WO2001017556A1 - Vaccine preparations for mucosal administration - Google Patents

Abstract

Vaccine preparations for mucosal administration characterized by containing an antigen and a carboxyvinyl polymer but being free from any basic substances for neutralizing the carboxyvinyl polymer. Use of these preparations makes it possible to promote the IgG production by the systemic immune system and remarkably enhance the productivity of secretory IgA.

Description

明細書 Specification

粘膜適用型ヮクチン製剤 技術分野 Mucosa-applied pectin preparation Technical field

本発明は、 鼻腔、 口腔等の粘膜表面に作用して、 抗原特異的な免疫応答を 効果的に誘導し得る粘膜適用型ワクチン製剤に関する。 背景技術 The present invention relates to a mucosa-applied vaccine preparation that acts on mucosal surfaces such as the nasal cavity and the oral cavity to effectively induce an antigen-specific immune response. Background art

現行ワクチンのほとんどは注射によ り投与されている。 注射での抗原投与 の場合、 全身系免疫には効果的に抗原特異的な免疫応答が誘導され主に I gG が産生される力 第一線の防御バリァである粘膜免疫系には免疫応答が誘導 されず、 分泌型 I gAはほとんど産生されない。 また注射投与では、 痛みや接 種部位周辺に炎症、 ワクチンの遺残などが観察されることもある。 このよう な注射による欠点を改良するために、 適用部位や適用方法も考慮に入れた新 型のワクチン製剤の開発が試みられている。 Most current vaccines are administered by injection. In the case of antigen administration by injection, systemic immunity effectively induces an antigen-specific immune response and mainly produces IgG.Immune response is exerted on the mucosal immune system, the first line of defense barrier. Not induced and little secreted IgA is produced. Injection may also cause pain, inflammation around the site of inoculation, and residual vaccine. In order to remedy such drawbacks due to injections, development of new vaccine formulations that take into account the site and method of application has been attempted.

その一例と して鼻腔、 口腔などの種々の粘膜に適用 し得る、 粘膜免疫シス テムを介した粘膜適用型ワクチン製剤が注目されており、 そのための有効な アジュバン トゃ製剤学的工夫が研究されている。 しかし一部の生ワクチンに ついて点鼻適用製剤が市販されているだけであり、 未だほとんど実用化され ていない。 As an example, a mucosal vaccine formulation via a mucosal immune system that can be applied to various mucous membranes such as the nasal cavity and oral cavity has attracted attention, and effective adjuvants and formulation methods have been studied for that purpose. ing. However, nasal preparations of some live vaccines are only commercially available, and have not been practically used yet.

粘膜アジュバン トの例と して、 例えば、 Vacc ine Research, 1 9 9 6 , Vo l . 5 , No . 3 ： 1 4 9— 1 6 2 には、 抗原とコ レラ トキシンまたはコレラ トキシン Bサブュニッ トの併用で抗原特異的な分泌型 I gAや血清 I gGが増大 することが記載されている力⁵、 コ レラ トキシン Bサブユニッ トは、 それ自身 の安全性等の面で難点があり、 未だ実用化されていない。Examples of mucosal adjuvants include, for example, Vaccine Research, 1996, Vol. 5, No. 3: 149—162, which include antigens and cholera toxin or cholera toxin B subunits. force combination in an antigen-specific secretory I gA and serum I gG of have been described to increase^5, cholera toxin B subunit, there are difficulties in terms of such its own safety, yet practical Not converted.

また製剤学的工夫と しては、 . 粘膜等へのゲル状噴霧剤用基剤と してカル ボキシビニルポリマーの使用が研究されている力 s、 調製時に塩基性物質で中 和してゲル化させているのが一般的である。 これは、 中和によ りカルボキシ ビニルポリマーを増粘させてゲルを形成し、 展着性が改善される結果、 液だ れの軽減、 薬物投与量の適性保持、 使用感向上等の効果が期待されるからで ある。 例えば、 特閲平 3 _ 3 8 5 2 9では、 カルボキシビ二ルポリマ一を一 旦、 塩基性物質で中和して增粘させた基剤を用いて、 イ ンフルエンザ用の鼻 腔内噴霧投与型のワ クチンゲル製剤を開示している。 しかしこの製剤は、 調 製時に中和操作が必要であ り、 またカルボキシビ二ルポリマーが高粘性であ るため、 1 )噴霧が困難、 2 )鼻粘膜での繊毛毒性等の欠点を有する恐れがあり、 実用的ではない。 なお免疫効果の評価と してはマウスの IgA抗体価の変化を 調べている力 、 カルボキシビ二ルポリマーを中和せずに用いた場合について は何ら検討していない。 またこの製剤の好ま しい p Hは 6 . 0 ~ 8 . 0 と記載 されている。 W 0 9 4 / 0 5 3 3 0 も同様にカルボキシビ二ルポリマ一を中 和せずに用いた鼻粘膜噴霧製剤を開示している力 好ま しい適用薬物は抗ァ レルギ一剤や血管収縮剤等であり、 ヮクチン抗原を用いた製剤への適応につ いては何ら言及していない。Pharmaceutical innovations include the use of carboxyvinyl polymer as a base for gel sprays on mucous membranes, etc. It is generally gelled. This is because the carboxyvinyl polymer is thickened by neutralization to form a gel and the spreadability is improved, resulting in a liquid. This is because effects such as reduction of the dose, maintenance of the appropriateness of the drug dose, and improvement of the feeling of use are expected. For example, in the review of Japanese Patent Application Laid-Open No. 3-3859-29, nasal spray administration for influenza was carried out using a base obtained by neutralizing carboxyvinyl polymer once with a basic substance and making it viscous. Vaccine gel formulations of the type are disclosed. However, this preparation requires a neutralization operation at the time of preparation, and the carboxyvinyl polymer is highly viscous, which may cause drawbacks such as 1) difficulty in spraying and 2) ciliary toxicity on the nasal mucosa. There is no practical. As for the evaluation of the immune effect, the ability to examine changes in IgA antibody titers in mice and the case where carboxyvinyl polymer was used without neutralization were not examined at all. The preferred pH of this preparation is described as 6.0 to 8.0. W094 / 053330 also discloses a nasal mucosal spray formulation using a neutralized carboxyvinyl polymer.The preferred drugs are anti-allergic agents and vasoconstrictors. No mention is made of adaptation to a preparation using a Pectin antigen.

上記のように、 粘膜適用型ワクチン製剤の開発において、 粘膜免疫を向上 させ得る粘膜アジュバン 卜の探索や製剤学的工夫の研究が進められているが、 十分な免疫力の確保や製造効率等の面での問題があり、 未だ満足するレベル には至っていない。 よって、 より優れた免疫力を有しかつ容易に調製され得 る粘膜適用型ヮクチン製剤、 特に抗原特異的な分泌型 I gAの産生を促進し得 る製剤の開発が求められていた。 発明の開示 As described above, in the development of vaccine preparations for mucosal application, the search for mucosal adjuvants that can improve mucosal immunity and research on pharmaceutical preparations are underway, but sufficient immunity and production efficiency must be ensured. There is a problem in the area, and it has not yet reached a satisfactory level. Therefore, there has been a demand for the development of a mucosa-applied pectin preparation having better immunity and which can be easily prepared, particularly a preparation capable of promoting the production of antigen-specific secretory IgA. Disclosure of the invention

本発明者らは、 上記課題に鑑み鋭意検討した結果、 粘膜適用型ワクチン製 剤において、 カルボキシビ二ルポリマ一を実質的に中和しないままで基剤と して用いれば、 全く意外にも、 抗原特異的な全身系免疫機構が誘導される上 に、 抗原特異的な分泌型 I gAの産生が増大するこ とを見出し、 以下に示す本 発明を完成した。 The present inventors have conducted intensive studies in view of the above problems, and as a result, when carboxylvinyl polymer was used as a base in a mucosal vaccine formulation without substantially neutralizing it, it was quite surprising that The present inventors have found that, in addition to inducing an antigen-specific systemic immune system, the production of antigen-specific secretory IgA is increased, and the present invention described below has been completed.

( 1 ) 抗原とカルボキシビ二ルポリマ一を含有し、 該カルボキシビニルポリ マーを中和するための塩基性物質を配合していないことを特徴とする、 粘膜 適用型ワクチン製剤。 ( 2 ) p Hが 6 · 5以下である、 上記 （ 1 ) 記載の製剤。(1) A vaccine preparation for mucosal application, which comprises an antigen and a carboxyvinyl polymer, and does not contain a basic substance for neutralizing the carboxyvinyl polymer. (2) The preparation according to (1), wherein the pH is 6.5 or less.

( 3 ) p Hが 6以下である、 上記 （ 2 ) 記載の製剤。 (3) The preparation according to the above (2), wherein the pH is 6 or less.

( 4 ) p Hが 5以下である、 上記 （ 3 ) 記載の製剤。 (4) The preparation according to the above (3), wherein the pH is 5 or less.

( 5 ) カルポキシビニルポリマーの含量が、 製剤全重量に対して約 0.0 1 〜約 1 0 %である、 上記 （ 1 ) から （ 4 ) のいずれかに記載の製剤。 (5) The preparation according to any one of (1) to (4) above, wherein the content of the carboxyvinyl polymer is about 0.01 to about 10% based on the total weight of the preparation.

( 6 ) カルボキシビ二ルポリマーの含量が、 製剤全重量に対して約 0.0 5 〜約 5.0 %である、 上記 （ 5 ) 記載の製剤。 (6) The preparation according to (5), wherein the content of the carboxyvinyl polymer is about 0.05 to about 5.0% based on the total weight of the preparation.

( 7 ) 温度 2 0 °Cで回転粘度計 （回転数 5 0 rpm)によ り測定した場合の粘 度が約 1 2 0 mPa's以下である、 上記 （ 1 ) から （ 6 ) のいずれかに記載 の製剤。 (7) Any one of the above (1) to (6), which has a viscosity of about 120 mPa's or less when measured by a rotational viscometer (rotation speed: 50 rpm) at a temperature of 20 ° C. A formulation as described.

( 8 ) 粘度が約 1〜約 1 0 0 mPa'sである、 上記 （ 7 ) 記載の製剤。 (8) The preparation according to the above (7), which has a viscosity of about 1 to about 100 mPa's.

( 9 ) 粘度が約 3〜約 8 0 mPa-sである、 上記 （ 8 ) 記載の製剤。 (9) The preparation according to (8), wherein the viscosity is about 3 to about 80 mPa-s.

( 1 0 ) p Hが 6.5以下であり、 カルボキシビ二ルポリマ一の含量が製剤 全重量に対して約 0.0 1〜約 1 0 %であり、 かつ温度 2 0 °Cで回転粘度計 (回転数 5 0 rpm)により測定した場合の粘度が約 1 2 0 mPa-s以下である、 上記 （ 1 ) 記載の製剤。 (10) pH is 6.5 or less, the content of carboxyvinyl polymer is about 0.01 to about 10% based on the total weight of the preparation, and the temperature is 20 ° C and the rotational viscometer (rotational speed) The formulation according to the above (1), which has a viscosity of not more than about 120 mPa-s when measured at 50 rpm.

( 1 1 ) p Hが 5以下であり、 カルボキシビ二ルポリマ一の含量が製剤全重 量に対して約 0.0 5〜約 5.0 %であり、 かつ粘度が約 1〜約 1 0 0 mPa's である、 上記 （ 1 0 ) 記載の製剤。 (11) The pH is 5 or less, the content of carboxyvinyl polymer is about 0.05 to about 5.0% based on the total weight of the preparation, and the viscosity is about 1 to about 100 mPa's. The preparation according to the above (10).

( 1 2 ) 液剤または噴霧剤である、 上記 （ 1 ) から （ 1 1 ) のいずれかに記 載の製剤。 (12) The preparation according to any one of (1) to (11) above, which is a liquid or a spray.

( 1 3 ) 適用される粘膜が、 鼻腔、 口腔、 咽頭、 気管、 腸管、 または鳥類の ファブリキウス嚢の粘膜である、 上記 （ 1 ) から （ 1 2 ) のいずれかに記載 の製剤。 (13) The preparation according to any one of (1) to (12) above, wherein the mucosa to be applied is a mucosa of a nasal cavity, an oral cavity, a pharynx, a trachea, an intestinal tract, or a bursa of a fabric of a bird.

( 1 4 ) 適用される粘膜が、 鼻腔の粘膜である、 上記 （ 1 3 ) 記載の製剤。 ( 1 5 ) 抗原が、 生も しくは不活化された細菌、 ウィルス、 および/または マイコプラズマである、 上記 （ 1 ) 〜 （ 1 4 ) のいずれかに記載の製剤。 ( 1 6 ) ヒ トを含む動物用である、 上記 （ 1 ) 〜 （ 1 5 ) のいずれかに記載 の製剤。 ( 1 7 ) 抗原特異的な全身系免疫機構を誘導し、 かつ粘膜上に抗原特異的な 分泌型 IgAを産生させる、 上記 （ 1 ) 〜 （ 1 6 ) のいずれかに記載の製剤。(14) The preparation according to (13), wherein the applied mucosa is a nasal mucosa. (15) The preparation according to any one of (1) to (14) above, wherein the antigen is a live or inactivated bacterium, virus, and / or mycoplasma. (16) The preparation according to any one of (1) to (15) above, which is for animals containing humans. (17) The preparation according to any one of the above (1) to (16), which induces an antigen-specific systemic immune system and produces antigen-specific secretory IgA on mucosa.

( 1 8 ) カルボキシビ二ルポリマ一を抗原と混合する時および混合前後のい ずれの段階においても、 該カルボキシビ二ルポリマーを中和するための塩基 性物質を配合しないこ とを特徴とする、 上記 （ 1 ) 〜 （ 1 7 ) のいずれかに 記載の製剤の製造方法。(18) A basic substance for neutralizing the carboxyvinyl polymer is not added at the time of mixing the carboxyvinyl polymer with the antigen and at any stage before and after the mixing. The method for producing the preparation according to any one of the above (1) to (17).

( 1 9 ) 上記 （ 1 8 ) 記載の製造方法によ り製造され得る、 上記 （ 1 ) 〜 ( 1 7 ) のいずれかに記載の製剤。 (19) The preparation according to any one of (1) to (17), which can be produced by the production method according to (18).

( 2 0 ) 粘膜適用型ヮクチン製剤を製造する際に、 基剤と してカルボキシビ 二ルポリマ一を、 それを中和するための塩基性物質を配合しないで使用する 方法。 (20) A method of using a carboxyvinyl polymer as a base without producing a basic substance for neutralizing the pectin preparation when applied to a mucosa-coated pectin preparation.

( 2 1 ) 粘膜適用型ワクチン製剤を投与した際に、 抗原特異的な全身系免疫 機構を誘導し、 かつ粘膜上に抗原特異的な分泌型 IgAを産生させるために行 う、 上記 （ 2 0 ) 記載の方法。 (21) In order to induce an antigen-specific systemic immunity mechanism and to produce an antigen-specific secretory IgA on the mucosa upon administration of a mucosa-applied vaccine preparation, the above-mentioned (20) ) Described method.

( 2 2 ) カルボキシビ二ルポリマ一を中和するための塩基性物質を配合して いない、 カルボキシビニルポリマ一を含有する粘膜適用型ヮクチン製剤用ァ ジュ ) ン ト。 (22) A mucous membrane-applicable drug preparation containing a carboxyvinyl polymer, which does not contain a basic substance for neutralizing the carboxyvinyl polymer.

( 2 3 ) 抗原特異的な分泌型 IgAの産生を促進する、 上記 （ 2 2 ) 記載のァ ジュノ ン ト。 発明を実施するための最良の形態 (23) The antigen according to (22), which promotes production of antigen-specific secretory IgA. BEST MODE FOR CARRYING OUT THE INVENTION

本粘膜適用型ヮクチン製剤は、 基剤と してカルボキシビ二ルポリマーを含 有するが、 該カルボキシビ二ルポリマーを中和するための塩基性物質は配合 していない。 すなわち本製剤の調製段階においては、 従来のようにカルポキ シビニルポリマーをその粘性を増大させる等の目的で塩基性物質で処理する ことによ り、 製剤の p Hを 7 に接近させる意図的な中和操作は一切行わない。 よって、 最終的に出来上がった本製剤中のカルボキシビニルボリマ一は、 塩 基性物質で実質的に中和されていない状態にある。 但し、 調製段階でそのよ うな意図的な中和操作を行っていない場合でも、 含有抗原が例えばペプチ ド やタンパク質等、 アミ ノ基等の塩基性を示す部分を有する物質である場合に は、 カルボキシビ二ルポリマー中のカルボシル基は、 結果的にそれら抗原の 塩基と、 多少な り とも中和状態を形成することもある力⁵、 このような製剤も 本製剤に包含される。The mucosa-coated pectin preparation contains a carboxyvinyl polymer as a base, but does not contain a basic substance for neutralizing the carboxyvinyl polymer. In other words, in the preparation stage of this product, the intention is to treat the carboxyvinyl polymer with a basic substance for the purpose of increasing its viscosity, as in the past, to bring the pH of the formulation closer to 7. No neutralization operation is performed. Therefore, the carboxyvinyl polymer in the finished product is not substantially neutralized with the basic substance. However, even if such an intentional neutralization operation is not performed during the preparation stage, the antigen contained may be, for example, a peptide. If the substance has a basic moiety such as an amino group, such as a protein or protein, the carbosyl group in the carboxyvinyl polymer consequently neutralizes the base of the antigen to some extent. forming also a force⁵ to, such formulations are also included in the present formulation.

即ち、 本製剤の一形態と しては、 抗原とカルボキシビ二ルポリマ一を含有 し、 該カルポ'キシビ二ルポリマーが抗原以外の塩基性物質、 例えば無機塩基 (例 ： N a O H、 K O H、 アンモニア等） や有機塩基 （例 ： アルキルアミ ン (例 ： メチルァ ミ ン、 ジェチルァミ ン等） 、 アルカノールァミ ン （例 ： メタ ノールアミ ン等） 、 アミ ノ酸 （アルギニン、 リ ジン等） ） 等では実質的に中 和されていないこ とを特徴とする粘膜適用型ワクチン製剤を包含する。 該 That is, as one form of the present preparation, an antigen and a carboxyvinyl polymer are contained, and the carbo'xyvinyl polymer is a basic substance other than the antigen, for example, an inorganic base (eg, NaOH, KOH, ammonia ), Organic bases (eg, alkylamines (eg, methylamine, getylamine, etc.), alkanolamines (eg, methanolylamine, etc.), and amino acids (arginine, lysine, etc.)). And mucosa-applied vaccine preparations characterized in that they are not neutralized. The

「実質的に中和されていない」 とは、 1 ) カルボキシビ二ルポリマ一のすベ てのカルボキシル基が完全に中和されていない状態か、 または 2 ) 本製剤中 に、 カルボキシビ二ルポリマーを中和する以外の目的で比較的微量配合され 得る 1またはそれ以上の添加剤の存在によって、 該カルボキシル基のごく一 部分のみが中和も しくはそれに近い状態にはあるものの、 その程度の中和状 態によっては製剤の p Hがほとんど中性側にはシフ ト しておらず、 その結果、 カルボキシビ二ルポリマ一の粘性もほとんど増大していないような状態を意 味する。 なお中和操作を しないで製剤を調製することによ り、 抗原の種類や その量によってカルボキシビ二ルポリマーと抗原との間に弱い結合が生じ、 固体分散体 （solid dispersion) を形成する場合もあるものと推測される。 本発明に使用するカルボキシビ二ルポリマ一とは、 主成分のァク リル酸を 重合して得られる種々の親水性ポリマーを意味し、 例えば、 カーボポール 9 3 4、 カーボポール 9 4 0、 カーボポール 9 4 1、 カーボボール 9 3 4 P、 9 7 1 P、 9 7 4 P (BFGoodlich社製） やハイ ビスヮコー 1 0 3、 1 0 4、 1 0 5等 （和光純薬（株）社製） 等が例示される。 カルボキシビ二ルポリマ一 の含量は、 製剤全重量に対して、 好ま しくは約 0.0 1〜約 1 0重量％、 よ り好ま し く は約 0.0 5〜約 5.0重量％である。 含量が少なすぎるとカルボ キシビニルホ リマーがゲル化せず、 その結果、 製剤の投与に不都合を生じた り、 投与しても液だれ等の現象が起きて抗原が粘膜に十分には付着せず、 免 疫反応が十分に惹起されない等の恐れがある。 一方、 含量が多すぎると、 力 ルポキシビニルポリマーのゲル化が極度に進行し、 液状の製剤と しては使用 できないか、 抗原が投与されても製剤中から粘膜表面上にう ま く放出されな い恐れがある。"Not substantially neutralized" means that 1) all carboxyl groups of the carboxyvinyl polymer are not completely neutralized, or 2) the carboxyvinyl polymer Due to the presence of one or more additives that can be incorporated in relatively small amounts for purposes other than neutralization, only a small portion of the carboxyl groups are in or near neutralization, but to a lesser extent. Depending on the neutralization state, the pH of the preparation is hardly shifted to the neutral side, and as a result, the viscosity of the carboxyvinyl polymer is hardly increased. By preparing a preparation without performing the neutralization operation, weak binding may occur between the carboxyvinyl polymer and the antigen depending on the type and amount of the antigen, and a solid dispersion may be formed. It is presumed that there is. The carboxyvinyl polymer used in the present invention means various hydrophilic polymers obtained by polymerizing acrylic acid as a main component, and examples thereof include Carbopol 934, Carbopol 9400, and Carbopol 940. Paul 941, Carboball 934P, 971P, 974P (manufactured by BFGoodlich), Hibisco Corp. 103, 104, 105, etc. (manufactured by Wako Pure Chemical Industries, Ltd.) ) And the like. The content of carboxyvinyl polymer is preferably from about 0.01 to about 10% by weight, more preferably from about 0.05 to about 5.0% by weight, based on the total weight of the preparation. If the content is too low, the carboxyvinyl polymer will not gel, resulting in inconvenience in the administration of the drug product, and even if the drug is administered, a phenomenon such as dripping will occur and the antigen will not adhere sufficiently to the mucous membrane. Exemption There is a risk that the epidemic reaction will not be sufficiently induced. On the other hand, if the content is too high, the gelation of the propyloxyvinyl polymer proceeds extremely, and it cannot be used as a liquid preparation, or the antigen is successfully released from the preparation onto the mucosal surface even when the antigen is administered May not be done.

本製剤の状態は、 通常、 溶液または懸濁液である。 本製剤の p Hは必ずし も限定されないが、 カルボキシビ二ルポリマーを塩基性物質で実質的に中和 せずに使用するので、 通常は p H 7未満、 好ま し く は p H 6 . 5以下、 よ り 好ま しくは P H 6以下または 6未満、 さ らに好ま しくは p H 5以下または p H 4 . 5以下であり、 また好ま しく は 1 以上、 よ り好ま しくは 2以上である。 特に好ま しい p Hの範囲の 1例は、 p H 2 〜 6 . 5、 特に p H 2 〜 4 . 5であ る。 p H値が高すぎると、 抗原特異的な免疫反応が十分に発揮されず、 特に 分泌型 I gAの産生が抑制されるか著しく低下する。 また一般に p H 8 ぐらい までは、 p Hの増大に伴いカルボキシビ二ルポリマ一の粘性も高くなる傾向 にあるので、 液剤または噴霧剤と して投与するのが困難になる恐れもある。 一方 p H値が低すきると、 カルボキシビ二ルポリマ一のゲル化に支障をきた し、 やはり前記のような液だれ等の問題が生じる。 p H調節のためにはリ ン 酸一水素ナ ト リ ゥム ·クェン酸緩衝液やリ ン酸塩緩衝液等の緩衝液も使用さ れる力 カルボキシビ二ルポリマーを実質的に中和するために添加されるも のではない。 This preparation is usually in the form of a solution or suspension. Although the pH of the preparation is not necessarily limited, the carboxyvinyl polymer is used without substantial neutralization with a basic substance, and thus is usually less than pH 7, preferably pH 6.5. Below, more preferably below pH 6 or below 6, further preferably below pH 5 or below pH 4.5 and preferably above 1 and more preferably above 2 . One example of a particularly preferred pH range is pH 2 to 6.5, especially pH 2 to 4.5. If the pH value is too high, an antigen-specific immune response is not sufficiently exerted, and in particular, production of secretory IgA is suppressed or significantly reduced. In general, up to about pH 8, the viscosity of the carboxyvinyl polymer tends to increase as the pH increases, and it may be difficult to administer it as a liquid or spray. On the other hand, if the pH value is too low, gelation of the carboxyvinyl polymer will be hindered, and the above-mentioned problems such as dripping will also occur. Buffers such as sodium hydrogen phosphate and citrate buffer and phosphate buffer are also used to adjust the pH. To substantially neutralize the carboxyvinyl polymer It is not added to

本製剤の粘度は、 カルボキシビ二ルポリマ一や任意の添加剤の含量や、 P H値、 保存状態等によ り異なり一概には規定できないが、 例えば温度 2 0 °C で回転粘度計 （回転数 5 0 rpm )によ り測定した場合、 好ま しくは約 1 2 0 mP a · s以下、 よ り好ま しくは約 1 〜約 1 0 ◦ mP a · s、 さ らに好ま し くは約 3 〜約 8 0 mPa · s、 特に好ま し く は約 3〜約 5 0 mPa · sである。 粘度が高すぎ ると、 本製剤を容器中に保存している際にノズルが詰まったり、 また噴霧し にく く なつた り等の不都合が生じる。 低すぎると液だれ等の恐れがある。 本製剤のよ り好ま しい形態と しては、 1 ) p Hが 6 . 5以下であり、 カル ボキシビニルボリマーの含量が製剤全 IE Sに対して約 0 . 0 1 〜約 1 0 %で あり、 かつ温度 2 0てで回転粘度計 （回転数 5 0 rpm )によ り測定した場合 の粘度が約 1 2 0 mPa ' s以下である場合、 2 ) p Hが 5以下であ り、 力ルポ キシビ二ルポリマーの含量が製剤全重量に対して約 0 . 0 5〜約 5 . 0 %であ り、 かつ粘度が約 1 〜約 1 0 0 mPa · sである場合、 等が例示される。The viscosity of this drug product differs depending on the content of carboxyvinyl polymer and optional additives, PH value, storage condition, etc., and cannot be specified unconditionally. For example, at a temperature of 20 ° C, a rotational viscometer (rotation speed) 50 rpm), preferably less than about 120 mPas, more preferably about 1 to about 10 mPas, and more preferably about 3 mPas. To about 80 mPa · s, particularly preferably about 3 to about 50 mPa · s. If the viscosity is too high, there are inconveniences such as clogging of the nozzle during storage of the drug product in the container, and difficulty in spraying. If it is too low, there is a risk of dripping. More preferred forms of the present preparation include: 1) a pH of 6.5 or less, and a carboxyvinyl polymer content of about 0.01 to about 10 %, And measured with a rotational viscometer (rotational speed 50 rpm) at a temperature of 20 If the viscosity is less than about 120 mPa's, 2) the pH is less than 5, and the content of carboxylic acid polymer is about 0.05 to about 5.0 with respect to the total weight of the preparation. %, And the viscosity is about 1 to about 100 mPa · s.

本製剤に含有され得る抗原と しては、 ヒ トまたはヒ ト以外の動物、 例えば 家禽 （例 ： ニヮ ト リ、 ァヒル、 カモ等） 、 家畜 （例 ： 牛、 馬、 豚等） 、 愛玩 動物 （例 ： 犬、 猫等） 等に対してワクチンと して作用 し得る各種抗原を意味 する。 また、 病原体由来のタ ンパク質、 糖タンパク質、 多糖類、 リポ多糖類、 ポリ ヌクレオチ ドまたは抗原をコー ドする D N A等が含まれる。 構成的には 従来型の生も しくは不活化されたワクチン以外にコンポーネン トワクチン、 サブユニッ トワクチン、 ベクタ一ワクチン、 遺伝子ワクチンも含まれる。 抗 原は、 細菌、 ウィルスおよび/またはマイコプラズマであり、 例えば、 細菌 と しては、 ヘリコバクタ一 ' ピロ リ、 百日咳菌、 ブルセラ菌、 サルモネラ菌 (腸チフス菌、 パラチフス菌） 、 ブ夕流産菌、 コレラ菌、 クロース ト リ ジァ ル抗原、 ボツ リ ヌス中毒症菌、 連鎖球菌、 球菌レブトスビラ、 へモフ ィ ルス 菌、 ポルデテラ菌、 大腸菌、 牛胸膜肺炎菌、 東洋型鶏ペス ト菌、 鴨ペス ト菌、 破傷風菌、 ジフテリア菌、 B C G、 鶏伝染性コ リーザ等が例示され、 ウィル スと しては、 ニューカッスル病ウィルス、 鶏伝染性気管支炎ウィルス、 伝染 性咽頭気管炎ウィルス、 日本脳炎ウィルス、 伝染性鼻気管炎ウィルス、 伝染 性肝炎ウィルス、 汎白血球減少症ウィルス、 腺パパ夕チ熱ウィ ルス、 狂犬病 ウィルス、 灰白髄炎ウィルス、 はしかウィルス、 アデノ ウイルス、 鷲口そう ウィルス、 牛疫ウィルス、 鶏白血症ウィルス、 伝染性上皮腫ウィルス、 羊痘 ウィルス、 イ ンフルエンザウイルス、 ポリオウイルス等が例示される。 また マイコプラズマ症と しては、 原発性異型肺炎、 牛肺疫、 ャギ伝染性胸膜肺炎、 ブ夕流行性肺炎等が知られている。 なお、 牛血清アルブミ ン （ B S A ) 等も モデル抗原と して使用できる。 これらの抗原を単独で用いて各々の単味ワク チンとすることも可能である し、 2種以上の抗原を混合して多価ワクチンと することも可能である。 Antigens that can be included in this formulation include human or non-human animals, such as poultry (eg, chicks, ducks, ducks, etc.), livestock (eg, cows, horses, pigs, etc.), pets It means various antigens that can act as vaccines for animals (eg, dogs, cats, etc.). It also includes proteins, glycoproteins, polysaccharides, lipopolysaccharides, polynucleotides encoding DNA or antigens derived from pathogens, and the like. Constitutively, in addition to conventional live or inactivated vaccines, it also includes component vaccines, subunit vaccines, vector-only vaccines, and gene vaccines. The antigen is a bacterium, a virus and / or a mycoplasma. Examples of the bacterium include Helicobacter pylori, B. pertussis, Brucella, Salmonella (S. typhi, Paratyphi), Busy abortion, and cholera. , Clostridium antigen, Clostridium botulism, Streptococcus, Streptococcus levetosvira, Hemophilus, Pordetella, Escherichia coli, Bovine pleural pneumonia, Oriental chicken pestis, Duck pestis, Examples include tetanus, diphtheria, BCG, chicken infectious coryza, and viruses such as Newcastle disease virus, chicken infectious bronchitis virus, infectious pharyngeal tracheitis virus, Japanese encephalitis virus, infectious nose. Tracheitis virus, infectious hepatitis virus, panleukopenia virus, glandular daddy virus, rabies virus, gray pulp Examples include inflammation virus, measles virus, adenovirus, eagle virus, rinderpest virus, fowl leukemia virus, infectious epithelioma virus, sheeppox virus, influenza virus, poliovirus and the like. Also known as mycoplasmosis are primary atypical pneumonia, bovine lung disease, goat-transmitted pleural pneumonia, and bush epidemic pneumonia. Bovine serum albumin (BSA) can also be used as a model antigen. These antigens can be used alone to make each plain vaccine, or two or more antigens can be mixed to make a multivalent vaccine.

上記抗原の含量は、 対象疾患、 投与ルー ト、 投与対象等によ り異なるが、 通常、 製剤全重量に対して、 約 0 . 0 1 〜約 9 0 %、 好ま し く は約 0 . 0 5〜 約 5 0 . 0 %、 特に好ま し く は約 0 . 1 〜約 3 0 %である。The content of the above antigen varies depending on the target disease, administration route, administration subject and the like, but is usually about 0.01 to about 90%, preferably about 0.00, relative to the total weight of the preparation. Five~ It is about 50.0%, particularly preferably about 0.1 to about 30%.

本製剤は、 所望によ り 、 下記に例示される各種の薬剤や添加剤を、 本発明 の目的 · 効果が阻害されない程度に、 適当量または極微量含有 し得る。 The preparation may contain, if desired, an appropriate amount or a trace amount of various agents and additives exemplified below, to the extent that the object and effects of the present invention are not impaired.

(カルボキシ ビニルボ リ マーの溶解補助や凝集防止を 目的と した添加剤） エチレ ング リ コール、 プロ ピレ ングリ コール、 ポ リ エチレ ングリ コール、 グリ セ リ ン、 エタ ノール、 イ ソブロバノール等のアルコール類。 (Additives for the purpose of assisting dissolution of carboxyvinyl polymer and preventing aggregation) Alcohols such as ethylene glycol, propylene glycol, polyethylene glycol, glycerin, ethanol and isobrovanol.

(免疫活性増強の補助剤） (Adjuvant for enhancing immune activity)

有機系のキサンタ ンガム、 グァ一ゴム、 ラ ンザンガム、 アラ ビアゴム、 ポ リ ビニルアルコール、 ポ リ アク リ ル酸塩、 ポ リ ビニルピロ リ ド ン、 アルギン 酸塩、 ゼラチン、 メチルセルロース、 カルボキシメチルセルロース、 ヒ ド ロ キシプロ ピルセルロース、 ヒ ドロキシプロ ピルメチルセルロース、 結晶セル ロース、 コラーゲン、 キ トサン、 フ イ ブ口イ ン、 セ リ シン、 サイ ト力イ ン、 リ ポポ リサッカライ ド、 コ レラ トキシン Bサブユニッ ト、 Qu i卜 A、 サポニン、 ペプチ ドグルカン、 ひ一シク ロデキス ト リ ン、 5 -シク ロデキス ト リ ン、 メ チル- 3 -シク ロデキス ト リ ン、 ジメチル- ? -シク ロデキス ト リ ン、 ヒ ドロキ シプロ ピル- /? -デキス ト リ ン、 DEAE -デキス ト ラ ン、 ポ リ オキシエチレ ン ( P0E ) ( 9 ) ラ ウ リルエーテル、 胆汁酸、 ポ リ ビニルァセタ一ルジェチル ァ ミ ノ アセテー ト、 レシチン、 力プリ ン酸ナ ト リ ウムや力プリ ル酸ナ ト リ ウ ムなどの脂肪酸ナ ト リ ウム、 ォレイ ン酸などの脂肪酸、 EDTA、 クェン酸、 ヒ アルロ ン酸、 デンプン、 ブロ ックポ リ マー、 サリ チル酸ナ ト リ ウム、 メ ン ト —ルゃシネオール等のテルペン系化合物、 ァプロチニンゃバシ ト ラシン等の タ ンパク分解酵素阻害剤、 無機系のシ リ カ、 セピオライ ト、 ベン トナイ ト、 モンモ リ ロナイ ト、 珪藻土、 パ一ライ ト等。 Organic xanthan gum, guar gum, lanthanum gum, arabic gum, polyvinyl alcohol, polyacrylate, polyvinylpyrrolidone, alginate, gelatin, methylcellulose, carboxymethylcellulose, hydroxy Xypropylcellulose, hydroxypropylmethylcellulose, crystalline cellulose, collagen, chitosan, fiber mouth, sericin, cytamine, lipopolysaccharide, cholera toxin B subunit, quat A, Saponin, Peptide dog glucan, H-cyclodextrin, 5-cyclodextrin, methyl-3-cyclodextrin, dimethyl-?-Cyclodextrin, Hydroxypropyl- / ? -Dextrin, DEAE-dextran, polyoxyethylene (P0E) (9) Fatty acids such as lauryl ether, bile acid, polyvinyl acetate monoethyl acetate, lecithin, sodium phosphate and sodium phosphate Fatty acids such as sodium and oleic acid, terpene compounds such as EDTA, citric acid, hyaluronic acid, starch, block polymer, sodium salicylate, and mentlucineol; Proteolytic enzyme inhibitors such as tracin, inorganic silica, sepiolite, bentonite, montmorillonite, diatomaceous earth, palmite, etc.

(等張化剤） 塩化ナ ト リ ウム、 塩化力 リ ゥ厶等の塩化アル力 リ 金属塩。 (Isotonicity agent) Metal chlorides such as sodium chloride and sodium chloride.

(不活化剤） ホルマ リ ン、 チメ ロサール等。 (Inactivator) Formalin, thimerosal, etc.

(防腐剤） ハラォキシ安息香酸メチル、 パラォキシ安息香酸ェチル、 パラオ キシ安息香酸プロ ピル、 バラォキシ安息香酸ブチル、 安息香酸ナ ト リ ウム、 ソルビン酸、 ソルビン酸カ リ ウム、 フ エノ キシエタ ノール等。 (Preservatives) Methyl haloxybenzoate, ethyl ethyl paraoxybenzoate, propyl paraoxybenzoate, butyl baloxybenzoate, sodium benzoate, sorbic acid, potassium sorbate, phenoxyethanol and the like.

(殺菌剤） 過酸化水素、 次亜塩素 fi 、 次亜塩素酸ナ ト リ ウム等。 また、 本製剤は、 抗原をあらかじめ高分子等でコーティ ング化、 リポソ一 ム化あるいはマイ クロカブセル化等の製剤調製に付した後に、 カルボキシビ 二ルポリマーと混合するこ ともできる。(Disinfectant) Hydrogen peroxide, hypochlorite fi, sodium hypochlorite, etc. In addition, this preparation can be mixed with a carboxyvinyl polymer after the antigen has been subjected to preparation of a preparation such as coating, liposome formation, or microcapsule formation with a polymer or the like in advance.

本製剤は、 好ま し く は液剤または噴霧剤と して、 人を含む各種動物の各種 粘膜組織上に投与される。 好ま しくは、 鼻腔、 口腔、 咽頭、 気管、 腸管、 ま たは鳥類のファブリキウス嚢等、 特に好ま し くは、 鼻腔に投与される。 投与 は、 通常のワクチン製剤と同様、 疾患が発生する前の適当な時期に、 通常、 1 〜数回/日で、 1 日だけまたは 1〜数週間の間隔で数回投与すればよい。 これら粘膜での免疫系を介して、 抗原特異的な全身系免疫機構の誘導および 分泌型 I gAの産生が促進される。 The formulation is administered, preferably as a solution or spray, on various mucosal tissues of various animals including humans. It is preferably administered to the nasal cavity, oral cavity, pharynx, trachea, intestinal tract, or avian bursa of birds, particularly preferably to the nasal cavity. As in the case of usual vaccine preparations, the administration may be carried out at an appropriate time before the onset of the disease, usually one to several times / day, several times a day or at intervals of one to several weeks. Through the mucosal immune system, induction of an antigen-specific systemic immune system and production of secretory IgA are promoted.

本製剤の調製法と しては、 カルボキシビ二ルポリマ一を、 抗原と混合する 時および混合前後のいずれの段階においても、 該カルボキシビ二ルポリマ一 を中和するための塩基性物質を配合しない点を除いては、 基本的には、 従来 のカルボキシビ二ルポリマーを用いた粘膜適用型製剤の製法に準じればよい。 特に従来法では、 カルボキシビ二ルポリマーを、 塩基性物質で一旦中和して から抗原と混合していたが、 本製剤の調製段階においてはそのような中和操 作は行わない。 このことによって、 本製剤投与時の免疫反応が専ら賦活化さ れる。 該中和操作とは、 最終製剤の p Hを低 p H側から 7 に近づけるための 操作を意味し、 必ずしも p H 7 になるこ とだけを意味するものではない。 本 製剤の調製法と しては具体的には、 例えば （ 1 ) カルボキシビ二ルポリマ一 と抗原とを同時に蒸留水または緩衝液中 （好ま し くは p H 6以下、 更に好ま しくは p H 5以下、 特に好ま しくは p H 4 . 5以下） に加えて混合する方法、 ( 2 ) 蒸留水または緩衝液中に溶解あるいは懸濁した抗原中に、 カルボキシ ビニルポリマ一を粉末あるいは一定濃度の溶液、 懸濁液の状態で添加する方 法等が挙げられる。 上記緩衝液と しては、 水を用いた場合と比較して最終製 剤の P Hを上げる機能を有するものは除く。 好ま しい該緩衝液は、 塩基性物 質を全く または極微量しか含有しない。 As a preparation method of the present preparation, a basic substance for neutralizing the carboxyvinyl polymer is not blended at the time of mixing the carboxyvinyl polymer with the antigen and at any stage before and after the mixing. Except for this point, it is basically possible to follow the conventional method for producing a mucosal-applied preparation using a carboxyvinyl polymer. In particular, in the conventional method, the carboxyvinyl polymer was once neutralized with a basic substance and then mixed with the antigen. However, such a neutralizing operation is not performed in the preparation stage of the present preparation. As a result, the immune response upon administration of the preparation is exclusively activated. The neutralization operation means an operation for bringing the pH of the final preparation closer to 7 from the low pH side, and does not necessarily mean that the pH becomes 7 alone. As a method for preparing the present preparation, for example, (1) a carboxyvinyl polymer and an antigen are simultaneously dissolved in distilled water or a buffer (preferably at pH 6 or lower, more preferably at pH 6 or lower). 5 or less, particularly preferably 4.5 or less) and (2) a powder or a fixed concentration solution of carboxyvinyl polymer in antigen dissolved or suspended in distilled water or buffer. And a method of adding in the form of a suspension. As the above buffer, those having the function of increasing the pH of the final product as compared with the case where water is used are excluded. Preferred buffers contain no or trace amounts of basic substances.

また抗原については、 遠心分離等による濃縮液や;束結乾燥等による固形物 も使用可能である。 前記の各極添加剤の添加順序も特に制限されないが、 例 えばカルボキシビ二ルポリマーと同時に液中に配合すればよい。As the antigen, a concentrated solution obtained by centrifugation or the like; or a solid obtained by bundling and drying can be used. The order of adding each of the above-mentioned polar additives is not particularly limited, either. For example, it may be blended in the liquid at the same time as the carboxyvinyl polymer.

カルボキシビ二ルポリマーと抗原等の混合には、 市販のスターラーやボル テックスによる攪拌、 プロペラ式の攪拌機、 さ らには、 よ り均一で安定な製 剤を得るために、 ホモ ミキサー、 ポリ ト ロンなどの高速せん断式攪拌機、 超 音波式ホモジナイザー、 圧力式ホモジナイザ一等を使用すればよい。 混合時 間は、 各種配合剤の含量や混合する機器等によって異な り一概には規定でき ないが、 通常、 数分〜数十時間である。 For mixing the carboxyvinyl polymer and antigen, etc., a commercially available stirrer or vortex agitator, a propeller-type agitator, and a homomixer, polytron to obtain a more uniform and stable product For example, a high-speed shearing stirrer, an ultrasonic homogenizer, a pressure homogenizer, or the like may be used. The mixing time varies depending on the content of the various compounding agents and the equipment used for mixing, and cannot be unconditionally specified, but is usually several minutes to several tens of hours.

さらに本発明は、 カルボキシビ二ルポリマ一を中和するための塩基性物質 を配合していない、 カルボキシビ二ルポリマ一を含有する粘膜適用型ヮクチ ン製剤用アジュバン トを提供する。 該アジュバン ド中のカルボキシビニルポ リマーは、 実質的に中和されていない状態にある。 該アジュバン ドを用いれ ば、 抗原特異的な免疫応答を増強でき、 特に抗原特異的な分泌型 IgAの産生 を促進することができる。 該アジュバン ドは、 所望によ り、 前記の種々の添 加剤を包含するかまたはそれらと組み合わせて使用することができる。 次に、 実施例、 比較例および試験例に基づいて本発明をさ らに詳しく説明 するが、 本発明はこれらに限定されるものではない。 なお、 本発明は様々な 抗原に適用可能であるが、 試験例では便宜的に、 モデル抗原と して牛血清ァ ルブミ ン （ B S A) を使用した。 The present invention further provides an adjuvant for a carboxyvinyl polymer-containing drug formulation containing a carboxyvinyl polymer, which does not contain a basic substance for neutralizing the carboxyvinyl polymer. The carboxyvinyl polymer in the adjuvant is in a substantially unneutralized state. When the adjuvant is used, an antigen-specific immune response can be enhanced, and in particular, the production of an antigen-specific secretory IgA can be promoted. The adjuvant may include or be used in combination with the various additives described above, if desired. Next, the present invention will be described in more detail based on Examples, Comparative Examples and Test Examples, but the present invention is not limited to these. Although the present invention can be applied to various antigens, bovine serum albumin (BSA) was used as a model antigen for convenience in the test examples.

実施例 1Example 1

B S Aを製剤全量に対し、 ◦ . 1重量％になるように蒸留水に溶解させた 後、 0 .2 5重量％となるようにカルボキシビ二ルポリマー 〔カーボポール 9 7 1 P、 B F G o o d 1 i c h社製〕 を徐々に加え、 ホモ ミキサーによる 混合 （混合速度 10300rpm、 1分） 、 超音波照射 （ S i l e n t o n i c U T— 6 0 4、 シャープ（株） 社製、 照射時間 3分） による均一分散化を経て、 製剤と した。 After dissolving BSA in distilled water to make up 1% by weight with respect to the total amount of the preparation, carboxyvinyl polymer [Carbopol 971P, BFG ood 1 ich to make up to 0.25% by weight Was gradually added, and homogenized by mixing with a homomixer (mixing speed 10300 rpm, 1 minute) and by ultrasonic irradiation (Silentonic UT-604, Sharp Corporation, irradiation time 3 minutes). After that, it became a formulation.

実施例 2〜 1 6Examples 2 to 16

カルボキシビ二ルポリマーの種類 · 含量等を調節する以外は、 実施例 1 に 準じて同様に本製剤を調製した。 なお、 実施例 5では蒸留水の代わり に ρ Η 3 .8の緩衝液 （ 0 .2 6 3 Μクェン酸水溶液 1 2 0 m Lと 0 . 1 2 3 Mリ ン 酸水素ニナ ト リ ウム 2 8 0 m Lの混液） を、 実施例 6、 6では 0.9 %食 塩水を用いた。 組成を表 1〜 3に示す。This preparation was prepared in the same manner as in Example 1 except that the type and content of the carboxyvinyl polymer were adjusted. In Example 5, instead of distilled water, a buffer of ρΗ3.8 (0.263 mL of aqueous solution of citric acid and 0.12 M In Examples 6 and 6, 0.9% saline was used. The compositions are shown in Tables 1-3.

(表 1 ) (table 1 )

(単位：重量％ ) (Unit:% by weight)

(表 2 )(Table 2)

(単位：重量％ ) (Unit:% by weight)

(表 3(Table 3

(単位：重量％ ) (Unit:% by weight)

実施例 1 7〜 2 2

Examples 17 to 22

実施例 1に準 じて、 0.1重量％の B S Aと 0.2 5重量％のカーボポール 9 7 1 Pを含む製剤を調製した後、 免疫活性増強の補助剤を添加して最終製 剤と した。 但し、 実施例 2 2については、 0.1重量％の83八と 0.1重 量％のバシ ト ラ シンを溶解した液をは じめに調製し、 その中に、 0 .2 5重 量％となる よう にカーボボール 9 7 1 Pを徐々に加え均一分散し製剤と した (表 4 )According to Example 1, a preparation containing 0.1% by weight of BSA and 0.25% by weight of carbopol 971P was prepared, and an adjuvant for enhancing immune activity was added to obtain a final preparation. However, in Example 22 2, 0.18% by weight of 838 and 0.1 weight % Of bacitracin was dissolved in the solution, and carboball 971 P was gradually added to the solution to obtain 0.25% by weight, and the mixture was uniformly dispersed to form a preparation. (Table 4)

(単位 ： 重量％) (Unit: weight%)

(注） (note)

• 免疫活性増強の補助剤 ： 大豆レシチン、 サリチル酸ナトリウム、 メント -ル、 ヒド ϋキシ 7°ϋ ル- /3 -シク Πテ"キストリン、 Ρ0Ε(9)ラウリルェ-テル、 ハ "シトラシン 実施例 2 3 • Adjuvants to enhance immune activity: soy lecithin, sodium salicylate, menthol, hydroxy 7 ° ϋ- / 3-cyclopentane cystrine, Ρ0Ε (9) lauryl ether, citrusine Example 23

B S Aを製剤全量に対し、 0 . 1重量％になるよう に 0 . 1 Μリ ン酸塩緩衝 液 （ Ρ Η 7 .0 ) に溶解させた後、 0 .2 5重量％となるよう にカーボポール 9 7 1 Ρを徐々に加え、 実施例 1 に準 じて混合後、 均一分散し、 製剤と した, なお該緩衝液の添加目的は、 カーボポール 9 7 1 Ρの中和ではない。 ここで は、 モデル抗原と して比較的安定な B S Αを用いている力 抗原のなかには 酸性条件下で不安定なものも存在する。 よって、 一般的に抗原をよ り安定な 状態で使用する場面をも想定して緩衝液を用いただけである。 After dissolving BSA in 0.1% phosphate buffer (about 7.0) based on the total weight of the preparation, the carbohydrate is adjusted to 0.25% by weight. Pole 971Ρ was gradually added, mixed according to Example 1, and then uniformly dispersed to give a preparation. The purpose of adding the buffer is not neutralization of Carbopol 971Ρ. Here, some force antigens that use relatively stable B S S as model antigens are unstable under acidic conditions. Therefore, in general, the buffer is used only in a situation where the antigen is used in a more stable state.

実施例 2 4Example 2 4

B S Aを 0 .6 g、 ェチルセルロース 〔アクアコー ト ®ECD- 30、 旭化成（株） 社製、 ェチルセルロース含量 2 7 %〕 を 1 0 .0 gおよびクェン酸 ト リェチ ルを 1 .0 g混合し懸濁液と した。 その懸濁液を用いスプレー ドライ機 （L- 8 型、 大川原化工機（株）製、 液の微粒化方式：二流体ノ ズル法） にてマイ ク ロ カプセルと した。 調製されたマイ ク ロカプセルを、 0 . 2 5重量％のカーボ ポール 9 7 1 P水溶液中に加え混合し、 製剤と した。0.6 g of BSA, 10.0 g of ethyl cellulose (Aquacoat® ECD-30, manufactured by Asahi Kasei Corporation, content of 27% of ethyl cellulose) and 1.0 g of triethyl citrate It was mixed to form a suspension. Using the suspension, spray-drying machine (L-8, manufactured by Okawara Kakoki Co., Ltd., liquid atomization method: two-fluid nozzle method) Capsules. The prepared microcapsules were added to and mixed with a 0.25% by weight aqueous solution of Carbopol 971P to give a preparation.

比較例 1および 2Comparative Examples 1 and 2

製剤全量に対して 0 . 1重量％の B S Aを含有する水溶液中に、 カーボポ ール 9 7 1 Pをそれそれ 0 .0 6および 0 .2 5重量％になるように添加しホ モ ミキサ一で混合後 （混合速度 1 0 3 0 0 rpm、 1 分） 、 水酸化ナ ト リ ウム で中和し、 さ らにホモ ミキサ一にて混合し （混合速度 1 0 3 0 0 rpm, 0 .5 分） 製剤と した。 In an aqueous solution containing 0.1% by weight of BSA with respect to the total amount of the preparation, 971 P of carbazole was added to give 0.06 and 0.25% by weight, respectively. After mixing (mixing speed: 1300 rpm, 1 minute), neutralize with sodium hydroxide, and mix with a homomixer (mixing speed: 1300 rpm, 0.000 rpm). 5 min) The formulation was used.

比較例 3Comparative Example 3

製剤全量に対し 0 . 1重量％の B S Aを含有する水溶液中に、 カーボポ一 ル 9 4 0 ( B F G o o d l i c h社製） を 0 .6重量％になるように添加し ホモ ミキサーで混合後 （混合速度 1 0 3 0 0 rpm, 1 分） 、 アルギニンで中 和し、 さらに手振とうにて混合 （ 0 .5分） し製剤と した。 なお、 溶液には 0.9 %塩化ナ 卜 リ ウムを添加した。 To an aqueous solution containing 0.1% by weight of BSA with respect to the total amount of the preparation, add Carbopol 9400 (manufactured by BFG oodlich) to 0.6% by weight and mix with a homomixer (mixing speed). The mixture was neutralized with arginine and mixed by hand shaking (0.5 minute) to obtain a preparation. Note that 0.9% sodium chloride was added to the solution.

比較例 4〜 7Comparative Examples 4 to 7

製剤全量に対して 0 . 1重量％の B S Aを含有する水溶液中に、 免疫活性 増強の補助剤と して、 それぞれ 1 . 0重量％の大豆レシチン （比較例 4 ) 、 1 .0重量％のサリチル酸ナ ト リ ウム （比較例 5 ) 、 0 . 1重量％のメ ン トー ル （比較例 6 ) および 5 .0重量％のヒ ドロキシプロ ピル- 3 -シクロデキス ト リ ン （比較例 7 ) を添加した。 In an aqueous solution containing 0.1% by weight of BSA with respect to the total amount of the preparation, 1.0% by weight of soybean lecithin (Comparative Example 4) and 1.0% by weight of Addition of sodium salicylate (Comparative Example 5), 0.1% by weight of methanol (Comparative Example 6) and 5.0% by weight of hydroxypropyl-3-cyclodextrin (Comparative Example 7) did.

比較例 8Comparative Example 8

B S Aを 0 .6 g：、 ェチルセルロースを 1 0 .0 gおよびクェン酸ト リェチ ルを 1 .0 g混合し懸濁液と した。 その懸濁液を用い実施例 2 4 と同じスプ レ一 ドライ条件にて調製しマイ クロカプセルと した。 0.6 g of BSA, 10.0 g of ethylcellulose and 1.0 g of triethyl citrate were mixed to form a suspension. The suspension was used to prepare microcapsules under the same spray-dry conditions as in Example 24.

試験例 1 (製剤の物性）Test Example 1 (Physical properties of preparation)

本製剤の粘度と P H値を測定した。 粘度の測定は、 回転式の E型粘度計 (V I S C O N I C E D形、 東京計器製）を用いて、 回転数 5 0 rpm, 温度 2 0 °Cの条件で行った。 p H値は、 室温にて p Hメータ一 （ F _ 8 D P、 堀場製） で測定した。 (表 5The viscosity and PH value of this formulation were measured. The viscosity was measured using a rotary E-type viscometer (VISCONICED type, manufactured by Tokyo Keiki) at a rotation speed of 50 rpm and a temperature of 20 ° C. The pH value was measured at room temperature with a pH meter (F_8DP, manufactured by Horiba). (Table 5

さらに、 実施例 1 3、 比較例 2 については、 ゲル製剤を超遠心分離 （遠 心加速度 134,000 X G 6 0分） し、 上清の B S A量を H P L C法 （カラ ム ： Shodex Asahipak GS-510H) にて定量した。 製剤中の B S Aに対する上 清中の B S Aの割合 （％) (以下、 上清の B S A率） を以下に示す。

Furthermore, in Examples 13 and Comparative Example 2, the gel preparation was subjected to ultracentrifugation (centrifugal acceleration 134,000 XG 60 minutes), and the BSA content of the supernatant was analyzed by HPLC (column: Shodex Asahipak GS-510H). And quantified. The ratio (%) of BSA in the supernatant to the BSA in the preparation (hereinafter, the BSA ratio in the supernatant) is shown below.

(表 6 ) (Table 6)

上清の B S A率 （％) BSA ratio of supernatant (%)

実施例 1 0 Example 10

実施例 3 14 Example 3 14

比較例 2 100 実施例 1 3では、 超遠心分離後、 沈殿物が認めら、 また、 上清の B S A 率が少なかった。 このこ とは、 カルボキシビ二ルポリマーと B S Aとの間に なんらかの弱い結合があって沈殿物が生成していることを示唆している。 す なわち、 実施例 1 では B S Aのほぼ全量、 実施例 3では 8 6 %が、 カルボキ シビニルポリマ一との間で固体分散体を形成している と予想される。 試験例 2 (生物試験） Comparative Example 2 100 In Example 13, precipitate was observed after ultracentrifugation, and the BSA ratio of the supernatant was low. This suggests that there is some weak binding between the carboxyvinyl polymer and the BSA and that a precipitate has formed. That is, it is expected that almost the entire amount of BSA in Example 1 and 86% in Example 3 form a solid dispersion with the carboxyvinyl polymer. Test example 2 (biological test)

上記実施例、 比較例のワクチン製剤をマウスに事前に投与して、 その後の B S Aに対する抗体蓰生能を調べた。The vaccine preparations of the above Examples and Comparative Examples were administered to mice in advance, and Antibody activity against BSA was examined.

1 ) 免疫法 1) Immunization method

麻酔下の B A L B /cマウス （雄， 8週齢， n = 5 ) に、 ワクチン製剤を 2 5 L /匹を両方の鼻腔内に均一に滴下した。 投与回数は 2回、 投与間隔 は 1週間と した。 B S Aの 1回あた りの投与量は 2 5〃 g/匹と した。 これ らに対して 5匹の非免疫同居対照群をおいた。 初回投与後 2週目または 4週 目に BSAに特異的な肺洗浄液中の分泌型 IgAおよび血清 IgGを測定した。 す なわち、 粘膜免疫の指標と して、 肺洗浄液中の分泌型 IgAを、 全身系免疫の 指標と して血清 IgGを調べた。 To an anesthetized BALB / c mouse (male, 8 weeks old, n = 5), the vaccine preparation was uniformly instilled into both nasal cavities at 25 L / animal. The number of administrations was twice, and the administration interval was one week. The dose per BSA was 25 mg / animal. There were five non-immune cohabitation control groups for these. Two or four weeks after the first administration, secretory IgA and serum IgG in the lung lavage fluid specific to BSA were measured. That is, secretory IgA in lung lavage fluid was examined as an index of mucosal immunity, and serum IgG was examined as an index of systemic immunity.

2 ) サンプリ ング法 2) Sampling method

初回投与後 2週目のマウスから EL ISA測定用の血清を採取し、 さらに胸部 を切開し、 気管を露出させる。 気管の顎下、 最上部よ り肺へリ ン酸緩衝液 1 mLを注入し、 ゆっ く り吸引、 注入を繰返し、 肺洗浄液サンプルと した。 The serum for ELISA measurement is collected from the mice 2 weeks after the first administration, and the chest is incised to expose the trachea. 1 mL of phosphate buffer was injected into the lungs from the uppermost part of the trachea and below the lungs, and suction and injection were repeated slowly to obtain a lung lavage fluid sample.

3 ) 肺洗浄液中の分泌型 IgAの測定 3) Measurement of secretory IgA in lung lavage fluid

炭酸緩衝液 （ P H 9.6 ) に溶解した 0.1 % B S A溶液をプレー ト（ F A L C O N 3 0 7 2 )の各ゥエルに 5 0〃 Lずつ分注し、 一夜、 4°C静置条件 下で固相化した。 その後、 0.1 %Tw e e n 2 0を含むリ ン酸緩衝液で洗 浄し、 ついで 3 %スキム ミルクにて、 室温で 1時間、 ブロ ッキングした。 さ らにプレー トを洗浄し、 肺洗浄液検体を 2倍階段希釈でゥエル中に 5 0 L ずつ分注し、 室温で 2時間反応させた。 その後、 洗浄し、 5 0 0倍希釈した ペルォキシダ一ゼ標識抗マウス IgA抗体を分注し、 室温で 1時間反応させた。 洗浄後、 各ゥエルに基質溶液（0-フヱ二レ ンジアミ ン /p H 5.0クェン酸緩 衝液 /3 0 %過酸化水素 （ 5 0 mg : 2 5 mL : 2 5〃 L) ) を 5 0〃 Lずつ分 注し、 5分後 2.5 M硫酸溶液で反応を停止させ、 マイ クロプレー ト測定用 リーダ一 （ 4 9 2 nm) で吸光度を測定する。 なお、 非免疫対照群のマウス の肺洗浄液 （ 2倍希釈液） は吸光度 0.1以下であった。 分泌型 IgA抗体価 は、 吸光度 0.1を超える肺洗浄液の最大希釈倍率で表した。 また、 2倍希 釈の肺洗浄液の吸光度が 0.1を超えたマウスの匹数を陽性反応の匹数と し た。 4 ) 血清 IgGの測定Dispense 50 L of each 0.1% BSA solution in carbonate buffer (PH 9.6) into each well of the plate (FALCON 3072), and immobilize it overnight at 4 ° C. did. Thereafter, the cells were washed with a phosphate buffer containing 0.1% Tween 20 and then blocked with 3% skim milk at room temperature for 1 hour. Further, the plate was washed, and a lung lavage fluid sample was dispensed at 50 L each in a 2-fold serial dilution into a well and allowed to react at room temperature for 2 hours. Thereafter, the cells were washed, diluted with a 500-fold diluted peroxidase-labeled anti-mouse IgA antibody, and allowed to react at room temperature for 1 hour. After washing, add 50 μl of substrate solution (0-phenylenediamine / pH 5.0 citrate buffer / 30% hydrogen peroxide (50 mg: 25 mL: 25 L)) to each well.注 Dispense L each, and after 5 minutes, stop the reaction with a 2.5 M sulfuric acid solution, and measure the absorbance with a microplate measurement reader (492 nm). The lung lavage solution (2-fold dilution) of the mice in the non-immune control group had an absorbance of 0.1 or less. The secretory IgA antibody titer was represented by the maximum dilution of the lung lavage fluid having an absorbance of more than 0.1. The number of mice whose absorbance of the 2-fold diluted lung lavage exceeded 0.1 was defined as the number of positive reactions. 4) Measurement of serum IgG

炭酸緩衝液 （ p H 9 . 6 ) に溶解した 0 . 1 % B S A溶液をプレー ト（ F A 〇 0 3 0 7 2 )の各ゥェルに 5 0 〃 しずっ分注し、 一夜、 4 °C静置条件 下で固相化した。 その後、 0 . 1 % Tw e e n 2 0 を含むリ ン酸緩衝液で洗 浄し、 ついで 3 %スキム ミルクにて、 室温で 1時間、 ブロ ッキングした。 さ らにプレー トを洗浄し、 血清検体を 2倍階段希釈でゥエル中に 5 0 / Lずつ 分注し、 室温で 2時間反応させた。 その後、 洗浄し、 2 0 0 0倍希釈したぺ ルォキシダーゼ標識抗マウス IgG抗体を分注し、 室温で 1時間反応させた。 洗浄後、 各ゥエルに基質溶液（0-フエ二レ ンジァ ミ ン/ p H 5 .0 クェン酸緩 A 0.1% BSA solution dissolved in carbonate buffer (pH 9.6) was dispensed 50 5 into each well of the plate (FA〇03072), and incubated at 4 ° C overnight. The solid phase was immobilized under the setting conditions. Then, the cells were washed with a phosphate buffer containing 0.1% Tween 20 and then blocked with 3% skim milk for 1 hour at room temperature. The plate was further washed, and a serum sample was dispensed at 50 / L into the wells at a two-fold serial dilution and reacted at room temperature for 2 hours. Thereafter, washing, a 2000-fold diluted peroxidase-labeled anti-mouse IgG antibody was dispensed, and reacted at room temperature for 1 hour. After washing, add the substrate solution (0-phenylenediamine / pH 5.0 buffered solution) to each well.

. .

衝液 / 3 0 %過酸化水素 （ 5 mg : 2 5 mL ： 1 0〃 L) ) を 5 0〃 Lずつ分注 し、 5分後 2 . 5 M硫酸溶液で反応を停止させ、 マイ クロプレー ト測定用リ o oImplant / 30% hydrogen peroxide (5 mg: 25 mL: 10 L) was dispensed in 50 L portions, and after 5 minutes, the reaction was stopped with a 2.5 M sulfuric acid solution, and microplates were added. Oo for measurement

—ダ一 （ 4 9 2 nm) で吸光度を測定する。 なおoo o o、 非免疫対照群のマウスの o o—Measure the absorbance at 490 nm. Oo o o, o o of non-immune control mice

血清 （ 1 0倍希釈液） は吸光度 0 .2以下であつた。 血清 IgG抗体価は、 吸 光度 0 .2 を超える血清の最大希釈倍率で表した。 また、 1 0倍希釈の血清 の吸光度が 0 .2 を超えたマウスの匹数を陽性反応の匹数と した。The serum (10-fold dilution) had an absorbance of 0.2 or less. The serum IgG antibody titer was expressed as the maximum dilution of serum having an absorbance of more than 0.2. The number of mice whose absorbance of the 10-fold diluted serum exceeded 0.2 was regarded as the number of positive reactions.

結果を以下に示す。 表中の（ ）内の数値は、 陽性反応の匹数/試験匹数を示 す。 The results are shown below. The values in parentheses in the table indicate the number of positive reaction animals / number of test animals.

(表 7 ) (Table 7)

初回投与後 2返目の抗体産生能 Antibody production ability at 2nd return after initial administration

肺洗浄液 IgA 血清 IgG Lung lavage fluid IgA Serum IgG

実施例 1 Example 1

実施例 2 Example 2

実施例 3 Example 3

実施例 5 Example 5

実施例 1 0 12 (4/5) Example 10 12 (4/5)

実施例 1 1 Example 1 1

実施例 2 3 76 (4/4) 1076 (4/4) Example 2 3 76 (4/4) 1076 (4/4)

比較例 1 631 (5/5) Comparative Example 1 631 (5/5)

比較例 2 955 (5/5) Comparative Example 2 955 (5/5)

比較例 3 本製剤を用いた場合、 あらかじめ中和処理して調製された比較例の製剤と 比べて、 血清 IgGおよび分泌型 IgA共に高い産生が認められた （表 7 ) 。 こ のこ とから、 本製剤を川いれば、 従来タイ プのワクチン製剤を用いた場合よ り も、 抗原特異的な全身系免疫機構がよ り顕著に誘導され、 かつ粘膜上での 抗原特異的な分泌型 IgAの産生も促進されるこ とが明らかとなった。Comparative Example 3 When this preparation was used, higher production of both serum IgG and secretory IgA was observed than the preparation of the comparative example prepared by neutralization in advance (Table 7). Therefore, if this product is submitted, it will be better than when a conventional vaccine formulation is used. Furthermore, it was revealed that the antigen-specific systemic immune system was more remarkably induced, and that the production of antigen-specific secretory IgA on the mucous membrane was promoted.

(表 8 )(Table 8)

免疫活性増強の 初回投与後 2週目の抗体産生能 補助剤 肺洗浄液 IgA 血清 IgG 実施例 17 ； レシチン 54 (4/4) 735 (5/5) 実施例 18 サリチル酸ナトリウム 64 (5/5) 640 (5/5) 実施例 19 メント-ル 74 (5/5) 1114 (5/5) 実施例 20 ΗΡ-/3 -シク ΠΓ'キストリン 56 (5/5) 970 (5/5) 比較例 4 大豆レシチン <2 (0/4) 67 (4/4) 比較例 5 サリチル酸ナトリウム <2 (0/3) く 10 (1/3) 比較例 6 メント-ル く 2 (0/5) 46 (5/5) 比較例 7 HP- ? -シクロテ、、キストリン <2 (0/5) 26 (2/5) 2 weeks after the first dose of immune activity enhancement, antibody production ability Auxiliary agent Lung lavage fluid IgA serum IgG Example 17; Lecithin 54 (4/4) 735 (5/5) Example 18 Sodium salicylate 64 (5/5) 640 (5/5) Example 19 Menthol 74 (5/5) 1114 (5/5) Example 20 ΗΡ- / 3-six ΠΓ 'cystrine 56 (5/5) 970 (5/5) Comparative example 4 Soy lecithin <2 (0/4) 67 (4/4) Comparative Example 5 Sodium salicylate <2 (0/3) Ku 10 (1/3) Comparative Example 6 Menthol Ku 2 (0/5) 46 (5 / 5) Comparative Example 7 HP-?-Cyclote, cystrin <2 (0/5) 26 (2/5)

(表 9 ))(Table 9))

免疫活性増強の 初回投与後 4週目の抗体産生能 補助剤 肺洗浄液 IgA 血清 IgG 実施例 1 無添力 Π 11 (4/5) 2229 (5/5) 実施例 18 サリチル酸ナトリウム 42 (5/5) 1940 (5/5) 実施例 19 メント-ル 32 (5/5) 1280 (5/5) 実施例 21 P0E(9)ラウリルエ-テル 63 (5/5) 3880 (5/5) カルボキシビニルポ リマ一と免疫活性増強の補助剤を併用 した本製剤の場 合、 分泌型 IgAの産生は高 く なつたが、 免疫活性増強の補助剤のみの対照製 剤では、 分泌型 IgAの産生は全く 認められなかった。 血清 IgGについても、 本製剤の場合の方が増強された（表 8 )。 Antibody-producing ability 4 weeks after the first dose of immunopotentiation Auxiliary agent Lung lavage solution IgA serum IgG Example 1 No Π 11 (4/5) 2229 (5/5) Example 18 Sodium salicylate 42 (5/5 1940 (5/5) Example 19 Menthol 32 (5/5) 1280 (5/5) Example 21 P0E (9) Lauryl ether 63 (5/5) 3880 (5/5) Carboxyvinyl Production of secretory IgA increased in the case of this formulation using lima and an adjuvant for enhancing immune activity, but no secretory IgA was produced in a control product containing only the adjuvant for enhancing immune activity. I was not able to admit. Serum IgG was also enhanced with this formulation (Table 8).

また、 投与後 4週目の分泌型 IgAの産生を調べる と、 免疫活性増強の補助 剤の併用で高く なつた（表 9 )。 このこ とは、 分泌型 IgAの産生が持続的であ るこ とを示す。 試験例 3 (生物試験） In addition, when the production of secretory IgA was examined 4 weeks after the administration, the level was increased with the combined use of an adjuvant for enhancing immune activity (Table 9). This indicates that secretory IgA production is sustained. Test example 3 (biological test)

実施例 2 4、 比較例 8のワクチン製剤をマウスに事前に投与 して、 その後 の B S Aに対する抗体産生能を調べた。 The vaccine preparations of Example 24 and Comparative Example 8 were administered to mice in advance, and the subsequent antibody production against BSA was examined.

1 ) 免疫法 麻酔下の B A L B / cマウス （雄， 5週齢， n = 5 ) に、 実施例 2 4の製 剤 l m L /匹をゾンデによ り経口投与した。 なお、 比較例 8は蒸留水に分散 させ 1 m L /匹をゾンデによ り経口投与した。 投与回数は 6回と した。 初回 投与後 3 日間連続で投与し、 1 1 日間休薬し、 再度、 3 日間連続で投与した B S Aの 1 回あたりの投与量は 1 m g/匹と した。 これらに対して 5匹の非 免疫同居対照群をおいた。 初回投与後 6週目に B S Aに特異的な血清 IgGお よび腸内の分泌型 IgAを測定した。1) Immunization method BALB / c mice (male, 5 weeks old, n = 5) under anesthesia were orally administered with lmL / animal of Example 24 using a sonde. In Comparative Example 8, 1 mL / animal was orally administered via a sonde after dispersing in distilled water. The number of administrations was six. The dose of BSA administered for 3 consecutive days after the first dose, withdrawal for 11 days, and again for 3 consecutive days was 1 mg / animal. There were five non-immune cohabitation controls for these. Six weeks after the first administration, BSA-specific serum IgG and intestinal secretory IgA were measured.

2 ) サンプリ ング法2) Sampling method

初回投与後 6週目のマウスから ELISA測定用の血清を採取し、 その後、 腹 部を切開し、 十二指腸から盲腸付近までの腸管の約 2 5 cmを摘出した。 腸 管内に十二指腸側から洗浄液 （ダルべッコ（―）リ ン酸緩衝液 / 5 0 mM E D T A水溶液/大豆製ト リ プシンイ ンヒビ夕一 （ 2 5 mL ： 2 5 mL ： 5 mg) ) を 3 mL注入し回収した。 その後、 回収液をボルテックスで混合し遠心分離 (回転数 3 0 0 0 rpm、 1 0分）後、 上清を腸洗浄液サンプルと した。 Serum for ELISA measurement was collected from the mice 6 weeks after the first administration, and then the abdomen was incised, and about 25 cm of the intestinal tract from the duodenum to the vicinity of the cecum was extracted. A washing solution (Dalbecco (-) phosphate buffer / 50 mM EDTA aqueous solution / soybean trypsin inhibitor (25 mL: 25 mL: 5 mg)) was injected into the intestinal tract from the duodenum side. mL was injected and collected. Thereafter, the recovered solution was mixed with a vortex and centrifuged (rotation speed: 300 rpm, 10 minutes), and the supernatant was used as an intestinal washing solution sample.

3 ) 腸洗浄液中の分泌型 IgAの測定3) Measurement of secretory IgA in intestinal lavage

試験例 2 — 3 ) と同様と した。 なお、 非免疫対照群のマウスの腸洗浄液 ( 3 2倍希釈液） は吸光度 0 .2以下であった。 分泌型 IgA抗体価は、 吸光 度 0.2 を超える肺洗浄液の最大希釈倍率で表した。 また、 3 2倍希釈の肺 洗浄液の吸光度が 0 .2を超えたマウスの匹数を陽性反応の匹数と した。 4 ) 血清 IgGの測定 It was the same as in Test Example 2-3). The intestinal washing solution (32-fold diluted solution) of the non-immune control group mice had an absorbance of 0.2 or less. The secretory IgA antibody titer was expressed as the maximum dilution of lung lavage fluid having an absorbance of more than 0.2. The number of mice whose absorbance of the 32-fold diluted lung lavage fluid exceeded 0.2 was regarded as the number of positive reactions. 4) Measurement of serum IgG

試験例 2 — 4 ) と同様と した。 結果を表 9 に示す。 なお、 非免疫対照群の マウスの血清 （ 1 0倍希釈液） は吸光度 0 .2以下であった。 The same as Test Example 2-4). Table 9 shows the results. The serum (10-fold dilution) of the mice in the non-immune control group had an absorbance of 0.2 or less.

(表 10)(Table 10)

初回投与後 6週目の抗体産生能 Antibody production ability 6 weeks after initial administration

腸洗浄液 IgA 血清 IgG Intestinal wash IgA Serum IgG

実施例 24 56 (3/5) 1280 (5/5) Example 24 56 (3/5) 1280 (5/5)

比較例 8 く 32 (1/5) 320 (5/5) Comparative Example 8 32 (1/5) 320 (5/5)

( )内の数 iiS ： 陽性反応の匹数/試験匹数 実施例 2 4の製剤を経口投与した場合、 カルボキシビニルポリマ一を混合 しないマイ クロカプセルよ り I gA産生が高くなつた。 また、 血清 I gGもカル ボキシビニルポリマ一の併用で高く なつた。 産業上の利用可能性Number in parentheses iiS: Number of positive reaction animals / number of test animals When the formulation of Example 24 was orally administered, carboxyvinyl polymer was mixed IgA production was higher than microcapsules that did not. Serum IgG also increased with the combined use of carboxyvinyl polymer. Industrial applicability

本発明のワクチン製剤またはアジュバン ドを用いれば、 全身免疫系のみな らず、 抗原特異的な分泌型 I gAの産生も顕著に誘導するこ とができる。 本製 剤は、 従来行われていたカルボキシビ二ルポリマーの事前の中和処理を行わ ずに調製されるので、 工業的生産の点でも有利である。 By using the vaccine preparation or adjuvant of the present invention, not only the systemic immune system but also the production of antigen-specific secretory IgA can be significantly induced. Since this preparation is prepared without prior neutralization treatment of the carboxyvinyl polymer, which is conventionally performed, it is advantageous in terms of industrial production.

Claims

請求の範囲 The scope of the claims

1 . 抗原とカルボキシビ二ルポリマーを含有し、 該カルボキシビニルポリ マ一を中和するための塩基性物質を配合していないことを特徴とする、 粘膜 適用型ワクチン製剤。1. A vaccine preparation for mucosal application, comprising an antigen and a carboxyvinyl polymer, and containing no basic substance for neutralizing the carboxyvinyl polymer.

2 . p Hが 6 . 5以下である、 請求項 1 記載の製剤。 2. The formulation according to claim 1, wherein the pH is 6.5 or less.

3 . p Hが 6以下である、 請求項 2記載の製剤。 3. The formulation according to claim 2, wherein the pH is 6 or less.

4. p Hが 5以下である、 請求項 3記載の製剤。 4. The formulation according to claim 3, wherein the pH is 5 or less.

5 . カルボキシビ二ルポリマーの含量が、 製剤全重量に対して約 0 .0 1 〜約 1 0 %である、 請求項 1 から 4のいずれかに記載の製剤。 5. The formulation according to any one of claims 1 to 4, wherein the content of the carboxyvinyl polymer is about 0.01 to about 10% based on the total weight of the formulation.

6 . カルボキシビ二ルポリマーの含量が、 製剤全重量に対して約 0 .0 5 〜約 5.0 %である、 請求項 5記載の製剤。 6. The formulation of claim 5, wherein the content of carboxyvinyl polymer is from about 0.05 to about 5.0% based on the total weight of the formulation.

7 . 温度 2 0 で回転粘度計 （回転数 5 0 rpm)により測定した場合の粘 度が約 1 2 0 mPa's以下である、 請求項 1 から 6のいずれかに記載の製剤。 7. The formulation according to any one of claims 1 to 6, which has a viscosity of about 120 mPa's or less when measured by a rotational viscometer (rotation speed: 50 rpm) at a temperature of 20.

8. 粘度が約 1 〜約 1 0 0 mPa's である、 請求項 7記載の製剤。8. The formulation of claim 7, wherein the viscosity is from about 1 to about 100 mPa's.

9 . 粘度が約 3〜約 8 0 mPa's である、 請求項 8記載の製剤。 9. The formulation of claim 8, wherein the viscosity is from about 3 to about 80 mPa's.

1 0 . p Hが 6 .5以下であり、 カルボキシビ二ルポリマーの含量が製剤全 重量に対して約 0 .0 1 〜約 1 0 %であり、 かつ温度 2 0 °Cで回転粘度計 PH is not more than 6.5, the content of carboxyvinyl polymer is about 0.01 to about 10% based on the total weight of the preparation, and the rotational viscometer is at a temperature of 20 ° C.

(回転数 5 0 rpm)によ り測定した場合の粘度が約 1 2 0 mPa' s以下である、 請求項 1記載の製剤。The formulation according to claim 1, which has a viscosity of about 120 mPa's or less when measured by (rotation speed: 50 rpm).

1 1 . p Hが 5以下であり、 力ルポキシビ二ルポリマーの含量が製剤全重 量に対して約 0 .0 5〜約 5 .0 %であ り、 かつ粘度が約 1 〜約 1 0 0 mPa's である、 請求項 1 0記載の製剤。 PH is 5 or less, the content of the lipoxyvinyl polymer is about 0.05 to about 5.0% based on the total weight of the preparation, and the viscosity is about 1 to about 100%. The preparation according to claim 10, which is mPa's.

1 2 . 液剤または噴霧剤である、 請求項 1 から 1 1 のいずれかに記載の製 剤。 12. The preparation according to any one of claims 1 to 11, which is a liquid preparation or a spray preparation.

1 3 . 適用される粘膜が、 鼻腔、 口腔、 咽頭、 気管、 腸管、 または鳥類の ファブリキウス ¾の粘胶である、 請求項 1 から 1 2のいずれかに記載の製剤。 13. The preparation according to any one of claims 1 to 12, wherein the mucous membrane to be applied is a nasal cavity, an oral cavity, a pharynx, a trachea, an intestinal tract, or an avian Fabrycius mucosa.

1 4. 適用される粘膜が、 鼻腔の粘膜である、 請求項 1 3記載の製剤。14. The formulation of claim 13, wherein the applied mucosa is a nasal mucosa.

1 5 . 抗原が、 生も しくは不活化された、 細菌、 ウィルス、 および/また はマイコプラズマである、 請求項 1 〜 1 4のいずれかに記載の製剤。1 5. The antigen is live or inactivated by bacteria, viruses, and / or The formulation according to any one of claims 1 to 14, wherein is a mycoplasma.

1 6 . ヒ トを含む動物用である、 請求項 1 〜 1 5のいずれかに記載の製剤。 16. The preparation according to any one of claims 1 to 15, which is for animals containing humans.

1 7 . 抗原特異的な全身系免疫機構を誘導し、 かつ粘膜上に抗原特異的な 分泌型 I gAを産生させる、 請求項 1 〜 1 6のいずれかに記載の製剤。17. The preparation according to any one of claims 1 to 16, which induces an antigen-specific systemic immune system and produces antigen-specific secretory IgA on mucous membranes.

1 8 . カルボキシビ二ルポリマーを抗原と混合する時および該混合前後の いずれの段階においても、 該カルボキシビ二ルポリマ一を中和するための塩 基性物質を配合しないことを特徴とする、 請求項 1 〜 1 7のいずれかに記載 の製剤の製造方法。 18. A basic substance for neutralizing the carboxyvinyl polymer is not blended at the time of mixing the carboxyvinyl polymer with the antigen and at any stage before and after the mixing. Item 18. The method for producing the preparation according to any one of Items 1 to 17.

1 9 . 請求項 1 8記載の製造方法によ り製造され得る、 請求項 1 〜 1 7の いずれかに記載の製剤。 19. The preparation according to any one of claims 1 to 17, which can be produced by the production method according to claim 18.

2 0 . 粘膜適用型ワ クチン製剤を製造する際に、 基剤と してカルボキシビ 二ルポリマ一を、 それを中和するための塩基性物質を配合しないで使用する 方法。 20. A method in which a carboxyvinyl polymer is used as a base without producing a basic substance for neutralizing the vaccine when producing a mucosa-applied vaccine preparation.

2 1 . 粘膜適用型ワクチン製剤を投与した際に、 抗原特異的な全身系免疫 機構を誘導し、 かつ粘膜上に抗原特異的な分泌型 I gAを産生させるために行 う、 請求項 2 0記載の方法。 21. The administration of a mucosa-applied vaccine preparation to induce an antigen-specific systemic immunity mechanism and to produce an antigen-specific secretory IgA on the mucous membrane. The described method.

2 2 . カルボキシビ二ルポリマ一を中和するための塩基性物質を配合して いない、 カルボキシビニルポリマ一を含有する粘膜適用型ヮクチン製剤用ァ ジュノ S'ン ト 。 22. An adjuvant for mucosa-applicable pectin preparations containing a carboxyvinyl polymer, which does not contain a basic substance for neutralizing the carboxyvinyl polymer.

2 3 . 抗原特異的な分泌型 I gAの産生を促進する、 請求項 2 2記載のアジ ュノ、 'ン 卜。23. The azunophil according to claim 22, which promotes the production of antigen-specific secretory IgA.