“467 160 lO 15 20 25 30 35 2 idag normalt ej används. Stärkelse från sådan gentekniskt förändrad potatis har stor potential som livsmedelstill- sats, eftersom den inte genomgått någon kemisk modifie- ringsprocess. “467 160 lO 15 20 25 30 35 2 today not normally used. Starch from such genetically modified potatoes has great potential as a food additive, as it has not undergone any chemical modification process.
Stärkelsesyntes Syntesen av stärkelse och regleringen därav studeras för närvarande med stort intresse, både på grundforsk- ningsnivå och med tanke på industriell tillämpning. Fastän man känner till mycket om vissa enzymers medverkan i om- vandlingen av sackaros till stärkelse, är stärkelsens bio- syntes ännu inte klarlagd. Genom undersökning av framför- allt majs har man dock kunnat klarlägga en del av syntes- vägarna och de enzymer som deltar i dessa reaktioner. De viktigaste stärkelsesyntetiserande enzymerna för uppbygg- nad av stärkelsekornen är stärkelsesyntas och "branching enzyme". I majs har man hittills påvisat och studerat tre former av stärkelsesyntas, varav två är lösliga och en är olösligt associerad till stärkelsekornen. Även "branching enzyme" i majs består av tre former, vilka troligen kodas av tre olika gener.Starch synthesis The synthesis of starch and its regulation is currently being studied with great interest, both at the basic research level and with a view to industrial application. Although much is known about the involvement of certain enzymes in the conversion of sucrose to starch, the biosynthesis of starch is not yet clear. Through research on maize in particular, however, it has been possible to clarify some of the synthetic pathways and the enzymes that participate in these reactions. The most important starch synthesizing enzymes for building starch grains are starch synthesis and branching enzymes. In maize, three forms of starch synthesis have so far been detected and studied, two of which are soluble and one is insoluble associated with the starch grains. The "branching enzyme" in maize also consists of three forms, which are probably encoded by three different genes.
"Branching enzyme" i olika växtslag Stärkelsekornen innehåller en blandning av linjära och förgrenade molekyler, vilka bildar stärkelsekomponen- terna amylos respektive amylopektin. Amylopektin produce- ras genom en interaktion mellan stärkelsesyntas och "branching enzyme", alfa-l,4-glukan;alfa-l,4-glukan-6-glu- kosyltransferas (EC 2.4.l.l8). "Branching enzyme" (BE) hydrolyserar alfa-1,4-bindningar och syntetiserar alfa- -1,6-bindningar (Mac Donald & Preiss, 1985; Preiss, 1988).Branching enzyme in different plant species The starch grains contain a mixture of linear and branched molecules, which form the starch components amylose and amylopectin, respectively. Amylopectin is produced by an interaction between starch synthase and branching enzyme, alpha-1,4-glucan, alpha-1,4-glucan-6-glucosyltransferase (EC 2.4.1.18). Branching enzyme (BE) hydrolyzes alpha-1,4 bonds and synthesizes alpha-1,6 bonds (Mac Donald & Preiss, 1985; Preiss, 1988).
Endosperm av normalmajs innehåller tre former av BE- -protein, betecknade BE I, BE IIa samt BE IIb. Mutationen "amylosextender" (ae) inhiberar aktiviteten av enzymet BE Ilb, vilket resulterar i ett reducerat innehåll av amylo- pektin och en motsvarande ökning av halten amylos. ae-en- dosperm har därmed ett annat förhållande mellan amylos och amylopektin än normal majs, nämligen 65:35 i stället för 25:75 (De Vries Kuranda, 1987). 10 15 20 25 30 35 467 160 3 Fastän likheterna mellan de tre enzymformerna är sto- ra har de var för sig egenskaper i sin primära struktur som gör dem unika. Generna för respektive enzymform har hittills inte identifierats, men genom isolering av cDNA- -kloner för varje BE-form kan respektive gen med stor san- nolikhet karaktäriseras.Endosperm of normal maize contains three forms of BE- protein, designated BE I, BE IIa and BE IIb. The mutation "amylose extender" (ae) inhibits the activity of the enzyme BE IIb, which results in a reduced content of amylopectin and a corresponding increase in the amylose content. ae-endosperm thus has a different ratio of amylose to amylopectin than normal maize, namely 65:35 instead of 25:75 (De Vries Kuranda, 1987). 10 15 20 25 30 35 467 160 3 Although the similarities between the three enzyme forms are great, they each have properties in their primary structure that make them unique. The genes for each enzyme form have not been identified so far, but by isolating cDNA clones for each BE form, the respective gene can with high probability be characterized.
I ärt av normaltyp har man identifierat två former av "branching enzyme" (BE). En mutation i r-locus, som medför en skrynklig ärt, påverkar aktiviteten av BE så att den ena enzymformen inhiberas. Detta resulterar i en förändrad stärkelsesammansättning med 30% amylopektin och 70% amylos jämfört med det omvända förhållandet i rund normal ärt (Smith, 1988).In normal-type peas, two forms of branching enzyme (BE) have been identified. A mutation in the r-locus, which causes a crumpled pea, affects the activity of BE so that one enzyme form is inhibited. This results in an altered starch composition with 30% amylopectin and 70% amylose compared to the inverse ratio of round normal pea (Smith, 1988).
"Branching enzyme" (BE) i potatis är ett monomert protein, dvs det består av en enda enzymform. Molekylvik- ten för potatis-BE varierar mellan 79 och 103 kD beroende på vilket reningsförfarande som används. Det finns indika- tioner på att potatis-BE skulle bestå av flera former, men antagligen är flera av formerna nedbrytningsprodukter fràn det egentliga proteinet (Vos-Scheperkeuter, 1989; Blennow & Johansson, 1990)."Branching enzyme" (BE) in potatoes is a monomeric protein, ie it consists of a single enzyme form. The molecular weight of potato BE varies between 79 and 103 kD depending on the purification procedure used. There are indications that potato BE would consist of several forms, but probably several of the forms are degradation products of the actual protein (Vos-Scheperkeuter, 1989; Blennow & Johansson, 1990).
Peptidsekvensering av tre BE-former, separerade med elektrofores, visar så stor homologi mellan enzymformerna att dessa antas ha samma ursprung. Serologiska test stöder detta antagande, eftersom antisera fràn de tre enzymfor- merna korsreagerar med varandra.Peptide sequencing of three BE forms, separated by electrophoresis, shows such great homology between the enzyme forms that they are believed to have the same origin. Serological tests support this assumption, since antisera from the three enzyme forms cross-react with each other.
Inhiberingfav "branching enzyme" Genom att inhibera någon av formerna av "branching enzyme" i majs och ärt kan stärkelsesammansättningen änd- ras så att halten av amylos kraftigt ökar på bekostnad av amylopektinproduktionen.Inhibition of "branching enzyme" By inhibiting any of the forms of "branching enzyme" in maize and peas, the starch composition can be changed so that the content of amylose increases sharply at the expense of amylopectin production.
I potatis har man hittills inte funnit någon naturlig genotyp med ett förhöjd innehåll av amylos. Det är dock möjligt att i varierande grad reducera innehållet av BE, vilket resulterar i att stärkelsen i potatisknölen har förhöjda halter av amylos i jämförelse med vanlig potatis. \4e7 160 10 15 20 25 30 35 4 Reduktionen av bildning av enzym kan åstadkommas pá flera sätt, t ex genom: - mutagenbehandling, vilket medför en förändring av gen- sekvensen som kodar för bildningen av enzymet - införlivande av en transposon i gensekvensen som kodar för enzymet - genteknisk modifiering så att uttrycket av genen som ko- dar för enzymet modifieras genom s k antisens-geninhibe- ring.To date, no natural genotype with an increased content of amylose has been found in potatoes. However, it is possible to reduce the content of BE to varying degrees, which results in the starch in the potato tuber having elevated levels of amylose compared to ordinary potatoes. The reduction of enzyme formation can be achieved in several ways, for example by: mutagenic treatment, which results in a change in the gene sequence encoding the formation of the enzyme - incorporation of a transposon into the gene sequence which encodes the enzyme - genetic engineering modification so that the expression of the gene encoding the enzyme is modified by so-called antisense gene inhibition.
I fig 1 visas ett specifikt undertryckande av normal genexpression genom att en komplementär antisens-nukleotid får hybridisera med mRNA för en målgen. Antisens-nukleoti- den är således antisens-RNA, som transkriberas in vivo från en "omvänd" gensekvens (Izant, 1989).Figure 1 shows a specific suppression of normal gene expression by allowing a complementary antisense nucleotide to hybridize to mRNA for a target gene. Thus, the antisense nucleotide is antisense RNA that is transcribed in vivo from a "reverse" gene sequence (Izant, 1989).
Genom användning av antisens-teknik har olika gen- funktioner i växter inhiberats. Antisens-konstruktionen för chalkon-syntas, polygalakturonas och fosfinotricin- -acetyltransferas har använts för att inhibera motsvarande enzym i växtslagen petunia, tomat respektive tobak (Van der Krol et al, 1990; Sheehy et al, 1988; Cornelissen, 1989). Ändamålet med uppfinningen är att åstadkomma en i olika grad ökad amylosproduktion i potatisknöl genom an- vändning av antisens-gen-inhibering.Through the use of antisense technology, various gene functions in plants have been inhibited. The antisense construct of chalcone synthase, polygalacturonase and phosphinothricin acetyltransferase has been used to inhibit the corresponding enzymes in the plant species petunia, tomato and tobacco respectively (Van der Krol et al, 1990; Sheehy et al, 1988; Cornelissen, 1989). The object of the invention is to achieve a varying degree of increased amylose production in potato tubers through the use of antisense gene inhibition.
Sammanfattning av uppfinningen Enligt uppfinningen inhiberas i varierande grad funk- tionen av BE-genen och därmed amylopektinproduktionen i potatis genom användning av nya antisens-konstruktioner.Summary of the Invention According to the invention, the function of the BE gene and thus the amylopectin production in potatoes is inhibited to varying degrees through the use of new antisense constructs.
Antisens-konstruktionerna enligt uppfinningen omfattar en knölspecifik promotor, transkriptionsstart samt första exon av genen som kodar för bildning av "branching enzyme" (BE-genen) i potatis, insatt i antisens-riktning.The antisense constructs of the invention comprise a tuber-specific promoter, transcription initiation and first exon of the gene encoding the formation of branching enzyme (BE gene) in potatoes, inserted in the antisense direction.
Uppfinningen omfattar även en gen som kodar för bild- ning av "branching enzyme" i potatis, den s k BE-genen.The invention also comprises a gene which codes for the formation of "branching enzyme" in potatoes, the so-called BE gene.
Uppfinningen omfattar likaså vektorer, vilka inbegri- per antisens-konstruktionerna enligt uppfinningen. lO 15 20 25 30 35 467 160 5 I ytterligare aspekter av uppfinningen omfattar denna celler, plantor, knölar, mikroknölar respektive frön, vil- kas genom innehåller antisens-konstruktionerna enligt upp- finningen.The invention also encompasses vectors which include the antisense constructs of the invention. In further aspects of the invention, it comprises cells, plants, tubers, microtubers and seeds, respectively, the genome of which contains the antisense constructs of the invention.
I ytterligare andra aspekter omfattar uppfinningen stärkelse av amylostyp, både nativ och derivatiserad.In still other aspects, the invention encompasses amylose-type starch, both native and derivatized.
Slutligen omfattar uppfinningen ett förfarande för undertryckande av bildning av stärkelse av amylopektintyp i potatis, varigenom potatisknölarna bildar i varierande grad ökad andel stärkelse av amylostyp.Finally, the invention comprises a process for suppressing the formation of amylopectin-type starch in potatoes, whereby the potato tubers form to varying degrees an increased proportion of amyl-type starch.
Uppfinningen beskrivs närmare med hjälp av bifogade figurer, vari fig 1 visar principen för antisens-geninhibering; fig 2 visar antisens-konstruktioner enligt uppfin- ningen (enligt Bevan, 1984).The invention is described in more detail with the aid of the accompanying figures, in which Fig. 1 shows the principle of antisense gene inhibition; Fig. 2 shows antisense constructions according to the invention (according to Bevan, 1984).
Dessutom visas sekvensen för en knölspecifik promotor i SEQ ID nr 1.In addition, the sequence of a tuber-specific promoter is shown in SEQ ID NO: 1.
Isolering_av genomisk BE-gen i potatis Utgående från en känd peptidsekvens från BE-genen i potatis framställs två syntetiska oligonukleotider som överlappar varandra. Oligonukleotiderna (producerade vid Institutet för cellbiologi, Uppsala, Sverige, på uppdrag av sökanden) används för identifiering av cDNA-kloner från ett cDNA-bibliotek i lambda gt ll (framställt för sökan- dens räkning av Clontech, USA). Dessa cDNA-kloner utnytt- jas för isolering av den genomiska BE-genen från ett geno- miskt bibliotek i EMBL 3 (framställt för sökande av Clon- tech, USA).Isolation of genomic BE gene in potatoes Based on a known peptide sequence from the BE gene in potatoes, two synthetic oligonucleotides are produced which overlap. The oligonucleotides (produced at the Institute of Cell Biology, Uppsala, Sweden, on behalf of the applicant) are used to identify cDNA clones from a cDNA library in lambda gt ll (produced on behalf of the applicant by Clontech, USA). These cDNA clones are used to isolate the genomic BE gene from a genomic library in EMBL 3 (manufactured for search by Clontech, USA).
Antisens-konstruktioner En varierande förhöjning av amyloshalten i potatis- knölar eftersträvas, varför olika typer av antisens-gener konstrueras, vilka mer eller mindre inhiberar uttrycket av BE-genen in vivo. Man utgår från den isolerade genomiska BE-genen, varigenom antisens-konstruktionerna omfattar delar av BE-genen motsvarande sekvenser i regionen kring promotor, transkriptionsstart samt första exon.Antisense constructs A varying increase in the amylose content of potato tubers is sought, so different types of antisense genes are constructed which more or less inhibit the expression of the BE gene in vivo. It is based on the isolated genomic BE gene, whereby the antisense constructs comprise parts of the BE gene corresponding sequences in the region around promoter, transcription start and first exon.
För att uppnå såväl variation i amyloshalt som väv- 4e7 160 10 15 20 25 30' 35 6 nadsspecificitet, dvs produktionen av amylopektin skall reduceras enbart i potatisknölen, kopplas olika knölspeci- fika promotorer till antisens-genen. Förutom den egna BE- -promotorn används följande promotorer i olika kombinatio- ner: 35S CaMV, patatin I (erhàllen från Dr. M. Bevan, Eng-, land) samt potatis-GBSS-promotorn.In order to achieve both variation in amylose content and tissue specificity, ie the production of amylopectin should be reduced only in the potato tuber, various tuber-specific promoters are linked to the antisense gene. In addition to its own BE promoter, the following promoters are used in various combinations: 35S CaMV, patatin I (obtained from Dr. M. Bevan, Eng-, land) and the potato GBSS promoter.
Isolering och karaktärisering av potatis-GBSS-promo- torn är beskriven i den samtidigt inlämnade patentansökan med titeln "Genteknisk förändring av potatis för bildning av stärkelse av amylopektintyp" av föreliggande sökande och dess nukleotidsekvens framgår av SEQ ID nr 1. GBSS- -promotorn ingår i den potatisgen som kodar för bildning av stärkelsekornbundet stärkelsesyntas (granule bound starch synthase). Det är detta enzym som huvudsakligen är ansvarigt för bildningen av amylos i potatis.Isolation and characterization of the potato GBSS promoter is described in the co-pending patent application entitled "Genetic engineering modification of potatoes to form amylopectin-type starch" by the present applicant and its nucleotide sequence is set forth in SEQ ID NO: 1. The GBSS promoter is included. in the potato gene encoding the formation of granule bound starch synthase. It is this enzyme that is mainly responsible for the formation of amylose in potatoes.
De binära Ti-plasmiderna pBI 121 och pBI 101 (till- handahàllna av Clontech, USA) ligger till grund för samt- liga genkonstruktioner (fig 2), vilket betyder att NPT-II och GUS-genen utgör selektionsmarkörer. GUS-genen är den gen som kodar för beta-glukuronidas.The binary Ti plasmids pBI 121 and pBI 101 (supplied by Clontech, USA) form the basis of all gene constructs (Fig. 2), which means that the NPT-II and GUS genes are selection markers. The GUS gene is the gene encoding beta-glucuronidase.
Transformation Antisens-konstruktionerna överförs till bakterier, lämpligen medelst "frys-upptinings"-metoden (An et al, 1988). Överföringen av den rekombinanta bakterien till potatisvävnad sker genom inkubation av potatisvävnanden med den rekombinanta bakterien i lämpligt medium efter det att någon form av skada tillförts potatisvävnaden. Under inkuberingen går T-DNA från bakterien in i värdväxtens DNA. Efter inkuberingen dödas bakterierna och potatisväv- naden överförs på fast medium för kallusinduktion och in- kuberas för kallustillväxt.Transformation The antisense constructs are transferred to bacteria, preferably by the "freeze-thaw" method (An et al, 1988). The transfer of the recombinant bacterium to potato tissue takes place by incubating potato tissues with the recombinant bacterium in a suitable medium after some form of damage has been added to the potato tissue. During the incubation, T-DNA from the bacterium enters the DNA of the host plant. After the incubation, the bacteria are killed and the potato tissue is transferred to a solid medium for callus induction and incubated for callus growth.
Efter lämpliga passager genom ytterligare medier bil- das skott, vilka skärs bort från potatisvävnaden.After suitable passages through additional media, shoots are formed, which are cut away from the potato tissue.
Som en första kontroll av att antisens-konstruktio- nerna har överförts till potatisvävnaden analyseras denna med avseende på närvaron av den använda markören. 10 15 20 25 30 35 467 160 7 Ytterligare kontroller för test av antisens-konstruk- tionernas expression samt överföring till potatisgenomet utförs med exempelvis southern och northern hybridisering (Maniatis et al (1982)). Antalet kopior av antisens-konst- ruktionen som överförts bestäms med southern hybridise- ring. I Kontrollen av expressionen pà proteinnivà utförs lämpligen pà mikroknölar inducerade in vitro pá de trans- formerade skotten för att man så snabbt som möjligt skall kunna genomföra kontrollen.As a first check that the antisense constructs have been transferred to the potato tissue, it is analyzed for the presence of the marker used. Additional controls for testing the expression of antisense constructs and transfer to the potato genome are performed by, for example, southern and northern hybridization (Maniatis et al (1982)). The number of copies of the antisense construct transferred is determined by southern hybridization. In the control of the expression at the protein level, it is suitably carried out on microbubbles induced in vitro on the transformed shoots in order to be able to carry out the control as quickly as possible.
Karaktärisering av stärkelsen Stärkelsesammansättningen i mikroknölar är identisk- med den i vanliga potatisknölar och därför kan antisens- -konstruktionernas inverkan pà amylopektinproduktionen undersökas i mikroknölar. Förhållandet mellan amylos och amylopektin kan bestämmas med en spektrofotometrisk metod (t ex enligt Hovenkamp-Hermelink et al, 1988).Characterization of the starch The starch composition in microtubers is identical to that in ordinary potato tubers and therefore the effect of antisense constructs on amylopectin production can be investigated in microtubers. The ratio of amylose to amylopectin can be determined by a spectrophotometric method (eg according to Hovenkamp-Hermelink et al, 1988).
Utvinning av amylos ur amylospotatis Amylos utvinns ur den s k amylospotatisen (potatis vari bildningen av amylopektin har undertryckts i varie- rande grad genom införandet av antisens-konstruktionerna enligt uppfinningen) på känt sätt.Extraction of amylose from amylospotates Amylose is extracted from the so-called amylospotates (potatoes in which the formation of amylopectin has been suppressed to varying degrees by the introduction of the antisense constructs according to the invention) in a known manner.
Derivatisering av amylos Beroende på amylosets slutliga användning kan dess fysikaliska och kemiska egenskaper förändras genom deri- vatisering. Med derivatisering avses här såväl kemisk som fysikalisk och enzymatisk behandling samt kombinationer av dessa (Modified starches).Derivatization of amylose Depending on the end use of the amylose, its physical and chemical properties may change through derivatization. Derivatization here refers to both chemical, physical and enzymatic treatment and combinations of these (Modified starches).
Den kemiska derivatiseringen, dvs kemisk förändring av amyloset, kan ske pà olika sätt, exempelvis genom oxi- dation, syrahydrolys, dextrinisering, olika former av för- etring, t ex katjonisering, hydroxipropylering och hyd- roxietyleing, olika former av förestring, t ex med vinyl- acetat, ättiksyraanhydrid, eller genom monofosfatering, difosfatering och oktenylsuccinering, samt kombinationer av dessa. "4e7 160 10 15 20 25 30 35 8 Fysikalisk förändring av amyloset kan exempelvis åstadkommas genom valstorkning eller extrudering.The chemical derivatization, ie chemical change of the amylose, can take place in different ways, for example by oxidation, acid hydrolysis, dextrinization, various forms of etherification, eg cationization, hydroxypropylation and hydroxyethylene, various forms of esterification, e.g. with vinyl acetate, acetic anhydride, or by monophosphating, diphosphating and octenyl succinating, and combinations thereof. Physical alteration of the amylose can be accomplished, for example, by roll drying or extrusion.
Vid enzymatisk derivatisering utförs en nedbrytning (minskning av viskositeten) och kemisk modifiering av amy- loset med hjälp av förekommande enzymatiska system.In enzymatic derivatization, a degradation (reduction of viscosity) and chemical modification of the amylose is carried out using existing enzymatic systems.
Derivatiseringen genomförs vid olika temperaturer, allt efter vilken slutprodukt som man önskar framställa.The derivatization is carried out at different temperatures, depending on which end product it is desired to produce.
Det vanliga temperaturomràdet som man arbetar inom är 20-45°C, men temperaturer upp till l80°C kan användas.The usual temperature range within which to work is 20-45 ° C, but temperatures up to 180 ° C can be used.
Uppfinningen beskrivs närmare i följande exempel.The invention is described in more detail in the following examples.
Exempel 1 Framställning av mikroknölar med insatta antisens-konst- ruktioner enligt uppfinningen Antisens-konstruktionerna (se fig 2) överförs till Agrobacterium tumefaciens stam LBA 4404 med hjälp av "frys-upptiningsmetoden" (An et al, 1988). Överföringen till potatisvävnad utförs enligt ett modifierat protokoll från Rocha-Sosa et al (1989).Example 1 Preparation of microtubers with inserted antisense constructs according to the invention The antisense constructs (see Fig. 2) are transferred to Agrobacterium tumefaciens strain LBA 4404 using the "freeze-thaw method" (An et al, 1988). The transfer to potato tissue is performed according to a modified protocol from Rocha-Sosa et al (1989).
Bladdiskar från potatisplantor odlade in vitro inku- beras i mörker pà flytande MS-medium (Murashige & Skoog, 1962) med 3% sackaros och 0,5% MES tillsammans med 100 pl av en suspension av rekombinant Agrobacterium per 10 ml medium i två dygn. Efter dessa två dygn dödas bakterierna.Leaf disks from potato plants grown in vitro are incubated in the dark on liquid MS medium (Murashige & Skoog, 1962) with 3% sucrose and 0.5% MES together with 100 μl of a recombinant Agrobacterium suspension per 10 ml medium for two days . After these two days, the bacteria are killed.
Bladdiskarna överförs pà fast medium för kallusinduktion och inkuberas i 4-6 veckor beroende på kallustillväxt. Det fasta mediet har följande sammansättning: MS + 3% sackaros 2 mg/l zeatinribosid 0,02 mg/l "NAA" 0,02 mg/l "GA3“ 500 mg/l "Claforan" 50 mg/l kanamycin 0,25% “Gellan" Härefter överförs bladdiskarna till ett medium med annan hormonsammansättning, vilket medium omfattar: 10 15 20 25 30 35 467 160 MS + 3% sackaros 5 mg/l "NAA" 0,1 mg/1 "BAP" 500 mg/l “Claforan" 50 mg/1 kanamycin 0,25% "Gellan" Bladdiskarna förvaras på detta medium i ca 4 veckor, varefter de överförs till ett medium där "Claforan"-kon- centrationen reducerats till 250 mg/1. Om det behövs flyt- tas bladdiskarna därefter till färskt medium var 4:e till 5:e vecka. Efter skottbildning skärs skotten bort frán bladdiskarna och överförs till ett identiskt medium.The leaf disks are transferred to solid medium for callus induction and incubated for 4-6 weeks depending on callus growth. The solid medium has the following composition: MS + 3% sucrose 2 mg / l zeatin riboside 0.02 mg / l "NAA" 0.02 mg / l "GA3" 500 mg / l "Claforan" 50 mg / l kanamycin 0.25 % "Gellan" Thereafter, the leaf disks are transferred to a medium with a different hormone composition, which medium comprises: 10 15 20 25 30 35 467 160 MS + 3% sucrose 5 mg / l "NAA" 0.1 mg / l "BAP" 500 mg / l "Claforan" 50 mg / l kanamycin 0.25% "Gellan" The leaf disks are stored on this medium for about 4 weeks, after which they are transferred to a medium where the "Claforan" concentration has been reduced to 250 mg / l. the leaf discs are then moved to fresh medium every 4 to 5 weeks, and after shoot formation, the shoots are cut away from the leaf discs and transferred to an identical medium.
Att antisens-konstruktionen har överförts till blad- diskarna kontrolleras först genom analys av närvaron av GUS-genen. Bladextrakt från de regenererade skotten ana- lyseras med avseende pá glukuronidasaktivitet med de substrat som beskrivits av Jefferson et al (1987). Aktivi- teten påvisas genom visuell bedömning.The fact that the antisense construct has been transferred to the leaf discs is first checked by analysis of the presence of the GUS gene. Leaf extracts from the regenerated shoots are analyzed for glucuronidase activity with the substrates described by Jefferson et al (1987). The activity is demonstrated by visual assessment.
Ytterligare kontroller av antisens-konstruktionernas expression samt överföring därav till potatisgenomet ut- förs med southern och northern hybridisering enligt Mania- tis et al (1982). Antalet kopior av antisens-konstruktio- nerna som överförts bestäms med southern hybridisering.Additional controls of the expression of the antisense constructs and their transfer to the potato genome are performed by southern and northern hybridization according to Manatis et al (1982). The number of copies of the antisense constructs transferred is determined by southern hybridization.
När det konstaterats att antisens-konstruktionerna överförts till och uttryckts i potatisgenomet vidtar kont- rollen av expressionen pá proteinnivà. För att inte behöva vänta på utvecklingen av en fullständig potatisplanta med potatisknölar utförs kontrollen på mikroknölar som induce- rats in vitro pà de transformerade skotten.Once it has been established that the antisense constructs have been transferred to and expressed in the potato genome, control of expression takes place at the protein level. In order not to have to wait for the development of a complete potato plant with potato tubers, the control is performed on micro-tubers induced in vitro on the transformed shoots.
Stambitar av potatisskotten klipps av vid noderna och placeras pà modifierat MS-medium. Där bildar de mikroknö- lar efter 2-3 veckor vid inkubering i mörker vid 19°C (Bourque et al, 1987). Mediet har följande sammansättning: MS + 6% sackaros 2,5 mg/l kinetin 2,5 mg/l "Gellan" “4e7 1eo 10 15 20 25 30 35 10 Antisens-konstruktionernas inverkan på BE-genens funktion med avseende på BE-proteinets aktivitet analy- seras med hjälp av elektrofores pá polyakrylamidgel (Hovenkamp-Hermelink et al, 1987). Stärkelse utvinns ur mikroknölarna och analyseras med avseende på närvaron av fm BE-proteinet.Stem pieces of the potato shoots are cut off at the nodes and placed on modified MS medium. There they form microbubbles after 2-3 weeks when incubated in the dark at 19 ° C (Bourque et al, 1987). The medium has the following composition: MS + 6% sucrose 2.5 mg / l kinetin 2.5 mg / l "Gellan" "4e7 1eo 10 15 20 25 30 35 10 The effect of antisense constructs on the function of the BE gene with respect to BE the activity of the protein is analyzed by electrophoresis on polyacrylamide gel (Hovenkamp-Hermelink et al, 1987). Starch is extracted from the microspheres and analyzed for the presence of the fm BE protein.
Stärkelsesammansättningen, dvs förhållandet mellan amylos och amylopektin, bestäms med en spektrofotometrisk metod enligt Hovenkamp-Hermelink et al (1988), varvid hal- ten av respektive stärkelsekomponent bestäms utifrån en standardkurva.The starch composition, ie the ratio of amylose to amylopectin, is determined by a spectrophotometric method according to Hovenkamp-Hermelink et al (1988), the content of each starch component being determined from a standard curve.
Exempel 2 Utvinning av amylos ur amylospotatis Potatis, vars huvudsakliga stärkelsekomponent utgörs av amylos, här kallad amylospotatis, gentekniskt förändrad enligt uppfinningen, rivs så att stärkelsen friläggs från cellväggarna.Example 2 Extraction of amylose from amylospotates Potatoes, the main starch component of which consists of amylose, here referred to as amylospotates, genetically modified according to the invention, are shredded so that the starch is exposed from the cell walls.
Cellväggarna (fibrerna) avskiljs från fruktsaft och stärkelse i centrisiler. Fruktsaften avskiljs från stär- kelsen i två steg, nämligen först i hydrocykloner och där- efter i speciellt konstruerade vakuumbandfilter.The cell walls (fibers) are separated from the fruit juice and starch in centrisils. The fruit juice is separated from the starch in two steps, namely first in hydrocyclones and then in specially designed vacuum band filters.
Därefter utförs en slutraffinering i hydrocykloner, där resten av fruktsaften och fibrerna avskiljs.A final refining is then carried out in hydrocyclones, where the rest of the fruit juice and fibers are separated.
Produkten torkas i två steg, först genom en förtork- ning pà vakuumfilter och därefter en sluttorkning i varm- luftström.The product is dried in two steps, first by a pre-drying on a vacuum filter and then a final drying in hot air stream.
Exempel 3 Kemisk derivatisering av amylos Amylos uppslammas i vatten till en koncentration av 20-50%. pH-värdet justeras till 10,0-12,0 och en kvartär ammoniumförening tillsätts i en sådan mängd att slutpro- T av 0,004-0,2. Reaktions- temperaturen inställs till 20-45°C. Då reaktionen är klar É justeras pH-värdet till 4-8, varefter produkten tvättas och torkas. På detta sätt erhålles det katjoniska stärkel- sederivatet 2-hydroxi-3-trimetylammoniumpropyleter. dukten får en substitutionsgrad 10 15 20 25 30 35 467 160 ll Exempel 4 Kemisk derivatisering av amylos Amylos uppslammas i vatten till en vattenhalt av 10-25 vikt%. pH-värdet justeras till 10,0-12,0 och en kvartär ammoniumförening tillsätts i en sådan mängd att slutprodukten får en substitutionsgrad av 0,004-0,2. Reak- tionstemperaturen inställs pá 20-45°C. Då reaktionen är klar justeras pH-värdet till 4-8. Slutprodukten är 2-hyd- roxi-3-trimetylammoniumpropyleter.Example 3 Chemical derivatization of amylose Amylose is suspended in water to a concentration of 20-50%. The pH is adjusted to 10.0-12.0 and a quaternary ammonium compound is added in such an amount that the final product of 0.004-0.2. The reaction temperature is set to 20-45 ° C. When the reaction is complete É, the pH is adjusted to 4-8, after which the product is washed and dried. In this way, the cationic starch derivative 2-hydroxy-3-trimethylammonium propyl ether is obtained. The product is given a degree of substitution 10 15 20 25 30 35 467 160 ll Example 4 Chemical derivatization of amylose Amylose is suspended in water to a water content of 10-25% by weight. The pH is adjusted to 10.0-12.0 and a quaternary ammonium compound is added in such an amount that the final product has a degree of substitution of 0.004-0.2. The reaction temperature is set at 20-45 ° C. When the reaction is complete, the pH is adjusted to 4-8. The final product is 2-hydroxy-3-trimethylammonium propyl ether.
Exempel 5 Kemisk derivatisering av amylos Amylos uppslammas i vatten till en koncentration av. 20-50 vikt%. pH-värdet justeras till 5,0-12,0 och natrium- hypoklorit tillsätts så att slutprodukten får önskad vis- kositet. Reaktionstemperaturen inställs pà 20-45°C. Dá reaktionen är klar justeras pH-värdet till 4-8, varefter slutprodukten tvättas och torkas. På detta sätt erhålles oxiderad stärkelse.Example 5 Chemical derivatization of amylose Amylose is slurried in water to a concentration of. 20-50% by weight. The pH is adjusted to 5.0-12.0 and sodium hypochlorite is added so that the final product has the desired viscosity. The reaction temperature is set at 20-45 ° C. When the reaction is complete, the pH is adjusted to 4-8, after which the final product is washed and dried. In this way oxidized starch is obtained.
Exempel 6 Fysikalisk derivatisering av amylos Amylos uppslammas i vatten till en koncentration av 20-50 vikt%, varefter uppslamningen anbringas pá en upp- värmd vals, där den torkas till en film.Example 6 Physical derivatization of amylose Amylose is slurried in water to a concentration of 20-50% by weight, after which the slurry is applied to a heated roller, where it is dried to a film.
Exempel 7 Kemisk och fysikalisk derivatisering av amylos Amylos beandlas enligt de förfaranden som beskrivs i något av exemplen 3-5 för kemisk modifiering och behandlas därefter vidare enligt exempel 6 för fysikalisk derivati- sering. '4e7 160 10 15 20 25 30 35 12 Litteraturreferenser: Blennow, A. & Johansson;, G., 1990. Phytochemistry (in press) fi: De Vries Kuranda, K., 1987. Immunological characteriza- tion of normal and amylose-extender alleles of Zea mays L.: Effects on the starch branching enzymes.Example 7 Chemical and physical derivatization of amylose Amylose is treated according to the procedures described in any of Examples 3-5 for chemical modification and then further treated according to Example 6 for physical derivatization. '4e7 160 10 15 20 25 30 35 12 Literature references: Blennow, A. &Johansson;, G., 1990. Phytochemistry (in press) fi: De Vries Kuranda, K., 1987. Immunological characterization of normal and amylose- extender alleles of Zea mays L .: Effects on the starch branching enzymes.
Doktorsavhandling. The Pennsylvania State University.Doctoral dissertation. The Pennsylvania State University.
Mac Donald, F. D. & Preiss, J., 1985. Plant Physiol 78:849-852.Mac Donald, F. D. & Preiss, J., 1985. Plant Physiol 78: 849-852.
Preiss, J., 1988. In Biochemistry of Plants: 14 (Carbohydrates) Ed. J. Preiss, Academic Press; 181-254.Preiss, J., 1988. In Biochemistry of Plants: 14 (Carbohydrates) Ed. J. Preiss, Academic Press; 181-254.
Smith, A., 1988. Planta 175:270-279.Smith, A., 1988. Planta 175: 270-279.
Vos-Scheperkeuter, G. H., de Wit, J. G., Ponstein, A.Vos-Scheperkeuter, G. H., de Wit, J. G., Ponstein, A.
S., Feenstra, W. J. & Witholt, B., 1989. Plant Physiol 90:75-84. ' Cornelissen, M., 1989. Nucleic Acids Res l7(18):7203-7209.S., Feenstra, W. J. & Witholt, B., 1989. Plant Physiol 90: 75-84. 'Cornelissen, M., 1989. Nucleic Acids Res l7 (18): 7203-7209.
Izant, J. G., 1989. Cell Motility and Cytosceleton 14:81-91.Izant, J. G., 1989. Cell Motility and Cytosceleton 14: 81-91.
Sheehy, R. E., Kramer, M., Hiatt, W. R., 1988. Proc.Sheehy, R. E., Kramer, M., Hiatt, W. R., 1988. Proc.
Natl. Acad. Sci., USA, 85(23):8805-8809.Natl. Acad. Sci., USA, 85 (23): 8805-8809.
Van der Krol, A. R., Mur, L. A., de Lange,, P., Gerats, A. G. M., Mol, J. N. M. & Stuitje, A. R., 1990. Mol.Van der Krol, A. R., Mur, L. A., de Lange ,, P., Gerats, A. G. M., Mol, J. N. M. & Stuitje, A. R., 1990. Mol.
Gen. 220:204-212.Gene. 220: 204-212.
An, G., Ebert, P. R., Mitra, A. & Ha, S. B., 1988. Plant Mol Biol. Manual A3:l-19.An, G., Ebert, P. R., Mitra, A. & Ha, S. B., 1988. Plant Mol Biol. Manual A3: l-19.
Murashige, T. & Skoog, F., 1962. Physiol. Plant 15:473-497.Murashige, T. & Skoog, F., 1962. Physiol. Plant 15: 473-497.
Rocha-Sosa, M., Sonnewald, U., Frommer, W., Stratmann, M., Shell, J. & Willmitzer, L., 1989. EMBO J.Rocha-Sosa, M., Sonnewald, U., Frommer, W., Stratmann, M., Shell, J. & Willmitzer, L., 1989. EMBO J.
Genet. 8(l):23-29. Û Jefferson, R. A., Kavanagh, R. A. & Bevan, M. W., 1987.Genet. 8 (l): 23-29. In Jefferson, R. A., Kavanagh, R. A. & Bevan, M. W., 1987.
Emso J. s=s9ø1-ssøv. ° Maniatis, T., Fritsch, E. F. & Sambrock, J., 1982.Emso J. s = s9ø1-ssøv. ° Maniatis, T., Fritsch, E. F. & Sambrock, J., 1982.
Molecular Cloning. A Laboratory Handbook. Cold Spring Harbor Laboratory Press, Cold Spring Harbor.Molecular Cloning. A Laboratory Handbook. Cold Spring Harbor Laboratory Press, Cold Spring Harbor.
Bourque, J. E., Miller, J. C. & Park, W. D., 1987. In 5 10 15 20 25 30 35 467 160 13 Vitro Cellular & Development Biology_23(5):38l-386.Bourque, J. E., Miller, J. C. & Park, W. D., 1987. In 5 10 15 20 25 30 35 467 160 13 Vitro Cellular & Development Biology_23 (5): 38l-386.
- Hovenkamp-Hermelink, J. H. M., de Vries, J. N., Adamse, P., Jacobsen, E., Witholt, B. & Feenstra, W. J., 1988.- Hovenkamp-Hermelink, J. H. M., de Vries, J. N., Adamse, P., Jacobsen, E., Witholt, B. & Feenstra, W. J., 1988.
Potato Research 31:241-246.Potato Research 31: 241-246.
- Modified starches: Properties and use, D. B. Wurzburg.- Modified starches: Properties and use, D. B. Wurzburg.
- Bevan, M. W., 1984. Nucleic Acids Res. l2:87ll-8721.- Bevan, M. W., 1984. Nucleic Acids Res. l2: 87ll-8721.
A 67 160 SEQ 14 ID nr 1 Sekvenserad molekyl: genomiskt DNA Namn: Promotor till GBSS-genen fràn potatis Sekvenslängd: 629 bp AACCATCCTT ACTCAATCTT GTAATGTATT TCGTAAAAAA GGGGGAAGTA AGATATTATT GGAATGTCAA TAGGAGACAG GTGAATCAAC TAATACAGTG CTCTTGACAC CATTCTCACT TCTCCTCCAA CCTTTTAGCA AATACTAAAA CAACCTTTAG TTAGAAAATA ACTAATATTC TTTAATTACT GTGGTAGCGT AACCGGACGG AAAGAGAGGG TCCACAGTTG GTGTCACTGA CACTCACTCA TTATTTCTGA GTGTATCAAT TGCAACTTAA AATTGTGCAT TATTTACAGT TAGTGGAGGG ATAATAATAA AGGAGGGAGT CCCATTGCAA CCCATAATAC CCTTCTGCTA AACCTGCTAC CACAGCTCAA TTTCATGCA TTTGTAATAG TATAGGCTAA TCATAATTAG AATTTGGAAT AGGGACCAGT TTTAATTAAC TGGTTTAGTT GGCCAAGTTG TGTCGATGAG AGGGATAGCC AAATAAGGCA CAAGTGGTAA AACCATGCAT ACCAAGTAAA ATCTTGTTTG ACAAAGCTAA ACCAGTACCT ACGAGACATA TT T TAGATAC AAGTCCAGCC CATTTCCCTA ACCCGCTATT GGCACCTCCT CTTTTACTCA 50 100 150 200 250 300 350 400 450 500 550 600 629 'ru IxA 67160 SEQ 14 ID No. 1 Sequenced molecule: genomic DNA Name: Promoter for the GBSS gene from potato Sequence length: 629 bp AACCATCCTT ACTCAATCTT GTAATGTATT TCGTAAAAAA GGGGGAAGTA AGATATTATT GGAATGTCAA TAGGAGACAG GTGAATCAAC TAATACAGTG CTCTTGACAC CATTCTCACT TCTCCTCCAA CCTTTTAGCA AATACTAAAA CAACCTTTAG TTAGAAAATA ACTAATATTC TTTAATTACT GTGGTAGCGT AACCGGACGG AAAGAGAGGG TCCACAGTTG GTGTCACTGA CACTCACTCA TTATTTCTGA GTGTATCAAT TGCAACTTAA AATTGTGCAT TATTTACAGT TAGTGGAGGG ATAATAATAA AGGAGGGAGT CCCATTGCAA CCCATAATAC CCTTCTGCTA AACCTGCTAC CACAGCTCAA TTTCATGCA TTTGTAATAG TATAGGCTAA TCATAATTAG AATTTGGAAT AGGGACCAGT TTTAATTAAC TGGTTTAGTT GGCCAAGTTG TGTCGATGAG AGGGATAGCC AAATAAGGCA CAAGTGGTAA AACCATGCAT ACCAAGTAAA ATCTTGTTTG ACAAAGCTAA ACCAGTACCT ACGAGACATA TT T TAGATAC AAGTCCAGCC CATTTCCCTA ACCCGCTATT GGCACCTCCT CTTTTACTCA 50 100 150 200 250 300 350 400 450 500 550 600 629 'ru Ix
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| SE9004095ASE467160B (en) | 1990-12-21 | 1990-12-21 | GENETIC MODIFICATION OF POTATOIS BEFORE EDUCATION OF AMYLOST TYPE |
| PCT/SE1991/000891WO1992011375A1 (en) | 1990-12-21 | 1991-12-20 | Genetically engineered modification of potato to form amylose-type starch |
| AU91097/91AAU9109791A (en) | 1990-12-21 | 1991-12-20 | Genetically engineered modification of potato to form amylose-type starch |
| PL91299927APL169859B1 (en) | 1990-12-21 | 1991-12-20 | Method of inhibiting formation of amylopectin-type starch in potatoes |
| EP92901887AEP0563201A1 (en) | 1990-12-21 | 1991-12-20 | Genetically engineered modification of potato to form amylose-type starch |
| US08/471,965US5856467A (en) | 1990-12-21 | 1995-06-06 | Genetically engineered modification of potato to form amylose-type starch |
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| SE9004095ASE467160B (en) | 1990-12-21 | 1990-12-21 | GENETIC MODIFICATION OF POTATOIS BEFORE EDUCATION OF AMYLOST TYPE |
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| SE9004095D0 SE9004095D0 (en) | 1990-12-21 |
| SE9004095L SE9004095L (en) | 1992-06-01 |
| SE467160Btrue SE467160B (en) | 1992-06-01 |
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| SE9004095ASE467160B (en) | 1990-12-21 | 1990-12-21 | GENETIC MODIFICATION OF POTATOIS BEFORE EDUCATION OF AMYLOST TYPE |
| Country | Link |
|---|---|
| EP (1) | EP0563201A1 (en) |
| AU (1) | AU9109791A (en) |
| PL (1) | PL169859B1 (en) |
| SE (1) | SE467160B (en) |
| WO (1) | WO1992011375A1 (en) |
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO1997020040A1 (en)* | 1995-11-29 | 1997-06-05 | Amylogene Hb | Starch branching enzyme ii of potato |
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| AU644619B2 (en) | 1989-12-21 | 1993-12-16 | Advanced Technologies (Cambridge) Limited | Modification of plant metabolism |
| DE4104782B4 (en)* | 1991-02-13 | 2006-05-11 | Bayer Cropscience Gmbh | Novel plasmids containing DNA sequences that cause changes in carbohydrate concentration and carbohydrate composition in plants, as well as plants and plant cells containing these plasmids |
| US5300145B1 (en)* | 1992-08-28 | 1995-11-28 | Nat Starch Chem Invest | Low amylopectin starch |
| GB9223454D0 (en)* | 1992-11-09 | 1992-12-23 | Ici Plc | Novel plants and processes for obtaining them |
| DE4330960C2 (en)* | 1993-09-09 | 2002-06-20 | Aventis Cropscience Gmbh | Combination of DNA sequences that enable the formation of highly amylose-containing starch in plant cells and plants, processes for producing these plants and the modified starch that can be obtained therefrom |
| DE69432796T2 (en)* | 1993-09-09 | 2004-04-29 | Bayer Cropscience Gmbh | COMBINATION OF DNA SEQUENCES WHICH ENABLES THE FORMATION OF MODIFIED STARCH IN PLANT CELLS AND PLANTS, METHOD FOR THE PRODUCTION OF THESE PLANTS |
| PL180543B1 (en)* | 1993-11-09 | 2001-02-28 | Du Pont | Recombinant DNA construct, a method of producing fructan and a method of increasing the level of fructan in plants EN PL |
| WO1995026407A1 (en)* | 1994-03-25 | 1995-10-05 | National Starch And Chemical Investment Holding Corporation | Method for producing altered starch from potato plants |
| US6265635B1 (en)* | 1994-05-18 | 2001-07-24 | Plantec Biotechnologie Gmbh Forschung & Entwicklung | DNA sequences coding for enzymes capable of facilitating the synthesis of linear α-1,4 glucans in plants, fungi and microorganisms |
| WO1996031612A2 (en)* | 1995-04-06 | 1996-10-10 | Seminis Vegetables | Process for selection of transgenic plant cells |
| ATE366318T1 (en) | 1995-05-05 | 2007-07-15 | Nat Starch Chem Invest | IMPROVEMENTS IN OR RELATING TO PLANT STARCH COMPOUNDS |
| GB9514435D0 (en)* | 1995-07-14 | 1995-09-13 | Danisco | Inhibition of gene expression |
| GB9514437D0 (en)* | 1995-07-14 | 1995-09-13 | Danisco | Inhibition of gene expression |
| HU229777B1 (en) | 1995-09-19 | 2014-07-28 | Bayer Cropscience Ag | Plants which synthesise a modified starch, process for the production thereof and modified starch |
| GB9623095D0 (en)* | 1996-11-05 | 1997-01-08 | Nat Starch Chem Invest | Improvements in or relating to starch content of plants |
| DE19653176A1 (en) | 1996-12-19 | 1998-06-25 | Planttec Biotechnologie Gmbh | New maize nucleic acid molecules and their use to produce a modified starch |
| US5998701A (en)* | 1997-06-04 | 1999-12-07 | Her Majesty The Queen In Right Of Canada As Represented By The Department Of Agriculture | Potatoes having improved quality characteristics and methods for their production |
| EP1007707A1 (en) | 1997-02-21 | 2000-06-14 | Danisco A/S | Antisense intron inhibition of starch branching enzyme expression |
| ES2374534T3 (en) | 1998-03-20 | 2012-02-17 | Commonwealth Scientific And Industrial Research Organisation | GENES EXPRESSION CONTROL. |
| AUPP249298A0 (en) | 1998-03-20 | 1998-04-23 | Ag-Gene Australia Limited | Synthetic genes and genetic constructs comprising same I |
| US8598332B1 (en) | 1998-04-08 | 2013-12-03 | Bayer Cropscience N.V. | Methods and means for obtaining modified phenotypes |
| NZ507093A (en) | 1998-04-08 | 2003-08-29 | Commw Scient Ind Res Org | Methods and means for reducing the phenotypic expression of a nucleic acid of interest in a plant |
| US20040214330A1 (en) | 1999-04-07 | 2004-10-28 | Waterhouse Peter Michael | Methods and means for obtaining modified phenotypes |
| DE19836098A1 (en) | 1998-07-31 | 2000-02-03 | Hoechst Schering Agrevo Gmbh | Plants that synthesize a modified starch, process for producing the plants, their use and the modified starch |
| EP1131452B1 (en) | 1998-11-09 | 2014-01-22 | Bayer CropScience Aktiengesellschaft | Nucleic acid molecules from rice and their use for the production of modified starch |
| US6423885B1 (en) | 1999-08-13 | 2002-07-23 | Commonwealth Scientific And Industrial Research Organization (Csiro) | Methods for obtaining modified phenotypes in plant cells |
| AU2002366743B2 (en) | 2001-12-21 | 2008-08-07 | Bayer Cropscience Ag | Pregelatinized starches and method for producing the same |
| DE10212892A1 (en) | 2002-03-20 | 2003-10-09 | Basf Plant Science Gmbh | Constructs and methods for regulating gene expression |
| AU2003249939A1 (en) | 2002-07-09 | 2004-01-23 | Basf Plant Science Gmbh | Use of ahas mutant genes as selection marker in potato transformation |
| EP1931789B1 (en) | 2005-09-20 | 2016-05-04 | BASF Plant Science GmbH | Methods for controlling gene expression using ta-siran |
| WO2013184768A1 (en) | 2012-06-05 | 2013-12-12 | University Of Georgia Research Foundation, Inc. | Compositions and methods of gene silencing in plants |
| CN114703208A (en)* | 2022-01-21 | 2022-07-05 | 贵州省生物技术研究所(贵州省生物技术重点实验室、贵州省马铃薯研究所、贵州省食品加工研究所) | Application of potato StGAPC gene in improving starch content of potatoes |
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| NL8800756A (en)* | 1988-03-25 | 1989-10-16 | Vereniging Voor Christelijk Wetenschappelijk Onderwijs | GENETICALLY MANUFACTURED PLANT CELLS AND PLANTS AND USEABLE RECOMBINANT DNA. |
| GB8826356D0 (en)* | 1988-11-10 | 1988-12-14 | Ici Plc | Adp glucose-pyrophosphorylase |
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO1997020040A1 (en)* | 1995-11-29 | 1997-06-05 | Amylogene Hb | Starch branching enzyme ii of potato |
| US6169226B1 (en) | 1995-11-29 | 2001-01-02 | Amylogene Hb | Starch branching enzyme II of potato |
| US6469231B1 (en) | 1995-11-29 | 2002-10-22 | Bo Ek | Starch branching enzyme II of potato |
| CN1112443C (en)* | 1995-11-29 | 2003-06-25 | 阿迈罗基因公司 | Branching enzyme II of potato starch |
| CZ298540B6 (en)* | 1995-11-29 | 2007-10-31 | Amylogene Hb C/O Svalöf Weibull Ab | Amino acid sequence, DNA sequence, fragments and vectors thereof, transgenic potato, process for the production of transgenic potatoes and use for manufacture of starch |
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| SE9004095L (en) | 1992-06-01 |
| EP0563201A1 (en) | 1993-10-06 |
| PL169859B1 (en) | 1996-09-30 |
| WO1992011375A1 (en) | 1992-07-09 |
| SE9004095D0 (en) | 1990-12-21 |
| AU9109791A (en) | 1992-07-22 |
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| SE467160B (en) | GENETIC MODIFICATION OF POTATOIS BEFORE EDUCATION OF AMYLOST TYPE | |
| US6784338B1 (en) | Genetically engineered modification of potato to form amylopectin-type starch | |
| CA2331300C (en) | Improvements in or relating to plants and plant products | |
| EP0826061B1 (en) | Improvements in or relating to plant starch composition | |
| CA2603919C (en) | High-phosphate starch | |
| US6066782A (en) | Combination of DNA sequences which enable the formation of modified starch in plant cells and plants, processes for the production of these plants and the modified starch obtainable therefrom | |
| JP3797624B2 (en) | DNA molecules encoding enzymes involved in starch synthesis, and vectors, bacteria, transgenic plant cells and transgenic plants containing the DNA molecules | |
| WO1999012950A9 (en) | Improvements in or relating to stability of plant starches | |
| US5856467A (en) | Genetically engineered modification of potato to form amylose-type starch |
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| NAL | Patent in force | Ref document number:9004095-7 Format of ref document f/p:F | |
| NUG | Patent has lapsed |