SU1007676A1 - Method of obtaining immunosorbent - Google Patents

Abstract

Translated fromRussian

1. СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ HfWHG СОРБЕНТА пУтём св зывани  антигена с носителем, о т л и ч а ю щ и и с   тем, что, с целью повышени  стабильности ,. в качестве антигена используютфосфолипидный антиген и св зывание осуи ствл ют обработкой носител  смесью раствора антигена в хлороформе и 0,5±0,01% раствора полиметилметакрилата в хлороформе при объемном соотношении носител  и указанной смеси 1:1 с последующим высушиванием по ученнопо продукта. 2,Способ по п, 1, о т л и ч а ющ и и с   тем, что используют фосфолипидные антигены риккетсий или хламидий.. 3.Способ по п, 1, о т л и ч а юV ) щ и и с   тем, что в качестве носител  используют полиакриламидный гель или растворивши крахмал, или сефароЗУ 4В.1. METHOD OF OBTAINING HfWHG SORBENT by binding the antigen to the carrier, so that, in order to increase stability,. As an antigen, a phospholipid antigen is used and the binding of osui is treated by treating the carrier with a mixture of a solution of antigen in chloroform and 0.5 ± 0.01% of a solution of polymethyl methacrylate in chloroform at a volume ratio of carrier and said mixture 1: 1, followed by drying on a scientific product. 2, The method according to p, 1, about tl and h ayush and with the fact that they use phospholipid antigens rickettsia or chlamydia .. 3. Method according to n, 1, about t and v and V) p and and so , that polyacrylamide gel is used as a carrier or by dissolving starch or SepharoZU 4B.

Description

Translated fromRussian

СХ)CX)

||

Од Изобретение относитс  к медицине а именно к медицинской микробиологи и может быть использовано дл  выдел ни  специфических антител, примен е мых в диагностике р да инфекционных заболеваний. Известен способ получени  иммуносорбента путем обработки кремнийсодержащего -неорганического носител j-амииопропилтриэтоксисиланом; моди фикации полученного носител  глутаровым альдегидом с последзющим ковалентным св зыванием его с белком . Иммуносорбент примен етс  дл  выделени  чистых антител из сыворот ки 1, . Однако кратность использовани  иммуносорбента составл ет . Известен способ полумени  иммуно сорбента путем включени  антигена а полиакриламидный гель проведением совместной полимеризации акрильных мономеров с общей концентрацией их до 12% в присутствии антигена и ини циаторов полимеризации с последующе дополнительной сшивкой предваритель но фиксированного антигена глутаров альдегидом. Вводимый в гель антиген в данном случае используют в ви де следующего комплекса - дифтерийный токсин- антитоксин из нативной культуральной жидкости дифтерийной палочки и нативной противодифтерий .ной сыворотки 2, Однако способ не обеспечивает вы сокой стабильности получаемых иммуносорбентов . В процессе использовани  после 10-13 кратного использова ни  значительно снижаетс  их специф ческа  активность, что св зано как с ухудшением колоночных свойств инертного носител , так и недостато но прочной фиксацией на нем антигена Цель изобретени  - повышение стабильности получаемого иммуносор , бентао Поставленна  цель достигаетс  способом получени  иммуносорбента путем св зывани  с носителем, где в качестве антигена используют фос фолипидный антиген и св зь ван 4е осуществл ют .обработкой носител  смесью раствора антигена в хлоформе и 0,5±0,OU;-ro раствора полиметилакрилата в хлороформе при объемном соотношении носител  и ука занной смеси 1;1 с последующим высу шиванием полученного продукта. Предпочтительно используют фосфолипидные антигены риккетсий или хламидий, В качестве носител  обычно используют полиакриламидный гель, или растворимый крахмал, или сефарозу 4В. Способность фосфолипидных антигенов раствор тьс  в хло Ьоформе, не мен   своей специфической активности , дает возможность иммобилизовать их на носителе с помощью растворенного в хлороформе полиметилметакрилата ( плексигласа). В результате достигаетс  не только прочна  фиксаци  антигена на носителе, но и за счет плексигласа значительно улучшаютс  колоночные свойства инертного носител - увеличиваетс  его стабильность , .Кратность -использовани  до 53 раз, В качестве исходного ма-. териала дл  извлечени  фосфолипидных антигенов используют желточные мешки куриных эмбрионовf инфицированных соответствующими микробными штаммамиf например, возбудителем сыпного тифа риккетси ми . Провачека, Желточные мешки гомогенизируют и из гомогената извлекают антиген по известной методике Гз . . П р и м е р 1 . 1риготовленный ант ген раствор ют в хлороформе- из рас чета 1 мл на 1 желточный мешок.После чего его смешивают с равным объемом раствора плексигласа в хлороформе . Ранее готов т полиакрил амидный гель (50 мл)„ С этой целью N,N-метилен-бис-акриламид 1,625 г раствор ют в 25 мл дистиллированной воды при fO°C в течение 30 мин, К полученному раствору добавл ют ,2,5 г акриламида, затем последовательно внос т инициаторы сополимеризации: 0,05 г персульфата аммони  и 0,25 мл 10 раствора на дистиллированной воде N, N, N, М- тетраметилэтилендиамина . Приготовленный полиакриламидный гель измельчают, просеива  через капроновое сито, промывают ацетоном и хлороформом. Затем к одному объему носител  полиакриламидному гелю добавл ют равный объем полученной смеси антиген плексиглас5 тщательно перемешивают и высушивают в токе воздуха до исчезновени  запаха растворител . Полученный Иммуносорбент используют дл  выделени  антител к риккетси м Провачека (пример 2), Аналогичным обраЗОЙ готов т иммуносорбенты на фосфоЬипиднух антигенах других микробов, например хламидий.The invention relates to medicine, namely medical microbiologists, and can be used to isolate specific antibodies used in the diagnosis of a number of infectious diseases. A method of producing an immunosorbent is known by treating the silicon-containing inorganic carrier with a j-amyiopropyltriethoxysilane; modification of the resulting carrier with glutaraldehyde with subsequent covalent binding of it to the protein. The immunosorbent is used to isolate pure antibodies from serum 1,. However, the multiplicity of use of the immunosorbent is. The known method of half-milling an immunosorbent by including an antigen and a polyacrylamide gel is carried out by joint polymerization of acrylic monomers with a total concentration of up to 12% in the presence of antigen and polymerization initiators, followed by additional cross-linking of preliminarily fixed glutar antigen with aldehyde. In this case, the antigen introduced into the gel is used in the form of the following complex — diphtheria toxin — antitoxin from native culture fluid of diphtheria bacillus and native anti-diphtheria of serum 2. However, the method does not provide high stability of the resulting immunosorbents. In the process of use, after 10-13 times of use, their specific activity is significantly reduced, which is associated both with the deterioration of the column properties of the inert carrier and the lack of firm fixation of the antigen on it. The purpose of the invention is to increase the stability of the resulting immunosor, bentao. preparation of the immunosorbent by binding to a carrier, where a phospholipid antigen is used as an antigen and van 4e is bound by treating the carrier with a mixture of an antigen solution in chlorine IU and 0.5 ± 0, OU; -ro of a solution of polymethylacrylate in chloroform with a volume ratio of the carrier and the specified mixture 1; 1, followed by drying the resulting product. Phospholipid antigens of rickettsia or chlamydia are preferably used. A polyacrylamide gel or soluble starch or Sepharose 4B is usually used as a carrier. The ability of phospholipid antigens to dissolve in chloroform, without changing its specific activity, makes it possible to immobilize them on a carrier using polymethyl methacrylate (plexiglas) dissolved in chloroform. As a result, not only strong fixation of the antigen on the carrier is achieved, but also due to Plexiglas the columnar properties of the inert carrier are significantly improved - its stability is increased. The use rate is up to 53 times. As the initial mass. In order to extract phospholipid antigens, yolk sacs of chick embryos infected with the appropriate microbial strains, for example, the causative agent of typhus rickettsi, are used to extract the material. Provacheka, Yolk sacs are homogenized and the antigen is removed from the homogenate using the well-known procedure Gz. . PRI me R 1. The 1 prepared ant gene is dissolved in chloroform - from a calculation of 1 ml per 1 yolk sac. After that, it is mixed with an equal volume of a solution of Plexiglas in chloroform. Polyacrylate amide gel (50 ml) was previously prepared. To this end, N, N-methylene bis-acrylamide, 1.625 g was dissolved in 25 ml of distilled water at fO ° C for 30 minutes. To the resulting solution was added 2.5 g of acrylamide, then copolymerization initiators are sequentially added: 0.05 g of ammonium persulfate and 0.25 ml of 10 solution of N, N, N, M-tetramethylethylene diamine in distilled water. Prepared polyacrylamide gel is crushed, sifting through a nylon sieve, washed with acetone and chloroform. Then an equal volume of the resulting mixture is added to the one volume of carrier polyacrylamide gel, the Plexiglas antigen is thoroughly mixed and dried in a stream of air until the odor of the solvent disappears. The resulting immunosorbent is used to isolate antibodies to Provachek rickettsi (example 2). In a similar manner, immunosorbents are prepared on phosphoid antibodies of other microbes, for example, chlamydia.

П р и м е р 2, Выделение антител к риккетси м Провачека из лошадиной антисыворотки.PRI me R 2, Isolation of antibodies to Provachek rickettsi m from horse antisera.

Сухой иммуносорбент суспендируют в физиологическом растворе рН 7,0 и . заполн ют колонку (100 ммх2;э мм). Колонку симмуносорбентрм промывают физиологическим раствором рН 7,0 до нулевой экстинкции. На колонку наслаивают антисыворотку к риккетси м Провачека и пропускают ее через слой иммуносорбента в течение 30 мин. После .полного отмывани  физиологическим раствором рН 7,0 несв завшегос  белка, сорбированные антитела элюируют. Элюцию провод тDry immunosorbent suspended in a physiological solution pH 7.0 and. fill the column (100 mmx2; o mm). Column simmunosorbentrm washed with saline pH 7.0 to zero extinction. Antiserum against Provachek rickettsi is layered onto the column and passed through an immunosorbent layer for 30 minutes. After complete washing with physiological saline pH 7.0 of unbound protein, adsorbed antibodies are eluted. The elution is carried out

одним из общеприн тых способов, ,в частности 0,1М буферным раствором КС1-глицина при рН 2,5 с последующей нейтрализацией раствора.One of the conventional methods, in particular, 0.1 M KCl-glycine buffer solution at pH 2.5, followed by neutralization of the solution.

Выделенные чистые антитела кIsolated pure antibodies to

риккетси м Провачека обладают высокой удельной специфической активностью. Коэффициент очистки составл ет ,5, гПри этом белок определ ют на спектрофотометре СФ-16, а ГЕ (гемогглвтинирующа  единица) определ ют в реакции непр мой гемогглютинации.Provachek's rickettsi m have a high specific specific activity. The purification coefficient is 5, whereby the protein is determined on an SF-16 spectrophotometer, and the GE (hemoglobulinating unit) is determined in the reaction of indirect hemogglutination.

Т а б л и ц а 1Table 1

П Ри м е р 3. Получение иммуносорбента дл  выделени  чистых антител к риккетси м Музера, Исходным материалом дл  получени  фосфолипидного антигена слу- . жат инфицированные риккетси ми Музера штамм Исахан н желточные оболоч ки куриных эмбрионов-(титр возбудите л  lO,J1fl5Q- 0,2 мл при введении в желточный MeiuoKJl Желточные оболочки гомогенизируют и из голорена извлекают антиген по методу ЗЪ Полученный антиген раствор ют в хлороформе из расчета 1 мл на 1 желточный мешок. Затем его смешивают с равным объемом 0,5 раствора плексигласа в хлороформе . Ранее готов т полиакриламидный гель, как описано выше. 1риготовленный полиакриламидный гель измельчают , просеива  через капроновое сито , промывают ацетоном и хлороформом Затем к одному объему носител  - поли а криламидному гелю добавл ют равный .объем полученной смеси антиген плексиглас , тщательно перемешивают и высушивают в токе возду а до исчезновени  запаха растворител  Полученный иммуносорбент используют дл  выделени  препаратов к риккетси м Музера , П р и м е р 4. Получение иммуносорбента дл  выделени  чистых антител к риккетси м Сибирика. В качестве исходного материала дл  получени  фосфолипидного антигена примен ют инфицированную рик- кетси ми Сибирика штамм К-1 ткань селезенки и брюшины белых мышей, зараженных внутрибрюшинно. Перед заражением белым мышам весом г (за -5 ч) внутримышечно ввод т гидрокортизон по 2,5 мг на одну МЫШЬ. Накопление возбудител  конт-. ролируют микроскопией мазков-отпечатков , окрашенных по Романовскому Гимза. В опыте используют материал с крестным накоплением возбудител . Извлечение антигена осуществл ют по методу СЗ 1олученный антиген раствор ют в хлороформе из расчета 1 мл на органы от одной белой мыши. Последующие этапы получе . ни  иммуносорбента провод т, как ук зано в примере 1. ,П р и ме р 5. Получение иммуносорбента дл  выделени  чистых к возбудителю энзоотического аборта овец. Исходным материалом дл  извлечени  фосфолипидного антигена служат желточные оболочки куриных эмбрионов, зараженных возбудителем энзоотического аборта овец штамм ЕАЕ. Титр возбудител  должен быть не менее 10 ЛДсо(0,2 мл при заражении в желточный мешок ). Выделение антигена и получение иммуносорбента провод т, как указано в примере 1, Г р и м е р 6. Получение иМмуносорбента дл  выделени  чистых антител к возбудителю венерической лимфогранулемы. Дл  получени  фосфолипидного ант гена используют желточныеоболочки развивающихс  куриных эмбрионов, инфицированных возбудителем венерической лимфогранулемы штамм ЛГВ. Титр возбудител  в исходной взвеси должен составл т ь 10 Щ.(0,25 мл при введении в желточный мешок), Да льнейша  обработка материала и получение иммуносорбента осуществл етс  , как указано в примере 1. П р и м е р 7 . Получение иммуно сорбента на основе сефарозы В. дл  выделени  антител к R. prowafzektii . Из желточной культуры риккетсий Провацека готов т фосфолиПидный антиген (методика примера 1).Полученный антиген раствор ют в хлороформе из расчета 1 мл на 1 желточный мешо Растворенный антиген смешивают с pa ным объемом 0,5 раствора мелкой стружки полиметилметакрилата в хлор форме. Приготовленную смесь соедин ют с равным объемом сефарозы kB (фцрма Pharinacia) рпредваритепьно. обезжиренной хлороформом ...Полученную смесь тщательно перемешивают и высушивают в токе воздуха до полного ис чезновени  запаха растворител . Получение иммуносорбента провод т при 18-22 С. П р и м е р 8о Получение иммуносорбента на основе сефарозы kB дл  в ыделени  антител .к Ch. psittacl. Из желточной культуры возбудител  орнитоза, тем же способом готов т фосфолипидный антиген. Полученный антиген раствор ют в хлороформе из расчета 1 мл на 1 желточный мешок . Остальные операции провод т КИМ же образом, как в примере 1. П р и м е р 9 . Получение иммуносорбента на основе крахмала растворимого (ГОСТ 10бЗ-б2,. Реахим) дл  выделени  антител к R. prowazeku. . Из желточной культуры риккетсий Провачека готов т, фосфолипидный антиген (тем же способом). Полученный антиген раствор ют в хлороформе из расчета 1 мл на 1 .жел.точный мешок. Растворенный антиген смешивают с равным объемом 0,i)% раствора мелкой стружки полиметилметакрилата в хлороформе . Приготовленную смесь соедин ют с равным объемом крахмала растворимого , предварительно обезжиренного хлороформом. Полученную смесь тщательно перемешивают и высушивают в токе воздуха до полного исчезновени  запаха растворител . Все перечисленные операции провод т при 18-22е, П р и м е р 10. Получение иммуносорбента на основе крахмала растворимого (ГОСТ 1063-62. Реахим) дл  выделени  антител к Ch. psittaci. Все операции провод т аналогичным образом с той лишь разницей, что работают .с фосфолипидным антигеном возбудител  орнитоза. Дл  извлечени  специфических антител соответствующий иммуносорбент суспендируют в физиологическом растворе рН 7,0 и заполн ют колонку. Последующие этапы работы изложены ранее (пример 2). В табл, 2 приведены результаты сравнительного применени  иммуносорбентов , приготовленных на основе различных инертных носителей, дл выделени  антител к риккетси м Провачека и хламиди м орнитоза.Example 3: Preparation of Immunosorbent for Isolation of Pure Antibodies to Muzer’s Rickettsi, The starting material for the production of a phospholipid antigen was. Musker rickettsi mi infected Isahan strain n the yolk membranes of chick embryos are harvested (excite titer lO, J1fl5Q- 0.2 ml when injected into the yolk MeiuoKJl The yolk membranes are homogenized and the antigen is extracted from goloren by the method Z3. 1 ml per 1 yolk sac. Then it is mixed with an equal volume of 0.5 Plexiglas-chloroform solution. Previously, the polyacrylamide gel is prepared as described above. The prepared polyacrylamide gel is crushed, sifted through a nylon sieve, washed with acetone nome and chloroform. Then an equal volume of the resulting mixture Plexiglas antigen is added to one volume of carrier — poly a krylamide gel, mixed thoroughly and dried in a current of air until the smell of the solvent disappears. The resulting immunosorbent is used to release drugs to the Musker rickettsi, Pr and m e p 4. Preparation of an immunosorbent for the isolation of pure antibodies to rickettsi of Siberia. As a starting material for obtaining a phospholipid antigen, K-1 infected tissue of Siberia was used as a source of phospholipid antigen. nki and peritoneum of white mice infected intraperitoneally. Before infection, white mice weighing g (for -5 h) were given intramuscular hydrocortisone 2.5 mg per MOUSE. Accumulator accumulation cont. Rolling microscopy of smears, prints, stained by Romanovsky Giemsa. In the experience of using material with the cross accumulation of the exciter. Removing the antigen is carried out according to the NW method. The obtained antigen is dissolved in chloroform at the rate of 1 ml for organs from a single white mouse. The subsequent stages will be received. Neither immunosorbent was carried out as indicated in Example 1. Pr and Mer 5. Preparation of immunosorbent for isolating sheep that are clean of the pathogen enzootic abortion. The starting material for the extraction of phospholipid antigen is the yolk membranes of chicken embryos infected with the pathogen of enzootic abortion of the EAE strain. The titer of the pathogen must be at least 10 LDso (0.2 ml when infected in the yolk sac). Isolation of the antigen and preparation of the immunosorbent are carried out as indicated in Example 1, p the rm 6. Production of immunosorbent for the isolation of pure antibodies to the causative agent of venereal lymphogranuloma. To obtain the phospholipid ant gene, the yolk shells of developing chicken embryos infected with the pathogen of venereal lymphogranuloma strain LGV are used. The titer of the exciter in the initial suspension should be 10 u. (0.25 ml when introduced into the yolk sac), then the processing of the material and obtaining the immunosorbent should be carried out as indicated in example 1. EXAMPLE 7. Preparation of immunophilic sorbent on the basis of sepharose B. for isolation of antibodies to R. prowafzektii. A phospholipid antigen is prepared from yolk culture of Provacalec rickettsia (method of Example 1). The resulting antigen is dissolved in chloroform at the rate of 1 ml per 1 yolk mixture. The dissolved antigen is mixed with a equal volume of 0.5 solution of polymethyl methacrylate chips in chlorine form. The prepared mixture is combined with an equal volume of Sepharose kB (Pharinacia complex). defatted with chloroform ... The mixture is thoroughly mixed and dried in a stream of air until the complete disappearance of the smell of the solvent. The preparation of the immunosorbent is carried out at 18-22 ° C. EXAMPLE 8 Preparation of the immunosorbent based on sepharose kB for the isolation of antibodies to Ch. psittacl. From the yolk culture of the ornithosis pathogen, the phospholipid antigen is prepared in the same way. The resulting antigen is dissolved in chloroform at the rate of 1 ml per 1 yolk sac. The remaining operations are performed by the CIM in the same manner as in Example 1. EXAMPLE 9. Preparation of soluble starch-based immunosorbent (GOST 10b3-b2, Reahim) for the isolation of antibodies to R. prowazeku. . From the yolk culture of Provachek Rickettsia, a phospholipid antigen was prepared (in the same way). The resulting antigen is dissolved in chloroform at the rate of 1 ml per 1. Gel bag. The dissolved antigen is mixed with an equal volume of 0, i)% solution of small chips of polymethyl methacrylate in chloroform. The mixture is combined with an equal volume of soluble starch, previously defatted with chloroform. The resulting mixture is thoroughly mixed and dried in a stream of air until the odor of the solvent has completely disappeared. All of the above operations were carried out at 18-22e, Example 10: Preparation of soluble starch-based immunosorbent (GOST 1063-62. Reakhim) to isolate antibodies to Ch. psittaci. All operations are carried out in a similar way with the only difference that they work with the phospholipid antigen of the ornithosis pathogen. To extract specific antibodies, the appropriate immunosorbent is suspended in physiological saline pH 7.0 and the column is filled. Subsequent phases of the work outlined earlier (example 2). Table 2 shows the results of a comparative use of immunosorbents prepared on the basis of various inert carriers for the isolation of antibodies to Provachek ricketsi and chlamydia ornithosis.

Полиакриламидный гель К риккетси м ПровачекаPolyacrylamide gel K rickettsi m Provachek

К хламиди м орнитозаTo Chlamydi m ornithosis

ЦвCV

К риккетси м ПровачекаTo Ricchetsi m Provachek

К хламиди м орнитозаTo Chlamydi m ornithosis

растК риккетси мrast rickettsi m

, Таким образом все приготовленные иммуносорбенты отличакзтс  достаточно высокой специфической активностью .Thus, all the prepared immunosorbents are different from a sufficiently high specific activity.

ИммуносорбентImmunosorbent

Иммуносорбент дл  выделени  антител к риккетси м Провач Известный способ Предлагаемый - Иммуносорбент дл  выделени  антител к возбудителю орнит Известный способ Предлагаемый - Иммуносорбент дл  выделени  тел к риккетси м Музера Известный способ Предлагаемый - Иммуносорбент дл  выделени  тел к риккетси м Сибирика Известный способ Предлагаемый.-МИммуносорбент дл  выделени  тел к возбудителю энзоотиче аборта овец Известный способ Предлагаемый a б л и ц a 2Immunosorbent for the isolation of antibodies to rickettsi Provach. Known method The proposed method is Immunosorbent for the isolation of antibodies to the pathogen ornit. Known method. Offered method: Immunosorbent for the isolation of bodies to Musker ricketsi. The known method. Isolation of bodies to the pathogen enzootic abortion of sheep. Known method. Proposed a b l and c a 2

820820

32,1 51632.1 516

30,7 37. 536,8 31,930.7 37. 536.8 31.9

Сравнительные данные по стабильности получаемых иммуносорбентов (носитель - полиакриламидный гель) приведны в табл. 3.Comparative data on the stability of the resulting immunosorbents (carrier - polyacrylamide gel) are given in table. 3

ТаблицаЗTable3

Кратность использовани Frequency of use

12 5112 51

1313

9 «79 “7

99

16 5316 53

31007676,031007676.0

В табл. k приведены результаты кетси м и хламиди м орнитоза в сравмногократного применени  иммуносор- . нении с иммуносорбентами, полученны бантов дл  выделени  антител к рик- ми известным способом.In tab. k shows the results of ketsy m and chlamydia m ornithosis in a comparable application of immunosorbide. with immunosorbents, bows for isolating antibodies to riks in a known manner.

Т а б л и ц а 4T a b l and c a 4

Claims (3)

Translated fromRussian

1. СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ ИММУНОСОРБЕНТА пУтём· связывания антигена с носителем, о т л и ч а ю щи й с я тем, что, с целью повышения стабильности ,. в качестве антигена используют'фосфолипидный антиген и связывание осуществляют обработкой носителя смесью раствора антигена в хлОро форме и 0,5+0,01% раствора полиметилметакрилата в хлороформе при объемном соотношении носителя и указанной смеси 1:1 с последующим высушиванием полученного продукта.1. METHOD FOR PRODUCING AN IMMUNOSORBENT BY · Binding an antigen to a carrier, which is related to the fact that, in order to increase stability,. The phospholipid antigen is used as antigen, and the binding is carried out by treating the support with a mixture of a solution of antigen in chloro form and a 0.5 + 0.01% solution of polymethyl methacrylate in chloroform with a volume ratio of the support and said mixture of 1: 1, followed by drying of the obtained product.2. Способ по π. 1, от л и ч а ющ и й с я тем, что используют фосфолипидные антигены риккетсий или хламидий.2. The method according to π. 1, excluding the fact that phospholipid antigens of rickettsia or chlamydia are used.3. Способ по π. 1, о т л и ч а ющ и й с я тем, что в качестве носителя используют полиакриламидный гель или растворимый крахмал, или сефарозу 4В.3. The method according to π. 1, with the fact that polyacrylamide gel or soluble starch, or Sepharose 4B, are used as a carrier.SU „„1007676SU „„ 1007676