TARIFNAME DUMAN AGACI (COTINUS COGGYGRIA) VE/VEYA ÖLMEZ ÇIÇEK (HELICHRYSUM ARENARIUM) EKSTRESI IÇEREN ANTI-AKNE ETKILI NANOEMÜLSIYON FORMÜLASYONU Teknik Alan Bulus, duman agaci (Cotinus coggygri'a) ve/veya ölmez çiçek (Helichrysum arenarium) ekstresi içeren derrnal yoldan uygulanmak üzere nanoemuljel formunda anti-akne etkili formülasyonlarla ilgilidir. Önceki Teknik Akne vulgaris, pilosebase ünitelerin sekil degistiren, uzun süreli enIlamatuvar bir hastaligidir. Androjen kaynakli artmis sebum üretimi ve degismis keratinizasyon, enflamasyon ve Cutibacteri'um acnes (önceki adiyla Propi'oni'bacteri'um acnes) bakteriyel kolonizasyonunun bir sonucu olarak akne, enIlamatuvar ve nonenflamatuvar lezyonlarla karakterize kronik bir hastaliktir. En sik görülen cilt hastaliklarina bakildiginda, görülme sikligi bakimindan akne vulgaris 2. sirada yer almaktadir. Aknenin psikolojik etkileri arasinda özgüven kaybi, depresyon, kaygi ve kisilerarasi ve isle ilgili zorluklar yer almaktadir. Konvansiyonel tedavinin dezavantajlari arasinda; akneye neden olan bakterilerde (C. acnes ve Staphylococcus epidermi'di's) artan antibiyotik direnci, bilinen bir teratojen olan oral tretinoine maruz kalan hamile kadinlarin insidansinin artmasi ve sistemik retinoit tedavisinin zayif güvenlik profili yer almaktadir. Akne tedavisinde bitkisel içerikli ürünlerin kullanimi, daha iyi hasta toleransi, uzun kullanim geçmisi, daha az yan etki ve nispeten daha uygun maliyetli olmasi gibi avantaj lari nedeniyle artmistir. M tedavisinde kullanilan bitkilerin etki mekanizmalari, akneye sebep olan bakterilere karsi gösterdikleri antibakteriyel aktivitelerin yani sira akne ile iliskili sebum aktivitesi, enflamasyon ve hiperkeratinizasyon üzerindeki etkilerinden kaynaklanmaktadir. C. acnes susuna karsi antimikrobiyal etkinligini ve in vitro enzim inhibisyon deneyleri ile antienIlamatuvar etkisini tespit ettigimiz, ülkemizde yetisen duman agaci (C. coggygri'a) ve ölmez çiçek (H. arenarium) ekstreleri kullanilarak yenilikçi anti-akne etkili özgün bir nanoemülsiyon formülasyonu hazirlanmistir. Nanoemülsiyon içerisindeki ekstrelerin deri için yüksek oranda geçise sahip olmasi, düsük dozda yüksek etkinlik göstermesi beklenmektedir. Nanoemülsiyonlar, flokülasyon veya kremalasma gibi stabilite problemlerinin üstesinden gelebilmektedir. Konvansiyonel akne tedavisi, tek basina veya siddetli vakalarda sistemik tedavilerle birlikte topikal ürün kullanimini da içerir. Topikal olarak kullanilan ajanlar arasinda komedolitik ajanlar, antibiyotikler ve çesitli anti-enflamatuvar ilaçlar bulunurken sistemik olarak kullanilan ajanlar arasinda retinoitler, antibiyotikler, çinko ve hormonlar yer almaktadir. Topikal tedavi kemedopapüler aknesi olan çogu hasta için standarttir; ancak püstülokistik skarli akne için lokal ve sistemik tedavilere ihtiyaç vardir. Nano boyutlu ilaç tasima sistemleri, etkin moleküllerin stabilitesini ve dermal emilimini arttirarak yüksek etkinlik elde edilmesini saglayabilmektedir. Akne tedavisi, mevcut lezyonlari kontrol altina almayi, mümkün oldugunca kalici skar olusumunu önlemeyi, hastaligin süresini sinirlamayi, morbiditeyi en aza indirmeyi ve yeni akne lezyonlarinin olusumuna karsi korumayi amaçlar. Akne karsiti ilaçlar foliküler keratinizasyonu norrnallestirerek, sebum üretimini baskilayarak etki etmelerinin yani sira, C. acnes'e karsi antibakteriyel etki göstererek iltihabi hafifletebilir ve antioksidan etki yoluyla C. acnes'i'n gelisimini destekleyen sebum oksidasyonunu azaltabilir. Fakat aknenin antibiyotiklerle tedavisini etkileyen en büyük sorunlardan biri özellikle monoterapide C. acnes'i'n gösterdigi direnç gelisimidir. S-Nitroimidazol ajanlari (metronidazol, tinidazol, ornidazol), aminoglikozitler, sülfonamitler ve mupirosine dogal olarak direnç olmasinin yani sira, akne tedavisinde topikal olarak en sik kullanilan antibiyotiklerden olan eritromisin ve klindamisine yüksek oranda, tetrasikline düsük oranda direnç göstermektedir. Giderek artan direnç sorununun önüne geçmek için antibiyotiklerin kullanimini kisitlamak, yeni tedavi yöntemleri gelistirmek ve gerekirse antibiyotiklerle birlikte kombine tedavi uygulamak gerekmektedir. Bu amaçla C. acnes üzerine etkili olan bitkisel ekstrelerin kullanimi, hem antibiyotiklere bagli yan etkilerin önüne geçecek, hem de direnç gelisimini yavaslatarak tedavide ek bir strateji gelistirilmesini saglayacaktir. coggygri'a ekstrelerinin cilt veya mukozal dokunun elastikiyetini veya yapisal bütünlügünü arttirmak amaciyla kullanimi açiklanmistir. Ancak basvuruda C. coggygri'a ekstresi içeren nanoemulj el formülasyonuna iliskin bir bilgi bulunmamaktadir. Bulusun Açiklamasi Bulus ile C. acnes patojenine karsi antimikrobiyal ve in vitro enzim inhibisyon testleri antienIlamatuvar etkinligi tespit edilmis olan C. coggygri'a ve/veya H. arenarium ekstreleri kullanilarak nanoemülsiyon formülasyonu hazirlanmistir. Hazirlanan nanoemülsiyonlar jel formülasyonu ile karistirilarak nanoemülsiyon içeren jel (nanoemuljel) formülasyonlari gelistirilmistir. Bulusun bir düzenlemesinde nanoemuljel formülasyonu etkin madde olarak sadece C. coggygri'a ekstresi içerir. Bulusun bir diger düzenlemesinde nanoemuljel formülasyonu etkin madde olarak sadece H. arenarium ekstresi içerir. Bulusun bir diger düzenlemesinde nanoemuljel formülasyonu etkin madde olarak C. coggygri'a ekstresi ile H. arenarium ekstresi içerir. Nanoemuljeller emülsiyon ve jellerin bir arada oldugu kombine dozaj sekillerdir. Nanoemuljeller emülsiyonlarin jellestirici ajan kullanilarak stabil hale geldigi sistemler oldugundan hem emülsiyonlarin hem de jellerin karakteristik özelliklerini gösterirler. Nanoemuljel formülasyonunda kullanilan emülsiyonlar su içerisinde yag (Y/S) veya yag içerisinde su (S/Y) seklinde olabilir. Jeller yüksek miktarda su veya hidroalkolik sivinin kolloidal bir kati parçacik agi içerisinde tutunmasiyla olusan dozaj formlaridir. Jeller, merhem ve krem formülasyonlarina göre cilde uygulanmaya çok daha elverisli sistemlerdir. J ellerin cilde uygulamadaki göstermis oldugu bu elverisli yapi hasta uyuncunu da artirmaktadir. J ellerin en büyük problemleri, hidrofobik bilesiklerin tasinmasindaki sorundur. Bu sorunun asilmasi için nanoemuljel formülasyonlari gelistirilmistir. Nanoemuljellerin hazirlanmasinda jel ve emülsiyon formülasyonlari ayri ayri üretilmektedir. Bunun için jellestirici polimer distile su ile disperse edilir. Emülsiyonun hazirlanmasi için yag fazi ve su fazindaki maddeler ayri ayri isitilarak eritilir. Yag fazi ve su fazi karistirilir ve emülsiyon olusturulur. Olusan emülsiyon jel ile belirli oranlarda karistirilir ve nanoemuljel formülasyonu elde edilir. Nanoemulj el formülasyonlarina giren polimerler, sürfaktanlar gibi genel madde gruplari ve bu gruplara giren bilesikler asagida belirtilmistir. J el için kullanilabilecek polimerler Görevi Xanthan gum Jellestirici ajan Pluronik F127 Jellestirici ajan HPMC Jellestirici ajan Carbopol 934 (carboxyvinyl polymer) Jellestirici ajan Distile su Dispersiyon ortami Emülsiyon için kullanilabilecek maddeler Görevi Distile su Çözücü, dispersiyon ortami Tween 20,40,60,80 Yüzey etkin madde Propilen glikol Nemlendirici Etanol Penetrasyon artirici Gliseril stearat Emülgatör Potasyum sorbat Koruyucu Sodyum benzoat Koruyucu Sivi parafin Kivam verici Yüzey etkin madde Setil alkol Kivam verici Izopropil palmitat Yumusatici Stearil alkol Kivam verici Stearik asit Kivam verici Dimetikon Viskozite ayarlayici Orta zincirli trigliserit Emulsiyon ajani, solvent; Soya fosfatidilkolin Emollient; emulsiyon ajani Alfa tokoferol Antioksidan Oleik asit Emulsiyon ajani, penetran ajan Kitosan Kivam verici Nanoemulj el formülasyonu asagidaki sekilde hazirlanir. Nanoemülsiyon formülasyonunun hazirlanmasi: Yag fazini orta zincirli trigliserit, soya fosfotidilkolin, alfa-tokoferol, oleik asit, C. coggygri'a ve/veya H. arenarium ekstreleri ile etanol olusturmaktadir. Su fazini ise polisorbat 80, sodyum benzoat ve saf su olusturmaktadir. Nano e mülsiyon formülasyonlarin elde edilmesi için yag fazi manyetik karistirici altinda su fazina yavas yavas ilave edilmis, karistirilmis ve nanoemülsiyonlarin olusmasi için gerekli olan hacme ulasilincaya kadar su fazini olusturan etanol ve distile su uzaklastirilmistir. J el formülasyonunun hazirlanmasi: Jel formülasyonlarinin hazirlanmasi için glasiyal asetik asit içeren sulu çözelti içerisinde düsük molekül agirlikli kitosan polimerinin karisimi hazirlanmistir. Bu karisimin içerisine hidroksipropil metilselüloz formülasyonu hazirlanmistir. Nanoemulj el formülasyonunun hazirlanmasi: K15M polimeri eklenerek jel Nanoemülsiyon ve jel formülasyonlari karistirilarak nanoemuljel formülasyonlari hazirlanmistir. Ekstreler üzerinde yapilan çalismalar Tablo 1 ve 2,de, hazirlanan formülasyonun stabilite çalismalarinin sonuçlari Tablo 3,te, karakterizasyon parametreleri ise Tablo 4,te verilmistir. Tablo 1 . Ekstrelerin C. acnes suslarina karsi minimum inhibitörkonsantrasyon (MIK) arahklan, MIK50 ve MIK90 degerleri (tig/ml) Ekstreler MIK araligi MIK50 MIK90 Tablo 2. Ekstrelerin antienflamatuvar etki ile iliskili hyalüronidaz. kolaj enaz, ksantin oksidaz ve lipoksij enaz enzim inhibisyon degerleri Hyalüronidaz Kolajenaz Ksantin oksidaz Lipoksijenaz Formülasyonda kullamlan 2 mg/ml (b) coggygria Helich sum arenarium (*) S.S. = Standart sapma (n: 3) (b) Stok konsantrasyon (c) Etki gözlenmedi (d) Tannik asit (e) Fenantrolin (I) Allopurinol (g) Baikalein Tablo 3. Ekstre yüklü fonnülasyonlarin stabilite sonuçlari Hizlandirilmis stabilite testlerini geçti mi? Santriûij Dondurup-çözme Isitma-sogutma Ekstre yüklü olmayan formülasyon Evet Evet Evet Cotinus coggygri'a-Nanoemülsiyon Evet Evet Evet Helichrysum arenari'um-Nanoemülsiyon Evet Evet Evet Tablo 4. Ekstre yüklü nanoemülsiyon içeren nanoemulj ellere ait damlacik boyutu, polidispersite indeksi ve zeta potansiyeli degerleri Formülasyon kodu Damlacigngyuklugu Polidispersite indeksi Zeta potansiyeli (mV) Nanoemulsiyon _ _ Nanoemulsiyon _ _ Cotinus coggygri'a- nanoemuljel Helichrysum arenari'um- nanoemuljel Bulusun avantajlari, Nanoemuljellerin asagida belirtilen avantajlari nedeniyle Cotinus coggygri'a ve Helichrysum arenari'um ekstresi için akne tedavisinde kullanilacak nanoemulj el formülasyonu seçilmistir: Nanoemuljeller hem emülsiyon formülasyonu hem de jel sayesinde uygulandigi bölgeden kontrollü salimin gerçeklesmesini saglarlar. Bu sistemler jel sayesinde mukoadhezif özellik gösterirler ve deride uzun süre kalabilirler. Jel yapisi nanoemulj el formülasyonlarinin daha stabil olmalarini saglamaktadir. Dermatolojik açindan jeller tiksotropik akis özelligi gösterirler, deriye kolay uygulanma, yumusatici özellik gösterme, uzun raf ömrüne sahip olma, seffaf ve hos görünüme sahip olma gibi pek çok avantaja sahiptir. Tiksotropik özellikte olmalari deriye kolayca uygulanabilmelerini saglamaktadir. Bu sayede nanoemulj eller de jellerin sahip oldugu tüm bu özellikleri göstermektedir. Jel yapisinin sagladigi yagsiz yapi kullanicilar tarafindan merhem ve kremlere göre nanoemulj el formülasyonlarinin daha rahat uygulanabilmelerine imkân tanimaktadir. J ellere kiyasla nanoemulj eller hidrofobik maddelerin yüklenmesine elverislidir. TR TRDESCRIPTION ANTI-ACNE EFFECTIVE NANOEMULSION FORMULATION CONTAINING COTINUS COGGYGRIA AND/OR IMMORTAL FLOWER (HELICHRYSUM ARENARIUM) EXTRACT Technical Field The invention relates to anti-acne effective formulations in the form of nanoemulgels for dermal application, containing Cotinus coggygri'a and/or Immortelle (Helichrysum arenarium) extract. Prior Art Acne vulgaris is a long-term inflammatory disease that causes deformity of the pilosebaceous units. Acne is a chronic disease characterized by inflammatory and noninflammatory lesions resulting from androgen-induced increased sebum production and altered keratinization, inflammation, and bacterial colonization by Cutibacterium acnes (formerly Propibacterium acnes). Among the most common skin diseases, acne vulgaris ranks second in prevalence. Psychological effects of acne include loss of self-esteem, depression, anxiety, and interpersonal and work-related difficulties. Disadvantages of conventional treatment include increasing antibiotic resistance in acne-causing bacteria (C. acnes and Staphylococcus epidermis), increased incidence of pregnant women exposed to oral tretinoin, a known teratogen, and the poor safety profile of systemic retinoid therapy. The use of herbal-based products in acne treatment has increased due to their advantages such as better patient tolerance, long-term use, fewer side effects, and relatively lower cost. The mechanisms of action of the plants used in acne treatment stem from their antibacterial activity against acne-causing bacteria, as well as their effects on acne-associated sebum activity, inflammation, and hyperkeratinization. An innovative, anti-acne nanoemulsion formulation was prepared using extracts of the smoke tree (C. coggygri'a) and the immortelle (H. arenarium), which grow in Turkey. We have demonstrated antimicrobial activity against C. acnes strains and anti-inflammatory effects through in vitro enzyme inhibition assays. The extracts in the nanoemulsion are expected to have high skin penetration and high efficacy at low doses. Nanoemulsions can overcome stability problems such as flocculation or creaming. Conventional acne treatment also involves the use of topical products, either alone or in combination with systemic treatments in severe cases. Topically applied agents include comedolytic agents, antibiotics, and various anti-inflammatory drugs, while systemically used agents include retinoids, antibiotics, zinc, and hormones. Topical treatment is the standard for most patients with chemedopapular acne; however, pustulocystic scarring acne requires local and systemic treatments. Nanosized drug delivery systems can enhance the stability and dermal absorption of active molecules, resulting in increased efficacy. Acne treatment aims to control existing lesions, prevent permanent scarring whenever possible, limit disease duration, minimize morbidity, and protect against the formation of new acne lesions. Anti-acne medications not only normalize follicular keratinization and suppress sebum production, but also have antibacterial effects against C. acnes, alleviating inflammation and, through antioxidant effects, reducing sebum oxidation, which promotes C. acnes growth. However, one of the major problems affecting the treatment of acne with antibiotics, especially with monotherapy, is the development of resistance by C. acnes. In addition to naturally occurring resistance to S-nitroimidazole agents (metronidazole, tinidazole, ornidazole), aminoglycosides, sulfonamides, and mupirocin, it also exhibits high rates of resistance to erythromycin and clindamycin, and low rates of resistance to tetracycline, the most commonly used topical antibiotics in acne treatment. To address this growing resistance problem, it is necessary to restrict antibiotic use, develop new treatment methods, and, if necessary, implement combination therapy with antibiotics. For this purpose, the use of herbal extracts effective against C. acnes will both prevent antibiotic-related side effects and slow the development of resistance, enabling the development of an additional treatment strategy. The use of coggygria extracts to increase the elasticity or structural integrity of skin or mucosal tissue has been described. However, no information is available in the application regarding a nanoemulsion formulation containing C. coggygria extract. Description of the Invention With the invention, a nanoemulsion formulation has been prepared using C. coggygria and/or H. arenarium extracts, which have been determined to have antimicrobial and in vitro enzyme inhibition tests anti-inflammatory activity against the C. acnes pathogen. The prepared nanoemulsions were mixed with the gel formulation to develop gel (nanoemulgel) formulations containing nanoemulsion. In one embodiment of the invention, the nanoemulgel formulation contains only C. coggygria extract as the active ingredient. In another embodiment of the invention, the nanoemulgel formulation contains only H. arenarium extract as the active ingredient. In yet another embodiment of the invention, the nanoemulgel formulation contains C. coggygria extract and H. arenarium extract as the active ingredients. Nanoemulgels are combined dosage forms that combine emulsions and gels. Nanoemulgels exhibit the characteristics of both emulsions and gels because they are systems in which emulsions are stabilized by the use of a gelling agent. The emulsions used in nanoemulgel formulations can be in the form of oil-in-water (O/W) or water-in-oil (W/O). Gels are dosage forms formed by the retention of large amounts of water or hydroalcoholic liquids within a colloidal network of solid particles. Gels are much more suitable for skin application than ointments and creams. This favorable structure of gels in skin application also increases patient compliance. One of the biggest problems with gels is the transport of hydrophobic compounds. Nanoemulgel formulations have been developed to overcome this problem. In the preparation of nanoemulgels, gel and emulsion formulations are produced separately. To achieve this, the gelling polymer is dispersed with distilled water. To prepare the emulsion, the substances in the oil and water phases are heated and melted separately. The oil and water phases are mixed to form an emulsion. The resulting emulsion is mixed with the gel in specific proportions, resulting in a nanoemulgel formulation. The general groups of substances, such as polymers and surfactants, used in nanoemulgel formulations, and the compounds included in these groups are listed below. Polymers that can be used for gel Function Xanthan gum Gelling agent Pluronic F127 Gelling agent HPMC Gelling agent Carbopol 934 (carboxyvinyl polymer) Gelling agent Distilled water Dispersion medium Substances that can be used for emulsion Function Distilled water Solvent, dispersion medium Tween 20,40,60,80 Surfactant Propylene glycol Humectant Ethanol Penetration enhancer Glyceryl stearate Emulsifier Potassium sorbate Preservative Sodium benzoate Preservative Liquid paraffin Thickener Surfactant Cetyl alcohol Thickener Isopropyl palmitate Softener Stearyl alcohol Thickener Stearic acid Thickener Dimethicone Viscosity adjuster Medium chain triglyceride Emulsifying agent, solvent; Soy phosphatidylcholine Emollient; Emulsifying agent Alpha-tocopherol Antioxidant Oleic acid Emulsifying agent, penetrating agent Chitosan Thickener The nanoemulsion formulation is prepared as follows. Preparation of the nanoemulsion formulation: The oil phase consists of medium-chain triglyceride, soy phosphatidylcholine, alpha-tocopherol, oleic acid, C. coggygria and/or H. arenarium extracts and ethanol. The water phase consists of polysorbate 80, sodium benzoate and purified water. To obtain nanoemulsion formulations, the oil phase was slowly added to the water phase under a magnetic stirrer, mixed, and the ethanol and distilled water forming the water phase were removed until the volume required for the formation of nanoemulsions was reached. Preparation of gel formulation: For the preparation of gel formulations, a mixture of low molecular weight chitosan polymer was prepared in an aqueous solution containing glacial acetic acid. Hydroxypropyl methylcellulose formulation was prepared into this mixture. Preparation of nanoemulsion formulation: K15M polymer was added and nanoemulsion-gel formulations were prepared by mixing the gel nanoemulsion and gel formulations. Studies on extracts are given in Tables 1 and 2, the results of stability studies of the prepared formulation are given in Table 3, and the characterization parameters are given in Table 4. Table 1. Minimum inhibitory concentration (MIC) ranges, MIK50 and MIK90 values (tig/ml) of the extracts against C. acnes strains Extracts MIC range MIK50 MIK90 Table 2. Hyaluronidase, collagenase, xanthine oxidase and lipoxygenase enzyme inhibition values of the extracts related to anti-inflammatory effect Hyaluronidase Collagenase Xanthine oxidase Lipoxygenase 2 mg/ml used in the formulation (b) coggygria Helichrysum arenarium (*) S.S. = Standard deviation (n: 3) (b) Stock concentration (c) No effect observed (d) Tannic acid (e) Phenanthroline (I) Allopurinol (g) Baikalein Table 3. Stability results of the extract-loaded formulations Passed the accelerated stability tests? Centrifugation Freeze-thaw Heating-cooling Formulation without extract-loaded Yes Yes Yes Cotinus coggygri'a-Nanoemulsion Yes Yes Yes Helichrysum arenari'um-Nanoemulsion Yes Yes Yes Table 4. Droplet size, polydispersity index and zeta potential values of nanoemulsions containing extract-loaded nanoemulsion Formulation code Droplet load Polydispersity index Zeta potential (mV) Nanoemulsion _ _ Nanoemulsion _ _ Cotinus coggygri'a- nanoemulgel Helichrysum arenari'um- nanoemulgel Advantages of the invention: Nanoemulgels have the following advantages: Nanoemulgels are both emulsion formulation and gel formulation. They provide controlled release from the applied area. These systems exhibit mucoadhesive properties thanks to the gel and can remain on the skin for extended periods. The gel structure ensures greater stability of nanoemulsion hand formulations. From a dermatological perspective, gels exhibit thixotropic flow properties, offering many advantages such as easy application to the skin, emollient properties, long shelf life, and transparency and a pleasant appearance. Their thixotropic properties allow them to be easily applied to the skin. Thus, nanoemulsion hands exhibit all these properties of gels. The oil-free texture provided by the gel structure allows users to apply nanoemulsion hand formulations more easily than ointments and creams. Compared to gels, nanoemulsion hands are more susceptible to loading hydrophobic substances. TR TR