WO1996032403A2 - Novel cytosine and cytidine derivatives - Google Patents

Abstract

The invention concerns cytosine and cytidine derivatives of general formula (1) and their production and use in medicaments.

Description

Translated fromGerman

Neue Cytosin- und Cytidinderivate New cytosine and cytidine derivatives

Die Erfindung betrifft Cytosin- und Cytidinderivate, deren Herstellung und Verwendung in Arzneimitteln.The invention relates to cytosine and cytidine derivatives, their production and use in medicaments.

Die therapeutische Anwendung von Cytidinen, insbesondere von Aracytidin und anderen Cytosin-Derivaten als Cytostatika oder Virustherapeutika wird beeinträchtigt durch ihre schnelle Deaktivierung durch Cytidin-Deaminasen, wobei aus den biologisch potenten Cytidinen bzw. Cytosin-Derivaten die entsprechenden inaktiven Uridine bzw. Uracil -Derivate entstehen wie von G. W. Camiener et al., Biochem. Pharmacol. 14, 1405 (1965), 16, 1681 (1967) und W. Kreis et al., Helv. Chim. Acta 61, 1011 (1978) beschrieben wird. Daher ist es von großem therapeutischen Interesse, Cytidine bzw. Cytosin-Derivate zu synthetisieren, die nicht Substrate der Cytidin-Deaminase sind und eine längere Wirkdauer in vivo besitzen.The therapeutic use of cytidines, in particular aracytidine and other cytosine derivatives as cytostatics or virus therapeutics, is impaired by their rapid deactivation by cytidine deaminases, the corresponding inactive uridines or uracil derivatives being formed from the biologically potent cytidines or cytosine derivatives as described by GW Camiener et al., Biochem. Pharmacol. 14, 1405 (1965), 16, 1681 (1967) and W. Kreis et al., Helv. Chim. Acta 61, 1011 (1978). It is therefore of great therapeutic interest to synthesize cytidines or cytosine derivatives which are not substrates of the cytidine deaminase and which have a longer duration of action in vivo.

Es wurde nun überraschend gefunden, daß Ansa-Cytosin- und Ansa-Cytidin-Derivate, die eine Dimethylengruppierung zwischen dem C⁵ -Kohlenstoff -Atom und dem N⁴-Stickstoff- Atom aufweisen, biologisch potente Moleküle darstellen, die nicht Substrate der Cytidin- Deaminase sind und daher nicht die oben erwähnten Nachteile der bereits zum Stand der Technik gehörenden Cytosin- und Cytidin-Derivate besitzen.It has now surprisingly been found that Ansa-cytosine and Ansa-cytidine derivatives, which have a dimethylene grouping between the C⁵ carbon atom and the N⁴ nitrogen atom, are biologically potent molecules which are not substrates of the cytidine Are deaminase and therefore do not have the disadvantages mentioned above of the cytosine and cytidine derivatives which already belong to the prior art.

Gegenstand der Erfindung sind Cytosin- und Cytidin-Derivate der allgemeinen Formel 1,The invention relates to cytosine and cytidine derivatives of the general formula 1,

worin

wherein

R Wasserstoff, CΗO, COR⁶ mit R⁶ in der Bedeutung von C₁-C₁₇ -Alkyl und Phenyl, oder COOR⁷ mit R⁷ in der Bedeutung von C₁-C₄Alkyl oder BenzylR is hydrogen, CΗO, COR⁶ with R⁶ in the meaning of C₁ -C₁₇ alkyl and phenyl, or COOR⁷ with R⁷ in the meaning of C₁ -C₄ alkyl or benzyl

R' Wasserstoff oder die GruppenR 'is hydrogen or the groups

:

:

worinwherein

n 1 oder 2n 1 or 2

X O, S, CH₂ oder NR,XO, S, CH₂ or NR,

R² Wasserstoff, Fluor, CH₃ oder CN,R^{2 is} hydrogen, fluorine, CH₃ or CN,

R³ Wasserstoff, Fluor, Hydroxy oder -OCH₃,R^{3 is} hydrogen, fluorine, hydroxy or -OCH₃ ,

R⁴ Wasserstoff, Fluor, Hydroxy, N₃ oder NH₂,R^{4 is} hydrogen, fluorine, hydroxy, N₃ or NH₂ ,

R⁵ Wasserstoff oder PO(OH)₂,R^{5 is} hydrogen or PO (OH)₂ ,

R², R³ gemeinsam =CH₂,R² , R³ together = CH₂ ,

R³, R⁴ gemeinsam eine Doppelbindung bilden und deren Salze.R³ , R⁴ together form a double bond and their salts.

Falls n = 2 ist, können alle Substituenten R² und R³ unterschiedlich sein.If n = 2, all substituents R² and R³ can be different.

Die Verbindungen der allgemeinen Formel 1 lassen sich beispielsweise folgendermaßen darstellen:The compounds of general formula 1 can be represented, for example, as follows:

Das bekannte 5-Hydroxyäthylcytosin 7 (J. D. Fissekis et al.; J. Org. Chem. 29, 2670 (1964)) läßt sich z. B. mit Triphenylphosphin-Dihalogeniden wie Bromid oder Chlorid und Triethylamin oder nach Mitsunobu zum neuen, noch nicht beschriebenen Ansa-Cytosin 1 (R = R₁ = H) cyclisieren, das sich zu den N-Acylderivaten wie dem N⁴-Acetylderivat 1 (R = COCH₃; R' = H) acylieren läßt. Silylierung von 1 (R = R₁ = H) mit Hexamethyldisilazan (HMDS) in Gegenwart einer katalytischen Menge Trimethylchlorsilan (TCS) in abs. Acetonitril gibt die 2,4-Bistrimethylsilylverbindung 8a, die sich mit 1-O-Acetyl-2,3,5-tri-O- benzoyl-β-D-ribofuranose 9 in Gegenwart von Trimethylsilyltriflat (oder SnCl₄) in Lösungsmitteln wie abs. 1,2-Dichlorethan oder Acetonitril in das geschützte kristalline Ansacytidin 10 umwandeln läßt. Analog reagiert die monosilylierte N⁴-Acetylverbindung 8b zum N⁴-acetylierten 2', 3',5'-Tri-O-benzoyl-ribofuranosid (10 mit N⁴-Acetylgruppe). Verseifung des Tribenzoates 10 ergibt das freie, kristalline Ansacytidin 11. Alternativ liefert die Umsetzung von persilylieitern 5-Hydroxyethyluracil mit 1-O-Acetyl-2,3,5-tri-O-benzoyl- β-D-ribose 9 in Gegenwart von Trimethylsilyltriflat (oder SnCl₄) das 5-Hydroxyethyl-2',3',5'- tri-O-benzoyl-uridin 12. Umsetzung von 12 mit POCl₃ (oder mit Triphe-nylphosphin/1,2-Di- bromtetrachloräthan) in Acetonitril ergibt die geschützte Dichlor- (oder Di-brom-)verbindung 13, die sich mit methanolischem Ammoniak in Gegenwart von tertiären Basen wie Triethylamin, Ethyldiisopropylamin oder DBU unter gleichzeitiger Verseifung der O- Benzoylgruppen zum freien Ansacytidin 11 cyclisiert.The well-known 5-hydroxyethylcytosine 7 (JD Fissekis et al .; J. Org. Chem. 29, 2670 (1964)) can e.g. B. with triphenylphosphine dihalides such as bromide or chloride and triethylamine or after Mitsunobu to cyclize to the new, not yet described Ansa-cytosine 1 (R = R₁ = H), which becomes the N-acyl derivatives such as the N⁴ -acetyl derivative 1 ( R = COCH₃ ; R '= H) can be acylated. Silylation of 1 (R = R₁ = H) with hexamethyldisilazane (HMDS) in the presence of a catalytic amount of trimethylchlorosilane (TCS) in abs. Acetonitrile gives the 2,4-bistrimethylsilyl compound 8a, which deals with 1-O-acetyl-2,3,5-tri-O-benzoyl-β-D-ribofuranose 9 in the presence of trimethylsilyl triflate (or SnCl₄ ) in solvents such as abs . Can convert 1,2-dichloroethane or acetonitrile into the protected crystalline ansacytidine 10. Analog reacts the monosilylated N⁴ -Acetylverbindung 8b for N⁴ -acetylierten 2 ', 3', 5'-Tri-O-benzoyl-ribofuranoside (10 N⁴ acetyl group). Saponification of the tribenzoate 10 gives the free, crystalline ansacytidine 11. Alternatively, it provides the reaction of 5-hydroxyethyluracil with 1-O-acetyl-2,3,5-tri-O-benzoyl-β-D-ribose 9 in the presence of trimethylsilyl triflate (or SnCl₄ ) the 5-hydroxyethyl-2 ', 3 ', 5'- tri-O-benzoyl-uridine 12. Reaction of 12 with POCl₃ (or with triphenylphosphine / 1,2-dibromotetrachloroethane) in acetonitrile gives the protected dichloro (or di-bromo) compound 13, which cyclizes with methanolic ammonia in the presence of tertiary bases such as triethylamine, ethyldiisopropylamine or DBU with simultaneous saponification of the O-benzoyl groups to give free ansacytidine 11.

ZZ.

a) R⁵ = H, b) R⁵ = PO(OH)₂, c) R⁵ = PO(OH)ONa

a) R⁵ = H, b) R⁵ = PO (OH)₂ , c) R⁵ = PO (OH) ONa

Das Ansacytidin 11 läßt sich nach den üblichen Methoden, z. B. durch Reaktion von 11 mit 2-Acetoxyisobuttersäurechlorid (J. G. Moffatt et al.; J. Org. Chem. 39, 2182 (1974)) oder 2- Acetoxybenzoylchlorid (J. J. Fox et al.; Synthesis 533 (1976)) bei 24 °C in Acetonitril bzw. durch Erhitzen mit Diphenylcarbonat in Gegenwart von Natriumbicarbonat (C. B. Reese et al., J. Chem. Soc, Perlon Trans. 1, 1172 (1982)), oder Ethylencarbonat (Ajinomoto Inc., DOS 2.261215) ins 2,2'-Anhydro-ansacytidin-Hydrochlorid 14 überführen. Nachfolgende Behandlung mit wäßrigem Ammoniak oder 1 N NaOH, Abdampfen, und Kristallisation aus Methanol liefert das kristalline Ansa-ara-cytidin 15a. Umsetzung mit äquivalenten Mengen an methanolischer HCl und vorsichtigen Konzentrieren bei T < 20 ° ergibt das kristalline Ansa- ara-cytidin-Hydrochlorid 15a HCl. Phosphorierung möit POCI₃ in Triethylphosphat ergibt das Phosphat 15b, aus dem sich über Nacht das Monophosphat 15c herstellen läßt.The Ansacytidin 11 can by the usual methods, for. B. by reaction of 11 with 2-acetoxyisobutyric acid chloride (JG Moffatt et al .; J. Org. Chem. 39, 2182 (1974)) or 2-acetoxybenzoyl chloride (JJ Fox et al .; Synthesis 533 (1976)) at 24 ° C in acetonitrile or by heating with diphenyl carbonate in the presence of sodium bicarbonate (CB Reese et al., J. Chem. Soc, Perlon Trans. 1, 1172 (1982)), or ethylene carbonate (Ajinomoto Inc., DOS 2.261215) ins 2, Transfer 2'-anhydro-ansacytidine hydrochloride 14. Subsequent treatment with aqueous ammonia or 1N NaOH, evaporation, and crystallization from methanol gives the crystalline Ansa-ara-cytidine 15a. Reaction with equivalent amounts of methanolic HCl and careful concentration at T <20 ° gives the crystalline solution. ara-cytidine hydrochloride 15a HCl. Phosphorization with POCI₃ in triethyl phosphate gives the phosphate 15b, from which the monophosphate 15c can be produced overnight.

Alternativ läßt sich 2,2'-Anhydro-ansacytidin 14 aus dem Oxazolin 16, das aus D-Arabinose und Cyanamid einfach zugänglich ist (R. A. Sanchez und L. E. Orgel, J. Mol. Biol. 47, 531 (1970); D. H. Shannahoff und R. A. Sanchez, J. Org. Chem. 38, 593 (1973)), durch Kondensation mit 2-Formyl-pyrrolidon 17 herstellen. Kondensation von 17 mit Harnstoff oder N¹,N² -bis-Trimethylsilylharnstoff ergibt Ansacytosin 1 (R = H; DPTBS; BOC).Alternatively, 2,2'-anhydro-ansacytidine 14 can be obtained from oxazoline 16, which is easily accessible from D-arabinose and cyanamide (RA Sanchez and LE Orgel, J. Mol. Biol. 47, 531 (1970); DH Shannahoff and RA Sanchez, J. Org. Chem. 38, 593 (1973)), by condensation with 2-formyl-pyrrolidone 17. Condensation of 17 with urea or N¹ , N² -bis-trimethylsilylurea gives ansacytosine 1 (R = H; DPTBS; BOC).

Selektiver Schutz der 5'-Hydroxylgruppe in 11 (oder dem entsprechenden N⁴-Acetylderivat) durch Tritylierung oder Silylierung, anschließende Mesylierung der 2',3'-Hydroxylgruppen und Behandlung mit Li₂Te liefert die 5'-geschützte 2,'3' -Didehydro-2',3'-dideoxyverbindung, aus der sich durch Hydrierung und anschließende Entfernung der 5'-Schutzgruppe das 2',3'- Dideoxyansa-ara-cytidin herstellen läßt. Reaktion der Silylverbindung 8b mit 1-α-Chloro-2- desoxy-3,5-di-O-toluolyl-D-ribofuranose 18 in Gegenwart von Trimethylsilyltriflat in abs. 1,2-Dichlorethan ergibt ein α/ß-Gemisch der geschützten 2'-Deoxyverbindungen, aus dem sich das ß-Anomer 19 kristallin vom α-Anomer 20 abtrennen läßt.Selective protection of the 5'-hydroxyl group in 11 (or the corresponding N⁴ -acetyl derivative) by tritylation or silylation, subsequent mesylation of the 2 ', 3'-hydroxyl groups and treatment with Li₂ Te provides the 5'-protected 2,' 3 ' -Didehydro-2 ', 3'-dideoxy compound, from which the 2', 3'-dideoxyansa-ara-cytidine can be prepared by hydrogenation and subsequent removal of the 5'-protecting group. Reaction of the silyl compound 8b with 1-α-chloro-2-deoxy-3,5-di-O-toluolyl-D-ribofuranose 18 in the presence of trimethylsilyl triflate in abs. 1,2-dichloroethane gives an α / β mixture of the protected 2'-deoxy compounds, from which the β-anomer 19 can be separated from the α-anomer 20 in crystalline form.

Verseifung von 19 mit methanolischem Ammoniak führt zum freien kristallinen 2'-Desoxy- ansacytidin 21.

Saponification of 19 with methanolic ammonia leads to the free crystalline 2'-deoxy-anacytidine 21.

Reaktion von 8b mit dem 2-Fluorderivat 22 (vgl. J. A. Martin et al., J. Med. Chem. 33, 2137 (1990)) gefolgt von Verseifung und Trennung ergibt neben dem ß-Anomer 23 das α-Anomer 24.Reaction of 8b with the 2-fluorine derivative 22 (cf. J.A. Martin et al., J. Med. Chem. 33, 2137 (1990)) followed by saponification and separation gives, in addition to the β-anomer 23, the α-anomer 24.

Umsetzung von 8b mit dem 2,2-Difluorzucker 25 (T. S. Chou, P. C. Heath, L. E. Patterson, L. M. Poket, R. E. Lakin und A. H. Hunt, Synthesis 565 (1992)) in Gegenwart von Trime- thylsilyltriflat in 1,2-Dichlorethan liefert nach Trennung und Verseifung das 2'-Desoxy-2',2'- difluor-ansacytidin 26 sowie das entsprechende α-Anomer 27.Reaction of 8b with the 2,2-difluorosugar 25 (TS Chou, PC Heath, LE Patterson, LM Poket, RE Lakin and AH Hunt, Synthesis 565 (1992)) in the presence of trimethylsilyl triflate in 1,2-dichloroethane Separation and saponification of the 2'-deoxy-2 ', 2'-difluoro-ansacytidine 26 and the corresponding α-anomer 27.

Reaktion des 2'-Desoxyansacytidins 21 mit tert.-Butyldiphenylsilylchlorid und nachfolgendem Erhitzen mit Diphenylcarbonat/NaHCO₃ ergibt das 2'-Deoxy-2,3'-anhydro-ansa-cytidin 28, das sich mit HN₃ oder AlF₃ und nachfolgender Abspaltung der TBDPS-Gruppe mit F- in das 3'-Azidoderivat 29 sowie das 3'-Fluoroderivat 30 umwandeln läßt.Reaction of the 2'-deoxyansacytidine 21 with tert-butyldiphenylsilyl chloride and subsequent heating with diphenyl carbonate / NaHCO₃ gives the 2'-deoxy-2,3'-anhydro-ansa-cytidine 28, which can be converted into the 3'-azido derivative 29 and the 3'-fluoro derivative 30 with HN₃ or AlF₃ and subsequent cleavage of the TBDPS group with F-.

Das 3'-Azidoderivat 29 läßt sich zum 3'-Aminoderivat hydrieren. Reaktion des N-acetylierten Ansacytidins 31 mit TIPS-Cl₂ und anschließende CrO₃-Oxydation ergibt das 2'-Keton 32, das in einer Wittig-Reaktion gefolgt von Fluorid-Behandlung das freie 2'-Methylennucleosid 33 liefert. Reaktion des Ketons 22 mit NaCN/NaHCO₃ in Et₂O/H₂O führt zum Cyanohydrin 34. Acylierung von 34 mit QH₅-O-CS-CI in Gegenwart von Triethylamin-DMAP und nachfolgende radikalische Reduktion mit Bu₃SnH/ AIBN und schließlich Abspaltung der Silyl- gruppen liefert das 2'-Desoxy-2-cyanoansacytidin 35 (vgl. A. Matsuda et al., Tetrahedron Leu. 32, 6003 (1991)).The 3'-azido derivative 29 can be hydrogenated to the 3'-amino derivative. Reaction of the N-acetylated ansacytidine 31 with TIPS-Cl₂ and subsequent CrO₃ oxidation gives the 2'-ketone 32, which in a Wittig reaction followed by fluoride treatment gives the free 2'-methylene nucleoside 33. Reaction of ketone 22 with NaCN / NaHCO₃ in Et₂ O / H₂ O leads to cyanohydrin 34. Acylation of 34 with QH₅ -O-CS-CI in the presence of triethylamine-DMAP and subsequent radical reduction with Bu₃ SnH / AIBN and finally cleavage of the silyl groups gives 2'-deoxy-2-cyanoansacytidine 35 (cf. A. Matsuda et al., Tetrahedron Leu. 32, 6003 (1991)).

Die Umsetzung von 8b mit reaktiven Zwischenstufen wie z. B. den entsprechenden Halogenderivaten ergibt die Secoderivate 3' (vgl. A. Holy, Coll. Czech. Commun. 58, 649 (1993), P. R. Brodfuehrer et al., Tetrahedron Lett. 35, 3243 (1994)), 4' und 5', während dieThe implementation of 8b with reactive intermediates such. B. the corresponding halogen derivatives gives the Secoderivate 3 '(cf. A. Holy, Coll. Czech. Commun. 58, 649 (1993), PR Brodfuehrer et al., Tetrahedron Lett. 35, 3243 (1994)), 4' and 5 'while the

Reaktion von 8 mit 5-Acetoxy-2-acetoxymethylthiazolidin in Gegenwart von Trimethyl- silyltriflat und nachfolgende Verseifung ein cis/trans-Gemisch liefert, aus dem sich das Nucleosid 6 rein abtrennen läßt.

Reaction of 8 with 5-acetoxy-2-acetoxymethylthiazolidine in the presence of trimethylsilyl triflate and subsequent hydrolysis yields a cis / trans mixture from which the nucleoside 6 can be separated off.

Gegenstand der Erfindung ist das Verfahren zur Herstellung der Verbindungen der Formel 1 The invention relates to the process for the preparation of the compounds of the formula 1

worin die Reste R' und R die oben angegebene Bedeutung haben, dadurch gekennzeichnet, daß man a) eine Verbindung der Formel 7in which the radicals R 'and R have the meaning given above, characterized in that a) a compound of the formula 7

mit Triphenylphosphindihalogenid und einem tertiären Amin umsetzt oder b) ein Formylpyrrolidon-Derivat der Formelnwith triphenylphosphine dihalide and a tertiary amine or b) a formylpyrrolidone derivative of the formulas

worin R¹³ Wasserstoff, einen SiR¹⁴R¹⁵R¹⁶-Rest, in dem R¹⁴, R¹⁵, R¹⁶ gleich oder verschieden sind und Phenyl oder C₁-C₄-Alkyl bedeuten, oder tert.-Butyloxycarbonyl bedeutet, mit einem Harnstoffderivat oder einem Isoharnstoffderivat wie 16in which R^{13 is} hydrogen, an SiR¹⁴ R¹⁵ R¹⁶ radical in which R¹⁴ , R¹⁵ , R^{16 are} identical or different and are phenyl or C₁ -C₄ alkyl, or is tert-butyloxycarbonyl, with a urea derivative or an isourea derivative such as 16

worin R¹⁷, R¹⁸ gleich oder verschieden sind und Wasserstoff oder SiR¹⁴R¹⁵ R¹⁶ bedeuten, umsetzt und gewünschtenfalls anschließend in 7-Stellung formyliert, acyliert oder COOR⁷ einführt oder in 3-Stellung den gegebenenfalls Hydroxyschutzgruppen enthaltenden Rest R' einführt und anschließend gewünschtenfalls N₃, NH₂, Fluor, CN oder =CH₂ einführt oder R³, R⁴ in der Bedeutung einer Doppelbindung einführt und diese gewünschtenfalls hydriert oder 5'

wherein R¹⁷ , R^{18 are the} same or different and are hydrogen or SiR¹⁴ R¹⁵ R¹⁶ , reacted and, if desired, subsequently formylated, acylated or introduced COOR⁷ or introduced in the 3-position the radical R ′ which may contain hydroxyl protective groups and then, if desired, introduces N₃ , NH₂ , fluorine, CN or = CH₂ or R³ , R⁴ in the meaning of a double bond and if desired hydrogenates or 5 '

Hydroxylgruppen in das 5'-Phosphat überführt und gegebenenfalls Schutzgruppen abspaltet oder die Salze bildet.Hydroxyl groups are converted into the 5'-phosphate and, if appropriate, protective groups are split off or the salts are formed.

Als Salze der 5'-Phosphate sind Alkalisalze wie Natrium- und Kalisalze und Ammoniumsalze geeignet. Als Hydroxyschutzgruppen können die gebräuchlichen Gruppen eingesetzt werden. Unter Alkyl sind geradkettige und verzweigte Alkyle zu verstehen, insbesondere C_1-4-Alkyle und C₁₅- und C₁₆-Alkylenreste.Alkali salts such as sodium and potassium salts and ammonium salts are suitable as salts of the 5'-phosphates. The customary groups can be used as hydroxyl protective groups. Alkyl is to be understood as meaning straight-chain and branched alkyls, in particular C_1-4 alkyls and C₁₅ and C₁₆ alkylene radicals.

Als bevorzugte Bedeutung des Restes R' ist die Gruppe 2 zu betrachten, wobei insbesondere n = 1 und X = O bevorzugt sind. Group 2 is to be regarded as the preferred meaning of the radical R ', n = 1 and X = O in particular being preferred.

Die Nucleoside der Formel 1 mit freien 5'-Hydroxylgruppen lassen sich mit Hilfe bekannter Methoden (M. Yoshikawa, T. Kato und T. Takenishi, Bull. Chem. Soc. Jap. 42, 3505 (1969) sowie T. Sowa und S. Ouchi, Bull. Chem. Soc. Jap. 48, 2084 (1975)) leicht in die entsprechenden 5'-Phosphate und deren Salze überführen.The nucleosides of formula 1 with free 5'-hydroxyl groups can be prepared using known methods (M. Yoshikawa, T. Kato and T. Takenishi, Bull. Chem. Soc. Jap. 42, 3505 (1969) and T. Sowa and S Ouchi, Bull. Chem. Soc. Jap. 48, 2084 (1975)) can easily be converted into the corresponding 5'-phosphates and their salts.

Die aufgeführten neuen Ansacytidine der allgemeinen Formel 1 sowie ihre 5'-Phosphate und Salze zeichnen sich speziell durch langanhaltende in vitro und in vivo Wirkung in verschiedenen Mäuse-Leukämiemodellen, insbesondere bei der L1210-Leukämie der Maus, der Zellkultur HL 60 sowie bei verschiedenen Viruskrankheiten aus.The listed new ansacytidines of general formula 1 as well as their 5'-phosphates and salts are particularly characterized by long-lasting in vitro and in vivo effects in various mouse leukemia models, in particular in mouse L1210 leukemia, HL 60 cell culture and in various viral diseases out.

Insbesondere die Verbindung 21 sowie die entsprechenden Phosphoramidate von 21, eignen sich hervorragend für die Bildung von stabiler Triplex-DNA (vgl. 5-MethyI-2'-deoxycytidin: G. C. Best und P. B. Dervan. J. Amer. Chem. Soc. 117, 1187 (1995)).Compound 21 in particular and the corresponding phosphoramidates of 21 are particularly suitable for the formation of stable triplex DNA (cf. 5-methyl-2'-deoxycytidine: GC Best and PB Dervan. J. Amer. Chem. Soc. 117, 1187 (1995)).

Zur Verwendung der erfindungsgemäßen Verbindungen als Arzneimittel werden diese in die Form eines pharmazeutischen Präparats gebracht, das neben dem Wirkstoff für die enterale oder parenterale Applikation geeignete pharmazeutische, organische oder anorganische inerte Trägermaterialien, wie zum Beispiel, Wasser, Gelantine, Gummi arabicum, Milchzucker, Stärke, Magnesiumstearat, Talk, pflanzliche Öle, Polyalkylenglykole usw. enthält. Die pharmazeutischen Präparate können in fester Form, zum Beispiel als Tabletten, Dragees, Suppositorien, Kapseln oder in flüssiger Form, zum Beispiel als Lösungen, Suspensionen oder Emulsionen vorliegen. Gegebenenfalls enthalten sie drüber hinaus Hilfsstoffe wie Konservierungs-, Stabilisierungs-, Netzmittel oder Emulgatoren, Salze zur Veränderung des osmotischen Drucks oder Puffer.To use the compounds according to the invention as pharmaceuticals, they are brought into the form of a pharmaceutical preparation which, in addition to the active ingredient for enteral or parenteral administration, has suitable pharmaceutical, organic or inorganic inert carrier materials, such as, for example, water, gelatin, gum arabic, lactose, starch , Magnesium stearate, talc, vegetable oils, polyalkylene glycols etc. contains. The Pharmaceutical preparations can be in solid form, for example as tablets, dragées, suppositories, capsules or in liquid form, for example as solutions, suspensions or emulsions. If necessary, they also contain auxiliary substances such as preservatives, stabilizers, wetting agents or emulsifiers, salts for changing the osmotic pressure or buffers.

Für die parenterale Anwendung sind insbesondere Injektionslösungen oder Suspensionen, insbesondere wäßrige Lösungen der aktiven Verbindungen in polyhydroxyethoxyliertem Rizinusöl, geeignet.Injection solutions or suspensions, in particular aqueous solutions of the active compounds in polyhydroxyethoxylated castor oil, are particularly suitable for parenteral use.

Als Trägersysteme können auch grenzflächenaktive Hilfsstoffe wie Salze der Gallensäuren oder tierische oder pflanzliche Phospholipide, aber auch Mischungen davon sowie Liposome oder deren Bestandteile verwendet werden.Surfactant auxiliaries such as salts of bile acids or animal or vegetable phospholipids, but also mixtures thereof and liposomes or their components can also be used as carrier systems.

Für die orale Anwendung sind insbesondere Tabletten, Dragees oder Kapseln mit Talkum und/oder Kohlenwasserstoffträger oder -binder, wie zum Beispiel Lactose, Mais- oder Kartoffelstärke, geeignet. Die Anwendung kann auch in flüssiger Form erfolgen, wie zum Beispiel als Saft, dem gegebenenfalls ein Süßstoff beigefügt ist.Tablets, coated tablets or capsules with talc and / or hydrocarbon carriers or binders, such as lactose, corn or potato starch, are particularly suitable for oral use. It can also be used in liquid form, for example as juice, to which a sweetener may be added.

Die Dosierung der Wirkstoffe kann je nach Verabfolgungsweg, Alter und Gewicht des Patienten, Art und Schwere der zu behandelnden Erkrankung und ähnlichen Faktoren variieren.The dosage of the active ingredients can vary depending on the route of administration, age and weight of the patient, type and severity of the disease to be treated and similar factors.

Soweit die Herstellung der Ausgangsverbindungen nicht beschrieben wird, sind diese bekannt oder analog zu bekannten Verbindungen oder hier beschriebenen Verfahren herstellbar.If the preparation of the starting compounds is not described, they are known or can be prepared analogously to known compounds or processes described here.

Die nachfolgenden Beispiele sollen das erfindungsgemäße Verfahren erläutern:The following examples are intended to explain the process according to the invention:

Beispiel 1example 1

Herstellung des 3,5,6,7-Tetrahydro-2H-pyrrolo[2,3d]pyrimidin-2-on 1 (R = R' = H)Preparation of 3,5,6,7-tetrahydro-2H-pyrrolo [2,3d] pyrimidin-2-one 1 (R = R '= H)

Zu einer gerührten Suspension von 7,75 g (50 mmol) des bekannten 5-(2-Hydroxy- ethyl)cytosins 7 (J. D. Fissekis et al., J. Org. Chem. 29, 2670 (1964)) und 15,73 g (60 mmol) Triphenylphosphin wurde bei +4 → 7 ° eine Lösung von 17,91 g (55 mmol) 1,2- Dibromotetrachlorethan in 75 ml abs. DMF innerhalb von 1 h zugetropft und noch 0,5 h bei +6 ° gerührt. Nach Aufwärmen auf 21 ° wurde die Reaktionsmischung nach 18 h bei 21 °C belassen, dann 25,85 g (200 mmol) N-Ethyl-N-diisopropylamin zugegeben und die Reaktionsmischung 2 h bei 82 - 84 ° Ölbadtemperatur erhitzt, wobei anfangs eine klare Lösung entstand, aus der aber nach ca. 45 Minuten wieder Kristalle ausfielen. Nach Abkühlen auf 65 º wurde filtriert und die abgesaugte Substanz mit 35 ml DMF gewaschen, wobei 2,51 g reinesTo a stirred suspension of 7.75 g (50 mmol) of the known 5- (2-hydroxyethyl) cytosine 7 (JD Fissekis et al., J. Org. Chem. 29, 2670 (1964)) and 15.73 g (60 mmol) triphenylphosphine was at +4 → 7 ° a solution of 17.91 g (55 mmol) 1,2-dibromotetrachloroethane in 75 ml abs. DMF added dropwise within 1 h and stirred for a further 0.5 h at +6 °. After warming up to 21 °, the reaction mixture was left at 21 ° C. after 18 h, then 25.85 g (200 mmol) of N-ethyl-N-diisopropylamine were added and the reaction mixture was heated at an oil bath temperature of 82-84 ° for 2 h, initially with clear solution was formed, from which crystals precipitated again after about 45 minutes. After cooling to 65 °, the mixture was filtered and the suctioned substance was washed with 35 ml of DMF, 2.51 g of pure

1 erhalten wurde. Das Filtrat wurde bei 65 - 70 ° im Vakuum abgedampft und der Rückstand mit 500 ml CH₂Cl₂ und 20 ml N-Ethyl-N-diisopropylamin gerührt und die ungelöste Substanz abgesaugt und nochmals mit 100 ml CH₂Cl₂ sowie 10 ml N-Ethyl-N-diisopropylamin gewaschen und getrocknet, wobei weitere 5,03 g 1 erhalten wurden. Beide Positionen 1 wurden in 150 ml H₂O suspendiert und unter Rühren so lange ges. NaHCO₃-Lösung zugegeben, bis ein p_H = 8 - 9 erreicht wurde. Nach einer weiteren Stunde Rühren bei 24 ° wurde abgedampft und der Rückstand aus 50 ml H₂O unter Zusatz von Aktivkohle umkristallisiert, wobei 4,8 g 1, Schmp. 310 ° (zers.) (Sublimation bei 260 °) erhalten wurden (¹H- NMR (DMSO-D₆ δ: 2.68 - 2.73 (tr, CH₂-C), 3.56 - 3.63 (tr, CH₂-N), 7.18 (s, H-C=C)1 was obtained. The filtrate was evaporated at 65-70 ° in vacuo and the residue was stirred with 500 ml of CH₂ Cl₂ and 20 ml of N-ethyl-N-diisopropylamine and the undissolved substance was suctioned off and again with 100 ml of CH₂ Cl₂ and 10 ml of N -Ethyl-N-diisopropylamine washed and dried, whereby a further 5.03 g 1 were obtained. Both positions 1 were suspended in 150 ml H₂ O and sat so long with stirring. NaHCO₃ solution was added until ap_H = 8-9 was reached. After stirring for a further hour at 24 °, the mixture was evaporated and the residue was recrystallized from 50 ml of H₂ O with the addition of activated carbon, giving 4.8 g of 1, mp. 310 ° (dec.) (Sublimation at 260 °) (¹ H NMR (DMSO-D₆ δ: 2.68 - 2.73 (tr, CH₂ -C), 3.56 - 3.63 (tr, CH₂ -N), 7.18 (s, HC = C)

Beispiel 2Example 2

Darstellung von 7-Acetyl-3,5,6,7-tetrahydro-2H-pyrrolo[2,3-d]pyrimidin-2-on 1 (R = COCH₃; R' = H)Preparation of 7-acetyl-3,5,6,7-tetrahydro-2H-pyrrolo [2,3-d] pyrimidin-2-one 1 (R = COCH₃ ; R '= H)

3,7 g (29,98 mmol) 3,5,6,7-Tetrahydro-2H-pyrrolo[2,3-d]pyrimidin-2-on wurden in 50 ml abs. Pyridin suspendiert und 8 ml Acetanhydrid zugegeben, worauf sich die Reaktionsmischung auf 28 ° erwärmte. Die nach einer Stunde Rühren klar gewordene Lösung wurde nach 18 h im Vakuum abgedampft, dreimal nach Zugabe von jeweils 30 ml abs. Xylol eingeengt und der Rückstand an der Ölpumpe getrocknet. Bei der Umkristallisation aus 50 ml Methanol und 2 ml H₂O wurden 1,58 g N-Acetylverbindung, Schmp. 274 - 279 ° und bei der Konzentration der Mutterlauge auf 25 ml weitere 0,68 g = insgesamt 2,26 g N- Acetylverbindung erhalten. Die abgedampfte Mutterlauge wurde mit 25 ml Pyridin - 5 ml Acetanhydrid nachacetyliert und nach 20 h mit Xylol mehrfach im Vak. abgedampft, wobei weitere 2,1 g praktisch reine N-Acetylverbindung erhalten wurden. Schmp. 274 - 279 °C,¹H- NMR (DMSO-D₆) δ: 2,56 (s, CH₃CO), 2,72 - 2,78 (m, CH₂-C=), 3,88 - 3,92 (m, CH₂-N), 7,56 (s, H-C=C), 11,05 (br, HN)3.7 g (29.98 mmol) 3,5,6,7-tetrahydro-2H-pyrrolo [2,3-d] pyrimidin-2-one were dissolved in 50 ml abs. Pyridine suspended and 8 ml of acetic anhydride added, whereupon the reaction mixture warmed to 28 °. The solution which became clear after stirring for one hour was evaporated in vacuo after 18 h, three times after the addition of 30 ml of abs. Xylene concentrated and the residue dried on an oil pump. In the recrystallization from 50 ml of methanol and 2 ml of H₂ O, 1.58 g of N-acetyl compound, mp. 274-279 ° and a further 0.68 g = a total of 2.26 g of N- Acetyl compound obtained. The evaporated mother liquor was post-acetylated with 25 ml pyridine - 5 ml acetic anhydride and after 20 h with xylene several times in vacuo. evaporated to give a further 2.1 g of practically pure N-acetyl compound. Mp 274 - 279 ° C,¹ H- NMR (DMSO-D₆ ) δ: 2.56 (s, CH₃ CO), 2.72 - 2.78 (m, CH₂ -C =), 3.88 - 3.92 (m, CH₂ - N), 7.56 (s, HC = C), 11.05 (br, HN)

Beispiel 3Example 3

3-(2',3',5'-Tri-O-benzoyl-ß-D-ribofuranosyl)-3,5,6,7-tetrahydro-2H-pyrrolo[2,3- d]pyrimidin-2-on 103- (2 ', 3', 5'-Tri-O-benzoyl-β-D-ribofuranosyl) -3,5,6,7-tetrahydro-2H-pyrrolo [2,3-d] pyrimidin-2-one 10th

Ca. 5 - 6 g rohes 3,5,6,7-Tetrahydro-2H-pyrrolo[2,3-d]pyrimidin-2-on 1 (R' = R = H) wurden mit 20 ml abs. Pyridin mit 125 ml Hexamethyldisilazan 12 h gekocht, dann im Vakuum eingeengt und der Rückstand zweimal mit je 50 ml Xylol abgedampft und schließlich an der Ölpumpe getrocknet, wobei 10,41 (36,97 mmol) kristalline Bisilylverbindung 8a erhalten wurde. Die Silylverbindung wurde mit 18,64 g (36,97 mmol) 1-O-Acetyl-2,3,5-tri-O- benzoyl-β-D-ribofuranose 9 unter Stickstoff in 200 ml abs. 1,2-Dichloräthan gelöst, darauf 8 ml (44 mmol) Trimethylsilyltriflat in 75 ml 1,2-Dichlorethan innerhalb von 30 min unter Rühren bei 24 ° zugetropft und die Reaktionsmischung 72 h bei 24 ° belassen. Nach Verdünnen mit 250 ml CH₂Cl₂ wurde mit 200 ml eiskalter gesättigter NaHCO₃-Lösung geschüttelt, die Phasen getrennt und die wäßrige Phase mit 2 x 200 ml CH₂Cl₂ nachextrahiert. Nach Trocknen (Na₂SO₄) und Abdampfen wurde der amorphe Rückstand (22,4 g) CH₂Cl₂ an einer Säule von 450 g SiO₂ Chromatographien, wobei 1 1 CH₂Cl₂ sowie weitere 2 1 CH₂Cl₂- Isopropanol (98 : 2) nur 3,15 g Nebenprodukte enthielten, während weitere Elution mit 2 - 3 1 des 98:2-Gemisches 17,25 g (80,23 %) reines homogenes Nucleosid 10 lieferte, das aus wenig Methanol kristallsierte. Schmp. 224 - 226 °C,¹H-NMR (DMSO-D₆) δ: 2.99 (tr, 2 H; CH₂-C=C), 3,74 (tr, 2 H; CH₂-N), 3,79 - 3,92 (m, 2 H; H₅'), 4,13 (m, 1 H, H₄') 4,21 (m, 1 H, H₃'), 4,28 - 4,32 (m, 1 H; H₂'), 7,48 (s, 1 H, H-C=C)Approximately 5 - 6 g of crude 3,5,6,7-tetrahydro-2H-pyrrolo [2,3-d] pyrimidin-2-one 1 (R '= R = H) were treated with 20 ml of abs. Pyridine boiled with 125 ml of hexamethyldisilazane for 12 h, then concentrated in vacuo and the residue was evaporated twice with 50 ml of xylene and finally dried on an oil pump, giving 10.41 (36.97 mmol) of crystalline bisilyl compound 8a. The silyl compound was treated with 18.64 g (36.97 mmol) of 1-O-acetyl-2,3,5-tri-O-benzoyl-β-D-ribofuranose 9 under nitrogen in 200 ml of abs. Dissolved 1,2-dichloroethane, then 8 ml (44 mmol) of trimethylsilyl triflate in 75 ml of 1,2-dichloroethane were added dropwise with stirring at 24 ° within 30 min and the reaction mixture was left at 24 ° for 72 h. After dilution with 250 ml of CH₂ Cl₂ , the mixture was shaken with 200 ml of ice-cold saturated NaHCO₃ solution, the phases were separated and the aqueous phase was subsequently extracted with 2 × 200 ml of CH₂ Cl₂ . After drying (Na₂ SO₄₎ and evaporation of the amorphous residue (22.4 g), CH₂ Cl₂ to a column of 450 g SiO₂ chromatography to give 1 1 CH₂ Cl₂ as well as an additional 2 1 CH₂ Cl₂ - Isopropanol (98: 2) contained only 3.15 g of by-products, while further elution with 2-3 of the 98: 2 mixture yielded 17.25 g (80.23%) of pure homogeneous nucleoside 10 which crystallized from a little methanol. M.p. 224-226 ° C,¹ H-NMR (DMSO-D₆ ) δ: 2.99 (tr, 2 H; CH₂ -C = C), 3.74 (tr, 2 H; CH₂ -N), 3.79 - 3.92 (m, 2 H; H₅ '), 4.13 (m, 1 H, H₄ ') 4.21 (m, 1 H, H₃ '), 4.28 - 4 , 32 (m, 1 H; H₂ '), 7.48 (s, 1 H, HC = C)

Beispiel 4Example 4

3-ß-D-Ribofuranosyl-3,5,6,7-tetrahydro-2H-pyrrolo[2,3-d]pyrimidin-2-on 113-β-D-ribofuranosyl-3,5,6,7-tetrahydro-2H-pyrrolo [2,3-d] pyrimidin-2-one 11

16,15 g (27,8 mmol) 2^,,3',5^,-Tri-O-benzoat 10 wurden 72 h in 250 ml gesättigtem methanolischem Ammoniak belassen, wonach das Dünnschichtchromatogramm im System n-Butanol : AcOH : H₂O = 4 : 1 : 5 (obere Phase) kein Ausgangsmaterial 10 mehr anzeigte. Beim Abdampfen begann bereits das freie Nucleosid 11 zu kristallisieren. Der Rückstand wurde in 300 ml H₂O und 200 ml Methyl-t-butylether aufgenommen und nach Trennung der Phasen die wäßrige Phase nochmals mit 200 ml Methyl-t-butylether nachextrahiert. Nach Einengen der wäßrigen Phase auf 150 ml wurden 2 g Aktivkohle zur gelben, heißen wäßrigen Lösung gegeben, die abfiltrierte Kohle mit 75 ml heißem H₂O nachgewaschen und die vereinigten H₂O-Filtrate eingedampft, wobei 7,8 g rohes kristallines Nucleosid erhalten wurden. Bei der Umkristallisation aus einem Gemisch von 175 ml Ethanol und 40 ml H₂O wurden 4,8 g 11, Schmp. 224 - 226 °, erhalten sowie aus der Mutterlauge noch 1,84 g 11. Gesamtausbeute = 6,64 g (88,8 %)¹H -NMR (D₂O) δ: 3,7 - 3,9 (m); 4,07 - 4,12 (n, H₄') 4,17 - 4,22 (m, H₃'), 4,27 - 4,30 (m, H₂'), 5,92 - 5,95 (m, H,'), 7,47 (s, H-C= C)16.15 g (27.8 mmol) of 2^, 3 ', 5^, tri-O-benzoate 10 were left in 250 ml of saturated methanolic ammonia for 72 h, after which the thin layer chromatogram in the system n-butanol: AcOH: H₂ O = 4: 1: 5 (upper phase) no longer indicated starting material 10. The free nucleoside 11 already began to crystallize on evaporation. The residue was taken up in 300 ml of H₂ O and 200 ml of methyl t-butyl ether and, after the phases had separated, the aqueous phase was extracted again with 200 ml of methyl t-butyl ether. After concentrating the aqueous phase to 150 ml, 2 g of activated carbon were added to the yellow, hot aqueous solution, the filtered carbon was washed with 75 ml of hot H₂ O and the combined H₂ O filtrates were evaporated, giving 7.8 g of crude crystalline nucleoside were. When recrystallizing from a mixture of 175 ml of ethanol and 40 ml of H₂ O, 4.8 g of 11 M.p. 224 - 226 °, obtained and from the mother liquor still 1.84 g 11. Total yield = 6.64 g (88.8%)¹ H -NMR (D₂ O) δ: 3.7 - 3.9 ( m); 4.07 - 4.12 (n, H₄ ') 4.17 - 4.22 (m, H₃ '), 4.27 - 4.30 (m, H₂ '), 5.92 - 5, 95 (m, H, '), 7.47 (s, HC = C)

Beispiel 5Example 5

2,2'-Anhydro-3(β-D-arabmofuranosyl)-3,5,6,7-tetrahydro-2H-pyrrolo[2,3-d]pyrimidin- 2-on-hydrochlorid 142,2'-anhydro-3 (β-D-arabmofuranosyl) -3,5,6,7-tetrahydro-2H-pyrrolo [2,3-d] pyrimidin-2-one hydrochloride 14

Zu einer Suspension von 1,35 g (5 mmol) der Verbindung 11 in 50 ml abs. Acetonitril wurden 3,29 g (20 mmol) Acetoxyisobuttersäurechlorid bei 21 ° gegeben und die Reaktionsmischung 4 h bei 21 ° gerührt, wobei sich nach ca. 1 h eine klare, farblose Lösung bildete und nach 4 h das Ausgangsmaterial 11 im System obere Phase von n-Butanol-Essigsäure-H₂O (4 : 1 : 5) nicht mehr nachweisbar war. Nach Abdampfen und dreimaligen Ausrühren des farblosen viskosen Rückstandes mit jeweils 100 ml Diäthylether wurden 75 ml 1 -molare methanolische HCl zugegeben und bei 21 ° ca. 18 h gerührt, wobei farblose Kristalle ausfielen, die mit 40 ml abs. Methanol gewaschen und getrocknet wurden, 1,14 g (79 %) 14, Schmp. 235 ° (Zers.). Nach Abdampfen des Filtrates verblieben 0,16 g im Rückstand.¹H- NMR (DMSO-D₆) δ: 3,03 - 3,07 (m, CH₂-C=C), 3,4 - 3,43 (m, CH₂OH), 3,82 - 3,86 (m, N- CH₂), 4,22 (s, H-4'), 4,48 (s, H-3'), 5,04 (m, 5-OH), 5,4 (d, H₂'), 6,5 (d, H₁'), 7,96 (s, H-C=C)To a suspension of 1.35 g (5 mmol) of compound 11 in 50 ml abs. 3.29 g (20 mmol) of acetoxyisobutyric acid chloride were added to acetonitrile at 21 ° and the reaction mixture was stirred at 21 ° for 4 h, a clear, colorless solution being formed after approx. 1 h and starting material 11 in the upper phase system after 4 h n-butanol-acetic acid-H₂ O (4: 1: 5) was no longer detectable. After evaporation and stirring three times of the colorless viscous residue with 100 ml of diethyl ether, 75 ml of 1 molar methanolic HCl were added and the mixture was stirred at 21.degree. For about 18 hours, colorless crystals precipitating with 40 ml of abs. Methanol was washed and dried, 1.14 g (79%) 14, mp. 235 ° (dec.). After the filtrate had been evaporated, 0.16 g remained in the residue.¹ H NMR (DMSO-D₆ ) δ: 3.03 - 3.07 (m, CH₂ -C = C), 3.4 - 3.43 (m, CH₂ OH), 3.82 - 3 , 86 (m, N-CH₂ ), 4.22 (s, H-4 '), 4.48 (s, H-3'), 5.04 (m, 5-OH), 5.4 ( d, H₂ '), 6.5 (d, H₁ '), 7.96 (s, HC = C)

Beispiel 6Example 6

3-(β -D-Arabmofuranosyl)-3,5,6,7-tetrahydro-2H-pyrroIo[2,3-d)pyrimidin-2-on 15a und Hydrochlorid 15a - HCl a) Eine Suspension von 2,69 g (10 mmol) des Ribofuranosids 11 in 150 ml Acetonitril wurde mit 9,875 g (60 mmol) α-Acetoxyisobuttersäurechlorid versetzt und 5 h bei 24 º gerührt. Nach Abdampfen des Acetonitrils wurde der Rückstand zweimal mit 300 ml Diethylether jeweils 15 Minuten gerührt, wobei sich ein feiner weißer Niederschlag absetzte. Die Etherphase wurde dekantiert, der Niederschlag mit 25 ml konz. Ammoniak versetzt und die sich bildende klare Lösung 48 h stehen gelassen. Nach Abdampfen wurde zweimal mit jeweils 30 ml H₂O und 30 ml Methanol abgedampft. Nach Versetzen mit 50 ml Methanol fielen farblose Kristalle aus, die abfiltriert wurden = 0,27 g 15, Schmp. 230 - 234 ° (Zers.). Nach Einengen der Mutterlauge und Zugabe von 30 ml Methanol konnten nach 18 h weitere 0,743 g 15 abfiltriert werden, Schmp. 231 - 235 ° (Zers.). Nach Abdampfen der Mutterlauge wurde der Rückstand mit 30 ml Pyridin und 15 ml Acetanhydrid 18 h bei 22 ° gerührt. Die hellgelbe Lösung lieferte nach Abdampfen und zweimaliger Kodestillation mit 2 x 40 ml Toluol einen Rückstand, der mit 60 ml eiskalter gesättigter NaHCO₃-Lösung - 100 ml CH₂Cl₂ geschüttelt wurde. Die CH₂Cl₂-Phase wurde mit Na₂SO₄ getrocknet und abgedampft. Nach Lösen in Essigester wurde über eine Säule von 100 g Silicagel filtriert. Nach 750 ml Vorlauf ergaben die nächsten 750 ml Eluat 1,9 g reines 2',3'',5'-Tri-O-Acetat, das mit 50 ml methanolischer NH₃ über Nacht verseift wurde. Nach Abdampfen kristallisierte der Rückstand (1,8 g) aus Methanol und ergab in zwei Portionen weitere 0,7 g 15a, Schmp. 232 - 235 °. Gesamtausbeute an 15a = 1,71 g (63,5 %). MS (EI) m/z = 269 (M⁺), 251 (M-H₂O), 238, 208, 177, 166, 150, 138, 121, 110, 95, 82, 70, 55, 43. Η-NMR (DMSO) 2,82 (tr, J = 8 Hz, 2 H, CH₂-C) 3,53 (tr, J = 8 Hz, 2 H, CH₂-N) 3,59 (m, 2 H, C₅-CH₂) 3,61 (m, 1 H, H₄') 3,89 (m, 1 H, H₃') 3,92 (m, 1 H, H₂') 4,9 (tr, J = 5 Hz, 1 H, 5' OH) 5,3 (d, J = 6 Hz, OH) 5,33 (tr, J = 4 Hz, 1 H, OH) 6,02 (d, J = 4 Hz, 1 H, H₁') 7,37 (d, 1 H, H-C=C) 7,76 (s,NH). b) Ausgehend von 4,03 g (15 mmol) des D-Ribofuranosids 11 ergab die analoge Umsetzung (vgl. Beispiel 5) mit 9,875 g (60 mmol) α-Acetoxyisobutteräurechlorid 3,5 g rohes 2,2'- Anhydroprodukt 14, das mit 10 % wäßrigem Ammoniak 3 Tage bei 22 ° gerührt wurde. Nach Abdampfen und zweimaliger Zugabe von jeweils 30 ml H₂O wurde der ölige Rückstand in 120 ml Methanol mit 30 ml 2 N NaOH versetzt und abgedampft. Nach Suspendieren in 100 ml Methanol und 15minütigem Rühren wurde der farblose Niederschlag abfiltriert und mit 30 ml Methanol gewaschen. Die Filtrate wurden mit soviel methanolischer HCl versetzt, bis ein p_H von 3 erreicht wurde, wobei NaCl ausfiel. Nach 30minütigem Rühren wurde das NaCl abfiltriert und mit 30 ml Methanol gewaschen. Die Filtrate wurden abgedampft und mit absolutem Ethanol extrahiert, wobei 3,28 g Ansa-ara-cytidin-Hydrochlorid 15a · HCl, Schmp. = 212 - 216 ° (Zers.) ausfiel, das mit 25 ml Methanol gewaschen wurde. Die abgedampften Mutterlaugen wurden in 35 ml Methanol heiß gelöst, wobei beim Abkühlen weitere 0,23 g 15a · HCl, Schmp. 212 - 216 ° (Zers.) gewonnen wurden. Gesamtausbeute an 15 · HCl = 3,51 g (76,53 %), MS (CI) m/z = 270 (M + 1) 168, 138,¹H-NMR (D₂O) δ: 2,95 (m, 2 H; CH₂-C=C), 3,6 (m, 2 H; H₅'), 3,78 (m, 1 H, H₄'), 3,58 (m, 2 H; CH₂N), 3,92 (m, 1 H; H₃'), 4,04 (m, 1 H; H₂'), 5,49 (m, 1 H, H₁') , 7,72 (s, 1 H; H-C=C)3- (β-D-Arabmofuranosyl) -3,5,6,7-tetrahydro-2H-pyrroIo [2,3-d) pyrimidin-2-one 15a and hydrochloride 15a - HCl a) A suspension of 2.69 g (10 mmol) of ribofuranoside 11 in 150 ml of acetonitrile was mixed with 9.875 g (60 mmol) of α-acetoxyisobutyric acid chloride and stirred for 5 hours at 24 °. After evaporation of the acetonitrile, the residue was stirred twice with 300 ml of diethyl ether for 15 minutes each time, during which a fine white precipitate settled out. The ether phase was decanted, the precipitate with 25 ml conc. Ammonia was added and the clear solution which formed was left to stand for 48 hours. After evaporation, the mixture was evaporated twice with 30 ml of H₂ O and 30 ml of methanol. After adding 50 ml of methanol, colorless crystals precipitated, which were filtered off = 0.27 g 15, mp. 230-234 ° (decomp.). After concentrating the mother liquor and adding 30 ml of methanol, a further 0.743 g of 15 could be filtered off after 18 h, mp. 231-235 ° (decomp.). After the mother liquor had been evaporated off, the residue was stirred at 30 ° for 30 hours with 30 ml of pyridine and 15 ml of acetic anhydride. After evaporation and two co-distillation with 2 × 40 ml of toluene, the light yellow solution gave a residue which was shaken with 60 ml of ice-cold saturated NaHCO₃ solution - 100 ml of CH₂ Cl₂ . The CH₂ Cl₂ phase was dried with Na₂ SO₄ and evaporated. After loosening in Ethyl ester was filtered through a column of 100 g silica gel. After 750 ml flow, the next 750 ml eluate gave 1.9 g of pure 2 ', 3'',5'-tri-O-acetate, which was saponified with 50 ml of methanolic NH₃ overnight. After evaporation, the residue (1.8 g) crystallized from methanol and gave in two portions a further 0.7 g 15a, mp. 232-235 °. Overall yield of 15a = 1.71 g (63.5%). MS (EI) m / z = 269 (M⁺ ), 251 (MH₂ O), 238, 208, 177, 166, 150, 138, 121, 110, 95, 82, 70, 55, 43. NMR NMR (DMSO) 2.82 (tr, J = 8 Hz, 2 H, CH₂ -C) 3.53 (tr, J = 8 Hz, 2 H, CH₂ -N) 3.59 (m, 2 H, C₅ -CH₂ ) 3.61 (m, 1 H, H₄ ') 3.89 (m, 1 H, H₃ ') 3.92 (m, 1 H, H₂ ') 4.9 (tr , J = 5 Hz, 1 H, 5 'OH) 5.3 (d, J = 6 Hz, OH) 5.33 (tr, J = 4 Hz, 1 H, OH) 6.02 (d, J = 4 Hz, 1 H, H₁ ') 7.37 (d, 1 H, HC = C) 7.76 (s, NH). b) Starting from 4.03 g (15 mmol) of D-ribofuranoside 11, the analogous reaction (cf. Example 5) with 9.875 g (60 mmol) of α-acetoxyisobutyl chloride gave 3.5 g of crude 2,2'-anhydro product 14, which was stirred for 3 days at 22 ° with 10% aqueous ammonia. After evaporation and the addition of 30 ml H₂ O twice, the oily residue in 120 ml methanol was mixed with 30 ml 2 N NaOH and evaporated. After suspending in 100 ml of methanol and stirring for 15 minutes, the colorless precipitate was filtered off and washed with 30 ml of methanol. The filtrates were treated with sufficient of methanolic HCl, was achieved to a p_H of 3, wherein NaCl precipitated. After stirring for 30 minutes, the NaCl was filtered off and washed with 30 ml of methanol. The filtrates were evaporated and extracted with absolute ethanol, whereby 3.28 g of Ansa-ara-cytidine hydrochloride 15a · HCl, mp = 212-216 ° (dec.) Precipitated, which was washed with 25 ml of methanol. The evaporated mother liquors were dissolved hot in 35 ml of methanol, a further 0.23 g of 15a.HCl, mp. 212-216 ° (decomp.) Being obtained on cooling. Total yield of 15HCl = 3.51 g (76.53%), MS (CI) m / z = 270 (M + 1) 168, 138,¹ H-NMR (D₂ O) δ: 2.95 ( m, 2 H; CH₂ -C = C), 3.6 (m, 2 H; H₅ '), 3.78 (m, 1 H, H₄ '), 3.58 (m, 2 H; CH₂ N), 3.92 (m, 1 H; H₃ '), 4.04 (m, 1 H; H₂ '), 5.49 (m, 1 H, H₁ '), 7.72 (s, 1 H; HC = C)

Beispiel 7Example 7

3-(ß-D-Arabinofuranosyl)-3,5,6,7-tetrahydro-2-H-pyrrolo[2,3-d]pyrimidin-2-on-5'-O- phosphat 15b3- (β-D-arabinofuranosyl) -3,5,6,7-tetrahydro-2-H-pyrrolo [2,3-d] pyrimidin-2-one-5'-O-phosphate 15b

Eine Suspension von 0,404 g (1,5 mmol) 3-(ß-D-Arabinofuranosyl)-3,5,6,7-tetrahydro-2H- pyrrolo-(2,3-d)-pyrimidin-2-on 15 in 7.5 ml Triethylphosphat wurde bei - 25 ° unter Rühren während einer Stunde langsam mit Hilfe einer Spritze mit 0,173 ml (1.88 m mol) Phosphoroxychorid versetzt und anschließend noch 1 Stunde bei ca. - 20 ° gerührt und dann im Eisbad noch 2 Stunden bei + 2 ° gerührt. Nach Einrühren in 25 ml Eiswasser wurde noch 2 Stunden bei 22 ° gerührt und das Triethylphosphat durch Extraktion mit 6 x 25 ml CH₂CI₂ aus der wässrigen Lösung extrahiert. Die wässrige Phase wurde dann langsam zu einer Lösung von 1 ml 1,2-Butylenoxyd in 180 ml Ethanol gegeben. Nach 5 Stunden Rühren bei 22 ° wurde die ausgefallene farblose Substanz abfiltriert und mit 20 ml Ethanol gewaschen, wobei 0,39 g 5'-Phosphat 15b erhalten wurden. Nach Abdampfen des Filtrats , Lösen in 5 ml H₂O nach Einrühren in 75 ml Ethanol fielen weitere 0,093 g 5'-Phosphat 15b aus.Gesamtausbeute = 0,483 g = 92,35% an 15b. MS (FAB/m/z = 372 (M . H⊕).A suspension of 0.404 g (1.5 mmol) of 3- (β-D-arabinofuranosyl) -3,5,6,7-tetrahydro-2H-pyrrolo- (2,3-d) -pyrimidin-2-one 15 in 7.5 ml of triethyl phosphate was slowly mixed with 0.173 ml (1.88 m mol) of phosphorus oxychloride at - 25 ° with stirring for 1 hour using a syringe and then stirred for another 1 hour at approx. - 20 ° and then in an ice bath for 2 hours at + 2 ° stirred. After stirring in 25 ml of ice water, the mixture was stirred for a further 2 hours at 22 ° and the triethyl phosphate was extracted from the aqueous solution by extraction with 6 × 25 ml of CH₂ Cl₂ . The aqueous phase was then slowly added to a solution of 1 ml of 1,2-butylene oxide in 180 ml of ethanol. After stirring for 5 hours The precipitated colorless substance was filtered off at 22 ° and washed with 20 ml of ethanol, 0.39 g of 5'-phosphate 15b being obtained. After evaporating the filtrate, dissolving in 5 ml of H₂ O after stirring in 75 ml of ethanol, a further 0.093 g of 5'-phosphate 15b precipitated out. Total yield = 0.483 g = 92.35% of 15b. MS (FAB / m / z = 372 (M. H⊕).

Beispiel 8Example 8

Natriuιmalz des 3(ß-D-A rabbinofuranosyl)-3,5,6,7-tetrahydro-2H-pyrrolo[2,3]pyrimidin- 2-on-5'-O-phosphats 15cSodium malt of 3 (β-D-A rabbinofuranosyl) -3,5,6,7-tetrahydro-2H-pyrrolo [2,3] pyrimidin-2-one-5'-O-phosphate 15c

Von dem unter Beispiel 9 beschriebenen 5'-O-Phosphats wurden 0,200 g (0,57 mmol) in 10 ml H₂O suspendiert und mit 1 N NaOH der pH- Wert der Lösung auf 7 gebracht, wobei sich ein klare Lösung bildete. Nach Einrühren in 70 ml Ethanol wurde 2 Stunden bei 22 ° gerührt, abfiltriert und mit 15 ml Ethanol gewaschen, wobei nach Trocknen im Vakuum 0,196 g (92,9%) reines Mononatriumsalz des 5'-O-phosphats-15c- erhalten wurde, MS (FAB) m/z = 394 (M + Na) 372 (M - H⊕) 237, 133 IR/KBr) 1680, 1575, 1505, 1315 cm^-1.From the 5'-O-phosphate described in Example 9, 0.200 g (0.57 mmol) was suspended in 10 ml H₂ O and the pH of the solution was brought to 7 with 1 N NaOH, a clear solution being formed. After stirring into 70 ml of ethanol, the mixture was stirred at 22 ° for 2 hours, filtered off and washed with 15 ml of ethanol, after drying under vacuum 0.196 g (92.9%) of pure monosodium salt of 5'-O-phosphate-15c- being obtained, MS (FAB) m / z = 394 (M + Na) 372 (M - H⊕) 237, 133 IR / KBr) 1680, 1575, 1505, 1315 cm^-1 .

Beispiel 9Example 9

3-(2'-Desoxy-3',5'-di-O-toluoyl-ß-D-ribofuranosyl)-7-acetyl-3,5,6,7.tetrahydro-2H- pyrrolo[2,3-d]-pyrimidin-2-on 19 und 3-(2'-Desoxy-3',5'-di-O-toluoyl)-α-D- ri bofuranosyl)-7-a cetyl-3,5,6,7-tetrahydro-2H-pyrrolo[2,3-d]-pyrimidin-2-on 203- (2'-Deoxy-3 ', 5'-di-O-toluoyl-β-D-ribofuranosyl) -7-acetyl-3,5,6,7-tetrahydro-2H-pyrrolo [2,3-d ] -pyrimidin-2-one 19 and 3- (2'-deoxy-3 ', 5'-di-O-toluoyl) -α-D-ri bofuranosyl) -7-a cetyl-3,5,6,7 tetrahydro-2H-pyrrolo [2,3-d] pyrimidin-2-one 20

1,79 g (10 mmol) 7-Acetyl-3,5,6,7-tetrahydro-2H-pyrrolo[2,3-d]-pyrimidin-2-on 1 (R = COCH₃; R' = H) wurden mit 2,1 ml (10 mmol) Hexamethyldisilazan (HMDS) und 1,27 ml (10 mmol) Trimethylchlorsilan (TCS) in 45 ml Acetonitril 2 h am Rückfluß gekocht, wobei sich eine klare Lösung bildete und NH₄,Cl in den Kühler sublimierte. Nach Abdampfen wurde der Rückstand noch dreimal mit jeweils 15 ml abs. Xylol abgedampft. Den kristallinen Rückstand suspendierte man in 120 ml abs. 1,2-Dichlorethan und fügte 3,86 g (10 mmol) 3,5- Di-O-toluolyl-2-desoxy-α-D-ribofuranosylchlorid sowie anschließend bei +5 ° 1,99 ml (11 mmol) Trimethylsiltriflat in 40 ml abs. 1,2-Dichlorethan während 30 min. unter Rühren hinzu. Nach weiteren 15 min bei +7 ° wurde ca. 4 h bei +21 ° gerührt und die Reaktionsmischung 18 h bei +4 ° im Kühlschrank aufbewahrt. Bei Aufarbeitung mit 120 ml eiskalter NaHCO₃-Lösung fiel etwas rotbraune Substanz aus, und es bildete sich eine Emulsion. Nach Filtration über ein G 4 Fritte und Nachwaschen mit CH₂Cl₂ wurden die Phasen getrennt und die wäßrige Phase mit zweimal 60 ml CH₂CI₂ extrahiert. Die vereinigte organische Phase lieferte nach Trocknen (Na₂SO₄) und Abdampfen 4,75 g bräunliches amorphes Rohprodukt, das in 40 ml Essigester - CH₂Cl₂ (1 : 1) gelöst und an einer Säule von 180 g Silicagel Chromatographien wurde. Elution mit 1 1 Essigester - CH₂Cl₂ (1 : 1) lieferte 0,15 g rotbraunes Öl, während die nächsten 0,5 1 3,4 g fast farbloses, partiell kristallines α/β-Gemisch von 19 und 20 ergab. Elution mit einem weiteren Liter Essigester : CH₂Cl₂ Gemisch ergab 0,43 g fast reines α-Nucleosid 20, das aus wenig Aceton kristallisierte. Kristallisation der 3,4 g α/β- Gemisch aus ca. 100 ml Aceton -CH₂Cl₂ ergab 1,5 g (28,2 %) kristallines reines ß-Nucleosid 19, Schmp. 203 - 205 °. Die Mutterlauge enthielt gemäß der Dünnschicht (obere Phase von Toluol - Essigsäure - H₂O = 5 : 5 : 1) hauptsächlich das α-Anomer 20 und wurde deshalb mit kristallinem α-Anomer in wenig Aceton angeimpft, wobei weiteres kristallines α-Anomer 20 Schmp. 148 - 150 ° anfiel.1.79 g (10 mmol) 7-acetyl-3,5,6,7-tetrahydro-2H-pyrrolo [2,3-d] pyrimidin-2-one 1 (R = COCH₃ ; R '= H) were refluxed with 2.1 ml (10 mmol) of hexamethyldisilazane (HMDS) and 1.27 ml (10 mmol) of trimethylchlorosilane (TCS) in 45 ml of acetonitrile, a clear solution being formed and NH₄ , Cl in the Cooler sublimated. After evaporation, the residue was three times with 15 ml of abs. Xylene evaporated. The crystalline residue was suspended in 120 ml of abs. 1,2-dichloroethane and added 3.86 g (10 mmol) of 3,5-di-O-toluolyl-2-deoxy-α-D-ribofuranosyl chloride and then at +5 ° 1.99 ml (11 mmol) of trimethylsiltriflate 40 ml abs. 1,2-dichloroethane for 30 min. with stirring. After a further 15 min at +7 °, the mixture was stirred for about 4 h at +21 ° and the reaction mixture was kept in the refrigerator for 18 h at +4 °. When working up with 120 ml of ice-cold NaHCO₃ solution, some red-brown substance precipitated out and an emulsion formed. After filtration through a G4 frit and washing with CH₂ Cl_2, the phases were separated and the aqueous phase extracted twice with 60 ml CH₂ CI.₂ After drying (Na₂ SO₄ ) and evaporation, the combined organic phase gave 4.75 g of a brownish amorphous crude product, which was dissolved in 40 ml of ethyl acetate - CH₂ Cl₂ (1: 1) and chromatographed on a column of 180 g of silica gel. Elution with 1 1 ethyl acetate - CH₂ Cl₂ (1: 1) yielded 0.15 g red-brown oil, while the next 0.5 1 3.4 g almost colorless, partially crystalline α / β mixture of 19 and 20 resulted. Elution with another liter of ethyl acetate: CH₂ Cl₂ mixture gave 0.43 g of almost pure α-nucleoside 20, which crystallized from a little acetone. Crystallization of the 3.4 g α / β mixture from approx. 100 ml acetone -CH₂ Cl₂ gave 1.5 g (28.2%) crystalline pure β-nucleoside 19, mp. 203-205 °. According to the thin layer (upper phase of toluene - acetic acid - H₂ O = 5: 5: 1), the mother liquor mainly contained the α-anomer 20 and was therefore inoculated with crystalline α-anomer in a little acetone, with further crystalline α-anomer 20 Mp 148 - 150 °.

β-Anomer 19¹H-NMR (CDCl₃) δ: 2,26 - 2,23 (m, 1 H, CH₂-N), 2,41 + 2,44 (s, 2 x CH₃-Ar), 2,40 - 2,50 (m, 1 H, CH₂-N), 2,60 - 2,70 (m, 1 H, H₂'), 2,69 (s, CH₃CO), 3,07 (d, d, d, J = 15 Hz; 1 H; H₂') 3,83 - 3,90 + 3,94 - 4,02 (m, 2 x 1 H; N-CH₂), 4,60 (dd, J = 3 Hz, 11 Hz, 1 H, H₅'), 4,63 (dd; J = 2 Hz, J = 3 Hz; 1 H; H₄') , 4,68 (dd, J = 2 Hz; J = 11 Hz; 1 H; H₅'), 5,62 (d, J = 7 Hz; 1 H; H₃'), 6,39 (dd; J = 6 Hz; J = 8 Hz; 1 H, H₁') , 7,24 (d, J = 8 Hz, Ar-H), 7,28 (d, J = 8 Hz, Ar-H), 7,64 (s, 1 H; C=C-H), 7,85 (d; J = 8 Hz, ArH), 7,97 (d; J = 8 Hz, ArH)β-anomer 19¹ H-NMR (CDCl₃ ) δ: 2.26 - 2.23 (m, 1 H, CH₂ -N), 2.41 + 2.44 (s, 2 x CH₃ -Ar) , 2.40 - 2.50 (m, 1 H, CH₂ -N), 2.60 - 2.70 (m, 1 H, H₂ '), 2.69 (s, CH₃ CO), 3 , 07 (d, d, d, J = 15 Hz; 1 H; H₂ ') 3.83 - 3.90 + 3.94 - 4.02 (m, 2 x 1 H; N-CH₂ ), 4.60 (dd, J = 3 Hz, 11 Hz, 1 H, H₅ '), 4.63 (dd; J = 2 Hz, J = 3 Hz; 1 H; H₄ '), 4.68 ( dd, J = 2 Hz; J = 11 Hz; 1 H; H₅ '), 5.62 (d, J = 7 Hz; 1 H; H₃ '), 6.39 (dd; J = 6 Hz; J = 8 Hz; 1 H, H₁ '), 7.24 (d, J = 8 Hz, Ar-H), 7.28 (d, J = 8 Hz, Ar-H), 7.64 (s , 1 H; C = CH), 7.85 (d; J = 8 Hz, ArH), 7.97 (d; J = 8 Hz, ArH)

Beispiel 10Example 10

3-(2'-Desoxy-β-D-ribofuranosyl) -3,5,6,7-tetrahydro-2H-pyrrolo [2,3d] -pyrimidin-2-on 213- (2'-Deoxy-β-D-ribofuranosyl) -3,5,6,7-tetrahydro-2H-pyrrolo [2,3d] pyrimidin-2-one 21

Eine Suspension von 1,3 g (2,45 mmol) 3-(2'-Desoxy-3',5'-di-O-toluoyl-ß-D-ribofuranosyl)- 7-acetyl-3,5,6,7-tetrahydro-2H-pyrrolo[2,3d]-pyrimidin-2-on 19 in 150 ml methanolischem Ammoniak wurde 48 h bei 22 ° gerührt, wobei sich eine gelbliche klare Lösung bildete. Nach Abdampfen wurde der Rückstand in 150 ml H₂O und 100 ml Methyl-t-butylether aufgenommen. Nach Trennung der Phasen wurde die wäßrige Phase abgedampft. Der farblose, kristalline Rückstand (0,68 g) wurde aus 5 ml H₂O umkristallisiert, wobei 0,22 reines 21, Schmp. 135 - 140 °→ 223 - 226 ° erhalten wurde. Umkristallisation der abgedampften Mutterlauge aus 8 ml Ethanol - H₂O (9 : 1) ergab weitere 0,17 g 19, Schmp. 134 - 140 °→ 224 - 228 °. Gesamtausbeute = 0,39 g 21 (63 %).A suspension of 1.3 g (2.45 mmol) of 3- (2'-deoxy-3 ', 5'-di-O-toluoyl-ß-D-ribofuranosyl) - 7-acetyl-3,5,6, 7-tetrahydro-2H-pyrrolo [2,3d] pyrimidin-2-one 19 in 150 ml of methanolic ammonia was stirred at 22 ° for 48 h, a yellowish, clear solution being formed. After evaporation, the residue was taken up in 150 ml of H₂ O and 100 ml of methyl t-butyl ether. After the phases had been separated, the aqueous phase was evaporated off. The colorless, crystalline residue (0.68 g) was recrystallized from 5 ml of H₂ O, giving 0.22 of pure 21, mp. 135-140 ° → 223-226 °. Recrystallization of the evaporated mother liquor from 8 ml of ethanol-H₂ O (9: 1) gave a further 0.17 g of 19, mp. 134-140 ° → 224-228 °. Overall yield = 0.39 g 21 (63%).

Beispiel 11Example 11

3-(2 O-Acetyl-5-O-benzoyl-2-deoxy-2-fluor-ß-D-arabinofuranosyl)-N⁷-acetyl-3,5,6,7- tetrahydro-2H-pyrroIo[2,3-d]pyrimidin-2-on3- (2 O-acetyl-5-O-benzoyl-2-deoxy-2-fluoro-ß-D-arabinofuranosyl) -N⁷ -acetyl-3,5,6,7-tetrahydro-2H-pyrrole [2, 3-d] pyrimidin-2-one

Das Ansacytoxin I (R = Ac: R' = H) 0,896 g ( 5m mol) wurde in 40 ml abs. Acetonitril mit überschüssigem Hexamethyldisilazan (HMDS)-Trimethylchlorsilan (TCS) 30 Minuten gekocht, wobei sich eine klare Lösung der silylierten Verbindung 8b bildete und NH₄CI in den Rückflußkühler sublimierte. Nach Abdampfen der Lösung im Vakuum unterThe Ansacytoxin I (R = Ac: R '= H) 0.896 g (5m mol) was in 40 ml abs. Boiled acetonitrile with excess hexamethyldisilazane (HMDS) trimethylchlorosilane (TCS) for 30 minutes, a clear solution of the silylated compound 8b being formed and NH₄ CI subliming into the reflux condenser. After evaporating the solution in vacuo

Feuchtigkeitsausschluß wurde der Rückstand zweimal mit jeweils 15 ml abs. Xylol im Vakuum abgedampft, in 20 ml 1,2 abs. Dichlorethan gelöst und eine Lösung von 1,206 g (5m mol) von 3-0-Acetyl-5-0-benzoyl-2-deoxy-2-fluor-α-D-arabinofuranosylbromid 22 zugegeben und die Reaktionsmischung 14 Stunden unter Stickstoff gekocht. Nach Abkühlen und Verdünnen der Lösung mit 50 ml CH₂CI₂ schüttelte man mit 75 ml eiskalter ges.Exclusion of moisture, the residue was twice with 15 ml of abs. Xylene evaporated in vacuo, in 20 ml 1.2 abs. Dissolved dichloroethane and a solution of 1.206 g (5 mol) of 3-0-acetyl-5-0-benzoyl-2-deoxy-2-fluoro-α-D-arabinofuranosyl bromide 22 added and the reaction mixture boiled under nitrogen for 14 hours. After cooling and diluting the solution with 50 ml of CH₂ CI_{2, the} mixture was shaken with 75 ml of ice-cold sat.

NaHCO₃-Lösung aus und extrahierte die wässrige Lösung noch mit 2 x 30 ml CH₂CI₂. Nach Trocknen (Na₂SO₄) und Abdampfen wurden die 2,53 g Rohprodukt in 20 ml Oberphase des Gemisches Toluol : Essigsäure : Wasser = 5 : 1 : 1 gelöst und an einer Säule von 120 g Silicagel chromatographiert. Nach einem Vorlauf von 500 ml ergaben die nächsten 150 ml 0,812 g (35,35 %) des einen ß-Anomers, während die nächsten 150 ml 0,210 g ß-α Gemischs und die letzten 150 ml 0,040 g (1,7%) reines α-Anomer ergaben.NaHCO₃ solution and extracted the aqueous solution with 2 x 30 ml CH₂ CI₂ . After drying (Na₂ SO₄ ) and evaporation, the 2.53 g of crude product were dissolved in 20 ml of the upper phase of the toluene: acetic acid: water = 5: 1: 1 mixture and chromatographed on a column of 120 g of silica gel. After a preliminary run of 500 ml, the next 150 ml gave 0.812 g (35.35%) of the one β-anomer, while the next 150 ml 0.210 g β-α mixture and the last 150 ml 0.040 g (1.7%) pure α-anomer resulted.

Gesamtausbeute an Nucleosid = 1,062 g (46,2%) ß-Anomer: MS (EI) m/z = 459 (M+), 439 (M - 1 + F) 380, 338, 318, 281, 258, 219, 180, 137, 105, MS (CI) = 460 (M + H⊕)Overall yield of nucleoside = 1.062 g (46.2%) β-anomer: MS (EI) m / z = 459 (M +), 439 (M - 1 + F) 380, 338, 318, 281, 258, 219, 180 , 137, 105, MS (CI) = 460 (M + H⊕)

1H-NMR (CDCI₃) 2,18 (s, 3H, COCH₃) 2.7 (s,3H, N-COCH₃) 2,68 (m, 2H, CH₂CH₂N) 4,05 (tr, 2H,J = 8Hz, CH₂N)4,4 (tr, 2H, H₄) 4,68 (dd, 2H, J = 4, 12Hz, H-5') 4,76 (dd, 2H, J = 3 + 12Hz H-5', 5,30 (dd, 1H, J = 2 + 17Hz, H'₂), 6,28 + 6,34 (dd, 1H; J = 2, 17Hz, H'₁) 7,2 - 8,08 (m, arom.) 7,58 (s, 1H, H-C = C), 4.05 (tr. 2H; J = 8 Hz, CH₂N)1H NMR (CDCI₃ ) 2.18 (s, 3H, COCH₃ ) 2.7 (s, 3H, N-COCH₃ ) 2.68 (m, 2H, CH₂ CH₂ N) 4.05 (tr, 2H , J = 8Hz, CH₂ N) 4.4 (tr, 2H, H₄ ) 4.68 (dd, 2H, J = 4, 12Hz, H-5 ') 4.76 (dd, 2H, J = 3 + 12Hz H-5 ', 5.30 (dd, 1H, J = 2 + 17Hz, H'₂ ), 6.28 + 6.34 (dd, 1H; J = 2, 17Hz, H '₁ ) 7, 2 - 8.08 (m, aroma.) 7.58 (s, 1H, HC = C), 4.05 (tr. 2H; J = 8 Hz, CH₂ N)

Beispiel 12Example 12

3-(2-Deoxy-2-fluor-ß-D-arabinofuranosyl)-3,5,6,7-tetrahydro-2H-pyrrolo [2,3- d]pyrimidin-2-on 233- (2-Deoxy-2-fluoro-ß-D-arabinofuranosyl) -3,5,6,7-tetrahydro-2H-pyrrolo [2,3-d] pyrimidin-2-one 23

0,77 g (0,168 m mol) reines ß-Anomer 3- (2'-O-Acetyl-5'-O-benzoyl-2'-deoxy-2^,-fluor-ß-D- arabinofuranosyl)-N⁷-acetyl-3,5,6.7-tetrahydro-2H-pyrrolo-[2,3-d]pyrimidin-2-on wurden 20 Stunden bei 22 ° mit 50 ml methanolischem Ammoniak gerührt und im Vakuum abgedampft. Der Rückstand wurde mit 150 ml Wasser und 75 ml Methyl-t- butylether (MBE)0.77 g (0.168 mol) of pure β-anomer 3- (2'-O-acetyl-5'-O-benzoyl-2'-deoxy-2^, -fluoro-ß-D-arabinofuranosyl) -N⁷ - acetyl-3,5,6,7-tetrahydro-2H-pyrrolo- [2,3-d] pyrimidin-2-one were stirred for 20 hours at 22 ° with 50 ml of methanolic ammonia and evaporated in vacuo. The residue was washed with 150 ml of water and 75 ml of methyl t-butyl ether (MBE)

aufgenommen und nach Trennen der Phasen die wässrige Phase noch zweimal mit jeweils 50 ml MBE sowie mit 75 ml CH₂CI extrahiert. Nach Abdampfen der wässrigen Phase wurde der Rückstand in 10 ml Wasser gelöst, mit 0,2 g Aktivkohle versetzt und die abfiltrierterecorded and after separation of the phases, the aqueous phase extracted twice with 50 ml of MBE and 75 ml of CH₂ CI. After evaporation of the aqueous phase, the residue was dissolved in 10 ml of water, mixed with 0.2 g of activated carbon and filtered off

Aktivkohle mit 10 ml Wasser nachgewaschen. Nach Abdampfen der wässrigen Phase erhielt man 0,54 g Rohprodukt, das nach Lösen in 30 ml kochendem Ethanol beim Abkühlen 0,290 g reines 22 Schmelzpunkt 219 - 221 ° und beim Einengen der Mutterlauge auf 10 ml weitere 0,038 g 22 zusammen lieferte.Wash the activated carbon with 10 ml of water. After evaporation of the aqueous phase, 0.54 g of crude product was obtained, which, when dissolved in 30 ml of boiling ethanol, gave 0.290 g of pure 22 melting point 219-221 ° upon cooling and a further 0.038 g of 22 when the mother liquor was concentrated to 10 ml.

MS (EI) m/z = 271 (M⊕), 251 (M-H₂O), 204, 177, 137, 121, 110, 93, 82 MS (CI) m/7 = 272 (M + 1) 252, 177, 138.MS (EI) m / z = 271 (M⊕), 251 (MH₂ O), 204, 177, 137, 121, 110, 93, 82 MS (CI) m / 7 = 272 (M + 1) 252, 177, 138.

¹H-NMR(DMSO) 285 (tr, 2H, J = 8Hz, CH₂CH₂N), 3,5 - 3,6 (m, 3H, CH₂N) 3,78 (m, 1H, H4') 4,12 - 4,21 (m, 1H, H₃'), 4,83 (dd, J = 2 + 3Hz, H'₂), 6,08 + 6,13 (dd, J = 3 + 17 Hz, H'₁) 7,4 (s, 1H, H-C=C) Beispiel 13¹ H-NMR (DMSO) 285 (tr, 2H, J = 8Hz, CH₂ CH₂ N), 3.5 - 3.6 (m, 3H, CH₂ N) 3.78 (m, 1H, H4 ' ) 4.12 - 4.21 (m, 1H, H₃ '), 4.83 (dd, J = 2 + 3Hz, H'₂ ), 6.08 + 6.13 (dd, J = 3 + 17 Hz, H '₁ ) 7.4 (s, 1H, HC = C) Example 13

3-(3,5-Di-0-benzoyl-2-deoxy-2,2-difluor-ß-D-ribofuranosyl)-N⁷-acetyl-3,5,6,7- tetrahydro-2H-pyrrolo[2,3-d]pyrimidin-2-on3- (3,5-Di-0-benzoyl-2-deoxy-2,2-difluoro-β-D-ribofuranosyl) -N⁷ -acetyl-3,5,6,7-tetrahydro-2H-pyrrolo [2nd , 3-d] pyrimidin-2-one

Eine Suspension von 0,896 g (5 m mol) 1 (R = Ac, R' = H) in 50 ml abs. Acetonitril wurde mit überschüssigem Hexamethyldisilazan (HMDS) und Trimethylchlorsilan (TCS) 90A suspension of 0.896 g (5 m mol) 1 (R = Ac, R '= H) in 50 ml abs. Acetonitrile was treated with excess hexamethyldisilazane (HMDS) and trimethylchlorosilane (TCS) 90

Minuten gekocht, wobei sich die silylierte Verbindung 8b bildete und NH₄CI in denBoiled minutes, the silylated compound 8b formed and NH₄ CI in the

Rückflußkühler sublimierte. Nach Abdampfen wurde der Rückstand (8b) 3 bis 4 Stunden bei 40 -50 ° (10^-2Bar) getrocknet und in 100 ml abs. 1,2-Dichlorethan gelöst. Man gab 2,2 g (4,8 m mol) 3,5-Di-0-benzoyl-2,2-difluor-D-ribofuranosylmesylat 25 zur Lösung und tropfte während 15 Minuten eine Lösung von 0,93 ml (5 m mol) Trimethylsilyltriflat in 20 ml abs. 1,2-Dichlorethan bei 22 ° unter Rühren zu. Anschließend wurde die Reaktionsmischung 14 Stunden am Rückfluß gekocht, weitere 0,37 ml ( 2 m mol) Trimethylsilyltriflat in 20 ml abs. 1,2-Dichlorethan bei 22 ° unter Rühren zu. Anschließend wurde die Reaktionsmischung 19 Stunden am Rückfluß gekocht, weitere 0,37 ml (2 m mol) Trimethylsilyltriflat zugegeben und nochmals 5 Stunden gekocht, wonach nur noch Spuren der Ausgangsbase im DC. System (Obere Phase von Toluol : Essigsäure : H₂O = 5 : 5 : 1) sichtbar waren.Reflux cooler sublimated. After evaporation, the residue (8b) was dried for 3 to 4 hours at 40 -50 ° (10^-2 bar) and in 100 ml abs. 1,2-dichloroethane dissolved. 2.2 g (4.8 m mol) of 3,5-di-0-benzoyl-2,2-difluoro-D-ribofuranosyl mesylate 25 were added to the solution and a solution of 0.93 ml (5 m mol) trimethylsilyl triflate in 20 ml abs. 1,2-dichloroethane at 22 ° with stirring. The reaction mixture was then boiled under reflux for 14 hours, a further 0.37 ml (2 mol) of trimethylsilyl triflate in 20 ml abs. 1,2-dichloroethane at 22 ° with stirring. The reaction mixture was then boiled under reflux for 19 hours, a further 0.37 ml (2 mol) of trimethylsilyl triflate was added and the mixture was boiled again for 5 hours, after which only traces of the starting base in the TLC. System (upper phase of toluene: acetic acid: H₂ O = 5: 5: 1) were visible.

Nach Aufarbeitung mit CH₂CI₂, eiskalter NaHCO₃ -Lösung wurde die CH₂Cl₂-Phase getrocknet (Na₂SO₄), filtriert und abgedampft. Die 2.64 g rötlich braunes, öliges Rohprodukt wurden dann mit der Oberphase von Toluol : Essigsäure : H₂O = 5 : 5 : 1 an einer Säule von 120 g Silicagel chromatographiert. . Nach ca. 550 ml Vorlauf ergaben die nächsten 550 ml Eluat 0.73 g Gemisch während die nächsten 550 ml 0,48 g reines geschütztes α-Anomer lieferte. Eine zweite Chromatographie des 0,73 g Gemisches wiederum an 120 g Silicagel lieferte nach ca. 650 ml Vorlauf 0,540 g reines ß-Anomer sowie 0,050 g reines α-Anomer. ß-Anomer: MS (CI) m/z = 540 (M⁺ + H); 498; 478; 436After working up with CH₂ CI₂ , ice-cold NaHCO₃ solution, the CH₂ Cl₂ phase was dried (Na₂ SO₄ ), filtered and evaporated. The 2.64 g of reddish brown, oily crude product were then chromatographed on a column of 120 g of silica gel using the upper phase of toluene: acetic acid: H₂ O = 5: 5: 1. , After about 550 ml flow, the next 550 ml eluate gave 0.73 g mixture, while the next 550 ml gave 0.48 g pure protected α-anomer. A second chromatography of the 0.73 g mixture in turn on 120 g of silica gel provided 0.540 g of pure β-anomer and 0.050 g of pure α-anomer after about 650 ml of preliminary run. β-anomer: MS (CI) m / z = 540 (M⁺ + H); 498; 478; 436

¹H-NMR (CDCI₃) δ = 2.48 (tr; 2H: J= 8Hz, CH₂CH₂N) 2.53 (s, 3H; CH₃CO) 4.3 (tr; 2H; J = 8Hz, CH₂N) 4.6 (m, 1H, H₄'), 4.68 - 4.9 (m, 2H, H₅'),5.63 - 5.68 (m, 1H, H₃') 6.58 - 6.63 (m, 1H, H'₁) 7,41 (s, 1H, H-C=C), 7.45 - 8,13 (m, arom. H).¹ H-NMR (CDCI₃ ) δ = 2.48 (tr; 2H: J = 8Hz, CH₂ CH₂ N) 2.53 (s, 3H; CH₃ CO) 4.3 (tr; 2H; J = 8Hz, CH₂ N) 4.6 (m, 1H, H₄ '), 4.68 - 4.9 (m, 2H, H₅ '), 5.63 - 5.68 (m, 1H, H₃ ') 6.58 - 6.63 (m, 1H, H'₁ ) 7, 41 (s, 1H, HC = C), 7.45 - 8.13 (m, aromatic H).

Beispiel 14Example 14

3-(2-Deoxy-2,2-difluor-ß-D-ribofuranosyl)-3,5,6,7-tetrahydro-2H-pyrrolo[2,3-d]- pyrimidin-2-on 263- (2-Deoxy-2,2-difluoro-β-D-ribofuranosyl) -3,5,6,7-tetrahydro-2H-pyrrolo [2,3-d] pyrimidin-2-one 26

Eine Suspension von 0,480 g (0,89 m mol) 3-[3,5-Di-0-benzoyl-2-deoxy-2,2-difluor-ß-D- ribofuranosyl) N-7-acetyl-3,5,6,7-tetrahydro-2H-pyrrolo[2,3-d]pyrimidin-2-on in 40 ml methanolischem Ammoniak wurde 18 Stunden bei 22 ° gerührt, wobei sich nach ca. 30 Minuten eine klare Lösung bildete. Nach Abdampfen und Aufarbeitung mit Wasser - CH₂CI₂ und nachfolgender Extraktion der wässrigen Phase mit CH₂CI₂ und Essigester, wurde die wässrige Phase eingeengt und der Rückstand (0,26 g) aus 5 ml Wasser umkristallisiert, wobei in zwei Positionen 0,161 g (62,5%) reines 26, Schmelzpunkt 167 - 170 ° erhalten wurden. MS (CI) m/z = 290 (M + H) 138, MS (EI) m/z = 290, 289 (M⁺) 272, 215, 208, 200, 95, 172, 164, 138, 137, 121, 110, 109, 93, 82, 60, 44A suspension of 0.480 g (0.89 mol) of 3- [3,5-di-0-benzoyl-2-deoxy-2,2-difluoro-β-D-ribofuranosyl) N-7-acetyl-3,5 , 6,7-tetrahydro-2H-pyrrolo [2,3-d] pyrimidin-2-one in 40 ml of methanolic ammonia was stirred at 22 ° for 18 hours, a clear solution being formed after about 30 minutes. After evaporation and working up with water - CH₂ CI₂ and subsequent extraction of the aqueous phase with CH₂ CI₂ and ethyl acetate, the aqueous phase was concentrated and the residue (0.26 g) was recrystallized from 5 ml of water, 0.161 g (62.5%) of pure 26, melting point 167-170 ° being obtained in two positions. MS (CI) m / z = 290 (M + H) 138, MS (EI) m / z = 290, 289 (M⁺ ) 272, 215, 208, 200, 95, 172, 164, 138, 137, 121 , 110, 109, 93, 82, 60, 44

¹H-NMR(DMSO-D₆) δ = 3,58 (tr, 3H, J = 8Hz, CH₂CH₂N), 3.63 - 3.68 (m, 1H, H₄'), 3,76 (m, 1H, H₅') 4.13 - 4.18 (m, 1H, H₃') 6.1 - 6.15 (m, 1H, H₁') , 7.43 (s, 1H, H-C=C).¹ H-NMR (DMSO-D₆ ) δ = 3.58 (tr, 3H, J = 8Hz, CH₂ CH₂ N), 3.63 - 3.68 (m, 1H, H₄ '), 3.76 (m, 1H, H₅ ') 4.13 - 4.18 (m, 1H, H₃ ') 6.1 - 6.15 (m, 1H, H₁ '), 7.43 (s, 1H, HC = C).

Claims

Translated fromGerman

Patentansprüche claims1.) Cytosin- und Cytidin-Derivate der allgemeinen Formel I1.) Cytosine and cytidine derivatives of the general formula I

worin

wherein R Wasserstoff, CHO, COR⁶ mit R⁶ in der Bedeutung von C₁-C₁₇-Alkyl und Phenyl, oder COOR⁷ mit R⁷ in der Bedeutung von C₁-C₄-Alkyl oder BenzylR is hydrogen, CHO, COR⁶ with R⁶ in the meaning of C₁ -C₁₇ alkyl and phenyl, or COOR⁷ with R⁷ in the meaning of C₁ -C₄ alkyl or benzylR' Wasserstoff oder die GruppenR 'is hydrogen or the groups

33

worinwherein n 1 oder 2 n 1 or 2 X 0, S, CH₂ oder NR,X 0, S, CH₂ or NR, R² Wasserstoff, Fluor, CH₃ oder CN,R^{2 is} hydrogen, fluorine, CH₃ or CN, R³ Wasserstoff, Fluor, Hydroxy oder -OCH₃,R^{3 is} hydrogen, fluorine, hydroxy or -OCH₃ , R⁴ Wasserstoff, Fluor, Hydroxy, N₃ oder NH_2,R^{4 is} hydrogen, fluorine, hydroxy, N₃ or NH_2, R⁵ Wasserstoff oder PO(OH)₂,R^{5 is} hydrogen or PO (OH)₂ , R², R³ gemeinsam =CH₂,R² , R³ together = CH₂ , R³, R⁴ gemeinsam eine Doppelbindung bilden und deren Salze.R³ , R⁴ together form a double bond and their salts.2.) 3,5,6,7-Tetrahydro-2H-pyrrolo[2,3d]pyrimidin-2-on2.) 3,5,6,7-tetrahydro-2H-pyrrolo [2,3d] pyrimidin-2-one 7-Acetyl-3,5,6,7-tetrahydro-2H-pyrrolo[2,3-d]pyrimidin-2-on 7-acetyl-3,5,6,7-tetrahydro-2H-pyrrolo [2,3-d] pyrimidin-2-one 3-ß-D-Ribofuranosyl-3,5,6,7-tetrahydro-2H-pyrrolo[2,3-d]pyrimidin-2-on 3-β-D-ribofuranosyl-3,5,6,7-tetrahydro-2H-pyrrolo [2,3-d] pyrimidin-2-one 3-(ß-D-Arabinofuranosyl)-3,5,6,7-tetrahydro-2H-pyrrolo[2,3-d)pyrimidin-2-on 3- (β-D-arabinofuranosyl) -3,5,6,7-tetrahydro-2H-pyrrolo [2,3-d) pyrimidin-2-one3-(ß-D-Arabinofuranosyl)-3,5,6,7-tetrahydro-2-H-pyrrolo[2,3-d]pyrimidin-2-on-5'-O- phosphat3- (β-D-arabinofuranosyl) -3,5,6,7-tetrahydro-2-H-pyrrolo [2,3-d] pyrimidin-2-one-5'-O-phosphate 3-(2^,-Desoxy-ß-D-ribofuranosyl)-3,5,6,7-tetrahydro-2H-pyrrolo[2,3d]-pyrimidin-2-on3- (2^, -Desoxy-ß-D-ribofuranosyl) -3,5,6,7-tetrahydro-2H-pyrrolo [2,3d] pyrimidin-2-one3-(2-Deoxy-2-fluor-ß-D-arabinofuranosyl)-3,5,6,7-tetrahydro-2H-pyrrolo [2,3- d]pyrimidin-2-on3- (2-Deoxy-2-fluoro-ß-D-arabinofuranosyl) -3,5,6,7-tetrahydro-2H-pyrrolo [2,3-d] pyrimidin-2-one3.) Verwendung der Verbindungen nach Anspruch 1 und 2 zur Herstellung von3.) Use of the compounds according to claim 1 and 2 for the preparation of Arzneimitteln. Medicines.4.) Verfahren zur Herstellung der Verbindungen der Formel I4.) Process for the preparation of the compounds of formula I.

worin die Reste R' und R die oben angegebene Bedeutung haben, dadurch gekennzeichnet, daß man a) eine Verbindung der Formel 7

in which the radicals R 'and R have the meaning given above, characterized in that a) a compound of the formula 7

mit Triphenylphosphindihalogenid und einem tertiären Amin umsetzt oder b) ein Formylpyrrolidon -Derivat der Formel 17with triphenylphosphine dihalide and a tertiary amine or b) a formylpyrrolidone derivative of the formula 17

worin R¹³ Wasserstoff, einen SiR¹⁴R¹⁵R¹⁶-Rest, in dem R¹⁴, R¹⁵, R¹⁶ gleich oder verschieden sind und Phenyl oder C₁-C₄-Alkyl bedeuten, oder tert.-Butyloxycarbonyl bedeutet,

in which R^{13 is} hydrogen, an SiR¹⁴ R¹⁵ R¹⁶ radical in which R¹⁴ , R¹⁵ , R^{16 are} identical or different and are phenyl or C₁ -C₄ alkyl, or is tert-butyloxycarbonyl,mit einem Harnstoffderivat oder einem Isoharnstoffderivat wie 16with a urea derivative or an isourea derivative such as 16

worin R¹⁷, R¹⁸ gleich oder verschieden sind und Wasserstoff oder SiR¹⁴R¹⁵R¹⁶ bedeuten, umsetzt und gewünschtenfalls anschließend in 7-Stellung formyliert, acyliert oder COOR⁷ einführt oder in 3-Stellung den gegebenenfalls Hydroxyschutzgruppen enthaltenden Rest R' einführt und anschließend gewünschtenfalls N3, NH2, Fluor, CN oder =CH2 einfuhrt oder R³, R⁴ in der Bedeutung einer Doppelbindung einführt und diese gewünschtenfalls hydriert oder 5' Hydroxylgruppen in das 5'-Phosphat überführt und gegebenenfalls Schutzgruppen abspaltet oder die Salze bildet.wherein R¹⁷ , R^{18 are the} same or different and are hydrogen or SiR¹⁴ R¹⁵ R¹⁶ , reacted and, if desired, subsequently formylated, acylated or introduced COOR⁷ or introduced in the 3-position the radical R ′ which may contain hydroxyl protective groups and then, if desired, introduces N3, NH2, fluorine, CN or = CH2 or R³ , R⁴ in the meaning of a double bond and, if desired, hydrogenates it or converts 5 'hydroxyl groups into the 5'-phosphate and optionally cleaves off protective groups or forms the salts.