ПЕРЕКРЕСТНАЯ ССЫЛКА НА РОДСТВЕННЫЕ ЗАЯВКИCROSS-REFERENCE TO RELATED APPLICATIONS
[0001] Данная заявка испрашивает приоритет относительно предварительной заявки на патент США №63/084241, поданной 28 сентября 2020 года, которая включена в данный документ посредством ссылки во всей своей полноте.[0001] This application claims priority to U.S. Provisional Patent Application No. 63/084,241, filed September 28, 2020, which is incorporated herein by reference in its entirety.
ОБЛАСТЬ ТЕХНИКИAREA OF TECHNOLOGY
[0002] Данное изобретение в целом относится к вариантам собачьих антител и их применению. В частности, данное изобретение относится к мутации в константной области Fc собачьего антитела для улучшения его периода полужизни.[0002] This invention generally relates to variants of canine antibodies and their uses. In particular, this invention relates to a mutation in the Fc constant region of a canine antibody to improve its half-life.
УРОВЕНЬ ТЕХНИКИLEVEL OF TECHNOLOGY
[0003] Собачьи моноклональные антитела (мАт) IgG разрабатываются в качестве эффективных терапевтических агентов в ветеринарной медицине. Несколько лет назад были идентифицированы и охарактеризованы четыре подкласса собачьих IgG (Bergeron et al., 2014, Vet Immunol ImmunopathoL, vol. 157 (1-2), pages 31-41). Однако было проделано не так много работы по продлению периода полужизни собачьих IgG.[0003] Canine IgG monoclonal antibodies (mAbs) are being developed as effective therapeutic agents in veterinary medicine. Several years ago, four subclasses of canine IgG were identified and characterized (Bergeron et al., 2014, Vet Immunol ImmunopathoL, vol. 157 (1-2), pages 31-41). However, little work has been done to extend the half-life of canine IgG.
[0004] Посредством механизма рециркуляции неонатальный рецептор Fc (FcRn) продлевает период полужизни IgG в рН-зависимом взаимодействии с областью его кристаллизующегося фрагмента (Fc). В частности, область Fc, охватывающая границу раздела доменов СН2 и СН3, взаимодействует с FcRn на поверхности клеток, регулируя гомеостаз IgG. Данному взаимодействию способствует кислотное взаимодействие после пиноцитоза IgG, и, таким образом, IgG защищен от деградации. Подвергшийся эндоцитозу IgG затем рециркулирует обратно на поверхность клетки и высвобождается в кровоток при щелочном рН, тем самым поддерживая достаточное количество IgG в сыворотке крови для надлежащего функционирования. Соответственно, фармакокинетический профиль IgG зависит от структурных и функциональных свойств их областей Fc.[0004] Through a recycling mechanism, the neonatal Fc receptor (FcRn) extends the half-life of IgG in a pH-dependent interaction with its crystallizable fragment (Fc) region. Specifically, the Fc region spanning the interface of the CH2 and CH3 domains interacts with FcRn on the cell surface to regulate IgG homeostasis. This interaction is facilitated by an acidic interaction following IgG pinocytosis, and thus IgG is protected from degradation. Endocytosed IgG is then recycled back to the cell surface and released into the bloodstream at alkaline pH, thereby maintaining sufficient serum IgG for proper function. Accordingly, the pharmacokinetic profile of IgG depends on the structural and functional properties of their Fc regions.
[0005] Собачий FcRn связывают три подкласса собачьих IgG, которые сравнивали с аналогами IgG человека. Период полужизни собачьих IgG еще предстоит полностью изучить, поскольку без какой-либо экспериментальной поддержки нельзя ожидать или предсказать, будут ли они точно совпадать с IgG человека.[0005] Canine FcRn binds three subclasses of canine IgG, which have been compared with their human IgG counterparts. The half-life of canine IgG remains to be fully studied, as without any experimental support, it cannot be expected or predicted whether they will accurately match human IgG.
[0006] Увеличенный период полужизни IgG обеспечивает возможность менее частого введения дозы и (или) введение более низкой дозы антитела - лекарственного препарата, что, в свою очередь, сокращает количество визитов к ветеринару, улучшает комплаентность пациентов и снижает зависящую от концентрации цитотоксичность / нежелательные явления.[0006] The increased half-life of IgG allows for less frequent dosing and/or administration of a lower dose of the antibody-drug product, which in turn reduces the number of visits to the veterinarian, improves patient compliance, and reduces concentration-dependent cytotoxicity/adverse events.
[0007] Соответственно, существует потребность в идентификации мутаций в константных областях Fc для улучшения периода полужизни.[0007] Accordingly, there is a need to identify mutations in Fc constant regions to improve half-life.
КРАТКОЕ ОПИСАНИЕ СУЩНОСТИ ИЗОБРЕТЕНИЯBRIEF DESCRIPTION OF THE INVENTION
[0008] Данное изобретение относится к мутантным собачьим IgG, которые обеспечивают более высокую аффинность к FcRn и более длительный период полужизни по сравнению с собачьими IgG дикого типа. В частности, авторы данного изобретения обнаружили, что замещение аминокислотного остатка аспарагина (Asn или N) в положении 434 другой аминокислотой удивительно и неожиданно повысило аффинность к FcRn и, таким образом, увеличило период полужизни IgG.[0008] The present invention relates to mutant canine IgGs that provide higher affinity for FcRn and a longer half-life compared to wild-type canine IgGs. In particular, the inventors of the present invention found that substitution of the asparagine (Asn or N) amino acid residue at position 434 with another amino acid surprisingly and unexpectedly increased the affinity for FcRn and, thus, increased the half-life of the IgG.
[0009] В одном аспекте данного изобретения представлен модифицированный IgG, содержащий: константный домен собачьего IgG, содержащий по меньшей мере одно аминокислотное замещение по сравнению с константным доменом собачьего IgG дикого типа, при этом указанное замещение находится в аминокислотном остатке 434, пронумерованном в соответствии с индексом ЕС, как по Кабату. В иллюстративном варианте осуществления данного изобретения указанное замещение представляет собой замещение аспарагина в положении 434 гистидином.[0009] In one aspect of the present invention, there is provided a modified IgG comprising: a constant domain of a canine IgG comprising at least one amino acid substitution compared to a constant domain of a wild-type canine IgG, wherein said substitution is at amino acid residue 434 numbered according to the EU index, as per Kabat. In an exemplary embodiment of the present invention, said substitution is a substitution of asparagine at position 434 with histidine.
[00010] В другом аспекте данного изобретения представлен полипептид, содержащий: константный домен собачьего IgG, содержащий по меньшей мере одно аминокислотное замещение по сравнению с константным доменом собачьего IgG дикого типа, при этом указанное замещение находится в аминокислотном остатке 434, пронумерованном в соответствии с индексом ЕС, как по Кабату.[00010] In another aspect of the invention, there is provided a polypeptide comprising: a canine IgG constant domain comprising at least one amino acid substitution compared to a wild-type canine IgG constant domain, wherein said substitution is at amino acid residue 434, numbered according to the EU index, as per Kabat.
[00011] В еще одном аспекте данного изобретения представлены антитело или молекула содержащие: константный домен собачьего IgG, содержащий по меньшей мере одно аминокислотное замещение по сравнению с константным доменом собачьего IgG дикого типа, при этом указанное замещение находится в аминокислотном остатке 434, пронумерованном в соответствии с индексом ЕС, как по Кабату.[00011] In another aspect of the invention, there is provided an antibody or molecule comprising: a canine IgG constant domain comprising at least one amino acid substitution compared to a wild-type canine IgG constant domain, wherein said substitution is at amino acid residue 434, numbered according to the EU index, as per Kabat.
[00012] В дополнительном аспекте данного изобретения представлен способ получения или производства антитела или молекулы, включающий в себя: обеспечение наличия вектора или клетки-хозяина, содержащих константный домен собачьего IgG, при этом указанный константный домен собачьего IgG содержит по меньшей мере одно аминокислотное замещение по сравнению с константным доменом собачьего IgG дикого типа, при этом указанное замещение находится в аминокислотном остатке 434, пронумерованном в соответствии с индексом ЕС, как по Кабату.[00012] In a further aspect of the present invention, there is provided a method for producing or manufacturing an antibody or molecule, comprising: providing a vector or host cell comprising a canine IgG constant domain, wherein said canine IgG constant domain comprises at least one amino acid substitution compared to a wild-type canine IgG constant domain, wherein said substitution is at amino acid residue 434, numbered according to the EU index, as per Kabat.
[00013] В другом аспекте данного изобретения представлен способ увеличения периода полужизни антитела в сыворотке крови собаки, включающий в себя: введение указанной собаке терапевтически эффективного количества антитела, содержащего константный домен собачьего IgG, при этом указанный константный домен собачьего IgG содержит по меньшей мере одно аминокислотное замещение по сравнению с константным доменом собачьего IgG дикого типа, при этом указанное замещение находится в аминокислотном остатке 434, пронумерованном в соответствии с индексом ЕС, как по Кабату. В иллюстративном варианте осуществления данного изобретения указанное антитело увеличивает период полужизни на около 30 суток.[00013] In another aspect of the present invention, there is provided a method for increasing the half-life of an antibody in the blood serum of a dog, comprising: administering to said dog a therapeutically effective amount of an antibody comprising a constant domain of a canine IgG, wherein said constant domain of a canine IgG comprises at least one amino acid substitution compared to a constant domain of a wild-type canine IgG, wherein said substitution is at amino acid residue 434 numbered according to the EU index, as per Kabat. In an exemplary embodiment of the present invention, said antibody increases the half-life by about 30 days.
[00014] В другом аспекте данного изобретения представлен способ поддержания терапевтического уровня антитела в сыворотке крови собаки, включающий в себя: введение указанной собаке терапевтически эффективного количества антитела, содержащего константный домен собачьего IgG, при этом указанный константный домен собачьего IgG содержит по меньшей мере одно аминокислотное замещение по сравнению с константным доменом собачьего IgG дикого типа, при этом указанное замещение находится в аминокислотном остатке 434, пронумерованном в соответствии с индексом ЕС, как по Кабату. В иллюстративном варианте осуществления данного изобретения указанное антитело поддерживает терапевтический уровень указанного антитела в сыворотке крови указанной собаки на протяжении периода, варьирующегося от около 1 месяца до около 7 месяцев.[00014] In another aspect of the present invention, there is provided a method for maintaining a therapeutic level of an antibody in the blood serum of a dog, comprising: administering to said dog a therapeutically effective amount of an antibody comprising a constant domain of a canine IgG, wherein said constant domain of a canine IgG comprises at least one amino acid substitution compared to a constant domain of a wild-type canine IgG, wherein said substitution is at amino acid residue 434 numbered according to the EU index, as according to Kabat. In an exemplary embodiment of the present invention, said antibody maintains a therapeutic level of said antibody in the blood serum of said dog for a period ranging from about 1 month to about 7 months.
[00015] Другие признаки и преимущества данного изобретения будут очевидны из следующего подробного описания и из следующих графических материалов. Тем не менее, следует понимать, что подробное описание и конкретные примеры, указывающие на предпочтительные варианты осуществления данного изобретения, приведены только в качестве иллюстрации, поскольку различные изменения и модификации в духе и объеме данного изобретения станут очевидными для специалистов в данной области техники из данного подробного описания.[00015] Other features and advantages of the present invention will be apparent from the following detailed description and from the following drawings. However, it should be understood that the detailed description and specific examples, while indicating preferred embodiments of the present invention, are given for illustrative purposes only, since various changes and modifications within the spirit and scope of the present invention will become apparent to those skilled in the art from this detailed description.
КРАТКОЕ ОПИСАНИЕ ГРАФИЧЕСКИХ МАТЕРИАЛОВBRIEF DESCRIPTION OF GRAPHIC MATERIALS
[00016] Данный патент или заявка на патент содержит по меньшей мере одно цветное изображение. Копии данного патента или данной патентной публикации с цветным (-и) изображением(-ями) будут предоставлены уполномоченной патентной организацией по запросу и после уплаты необходимой пошлины.[00016] This patent or patent application contains at least one color image. Copies of this patent or this patent publication with the color image(s) will be provided by the authorized patent organization upon request and payment of the required fee.
[00017] На фиг. 1 показана доменная структура IgG. В домене СН3 произведена мутация Fc N434H для увеличения периода полужизни IgG путем повышения аффинности к FcRn при рН 6.[00017] Figure 1 shows the domain structure of IgG. The CH3 domain was mutated to Fc N434H to increase the half-life of IgG by increasing the affinity for FcRn at pH 6.
[00018] На фиг. 2А показаны аминокислотные последовательности собачьего IgGB, имеющего N434H, и собачьего IgGB дикого типа (ДТ).[00018] Fig. 2A shows the amino acid sequences of canine IgGB having N434H and canine wild-type (WT) IgGB.
[00019] На фиг. 2В показано выравнивание аминокислотных последовательностей IgGl дикого типа (ДТ) человека, собачьего IgGA ДТ, собачьего IgGB ДТ, собачьего IgGC ДТ и собачьего IgGD ДТ. Аминокислотные остатки пронумерованы в соответствии с индексом ЕС, как по Кабату. Аминокислотные остатки СН1, шарнира, СН2 и СН3 выделены красным, фиолетовым, синим и зеленым, соответственно.[00019] Fig. 2B shows an alignment of the amino acid sequences of human wild-type (WT) IgG1, canine WT IgGA, canine WT IgGB, canine WT IgGC, and canine WT IgGD. Amino acid residues are numbered according to the EU index, as per Kabat. The amino acid residues of CH1, hinge, CH2, and CH3 are highlighted in red, purple, blue, and green, respectively.
[00020] На фиг. 2С показаны нуклеотидные последовательности IgGB 65 ДТ.[00020] Fig. 2C shows the nucleotide sequences of IgGB 65 WT.
[00021] На фиг. 3 показаны индивидуальные концентрации мАт1 IgG ДТ в сыворотке крови у 4 собак - 2 самцов (01, самец; 02, самец) и 2 самок (03, самка; 04, самка) - после однократной инъекции дозы в 2 мг/кг, измеренные на протяжении периода в 56 суток.[00021] Figure 3 shows individual serum concentrations of IgG mAb1 in 4 dogs - 2 males (01, male; 02, male) and 2 females (03, female; 04, female) - after a single injection of a 2 mg/kg dose, measured over a period of 56 days.
[00022] На фиг. 4 показаны индивидуальные концентрации мАт1 IgG N434H в сыворотке крови у 4 собак - 2 самцов (17, самец; 18, самец) и 2 самок (19, самка; 20, самка) - после однократной инъекции дозы в 2 мг/кг, измеренные на протяжении периода в 56 суток.[00022] Figure 4 shows individual serum concentrations of IgG N434H mAb1 in 4 dogs, 2 male (17, male; 18, male) and 2 female (19, female; 20, female), following a single injection of a 2 mg/kg dose, measured over a 56-day period.
[00023] На фиг. 5 показаны индивидуальные концентрации мАт2 IgG ДТ в сыворотке крови у 8 собак - 4 самцов (Н03433, Н03434, Н03435, Н03436) и 4 самок (Н03453, Н03454, Н03455, Н03456) - после трех инъекций (п/к, п/к, в/в) дозой по 2 мг/кг, измеренные на протяжении периода в 98 суток.[00023] Fig. 5 shows individual serum concentrations of mAb2 IgG WT in 8 dogs - 4 males (H03433, H03434, H03435, H03436) and 4 females (H03453, H03454, H03455, H03456) - after three injections (s.c., s.c., i.v.) at a dose of 2 mg/kg, measured over a period of 98 days.
[00024] На фиг. 6 показаны индивидуальные концентрации мАт2 IgG N434H в сыворотке крови у 8 собак 4 самцов (Н03433, Н03434, Н03435, Н03436) и 4 самок (Н03453, Н03454, Н03455 и Н03456) - после трех инъекций (п/к, п/к, в/в) дозой по 2 мг/кг, измеренные на протяжении периода в 98 суток.[00024] Fig. 6 shows individual serum concentrations of IgG N434H mAb2 in 8 dogs, 4 males (H03433, H03434, H03435, H03436) and 4 females (H03453, H03454, H03455 and H03456), after three injections (s.c., s.c., i.v.) at a dose of 2 mg/kg, measured over a period of 98 days.
[00025] На фиг. 7 показаны профили ZTS-00008183 в сыворотке крови у собак после подкожного введения однократной дозы в 4 мг/кг. Цвета обозначают различные идентификационные номера животных.[00025] Figure 7 shows the serum profiles of ZTS-00008183 in dogs following subcutaneous administration of a single 4 mg/kg dose. Colors represent different animal identification numbers.
[00026] На фиг. 8 показаны средние профили ZTS-00008183 в сыворотке крови у собак после подкожного введения однократной дозы в 4 мг/кг.[00026] Figure 8 shows the mean serum profiles of ZTS-00008183 in dogs following subcutaneous administration of a single 4 mg/kg dose.
[00027] На фиг. 9 представлен график средних значений наименьших квадратов по видам воздействия по моментам времени (3-5 месяцев). Уровни альфа: сутки 84=0,07085, сутки 112=0,04575, сутки 140=0,04352.[00027] Fig. 9 shows a graph of the least squares mean values by type of exposure at time points (3-5 months). Alpha levels: day 84=0.07085, day 112=0.04575, day 140=0.04352.
[00028] На фиг. 10 представлен график средних значений наименьших квадратов и процентов изменения по видам воздействия по моментам времени (3-5 месяцев). % изменения средних значений = 100 × [среднее значение (В01) - среднее значение (В02) / среднее значение (В01)].[00028] Fig. 10 shows a graph of least squares means and percent change by treatment over time (3-5 months). % change in means = 100 x [mean (B01) - mean (B02) / mean (B01)].
[00029] На фиг. 11 представлены диаграммы размаха оценок зуда для всех моментов времени. В01=плацебо, 0 мг/кг; В02=ZTS-00008183, 4 мг/кг.[00029] Figure 11 shows the boxplots of pruritus scores for all time points. B01=placebo, 0 mg/kg; B02=ZTS-00008183, 4 mg/kg.
[00030] На фиг. 12 представлен график оценок зуда в виде средних арифметических значений по видам воздействия для всех моментов времени. Планки погрешностей отображают стандартную ошибку.[00030] Figure 12 shows a graph of the itching scores as arithmetic means by exposure type for all time points. Error bars represent the standard error.
[00031] На фиг. 13 представлен график оценок зуда в виде средних арифметических значений и процентов изменения по видам воздействия для всех моментов времени. % изменения средних значений = 100 × [среднее значение (В01) - среднее значение (B0X) / среднее значение (В01)], где X=2, 3.[00031] Fig. 13 shows a graph of the itching scores as arithmetic means and percent change by treatment for all time points. % change in mean values = 100 x [mean value (B01) - mean value (B0X) / mean value (B01)], where X=2.3.
КРАТКОЕ ОПИСАНИЕ ПЕРЕЧНЯ ПОСЛЕДОВАТЕЛЬНОСТЕЙSEQUENCE LISTING SUMMARY
[00032] SEQ ID NO.: 1 представляет собой аминокислотную последовательность константного домена мутантного собачьего IgGB, имеющего мутацию N434H;[00032] SEQ ID NO.: 1 is the amino acid sequence of the constant domain of mutant canine IgGB having the N434H mutation;
[00033] SEQ ID NO.: 2 представляет собой аминокислотную последовательность константного домена собачьего IgGB дикого типа;[00033] SEQ ID NO.: 2 is the amino acid sequence of the constant domain of wild-type canine IgGB;
[00034] SEQ ID NO.: 3 представляет собой кодон-оптимизированную нуклеотидную последовательность константного домена собачьего IgG дикого типа (IgGB_65_ДТ);[00034] SEQ ID NO.: 3 is the codon-optimized nucleotide sequence of the constant domain of canine wild-type IgG (IgGB_65_WT);
[00035] SEQ ID NO.: 4 представляет собой нуклеотидную последовательность константного домена собачьего IgGB дикого типа;[00035] SEQ ID NO.: 4 is the nucleotide sequence of the constant domain of wild-type canine IgGB;
[00036] SEQ ID NO.: 5 представляет собой аминокислотную последовательность домена CH1 IgGB, положения 118-215;[00036] SEQ ID NO.: 5 is the amino acid sequence of the CH1 domain of IgGB, positions 118-215;
[00037] SEQ ID NO.: 6 представляет собой аминокислотную последовательность шарнирного домена IgGB, положения 217-230;[00037] SEQ ID NO.: 6 is the amino acid sequence of the hinge domain of IgGB, positions 217-230;
[00038] SEQ ID NO.: 7 представляет собой аминокислотную последовательность домена СН2 IgGB дикого типа, положения 231-340;[00038] SEQ ID NO.: 7 is the amino acid sequence of the CH2 domain of wild-type IgGB, positions 231-340;
[00039] SEQ ID NO.: 8 представляет собой аминокислотную последовательность домена СН3 IgGB дикого типа, положения 341-447;[00039] SEQ ID NO.: 8 is the amino acid sequence of the CH3 domain of wild-type IgGB, positions 341-447;
[00040] SEQ ID NO.: 9 представляет собой нуклеотидную последовательность домена CH1 IgGB;[00040] SEQ ID NO.: 9 is the nucleotide sequence of the CH1 domain of IgGB;
[00041] SEQ ID NO.: 10 представляет собой нуклеотидную последовательность шарнирного домена IgGB;[00041] SEQ ID NO.: 10 is the nucleotide sequence of the hinge domain of IgGB;
[00042] SEQ ID NO.: 11 представляет собой нуклеотидную последовательность домена СН2 IgGB дикого типа;[00042] SEQ ID NO.: 11 is the nucleotide sequence of the CH2 domain of wild-type IgGB;
[00043] SEQ ID NO.: 12 представляет собой нуклеотидную последовательность домена СН3 IgGB дикого типа;[00043] SEQ ID NO.: 12 is the nucleotide sequence of the CH3 domain of wild-type IgGB;
[00044] SEQ ID NO: 13 представляет собой CDR1 вариабельной области тяжелой цепи антитела против ИЛ-31, обозначаемую в данном документе как 11E12-VH-CDR1;[00044] SEQ ID NO: 13 is the CDR1 of the heavy chain variable region of the anti-IL-31 antibody, referred to herein as 11E12-VH-CDR1;
[00045] SEQ ID NO: 14 представляет собой CDR1 вариабельной области тяжелой цепи антитела против ИЛ-31, обозначаемую в данном документе как 34D03-VH-CDR1;[00045] SEQ ID NO: 14 is the CDR1 of the heavy chain variable region of the anti-IL-31 antibody, referred to herein as 34D03-VH-CDR1;
[00046] SEQ ID NO: 15 представляет собой CDR2 вариабельной области тяжелой цепи антитела против ИЛ-31, обозначаемую в данном документе как 11E12-VH-CDR2;[00046] SEQ ID NO: 15 is the CDR2 of the heavy chain variable region of the anti-IL-31 antibody, referred to herein as 11E12-VH-CDR2;
[00047] SEQ ID NO: 16 представляет собой CDR2 вариабельной области тяжелой цепи антитела против ИЛ-31, обозначаемую в данном документе как 34D03-VH-CDR2;[00047] SEQ ID NO: 16 is the CDR2 of the heavy chain variable region of the anti-IL-31 antibody, referred to herein as 34D03-VH-CDR2;
[00048] SEQ ID NO: 17 представляет собой CDR3 вариабельной области тяжелой цепи антитела против ИЛ-31, обозначаемую в данном документе как 11E12-VH-CDR3;[00048] SEQ ID NO: 17 is the CDR3 of the heavy chain variable region of the anti-IL-31 antibody, referred to herein as 11E12-VH-CDR3;
[00049] SEQ ID NO: 18 представляет собой CDR3 вариабельной области тяжелой цепи антитела против ИЛ-31, обозначаемую в данном документе как 34D03-VH-CDR3;[00049] SEQ ID NO: 18 is the CDR3 of the heavy chain variable region of the anti-IL-31 antibody, referred to herein as 34D03-VH-CDR3;
[00050] SEQ ID NO: 19 представляет собой CDR1 вариабельной области легкой цепи антитела против ИЛ-31, обозначаемую в данном документе как 11E12-VL-CDR1;[00050] SEQ ID NO: 19 is the CDR1 of the light chain variable region of an anti-IL-31 antibody, referred to herein as 11E12-VL-CDR1;
[00051] SEQ ID NO: 20 представляет собой CDR1 вариабельной области легкой цепи антитела против ИЛ-31, обозначаемую в данном документе как 34D03-VL-CDR1;[00051] SEQ ID NO: 20 is the light chain variable region CDR1 of an anti-IL-31 antibody, referred to herein as 34D03-VL-CDR1;
[00052] SEQ ID NO: 21 представляет собой CDR2 вариабельной области легкой цепи антитела против ИЛ-31, обозначаемую в данном документе как 11E12-VL-CDR2;[00052] SEQ ID NO: 21 is the CDR2 of the light chain variable region of the IL-31 antibody, referred to herein as 11E12-VL-CDR2;
[00053] SEQ ID NO: 22 представляет собой CDR2 вариабельной области легкой цепи антитела против ИЛ-31, обозначаемую в данном документе как 34D03-VL-CDR2;[00053] SEQ ID NO: 22 is the CDR2 of the light chain variable region of the IL-31 antibody, referred to herein as 34D03-VL-CDR2;
[00054] SEQ ID NO: 23 представляет собой CDR3 вариабельной области легкой цепи антитела против ИЛ-31, обозначаемую в данном документе как 11E12-VL-CDR3;[00054] SEQ ID NO: 23 is the CDR3 of the light chain variable region of the IL-31 antibody, referred to herein as 11E12-VL-CDR3;
[00055] SEQ ID NO: 24 представляет собой CDR3 вариабельной области легкой цепи антитела против ИЛ-31, обозначаемую в данном документе как 34D03-VL-CDR3;[00055] SEQ ID NO: 24 is the CDR3 of the light chain variable region of an anti-IL-31 antibody, referred to herein as 34D03-VL-CDR3;
[00056] SEQ ID NO: 25 представляет собой последовательность вариабельной области легкой цепи антитела против ИЛ-31, обозначаемую в данном документе как MU-11E12-VL;[00056] SEQ ID NO: 25 is the light chain variable region sequence of the anti-IL-31 antibody, referred to herein as MU-11E12-VL;
[00057] SEQ ID NO: 26 представляет собой последовательность вариабельной области легкой цепи антитела против ИЛ-31, обозначаемую в данном документе как CAN-11Е12-VL-cUn-FW2;[00057] SEQ ID NO: 26 is the light chain variable region sequence of the anti-IL-31 antibody, referred to herein as CAN-11E12-VL-cUn-FW2;
[00058] SEQ ID NO: 27 представляет собой последовательность вариабельной области легкой цепи антитела против ИЛ-31, обозначаемую в данном документе как CAN-11Е12-VL-cUn-13;[00058] SEQ ID NO: 27 is the light chain variable region sequence of the anti-IL-31 antibody, referred to herein as CAN-11E12-VL-cUn-13;
[00059] SEQ ID NO: 28 представляет собой последовательность вариабельной области легкой цепи антитела против ИЛ-31, обозначаемую в данном документе как MU-34D03-VL;[00059] SEQ ID NO: 28 is the light chain variable region sequence of the anti-IL-31 antibody, referred to herein as MU-34D03-VL;
[00060] SEQ ID NO: 29 представляет собой последовательность вариабельной области легкой цепи антитела против ИЛ-31, обозначаемую в данном документе как CAN-34D03-VL-998-1;[00060] SEQ ID NO: 29 is the light chain variable region sequence of the anti-IL-31 antibody, referred to herein as CAN-34D03-VL-998-1;
[00061] SEQ ID NO: 30 представляет собой последовательность вариабельной области тяжелой цепи антитела против ИЛ-31, обозначаемую в данном документе как MU-11E12-VH;[00061] SEQ ID NO: 30 is the heavy chain variable region sequence of the anti-IL-31 antibody, referred to herein as MU-11E12-VH;
[00062] SEQ ID NO: 31 представляет собой последовательность вариабельной области тяжелой цепи антитела против ИЛ-31, обозначаемую в данном документе как CAN-11Е12-VH-415-1;[00062] SEQ ID NO: 31 is the heavy chain variable region sequence of the anti-IL-31 antibody, referred to herein as CAN-11E12-VH-415-1;
[00063] SEQ ID NO: 32 представляет собой последовательность вариабельной области тяжелой цепи антитела против ИЛ-31, обозначаемую в данном документе как MU-34D03-VH;[00063] SEQ ID NO: 32 is the heavy chain variable region sequence of the anti-IL-31 antibody, referred to herein as MU-34D03-VH;
[00064] SEQ ID NO: 33 представляет собой последовательность вариабельной области тяжелой цепи антитела против ИЛ-31, обозначаемую в данном документе как CAN-34D03-VH-568-1;[00064] SEQ ID NO: 33 is the heavy chain variable region sequence of the anti-IL-31 antibody, referred to herein as CAN-34D03-VH-568-1;
[00065] SEQ ID NO: 34 представляет собой аминокислотную последовательность, соответствующую учетному номеру C7G0W1 в GenBank, что соответствует полноразмерному белку ИЛ-31 собаки.[00065] SEQ ID NO: 34 is the amino acid sequence corresponding to GenBank accession number C7G0W1, which corresponds to the full-length canine IL-31 protein.
[00066] SEQ ID NO: 35 представляет собой нуклеотидную последовательность, соответствующую учетному номеру C7G0W1 в GenBank, что соответствует нуклеотидной последовательности, кодирующей полноразмерный белок ИЛ-31 собаки.[00066] SEQ ID NO: 35 is the nucleotide sequence corresponding to GenBank accession number C7G0W1, which corresponds to the nucleotide sequence encoding the full-length canine IL-31 protein.
[00067] SEQ ID NO: 36 представляет собой нуклеотидную последовательность, кодирующую последовательность вариабельной области легкой цепи антитела против ИЛ-31, обозначаемую в данном документе как MU-11E12-VL;[00067] SEQ ID NO: 36 is a nucleotide sequence encoding a light chain variable region sequence of an anti-IL-31 antibody, referred to herein as MU-11E12-VL;
[00068] SEQ ID NO: 37 представляет собой нуклеотидную последовательность, кодирующую последовательность вариабельной области тяжелой цепи антитела против ИЛ-31, обозначаемую в данном документе как MU-11E12-VH;[00068] SEQ ID NO: 37 is a nucleotide sequence encoding a heavy chain variable region sequence of an anti-IL-31 antibody, referred to herein as MU-11E12-VH;
[00069] SEQ ID NO: 38 представляет собой нуклеотидную последовательность, кодирующую последовательность вариабельной области легкой цепи антитела против ИЛ-31, обозначаемую в данном документе как MU-34D03-VL;[00069] SEQ ID NO: 38 is a nucleotide sequence encoding a light chain variable region sequence of an anti-IL-31 antibody, referred to herein as MU-34D03-VL;
[00070] SEQ ID NO: 39 представляет собой нуклеотидную последовательность, кодирующую последовательность вариабельной области тяжелой цепи антитела против ИЛ-31, обозначаемую в данном документе как MU-34D03-VH;[00070] SEQ ID NO: 39 is a nucleotide sequence encoding a heavy chain variable region sequence of an anti-IL-31 antibody, referred to herein as MU-34D03-VH;
[00071] SEQ ID NO: 40 представляет собой аминокислотную последовательность собачьей константной области тяжелой цепи дикого типа, обозначаемую в данном документе как НС-64 (учетный номер в GenBank: AF354264);[00071] SEQ ID NO: 40 is the amino acid sequence of the wild-type canine heavy chain constant region, referred to herein as HC-64 (GenBank accession number: AF354264);
[00072] SEQ ID NO: 41 представляет собой нуклеотидную последовательность, кодирующую последовательность собачьей константной области тяжелой цепи дикого типа, обозначаемую в данном документе как НС-64 (учетный номер в GenBank: AF354264);[00072] SEQ ID NO: 41 is a nucleotide sequence encoding the wild-type canine heavy chain constant region sequence, referred to herein as HC-64 (GenBank accession number: AF354264);
[00073] SEQ ID NO: 42 представляет собой аминокислотную последовательность собачьей константной области тяжелой цепи дикого типа, обозначаемую в данном документе как НС-65 (учетный номер в GenBank: AF354265);[00073] SEQ ID NO: 42 is the amino acid sequence of the wild-type canine heavy chain constant region, referred to herein as HC-65 (GenBank accession number: AF354265);
[00074] SEQ ID NO: 43 представляет собой нуклеотидную последовательность, кодирующую последовательность собачьей константной области тяжелой цепи дикого типа, обозначаемую в данном документе как НС-65 (учетный номер в GenBank: AF354265);[00074] SEQ ID NO: 43 is a nucleotide sequence encoding the wild-type canine heavy chain constant region sequence, referred to herein as HC-65 (GenBank accession number: AF354265);
[00075] SEQ ID NO: 44 представляет собой аминокислотную последовательность собачьей константной области легкой цепи, обозначаемую в данном документе как каппа (учетный номер в GenBank: ХР_532962);[00075] SEQ ID NO: 44 is the amino acid sequence of the canine light chain constant region, referred to herein as kappa (GenBank accession number: XP_532962);
[00076] SEQ ID NO: 45 представляет собой нуклеотидную последовательность, кодирующую последовательность собачьей константной области легкой цепи, обозначаемую в данном как каппа (учетный номер в GenBank: ХР_532962);[00076] SEQ ID NO: 45 is a nucleotide sequence encoding a canine light chain constant region sequence, referred to herein as kappa (GenBank accession number: XP_532962);
[00077] SEQ ID NO: 46 представляет собой нуклеотидную последовательность, кодирующую последовательность вариабельной области легкой цепи антитела против ИЛ-31, обозначаемую в данном документе как CAN-34D03-VL-998-1;[00077] SEQ ID NO: 46 is a nucleotide sequence encoding a light chain variable region sequence of an anti-IL-31 antibody, referred to herein as CAN-34D03-VL-998-1;
[00078] SEQ ID NO: 47 представляет собой нуклеотидную последовательность, кодирующую последовательность вариабельной области тяжелой цепи антитела против ИЛ-31, обозначаемую в данном документе как CAN-34D03-VH-568-1;[00078] SEQ ID NO: 47 is a nucleotide sequence encoding a heavy chain variable region sequence of an anti-IL-31 antibody, referred to herein as CAN-34D03-VH-568-1;
[00079] SEQ ID NO: 48 представляет собой нуклеотидную последовательность, кодирующую последовательность вариабельной области легкой цепи антитела против ИЛ-31, обозначаемую в данном документе как CAN-11E12-VL-cUn-FW2;[00079] SEQ ID NO: 48 is a nucleotide sequence encoding a light chain variable region sequence of an anti-IL-31 antibody, referred to herein as CAN-11E12-VL-cUn-FW2;
[00080] SEQ ID NO: 49 представляет собой нуклеотидную последовательность, кодирующую последовательность вариабельной области тяжелой цепи антитела против ИЛ-31, обозначаемую в данном документе как CAN-11E12-VH-415-1;[00080] SEQ ID NO: 49 is a nucleotide sequence encoding a heavy chain variable region sequence of an anti-IL-31 antibody, referred to herein as CAN-11E12-VH-415-1;
[00081] SEQ ID NO: 50 представляет собой нуклеотидную последовательность, кодирующую последовательность вариабельной области легкой цепи антитела против ИЛ-31, обозначаемую в данном документе как CAN-11Е12-VL-cUn-13;[00081] SEQ ID NO: 50 is a nucleotide sequence encoding a light chain variable region sequence of an anti-IL-31 antibody, referred to herein as CAN-11E12-VL-cUn-13;
[00082] SEQ ID NO: 51 представляет собой последовательность вариабельной области легкой цепи антитела против ИЛ-31, обозначаемую в данном документе как CAN-11E12_VL_cUn_1;[00082] SEQ ID NO: 51 is the light chain variable region sequence of the anti-IL-31 antibody, referred to herein as CAN-11E12_VL_cUn_1;
[00083] SEQ ID NO: 52 представляет собой нуклеотидную последовательность, кодирующую последовательность вариабельной области легкой цепи антитела против ИЛ-31, обозначаемую в данном документе как CAN-11Е12-VL-cUn-1;[00083] SEQ ID NO: 52 is a nucleotide sequence encoding a light chain variable region sequence of an anti-IL-31 antibody, referred to herein as CAN-11E12-VL-cUn-1;
[00084] SEQ ID NO: 53 соответствует аминокислотной последовательности конструкции полноразмерного ИЛ-31 собаки для экспрессии в Е. coli;[00084] SEQ ID NO: 53 corresponds to the amino acid sequence of the full-length canine IL-31 construct for expression in E. coli;
[00085] SEQ ID NO: 54 соответствует нуклеотидной последовательности[00085] SEQ ID NO: 54 corresponds to the nucleotide sequence
конструкции полноразмерного ИЛ-31 собаки для экспрессии в Е. coli;constructs of full-length canine IL-31 for expression in E. coli;
[00086] SEQ ID NO: 55 представляет собой нуклеотидную последовательность, кодирующую последовательность вариабельной области тяжелой цепи антитела против фактора роста нервов (ФРН, англ. «NGF») антитела, обозначаемого в данном документе как ZTS-841;[00086] SEQ ID NO: 55 is a nucleotide sequence encoding a heavy chain variable region sequence of an anti-nerve growth factor (NGF) antibody of the antibody designated herein as ZTS-841;
[00087] SEQ ID NO: 56 представляет собой аминокислотную последовательность, кодирующую последовательность вариабельной области тяжелой цепи антитела против ФРН, обозначаемого в данном документе как ZTS-841;[00087] SEQ ID NO: 56 is an amino acid sequence encoding the heavy chain variable region sequence of an anti-NGF antibody designated herein as ZTS-841;
[00088] SEQ ID NO: 57 представляет собой CDR1 вариабельной области тяжелой цепи антитела против ФРН, обозначаемого в данном документе как ZTS-841;[00088] SEQ ID NO: 57 is the CDR1 of the heavy chain variable region of the anti-NGF antibody designated herein as ZTS-841;
[00089] SEQ ID NO: 58 представляет собой CDR2 вариабельной области тяжелой цепи антитела против ФРН, обозначаемого в данном документе как ZTS-841;[00089] SEQ ID NO: 58 is the CDR2 of the heavy chain variable region of the anti-NGF antibody designated herein as ZTS-841;
[00090] SEQ ID NO: 59 представляет собой CDR3 вариабельной области тяжелой цепи антитела против ФРН, обозначаемого в данном документе как ZTS-841;[00090] SEQ ID NO: 59 is the CDR3 of the heavy chain variable region of the anti-NGF antibody designated herein as ZTS-841;
[00091] SEQ ID NO: 60 представляет собой нуклеотидную последовательность, кодирующую последовательность вариабельной области легкой цепи антитела против ФРН, обозначаемого в данном документе как ZTS-841;[00091] SEQ ID NO: 60 is a nucleotide sequence encoding a light chain variable region sequence of an anti-NGF antibody designated herein as ZTS-841;
[00092] SEQ ID NO: 61 представляет собой аминокислотную последовательность, кодирующую последовательность вариабельной области легкой цепи антитела против ФРН, обозначаемого в данном документе как ZTS-841;[00092] SEQ ID NO: 61 is an amino acid sequence encoding the light chain variable region sequence of an anti-NGF antibody designated herein as ZTS-841;
[00093] SEQ ID NO: 62 представляет собой CDR1 вариабельной области легкой цепи антитела против ФРН, обозначаемого в данном документе как ZTS-841;[00093] SEQ ID NO: 62 is the CDR1 of the light chain variable region of the anti-NGF antibody designated herein as ZTS-841;
[00094] SEQ ID NO: 63 представляет собой CDR2 вариабельной области легкой цепи антитела против ФРН, обозначаемого в данном документе как ZTS-841;[00094] SEQ ID NO: 63 is CDR2 of the light chain variable region of the anti-NGF antibody designated herein as ZTS-841;
[00095] SEQ ID NO: 64 представляет собой CDR3 вариабельной области легкой цепи антитела против ФРН, обозначаемого в данном документе как ZTS-841;[00095] SEQ ID NO: 64 is the CDR3 of the light chain variable region of the anti-NGF antibody designated herein as ZTS-841;
[00096] SEQ ID NO: 65 представляет собой аминокислотную последовательность мутантного домена СН3 IgGB, положения 341-447;[00096] SEQ ID NO: 65 is the amino acid sequence of the mutant CH3 domain of IgGB, positions 341-447;
[00097] SEQ ID NO: 66 представляет собой аминокислотную последовательность мутантной области внутри домена СН3 IgGB;[00097] SEQ ID NO: 66 is the amino acid sequence of a mutant region within the CH3 domain of IgGB;
[00098] SEQ ID NO: 67 представляет собой нуклеотидную последовательность легкой цепи антитела против ИЛ-31, обозначаемого в данном документе как ZTS-00008183;[00098] SEQ ID NO: 67 is the nucleotide sequence of the light chain of the anti-IL-31 antibody designated herein as ZTS-00008183;
[00099] SEQ ID NO: 68 представляет собой аминокислотную последовательность легкой цепи антитела против ИЛ-31, обозначаемого в данном документе как ZTS-00008183;[00099] SEQ ID NO: 68 is the amino acid sequence of the light chain of the anti-IL-31 antibody designated herein as ZTS-00008183;
[000100] SEQ ID NO: 69 представляет собой нуклеотидную последовательность тяжелой цепи антитела против ИЛ-31, обозначаемого в данном документе как ZTS-00008183;[000100] SEQ ID NO: 69 is the nucleotide sequence of the heavy chain of the anti-IL-31 antibody designated herein as ZTS-00008183;
[000101] SEQ ID NO: 70 представляет собой аминокислотную последовательность тяжелой цепи антитела против ИЛ-31, обозначаемого в данном документе как ZTS-00008183;[000101] SEQ ID NO: 70 is the amino acid sequence of the heavy chain of the anti-IL-31 antibody designated herein as ZTS-00008183;
[000102] SEQ ID NO: 71 представляет собой CDR1 вариабельной области тяжелой цепи антитела против трансформирующего фактора роста (ТФР, англ. «TGF»)-β1,3 антитела, обозначаемого в данном документе как ZTS-426;[000102] SEQ ID NO: 71 is the CDR1 of the heavy chain variable region of the anti-transforming growth factor (TGF)-β1,3 antibody, herein designated as ZTS-426;
[000103] SEQ ID NO: 72 представляет собой CDR2 вариабельной области тяжелой цепи антитела против ТФР-β1,3, обозначаемого в данном документе как ZTS-426;[000103] SEQ ID NO: 72 is the CDR2 of the heavy chain variable region of the anti-TGF-β1,3 antibody, referred to herein as ZTS-426;
[000104] SEQ ID NO: 73 представляет собой CDR3 вариабельной области тяжелой цепи антитела против ТФР-β1,3, обозначаемого в данном документе как ZTS-426;[000104] SEQ ID NO: 73 is the CDR3 of the heavy chain variable region of the anti-TGF-β1,3 antibody, referred to herein as ZTS-426;
[000105] SEQ ID NO: 74 представляет собой CDR1 вариабельной области легкой цепи антитела против ТФР-β1,3, обозначаемого в данном документе как ZTS-426;[000105] SEQ ID NO: 74 is the CDR1 of the light chain variable region of the anti-TGF-β1,3 antibody, referred to herein as ZTS-426;
[000106] SEQ ID NO: 75 представляет собой CDR2 вариабельной области легкой цепи антитела против ТФР-β1,3, обозначаемого в данном документе как ZTS-426;[000106] SEQ ID NO: 75 is CDR2 of the light chain variable region of the anti-TGF-β1,3 antibody, referred to herein as ZTS-426;
[000107] SEQ ID NO: 76 представляет собой CDR3 вариабельной области легкой цепи антитела против ТФР-β1,3, обозначаемого в данном документе как ZTS-426;[000107] SEQ ID NO: 76 is the CDR3 of the light chain variable region of the anti-TGF-β1,3 antibody, referred to herein as ZTS-426;
[000108] SEQ ID NO: 77 представляет собой аминокислотную последовательность тяжелой цепи антитела против ТФР-β1,3, обозначаемого в данном документе как ZTS-426;[000108] SEQ ID NO: 77 is the amino acid sequence of the heavy chain of the anti-TGF-β1,3 antibody, referred to herein as ZTS-426;
[000109] SEQ ID NO: 78 представляет собой нуклеотидную последовательность тяжелой цепи антитела против ТФР-β1,3, обозначаемого в данном документе как ZTS-426;[000109] SEQ ID NO: 78 is the nucleotide sequence of the heavy chain of the anti-TGF-β1,3 antibody, referred to herein as ZTS-426;
[000110] SEQ ID NO: 79 представляет собой аминокислотную последовательность легкой цепи антитела против ТФР-β1,3, обозначаемого в данном документе как ZTS-426;[000110] SEQ ID NO: 79 is the amino acid sequence of the light chain of the anti-TGF-β1,3 antibody referred to herein as ZTS-426;
[000111] SEQ ID NO: 80 представляет собой нуклеотидную последовательность легкой цепи антитела против ТФР-β1,3, обозначаемого в данном документе как ZTS-426;[000111] SEQ ID NO: 80 is the nucleotide sequence of the light chain of the anti-TGF-β1,3 antibody referred to herein as ZTS-426;
[000112] SEQ ID NO: 81 представляет собой CDR1 вариабельной области тяжелой цепи антитела против ТФР-β1, обозначаемого в данном документе как ZTS-501;[000112] SEQ ID NO: 81 is the CDR1 of the heavy chain variable region of the anti-TGF-β1 antibody referred to herein as ZTS-501;
[000113]SEQ ID NO: 82 представляет собой CDR2 вариабельной области тяжелой цепи антитела против ТФР-β1, обозначаемого в данном документе как ZTS-501;[000113]SEQ ID NO: 82 is the CDR2 of the heavy chain variable region of the anti-TGF-β1 antibody referred to herein as ZTS-501;
[000114]SEQ ID NO: 83 представляет собой CDR3 вариабельной области тяжелой цепи антитела против ТФР-β1, обозначаемого в данном документе как ZTS-501;[000114]SEQ ID NO: 83 is the CDR3 of the heavy chain variable region of the anti-TGF-β1 antibody referred to herein as ZTS-501;
[000115] SEQ ID NO: 84 представляет собой CDR1 вариабельной области легкой цепи антитела против ТФР-β1, обозначаемого в данном документе как ZTS-501;[000115] SEQ ID NO: 84 is the CDR1 of the light chain variable region of the anti-TGF-β1 antibody referred to herein as ZTS-501;
[000116] SEQ ID NO: 85 представляет собой CDR2 вариабельной области легкой цепи антитела против ТФР-β1, обозначаемого в данном документе как ZTS-501;[000116] SEQ ID NO: 85 is the CDR2 of the light chain variable region of the anti-TGF-β1 antibody referred to herein as ZTS-501;
[000117] SEQ ID NO: 86 представляет собой CDR3 вариабельной области легкой цепи антитела против ТФР-β1, обозначаемого в данном документе как ZTS-501;[000117] SEQ ID NO: 86 is the CDR3 of the light chain variable region of the anti-TGF-β1 antibody referred to herein as ZTS-501;
[000118] SEQ ID NO: 87 представляет собой аминокислотную последовательность тяжелой цепи антитела против ТФР-β1, обозначаемого в данном документе как ZTS-501;[000118] SEQ ID NO: 87 is the amino acid sequence of the heavy chain of the anti-TGF-β1 antibody referred to herein as ZTS-501;
[000119] SEQ ID NO: 88 представляет собой нуклеотидную последовательность тяжелой цепи антитела против ТФР-β1, обозначаемого в данном документе как ZTS-501.[000119] SEQ ID NO: 88 is the nucleotide sequence of the heavy chain of the anti-TGF-β1 antibody referred to herein as ZTS-501.
[000120] SEQ ID NO: 89 представляет собой аминокислотную последовательность легкой цепи антитела против ТФР-β1, обозначаемого в данном документе как ZTS-501;[000120] SEQ ID NO: 89 is the amino acid sequence of the light chain of the anti-TGF-β1 antibody referred to herein as ZTS-501;
[000121] SEQ ID NO: 90 представляет собой нуклеотидную последовательность легкой цепи антитела против ТФР-β1, обозначаемого в данном документе как ZTS-501;[000121] SEQ ID NO: 90 is the nucleotide sequence of the light chain of the anti-TGF-β1 antibody referred to herein as ZTS-501;
[000122] SEQ ID NO: 91 представляет собой CDR1 вариабельной области тяжелой цепи антитела против ТФР-β1,2,3, обозначаемого в данном документе как ZTS-4155;[000122] SEQ ID NO: 91 is the CDR1 of the heavy chain variable region of the anti-TGF-β1,2,3 antibody, referred to herein as ZTS-4155;
[000123] SEQ ID NO: 92 представляет собой CDR2 вариабельной области тяжелой цепи антитела против ТФР-β1,2,3, обозначаемого в данном документе как ZTS-4155;[000123] SEQ ID NO: 92 is the CDR2 of the heavy chain variable region of the anti-TGF-β1,2,3 antibody, referred to herein as ZTS-4155;
[000124] SEQ ID NO: 93 представляет собой CDR3 вариабельной области тяжелой цепи антитела против ТФР-β1,2,3, обозначаемого в данном документе как ZTS-4155;[000124] SEQ ID NO: 93 is the CDR3 of the heavy chain variable region of the anti-TGF-β1,2,3 antibody, referred to herein as ZTS-4155;
[000125] SEQ ID NO: 94 представляет собой CDR1 вариабельной области легкой цепи антитела против ТФР-β1,2,3, обозначаемого в данном документе как ZTS-4155;[000125] SEQ ID NO: 94 is the CDR1 of the light chain variable region of the anti-TGF-β1,2,3 antibody, referred to herein as ZTS-4155;
[000126] SEQ ID NO: 95 представляет собой CDR2 вариабельной области легкой цепи антитела против ТФР-β1,2,3, обозначаемого в данном документе как ZTS-4155;[000126] SEQ ID NO: 95 is the CDR2 of the light chain variable region of the anti-TGF-β1,2,3 antibody, referred to herein as ZTS-4155;
[000127] SEQ ID NO: 96 представляет собой CDR3 вариабельной области легкой цепи антитела против ТФР-β1,2,3, обозначаемого в данном документе как ZTS-4155;[000127] SEQ ID NO: 96 is the CDR3 of the light chain variable region of the anti-TGF-β1,2,3 antibody, referred to herein as ZTS-4155;
[000128] SEQ ID NO: 97 представляет собой аминокислотную последовательность тяжелой цепи антитела против ТФР-β1,2,3, обозначаемого в данном документе как ZTS-4155;[000128] SEQ ID NO: 97 is the amino acid sequence of the heavy chain of the anti-TGF-β1,2,3 antibody, referred to herein as ZTS-4155;
[000129] SEQ ID NO: 98 представляет собой нуклеотидную последовательность тяжелой цепи антитела против ТФР-β1,2,3, обозначаемого в данном документе как ZTS-4155;[000129] SEQ ID NO: 98 is the nucleotide sequence of the heavy chain of the anti-TGF-β1,2,3 antibody, referred to herein as ZTS-4155;
[000130] SEQ ID NO: 99 представляет собой аминокислотную последовательность легкой цепи антитела против ТФР-β1,2,3, обозначаемого в данном документе как ZTS-4155;[000130] SEQ ID NO: 99 is the amino acid sequence of the light chain of the anti-TGF-β1,2,3 antibody referred to herein as ZTS-4155;
[000131] SEQ ID NO: 100 представляет собой нуклеотидную последовательность легкой цепи антитела против ТФР-β1,2,3, обозначаемого в данном документе как ZTS-4155;[000131] SEQ ID NO: 100 is the nucleotide sequence of the light chain of the anti-TGF-β1,2,3 antibody, referred to herein as ZTS-4155;
[000132] SEQ ID NO: 101 представляет собой CDR1 вариабельной области тяжелой цепи антитела против ТФР-β1,2,3, обозначаемого в данном документе как ZTS-122;[000132] SEQ ID NO: 101 is the CDR1 of the heavy chain variable region of the anti-TGF-β1,2,3 antibody, referred to herein as ZTS-122;
[000133] SEQ ID NO: 102 представляет собой CDR2 вариабельной области тяжелой цепи антитела против ТФР-β1,2,3, обозначаемого в данном документе как ZTS-122;[000133] SEQ ID NO: 102 is the CDR2 of the heavy chain variable region of the anti-TGF-β1,2,3 antibody, referred to herein as ZTS-122;
[000134] SEQ ID NO: 103 представляет собой CDR3 вариабельной области тяжелой цепи антитела против ТФР-β1,2,3, обозначаемого в данном документе как ZTS-122;[000134] SEQ ID NO: 103 is the CDR3 of the heavy chain variable region of the anti-TGF-β1,2,3 antibody, referred to herein as ZTS-122;
[000135] SEQ ID NO: 104 представляет собой CDR1 вариабельной области легкой цепи антитела против ТФР-β1,2,3, обозначаемого в данном документе как ZTS-122;[000135] SEQ ID NO: 104 is the CDR1 of the light chain variable region of the anti-TGF-β1,2,3 antibody, referred to herein as ZTS-122;
[000136] SEQ ID NO: 105 представляет собой CDR2 вариабельной области легкой цепи антитела против ТФР-β1,2,3, обозначаемого в данном документе как ZTS-122;[000136] SEQ ID NO: 105 is CDR2 of the light chain variable region of the anti-TGF-β1,2,3 antibody, referred to herein as ZTS-122;
[000137] SEQ ID NO: 106 представляет собой CDR3 вариабельной области легкой цепи антитела против ТФР-β1,2,3, обозначаемого в данном документе как ZTS-122;[000137] SEQ ID NO: 106 is the CDR3 of the light chain variable region of the anti-TGF-β1,2,3 antibody, referred to herein as ZTS-122;
[000138] SEQ ID NO: 107 представляет собой аминокислотную последовательность тяжелой цепи антитела против ТФР-β1,2,3, обозначаемого в данном документе как ZTS-122;[000138] SEQ ID NO: 107 is the amino acid sequence of the heavy chain of the anti-TGF-β1,2,3 antibody, referred to herein as ZTS-122;
[000139] SEQ ID NO: 108 представляет собой нуклеотидную последовательность тяжелой цепи антитела против ТФР-β1,2,3, обозначаемого в данном документе как ZTS-122;[000139] SEQ ID NO: 108 is the nucleotide sequence of the heavy chain of the anti-TGF-β1,2,3 antibody, referred to herein as ZTS-122;
[000140] SEQ ID NO: 109 представляет собой аминокислотную последовательность легкой цепи антитела против ТФР-β1,2,3, обозначаемого в данном документе как ZTS-122;[000140] SEQ ID NO: 109 is the amino acid sequence of the light chain of the anti-TGF-β1,2,3 antibody, referred to herein as ZTS-122;
[000141] SEQ ID NO: 110 представляет собой нуклеотидную последовательность легкой цепи антитела против ТФР-β1,2,3, обозначаемого в данном документе как ZTS-122;[000141] SEQ ID NO: 110 is the nucleotide sequence of the light chain of the anti-TGF-β1,2,3 antibody, referred to herein as ZTS-122;
[000142]SEQ ID NO: 111 представляет собой CDR1 вариабельной области тяжелой цепи антитела против ТФР-β1,2,3, обозначаемого в данном документе как ZTS-207;[000142]SEQ ID NO: 111 is the CDR1 of the heavy chain variable region of the anti-TGF-β1,2,3 antibody, referred to herein as ZTS-207;
[000143] SEQ ID NO: 112 представляет собой CDR2 вариабельной области тяжелой цепи антитела против ТФР-β1,2,3, обозначаемого в данном документе как ZTS-207;[000143] SEQ ID NO: 112 is the CDR2 of the heavy chain variable region of the anti-TGF-β1,2,3 antibody, referred to herein as ZTS-207;
[000144] SEQ ID NO: 113 представляет собой CDR3 вариабельной области тяжелой цепи антитела против ТФР-β1,2,3, обозначаемого в данном документе как ZTS-207;[000144] SEQ ID NO: 113 is the CDR3 of the heavy chain variable region of the anti-TGF-β1,2,3 antibody, referred to herein as ZTS-207;
[000145] SEQ ID NO: 114 представляет собой CDR1 вариабельной области легкой цепи антитела против ТФР-β1,2,3, обозначаемого в данном документе как ZTS-207;[000145] SEQ ID NO: 114 is the CDR1 of the light chain variable region of the anti-TGF-β1,2,3 antibody, referred to herein as ZTS-207;
[000146] SEQ ID NO: 115 представляет собой CDR2 вариабельной области легкой цепи антитела против ТФР-β1,2,3, обозначаемого в данном документе как ZTS-207;[000146] SEQ ID NO: 115 is CDR2 of the light chain variable region of the anti-TGF-β1,2,3 antibody, referred to herein as ZTS-207;
[000147] SEQ ID NO: 116 представляет собой CDR3 вариабельной области легкой цепи антитела против ТФР-β1,2,3, обозначаемого в данном документе как ZTS-207;[000147] SEQ ID NO: 116 is the CDR3 of the light chain variable region of the anti-TGF-β1,2,3 antibody, referred to herein as ZTS-207;
[000148] SEQ ID NO: 117 представляет собой аминокислотную последовательность тяжелой цепи антитела против ТФР-β1,2,3, обозначаемого в данном документе как ZTS-207;[000148] SEQ ID NO: 117 is the amino acid sequence of the heavy chain of the anti-TGF-β1,2,3 antibody, referred to herein as ZTS-207;
[000149] SEQ ID NO: 118 представляет собой нуклеотидную последовательность тяжелой цепи антитела против ТФР-β1,2,3, обозначаемого в данном документе как ZTS-207;[000149] SEQ ID NO: 118 is the nucleotide sequence of the heavy chain of the anti-TGF-β1,2,3 antibody, referred to herein as ZTS-207;
[000150] SEQ ID NO: 119 представляет собой аминокислотную последовательность легкой цепи антитела против ТФР-β1,2,3, обозначаемого в данном документе как ZTS-207;[000150] SEQ ID NO: 119 is the amino acid sequence of the light chain of the anti-TGF-β1,2,3 antibody referred to herein as ZTS-207;
[000151] SEQ ID NO: 120 представляет собой нуклеотидную последовательность легкой цепи антитела против ТФР-β1,2,3, обозначаемого в данном документе как ZTS-207.[000151] SEQ ID NO: 120 is the nucleotide sequence of the light chain of the anti-TGF-β1,2,3 antibody, referred to herein as ZTS-207.
ПОДРОБНОЕ ОПИСАНИЕ СУЩНОСТИ ИЗОБРЕТЕНИЯDETAILED DESCRIPTION OF THE ESSENCE OF THE INVENTION
[000152] Данное изобретение можно легче понять, обратившись к следующему подробному описанию, которое является частью данного документа. Следует понимать, что данное изобретение не ограничено конкретными продуктами, способами, условиями или параметрами, описанными и (или) показанными в данном документе, и что терминология, употребляемая в данном документе, предназначена только для описания конкретных вариантов осуществления данного изобретения в качестве примера и не предназначена для ограничения заявленного изобретения.[000152] The present invention can be better understood by reference to the following detailed description, which forms a part of this document. It is to be understood that the present invention is not limited to the specific products, methods, conditions, or parameters described and/or shown herein, and that the terminology used herein is intended only to describe specific embodiments of the present invention by way of example and is not intended to limit the claimed invention.
[000153] Если в данном документе не определено иное, научные и технические термины, употребляемые в связи с данной заявкой, имеют значения, которые обычно понимаются рядовыми специалистами в данной области техники. Кроме того, если контекст не требует иного, термины в единственном числе включают в себя множественное число, а термины во множественном числе включают в себя единственное число.[000153] Unless otherwise defined herein, scientific and technical terms used in connection with this application have the meanings commonly understood by those of ordinary skill in the art. Furthermore, unless the context otherwise requires, terms in the singular include the plural, and terms in the plural include the singular.
[000154] Как указано выше и по всему тексту данного документа, следующие термины и сокращения, если не указано иное, следует понимать как имеющие следующие значения.[000154] As stated above and throughout this document, the following terms and abbreviations, unless otherwise specified, shall be understood to have the following meanings.
ОпределенияDefinitions
[000155] В данном документе формы единственного числа включают в себя ссылку на множественное число, и ссылка на конкретное числовое значение включает в себя по меньшей мере указанное конкретное значение, если контекст явно не указывает на иное. Следовательно, например, ссылка на «молекулу» или «соединение» является ссылкой на одну или большее число таких молекул или соединений и их эквивалентов, известных специалистам в данной области техники, и так далее. При употреблении в контексте данного документа термин «множество» означает больше чем один. При указании диапазона, другой вариант осуществления данного изобретения включает в себя интервал от одного конкретного значения и (или) до другого конкретного значения. Подобным образом, когда значения указаны как приблизительные величины с использованием предшествующего слова «около», следует понимать, что конкретное значение образует другой вариант осуществления данного изобретения. Все диапазоны являются включающими и могут комбинироваться.[000155] As used herein, the singular forms "a" and "an" include a plural reference, and reference to a particular numerical value includes at least the stated particular value, unless the context clearly dictates otherwise. Thus, for example, reference to a "molecule" or "compound" is a reference to one or more such molecules or compounds and their equivalents known to those skilled in the art, and so on. When used in the context of this document, the term "plurality" means more than one. When a range is specified, another embodiment of the invention includes an interval from one particular value and/or to another particular value. Similarly, when values are specified as approximate quantities using the preceding word "about," it is to be understood that the particular value forms another embodiment of the invention. All ranges are inclusive and may be combined.
[000156] В описании и формуле данного изобретения нумерация аминокислотных остатков в тяжелой цепи иммуноглобулина соответствует индексу ЕС, как по Кабату - как в работе Kabat et al., Sequences of Proteins of Immunological Interest, 5th Ed. Public Health Service, National Institutes of Health, Bethesda, Md. (1991). «Индекс EC, как по Кабату» относится к нумерации остатков в антителе IgG и отражен в данном документе на фиг. 2.[000156] In the description and claims of the present invention, the numbering of amino acid residues in the immunoglobulin heavy chain corresponds to the EC index as in Kabat, as in Kabat et al., Sequences of Proteins of Immunological Interest,5th Ed. Public Health Service, National Institutes of Health, Bethesda, Md. (1991). "EC index as in Kabat" refers to the numbering of residues in an IgG antibody and is reflected herein in Fig. 2.
[000157] Термин «выделенная», когда он употребляется по отношению к нуклеиновой кислоте, представляет собой нуклеиновую кислоту, которая идентифицирована и отделена по меньшей мере от одной загрязняющей нуклеиновой кислоты, с которой она обычно ассоциирована в своем природном источнике. Выделенная нуклеиновая кислота пребывает в форме или в окружении, которые отличны от тех, в которых она встречается в природе. Следовательно, молекулы выделенной нуклеиновой кислоты отличаются от молекулы нуклеиновой кислоты, существующей в естественных клетках. Молекула выделенной нуклеиновой кислоты включает в себя молекулу нуклеиновой кислоты, содержащуюся в клетках, которые обычно экспрессируют закодированный в них полипептид, когда, например, указанная молекула нуклеиновой кислоты находится в плазмиде или в хромосомном расположении, отличном от расположения в естественных клетках. Выделенная нуклеиновая кислота может присутствовать в одноцепочечной или двухцепочечной форме. Когда молекула выделенной нуклеиновой кислоты предназначена для использования в экспрессии белка, соответствующий олигонуклеотид или полинуклеотид будет содержать, как минимум, смысловую или кодирующую цепь, но может содержать как смысловую, так и антисмысловую цепи (т.е. может быть двухцепочечным).[000157] The term "isolated," when used with respect to a nucleic acid, is a nucleic acid that has been identified and separated from at least one contaminating nucleic acid with which it is normally associated in its natural source. An isolated nucleic acid is in a form or environment that is different from that in which it is found in nature. Consequently, isolated nucleic acid molecules are different from a nucleic acid molecule that exists in natural cells. An isolated nucleic acid molecule includes a nucleic acid molecule contained in cells that normally express the polypeptide encoded therein, when, for example, said nucleic acid molecule is in a plasmid or in a chromosomal location different from that in natural cells. An isolated nucleic acid may be present in single-stranded or double-stranded form. When an isolated nucleic acid molecule is intended for use in protein expression, the corresponding oligonucleotide or polynucleotide will contain at least a sense or coding strand, but may contain both sense and antisense strands (i.e., may be double-stranded).
[000158] Молекула нуклеиновой кислоты является «функционально связанной» или «функционально ассоциированной», когда она находится в функциональной взаимосвязи с другой молекулой нуклеиновой кислоты. Например, промотор или энхансер функционально связан с кодирующей последовательностью нуклеиновой кислоты, если он влияет на транскрипцию данной последовательности; или сайт связывания рибосомы функционально связан с кодирующей последовательностью нуклеиновой кислоты, если он расположен так, чтобы облегчить ее трансляцию. Молекула нуклеиновой кислоты, кодирующая вариант области Fc, функционально связана с молекулой нуклеиновой кислоты, кодирующей гетерологичный белок (т.е. белок или его функциональный фрагмент, которые если существуют в природе, то не содержат область Fc), если она расположена так, что экспрессируемый слитый белок содержит указанные гетерологичный белок или его функциональный фрагмент, примыкающие либо в положении 5', либо в положении 3' к указанному вариантному полипептиду области Fc; указанный гетерологичный белок может непосредственно примыкать к указанному вариантному полипептиду области Fc или может быть отделен от него линкерной последовательностью любых длины и состава. Подобным образом, молекула полипептида (употребляется в данном документе как синоним термина «белок») является «функционально связанной» или «функционально ассоциированной», когда она находится в функциональной взаимосвязи с другим полипептидом.[000158] A nucleic acid molecule is "operably linked" or "functionally associated" when it is in a functional relationship with another nucleic acid molecule. For example, a promoter or enhancer is operably linked to a nucleic acid coding sequence if it affects the transcription of that sequence; or a ribosome binding site is operably linked to a nucleic acid coding sequence if it is positioned to facilitate its translation. A nucleic acid molecule encoding a variant Fc region is operably linked to a nucleic acid molecule encoding a heterologous protein (i.e., a protein or functional fragment thereof that, if naturally occurring, does not comprise an Fc region) if it is positioned such that the expressed fusion protein comprises said heterologous protein or functional fragment thereof adjacent at either the 5' or 3' position to said variant Fc region polypeptide; The heterologous protein may be directly adjacent to the variant Fc region polypeptide or may be separated from it by a linker sequence of any length and composition. Similarly, a polypeptide molecule (used herein as synonymous with the term "protein") is "functionally linked" or "functionally associated" when it is in a functional relationship with another polypeptide.
[000159] При употреблении в контексте данного документа термин «функциональный фрагмент», употребляемый по отношению к полипептиду или белку (например, вариантной области Fc или моноклональному антителу), относится к фрагментам такого белка, которые сохраняют по меньшей мере одну функцию указанного полноразмерного полипептида. Размер фрагментов может варьировать от шести аминокислот до всей аминокислотной последовательности полноразмерного полипептида минус одна аминокислота. Функциональный фрагмент полипептида вариантной области Fc согласно данному изобретению сохраняет по меньшей мере одно «аминокислотное замещение», как определено в данном документе. Функциональный фрагмент полипептида вариантной области Fc сохраняет по меньшей мере одну известную в данной области техники функцию, связанную с областью Fc (например, АЗКЦ, КЗЦ, связывание с рецептором Fc, связывание с Clq, подавление рецепторов клеточной поверхности или может, например, увеличивать период полужизни in vivo или in vitro полипептида, с которым он функционально ассоциирован).[000159] As used herein, the term "functional fragment" when used with respect to a polypeptide or protein (e.g., a variant Fc region or a monoclonal antibody) refers to fragments of such protein that retain at least one function of the full-length polypeptide. Fragments can range in size from six amino acids to the entire amino acid sequence of the full-length polypeptide minus one amino acid. A functional fragment of a variant Fc region polypeptide of the present invention retains at least one "amino acid substitution" as defined herein. A functional fragment of a variant Fc region polypeptide retains at least one function known in the art associated with an Fc region (e.g., ADCC, CDC, Fc receptor binding, Clq binding, downregulation of cell surface receptors, or can, for example, increase the in vivo or in vitro half-life of the polypeptide with which it is functionally associated).
[000160] Термин «очищенный» или «очистка» относится к существенному удалению из образца по меньшей мере одного загрязняющего вещества. Например, антигенспецифическое антитело может быть очищено путем полного или существенного удаления (по меньшей мере 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95% или больше, предпочтительно - по меньшей мере 96%, 97%, 98% или 99%) по меньшей мере одного загрязняющего белка, не являющегося иммуноглобулином; оно также может быть очищено путем удаления белка иммуноглобулина, который не связывается с тем же антигеном. Удаление белков, не являющихся иммуноглобулинами, и (или) удаление иммуноглобулинов, которые не связывают конкретный антиген, приводит к повышению процентного содержания антигенспецифических иммуноглобулинов в данном образце. В другом примере полипептид (например, иммуноглобулин), экспрессируемый в бактериальных клетках-хозяевах, очищают путем полного или существенного удаления белков клеток-хозяев; следовательно, процентное содержание указанного полипептида в данном образце повышается.[000160] The term "purified" or "purification" refers to the substantial removal of at least one contaminant from a sample. For example, an antigen-specific antibody may be purified by completely or substantially removing (at least 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95% or more, preferably at least 96%, 97%, 98% or 99%) at least one contaminating non-immunoglobulin protein; it may also be purified by removing an immunoglobulin protein that does not bind the same antigen. Removing non-immunoglobulin proteins and/or removing immunoglobulins that do not bind a particular antigen results in an increased percentage of antigen-specific immunoglobulins in a given sample. In another example, a polypeptide (e.g., an immunoglobulin) expressed in bacterial host cells is purified by completely or substantially removing host cell proteins; therefore, the percentage of said polypeptide in a given sample is increased.
[000161] Термин «нативный» при употреблении по отношению к полипептиду (например, к области Fc), употребляется в данном документе, чтобы указать, что данный полипептид имеет аминокислотную последовательность, состоящую из аминокислотной последовательности полипептида, обычно встречающегося в природе, или его встречающегося в природе полиморфизма. Нативный полипептид (например, нативная область Fc) может быть получен рекомбинантным способом или может быть выделен из природного источника.[000161] The term "native," when used with respect to a polypeptide (e.g., an Fc region), is used herein to indicate that the polypeptide has an amino acid sequence consisting of the amino acid sequence of a polypeptide typically found in nature, or a naturally occurring polymorphism thereof. A native polypeptide (e.g., a native Fc region) may be recombinantly produced or may be isolated from a natural source.
[000162] Термин «вектор экспрессии» при употреблении в контексте данного документа относятся к рекомбинантной молекуле ДНК, содержащей желаемую кодирующую последовательность и соответствующие последовательности нуклеиновых кислот, необходимые для экспрессии данной функционально связанной кодирующей последовательности в конкретном организме-хозяине.[000162] The term "expression vector" as used herein refers to a recombinant DNA molecule containing a desired coding sequence and the corresponding nucleic acid sequences necessary for the expression of the operably linked coding sequence in a particular host organism.
[000163] При употреблении в контексте данного документа термин «клетка-хозяин» относится к любой эукариотической или прокариотической клетке (например, бактериальные клетки, такие как Е. coli, клетки СНО, клетки дрожжей, клетки млекопитающих, клетки птиц, клетки амфибий, клетки растений, клетки рыб и клетки насекомых), независимо от того, находятся ли они in vitro, in situ или in vivo.[000163] As used in the context of this document, the term "host cell" refers to any eukaryotic or prokaryotic cell (e.g., bacterial cells such as E. coli, CHO cells, yeast cells, mammalian cells, avian cells, amphibian cells, plant cells, fish cells, and insect cells), whether in vitro, in situ, or in vivo.
[000164] При употреблении в контексте данного документа термин «область Fc» относится к С-концевой области тяжелой цепи иммуноглобулина. «Область Fc» может представлять собой нативную последовательность области Fc или вариантную область Fc. Хотя общепринятые границы области Fc тяжелой цепи иммуноглобулина могут варьировать, область Fc тяжелой цепи собачьего IgG обычно определяется как простирающаяся, например, от аминокислотного остатка в положении 231 до его карбоксильного конца. В некоторых вариантах осуществления данного изобретения варианты содержат только части области Fc и могут включать в себя или не включать в себя карбоксильный конец. Область Fc иммуноглобулина, как правило, содержит два константных домена - СН2 и СН3. В некоторых вариантах осуществления данного изобретения представлены варианты, имеющие один или большее число константных доменов. В других вариантах осуществления данного изобретения представлены варианты без таких константных доменов (или только с частями таких константных доменов).[000164] As used herein, the term "Fc region" refers to the C-terminal region of an immunoglobulin heavy chain. The "Fc region" may be a native sequence Fc region or a variant Fc region. Although the generally accepted boundaries of the Fc region of an immunoglobulin heavy chain may vary, the Fc region of a canine IgG heavy chain is typically defined as extending, for example, from amino acid residue position 231 to its carboxyl terminus. In some embodiments, variants comprise only portions of the Fc region and may or may not include the carboxyl terminus. An immunoglobulin Fc region typically comprises two constant domains, CH2 and CH3. Some embodiments of the invention include variants having one or more constant domains. Other embodiments of the invention include variants without such constant domains (or with only portions of such constant domains).
[000165] «Домен СН2» области Fc собачьего IgG, как правило, простирается, например, примерно от аминокислоты 231 до примерно аминокислоты 340 (см. фиг. 2В). Домен СН2 уникален тем, что он не связан тесно с другим доменом. Две N-связанные разветвленные углеводные цепи расположены между двумя доменами СН2 интактной нативной молекулы IgG.[000165] The "CH2 domain" of the Fc region of canine IgG typically extends, for example, from approximately amino acid 231 to approximately amino acid 340 (see Fig. 2B). The CH2 domain is unique in that it is not closely associated with another domain. Two N-linked branched carbohydrate chains are located between the two CH2 domains of the intact native IgG molecule.
[000166] «Домен СН3» области Fc собачьего IgG, как правило, представляет собой участок остатков, находящийся в С-концевом положении относительно домена СН2 в области Fc, простирающейся, например, примерно от аминокислотного остатка 341 до примерно аминокислотного остатка 447 (см. фиг. 2В).[000166] The "CH3 domain" of the Fc region of canine IgG is typically a stretch of residues located at the C-terminal position relative to the CH2 domain in the Fc region, extending, for example, from about amino acid residue 341 to about amino acid residue 447 (see Fig. 2B).
[000167] «Функциональная область Fc» обладает «эффекторной функцией» нативной последовательности области Fc. По меньшей мере однаэффекторная функция полипептида, содержащего вариант области Fc согласно данному изобретению, может быть усилена или снижена по сравнению с полипептидом, содержащим нативную область Fc или родительскую область данного варианта Fc. Примеры эффекторных функций включают в себя следующие, но не ограничиваются ими: связывание Clq; комплемент-зависимую цитотоксичность (КЗЦ, англ. «CDC»); связывание рецептора Fc; антителозависимую клеточно-опосредованную цитотоксичность (АЗКЦ, англ. «ADCC»); фагоцитоз; снижение экспрессии рецепторов клеточной поверхности (например, В-клеточного рецептора - ВКР, англ. «BCR») и т.д. Такие эффекторные функции могут требовать того, чтобы область Fc была функционально связана со связывающим доменом (например, вариабельным доменом антитела), и их можно оценить с использованием различных анализов (например, анализ связывания Fc, анализы АЗКЦ, анализы КЗЦ, деплеция целевых клеток из образцов цельной или фракционированной крови и т.д.).[000167] A "functional Fc region" has the "effector function" of a native sequence Fc region. At least one effector function of a polypeptide comprising a variant Fc region according to the invention may be enhanced or reduced compared to a polypeptide comprising a native Fc region or the parental region of the variant Fc region. Examples of effector functions include, but are not limited to: Clq binding; complement-dependent cytotoxicity (CDC); Fc receptor binding; antibody-dependent cell-mediated cytotoxicity (ADCC); phagocytosis; downregulation of cell surface receptors (e.g., B cell receptor - BCR), etc. Such effector functions may require the Fc region to be functionally linked to a binding domain (e.g., the variable domain of an antibody) and can be assessed using a variety of assays (e.g., Fc binding assay, ADCC assays, CDC assays, depletion of target cells from whole or fractionated blood samples, etc.).
[000168] «Нативная последовательность области Fc» или «область Fc дикого типа» относятся к аминокислотной последовательности, которая идентична аминокислотной последовательности области Fc, обычно встречающейся в природе. Иллюстративные нативные последовательности собачьих областей Fc показаны на фиг. 2 и включают в себя нативную последовательность области Fc собачьего IgGB_65.[000168] A "native sequence Fc region" or "wild-type Fc region" refers to an amino acid sequence that is identical to the amino acid sequence of an Fc region typically found in nature. Exemplary native sequences of canine Fc regions are shown in Fig. 2 and include the native sequence of the Fc region of canine IgGB_65.
[000169] «Вариант области Fc» содержит аминокислотную последовательность, которая отличается от нативной последовательности области Fc (или ее фрагмента) по меньшей мере одним «аминокислотным замещением», как определено в данном документе. В предпочтительных вариантах осуществления данного изобретения указанный вариант области Fc имеет по меньшей мере одно аминокислотное замещение по сравнению с нативной последовательностью области Fc или по сравнению с областью Fc родительского полипептида, предпочтительно 1, 2, 3, 4 или 5 аминокислотных замещений в нативной последовательности области Fc или в области Fc родительского полипептида. В альтернативном варианте осуществления данного изобретения вариант области Fc может быть сгенерирован в соответствии с описанными в данном документе способами, и указанный вариант области Fc может быть слит с гетерологичным полипептидом по выбору, таким как вариабельный домен антитела или полипептид, не являющийся антителом, например, связывающий домен рецептора или лиганда.[000169] An "Fc region variant" comprises an amino acid sequence that differs from a native Fc region (or fragment thereof) by at least one "amino acid substitution" as defined herein. In preferred embodiments, said Fc region variant has at least one amino acid substitution compared to the native Fc region sequence or compared to the Fc region of the parent polypeptide, preferably 1, 2, 3, 4, or 5 amino acid substitutions in the native Fc region sequence or in the Fc region of the parent polypeptide. In an alternative embodiment, an Fc region variant can be generated according to the methods described herein, and said Fc region variant can be fused to a heterologous polypeptide of choice, such as an antibody variable domain or a non-antibody polypeptide, such as a receptor or ligand binding domain.
[000170] При употреблении в контексте данного документа термин «производное» в контексте полипептидов относится к полипептиду, который содержит аминокислотную последовательность, которая была изменена введением замещения аминокислотного остатка. Термин «производное» при употреблении в контексте данного документа также относится к полипептиду, который был модифицирован путем ковалентного присоединения к данному полипептиду молекулы любого типа. Например, но не в порядке ограничения, антитело может быть модифицировано, например, путем гликозилирования, ацетилирования, пэгилирования, фосфорилирования, амидирования, дериватизации известными защитными / блокирующими группами, протеолитического расщепления, связывания с клеточным лигандом или другим белком и т.д. Производный полипептид может быть получен путем химических модификаций с использованием методик, известных специалистам в данной области техники, включая, но не ограничиваясь ими, специфическое химическое расщепление, ацетилирование, формилирование, метаболический синтез туникамицина и т.д. Кроме того, производный полипептид обладает функцией, которая сходна или идентична функции полипептида, из которого он был получен. Следует понимать, что полипептид, содержащий вариант области Fc согласно данному изобретению, может представлять собой производное, как определено в данном документе, предпочтительно дериватизация происходит внутри области Fc.[000170] As used herein, the term "derivative" in the context of polypeptides refers to a polypeptide that comprises an amino acid sequence that has been altered by introducing an amino acid residue substitution. The term "derivative" as used herein also refers to a polypeptide that has been modified by covalently attaching a molecule of any type to the polypeptide. For example, but not by way of limitation, an antibody can be modified, for example, by glycosylation, acetylation, pegylation, phosphorylation, amidation, derivatization with known protecting/blocking groups, proteolytic cleavage, binding to a cellular ligand or another protein, etc. The derivative polypeptide can be obtained by chemical modifications using techniques known to those skilled in the art, including, but not limited to, specific chemical cleavage, acetylation, formylation, metabolic synthesis of tunicamycin, etc. Furthermore, the derivative polypeptide has a function that is similar or identical to the function of the polypeptide from which it was derived. It should be understood that the polypeptide comprising the Fc region variant according to the present invention can be a derivative as defined herein, preferably the derivatization occurs within the Fc region.
[000171] «По существу собачьего происхождения» при употреблении в контексте данного документа в отношении полипептида (например, области Fc или моноклонального антитела), означает, что данный полипептид имеет аминокислотную последовательность, которая по меньшей мере на 80%, по меньшей мере на 85%, более предпочтительно по меньшей мере на 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, или еще более предпочтительно - по меньшей мере на 95%, 95%, 97%, 98% или на 99% гомологична нативному собачьему аминополипептиду.[000171] "Substantially of canine origin" when used herein with respect to a polypeptide (e.g., an Fc region or a monoclonal antibody) means that the polypeptide has an amino acid sequence that is at least 80%, at least 85%, more preferably at least 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, or even more preferably at least 95%, 95%, 97%, 98%, or 99% homologous to a native canine aminopolypeptide.
[000172] Термины «рецептор Fc» и «FcR» употребляются для описания рецептора, который связывается с участком Fc (например, с участком Fc антитела). Предпочтительный FcR представляет собой FcR с природной последовательностью. Более того, предпочтительный FcR представляет собой тот, который связывает антитело IgG (гамма-рецептор) и включает в себя рецепторы подклассов Fc гамма RI, Fc гамма RII, Fc гамма RIII, включая аллельные варианты и формы данных рецепторов после альтернативного сплайсинга. Другой предпочтительный FcR включает в себя неонатальный рецептор - FcRn, который отвечает за перенос материнских IgG к плоду (Guyer et al., J. Immunol. 117: 587 (1976); и Kim et al., J. Immunol. 24: 249 (1994)). В данном документе термин «FcR» охватывает и другие FcR, включительно с теми, которые будут идентифицированы в будущем.[000172] The terms "Fc receptor" and "FcR" are used to describe a receptor that binds to an Fc region (e.g., an Fc region of an antibody). A preferred FcR is a native sequence FcR. Moreover, a preferred FcR is one that binds an IgG antibody (a gamma receptor) and includes receptors of the Fc gamma RI, Fc gamma RII, Fc gamma RIII subclasses, including allelic variants and alternatively spliced forms of these receptors. Another preferred FcR includes the neonatal receptor, FcRn, which is responsible for the transfer of maternal IgG to the fetus (Guyer et al., J. Immunol. 117: 587 (1976); and Kim et al., J. Immunol. 24: 249 (1994)). In this document, the term "FcR" includes other FcRs, including those that will be identified in the future.
[000173] Фраза «антителозависимая клеточно-опосредованная цитотоксичность», или «АЗКЦ», относится к клеточно-опосредованной реакции, в которой неспецифические цитотоксические клетки (например, неспецифические), которые экспрессируют рецепторы FcR (например, клетки естественные киллеры («NK-клетки»), нейтрофилы и макрофаги) распознают связанное антитело на целевой клетке и впоследствии вызывают лизис данных целевых клеток. Первичные клетки, опосредующие АЗКЦ, - NK-клетки, экспрессируют только Fc гамма RIII, тогда как моноциты экспрессируют Fc гамма RI, Fc гамма RII и Fc гамма RIII.[000173] The phrase "antibody-dependent cell-mediated cytotoxicity" or "ADCC" refers to a cell-mediated response in which non-specific cytotoxic cells (e.g., non-specific) that express FcR receptors (e.g., natural killer cells ("NK cells"), neutrophils, and macrophages) recognize bound antibody on a target cell and subsequently cause lysis of these target cells. The primary cells mediating ADCC, NK cells, express only Fc gamma RIII, whereas monocytes express Fc gamma RI, Fc gamma RII, and Fc gamma RIII.
[000174] При употреблении в контексте данного документа фраза «эффекторные клетки» относится к лейкоцитам (предпочтительно собачьим), которые экспрессируют один или большее число рецепторов FcR и выполняют эффекторные функции. Предпочтительно, данные клетки экспрессируют по меньшей мере Fc гамма RIII и выполняют эффекторную функцию АЗКЦ. Примеры лейкоцитов, которые опосредуют АЗКЦ, включают в себя моноклональные клетки периферической крови (МКПК, англ. «РВМС»), NK-клетки, моноциты, цитотоксические Т-клетки и нейтрофилы. Эффекторные клетки могут быть выделены из нативного источника (например, из крови или из МКПК).[000174] As used herein, the phrase "effector cells" refers to leukocytes (preferably canine) that express one or more FcR receptors and perform effector functions. Preferably, these cells express at least Fc gamma RIII and perform ADCC effector function. Examples of leukocytes that mediate ADCC include peripheral blood monoclonal cells (PBMCs), NK cells, monocytes, cytotoxic T cells, and neutrophils. Effector cells can be isolated from a native source (e.g., from blood or from PBMCs).
[000175] Вариант полипептида с «измененной» аффинностью связывания с FcRn представляет собой полипептид, который имеет либо повышенную (т.е. увеличенную, большую или более высокую), либо сниженную (т.е. уменьшенную, меньшую или более низкую) аффинность связывания с FcRn по сравнению с родительским полипептидом данного варианта или с полипептидом, содержащим нативную область Fc, при измерении при рН 6,0. Вариант полипептида, который проявляет повышенное связывание или повышенную аффинность связывания с FcRn, связывает FcRn с более высокой аффинностью, чем родительский полипептид. Вариант полипептида, который проявляет сниженное связывание или сниженную аффинность связывания с FcRn, связывает FcRn с более низкой аффинностью, чем его родительский полипептид. Такие варианты, которые демонстрируют сниженное связывание с FcRn, могут обладать незначительным или вообще не иметь заметного связывания с FcRn, например, 0-20% связывания с FcRn, по сравнению с родительским полипептидом. Вариант полипептида, который связывает FcRn с «повышенной аффинностью» по сравнению с его родительским полипептидом, представляет собой тот, который связывает FcRn с более высокой аффинностью связывания, чем родительский полипептид, когда количества указанного варианта полипептида и указанного родительского полипептида в анализе связывания по существу одинаковы, и все другие условия идентичны. Например, вариант полипептида с повышенной аффинностью связывания с FcRn может демонстрировать от около 1,10-кратного до около 100-кратного (более типично - от около 1,2-кратного до около 50-кратного) повышения аффинности связывания с FcRn по сравнению с родительским полипептидом, при этом аффинность связывания с FcRn определяют, например, в анализе способом твердофазного иммуноферментного анализа (ТИФА, англ. «ELISA») или другим способом, доступным рядовому специалисту в данной области техники.[000175] A polypeptide variant with an "altered" binding affinity for FcRn is a polypeptide that has either an increased (i.e., increased, greater, or higher) or a decreased (i.e., decreased, less, or lower) binding affinity for FcRn compared to the parent polypeptide of the variant or to a polypeptide containing a native Fc region, when measured at pH 6.0. A polypeptide variant that exhibits increased binding or increased binding affinity for FcRn binds FcRn with a higher affinity than the parent polypeptide. A polypeptide variant that exhibits decreased binding or decreased binding affinity for FcRn binds FcRn with a lower affinity than its parent polypeptide. Such variants that exhibit reduced binding to FcRn may exhibit little or no detectable binding to FcRn, e.g., 0-20% of FcRn binding, compared to the parent polypeptide. A polypeptide variant that binds FcRn with "enhanced affinity" compared to its parent polypeptide is one that binds FcRn with a higher binding affinity than the parent polypeptide when the amounts of said polypeptide variant and said parent polypeptide in the binding assay are substantially the same, and all other conditions are identical. For example, a variant polypeptide with enhanced binding affinity for FcRn may exhibit from about 1.10-fold to about 100-fold (more typically from about 1.2-fold to about 50-fold) increased binding affinity for FcRn compared to the parent polypeptide, wherein the binding affinity for FcRn is determined, for example, in an enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA) or other method available to one of ordinary skill in the art.
[000176] При употреблении в контексте данного документа термин «аминокислотное замещение» относится к замене по меньшей мере одного существующего аминокислотного остатка в данной аминокислотной последовательности другим, отличным от него «замещающим» аминокислотным остатком. Замещающий остаток или остатки могут быть «встречающимися в природе замещающими аминокислотными остатками» (т.е. кодируемыми генетическим кодом) и выбранными из: аланина (Ala); аргинина (Arg); аспарагина (Asn); аспарагиновой кислоты (Asp); цистеина (Cys); глутамина (Gln); глутаминовой кислоты (Glu); глицина (Gly); гистидина (His); изолейцина (Ile); лейцина (Leu); лизина (Lys); метионина (Met); фенилаланина (Phe); пролина (Pro); серина (Ser); треонина (Thr); триптофана (Тгр); тирозина (Tyr); и валина (Val). Замещение одним или большим числом не встречающихся в природе аминокислотных остатков также охватывается определением аминокислотного замещения, указанным в данном документе. «Не встречающийся в природе аминокислотный остаток» относится к остатку, отличному от перечисленных выше встречающихся в природе аминокислотных остатков, который способен ковалентно связывать соседний (-е) аминокислотный (-е) остаток (остатки) в полипептидной цепи. Примеры не встречающихся в природе аминокислотных остатков включают в себя норлейцин, орнитин, норвалин, гомосерин и другие аналоги аминокислотных остатков, такие как те, которые описаны в работе Ellman et al. Meth. Enzym. 202: 301-336 (1991).[000176] As used herein, the term "amino acid substitution" refers to the replacement of at least one existing amino acid residue in a given amino acid sequence with a different, "replacement" amino acid residue. The replacement residue or residues may be "naturally occurring replacement amino acid residues" (i.e., encoded by the genetic code) and selected from: alanine (Ala); arginine (Arg); asparagine (Asn); aspartic acid (Asp); cysteine (Cys); glutamine (Gln); glutamic acid (Glu); glycine (Gly); histidine (His); isoleucine (Ile); leucine (Leu); lysine (Lys); methionine (Met); phenylalanine (Phe); proline (Pro); serine (Ser); threonine (Thr); tryptophan (Trp); tyrosine (Tyr); and valine (Val). Substitution with one or more unnatural amino acid residues is also encompassed by the definition of amino acid substitution set forth herein. "Unnatural amino acid residue" refers to a residue, other than the naturally occurring amino acid residues listed above, that is capable of covalently linking adjacent amino acid residue(s) in a polypeptide chain. Examples of unnatural amino acid residues include norleucine, ornithine, norvaline, homoserine, and other amino acid residue analogs such as those described in Ellman et al. Meth. Enzym. 202: 301–336 (1991).
[000177] Термин «сигнал анализа» относится к выходному сигналу любого способа выявления белок-белковых взаимодействий, включительно с, но не ограничиваясь ими, измерениями абсорбции в колориметрических анализах, интенсивности флуоресценции или распадов в минуту. Форматы анализа могут включать в себя ТИФА, сортировку клеток с активированной флуоресценцией (FACS) или другие способы. Изменение «сигнала анализа» может отражать изменение жизнеспособности клеток и (или) изменение кинетического показателя скорости обратной реакции, кинетического показателя скорости прямой реакции или обоих показателей. «Более высокий сигнал анализа» относится к измеренному выходному числу, которое больше, чем другое число (например, вариант может иметь более высокое (большее) измеренное число в анализе ТИФА по сравнению с родительским полипептидом). «Более низкий» сигнал анализа относится к измеренному выходному числу, которое меньше, чем другое число (например, вариант может иметь более низкое (меньшее) измеренное число в анализе ТИФА по сравнению с родительским полипептидом).[000177] The term "assay signal" refers to the output signal of any method for detecting protein-protein interactions, including, but not limited to, absorbance measurements in colorimetric assays, fluorescence intensity, or cpm. Assay formats may include ELISA, fluorescence-activated cell sorting (FACS), or other methods. A change in the "assay signal" may reflect a change in cell viability and/or a change in a kinetic measure of the reverse reaction rate, a kinetic measure of the forward reaction rate, or both. A "higher assay signal" refers to a measured output number that is greater than another number (e.g., a variant may have a higher (larger) measured number in an ELISA assay compared to the parent polypeptide). A "lower" assay signal refers to a measured output number that is less than another number (e.g., a variant may have a lower (lower) measured number in an ELISA assay compared to the parent polypeptide).
[000178] Термин «аффинность связывания» относится к константе равновесной диссоциации (выраженной в единицах концентрации), связанной с каждым взаимодействием связывания рецептора Fc с Fc. Аффинность связывания напрямую связана с кинетической константой скорости обратной реакции (как правило, указывается в единицах обратного времени, например, секунды-1), деленной на кинетическую константу скорости прямой реакции (как правило, указывается в единицах концентрации на единицу времени, например, моль/секунда). В общем, невозможно однозначно утверждать, вызваны ли изменения констант равновесной диссоциации различиями в скоростях прямой реакции, обратной реакции или и тем, и другим, если каждый из данных параметров не определен экспериментально (например, с помощью измерений по технологии BIACORE или SAPIDYNE).[000178] The term "binding affinity" refers to the equilibrium dissociation constant (expressed in units of concentration) associated with each Fc receptor-Fc binding interaction. Binding affinity is directly related to the kinetic rate constant of the reverse reaction (typically reported in units of reciprocal time, e.g., seconds-1 ) divided by the kinetic rate constant of the forward reaction (typically reported in units of concentration per unit time, e.g., mol/second). In general, it is not possible to definitively state whether changes in equilibrium dissociation constants are due to differences in the rates of the forward reaction, the reverse reaction, or both unless each of these parameters is determined experimentally (e.g., using BIACORE or SAPIDYNE measurements).
[000179] При употреблении в контексте данного документа термин «шарнирная область» относится к участку из аминокислот в собачьем IgG, простирающемуся, например, от положения 216 до положения 230 собачьего IgG. Шарнирные области других изотипов IgG могут быть выровнены с последовательностью IgG путем размещения остатков цистеина, образующих дисульфидные связи между тяжелыми цепями (S-S), в одних и тех же положениях.[000179] As used in the context of this document, the term "hinge region" refers to a stretch of amino acids in canine IgG extending, for example, from position 216 to position 230 of canine IgG. Hinge regions of other IgG isotypes can be aligned with the IgG sequence by placing cysteine residues that form interheavy chain disulfide bonds (S-S) at the same positions.
[000180] «Clq» представляет собой полипептид, который включает в себя сайт связывания для области Fc иммуноглобулина. Clq вместе с двумя сериновыми протеазами, Olr и Cls, образует комплекс Cl - первый компонент пути КЗЦ.[000180] "Clq" is a polypeptide that contains a binding site for the Fc region of immunoglobulin. Clq, together with two serine proteases, Olr and Cls, forms the Cl complex, the first component of the CDC pathway.
[000181] При употреблении в контексте данного документа термин «антитело», употребляемый взаимозаменяемо с термином «иммуноглобулин», или «Ig», употребляется в наиболее широком смысле и конкретно охватывает моноклональные антитела (включительно с полноразмерными моноклональными антителами), поликлональные антитела, мультиспецифические антитела (например, биспецифические антитела) и фрагменты антител при условии, что они проявляют желаемую биологическую активность или функциональную активность. Одноцепочечные антитела и химерные, собачьи или канинизированные антитела, а также химерные или CDR-привитые одноцепочечные антитела и тому подобное, содержащие части, полученные из разных видов, также охватываются данным изобретением и термином «антитело». Различные части таких антител могут быть соединены вместе химическим путем с помощью обычных методик, синтетическим путем или могут быть получены в виде непрерывного белка с использованием способов генной инженерии. Например, нуклеиновые кислоты, кодирующие химерную или канинизированную цепь, могут быть экспрессированы для получения непрерывного белка. См., например, патент США №4816567; патент США №4816397; WO 86/01533; патент США №5225539; и патенты США №5585089 и №5698762. См. также работу Newman, R. et al. BioTechnology, 10: 1455-1460, 1993, касательно приматизированного антитела и Ladner et al., патент США №4946778 и Bird, R.Е. et al., Science, 242: 423-426, 1988, касательно одноцепочечных антител. Следует понимать, что все формы антител, содержащих область Fc (или ее часть), охватываются в данном документе термином «антитело». Кроме того, антитело может быть помечено выявляемой меткой, иммобилизовано на твердой фазе и (или) конъюгировано с гетерологичным соединением (например, ферментом или токсином) в соответствии со способами, известными в данной области техники.[000181] When used in the context of this document, the term "antibody", when used interchangeably with the term "immunoglobulin" or "Ig", is used in the broadest sense and specifically encompasses monoclonal antibodies (including full-length monoclonal antibodies), polyclonal antibodies, multispecific antibodies (e.g., bispecific antibodies), and antibody fragments, provided that they exhibit the desired biological activity or functional activity. Single-chain antibodies and chimeric, canine, or caninized antibodies, as well as chimeric or CDR-grafted single-chain antibodies and the like, containing portions obtained from different species, are also encompassed by the present invention and the term "antibody". The various portions of such antibodies may be joined together chemically using conventional techniques, synthetically, or may be produced as a continuous protein using genetic engineering techniques. For example, nucleic acids encoding a chimeric or caninized chain can be expressed to produce a continuous protein. See, e.g., U.S. Patent No. 4,816,567; U.S. Patent No. 4,816,397; WO 86/01533; U.S. Patent No. 5,225,539; and U.S. Patent Nos. 5,585,089 and 5,698,762. See also Newman, R. et al. BioTechnology, 10: 1455-1460, 1993, regarding a primatized antibody and Ladner et al., U.S. Patent No. 4,946,778 and Bird, R.E. et al., Science, 242: 423-426, 1988, regarding single-chain antibodies. It should be understood that all forms of antibodies containing an Fc region (or a portion thereof) are encompassed by the term "antibody" herein. Furthermore, an antibody may be labeled with a detectable label, immobilized on a solid phase, and/or conjugated to a heterologous compound (e.g., an enzyme or toxin) according to methods known in the art.
[000182] При употреблении в контексте данного документа термин «фрагмент антитела» относится к части интактного антитела. Примеры фрагментов антител включают в себя, но не ограничиваются ими, линейные антитела; молекулы одноцепочечных антител; пептиды Fc или Fc', Fab и фрагменты Fab, и мультиспецифические антитела, образованные из фрагментов антител. Фрагменты антитела предпочтительно сохраняют по меньшей мере часть шарнира и, необязательно, область СН1 тяжелой цепи IgG. В других предпочтительных вариантах осуществления данного изобретения фрагменты антитела содержат по меньшей мере часть области СН2 или всю область СН2.[000182] As used herein, the term "antibody fragment" refers to a portion of an intact antibody. Examples of antibody fragments include, but are not limited to, linear antibodies; single-chain antibody molecules; Fc or Fc' peptides, Fabs and Fab fragments, and multispecific antibodies formed from antibody fragments. Antibody fragments preferably retain at least a portion of the hinge and, optionally, the CH1 region of the IgG heavy chain. In other preferred embodiments of the invention, antibody fragments comprise at least a portion of the CH2 region or the entire CH2 region.
[000183] При употреблении в контексте данного документа термин «функциональный фрагмент», когда он употребляется в отношении моноклонального антитела, предназначен для обозначения части моноклонального антитела, которая все еще сохраняет функциональную активность. Функциональная активность может представлять собой, например, антигенсвязывающую активность или специфичность, рецепторсвязывающую активность или специфичность, эффекторную функциональную активность и тому подобное. Функциональные фрагменты моноклонального антитела включают в себя, например, индивидуальные тяжелые или легкие цепи и их фрагменты, такие как VL, VH и Fd; моновалентные фрагменты, такие как Fv, Fab и Fab'; бивалентные фрагменты, такие как F(ab')2; одноцепочечный Fv (scFv); и фрагменты Fc. Данные термины описаны, например, в работах Harlowe and Lane, Antibodies: A Laboratory Manual, Cold Spring Harbor Laboratory, New York (1989); Molec. Biology and Biotechnology: A Comprehensive Desk Reference (Myers, R. A. (ed.), New York: VCH Publisher, Inc.); Huston et al., Cell Biophysics, 22: 189-224 (1993); Pluckthun and Skerra, Meth. Enzymol., 178: 497-515 (1989); и в работе Day, E. D., Advanced Immuno chemistry, Second Ed., Wiley-Liss, Inc., New York, N.Y. (1990). Термин «функциональный фрагмент» предназначен как включающий в себя, например, фрагменты, полученные протеазным расщеплением или восстановлением моноклонального антитела и способами рекомбинантной ДНК, известными специалистам в данной области техники.[000183] As used herein, the term "functional fragment" when used in relation to a monoclonal antibody is intended to refer to a portion of the monoclonal antibody that still retains functional activity. The functional activity may be, for example, antigen-binding activity or specificity, receptor-binding activity or specificity, effector functional activity, and the like. Functional fragments of a monoclonal antibody include, for example, individual heavy or light chains and fragments thereof, such as VL, VH, and Fd; monovalent fragments such as Fv, Fab, and Fab'; bivalent fragments such as F(ab')2; single-chain Fv (scFv); and Fc fragments. These terms are described, for example, in Harlowe and Lane, Antibodies: A Laboratory Manual, Cold Spring Harbor Laboratory, New York (1989); Molec. Biology and Biotechnology: A Comprehensive Desk Reference (Myers, R. A. (ed.), New York: VCH Publisher, Inc.); Huston et al., Cell Biophysics, 22: 189–224 (1993); Pluckthun and Skerra, Meth. Enzymol., 178: 497–515 (1989); and Day, E. D., Advanced Immunochemistry, Second Ed., Wiley-Liss, Inc., New York, N.Y. (1990). The term "functional fragment" is intended to include, for example, fragments obtained by protease cleavage or reconstitution of a monoclonal antibody and recombinant DNA techniques known to those skilled in the art.
[000184] При употреблении в контексте данного документа термин «фрагмент» относится к полипептиду, содержащему аминокислотную последовательность из по меньшей мере 5, 15, 20, 25, 40, 50, 70, 90, 100 или больше смежных аминокислотных остатков из аминокислотной последовательности другого полипептида. В предпочтительном варианте осуществления данного изобретения фрагмент полипептида сохраняет по меньшей мере одну функцию полноразмерного полипептида.[000184] As used herein, the term "fragment" refers to a polypeptide comprising an amino acid sequence of at least 5, 15, 20, 25, 40, 50, 70, 90, 100 or more contiguous amino acid residues from the amino acid sequence of another polypeptide. In a preferred embodiment of the invention, a fragment of a polypeptide retains at least one function of the full-length polypeptide.
[000185] При употреблении в контексте данного документа термин «химерное антитело» включает в себя моновалентные, бивалентные или поливалентные иммуноглобулины. Моновалентное химерное антитело представляет собой димер, образованный химерной тяжелой цепью, связанной посредством дисульфидных мостиков с химерной легкой цепью. Бивалентное химерное антитело представляет собой тетрамер, образованный двумя димерами тяжелая цепь - легкая цепь, связанными посредством по меньшей мере одного дисульфидного мостика. Химерная тяжелая цепь антитела для применения у собак содержит антигеневязывающую область, полученную из тяжелой цепи несобачьего антитела, которая связана с по меньшей мере частью константной области собачьей тяжелой цепи, такой как СН1 или СН2. Химерная легкая цепь антитела для применения у собак содержит антигенсвязывающую область, полученную из легкой цепи несобачьего антитела, связанную с по меньшей мере частью константной области собачьей легкой цепи (CL). Антитела, фрагменты или производные, имеющие химерные тяжелые цепи и легкие цепи с одинаковой или различной специфичностью связывания вариабельной области, можно также получить путем соответствующего объединения индивидуальных полипептидных цепей в соответствии с известными стадиями способа. При таком подходе организмы-хозяева, экспрессирующие химерные тяжелые цепи, культивируют отдельно от организмов-хозяев, экспрессирующих химерные легкие цепи, и цепи иммуноглобулина отдельно выделяют и затем объединяют.В качестве альтернативы, указанные организмы-хозяева могут быть совместно культивированы, и цепям дают возможность спонтанно ассоциироваться в культуральной среде с последующим извлечением собранного иммуноглобулина или фрагмента, либо как тяжелая, так и легкая цепи могут быть экспрессированы в одной и той же клетке-хозяине. Способы получения химерных антител хорошо известны в данной области техники (см., например, патент США №6284471; №5807715; №4816567; и №4816397).[000185] As used herein, the term "chimeric antibody" includes monovalent, bivalent, or multivalent immunoglobulins. A monovalent chimeric antibody is a dimer formed by a chimeric heavy chain linked via disulfide bridges to a chimeric light chain. A bivalent chimeric antibody is a tetramer formed by two heavy chain-light chain dimers linked via at least one disulfide bridge. A chimeric heavy chain antibody for use in dogs comprises an antigen-binding region derived from a heavy chain of a non-canine antibody that is linked to at least a portion of a constant region of a canine heavy chain, such as CH1 or CH2. A chimeric light chain antibody for use in dogs comprises an antigen-binding region derived from a non-canine antibody light chain linked to at least a portion of a canine light chain constant region (CL). Antibodies, fragments, or derivatives having chimeric heavy chains and light chains with the same or different variable region binding specificities can also be produced by appropriately combining individual polypeptide chains in accordance with known method steps. In this approach, host organisms expressing the chimeric heavy chains are cultured separately from host organisms expressing the chimeric light chains, and the immunoglobulin chains are separately isolated and then combined. Alternatively, these host organisms can be co-cultured, and the chains are allowed to spontaneously associate in the culture medium, followed by recovery of the assembled immunoglobulin or fragment, or both the heavy and light chains can be expressed in the same host cell. Methods for producing chimeric antibodies are well known in the art (see, for example, U.S. Pat. No. 6,284,471; No. 5,807,715; No. 4,816,567; and No. 4,816,397).
[000186] При употреблении в контексте данного документа «канинизированные» формы несобачьих (например, мышиных) антител (т.е. канинизированные антитела) представляют собой антитела, которые содержат минимальную последовательность, полученную из несобачьего иммуноглобулина, или не содержат такую последовательность. По большей части канинизированные антитела представляют собой собачьи иммуноглобулины (антитело-реципиент), в которых остатки из гипервариабельной области реципиента замещены остатками из гипервариабельной области вида, отличного от собаки (антитело-донор), такого как мышь, крыса, кролик или примат, отличный от человека, имеющими желаемые специфичность, аффинность и объем связывания. В некоторых случаях остатки каркасного участка (FR) собачьего иммуноглобулина замещены соответствующими остатками из вида, отличного от собаки. Кроме того, канинизированные антитела могут содержать остатки, которые не обнаруживаются в антителе-реципиенте или в антителе-доноре. Такие модификации, как правило, выполняют для дальнейшего улучшения характеристик антитела. Как правило, канинизированное антитело будет содержать по существу все из по меньшей мере одного и, как правило, двух вариабельных доменов, в которых все или по существу все гипервариабельные петли (области CDR) соответствуют таковым из иммуноглобулина из вида, отличного от собаки, и все или по существу все остатки FR представляют собой таковые из последовательности собачьего иммуноглобулина. Канинизированное антитело может также содержать по меньшей мере часть константной области иммуноглобулина (Fc), как правило - часть константной области собачьего иммуноглобулина.[000186] As used herein, "caninized" forms of non-canine (e.g., murine) antibodies (i.e., caninized antibodies) are antibodies that contain little or no sequence derived from a non-canine immunoglobulin. In most cases, caninized antibodies are canine immunoglobulins (the recipient antibody) in which residues from the hypervariable region of the recipient are replaced by residues from the hypervariable region of a non-canine species (the donor antibody), such as a mouse, rat, rabbit, or non-human primate, having the desired specificity, affinity, and binding extent. In some cases, framework region (FR) residues of the canine immunoglobulin are replaced by corresponding residues from a non-canine species. Additionally, caninized antibodies may contain residues that are not found in the recipient or donor antibody. Such modifications are typically performed to further improve the antibody's characteristics. Typically, a caninized antibody will contain substantially all of at least one, and typically two, variable domains, in which all or substantially all of the complementarity determining loops (CDRs) correspond to those of an immunoglobulin from a species other than a dog, and all or substantially all of the FR residues are those of a canine immunoglobulin sequence. A caninized antibody may also contain at least a portion of an immunoglobulin constant region (Fc), typically a portion of a canine immunoglobulin constant region.
[000187] При употреблении в контексте данного документа термин «иммуноадгезин» обозначает антителоподобные молекулы, которые объединяют домен связывания гетерологичного белка «адгезина» (например, рецептора, лиганда или фермента) с константным доменом иммуноглобулина. По своей структуре иммуноадгезины содержат слияние аминокислотной последовательности адгезина с желаемой специфичностью связывания, которая отличается от сайта распознавания и связывания антигена (антигенсвязывающего сайта) антитела (т.е. является «гетерологичной»), с последовательностью константного домена иммуноглобулина.[000187] As used in the context of this document, the term "immunoadhesin" refers to antibody-like molecules that combine the binding domain of a heterologous "adhesin" protein (e.g., a receptor, ligand, or enzyme) with an immunoglobulin constant domain. Structurally, immunoadhesins comprise a fusion of the amino acid sequence of an adhesin with the desired binding specificity, which is distinct from the antigen recognition and binding site (antigen-binding site) of an antibody (i.e., is "heterologous"), with the sequence of an immunoglobulin constant domain.
[000188] При употреблении в контексте данного документа термин «лигандсвязывающий домен» относится к любому нативному рецептору или любой его области или производному, сохраняющим по меньшей мере качественную лиганд связывающую способность соответствующего нативного рецептора. В определенных вариантах осуществления данного изобретения указанный рецептор получен из полипептида клеточной поверхности, имеющего внеклеточный домен, который гомологичен представителю суперсемейства иммуноглобулинов. Другие рецепторы, которые не являются представителями суперсемейства иммуноглобулинов, но, тем не менее, конкретно охватываются данным определением, представляют собой рецепторы цитокинов, и, в частности, рецепторы с активностью тирозинкиназы (рецепторные тирозинкиназы), представителей суперсемейств рецепторов гемопоэтина и фактора роста нервов, и молекулы клеточной адгезии (например, Е-, L- и Р-селектины).[000188] As used herein, the term "ligand-binding domain" refers to any native receptor or any region or derivative thereof that retains at least the qualitative ligand-binding capacity of the corresponding native receptor. In certain embodiments of the invention, the receptor is derived from a cell surface polypeptide having an extracellular domain that is homologous to a member of the immunoglobulin superfamily. Other receptors that are not members of the immunoglobulin superfamily but are nonetheless specifically encompassed by this definition are cytokine receptors, and in particular receptors with tyrosine kinase activity (receptor tyrosine kinases), members of the hematopoietin and nerve growth factor receptor superfamilies, and cell adhesion molecules (e.g., E-, L-, and P-selectins).
[000189] При употреблении в контексте данного документа термин «рецепторсвязывающий домен» относится к любому нативному лиганду рецептора, включительно, например, с молекулами клеточной адгезии, или любой области или производному указанного нативного лиганда, сохраняющим по меньшей мере качественную рецепторсвязывающую способность соответствующего нативного лиганда.[000189] When used in the context of this document, the term "receptor binding domain" refers to any native ligand of a receptor, including, for example, cell adhesion molecules, or any region or derivative of said native ligand that retains at least the qualitative receptor binding capacity of the corresponding native ligand.
[000190] При употреблении в контексте данного документа термин «выделенный» полипептид представляет собой полипептид, который был идентифицирован и отделен от и (или) выделен из компонента его естественной среды. Загрязняющие компоненты его естественной среды представляют собой материалы, которые будут мешать диагностическому или терапевтическому применению данного полипептида и могут включать в себя ферменты, гормоны и другие белковые или небелковые растворенные вещества. В некоторых вариантах осуществления данного изобретения выделенный полипептид очищают (1) до содержания полипептидов, составляющего больше чем 95% по массе, как определено методом Лоури, и предпочтительно - больше чем 99% по массе, (2) до степени, достаточной для получения по меньшей мере 15 остатков N-концевой или внутренней аминокислотной последовательности с использованием секвенатора с вращающейся чашкой, или (3) до однородности с помощью электрофореза в полиакриламидном геле с додецилсульфатом натрия (ДСН-ПААГ, англ. «SDS-PAGE») в восстанавливающих или невосстанавливающих условиях с использованием окрашивания синим кумасси или серебром. Выделенный полипептид включает в себя полипептид in situ в рекомбинантных клетках, поскольку по меньшей мере один компонент естественной среды такого полипептида не будет присутствовать. Как правило, однако, выделенный полипептид получают посредством по меньшей мере одной стадии очистки.[000190] As used in the context of this document, the term "isolated" polypeptide is a polypeptide that has been identified and separated from and/or isolated from a component of its natural environment. Contaminating components of its natural environment are materials that would interfere with the diagnostic or therapeutic use of the polypeptide and may include enzymes, hormones, and other proteinaceous or non-proteinaceous solutes. In some embodiments of the invention, the isolated polypeptide is purified (1) to a polypeptide content greater than 95% by weight as determined by the Lowry method, and preferably greater than 99% by weight, (2) to a degree sufficient to obtain at least 15 residues of the N-terminal or internal amino acid sequence using a spinning cup sequencer, or (3) to homogeneity using sodium dodecyl sulfate polyacrylamide gel electrophoresis (SDS-PAGE) under reducing or non-reducing conditions using Coomassie blue or silver staining. An isolated polypeptide includes a polypeptide in situ in recombinant cells, since at least one component of the natural environment of such a polypeptide will not be present. Typically, however, an isolated polypeptide is obtained by at least one purification step.
[000191] При употреблении в контексте данного документа термины «нарушение» и «заболевание» употребляются взаимозаменяемо для обозначения любого состояния, которое улучшилось бы от лечения вариантом полипептида (полипептидом, содержащим вариант области Fc согласно данному изобретению), включая хронические и острые нарушения или заболевания (например, патологические состояния, которые предрасполагают пациента к конкретному нарушению).[000191] When used in the context of this document, the terms "disorder" and "disease" are used interchangeably to refer to any condition that would benefit from treatment with a variant polypeptide (a polypeptide comprising a variant Fc region of the present invention), including chronic and acute disorders or diseases (e.g., pathological conditions that predispose a patient to a particular disorder).
[000192] При употреблении в контексте данного документа термин «рецептор» относится к полипептиду, способному связывать по меньшей мере один лиганд. Предпочтительный рецептор представляет собой рецептор поверхности клетки или растворимый рецептор, имеющий внеклеточный лигандсвязывающий домен и, необязательно, другие домены (например, трансмембранный домен, внутриклеточный домен и (или) мембранный якорь). Рецептор, подлежащий оценке в анализе, описанном в данном документе, может представлять собой интактный рецептор или его фрагмент, или его производное (например, слитый белок, содержащий связывающий домен рецептора, слитый с одним или большим числом гетерологичных полипептидов). Более того, рецептор, подлежащий оценке на предмет его связывающих свойств, может присутствовать в клетке или быть выделен и необязательно нанесен на планшет для анализа или на какую-либо другую твердую фазу, или может непосредственно быть помечен и использован в качестве зонда.[000192] As used herein, the term "receptor" refers to a polypeptide capable of binding at least one ligand. A preferred receptor is a cell surface receptor or a soluble receptor having an extracellular ligand-binding domain and, optionally, other domains (e.g., a transmembrane domain, an intracellular domain, and/or a membrane anchor). The receptor to be assessed in the assay described herein may be an intact receptor or a fragment thereof, or a derivative thereof (e.g., a fusion protein comprising a receptor binding domain fused to one or more heterologous polypeptides). Moreover, the receptor to be assessed for its binding properties may be present in a cell or isolated and optionally coated on an assay plate or some other solid phase, or may be directly labeled and used as a probe.
IgG собачьих дикого типаWild-type canine IgG
[000193] Собачьи IgG хорошо известны в данной области техники и полностью описаны, например, вработе Bergeron et al., 2014, Vet Immunol Immunopathol., vol. 157(1-2), pages 31-41. В одном варианте осуществления данного изобретения собачий IgG представляет собой IgGA. В другом варианте осуществления данного изобретения собачий IgG представляет собой IgGB. В еще одном варианте осуществления данного изобретения собачий IgG представляет собой IgGC. В дополнительном варианте осуществления данного изобретения собачий IgG представляет собой IgGD. В конкретном варианте осуществления данного изобретения собачий IgG представляет собой IgGB_65.[000193] Canine IgGs are well known in the art and are fully described, for example, in Bergeron et al., 2014, Vet Immunol Immunopathol., vol. 157(1-2), pages 31-41. In one embodiment of the invention, the canine IgG is IgGA. In another embodiment of the invention, the canine IgG is IgGB. In another embodiment of the invention, the canine IgG is IgGC. In a further embodiment of the invention, the canine IgG is IgGD. In a specific embodiment of the invention, the canine IgG is IgGB_65 .
[000194] Аминокислотные и нуклеотидные последовательности IgGA, IgGB, IgGC и IgGD также хорошо известны в данной области техники.[000194] The amino acid and nucleotide sequences of IgGA , IgGB , IgGC and IgGD are also well known in the art.
[000195] В одном примере IgG согласно данному изобретению содержит константный домен, например, домены CH1, СН2 или СН3, или их комбинацию. В другом примере константный домен согласно данному изобретению содержит область Fc, включающую в себя, например, домены СН2 или СН3, или их комбинацию.[000195] In one example, an IgG of the present invention comprises a constant domain, such as a CH1, CH2, or CH3 domain, or a combination thereof. In another example, a constant domain of the present invention comprises an Fc region, such as a CH2 or CH3 domain, or a combination thereof.
[000196] В конкретном примере указанный константный домен дикого типа содержит аминокислотную последовательность, указанную в SEQ ID NO.: 2. В некоторых вариантах осуществления данного изобретения указанный константный домен дикого типа IgG представляет собой гомолог, вариант, изомер или функциональный фрагмент последовательности SEQ ID NO.: 2, но без какой-либо мутации в положении 434. Каждая возможность представляет собой отдельный вариант осуществления данного изобретения.[000196] In a specific example, said wild-type constant domain comprises the amino acid sequence set forth in SEQ ID NO.: 2. In some embodiments of the invention, said wild-type IgG constant domain is a homologue, variant, isomer, or functional fragment of the sequence SEQ ID NO.: 2, but without any mutation at position 434. Each possibility represents a separate embodiment of the invention.
[000197] Константные домены IgG также включают в себя полипептиды с аминокислотными последовательностями, по существу сходными с аминокислотной последовательностью указанных тяжелой и (или) легкой цепей. По существу та же аминокислотная последовательность определена в данном документе как последовательность, которая по меньшей мере на 70%, на 75%, на 80%, на 85%, на 90%, на 95% или на 99% идентична сравниваемой аминокислотной последовательности, как определено способом поиска FASTA в соответствии с работой Pearson and Lipman, Proc. Natl. Acad. Sci. USA 85: 2444-2448 (1988).[000197] IgG constant domains also include polypeptides with amino acid sequences substantially similar to the amino acid sequence of said heavy and/or light chains. Substantially the same amino acid sequence is defined herein as a sequence that is at least 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, or 99% identical to a reference amino acid sequence, as determined by the FASTA search method according to Pearson and Lipman, Proc. Natl. Acad. Sci. USA 85: 2444-2448 (1988).
[000198] Данное изобретение также включает в себя молекулы нуклеиновых кислот, которые кодируют IgG или их фрагменты, описанные в данном документе. В одном варианте осуществления данного изобретения указанные нуклеиновые кислоты могут кодировать тяжелую цепь антитела, содержащую, например, области CH1, СН2, СН3 или их комбинацию. В другом варианте осуществления данного изобретения указанные нуклеиновые кислоты могут кодировать тяжелую цепь антитела, содержащую, например, любую из областей VH или ее часть, или любую из областей CDR VH, включительно с любыми их вариантами. Данное изобретение также включает в себя молекулы нуклеиновых кислот, которые кодируют легкую цепь антитела, содержащую, например, любую из областей CL или ее часть, любую из областей VL или ее часть, или любую из областей CDR VL, включительно с любыми их вариантами. В определенных вариантах осуществления данного изобретения указанная нуклеиновая кислота кодирует как тяжелую, так и легкую цепи, или их части.[000198] The invention also includes nucleic acid molecules that encode IgG or fragments thereof described herein. In one embodiment of the invention, said nucleic acids may encode an antibody heavy chain comprising, for example, CH1, CH2, CH3 regions, or a combination thereof. In another embodiment of the invention, said nucleic acids may encode an antibody heavy chain comprising, for example, any of the VH regions or a portion thereof, or any of the VH CDR regions, including any variants thereof. The invention also includes nucleic acid molecules that encode an antibody light chain comprising, for example, any of the CL regions or a portion thereof, any of the VL regions or a portion thereof, or any of the VL CDR regions, including any variants thereof. In certain embodiments of the invention, said nucleic acid encodes both the heavy and light chains, or portions thereof.
[000199] Аминокислотная последовательность константного домена дикого типа, указанная в SEQ ID NO.: 2, кодируется последовательностью нуклеиновой кислоты, указанной в SEQ ID NO: 4.[000199] The amino acid sequence of the wild-type constant domain set forth in SEQ ID NO: 2 is encoded by the nucleic acid sequence set forth in SEQ ID NO: 4.
Модифицированные собачьи IgGModified canine IgG
[000200] Авторы данного изобретения обнаружили, что замещение аминокислотного остатка аспарагина (Asn или N) в положении 434 другой аминокислотой удивительно и неожиданно повысило аффинность к FcRn и увеличило период полужизни IgG. Термин «положение 434» при употреблении в контексте данного документа относится к положению, пронумерованному в соответствии с индексом ЕС, как по Кабату (Kabat et al., Sequences of Proteins of Immunological Interest, 5th Ed. Public Health Service, National Institutes of Health, Bethesda, Md. (1991)).[000200] The inventors of the present invention found that substitution of the asparagine (Asn or N) amino acid residue at position 434 with another amino acid surprisingly and unexpectedly increased the affinity for FcRn and increased the half-life of IgG. The term "position 434" when used in the context of this document refers to the position numbered according to the EU index, as per Kabat et al. (1991).
[000201] Соответственно, в одном варианте осуществления данного изобретения представлен модифицированный IgG, содержащий: константный домен собачьего IgG, содержащий по меньшей мере одно аминокислотное замещение по сравнению с константным доменом собачьего IgG дикого типа, при этом указанное замещение находится в аминокислотном остатке 434, пронумерованном в соответствии с индексом ЕС, как по Кабату. Аспарагин в положении 434 может быть замещен любой другой аминокислотой. Например, аспарагин в положении 434 может быть замещен гистидином (т.е. N434H), серином (т.е. N434S), аланином (т.е. N434A), фенилаланином (т.е. N434F), глицином (т.е. N434G), изолейцином (т.е. N434I), лизином (т.е. N434K), лейцином (т.е. N434L), метионином (т.е. N434M), глутамином (т.е. N434Q), аргинином (т.е. N434R), треонином (т.е. N434T), валином (т.е. N434V), триптофаном (т.е. N434W), тирозином (т.е. N434Y), цистеином (т.е. N434C), аспарагиновой кислотой (т.е. N434D), глутаминовой кислотой (т.е. N434E) или пролином (т.е. N434P). В конкретном варианте осуществления данного изобретения указанное замещение представляет собой замещение гистидином (например, N434H).[000201] Accordingly, in one embodiment of the present invention, there is provided a modified IgG comprising: a constant domain of a canine IgG comprising at least one amino acid substitution compared to a constant domain of a wild-type canine IgG, wherein said substitution is at amino acid residue 434, numbered according to the EU index, as per Kabat. The asparagine at position 434 may be substituted with any other amino acid. For example, asparagine at position 434 can be substituted with histidine (i.e., N434H), serine (i.e., N434S), alanine (i.e., N434A), phenylalanine (i.e., N434F), glycine (i.e., N434G), isoleucine (i.e., N434I), lysine (i.e., N434K), leucine (i.e., N434L), methionine (i.e., N434M), glutamine (i.e., N434Q), arginine (i.e., N434R), threonine (i.e., N434T), valine (i.e., N434V), tryptophan (i.e., N434W), tyrosine (i.e., N434Y), cysteine (i.e., N434C), aspartic acid (i.e., N434D), glutamic acid (i.e., N434E), or proline (i.e., N434P). In a particular embodiment of the invention, said substitution is a histidine substitution (e.g., N434H).
[000202] В конкретном примере мутантный константный домен согласно данному изобретению содержит аминокислотную последовательность, указанную в SEQ ID NO.: 1. В некоторых вариантах осуществления данного изобретения указанный мутантный константный домен IgG представляет собой гомолог, вариант, изомер или функциональный фрагмент последовательности SEQ ID NO.: 1, но с мутацией в положении 434. Каждая возможность представляет собой отдельный вариант осуществления данного изобретения.[000202] In a specific example, a mutant constant domain according to the present invention comprises the amino acid sequence indicated in SEQ ID NO.: 1. In some embodiments of the present invention, said mutant IgG constant domain is a homologue, variant, isomer, or functional fragment of the sequence SEQ ID NO.: 1, but with a mutation at position 434. Each possibility represents a separate embodiment of the present invention.
[000203] Аминокислотная последовательность мутантного константного домена, указанная в SEQ ID NO.: 1, кодируется соответствующей ей мутантной последовательностью нуклеиновой кислоты, например, мутантной формой последовательности нуклеиновой кислоты, указанной в SEQ ID NO.: 4. В некоторых вариантах осуществления данного изобретения кодон нуклеиновой кислоты, соответствующий положению 434 мутантной формы, содержит САС или CAT.[000203] The amino acid sequence of the mutant constant domain indicated in SEQ ID NO.: 1 is encoded by a corresponding mutant nucleic acid sequence, for example, a mutant form of the nucleic acid sequence indicated in SEQ ID NO.: 4. In some embodiments of the invention, the nucleic acid codon corresponding to position 434 of the mutant form comprises CAC or CAT.
[000204] В некоторых вариантах осуществления данного изобретения мутантный константный домен согласно данному изобретению содержит аминокислотную последовательность, указанную в SEQ ID NO.: 65 или 66. В некоторых вариантах осуществления данного изобретения указанный мутантный константный домен IgG представляет собой гомолог, вариант, изомер или функциональный фрагмент последовательности SEQ ID NO.: 65 или 66, но с мутацией в положении 434. Каждая возможность представляет собой отдельный вариант осуществления данного изобретения.[000204] In some embodiments of the invention, a mutant constant domain of the invention comprises an amino acid sequence as set forth in SEQ ID NO.: 65 or 66. In some embodiments of the invention, said mutant IgG constant domain is a homologue, variant, isomer, or functional fragment of the sequence of SEQ ID NO.: 65 or 66, but with a mutation at position 434. Each possibility represents a separate embodiment of the invention.
[000205] Аминокислотная последовательность мутантного константного домена, указанная в SEQ ID NO.: 65 или 66, кодируется соответствующей ей мутантной нуклеотидной последовательностью.[000205] The amino acid sequence of the mutant constant domain indicated in SEQ ID NO.: 65 or 66 is encoded by its corresponding mutant nucleotide sequence.
[000206] В одном аспекте данного изобретения модифицированный IgG согласно данному изобретению обеспечивает период полужизни, варьирующийся от около 10 суток до около 35 суток. В одном варианте осуществления данного изобретения модифицированный IgG согласно данному изобретению обеспечивает период полужизни, составляющий около 10, 12, 15, 17, 19, 20, 23, 26, 28, 30, 33 или 35 суток. В конкретном варианте осуществления данного изобретения модифицированный IgG согласно данному изобретению обеспечивает период полужизни, составляющий больше чем 30 суток.[000206] In one aspect of the invention, a modified IgG of the invention provides a half-life ranging from about 10 days to about 35 days. In one embodiment of the invention, a modified IgG of the invention provides a half-life of about 10, 12, 15, 17, 19, 20, 23, 26, 28, 30, 33, or 35 days. In a specific embodiment, a modified IgG of the invention provides a half-life of greater than 30 days.
[000207] В одном аспекте данного изобретения модифицированный IgG согласно данному изобретению поддерживает терапевтический уровень в сыворотке крови на протяжении периода времени, варьирующегося от около 1 месяца до около 7 месяцев. В одном варианте осуществления данного изобретения модифицированный IgG согласно данному изобретению поддерживает терапевтический уровень в сыворотке крови на протяжении около 7, 14, 28, 56, 84, 112, 140, 168 или 210 суток. В конкретном варианте осуществления данного изобретения модифицированный IgG согласно данному изобретению поддерживает терапевтический уровень в сыворотке крови на протяжении больше чем 3 месяцев.[000207] In one aspect of the invention, the modified IgG of the invention maintains a therapeutic level in the blood serum for a period of time ranging from about 1 month to about 7 months. In one embodiment of the invention, the modified IgG of the invention maintains a therapeutic level in the blood serum for about 7, 14, 28, 56, 84, 112, 140, 168, or 210 days. In a specific embodiment, the modified IgG of the invention maintains a therapeutic level in the blood serum for more than 3 months.
Способы получения молекул антител, представленных в данном изобретенииMethods for producing the antibody molecules provided in this invention
[000208] Способы получения молекул антител хорошо известны в данной области техники и полностью описаны в патентах США №8394925; №8088376; №8546543; №10336818; и №9803023, и в заявке на патент США №20060067930, которые включены в данный документ посредством ссылки во всей полноте. Могут применяться любые подходящие способ, процесс или технология, известные специалисту в данной области техники. Молекулу антитела, имеющую вариант области Fc согласно данному изобретению, можно получить в соответствии со способами, хорошо известными в данной области техники. В некоторых вариантах осуществления данного изобретения указанный вариант области Fc может быть слит с гетерологичный полипептидом по выбору, таким как вариабельный домен антитела или связывающий домен рецептора или лиганда.[000208] Methods for producing antibody molecules are well known in the art and are fully described in U.S. Pat. Nos. 8,394,925; 8,088,376; 8,546,543; 10,336,818; and 9,803,023, and U.S. Patent Application No. 20060067930, which are incorporated herein by reference in their entireties. Any suitable method, process, or technology known to one of skill in the art may be used. An antibody molecule having a variant Fc region of the present invention can be produced according to methods well known in the art. In some embodiments of the present invention, the variant Fc region may be fused to a heterologous polypeptide of choice, such as an antibody variable domain or a receptor or ligand binding domain.
[000209] С появлением способов молекулярной биологии и рекомбинантных технологий специалист в данной области техники может получить антитело и антителоподобные молекулы рекомбинантными средствами и, таким образом, генерировать последовательности генов, которые кодируют специфические аминокислотные последовательности, обнаруживаемые в полипептидной структуре антител. Такие антитела можно получать либо путем клонирования последовательностей генов, кодирующих полипептидные цепи указанных антител, либо путем прямого синтеза указанных полипептидных цепей со сборкой синтезированных цепей с образованием активных тетрамерных (H2L2) структур, обладающих аффинностью к специфическим эпитопам и антигенным детерминантам. Это позволило получить готовые антитела, имеющие последовательности, характерные для нейтрализующих антител из разных видов и источников.[000209] With the advent of molecular biology and recombinant technologies, one skilled in the art can produce antibodies and antibody-like molecules by recombinant means and thereby generate gene sequences that encode specific amino acid sequences found in the polypeptide structure of antibodies. Such antibodies can be obtained either by cloning the gene sequences encoding the polypeptide chains of said antibodies or by direct synthesis of said polypeptide chains with assembly of the synthesized chains to form active tetrameric (H2L2) structures with affinity for specific epitopes and antigenic determinants. This has made it possible to obtain ready-made antibodies having sequences characteristic of neutralizing antibodies from various species and sources.
[000210] Независимо от источника антител или способов их рекомбинантного получения, или способов их синтеза, in vitro или in vivo, с использованием трансгенных животных, больших клеточных культур лабораторного или коммерческого размера, с использованием трансгенных растений или путем прямого химического синтеза, в котором не используются живые организмы ни на одной стадии процесса, все антитела имеют сходную общую 3-мерную структуру. Данную структуру часто обозначают как H2L2, что относится к тому факту, что антитела обычно содержат две легкие (L) аминокислотные цепи и 2 тяжелые (Н) аминокислотные цепи. Обе цепи имеют участки, способные взаимодействовать со структурно комплементарной антигенной мишенью. Области, взаимодействующие с указанной мишенью, называются «вариабельными» областями, или «V»-областями, и характеризуются отличиями в аминокислотной последовательности от антител с различной антигенной специфичностью. Вариабельные участки цепи Н и цепи L содержат аминокислотные последовательности, способные специфически связываться с антигенными мишенями.[000210] Regardless of the source of antibodies or the methods of their recombinant production, or the methods of their synthesis, whether in vitro or in vivo, using transgenic animals, large laboratory or commercial cell cultures, using transgenic plants, or by direct chemical synthesis that does not use living organisms at any stage of the process, all antibodies have a similar general 3-dimensional structure. This structure is often referred to as H2L2, which refers to the fact that antibodies typically contain two light (L) amino acid chains and 2 heavy (H) amino acid chains. Both chains have regions capable of interacting with a structurally complementary antigenic target. The regions that interact with said target are called "variable" regions, or "V" regions, and are characterized by differences in amino acid sequence from antibodies with different antigenic specificities. The variable regions of the H chain and the L chain contain amino acid sequences capable of specifically binding to antigenic targets.
[000211] При употреблении в контексте данного документа термин «антигенсвязывающая область» относится к той части молекулы антитела, которая содержит аминокислотные остатки, которые взаимодействуют с антигеном и придают антителу его специфичность и аффинность к данному антигену. Антигенсвязывающая область антитела включает в себя «каркасные» аминокислотные остатки, необходимые для поддержания надлежащей конформации антигенсвязывающих остатков. Внутри вариабельных областей цепей Н и L, которые обеспечивают антигенсвязывающие области, находятся последовательности меньшего размера, получившие название «гипервариабельных» вследствие их крайней вариабельности между антителами различной специфичности. Такие гипервариабельные области также упоминаются как «области, определяющие комплементарность», или области «CDR». С областями CDR связана основная специфичность антитела к конкретной антигенной детерминантной структуре.[000211] As used herein, the term "antigen-binding region" refers to that portion of an antibody molecule that contains the amino acid residues that interact with an antigen and confer on the antibody its specificity and affinity for that antigen. The antigen-binding region of an antibody includes "framework" amino acid residues necessary to maintain the proper conformation of the antigen-binding residues. Within the variable regions of the H and L chains that provide the antigen-binding regions are smaller sequences called "hypervariable" sequences due to their extreme variability between antibodies of different specificities. Such hypervariable regions are also referred to as "complementarity-determining regions" or "CDRs." The CDRs are responsible for the essential specificity of an antibody for a particular antigenic determinant structure.
[000212] CDR представляют собой несмежные участки аминокислот в вариабельных областях, но, независимо от вида, было обнаружено, что позиционные местоположения этих критических аминокислотных последовательностей в вариабельных областях тяжелой и легкой цепей имеют сходные местоположения в аминокислотных последовательностях вариабельных цепей. Вариабельные тяжелые и легкие цепи всех антител имеют по три области CDR, каждая из которых не смежна с другими. У всех видов млекопитающих пептиды антител содержат константные (т.е. высококонсервативные) и вариабельные области, и внутри последних содержатся CDR и так называемые «каркасные области», состоящие из аминокислотных последовательностей внутри вариабельной области тяжелой или легкой цепей, но за пределами CDR.[000212] CDRs are non-contiguous stretches of amino acids in variable regions, but, regardless of species, the positional locations of these critical amino acid sequences in the variable regions of the heavy and light chains have been found to have similar locations in the amino acid sequences of the variable chains. The variable heavy and light chains of all antibodies have three CDRs, each non-contiguous. In all mammalian species, antibody peptides contain constant (i.e., highly conserved) and variable regions, and within the latter are CDRs and so-called "framework regions," consisting of amino acid sequences within the variable region of the heavy or light chain but outside the CDRs.
[000213] В данном изобретении дополнительно представлен вектор, включающий в себя по меньшей мере одну из нуклеиновых кислот, описанных выше. Поскольку генетический код является вырожденным, для кодирования конкретной аминокислоты может использоваться больше чем один кодон. Используя генетический код, можно идентифицировать одну или большее число различных нуклеотидных последовательностей, каждая из которых была бы способна кодировать данную аминокислоту. Вероятность того, что конкретный олигонуклеотид фактически будет составлять действительную кодирующую последовательность, можно оценить путем рассмотрения аномальных отношений спаривания оснований и частоты, с которой конкретный кодон действительно используется (для кодирования конкретной аминокислоты) в эукариотических или прокариотических клетках, экспрессирующих антитело или его часть. Такие «правила использования кодонов» описаны в работе Lathe, et al., 183 J. Molec. Biol. 1-12 (1985). Применяя «правила использования кодонов» согласно Lathe, можно идентифицировать единственную нуклеотидную последовательность или набор нуклеотидных последовательностей, которые содержат теоретическую «наиболее вероятную» нуклеотидную последовательность, способную кодировать последовательности собачьих IgG. Также предполагается, что области, кодирующие антитела для применения в данном изобретении, также можно получить путем изменения существующих генов антител с использованием стандартных методик молекулярной биологии, которые приводят к вариантам антител и пептидов, описанных в данном документе. Такие варианты включают в себя, но не ограничиваются ими, делеции, добавления и замещения в аминокислотной последовательности антител или пептидов.[000213] The present invention further provides a vector comprising at least one of the nucleic acids described above. Because the genetic code is degenerate, more than one codon may be used to encode a particular amino acid. Using the genetic code, one or more different nucleotide sequences can be identified, each of which would be capable of encoding a given amino acid. The likelihood that a particular oligonucleotide will actually constitute the actual coding sequence can be estimated by considering the anomalous base pairing relationships and the frequency with which a particular codon is actually used (to encode a particular amino acid) in eukaryotic or prokaryotic cells expressing the antibody or portion thereof. Such "codon usage rules" are described in Lathe, et al., 183 J. Molec. Biol. 1-12 (1985). By applying the "codon usage rules" of Lathe, it is possible to identify a single nucleotide sequence or set of nucleotide sequences that contain the theoretical "most probable" nucleotide sequence capable of encoding canine IgG sequences. It is also contemplated that antibody coding regions for use in this invention can also be obtained by altering existing antibody genes using standard molecular biology techniques, resulting in variants of the antibodies and peptides described herein. Such variants include, but are not limited to, deletions, additions, and substitutions in the amino acid sequence of the antibodies or peptides.
[000214] Например, одним из классов замещений являются консервативные аминокислотные замещения. Такие замещения представляют собой замещения, которые заменяют данную аминокислоту в пептиде собачьего антитела другой аминокислотой со сходными характеристиками. Как правило, консервативными замещениями считаются замещения одна на другую между алифатическими аминокислотами Ala, Val, Leu и Ile; замещение гидроксильных остатков Ser и Thr, замещение кислотных остатков Asp и Glu, замещение между амидными остатками Asn и Gln, замещение основных остатков Lys и Arg, замещения между ароматическими остатками Phe, Tyr, и тому подобное. Указания относительно того, какие изменения аминокислот, вероятно, будут фенотипически незаметными, содержатся в работе Bowie et al., 247 Science 1306-10 (1990).[000214] For example, one class of substitutions are conservative amino acid substitutions. Such substitutions are those that replace a given amino acid in a canine antibody peptide with another amino acid with similar characteristics. Typically, conservative substitutions are considered to be substitutions between the aliphatic amino acids Ala, Val, Leu, and Ile; substitutions between the hydroxyl residues Ser and Thr, substitutions between the acidic residues Asp and Glu, substitutions between the amide residues Asn and Gln, substitutions between the basic residues Lys and Arg, substitutions between the aromatic residues Phe, Tyr, and the like. Guidance on which amino acid changes are likely to be phenotypically inconspicuous is provided by Bowie et al., 247 Science 1306-10 (1990).
[000215] Варианты собачьих антител и пептидов могут быть полностью функциональными или у них может отсутствовать одна или большее число из функций. Полностью функциональные варианты, как правило, содержат только консервативные вариации или вариации в некритических остатках, или в некритических областях. Функциональные варианты могут также содержать замещение аналогичных аминокислот, что не приводит к изменению или приводит к незначительному изменению функции. В качестве альтернативы, такие замены могут в некоторой степени положительно или отрицательно влиять на функцию. Нефункциональные варианты, как правило, содержат одну или большее число неконсервативных аминокислотных замещений, делеций, вставок, инверсий или усечений, или замещение, вставку, инверсию или делецию в критическом остатке или в критической области.[000215] Variants of canine antibodies and peptides may be fully functional or may lack one or more functions. Fully functional variants typically contain only conservative variations or variations at non-critical residues or in non-critical regions. Functional variants may also contain substitutions of similar amino acids that result in little or no change in function. Alternatively, such substitutions may have some positive or negative effect on function. Non-functional variants typically contain one or more non-conservative amino acid substitutions, deletions, insertions, inversions, or truncations, or a substitution, insertion, inversion, or deletion at a critical residue or in a critical region.
[000216] Аминокислоты, которые критически необходимы для функционирования, можно идентифицированы способами, известными в данной области техники, такими как сайт-направленный мутагенез или аланин-сканирующий мутагенез Cunningham et al., 244 Science 1081-85 (1989). Последняя процедура вводит единичные мутации аланина в каждом остатке в молекуле. Полученные мутантные молекулы затем тестируют на биологическую активность, такую как связывание с эпитопом или активность АЗКЦ in vitro. Сайты, которые являются критическими для связывания лиганда с рецептором, также можно определить с помощью структурного анализа, такого как кристаллография, ядерный магнитный резонанс или фотоаффинное мечение Smith et al, 224 J. Mol. Biol. 899-904 (1992); de Vos et al., 255 Science 306-12 (1992).[000216] Amino acids that are critical for function can be identified by methods known in the art, such as site-directed mutagenesis or alanine scanning mutagenesis Cunningham et al., 244 Science 1081-85 (1989). The latter procedure introduces single alanine mutations at each residue in the molecule. The resulting mutant molecules are then tested for biological activity, such as epitope binding or ADCC activity in vitro. Sites that are critical for ligand binding to the receptor can also be determined by structural analysis, such as crystallography, nuclear magnetic resonance, or photoaffinity labeling Smith et al., 224 J. Mol. Biol. 899-904 (1992); de Vos et al., 255 Science 306-12 (1992).
[000217] Более того, полипептиды часто содержат аминокислоты, отличные от двадцати «встречающихся в природе» аминокислот.Кроме того, многие аминокислоты, включительно с концевыми аминокислотами, могут быть модифицированы либо естественными процессами, такими как процессинг или другие посттрансляционные модификации, либо методиками химической модификации, которые хорошо известны в данной области техники. Известные модификации включают в себя следующие, но не ограничиваются ими: ацетилирование, ацилирование, АДФ-рибозилирование, амидирование, ковалентное присоединение флавина, ковалентное присоединение гемового фрагмента, ковалентное присоединение нуклеотида или нуклеотидного производного, ковалентное присоединение липида или липидного производного, ковалентное присоединение фосфотидилинозитола, перекрестное сшивание, циклизацию, образование дисульфидной связи, деметилирование, образование ковалентных перекрестных связей, образование цистеина, образование пироглутамата, формилирование, гамма-карбоксилирование, гликозилирование, образование гликозилфосфатидилинозитолового (ГФИ, англ. «GPI») якоря, гидроксилирование, иодирование, метилирование, миристилирование, окисление, протеолитический процессинг, фосфорилирование, пренилирование, рацемизацию, селеноилирование, сульфатирование, добавление аминокислот, опосредованное транспортной РНК, к белкам, например, аргинилирование, и убиквитинирование. Такие модификации хорошо известны специалистам в данной области техники и были очень подробно описаны в научной литературе. Несколько особенно распространенных модификаций, например, гликозилирование, присоединение липида, сульфатирование, гамма-карбоксилирование остатков глутаминовой кислоты, гидроксилирование и АДФ-рибозилирование, описаны в большинстве фундаментальных работ, таких как «Proteins - Structure and Molecular Properties» (2nd ed., Т.E. Creighton, W.H. Freeman & Co., N.Y., 1993). На данную тему доступно множество подробных обзоров, например, работы Wold, Posttranslational Covalent Modification of proteins, 1-12 (Johnson, ed., Academic Press, N.Y., 1983); Seifter et al. 182 Meth. Enzymol. 626-46 (1990); и Rattan et al. 663 Ann. NY Acad. Sci. 48-62 (1992).[000217] Moreover, polypeptides often contain amino acids other than the twenty "naturally occurring" amino acids. In addition, many amino acids, including terminal amino acids, can be modified either by natural processes such as processing or other post-translational modifications, or by chemical modification techniques that are well known in the art. Known modifications include, but are not limited to, acetylation, acylation, ADP-ribosylation, amidation, covalent attachment of flavin, covalent attachment of a heme moiety, covalent attachment of a nucleotide or nucleotide derivative, covalent attachment of a lipid or lipid derivative, covalent attachment of phosphatidylinositol, cross-linking, cyclization, disulfide bond formation, demethylation, covalent cross-linking, cysteine formation, pyroglutamate formation, formylation, gamma-carboxylation, glycosylation, glycosylphosphatidylinositol (GPI) anchor formation, hydroxylation, iodination, methylation, myristylation, oxidation, proteolytic processing, phosphorylation, prenylation, racemization, selenoylation, sulfation, addition transfer RNA-mediated addition of amino acids to proteins, such as arginylation and ubiquitination. Such modifications are well known to those skilled in the art and have been described in great detail in the scientific literature. Several particularly common modifications, such as glycosylation, lipid addition, sulfation, gamma-carboxylation of glutamic acid residues, hydroxylation, and ADP-ribosylation, are described in most fundamental works, such as Proteins - Structure and Molecular Properties (2nd ed., T.E. Creighton, W.H. Freeman & Co., NY, 1993). Many detailed reviews are available on this topic, such as Wold, Posttranslational Covalent Modification of proteins, 1-12 (Johnson, ed., Academic Press, NY, 1983); Seifter et al. 182 Meth. Enzymol. 626-46 (1990); and Rattan et al. 663 Ann. NY Acad. Sci. 48-62 (1992).
[000218] В другом аспекте данного изобретения представлены производные антител. «Производное» антитела содержит дополнительные химические фрагменты, которые обычно не входят в состав белка. Ковалентные модификации белка включены в объем данного изобретения. Такие модификации могут быть введены в молекулу путем приведения целевых аминокислотных остатков данного антитела в реакцию с органическим дериватизирующим агентом, который способен вступать в реакцию с выбранными боковыми цепями или концевыми остатками. Например, дериватизация бифункциональными агентами, хорошо известными в данной области техники, пригодна для сшивания антитела или фрагмента с нерастворимой в воде несущей матрицей или с другими макромолекулярными носителями.[000218] In another aspect of the present invention, antibody derivatives are provided. A "derivative" of an antibody contains additional chemical moieties that are not typically found in the protein. Covalent modifications of the protein are included within the scope of the present invention. Such modifications can be introduced into the molecule by reacting the target amino acid residues of the antibody with an organic derivatizing agent that is capable of reacting with selected side chains or terminal residues. For example, derivatization with bifunctional agents well known in the art is suitable for cross-linking the antibody or fragment to a water-insoluble carrier matrix or to other macromolecular carriers.
[000219] Производные также включают в себя радиоактивно меченные моноклональные антитела. Например, меченные радиоактивным йодом (251,1311), углеродом (4С), серой (35S), индием, тритием (Н3) или подобным; конъюгаты моноклональных антител с биотином или авидином, с ферментами, такими как пероксидаза хрена, щелочная фосфатаза, бета-D-галактозидаза, глюкозооксидаза, глюкоамилаза, ангидраза карбоновой кислоты, ацетилхолинэстераза, лизоцим, малатдегидрогеназа или глюкозо-6-фосфатдегидрогеназа; а также конъюгаты моноклональных антител с биолюминесцентными агентами (такими как люцифераза), хемолюминесцентными агентами (такими как сложные эфиры акридина) или флуоресцентными агентами (такими как фикобилипротеины).[000219] Derivatives also include radioactively labeled monoclonal antibodies. For example, those labeled with radioactive iodine (251,1311), carbon (4C), sulfur (35S), indium, tritium (H3 ) or the like; conjugates of monoclonal antibodies with biotin or avidin, with enzymes such as horseradish peroxidase, alkaline phosphatase, beta-D-galactosidase, glucose oxidase, glucoamylase, carboxylic acid anhydrase, acetylcholinesterase, lysozyme, malate dehydrogenase or glucose-6-phosphate dehydrogenase; as well as conjugates of monoclonal antibodies with bioluminescent agents (such as luciferase), chemiluminescent agents (such as acridine esters) or fluorescent agents (such as phycobiliproteins).
[000220] Другое производное бифункционального антитела согласно данному изобретению представляет собой биспецифическое антитело, полученное путем объединения частей двух отдельных антител, которые распознают две разные антигенные группы. Этого можно достичь с помощью методик перекрестного сшивания или рекомбинации. В качестве дополнения, фрагменты могут быть добавлены к антителу или его части для увеличения периода полужизни in vivo (например, путем увеличения времени выведения из кровотока). Такие методики включают в себя, например, добавление фрагментов ПЭГ (также называемое «пэгилированием»), и хорошо известны в данной области техники. См. публикацию заявки на патент США №20030031671.[000220] Another derivative of the bifunctional antibody of the present invention is a bispecific antibody obtained by combining portions of two separate antibodies that recognize two different antigen groups. This can be achieved using cross-linking or recombination techniques. In addition, fragments can be added to the antibody or portion thereof to increase half-life in vivo (e.g., by increasing the time it is cleared from the bloodstream). Such techniques include, for example, the addition of PEG moieties (also referred to as "PEGylation") and are well known in the art. See U.S. Patent Application Publication No. 20030031671.
[000221] В некоторых вариантах осуществления данного изобретения нуклеиновые кислоты, кодирующие указанное антитело, вводят непосредственно в клетку-хозяина, и указанную клетку инкубируют в условиях, достаточных для индуцирования экспрессии указанного кодируемого антитела. После того, как указанные нуклеиновые кислоты ввели в клетку, указанную клетку обычно инкубируют, как правило - при температуре 37°С, иногда с отбором, в течение периода времени, составляющего около 1-24 часов, чтобы обеспечить экспрессию указанного антитела. В одном варианте осуществления данного изобретения указанное антитело секретируется в надосадочную жидкость среды, в которой растет указанная клетка. Традиционно моноклональные антитела получали в виде нативных молекул в мышиных гибридомных линиях. В дополнение к указанной технологии данное изобретение обеспечивает экспрессию антител по рекомбинантной ДНК. Это позволяет получать антитела, а также спектр производных антител и слитых белков у выбранного вида организма-хозяина.[000221] In some embodiments of the invention, nucleic acids encoding said antibody are introduced directly into a host cell, and said cell is incubated under conditions sufficient to induce expression of said encoded antibody. After said nucleic acids have been introduced into the cell, said cell is typically incubated, typically at 37°C, sometimes with selection, for a period of about 1-24 hours to ensure expression of said antibody. In one embodiment of the invention, said antibody is secreted into the supernatant of the medium in which said cell grows. Traditionally, monoclonal antibodies have been produced as native molecules in mouse hybridoma lines. In addition to said technology, the present invention provides for expression of antibodies from recombinant DNA. This allows for the production of antibodies, as well as a range of antibody derivatives and fusion proteins, in a selected host species.
[000222] Последовательность нуклеиновой кислоты, кодирующая по меньшей мере одно антитело, часть или полипептид согласно данному изобретению, может быть рекомбинирована с векторной ДНК в соответствии с традиционными методиками, включительно с тупыми или липкими концами для лигирования, расщеплением рестрикционным ферментом для получения подходящих концов, заполнением когезионных концов по мере необходимости, обработкой щелочной фосфатазой для избегания нежелательного соединения и лигированием соответствующими лигазами. Методики таких манипуляций, описанные, например, в работах Maniatis et al., MOLECULAR CLONING, LAB. MANUAL, (Cold Spring Harbor Lab. Press, NY, 1982 and 1989); и Ausubel et al. 1993, как указано выше, можно применять для конструирования последовательностей нуклеиновых кислот, которые кодируют молекулу антитела или ее антигенсвязывающую область.[000222] A nucleic acid sequence encoding at least one antibody, portion, or polypeptide of the present invention can be recombined with vector DNA according to conventional techniques, including blunt or sticky ends for ligation, restriction enzyme digestion to obtain suitable ends, filling in cohesive ends as necessary, alkaline phosphatase treatment to avoid unwanted joining, and ligation with appropriate ligases. Techniques for such manipulations, as described, for example, in Maniatis et al., MOLECULAR CLONING, LAB. MANUAL, (Cold Spring Harbor Lab. Press, NY, 1982 and 1989); and Ausubel et al. 1993, as noted above, can be used to construct nucleic acid sequences that encode an antibody molecule or its antigen-binding region.
[000223] Молекула нуклеиновой кислоты, такая как ДНК, считается «способной экспрессировать» полипептид, если она содержит нуклеотидные последовательности, которые содержат информацию о регулировании транскрипции и трансляции, и такие последовательности «функционально связаны» с нуклеотидными последовательностями, которые кодируют указанный полипептид. Функциональная связь представляет собой связь, при которой регуляторные последовательности ДНК и последовательность ДНК, которую требуется экспрессировать, соединены таким образом, чтобы обеспечить экспрессию генов в виде пептидов или частей антител в извлекаемых количествах. Точная природа регуляторных областей, необходимых для экспрессии генов, может варьировать от организма к организму, как хорошо известно в аналогичной области техники. См., например, работы Sambrook et al., 2001, как указано выше; Ausubel et al., 1993, как указано выше.[000223] A nucleic acid molecule, such as DNA, is said to be "capable of expressing" a polypeptide if it contains nucleotide sequences that contain transcriptional and translational regulatory information, and such sequences are "operably linked" to nucleotide sequences that encode the polypeptide. A functional linkage is one in which the DNA regulatory sequences and the DNA sequence desired to be expressed are linked in such a way as to provide for the expression of genes as peptides or antibody portions in recoverable amounts. The precise nature of the regulatory regions required for gene expression may vary from organism to organism, as is well known in the art. See, for example, Sambrook et al., 2001, as cited above; Ausubel et al., 1993, as cited above.
[000224] Соответственно, данное изобретение охватывает собой экспрессию антитела или пептида либо в прокариотических, либо в эукариотических клетках. Подходящие организмы-хозяева включают в себя бактериальные или эукариотические организмы-хозяева, включительно с клетками бактерий, дрожжей, насекомых, грибов, птиц и млекопитающих либо in vivo, либо in situ, или клетки-хозяева, происходящие от млекопитающих, насекомых, птиц или дрожжей. Указанная клетка или ткань млекопитающего может происходить от человека, примата, хомяка, кролика, грызуна, коровы, свиньи, овцы, лошади, козы, собаки или кошки. Также можно использовать любую другую подходящую клетку млекопитающего, известную в данной области техники.[000224] Accordingly, the present invention encompasses the expression of an antibody or peptide in either prokaryotic or eukaryotic cells. Suitable host organisms include bacterial or eukaryotic host organisms, including bacterial, yeast, insect, fungal, avian, and mammalian cells, either in vivo or in situ, or host cells derived from mammals, insects, avian, or yeast. The mammalian cell or tissue may be from a human, primate, hamster, rabbit, rodent, cow, pig, sheep, horse, goat, dog, or cat. Any other suitable mammalian cell known in the art may also be used.
[000225] В одном варианте осуществления данного изобретения нуклеотидная последовательность согласно данному изобретению будет включена в плазмиду или вирусный вектор, способные к автономной репликации в реципиенте-хозяине. Для этой цели можно применять любой из широкого спектра векторов. См., например, работу Ausubel etal., 1993, как указано выше. Факторы, имеющие значение при выборе конкретной плазмиды или вирусного вектора, включают в себя: легкость, с которой клетки-реципиенты, содержащие данный вектор, могут быть распознаны и отобраны из тех клеток-реципиентов, которые не содержат данный вектор; число копий данного вектора, которые желательны у конкретного организма-хозяина; и желательна ли возможность «перемещать» вектор между клетками-хозяевами разных видов.[000225] In one embodiment of the invention, the nucleotide sequence of the invention will be included in a plasmid or viral vector capable of autonomous replication in a recipient host. Any of a wide variety of vectors can be used for this purpose. See, for example, Ausubel et al., 1993, as noted above. Factors that are important in selecting a particular plasmid or viral vector include: the ease with which recipient cells containing the vector can be recognized and selected from those recipient cells that do not contain the vector; the number of copies of the vector that are desired in a particular host organism; and whether the ability to "move" the vector between host cells of different species is desirable.
[000226] Примеры прокариотических векторов, известных в данной области техники, включают в себя плазмиды, например те, которые способны к репликации в Е. coli (такие как, например, pBR322, CoIE1, pSC101, pACYC 184, .pi.vX). Такие плазмиды описаны, например, в работах Maniatis et al., 1989, как указано выше; Ausubel et al, 1993, как указано выше. Плазмиды Bacillus включают в себя рС194, рС221, рТ127 и т.д. Такие плазмиды описаны в работе Gryczan, THE MOLEC. BIO. OF THE BACILLI 307-329 (Academic Press, NY, 1982). Подходящие плазмиды Streptomyces включают в себяр p1J101 (Kendall et al., 169 J. Bacteriol. 4177-83 (1987), и бактериофаги Streptomyces, такие как phLC31 (Chater et al., SIXTH INT'L SYMPOSIUM ON ACTINOMYCETALES BIO. 45-54 (Akademiai Kaido, Budapest, Hungary 1986). Обзор плазмид Pseudomonas см. в работах John et al., 8 Rev. Infect. Dis. 693-704 (1986); lzaki, 33 Jpn. J. Bacteriol. 729-42 (1978); и в работе Ausubel et al., 1993, как указано выше.[000226] Examples of prokaryotic vectors known in the art include plasmids, such as those capable of replication in E. coli (such as, for example, pBR322, CoIE1, pSC101, pACYC 184, .pi.vX). Such plasmids are described, for example, in Maniatis et al., 1989, as cited above; Ausubel et al., 1993, as cited above. Bacillus plasmids include pC194, pC221, pT127, etc. Such plasmids are described in Gryczan, THE MOLEC. BIO. OF THE BACILLI 307-329 (Academic Press, NY, 1982). Suitable Streptomyces plasmids include p1J101 (Kendall et al., 169 J. Bacteriol. 4177–83 (1987) and Streptomyces bacteriophages such as phLC31 (Chater et al., SIXTH INT'L SYMPOSIUM ON ACTINOMYCETALES BIO. 45–54 (Akademiai Kaido, Budapest, Hungary 1986). For reviews of Pseudomonas plasmids, see John et al., 8 Rev. Infect. Dis. 693–704 (1986); Izaki, 33 Jpn. J. Bacteriol. 729–42 (1978); and Ausubel et al., 1993, as noted above.
[000227] В качестве альтернативы, элементы экспрессии генов, пригодные для экспрессии кДНК, кодирующих антитела или пептиды, включают в себя следующие, но не ограничиваются ими: (а) промоторы вирусной транскрипции и их энхансерные элементы, такие как ранний промотор SV40 (Okayama et al., 3 Mol. Cell. Biol. 280 (1983), LTR вируса саркомы Рауса (Gorman et al., 79 Proc. Natl. Acad. Sci., USA 6777 (1982), и LTR вируса мышиного лейкоза Молони (Grosschedl et al., 41 Cell 885 (1985); (b) области сплайсинга и сайты полиаденилирования, такие как те, которые получены из поздней области SV40 (Okayarea et al., 1983), и (с) сайты полиаденилирования, такие как в SV40 (Okayama et al., 1983).[000227] Alternatively, gene expression elements suitable for expressing cDNAs encoding antibodies or peptides include, but are not limited to, the following: (a) viral transcription promoters and their enhancer elements, such as the SV40 early promoter (Okayama et al., 3 Mol. Cell. Biol. 280 (1983), the Rous sarcoma virus LTR (Gorman et al., 79 Proc. Natl. Acad. Sci., USA 6777 (1982), and the Moloney murine leukemia virus LTR (Grosschedl et al., 41 Cell 885 (1985); (b) splice regions and polyadenylation sites, such as those derived from the SV40 late region (Okayama et al., 1983), and (c) polyadenylation sites, such as in SV40 (Okayama et al., 1983).
[000228] Иммуноглобулиновые гены кДНК можно экспрессировать так, как описано в работе Weidle et al., 51 Gene 21 (1987), используя в качестве элементов экспрессии ранний промотор SV40 и его энхансер, энхансеры промотора цепи Н иммуноглобулина мыши, сплайсинг мРНК поздней области SV40, промежуточную последовательность S-глобина кролика, сайты полиаденилирования иммуноглобулина и S-глобина кролика, и элементы полиаденилирования SV40. Для генов иммуноглобулинов, состоящих частично из кДНК, частично из геномной ДНК (Whittle et al., 1 Protein Engin. 499 (1987)), промотор транскрипции может представлять собой цитомегаловирус человека, энхансеры транскрипции могут представлять собой цитомегаловирус и иммуноглобулин мыши / человека, а области сплайсинга мРНК и полиаденилирования могут представлять собой нативные хромосомные последовательности иммуноглобулина.[000228] Immunoglobulin cDNA genes can be expressed as described by Weidle et al., 51 Gene 21 (1987), using as expression elements the SV40 early promoter and its enhancer, mouse immunoglobulin H chain promoter enhancers, SV40 late region mRNA splicing, rabbit S-globin intermediate sequence, immunoglobulin and rabbit S-globin polyadenylation sites, and SV40 polyadenylation elements. For immunoglobulin genes, which consist partly of cDNA and partly of genomic DNA (Whittle et al., 1 Protein Engin. 499 (1987)), the transcriptional promoter may be human cytomegalovirus, the transcriptional enhancers may be cytomegalovirus and mouse/human immunoglobulin, and the mRNA splicing and polyadenylation regions may be native chromosomal immunoglobulin sequences.
[000229] В одном варианте осуществления данного изобретения для экспрессии генов кДНК в клетках грызунов промотор транскрипции представляет собой последовательность LTR вируса, энхансеры промотора транскрипции представляют собой один или оба из энхансера тяжелой цепи иммуноглобулина мыши и энхансера LTR вируса, область сплайсинга содержит интрон размером больше чем 31 п.о., и области полиаденилирования и терминации транскрипции получены из нативной хромосомной последовательности, соответствующей синтезируемой цепи иммуноглобулина. В других вариантах осуществления данного изобретения последовательности кДНК, кодирующие другие белки, объединяют с перечисленными выше элементами экспрессии для достижения экспрессии указанных белков в клетках млекопитающих.[000229] In one embodiment of the invention, for expression of cDNA genes in rodent cells, the transcription promoter is a viral LTR sequence, the transcription promoter enhancers are one or both of a mouse immunoglobulin heavy chain enhancer and a viral LTR enhancer, the splice region contains an intron greater than 31 bp, and the polyadenylation and transcription termination regions are derived from a native chromosomal sequence corresponding to the immunoglobulin chain being synthesized. In other embodiments of the invention, cDNA sequences encoding other proteins are combined with the above expression elements to achieve expression of said proteins in mammalian cells.
[000230] Каждый слитый ген может быть собран в экспрессионный вектор или вставлен в него. Клетки-реципиенты, способные экспрессировать продукт гена цепи иммуноглобулина, затем трансфицируют отдельно пептидом или геном, кодирующим цепь Н или L, или совместно трансфицируют геном цепей Н и L. Трансфицированные клетки-реципиенты культивируют в условиях, которые обеспечивают экспрессию встроенных генов, и из указанной культуры извлекают экспрессированные цепи иммуноглобулина или интактные антитела, или их фрагменты.[000230] Each fusion gene can be assembled into or inserted into an expression vector. Recipient cells capable of expressing the immunoglobulin chain gene product are then transfected separately with a peptide or gene encoding an H or L chain, or co-transfected with a gene for the H and L chains. The transfected recipient cells are cultured under conditions that allow expression of the inserted genes, and the expressed immunoglobulin chains or intact antibodies, or fragments thereof, are recovered from the culture.
[000231] В одном варианте осуществления данного изобретения слитые гены, кодирующие пептид или цепи Н и L, или их части, собираются в отдельные векторы экспрессии, которые затем используются для совместной трансфекции клетки-реципиента. В качестве альтернативы, слитые гены, кодирующие цепи Н и L, могут быть собраны на одном и том же векторе экспрессии. Для трансфекции векторов экспрессии и получения антитела указанная линия клеток-реципиентов может представлять собой клетки миеломы. Клетки миеломы могут синтезировать, собирать и секретировать иммуноглобулины, кодируемые генами трансфицированного иммуноглобулина, и обладают механизмом для гликозилирования указанного иммуноглобулина. Клетки миеломы можно выращивать в культуре или в брюшной полости мыши, при этом секретируемый иммуноглобулин можно получить из асцитной жидкости. Другие подходящие клетки-реципиенты включают в себя лимфоидные клетки, такие как В-лимфоциты собачьего или несобачьего происхождения, гибридомные клетки собачьего или несобачьего происхождения, или межвидовые гетерогибридомные клетки.[000231] In one embodiment of the invention, fusion genes encoding the peptide or the H and L chains, or portions thereof, are assembled into separate expression vectors, which are then used to co-transfect a recipient cell. Alternatively, fusion genes encoding the H and L chains can be assembled on the same expression vector. For transfection of the expression vectors and production of the antibody, the recipient cell line can be myeloma cells. Myeloma cells can synthesize, assemble, and secrete immunoglobulins encoded by the transfected immunoglobulin genes and have the machinery for glycosylation of said immunoglobulin. Myeloma cells can be grown in culture or in the peritoneal cavity of a mouse, and the secreted immunoglobulin can be obtained from ascites fluid. Other suitable recipient cells include lymphoid cells such as B lymphocytes of canine or non-canine origin, hybridoma cells of canine or non-canine origin, or interspecies heterohybridoma cells.
[000232] Вектор экспрессии, несущий конструкцию антитела или полипептид согласно данному изобретению, можно ввести в соответствующую клетку-хозяина любым из множества подходящих способов, включительно с такими биохимическими способами, как трансформация, трансфекция, конъюгация, слияние протопластов, осаждение с фосфатом кальция и нанесение поликатионов, таких как диэтиламиноэтил (ДЭАЭ, англ. «DEAE») декстран, и такими механическими способами, как электропорация, прямая микроинъекция и бомбардировка микрочастицами Johnston et al., 240 Science 1538 (1988).[000232] An expression vector carrying an antibody construct or polypeptide of the present invention can be introduced into an appropriate host cell by any of a variety of suitable methods, including biochemical methods such as transformation, transfection, conjugation, protoplast fusion, calcium phosphate precipitation, and application of polycations such as diethylaminoethyl (DEAE) dextran, and mechanical methods such as electroporation, direct microinjection, and microparticle bombardment Johnston et al., 240 Science 1538 (1988).
[000233] Дрожжи могут обеспечить существенные преимущества перед бактериями в производстве цепей Н и L иммуноглобулина. Дрожжи осуществляют посттрансляционные пептидные модификации, включая гликозилирование. В настоящее время существует ряд стратегий рекомбинантной ДНК, которые используют сильные промоторные последовательности и плазмиды с большим числом копий, которые можно применять для получения желаемых белков в дрожжах. Дрожжи распознают лидирующие последовательности продуктов клонированных генов млекопитающих и секретируют пептиды, несущие лидирующие последовательности (т.е. пре-пептиды) Hitzman et al., 11th Int'l Conference on Yeast, Genetics & Molec. Biol. (Montpelier, France, 1982).[000233] Yeast may provide significant advantages over bacteria in the production of immunoglobulin H and L chains. Yeast perform post-translational peptide modifications, including glycosylation. Currently, there are a number of recombinant DNA strategies that utilize strong promoter sequences and high-copy-number plasmids that can be used to produce desired proteins in yeast. Yeast recognizes leader sequences of cloned mammalian gene products and secretes peptides bearing the leader sequences (i.e., prepeptides) Hitzman et al.,11th Int'l Conference on Yeast, Genetics & Molec. Biol. (Montpelier, France, 1982).
[000234] Дрожжевые системы экспрессии генов можно регулярно оценивать на предмет уровней продукции, секреции и стабильности пептидов, антител, их фрагментов и областей. Можно применять любую из ряда дрожжевых систем экспрессии генов, содержащих промоторные и терминационные элементы из активно экспрессируемых генов, кодирующих гликолитические ферменты, которые продуцируются в больших количествах при выращивании дрожжей в средах, богатых глюкозой. Известные гликолитические гены также могут обеспечить очень эффективные сигналы управления транскрипцией. Например, можно применять промоторные и терминационные сигналы гена фосфоглицераткиназы (ФГК, англ. «PGK»). Для оценки оптимальных экспрессионных плазмид для экспрессии клонированных кДНК иммуноглобулина в дрожжах можно применять ряд подходов. См. Vol. II DNA Cloning, 45-66, (Glover, ed.,) IRL Press, Oxford, UK 1985.[000234] Yeast gene expression systems can be routinely assessed for the levels of production, secretion, and stability of peptides, antibodies, and fragments and regions thereof. Any of a number of yeast gene expression systems can be used that contain promoter and termination elements from actively expressed genes encoding glycolytic enzymes, which are produced in large quantities when yeast is grown in glucose-rich media. Known glycolytic genes can also provide very efficient transcriptional control signals. For example, the promoter and termination signals of the phosphoglycerate kinase (PGK) gene can be used. A number of approaches can be used to evaluate optimal expression plasmids for expression of cloned immunoglobulin cDNAs in yeast. See Vol. II DNA Cloning, 45-66, (Glover, ed.,) IRL Press, Oxford, UK 1985.
[000235] Бактериальные штаммы также можно применять в качестве организмов-хозяев для получения молекул антител или пептидов, описанных в данном изобретении. В связи с указанными бактериальными хозяевами используют плазмидные векторы, содержащие репликон и контрольные последовательности, которые получены из видов, совместимых с клеткой-хозяином. Указанный вектор несет сайт репликации, а также специфические гены, которые способны обеспечивать фенотипический отбор в трансформированных клетках. Можно применять ряд подходов для оценки экспрессии плазмид для получения антител, их фрагментов и областей, или цепей антител, кодируемых клонированными кДНК иммуноглобулина в бактериях (см. Работы Glover, 1985, как указано выше; Ausubel, 1993 как указано выше; Sambrook, 2001, как указано выше; Colligan et al., eds. Current Protocols in Immunology, John Wiley & Sons, NY, N.Y. (1994-2001); Colligan et al., eds. Current Protocols in Protein Science, John Wiley & Sons, NY, N.Y. (1997-2001).[000235] Bacterial strains can also be used as host organisms for the production of the antibody molecules or peptides described in this invention. In connection with said bacterial hosts, plasmid vectors containing a replicon and control sequences that are obtained from species compatible with the host cell are used. Said vector carries a replication site, as well as specific genes that are capable of providing phenotypic selection in transformed cells. A number of approaches can be used to evaluate the expression of plasmids for the production of antibodies, fragments and regions thereof, or antibody chains encoded by cloned immunoglobulin cDNAs in bacteria (see Glover, 1985, as cited above; Ausubel, 1993, as cited above; Sambrook, 2001, as cited above; Colligan et al., eds. Current Protocols in Immunology, John Wiley & Sons, NY, NY (1994-2001); Colligan et al., eds. Current Protocols in Protein Science, John Wiley & Sons, NY, NY (1997-2001).
[000236] Клетки-хозяева, происходящие из млекопитающих, можно выращивать in vitro или in vivo. Клетки млекопитающих обеспечивают посттрансляционные модификации молекул белка иммуноглобулина, включительно с удалением лидирующего пептида, фолдинг и сборку цепей Н и L, гликозилирование молекул антител и секрецию функционального белка антитела. Клетки млекопитающих, которые могут быть полезны в качестве организмов-хозяев для продуцирования белков антител, в дополнение к клеткам лимфоидного происхождения, описанным выше, включают в себя клетки фибробластного происхождения, такие как клетки Vero (АТСС CRL 81) или клетки СНО-K1 (АТСС CRL 61). Доступно множество векторных систем для экспрессии клонированных пептидов из генов цепей Н и L в клетках млекопитающих (см. работу Glover, 1985, как указано выше). Для получения полных антител H2L2 можно применять различные подходы. Возможна совместная экспрессия цепей Н и L в одних и тех же клетках для достижения внутриклеточной ассоциации и сцепления цепей H и L в полные тетрамерные антитела H2L2 и (или) пептиды. Указанная совместная экспрессия может происходить при использовании либо одних и тех же, либо разных плазмид в одном и том же хозяине. Гены для обеих цепей и (или) пептидов Н и L можно поместить в одну и ту же плазмиду, которую затем трансфицируют в клетки, а затем отбирать непосредственно клетки, экспрессирующие обе указанные цепи. В качестве альтернативы, клетки можно сначала трансфицировать плазмидой, кодирующей одну цепь, например, цепь L, с последующей трансфекцией полученной клеточной линии плазмидой с цепью Н, содержащей второй маркер отбора. Клеточные линии, продуцирующие пептиды и (или) молекулы H2L2 любым из путей, можно трансфицировать плазмидами, кодирующими дополнительные копии пептидов цепей Н, L или Н плюс L, в сочетании с дополнительными маркерами отбора для получения клеточных линий с улучшенными свойствами, такими как более высокая продукция собранных молекул антител H2L2 или повышенная стабильность трансфицированных клеточных линий.[000236] Host cells of mammalian origin can be grown in vitro or in vivo. Mammalian cells provide post-translational modifications of immunoglobulin protein molecules, including removal of the leader peptide, folding and assembly of the H and L chains, glycosylation of antibody molecules, and secretion of functional antibody protein. Mammalian cells that may be useful as host organisms for the production of antibody proteins, in addition to the cells of lymphoid origin described above, include cells of fibroblast origin such as Vero cells (ATCC CRL 81) or CHO-K1 cells (ATCC CRL 61). A variety of vector systems are available for the expression of cloned peptides from the H and L chain genes in mammalian cells (see Glover, 1985, as noted above). Various approaches can be used to produce complete H2L2 antibodies. Coexpression of the H and L chains in the same cells is possible to achieve intracellular association and linkage of the H and L chains into complete tetrameric H2L2 antibodies and/or peptides. This coexpression can occur using either the same or different plasmids in the same host. The genes for both H and L chains and/or peptides can be placed on the same plasmid, which is then transfected into cells, and cells expressing both chains can then be directly selected. Alternatively, cells can first be transfected with a plasmid encoding one chain, for example, the L chain, followed by transfection of the resulting cell line with a plasmid encoding the H chain containing a second selection marker. Cell lines producing H2L2 peptides and/or molecules by any of the pathways can be transfected with plasmids encoding additional copies of the H, L, or H plus L chain peptides, in combination with additional selection markers, to generate cell lines with improved properties, such as higher production of assembled H2L2 antibody molecules or increased stability of transfected cell lines.
[000237] Для долгосрочного получения рекомбинантных антител с высоким выходом можно применять стабильную экспрессию. Например, можно сконструировать клеточные линии, которые стабильно экспрессируют молекулу антитела. Вместо использования векторов экспрессии, которые содержат вирусные источники репликации, клетки-хозяева можно трансформировать кассетами экспрессии иммуноглобулина и маркера отбора. После введения чужеродной ДНК сконструированные клетки можно выращивать в течение 1-2 суток в обогащенной питательной среде, а затем перевести на селективную среду. Маркер отбора в рекомбинантной плазмиде придает устойчивость к отбору и позволяет клеткам стабильно интегрировать плазмиду в хромосому и расти с образованием очагов, которые, в свою очередь, можно клонировать и размножать в клеточные линии. Такие сконструированные клеточные линии могут быть особенно полезны при скрининге и оценке соединений / компонентов, которые прямо или косвенно взаимодействуют с данной молекулой антитела.[000237] Stable expression can be used for long-term, high-yield production of recombinant antibodies. For example, cell lines can be engineered to stably express the antibody molecule. Instead of using expression vectors containing viral origins of replication, host cells can be transformed with immunoglobulin expression cassettes and a selection marker. After introducing foreign DNA, the engineered cells can be grown for 1-2 days in an enriched nutrient medium and then transferred to a selection medium. The selection marker in the recombinant plasmid confers resistance to selection and allows the cells to stably integrate the plasmid into the chromosome and grow to form foci, which in turn can be cloned and expanded into cell lines. Such engineered cell lines can be particularly useful in screening and evaluating compounds/components that directly or indirectly interact with a given antibody molecule.
[000238] Как только антитело согласно данному изобретению получено, его можно очистить любым способом очистки молекулы иммуноглобулина, известным в данной области техники, например, хроматографией (например, ионообменной, аффинной, в частности с аффинностью к специфическому антигену после белка А, и хроматографией на колонке с отсечением по размеру), центрифугированием, способом дифференциальной растворимости или любой другой стандартной методикой очистки белков. Во многих вариантах осуществления данного изобретения антитела секретируются из клетки в культуральную среду и собираются из указанной культуральной среды.[000238] Once the antibody of the present invention is obtained, it can be purified by any method for purifying an immunoglobulin molecule known in the art, such as chromatography (e.g., ion exchange, affinity, in particular with affinity to a specific antigen after protein A, and size cut-off column chromatography), centrifugation, differential solubility, or any other standard protein purification technique. In many embodiments of the present invention, the antibodies are secreted from the cell into the culture medium and collected from said culture medium.
[000239] В другом аспекте данного изобретения представлено антитело, содержащее: константный домен собачьего IgG, содержащий по меньшей мере одно аминокислотное замещение по сравнению с константным доменом собачьего IgG дикого типа, при этом указанное замещение находится в аминокислотном остатке 434. В одном варианте осуществления данного изобретения указанное замещение представляет собой замещение аспарагина в положении 434 гистидином (N434H).[000239] In another aspect of the invention, there is provided an antibody comprising: a canine IgG constant domain comprising at least one amino acid substitution compared to a wild-type canine IgG constant domain, wherein said substitution is at amino acid residue 434. In one embodiment of the invention, said substitution is a substitution of asparagine at position 434 with histidine (N434H).
[000240] Антитело, имеющее указанное замещение, может представлять собой любое подходящее антитело, известное специалисту в данной области техники. В одном примере указанное антитело представляет собой антитело против ИЛ-31. В другом примере указанное антитело представляет собой антитело против ФРН. В другом примере указанное антитело представляет собой антитело против ТФР-β.[000240] The antibody having said substitution may be any suitable antibody known to one skilled in the art. In one example, said antibody is an anti-IL-31 antibody. In another example, said antibody is an anti-NGF antibody. In another example, said antibody is an anti-TGF-β antibody.
[000241] Антитело против ИЛ-31 без описанного в данном документе замещения хорошо известно в данной области техники и полностью описано, например, в патентах США №10526405; №10421807; №9206253; и №8790651. Антитело против ФРН без описанного в данном документе замещения также хорошо известно в данной области техники и полностью описано, например, в патентах США №10125192; №10093725; №9951128; №9617334; и №9505829. Кроме того, антитело против ТФР-β без описанного в данном документе замещения также хорошо известно в данной области техники и полностью описано, например, в заявках на патент США №63/036092 и 63/248679, и в международной патентной РСТ-заявке PCT/US 2021/036347.[000241] An anti-IL-31 antibody without the substitution described herein is well known in the art and is fully described, for example, in U.S. Patent Nos. 1,0526,405; 1,0421,807; 9,206,253; and 8,790,651. An anti-NGF antibody without the substitution described herein is also well known in the art and is fully described, for example, in U.S. Patent Nos. 1,0125,192; 1,0093,725; 9,951,128; 9,617,334; and 9,505,829. In addition, an anti-TGF-β antibody without the substitution described herein is also well known in the art and is fully described, for example, in U.S. Patent Applications Nos. 63/036,092 and 63/248,679, and in PCT International Patent Application PCT/US2021/036347.
[000242] В одном варианте осуществления данного изобретения антитело против ИЛ-31 согласно данному изобретению (т.е. антитело, имеющее замещение) снижает, ингибирует или нейтрализует ИЛ-31-опосредованные состояние зуда или аллергическое состояние. В другом варианте осуществления данного изобретения антитело против ИЛ-31 согласно данному изобретению снижает, ингибирует или нейтрализует активность ИЛ-31 у собаки.[000242] In one embodiment of the invention, an anti-IL-31 antibody of the invention (i.e., an antibody having a substitution) reduces, inhibits, or neutralizes an IL-31-mediated pruritic or allergic condition. In another embodiment of the invention, an anti-IL-31 antibody of the invention reduces, inhibits, or neutralizes IL-31 activity in a dog.
[000243] В одном примере антитело против ИЛ-31 согласно данному изобретению связывается с ИЛ-31 в области примерно между 95 и 125 аминокислотными остатками аминокислотной последовательности ИЛ-31 собаки согласно SEQ ID NO: 44, предпочтительно в области примерно между аминокислотными остатками 102 и 122 последовательности ИЛ-31 собаки согласно SEQ ID NO: 44.[000243] In one example, an anti-IL-31 antibody of the present invention binds to IL-31 in a region between approximately amino acid residues 95 and 125 of the canine IL-31 amino acid sequence of SEQ ID NO: 44, preferably in a region between approximately amino acid residues 102 and 122 of the canine IL-31 sequence of SEQ ID NO: 44.
[000244] Последовательности VL, VH и CDR антител против ИЛ-31 хорошо известны в данной области техники и полностью описаны, например, в патентах США№10526405; №10421807; №9206253; и №8790651. В одном примере антитело против ИЛ-31 согласно данному изобретению может включать в себя по меньшей мере одну из следующих комбинаций последовательностей областей, определяющих комплементарность (CDR): (1) 11Е12: вариабельную тяжелую (VH)-CDR1 согласно SEQ ID NO: 13, VH-CDR2 согласно SEQ ID NO: 15, VH-CDR3 согласно SEQ ID NO: 17, вариабельную легкую (VL)-CDR1 согласно SEQ ID NO: 19, VL-CDR2 согласно SEQ ID NO: 21 и VL-CDR3 согласно SEQ ID NO: 23; или (2) 34D03: VH-CDR1 согласно SEQ ID NO: 14, VH-CDR2 согласно SEQ ID NO: 16, VH-CDR3 согласно SEQ ID NO: 18, VL-CDR1 согласно SEQ ID NO: 20, VL-CDR2 согласно SEQ ID NO: 22 и VL-CDR3 согласно SEQ ID NO: 24. В некоторых вариантах осуществления данного изобретения антитело против ИЛ-31 согласно данному изобретению может включать в себя по меньшей мере одну CDR, описанную в данном документе.[000244] The VL, VH, and CDR sequences of anti-IL-31 antibodies are well known in the art and are fully described, for example, in U.S. Patents 10,526,405; 10,421,807; 9,206,253; and 8,790,651. In one example, an anti-IL-31 antibody of the present invention may include at least one of the following combinations of complementarity determining region (CDR) sequences: (1) 11E12: variable heavy (VH)-CDR1 according to SEQ ID NO: 13, VH-CDR2 according to SEQ ID NO: 15, VH-CDR3 according to SEQ ID NO: 17, variable light (VL)-CDR1 according to SEQ ID NO: 19, VL-CDR2 according to SEQ ID NO: 21, and VL-CDR3 according to SEQ ID NO: 23; or (2) 34D03: VH-CDR1 according to SEQ ID NO: 14, VH-CDR2 according to SEQ ID NO: 16, VH-CDR3 according to SEQ ID NO: 18, VL-CDR1 according to SEQ ID NO: 20, VL-CDR2 according to SEQ ID NO: 22 and VL-CDR3 according to SEQ ID NO: 24. In some embodiments of the invention, an anti-IL-31 antibody of the invention may include at least one CDR described herein.
[000245] В одном варианте осуществления данного изобретения антитело против ИЛ-31 согласно данному изобретению может включать в себя вариабельную область легкой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, указанную в SEQ ID NO: 25 (MU-11E12-VL), SEQ ID NO: 26 (CAN-11Е12-VL-cUn-FW2), SEQ ID NO; 27 (CAN-11E12-VL-cUn-13), SEQ ID NO: 28 (MU-34D03-VL) или SEQ ID NO: 29 (CAN-34D03-VL-998-1).[000245] In one embodiment of the invention, an anti-IL-31 antibody of the invention may include a light chain variable region comprising the amino acid sequence set forth in SEQ ID NO: 25 (MU-11E12-VL), SEQ ID NO: 26 (CAN-11E12-VL-cUn-FW2), SEQ ID NO; 27 (CAN-11E12-VL-cUn-13), SEQ ID NO: 28 (MU-34D03-VL), or SEQ ID NO: 29 (CAN-34D03-VL-998-1).
[000246] В другом варианте осуществления данного изобретения антитело против ИЛ-31 согласно данному изобретению может включать в себя вариабельную область тяжелой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, указанную в SEQ ID NO: 30 (MU-11E12-VH), SEQ ID NO: 31 (CAN-11E12-VH-415-1), SEQ ID NO: 32 (MU-34D03-VH) или SEQ ID NO: 33 (CAN-34D03-VH-568-1).[000246] In another embodiment of the invention, an anti-IL-31 antibody of the invention may include a heavy chain variable region comprising the amino acid sequence set forth in SEQ ID NO: 30 (MU-11E12-VH), SEQ ID NO: 31 (CAN-11E12-VH-415-1), SEQ ID NO: 32 (MU-34D03-VH), or SEQ ID NO: 33 (CAN-34D03-VH-568-1).
[000247] В одном варианте осуществления данного изобретения мутантное антитело против ФРН согласно данному изобретению (т.е. антитело, имеющее замещение) снижает, ингибирует или нейтрализует активность ФРН у животного и (или) усиливает способность ингибировать связывание ФРН с Trk А и р75 для лечения ФРН-опосредованных боли или состояния.[000247] In one embodiment of the invention, a mutant anti-NGF antibody of the invention (i.e., an antibody having a substitution) reduces, inhibits, or neutralizes NGF activity in an animal and/or enhances the ability to inhibit NGF binding to Trk A and p75 to treat an NGF-mediated pain or condition.
[000248] Последовательности VL, VH и CDR антител против ФРН также хорошо известны в данной области техники и полностью описаны, например, в патентах США №10125192; №10093725; №9951128; №9617334; и №9505829. В одном примере антитело против ФРН согласно данному изобретению может включать в себя по меньшей мере одну из следующих последовательностей областей, определяющих комплементарность (CDR): ZTS-841: вариабельную тяжелую (VH)-CDR1 согласно SEQ ID NO: 57, VH-CDR2 согласно SEQ ID NO: 58, VH-CDR3 согласно SEQ ID NO: 59, вариабельную легкую (VL)-CDR1 согласно SEQ ID NO: 62, VL-CDR2 согласно SEQ ID NO: 63 и VL-CDR3 согласно SEQ ID NO: 64. В некоторых вариантах осуществления данного изобретения VL-CDR2 содержит остатки согласно SEQ ID NO: 63.[000248] The VL, VH, and CDR sequences of anti-NGF antibodies are also well known in the art and are fully described, for example, in U.S. Patent Nos. 10,125,192; 10,093,725; 9,951,128; 9,617,334; and 9,505,829. In one example, an anti-NGF antibody of the present invention may include at least one of the following complementarity determining region (CDR) sequences: ZTS-841: variable heavy (VH)-CDR1 according to SEQ ID NO: 57, VH-CDR2 according to SEQ ID NO: 58, VH-CDR3 according to SEQ ID NO: 59, variable light (VL)-CDR1 according to SEQ ID NO: 62, VL-CDR2 according to SEQ ID NO: 63, and VL-CDR3 according to SEQ ID NO: 64. In some embodiments of the present invention, VL-CDR2 comprises residues according to SEQ ID NO: 63.
[000249] В одном варианте осуществления данного изобретения антитело против ФРН согласно данному изобретению может включать в себя вариабельную область легкой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, указанную в SEQ ID NO: 61 (CAN-ZTS-841-VL).[000249] In one embodiment of the invention, an anti-NGF antibody of the invention may include a light chain variable region comprising the amino acid sequence set forth in SEQ ID NO: 61 (CAN-ZTS-841-VL).
[000250] В другом варианте осуществления данного изобретения антитело против ФРН согласно данному изобретению может включать в себя вариабельную область тяжелой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, указанную в SEQ ID NO: 56 (CAN-ZTS-841-VH).[000250] In another embodiment of the invention, an anti-NGF antibody of the invention may comprise a heavy chain variable region comprising the amino acid sequence set forth in SEQ ID NO: 56 (CAN-ZTS-841-VH).
[000251] В одном варианте осуществления данного изобретения антитело против ТФР-β согласно данному изобретению (т.е. антитело, имеющее замещение) снижает, ингибирует или нейтрализует ТФР-β-опосредованное заболевание или патологическое состояние, например, хроническую болезнь почек. В другом варианте осуществления данного изобретения антитело против ТФР-β согласно данному изобретению снижает, ингибирует или нейтрализует активность ТФР-β у собаки. Антитело против ТФР-β согласно данному изобретению может связываться с ТФР-β1,2,3 или с их комбинацией. Например, в одном варианте осуществления данного изобретения антитело против ТФР-β согласно данному изобретению связывается с ТФР-β1. В другом варианте осуществления данного изобретения антитело против ТФР-β согласно данному изобретению связывается с ТФР-β2. В другом варианте осуществления данного изобретения антитело против ТФР-β согласно данному изобретению связывается с ТФР-β3. В еще одном варианте осуществления данного изобретения антитело против ТФР-β согласно данному изобретению связывается с ТФР-β1, ТФР-β2, ТФР-β3 или с их комбинацией.[000251] In one embodiment of the invention, an anti-TGF-β antibody of the invention (i.e., an antibody having a substitution) reduces, inhibits, or neutralizes a TGF-β-mediated disease or condition, such as chronic kidney disease. In another embodiment of the invention, an anti-TGF-β antibody of the invention reduces, inhibits, or neutralizes TGF-β activity in a dog. An anti-TGF-β antibody of the invention can bind to TGF-β1, 2, 3, or a combination thereof. For example, in one embodiment of the invention, an anti-TGF-β antibody of the invention binds to TGF-β1. In another embodiment of the invention, an anti-TGF-β antibody of the invention binds to TGF-β2. In another embodiment of the invention, an anti-TGF-β antibody of the invention binds to TGF-β3. In yet another embodiment of the invention, an anti-TGF-β antibody of the invention binds to TGF-β1, TGF-β2, TGF-β3, or a combination thereof.
[000252] Последовательности VL, VH и CDR антител против ТФР-β хорошо известны в данной области техники и полностью описаны, например, в заявках на патент США №63/036092 и №63/248679, и в международной патентной РСТ-заявке PCT/US2021/036347. В одном примере антитело против ТФР-β согласно данному изобретению может включать в себя по меньшей мере одну из следующих комбинаций последовательностей областей, определяющих комплементарность (CDR): (1) ZTS-426: вариабельную тяжелую (VH)-CDR1 согласно SEQ ID NO: 71, VH-CDR2 согласно SEQ ID NO: 72, VH-CDR3 согласно SEQ ID NO: 73, вариабельную легкую (VL)-CDR1 согласно SEQ ID NO: 74, VL-CDR2 согласно SEQ ID NO: 75 и VL-CDR3 согласно SEQ ID NO: 76; или (2) ZTS-501: VH-CDR1 согласно SEQ ID NO: 81, VH-CDR2 согласно SEQ ID NO: 82, VH-CDR3 согласно SEQ ID NO: 83, VL-CDR1 согласно SEQ ID NO: 84, VL-CDR2 согласно SEQ ID NO: 85 и VL-CDR3 согласно SEQ ID NO: 86; или (3) ZTS-4155: VH-CDR1 согласно SEQ ID NO: 91, VH-CDR2 согласно SEQ ID NO: 92, VH-CDR3 согласно SEQ ID NO: 93, VL-CDR1 согласно SEQ ID NO: 94, VL-CDR2 согласно SEQ ID NO: 95 и VL-CDR3 согласно SEQ ID NO: 96; или (4) ZTS-122: VH-CDR1 согласно SEQ ID NO: 101, VH-CDR2 согласно SEQ ID NO: 102, VH-CDR3 согласно SEQ ID NO: 103, VL-CDR1 согласно SEQ ID NO: 104, VL-CDR2 согласно SEQ ID NO: 105 и VL-CDR3 согласно SEQ ID NO: 106; или (5) ZTS-207: VH-CDR1 согласно SEQ ID NO: 111, VH-CDR2 согласно SEQ ID NO: 112, VH-CDR3 согласно SEQ ID NO: 113, VL-CDR1 согласно SEQ ID NO: 114, VL-CDR2 согласно SEQ ID NO: 115 и VL-CDR3 согласно SEQ ID NO: 116.[000252] The VL, VH, and CDR sequences of anti-TGF-β antibodies are well known in the art and are fully described, for example, in U.S. Patent Applications Nos. 63/036,092 and 63/248,679, and in PCT International Patent Application No. PCT/US2021/036347. In one example, an anti-TGF-β antibody of the present invention may include at least one of the following combinations of complementarity determining region (CDR) sequences: (1) ZTS-426: variable heavy (VH)-CDR1 according to SEQ ID NO: 71, VH-CDR2 according to SEQ ID NO: 72, VH-CDR3 according to SEQ ID NO: 73, variable light (VL)-CDR1 according to SEQ ID NO: 74, VL-CDR2 according to SEQ ID NO: 75, and VL-CDR3 according to SEQ ID NO: 76; or (2) ZTS-501: VH-CDR1 according to SEQ ID NO: 81, VH-CDR2 according to SEQ ID NO: 82, VH-CDR3 according to SEQ ID NO: 83, VL-CDR1 according to SEQ ID NO: 84, VL-CDR2 according to SEQ ID NO: 85 and VL-CDR3 according to SEQ ID NO: 86; or (3) ZTS-4155: VH-CDR1 according to SEQ ID NO: 91, VH-CDR2 according to SEQ ID NO: 92, VH-CDR3 according to SEQ ID NO: 93, VL-CDR1 according to SEQ ID NO: 94, VL-CDR2 according to SEQ ID NO: 95 and VL-CDR3 according to SEQ ID NO: 96; or (4) ZTS-122: VH-CDR1 according to SEQ ID NO: 101, VH-CDR2 according to SEQ ID NO: 102, VH-CDR3 according to SEQ ID NO: 103, VL-CDR1 according to SEQ ID NO: 104, VL-CDR2 according to SEQ ID NO: 105 and VL-CDR3 according to SEQ ID NO: 106; or (5) ZTS-207: VH-CDR1 according to SEQ ID NO: 111, VH-CDR2 according to SEQ ID NO: 112, VH-CDR3 according to SEQ ID NO: 113, VL-CDR1 according to SEQ ID NO: 114, VL-CDR2 according to SEQ ID NO: 115 and VL-CDR3 according to SEQ ID NO: 116.
[000253] В некоторых вариантах осуществления данного изобретения антитело против ТФР-β согласно данному изобретению может включать в себя по меньшей мере одну CDR, описанную в данном документе.[000253] In some embodiments of the invention, an anti-TGF-β antibody of the invention may include at least one CDR described herein.
[000254] В одном варианте осуществления данного изобретения антитело против ТФР-β согласно данному изобретению может включать в себя вариабельную область тяжелой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, указанную в SEQ ID NO: 77 (ZTS-426), SEQ ID NO: 87 (ZTS-501), SEQ ID NO: 97 (ZTS-4155), SEQ ID NO: 107 (ZTS-122) или SEQ ID NO: 117 (ZTS-207).[000254] In one embodiment of the invention, an anti-TGF-β antibody of the invention may include a heavy chain variable region comprising the amino acid sequence set forth in SEQ ID NO: 77 (ZTS-426), SEQ ID NO: 87 (ZTS-501), SEQ ID NO: 97 (ZTS-4155), SEQ ID NO: 107 (ZTS-122), or SEQ ID NO: 117 (ZTS-207).
[000255] В другом варианте осуществления данного изобретения антитело против ТФР-β согласно данному изобретению может включать в себя вариабельную область легкой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, указанную в SEQ ID NO: 79 (ZTS-426), SEQ ID NO: 89 (ZTS-501), SEQ ID NO: 99 (ZTS-4155), SEQ ID NO: 109 (ZTS-122) или SEQ ID NO: 119 (ZTS-207).[000255] In another embodiment of the invention, an anti-TGF-β antibody of the invention may include a light chain variable region comprising the amino acid sequence set forth in SEQ ID NO: 79 (ZTS-426), SEQ ID NO: 89 (ZTS-501), SEQ ID NO: 99 (ZTS-4155), SEQ ID NO: 109 (ZTS-122), or SEQ ID NO: 119 (ZTS-207).
Фармацевтическое и ветеринарное применениеPharmaceutical and veterinary use
[000256] В данном изобретении также представлена фармацевтическая композиция, содержащая молекулы согласно данному изобретению и один или большее число фармацевтически приемлемых носителей. Более конкретно, в данном изобретении представлена фармацевтическая композиция, содержащая фармацевтически приемлемый носитель или разбавитель и, в качестве активного ингредиента, антитело или пептид согласно данному изобретению.[000256] The present invention also provides a pharmaceutical composition comprising the molecules of the present invention and one or more pharmaceutically acceptable carriers. More particularly, the present invention provides a pharmaceutical composition comprising a pharmaceutically acceptable carrier or diluent and, as an active ingredient, an antibody or peptide of the present invention.
[000257] «Фармацевтически приемлемые носители» включают в себя любой эксципиент, который не токсичен для клетки или животного, подвергающегося его воздействию, в применяемых дозах и концентрациях. Фармацевтическая композиция может включать в себя один или большее число дополнительных терапевтических агентов.[000257] "Pharmaceutically acceptable carriers" include any excipient that is non-toxic to the cell or animal exposed to it at the dosages and concentrations employed. The pharmaceutical composition may include one or more additional therapeutic agents.
[000258] «Фармацевтически приемлемое(-ый, -ая, -ые)» относится к тем соединениям, материалам, композициям и (или) дозированным формам, которые с медицинской точки зрения подходят для контакта с тканями животных без чрезмерной токсичности, раздражения, аллергической реакции или других проблем, или осложнений, в соответствии с разумным соотношением польза/риск.[000258] "Pharmaceutically acceptable" refers to those compounds, materials, compositions, and/or dosage forms that are medically suitable for contact with animal tissues without undue toxicity, irritation, allergic reaction, or other problems or complications, consistent with a reasonable benefit/risk ratio.
[000259] Фармацевтически приемлемые носители включают в себя растворители, дисперсионные среды, буферы, покрытия, антибактериальные и противогрибковые агенты, смачивающие агенты, консерванты, буферы, хелатирующие агенты, антиоксид анты, изотонические агенты и агенты, замедляющие абсорбцию.[000259] Pharmaceutically acceptable carriers include solvents, dispersion media, buffers, coatings, antibacterial and antifungal agents, wetting agents, preservatives, buffers, chelating agents, antioxidants, isotonic agents, and absorption delaying agents.
[000260] Фармацевтически приемлемые носители включают в себя воду; физиологический раствор; фосфатно-солевой раствор; декстрозу; глицерол; спирты, такие как этанол и изопропанол; фосфат, цитрат и другие органические кислоты; аскорбиновую кислоту; полипептиды с низкой молекулярной массой (меньше чем около 10 остатков); белки, такие как сывороточный альбумин, желатин или иммуноглобулины; гидрофильные полимеры, такие как поливинилпирролидон; аминокислоты, такие как глицин, глутамин, аспарагин, аргинин или лизин; моносахариды, дисахариды и другие углеводы, включительно с глюкозой, маннозой или декстринами; ЭДТА; противоионы, образующие соли, такие как натрий; и (или) неионные поверхностно-активные вещества, такие как ТВИН, полиэтиленгликоль (ПЭГ) и полоксамеры; изотонические агенты, такие как сахара, полиспирты, такие как маннит и сорбит, и хлорид натрия; а также их комбинации.[000260] Pharmaceutically acceptable carriers include water; saline; phosphate-saline; dextrose; glycerol; alcohols such as ethanol and isopropanol; phosphate, citrate and other organic acids; ascorbic acid; low molecular weight polypeptides (less than about 10 residues); proteins such as serum albumin, gelatin or immunoglobulins; hydrophilic polymers such as polyvinylpyrrolidone; amino acids such as glycine, glutamine, asparagine, arginine or lysine; monosaccharides, disaccharides and other carbohydrates, including glucose, mannose or dextrins; EDTA; salt-forming counterions such as sodium; and/or nonionic surfactants such as TWEEN, polyethyleneglycol (PEG) and poloxamers; isotonic agents such as sugars, polyalcohols such as mannitol and sorbitol, and sodium chloride; and combinations thereof.
[000261] Фармацевтические композиции согласно данному изобретению могут быть приготовлены в различных формах, включительно с, например, жидкими, полутвердыми или твердыми лекарственными формами, такими как жидкие растворы (например, растворы для инъекций и инфузий), дисперсии или суспензии, липосомы, суппозитории, таблетки, пилюли или порошки. В некоторых вариантах осуществления данного изобретения указанные композиции составлены в форме растворов для инъекций или инфузий. Указанная композиция может быть в форме, подходящей для внутривенного, внутриартериального, внутримышечного, подкожного, парентерального, трансмукозального, перорального, местного или трансдермального введения. Указанную композицию можно составить в форме фармацевтической композиции немедленного, контролируемого, пролонгированного или замедленного высвобождения.[000261] The pharmaceutical compositions of the present invention can be prepared in various forms, including, for example, liquid, semi-solid or solid dosage forms, such as liquid solutions (e.g., injection and infusion solutions), dispersions or suspensions, liposomes, suppositories, tablets, pills or powders. In some embodiments of the present invention, the compositions are formulated in the form of injection or infusion solutions. The composition can be in a form suitable for intravenous, intraarterial, intramuscular, subcutaneous, parenteral, transmucosal, oral, topical or transdermal administration. The composition can be formulated in the form of an immediate, controlled, extended or delayed release pharmaceutical composition.
[000262] Композиции согласно данному изобретению можно вводить либо в качестве отдельных терапевтических агентов, либо в комбинации с другими терапевтическими агентами. Их можно вводить отдельно, но обычно их вводят с фармацевтическим носителем, выбранным на основе выбранного способа введения и стандартной фармацевтической практики. Введение антител, описанных в данном документе, можно осуществлять любым подходящим способом, включительно с парентеральной инъекцией (такой как внутрибрюшинная, подкожная или внутримышечная инъекция), пероральным путем или путем местного введения антител (обычно содержащихся в фармацевтической композиции) на поверхность дыхательных путей. Местное введение на поверхность дыхательных путей можно осуществлять путем интраназального введения (например, с помощью капельницы, тампона или ингалятора). Местное введение антител на поверхность дыхательных путей также можно осуществлять путем ингаляционного введения, например, путем создания пригодных для вдыхания частиц фармацевтического состава (включительно как с твердыми, так и с жидкими частицами), содержащих антитела в виде аэрозольной суспензии, и затем вызывая вдыхание субъектом указанных пригодных для вдыхания частиц. Способы и устройство для введения пригодных для вдыхания частиц фармацевтических составов хорошо известны, и можно применять любую традиционную методику.[000262] The compositions of the present invention can be administered either as single therapeutic agents or in combination with other therapeutic agents. They can be administered alone, but are typically administered with a pharmaceutical carrier selected based on the chosen route of administration and standard pharmaceutical practice. Administration of the antibodies described herein can be accomplished by any suitable route, including parenteral injection (such as intraperitoneal, subcutaneous, or intramuscular injection), oral administration, or topical administration of the antibodies (typically contained in a pharmaceutical composition) to the surface of the respiratory tract. Topical administration to the surface of the respiratory tract can be accomplished by intranasal administration (e.g., using a dropper, swab, or inhaler). Local administration of antibodies to the respiratory tract surface can also be accomplished by inhalation, for example, by creating respirable particles of a pharmaceutical formulation (including both solid and liquid particles) containing the antibodies in an aerosol suspension and then inducing inhalation of said respirable particles by the subject. Methods and apparatus for administering respirable particles of pharmaceutical formulations are well known, and any conventional technique can be used.
[000263] В некоторых желательных вариантах осуществления данного изобретения указанные антитела вводят посредством парентеральной инъекции. Для парентерального введения антитела или молекулы можно составить в форме раствора, суспензии, эмульсии или лиофилизированного порошка в сочетании с фармацевтически приемлемым носителем для парентерального введения. Например, указанный носитель может представлять собой раствор антитела или его смеси, растворенный в приемлемом носителе, таком как водный носитель, такими носителями являются вода, физиологический раствор, раствор Рингера, раствор декстрозы, раствор трегалозы или сахарозы, или 5% сывороточный альбумин, 0,4% физиологический раствор, 0,3% глицин и тому подобное. Также можно использовать липосомы и неводные носители, такие как фиксированные масла. Указанные растворы стерильны и, как правило, не содержат твердых частиц. Указанные композиции могут быть стерилизованы обычными, хорошо известными методиками стерилизации. Указанные композиции могут содержать фармацевтически приемлемые вспомогательные вещества, необходимые для приближения к физиологическим условиям, такие как регулирующие рН и буферные агенты, регулирующие токсичность агенты и тому подобное, например, ацетат натрия, хлорид натрия, хлорид калия, хлорид кальция, лактат натрия и т.д. Концентрация антител в указанных фармацевтических составах может варьировать в широких пределах, например, от меньше чем около 0,5% по массе, обычно на уровне или по меньшей мере около 1% по массе, вплоть до 15% или 20% по массе, и выбирается главным образом на основе объемов жидкости, показателей вязкости и т.д., в соответствии с конкретным выбранным путем введения. Носитель или лиофилизированный порошок могут содержать добавки, которые поддерживают изотоничность (например, хлорид натрия, маннит) и химическую стабильность (например, буферы и консерванты). Указанный фармацевтический состав стерилизуют с помощью общепринятых методик. Фактические способы приготовления композиций для парентерального введения известны или очевидны специалистам в данной области техники и описаны более подробно, например, в работе REMINGTON'S PHARMA. SCI. (15th ed., Mack Pub. Co., Easton, Pa., 1980).[000263] In some desirable embodiments of the present invention, the antibodies are administered by parenteral injection. For parenteral administration, the antibodies or molecules can be formulated in the form of a solution, suspension, emulsion, or lyophilized powder in combination with a pharmaceutically acceptable carrier for parenteral administration. For example, the carrier can be a solution of the antibody or mixture thereof dissolved in an acceptable carrier, such as an aqueous carrier, such carriers being water, saline, Ringer's solution, dextrose solution, trehalose or sucrose solution, or 5% serum albumin, 0.4% saline, 0.3% glycine, and the like. Liposomes and non-aqueous carriers, such as fixed oils, can also be used. The solutions are sterile and generally free of solid particles. The compositions can be sterilized using conventional, well-known sterilization techniques. The said compositions may contain pharmaceutically acceptable auxiliary substances necessary to approximate physiological conditions, such as pH adjusting and buffering agents, toxicity adjusting agents, and the like, for example, sodium acetate, sodium chloride, potassium chloride, calcium chloride, sodium lactate, etc. The concentration of antibodies in the said pharmaceutical formulations may vary widely, for example, from less than about 0.5% by weight, usually at or at least about 1% by weight, up to 15% or 20% by weight, and is selected mainly on the basis of liquid volumes, viscosity indices, etc., in accordance with the specific chosen route of administration. The carrier or lyophilized powder may contain additives that maintain isotonicity (e.g., sodium chloride, mannitol) and chemical stability (e.g., buffers and preservatives). The said pharmaceutical formulation is sterilized using conventional techniques. Actual methods for preparing compositions for parenteral administration are known or obvious to those skilled in the art and are described in more detail, for example, in REMINGTON'S PHARMA. SCI. (15th ed., Mack Pub. Co., Easton, Pa., 1980).
[000264] Антитела или молекулы согласно данному изобретению могут быть лиофилизированы для хранения и восстановлены в подходящем носителе перед использованием. Было показано, что данная методика эффективна при использовании с обычными иммуноглобулинами. Можно использовать любые подходящие методики лиофилизации и восстановления. Специалистам в данной области техники будет понятно, что лиофилизация и восстановление могут приводить к различной степени потери активности антител и что уровни использования, возможно, придется корректировать для компенсации. Композиции, содержащие указанные антитела или их смесь, можно вводить для предотвращения рецидива и (или) для терапевтического лечения существующего заболевания. Подходящие фармацевтические носители описаны в наиболее позднем издании «Фармацевтических наук Ремингтона» («REMINGTON'S PHARMACEUTICAL SCIENCES») - стандартной цитируемой работе в данной области техники. При терапевтическом применении композиции вводят субъекту, уже страдающему заболеванием, в количестве, достаточном для излечения или, по меньшей мере, частичной остановки или облегчения указанного заболевания и его осложнений.[000264] The antibodies or molecules of the present invention can be lyophilized for storage and reconstituted in a suitable carrier before use. This technique has been shown to be effective when used with conventional immunoglobulins. Any suitable lyophilization and reconstitution techniques can be used. Those skilled in the art will appreciate that lyophilization and reconstitution can result in varying degrees of loss of antibody activity and that usage levels may need to be adjusted to compensate. Compositions containing the antibodies or mixtures thereof can be administered to prevent relapse and/or for the therapeutic treatment of an existing disease. Suitable pharmaceutical carriers are described in the most recent edition of "REMINGTON'S PHARMACEUTICAL SCIENCES," a standard reference in the art. In therapeutic use, the compositions are administered to a subject already suffering from a disease in an amount sufficient to cure or at least partially arrest or alleviate said disease and its complications.
[000265] Эффективные дозы композиций согласно данному изобретению для лечения состояний или заболеваний, описанных в данном документе, варьируются в зависимости от множества различных факторов, включительно, например, но не ограничиваясь ими, с фармакодинамическими характеристиками конкретного агента, способом и путем его введения; целевым участком; физиологическим состоянием животного; другими вводимыми лекарственными препаратами; характером лечения - профилактическим или терапевтическим; возрастом, состоянием здоровья и массой тела реципиента; природой и степенью выраженности симптомов, характером сопутствующего лечения, частотой лечения и желаемым эффектом.[000265] Effective doses of the compositions of the present invention for treating the conditions or diseases described herein vary depending on a variety of factors, including, for example, but not limited to, the pharmacodynamic characteristics of the particular agent, the route and route of administration; the target site; the physiological state of the animal; other drugs administered; the nature of the treatment - prophylactic or therapeutic; the age, health and body weight of the recipient; the nature and severity of the symptoms, the nature of concomitant treatment, the frequency of treatment and the desired effect.
[000266] Однократное или многократное введение указанных композиций можно осуществлять с уровнями доз и схемой, выбираемыми лечащим ветеринаром. В любом случае, указанные фармацевтические композиции должны обеспечивать количество антитела (антител) согласно данному изобретению, достаточное для эффективного лечения данного субъекта. В иллюстративном варианте осуществления данного изобретения композицию согласно данному изобретению вводят один раз в два месяца, один раз в три месяца, один раз в четыре месяца, один раз в пять месяцев, один раз в шесть месяцев или один раз в семь месяцев.[000266] Single or multiple administrations of the said compositions can be carried out at dosage levels and in a schedule selected by the attending veterinarian. In any case, the said pharmaceutical compositions should provide an amount of the antibody(ies) of the present invention sufficient to effectively treat the subject. In an illustrative embodiment of the present invention, the composition of the present invention is administered once every two months, once every three months, once every four months, once every five months, once every six months, or once every seven months.
[000267] Лечебные дозы можно титровать с использованием обычных способов, известных специалистам в данной области техники, для оптимизации безопасности и эффективности.[000267] Treatment doses can be titrated using conventional methods known to those skilled in the art to optimize safety and efficacy.
[000268] Фармацевтические композиции согласно данному изобретению могут содержать «терапевтически эффективное количество». «Терапевтически эффективное количество» относится к количеству, эффективному для достижения желаемого терапевтического результата при необходимых дозах и в течение необходимых периодов времени. Терапевтически эффективное количество молекулы может варьировать в зависимости от таких факторов, как стадия заболевания, возраст, пол и масса тела субъекта, а также способность молекулы вызывать желаемый ответ у данного субъекта. Терапевтически эффективное количество также является таким, при использовании которого терапевтически благоприятные эффекты превосходят любые токсические или пагубные эффекты данной молекулы.[000268] The pharmaceutical compositions of the present invention may comprise a "therapeutically effective amount." A "therapeutically effective amount" refers to an amount effective to achieve the desired therapeutic result at the required doses and for the required periods of time. A therapeutically effective amount of a molecule may vary depending on factors such as the stage of the disease, the age, sex, and body weight of the subject, as well as the ability of the molecule to elicit the desired response in the subject. A therapeutically effective amount is also one in which the therapeutically beneficial effects outweigh any toxic or detrimental effects of the molecule.
[000269] В другом аспекте данного изобретения композиции согласно данному изобретению можно применять, например, при лечении различных заболеваний и нарушений у собак. При употреблении в контексте данного документа термины «лечить» и «лечение» относятся к терапевтическому лечению, включительно с профилактическими или предупреждающими мерами, целью которых является предотвращение или замедление (уменьшение) нежелательного физиологического изменения, связанного с заболеванием или состоянием. Благоприятные или желаемые клинические результаты включают в себя следующие, но не ограничиваются ими: облегчение симптомов, уменьшение степени заболевания или состояния, стабилизацию заболевания или состояния (т.е. когда заболевание или состояние не ухудшается), задержку или замедление прогрессирования заболевания или состояния, смягчение или облегчение заболевания, или состояния, и ремиссию (частичную или полную) заболевания или состояния, независимо от того, обнаруживаемые они или нет. К числу тех, кто нуждается в лечении, относятся те, кто уже имеют заболевание или патологическое состояние, а также те, кто склонен к заболеванию или патологическому состоянию, или те, у кого заболевание или патологическое состояние необходимо предотвратить.[000269] In another aspect of the present invention, the compositions of the present invention can be used, for example, in the treatment of various diseases and disorders in dogs. As used herein, the terms "treat" and "treatment" refer to therapeutic treatment, including prophylactic or preventative measures, the purpose of which is to prevent or slow down (reduce) an undesirable physiological change associated with a disease or condition. Beneficial or desired clinical results include, but are not limited to, the following: alleviation of symptoms, a decrease in the severity of the disease or condition, stabilization of the disease or condition (i.e., when the disease or condition does not worsen), a delay or slowing of the progression of the disease or condition, mitigation or relief of the disease or condition, and remission (partial or complete) of the disease or condition, whether detectable or not. Those who require treatment include those who already have a disease or condition, those who are prone to developing a disease or condition, or those whose disease or condition needs to be prevented.
[000270] Мутантную молекулу согласно данному изобретению можно применять для лечения любого подходящего заболевания или нарушения. Например, мутантное антитело против ИЛ-31 согласно данному изобретению можно применять для лечения опосредованных ИЛ-31 состояния зуда или аллергического состояния. Примеры опосредованного ИЛ-31 состояния зуда включают в себя, например, но не ограничиваются ими, атопический дерматит, экзему, псориаз, склеродермию и зуд. Примеры опосредованного ИЛ-31 аллергического состояния включают в себя, например, но не ограничиваются ими, аллергический дерматит, летнюю экзему, крапивницу, отеки, воспалительное заболевание дыхательных путей, рецидивирующую обструкцию дыхательных путей, гиперчувствительность дыхательных путей, хроническую обструктивную болезнь легких и воспалительные процессы, возникающие в результате аутоиммунитета.[000270] The mutant molecule of the present invention can be used to treat any suitable disease or disorder. For example, the mutant anti-IL-31 antibody of the present invention can be used to treat an IL-31-mediated pruritic or allergic condition. Examples of an IL-31-mediated pruritic condition include, for example, but are not limited to, atopic dermatitis, eczema, psoriasis, scleroderma, and pruritus. Examples of an IL-31-mediated allergic condition include, for example, but are not limited to, allergic dermatitis, summer eczema, urticaria, edema, inflammatory airway disease, recurrent airway obstruction, airway hyperresponsiveness, chronic obstructive pulmonary disease, and inflammatory processes resulting from autoimmunity.
[000271] Мутантное антитело против ФРН согласно данному изобретению можно применять для лечения опосредованных ФРН боли или состояния. Примеры боли включают в себя, например, следующие, но не ограничиваясь ими: хроническую боль, воспалительную боль, боль после хирургического надреза, нейропатическую боль, боль при переломе, боль при переломе, ассоциированном с остеопорозом, постгерпетическую невралгию, боль при онкологическом заболевании, боль, возникающую в результате ожогов, боль, связанную с ранами, боль, связанную с травмой, нейропатическую боль, боль, связанную с нарушением опорно-двигательного аппарата, ревматоидный артрит, остеоартрит, анкилозирующий спондилит, серонегативные (неревматоидные) артропатии, внесуставной ревматизм, периартикулярное нарушение или периферическую нейропатию. В конкретном варианте осуществления данного изобретения указанная боль представляет собой боль при остеоартрите.[000271] The NGF mutant antibody of the present invention can be used to treat an NGF-mediated pain or condition. Examples of pain include, but are not limited to, chronic pain, inflammatory pain, pain following a surgical incision, neuropathic pain, fracture pain, osteoporosis-associated fracture pain, postherpetic neuralgia, cancer pain, pain resulting from burns, pain associated with wounds, pain associated with trauma, neuropathic pain, pain associated with musculoskeletal disorder, rheumatoid arthritis, osteoarthritis, ankylosing spondylitis, seronegative (non-rheumatoid) arthropathies, extra-articular rheumatism, periarticular disorder, or peripheral neuropathy. In a specific embodiment of the present invention, said pain is osteoarthritic pain.
[000272] Мутантное антитело против ТФР-β согласно данному изобретению можно применять для лечения ТФР-β-опосредованного заболевания или патологического состояния. Примеры ТФР-β-опосредованного заболевания или патологического состояния включают в себя, например, но не ограничиваются ей, хроническую болезнь почек.[000272] The TGF-β mutant antibody of the present invention can be used to treat a TGF-β-mediated disease or condition. Examples of a TGF-β-mediated disease or condition include, for example, but are not limited to, chronic kidney disease.
[000273] Все патенты и литературные ссылки, указанные в данном документе, настоящим включены в данный документ посредством ссылки во всей их полноте.[000273] All patents and literature references cited in this document are hereby incorporated by reference in their entirety.
[000274] Следующие ниже примеры представлены в дополнение к предшествующему описанию и для лучшего понимания изобретения, описанного в данном документе. Указанные примеры не следует рассматривать как ограничение описываемого изобретения. Следует понимать, что примеры и варианты осуществления данного изобретения, описанные в данном документе, предназначены только для иллюстративных целей, и что различные их модификации или изменения будут понятны квалифицированным специалистам в данной области техники и включены в данный документ, и могут осуществляться без отклонения от объема данного изобретения.[000274] The following examples are presented in addition to the preceding description and for a better understanding of the invention described herein. These examples should not be construed as limiting the invention described. It should be understood that the examples and embodiments of the invention described herein are intended for illustrative purposes only, and that various modifications or changes thereof will be understood by those skilled in the art and are included herein, and can be made without departing from the scope of the invention.
ПРИМЕРЫEXAMPLES
ПРИМЕР 1EXAMPLE 1
Конструирование Fc-мутантных собачьих IgGConstruction of Fc-mutant canine IgG
[000275] Конструирование всех собачьих IgG (фиг. 1) осуществляли так, как описано в работе Bergeron et al. (Bergeron etal., 2014, Vet Immunol Immunopathol., vol. 157 (1-2), pages 31-41), при этом использовали плазмиды, содержащие последовательность, кодирующую собачьи константные области для подкласса IgGB (65), и последовательности VH/VL для каждого исследуемого в данном примере мАт вставляли в положении к 5' и в рамке с нуклеотидами, кодирующими указанные константные домены. Мутации производили в положении N434 домена СН3 (фиг. 2) каждой плазмиды с использованием мутагенеза по технологии QuikChange II от Agilent и связанных с ним инструментов Agilent для разработки праймеров для мутагенеза, направленного на один сайт (https://www.agilent.com/store/primerDesignProgram.jsp).[000275] Construction of all canine IgGs (Fig. 1) was performed as described by Bergeron et al. (Bergeron et al., 2014, Vet Immunol Immunopathol., vol. 157 (1-2), pages 31-41), using plasmids containing the sequence encoding the canine constant regions for the IgGB subclass (65), and the VH/VL sequences for each mAb tested in this example were inserted 5' and in-frame with the nucleotides encoding the indicated constant domains. Mutations were made at position N434 of the CH3 domain (Fig. 2) of each plasmid using Agilent's QuikChange II mutagenesis technology and associated Agilent single-site mutagenesis primer design tools (https://www.agilent.com/store/primerDesignProgram.jsp).
[000276] Конструкции антител кратковременно экспрессировали либо в клетках НЕК 293 с использованием стандартного протокола трансфекции липофектамином (Invitrogen Life Technologies, г. Карлсбад, штат Калифорния, США), либо в клетках СНО с использованием протоколов из набора реактивов ExpiCHO transient system (ThermoFisher Scientific). Экспрессия ExpiCHO соответствовала протоколам, изложенным ThermoFisher для совместной трансфекции плазмиды, содержащей последовательность генов, кодирующую легкую цепь IgG и тяжелую цепь IgG. Для экспрессии HEK293 совместно трансфицировали равные по весу количества плазмиды с тяжелой цепью и плазмиды с легкой цепью. Клетки выращивали в течение 7 суток, после чего собирали надосадочные жидкости для очистки от антител. Антитела подвергали скринингу на предмет связывания с сенсорами белка А или белка G с помощью количественного определения в системе Octet QKe (Pall ForteBio Corp, г. Менло-Парк, штат Калифорния, США). Конструкции, которые связывались с белком А, очищали и количественно определяли так, как описано в работе Bergeron et al. для качественной оценки белка.[000276] Antibody constructs were transiently expressed either in HEK 293 cells using a standard Lipofectamine transfection protocol (Invitrogen Life Technologies, Carlsbad, CA, USA) or in CHO cells using protocols from the ExpiCHO transient system (ThermoFisher Scientific). ExpiCHO expression followed protocols outlined by ThermoFisher for co-transfection of a plasmid containing the gene sequence encoding the IgG light chain and IgG heavy chain. For HEK293 expression, equal weight amounts of the heavy chain plasmid and the light chain plasmid were co-transfected. Cells were grown for 7 days, after which supernatants were collected for antibody purification. Antibodies were screened for binding to protein A or protein G sensors using quantification on the Octet QKe system (Pall ForteBio Corp, Menlo Park, CA, USA). Constructs that bound protein A were purified and quantified as described by Bergeron et al. for protein qualitative assessment.
ПРИМЕР 2EXAMPLE 2
Анализ аффинности и активности связывания с целевой молекулойAnalysis of binding affinity and activity to the target molecule
[000277] Аффинность каждого мАт оценивали с помощью анализа по технологии Biacore и определяли IC50 с помощью подходящего клеточного анализа активности. Проводили поверхностный плазмонный резонанс на приборе Biacore Т200 (GE Healthcare, г. Питтсбург, штат Пенсильвания, США) для измерения аффинностей связывания каждого антитела с его целевой молекулой. По 2,5 мкг/мл каждого целевого белка иммобилизовали путем аминного связывания с использованием реактива EDC/NHS для получения конечной плотности, составляющей ~250 ЕР (единиц резонанса, англ. «RU») в проточных ячейках 2-4 сенсорного чипа СМ5, соответственно.[000277] The affinity of each mAb was assessed using the Biacore assay, and the IC50 was determined using a suitable cell-based activity assay. Surface plasmon resonance was performed on a Biacore T200 instrument (GE Healthcare, Pittsburgh, PA, USA) to measure the binding affinities of each antibody to its target molecule. 2.5 μg/mL of each target protein was immobilized by amine coupling using EDC/NHS reagent to obtain a final density of ~250 RU (resonance units) in flow cells 2–4 of the CM5 sensor chip, respectively.
[000278] Проточную ячейку 1 использовали в качестве внутреннего референса для поправки на воздействие рабочего буфера. Связывание антител измеряли при температуре 15°С с продолжительностью контакта 250 с и скоростью потока 30 мкл/мин. Период диссоциации составлял 300 с. Восстановление проводили с использованием восстановительных буферов (10 мМ глицина, рН 1,5, и 10 мМ NaOH) и скоростью потока 20 мкл/мин в течение 60 с каждый. Рабочий буфер / разбавитель (IX HBS-EP, GE Healthcare, BR-1006-69, 10Х, содержащий 100 мМ HEPES, 150 мМ NaCl, 30 мМ ЭДТА и 0,5% об./об. сурфактанта Р20, рН 7,4, 1:10 в отфильтрованной MQ H2O) использовали в качестве отрицательного контроля при том же формате анализа.[000278] Flow cell 1 was used as an internal reference to correct for the effect of the running buffer. Antibody binding was measured at 15°C with a contact time of 250 s and a flow rate of 30 μl/min. The dissociation period was 300 s. Reconstitution was performed using reconstitution buffers (10 mM glycine, pH 1.5, and 10 mM NaOH) and a flow rate of 20 μl/min for 60 s each. Running buffer/diluent (IX HBS-EP, GE Healthcare, BR-1006-69, 10X, containing 100 mM HEPES, 150 mM NaCl, 30 mM EDTA and 0.5% v/v surfactant P20, pH 7.4, 1:10 in filtered MQH2O ) was used as a negative control in the same assay format.
[000279] Данные анализировали с помощью программного обеспечения Biacore Т200 Evaluation с использованием способа двойного референса. Полученные в результате кривые встраивали в модель связывания 1:1. Не было выявлено различий в аффинностях связывания или в IC50между IgG ДТ и мутантными IgG N434H (таблица 1).[000279] Data were analyzed using Biacore T200 Evaluation software using the dual reference method. The resulting curves were fitted to a 1:1 binding model. No differences in binding affinities or IC50 were detected between WT IgG and N434H mutant IgG (Table 1).
ПРИМЕР 3EXAMPLE 3
Анализ связывания FcRn in vitroIn vitro FcRn binding assay
[000280] Выделяли и подготавливали собачий FcRn, и анализировали Fc-мутанты IgG по сравнению с собачьим FcRn в соответствии с работой Bergeron et.al, как обсуждалось выше. Применяли стандартный способ ПЦР для амплификации субъединицы α собачьего FcRn и β-микроглобулина с использованием вырожденных праймеров, разработанных на основании выравнивания последовательностей яванской макаки, человека, мыши и крысы. Праймеры содержали HindIII на 3'-концах и BamH1 на 5'-концах для облегчения субклонирования в векторы pcDNA3.1(+), сконструированные с С-концевой меткой 6х His+ВАР (AGLNDIFEAQKIEWHE). Субъединицу FcRn-α и β-микроглобулин совместно трансфицировали в клетки HEK 293, и комплекс FcRn очищали методом аффинной очистки посредством аффинной хроматографии с иммобилизованным металлом (АХИМ, англ. «IMAC») с использованием С-концевой гистидиновой метки. Показатели KD измеряли с помощью Biacore 3000 или Biacore Т200 (GE Healthcare, г. Питтсбург, штат Пенсильвания, США) с использованием сенсорного чипа СМ5.[000280] Canine FcRn was isolated and prepared, and IgG Fc mutants were analyzed compared to canine FcRn according to the work of Bergeron et al., as discussed above. A standard PCR method was used to amplify the canine FcRn α subunit and β-microglobulin using degenerate primers designed based on an alignment of cynomolgus monkey, human, mouse, and rat sequences. The primers contained HindIII at the 3' ends and BamH1 at the 5' ends to facilitate subcloning into pcDNA3.1(+) vectors constructed with a C-terminal 6x His+BAP tag (AGLNDIFEAQKIEWHE). FcRn-α subunit and β-microglobulin were cotransfected into HEK 293 cells, and the FcRn complex was affinity purified by immobilized metal affinity chromatography (IMAC) using a C-terminal histidine tag. KD values were measured using a Biacore 3000 or Biacore T200 (GE Healthcare, Pittsburgh, PA, USA) with a CM5 sensor chip.
[000281] FcRn иммобилизовали на поверхности сенсора с использованием стандартного способа аминной иммобилизации для достижения желаемой поверхностной плотности. HBS-EP использовали в качестве рабочего буфера для иммобилизации, а 10 мМ MES; 150 мМ NaCl; 0,005% Твин-20; 0,5 мг/мл БСА; рН 6 и р Н7,2, и ФСБ; 0,005% Твин-20; 0,5 мг/мл БСА; рН 7,4 использовали в качестве рабочих буферов для анализа и титрования. Fc-мутантные IgG пропускали над поверхностью рецепторов и определяли аффинность с помощью программного обеспечения Scrubber2 (BioLogic Software Pty, Ltd., Кэмпбелл, Австралия) или программного обеспечения Т200 Evaluation (таблица 2). Значения от пустых контрольных ячеек, содержащих только буфер, вычитали из значений для всех остальных ячеек. Проточные ячейки восстанавливали с использованием 50 мМ Трис рН 8. Прогоны проводили при температуре 15°С.[000281] FcRn was immobilized on the sensor surface using a standard amine immobilization method to achieve the desired surface density. HBS-EP was used as the immobilization running buffer, and 10 mM MES; 150 mM NaCl; 0.005% Tween-20; 0.5 mg/mL BSA; pH 6 and pH7.2, and PBS; 0.005% Tween-20; 0.5 mg/mL BSA; pH 7.4 were used as assay running and titration buffers. Fc-mutant IgGs were passed over the receptor surface and affinity was determined using Scrubber2 software (BioLogic Software Pty, Ltd., Campbell, Australia) or T200 Evaluation software (Table 2). Values from blank control wells containing only buffer were subtracted from the values for all other wells. Flow cells were reconstituted using 50 mM Tris pH 8. Runs were performed at 15°C.
[000282] Мутации, произведенные в положении 434 для мАт 1, 2 и 3, оказали заметное влияние на аффинность указанных IgG к FcRn при рН 6. Мутация N434H привела к значительному повышению аффинности к FcRn при рН 6, сохраняя при этом слабую аффинность при рН 7,2 для всех трех мАт.Обширный мутагенез в положении 434 показывает, что несколько других мутаций повышают аффинность к FcRn при рН 6. Данное исследование показывает, что повышение аффинности IgG к FcRn не зависит от доменов VHVL и является универсальным для любого собачьего IgGB (65).[000282] Mutations made at position 434 for mAbs 1, 2, and 3 had a marked effect on the affinity of these IgGs for FcRn at pH 6. The N434H mutation resulted in a significant increase in affinity for FcRn at pH 6, while maintaining weak affinity at pH 7.2 for all three mAbs. Extensive mutagenesis at position 434 shows that several other mutations increase affinity for FcRn at pH 6. This study shows that the increase in IgG affinity for FcRn is independent of the VHVL domains and is universal for any canine IgG (65).
Таблица 2. Связывание IgG дикого типа (ДТ) и мутантного IgG N434 с собачьим FcRn, измеренное посредством поверхностного плазмонного резонанса (Biacore):Table 2. Binding of wild-type (WT) and mutant IgG N434 to canine FcRn measured by surface plasmon resonance (Biacore):
ПРИМЕР 4EXAMPLE 4
Исследования фармакокинетики Fc-мутантных IgG у собакPharmacokinetic studies of Fc-mutant IgG in dogs
[000283] Цель данного исследования заключалась в определении фармакокинетики у собак 2 моноклональных антител IgG (мАт1 и мАт2), полученных против двух конкретных и разных целевых молекул, с мутантным Fc N434H, встроенным в каждый IgG.[000283] The objective of this study was to determine the pharmacokinetics in dogs of two IgG monoclonal antibodies (mAb1 and mAb2) raised against two specific and different target molecules with the mutant Fc N434H incorporated into each IgG.
[000284] Для исследования мАт1 ДТ и мутантных IgG N434H группам из 4 самцов собак породы бигль вводили однократную дозу в 2 мг/кг внутривенно. Для исследования мАт2 ДТ и мутантных IgG группам из 4 самцов и 4 самок собак породы бигль вводили по три дозы по 2 мг/кг одного из IgG с интервалом в 28 суток. Первые две дозы вводили подкожно, а последнюю дозу вводили внутривенно. «Свободные» IgG в сыворотке крови собак анализировали с использованием валидированных анализов связывания лигандов, специфичных для каждого IgG, автоматизированных на платформе Gyrolab хР™ (фиг. 3-6). Фармакокинетические расчеты проводили с использованием некомпартментарного подхода (правило линейной трапеции для расчетов AUC) с помощью Watson™ (таблица 3). Для мАт2 IgG периоды полужизни оценивали для первой и второй доз с использованием моментов времени с 7-х по 28-е сутки после введения доз. Периоды полужизни для последней дозы оценивали с использованием моментов времени с 7-х по 42-е сутки после введения дозы. Дополнительные расчеты выполняли с помощью Excel™, включительно с поправкой AUC, учитывающей перекрытие профилей концентрация время после 2-й и 3-й инъекций препарата. Сводные данные о концентрации во времени и фармакокинетические данные с простой статистикой (среднее значение, стандартное отклонение, коэффициент вариации) рассчитывали с использованием Excel™ или Watson™. Никакие другие статистические анализы не проводили.[000284] For the WT mAb1 and N434H mutant IgG studies, groups of 4 male Beagle dogs were administered a single 2 mg/kg dose intravenously. For the WT mAb2 and mutant IgG studies, groups of 4 male and 4 female Beagle dogs were administered three 2 mg/kg doses of either IgG, 28 days apart. The first two doses were administered subcutaneously, and the last dose was administered intravenously. Free IgG in dog serum was analyzed using validated ligand binding assays specific for each IgG, automated on the Gyrolab xP™ platform (Figs. 3-6). Pharmacokinetic calculations were performed using a non-compartmental approach (linear trapezoidal rule for AUC calculations) using Watson™ (Table 3). For mAb2 IgG, half-lives were estimated for the first and second doses using time points from day 7 to day 28 post-dose. Half-lives for the final dose were estimated using time points from day 7 to day 42 post-dose. Additional calculations were performed using Excel™, including an AUC correction accounting for the overlap in concentration-time profiles after the second and third injections. Summary concentration-time data and pharmacokinetic data with simple statistics (mean, standard deviation, coefficient of variation) were calculated using Excel™ or Watson™. No other statistical analyses were performed.
[000285] Было показано, что точечная мутация N434H в собачьем IgGB (65) увеличивает период полужизни двух различных собачьих IgG у собак породы бигль. Для мАт1 период полужизни увеличился с 9,7 +/- 2,6 суток до 17,1 +/- 5,1 суток, а для мАт2 - с 9,2 +/- 1,7 суток до 19,3 +/- 3,1 суток. Механизм действия заключается в повышении аффинности к собачьему FcRn при рН 6, и это было продемонстрировано на трех собачьих IgG, которые связывают очень разные и конкретные растворимые целевые молекулы. Следовательно, было продемонстрировано, что продление периода полужизни мутациями N434 в IgGB (65) не зависит от доменов VHVL.[000285] The N434H point mutation in canine IgG (65) was shown to increase the half-life of two different canine IgGs in beagle dogs. For mAb1, the half-life increased from 9.7 +/- 2.6 days to 17.1 +/- 5.1 days, and for mAb2, from 9.2 +/- 1.7 days to 19.3 +/- 3.1 days. The mechanism of action is through increased affinity for canine FcRn at pH 6, and this was demonstrated for three canine IgGs that bind very different and specific soluble target molecules. Therefore, the half-life prolongation by the N434 mutations in IgG (65) was demonstrated to be independent of the VHVL domains.
ПРИМЕР 5EXAMPLE 5
Анализ связывания FcRnFcRn binding assay
[000286] Выделяли и подготавливали собачий FcRn, и анализировали Fc-мутанты IgG по сравнению с собачьим FcRn в соответствии с работой Bergeron et. al, как обсуждалось выше. Применяли стандартный способ ПЦР для амплификации субъединицы α собачьего FcRn и β-микроглобулина. Субъединицу FcRn-α и β-микроглобулин совместно трансфицировали в клетки HEK 293, и комплекс FcRn очищали методом аффинной очистки посредством аффинной хроматографии с иммобилизованным металлом (АХИМ, англ. «IMAC») с использованием С-концевой гистидиновой метки. Комплекс FcRn метили биотином с помощью ферментативной реакции биотинилирования BirA. Показатели KD измеряли с помощью Biacore Т200 (GE Healthcare, г. Питтсбург, штат Пенсильвания, США) или Biacore 8K (Cytiva, г. Мальборо, штат Массачусетс, США) с использованием сенсорного чипа SA.[000286] Canine FcRn was isolated and prepared, and IgG Fc mutants were analyzed compared to canine FcRn according to the work of Bergeron et al, as discussed above. A standard PCR method was used to amplify the canine FcRn α subunit and β-microglobulin. The FcRn-α subunit and β-microglobulin were co-transfected into HEK 293 cells, and the FcRn complex was affinity purified by immobilized metal affinity chromatography (IMAC) using a C-terminal histidine tag. The FcRn complex was labeled with biotin using the enzymatic biotinylation reaction BirA. KD values were measured using a Biacore T200 (GE Healthcare, Pittsburgh, PA, USA) or Biacore 8K (Cytiva, Marlborough, MA, USA) using the SA sensor chip.
[000287] FcRn захватывали на поверхности указанного сенсора с использованием модифицированного метода захвата SA. 10 мМ MES; 150 мМ NaCl; 0,005% Твин-20; 0,5 мг/мл БСА; рН 6 использовали в качестве буфера для захвата, анализа и титрования. 1х HBS-P, 0,5 мг/мл БСА; рН 7,4 также использовали в качестве буфера для анализа и титрования. Fc-мутантные IgG пропускали над поверхностью рецепторов и определяли аффинность с помощью программного обеспечения Т200 Evaluation или программного обеспечения Biacore Insight Evaluation. Значения от пустых контрольных ячеек, содержащих только буфер, вычитали из значений для всех остальных ячеек. Проточные ячейки восстанавливали с использованием 50 мМ Трис рН 8 или рН 9. Прогоны проводили при температуре 15°С.[000287] FcRn was captured on the surface of the indicated sensor using a modified SA capture method. 10 mM MES; 150 mM NaCl; 0.005% Tween-20; 0.5 mg/ml BSA; pH 6 were used as the capture, assay, and titration buffer. 1x HBS-P, 0.5 mg/ml BSA; pH 7.4 was also used as the assay and titration buffer. Fc-mutant IgGs were passed over the receptor surface and the affinity was determined using T200 Evaluation software or Biacore Insight Evaluation software. Values from blank control wells containing only buffer were subtracted from the values for all other wells. Flow cells were reconstituted with 50 mM Tris pH 8 or pH 9. Runs were performed at 15°C.
[000288] Мутации, произведенные в соответствующих положениях, оказали заметное влияние на аффинность указанных IgG к FcRn при рН 6. Связывание IgG дикого типа (ДТ) и мутантных IgG с собачьим FcRn измеряли посредством поверхностного плазмонного резонанса (Biacore).[000288] Mutations made at the corresponding positions had a marked effect on the affinity of these IgGs for FcRn at pH 6. Binding of wild-type (WT) and mutant IgGs to canine FcRn was measured by surface plasmon resonance (Biacore).
[000289] Заметное влияние на аффинность наблюдалось у совершенно разных и структурно различающихся антител, которые связывают разные целевые молекулы (т.е. у антител против ИЛ-31 и против ФРН), а также у разных версий антител, которые связывают одну и ту же целевую молекулу (т.е. у разных версий антител против ИЛ-31 и против ФРН) (таблицы 1-4). Следовательно, повышение аффинности IgG к FcRn не зависит от доменов VHVL или областей CDR. В дополнение к этому, заметное влияние на аффинность наблюдалось у множества подклассов IgG, хотя и присутствовала небольшая вариабельность. В целом, данные результаты показывают, что повышение аффинности IgG к FcRn к не зависит от подкласса собачьих IgG.[000289] Marked effects on affinity were observed across distinct and structurally distinct antibodies that bind different target molecules (i.e., anti-IL-31 and anti-NGF antibodies), as well as across different versions of antibodies that bind the same target molecule (i.e., different versions of anti-IL-31 and anti-NGF antibodies) (Tables 1-4). Therefore, the increase in IgG affinity for FcRn is independent of the VHVL domains or CDR regions. Additionally, marked effects on affinity were observed across multiple IgG subclasses, although there was some variability. Overall, these results indicate that the increase in IgG affinity for FcRn is independent of the canine IgG subclass.
ПРИМЕР 6EXAMPLE 6
Исследования фармакокинетики Fc-мутанта IgG у собакPharmacokinetic studies of Fc-mutant IgG in dogs
[000290] Цель данного исследования заключалась в определении эффективности дозы ZTS-00008183, составляющей 4,0 мг/кг, на основании эффективности в модели индуцированного зуда у собак, при этом эффективность измеряли путем оценки снижения зуда на протяжении до 210 суток, включительно, после введения исследуемого препарата в сутки 0. При употреблении в контексте данного документа термин «ZTS-00008183» обозначает антитела против ИЛ-31, имеющее мутацию N434H в его константной области. ZTS-00008183 содержит вариабельные области (т.е. VL и VH, включающие в себя CDR) из 34D03, как описано в данном документе.[000290] The objective of this study was to determine the efficacy of ZTS-00008183 at a dose of 4.0 mg/kg based on efficacy in a canine pruritus model, with efficacy measured by assessing pruritus reduction for up to and including 210 days following administration of study drug on Day 0. As used herein, the term "ZTS-00008183" refers to an anti-IL-31 antibody that has the N434H mutation in its constant region. ZTS-00008183 comprises the variable regions (i.e., VL and VH, including the CDRs) of 34D03, as described herein.
[000291] ZTS-00008183 или плацебо вводили путем однократной п/к инъекции собакам породы бигль (возраст ~4 года). Виды воздействий обобщены ниже.[000291] ZTS-00008183 or placebo was administered by a single subcutaneous injection to beagle dogs (age ~4 years). The interventions are summarized below.
[000292] Образцы сыворотки крови отбирали до введения препарата (сутки -7) и в сутки 7, 14, 28, 56, 84, 112, 140, 168 и 210 после введения препарата.[000292] Serum samples were collected prior to drug administration (day -7) and on days 7, 14, 28, 56, 84, 112, 140, 168, and 210 after drug administration.
[000293] В частности, собакам породы бигль (n=8, возраст около 4 лет на дату введения дозы) однократно вводили п/к-дозу ZTS-00008183 4 мг/кг в исследовании ИЛ-31-индуцированного зуда. Образцы сыворотки крови отбирали до введения препарата (сутки -7) и в сутки 7, 14, 28, 56, 84, 112, 140, 168 и 210 после введения препарата.[000293] Specifically, beagle dogs (n=8, approximately 4 years of age at dosing) were administered a single 4 mg/kg subcutaneous dose of ZTS-00008183 in a study of IL-31-induced pruritus. Serum samples were collected prior to dosing (day -7) and on days 7, 14, 28, 56, 84, 112, 140, 168, and 210 after dosing.
[000294] Тестируемые мАт количественно определяли с использованием анализов связывания лигандов. Антитела против лекарственных препаратов (АПЛП, англ. «ADA») оценивали с помощью соответствующих способов анализа АПЛП.[000294] Test mAbs were quantified using ligand binding assays. Anti-drug antibodies (ADAs) were assessed using appropriate ADA assays.
[000295] Биоаналитические данные были получены от BioAgilytix Labs в виде файлов Excel™. Данные импортировали в Watson™ v. 7.4.1. Токсикокинетические и фармакокинетические параметры (Cmax, tmax, AUC, AUC экстрап. и t1/2) рассчитывали с использованием некомпартментарного подхода с помощью Watson™ v. 7.4.1. Периоды полужизни ZTS-00008183 оценивали для групп В02 с использованием моментов времени с 56-х по 210-е сутки после введения доз. Проводили оценку иммуногенности.[000295] Bioanalytical data were obtained from BioAgilytix Labs as Excel™ files. Data were imported into Watson™ v. 7.4.1. Toxicokinetic and pharmacokinetic parameters (Cmax , tmax , AUC, AUC extrap., and t1/2 ) were calculated using a non-compartmental approach using Watson™ v. 7.4.1. ZTS-00008183 half-lives were estimated for B02 cohorts using time points from days 56 to 210 post-dose. Immunogenicity assessment was performed.
[000296] Концентрации ZTS-00008183 в сыворотке крови перечислены в таблице 6.[000296] Serum concentrations of ZTS-00008183 are listed in Table 6.
[000297] Средние значения фармакокинетических параметров ZTS-00008183 представлены в таблице 7 ниже.[000297] The mean pharmacokinetic parameter values for ZTS-00008183 are presented in Table 7 below.
[000298] Иммуногенности, вызванной лечением, обнаружено не было.[000298] No treatment-induced immunogenicity was observed.
[000299] Профили ZTS-00008183 в сыворотке крови проиллюстрированы на фиг. 7. Средние профили ZTS-00008183 в сыворотке крови проиллюстрированы на фиг. 8.[000299] The serum profiles of ZTS-00008183 are illustrated in Fig. 7. The mean serum profiles of ZTS-00008183 are illustrated in Fig. 8.
[000300] В целом, данные результаты демонстрируют, что константный домен собачьего IgG, имеющий мутацию N434H, обеспечивал период полужизни, составляющий около 30 суток. Это увеличение периода полужизни больше чем в 2 раза (т.е. на 200%) по сравнению с периодом полужизни для дикого типа, составляющим от 9,2 суток до 9,7 суток (см. таблицу 2).[000300] Overall, these results demonstrate that the canine IgG constant domain containing the N434H mutation provided a half-life of approximately 30 days. This is a greater than 2-fold (i.e., 200%) increase in half-life compared to the wild-type half-life of 9.2 to 9.7 days (see Table 2).
ПРИМЕР 7EXAMPLE 7
Длительный терапевтический эффект Fc-мутанта IgGLong-term therapeutic effect of Fc-mutant IgG
[000301] Оценивали однократную подкожную дозу ZTS-00008183, составляющую 4 мг/кг, в модели ИЛ-31-индуцированного зуда у собак.[000301] A single subcutaneous dose of 4 mg/kg ZTS-00008183 was evaluated in a canine IL-31-induced pruritus model.
[000302] Двадцать четыре здоровых собаки породы бигль рандомизированно распределяли по группам воздействия с использованием рандомизированной схемы полного блока и вводили им ZTS-00008183 в дозе по 4 мг/кг массы тела или плацебо в параллельном исследовании эффективности. Животных распределяли на основании исторических оценок зуда, чтобы сформировать восемь (8) полных блоков размером по 3.[000302] Twenty-four healthy Beagle dogs were randomly assigned to treatment groups using a randomized complete block design and administered ZTS-00008183 at a dose of 4 mg/kg body weight or placebo in a parallel efficacy study. Animals were allocated based on historical pruritus scores to form eight (8) complete blocks of size 3.
[000303] Каждому животному в день -7 исследования вводили ИЛ-31 (по 2,5 мкг/кг) для индуцирования зуда, чтобы установить базовую оценку зуда. Дополнительные введения ИЛ-31 выполняли в дни исследования 7, 28, 56, 84, 112, 140, 168 и 210.[000303] Each animal was administered IL-31 (2.5 μg/kg) on study day 7 to induce pruritus to establish a baseline pruritus score. Additional IL-31 administrations were performed on study days 7, 28, 56, 84, 112, 140, 168, and 210.
[000304] За животными наблюдали на предмет связанного с зудом поведения в течение 120-минутного периода после каждого введения. Наблюдения проводили в течение 1-минутного периода, и любая связанная с зудом активность в течение этого периода обозначалась как положительный ответ. Совокупное число положительных ответов определяло оценку зуда.Animals were observed for pruritus-related behavior for a 120-minute period following each administration. Observations were made for a 1-minute period, and any pruritus-related activity during this period was designated as a positive response. The cumulative number of positive responses determined the pruritus score.
[000305] Во время этого исследования не было отмечено каких-либо побочных эффектов, и все исследуемые и контрольные препараты, и вводимые материалы, вводили в соответствии с протоколом.[000305] No adverse events were observed during this study, and all study and control drugs and injection materials were administered according to protocol.
[000306] Полученные результаты демонстрируют, что однократная п/к-доза ZTS-00008183, составляющая 4,0 мг/кг, характеризовалась значительно более низкой оценкой зуда по способу наименьших квадратов (таблицы 9, 11 и 13) по сравнению с контролем через 3, 4 и 5 месяцев (Р<0,0001) в данной модели ИЛ-31-индуцированного зуда у собак.[000306] The results demonstrate that a single 4.0 mg/kg subcutaneous dose of ZTS-00008183 was associated with significantly lower least squares pruritus scores (Tables 9, 11, and 13) compared to controls at 3, 4, and 5 months (P<0.0001) in this IL-31-induced pruritus model in dogs.
[000307] Как показано на фиг. 9-13, ZTS-0008183 (В02) в дозе 4 мг/кг характеризуется значительно более низкой общей оценкой зуда в данной модели ИЛ-31-индуцированного зуда у собак по сравнению с контролем в дни исследования 84, 112, 140, 168 и 210.[000307] As shown in Figs. 9-13, ZTS-0008183 (B02) at 4 mg/kg had significantly lower total pruritus scores in this IL-31-induced pruritus model in dogs compared to controls on study days 84, 112, 140, 168, and 210.
[000308] Основываясь на данных оценках зуда, полученные результаты также демонстрируют, что ZTS-00008183 терапевтически эффективен в течение 84, 112, 140, 168 и 210 суток (т.е. около 7 месяцев).[000308] Based on these pruritus assessments, the obtained results also demonstrate that ZTS-00008183 is therapeutically effective for 84, 112, 140, 168 and 210 days (i.e., approximately 7 months).
[000309] Данные результаты дополнительно демонстрируют, что ZTS-00008183 обладает долгосрочным терапевтическим эффектом и может вводиться один раз в 3, 4, 5, 6 или 7 месяцев.[000309] These results further demonstrate that ZTS-00008183 has a long-term therapeutic effect and can be administered once every 3, 4, 5, 6, or 7 months.
[000310] В целом, полученные результаты демонстрируют, что константный домен собачьего IgG, имеющий мутацию N434H, поддерживает терапевтический уровень в сыворотке крови на протяжении около 210 суток (т.е. на 7 месяцев). Это в несколько раз превышает длительности поддержания терапевтического уровня антител против ИЛ-31 дикого типа, о которых сообщалось в более ранних исследованиях.[000310] Overall, the obtained results demonstrate that the constant domain of canine IgG bearing the N434H mutation maintains therapeutic levels in serum for approximately 210 days (i.e., 7 months). This is several times longer than the duration of maintenance of therapeutic levels of wild-type IL-31 antibodies reported in previous studies.
ПРИМЕР 8EXAMPLE 8
Анализ связывания FcRnFcRn binding assay
[000311] Как обсуждалось в примере 3, выделяли и подготавливали собачий FcRn, и анализировали Fc-мутанты IgG по сравнению с собачьим FcRn в соответствии с работой Bergeron et.al, как обсуждалось выше. Применяли стандартный способ ПЦР для амплификации субъединицы α собачьего FcRn и β-микроглобулина с использованием вырожденных праймеров, разработанных на основании выравнивания последовательностей яванской макаки, человека, мыши и крысы. Праймеры содержали HindIII на 3'-концах и BamH1 на 5'-концах для облегчения субклонирования в векторы pcDNA3.1(+), сконструированные с С-концевой меткой 6х His+ВАР (AGLNDIFEAQKIEWHE). Субъединицу FcRn-α и β-микроглобулин совместно трансфицировали в клетки HEK 293, и комплекс FcRn очищали методом аффинной очистки посредством аффинной хроматографии с иммобилизованным металлом (АХИМ, англ. «IMAC») с использованием С-концевой гистидиновой метки. Показатели KD измеряли с помощью Biacore Т200 (GE Healthcare, г. Питтсбург, штат Пенсильвания, США) с использованием сенсорного чипа СМ5 или SA.[000311] As discussed in Example 3, canine FcRn was isolated and prepared, and IgG Fc mutants were analyzed compared to canine FcRn according to the work of Bergeron et al., as discussed above. A standard PCR method was used to amplify the canine FcRn α subunit and β-microglobulin using degenerate primers designed based on an alignment of cynomolgus monkey, human, mouse, and rat sequences. The primers contained HindIII at the 3' ends and BamH1 at the 5' ends to facilitate subcloning into pcDNA3.1(+) vectors constructed with a C-terminal 6x His+BAP tag (AGLNDIFEAQKIEWHE). FcRn-α subunit and β-microglobulin were cotransfected into HEK 293 cells, and the FcRn complex was affinity purified by immobilized metal affinity chromatography (IMAC) using a C-terminal histidine tag. KD values were measured using a Biacore T200 (GE Healthcare, Pittsburgh, PA, USA) with a CM5 or SA sensor chip.
[000312] FcRn захватывали на поверхности указанного сенсора с использованием модифицированного метода захвата SA. 10 мМ MES; 150 мМ NaCl; 0,005% Твин-20; 0,5 мг/мл БСА; рН 6 использовали в качестве буфера для захвата, анализа и титрования. 1х HBS-P, 0,5 мг/мл БСА; рН 7,4 также использовали в качестве буфера для анализа и титрования. Fc-мутантные IgG пропускали над поверхностью рецепторов и определяли аффинность с помощью программного обеспечения Т200 Evaluation или программного обеспечения Biacore Insight Evaluation. Значения от пустых контрольных ячеек, содержащих только буфер, вычитали из значений для всех остальных ячеек. Проточные ячейки восстанавливали с использованием 50 мМ Трис рН 8 или рН 9. Прогоны проводили при температуре 15°С.[000312] FcRn was captured on the surface of the indicated sensor using a modified SA capture method. 10 mM MES; 150 mM NaCl; 0.005% Tween-20; 0.5 mg/ml BSA; pH 6 were used as the capture, assay, and titration buffer. 1x HBS-P, 0.5 mg/ml BSA; pH 7.4 was also used as the assay and titration buffer. Fc-mutant IgGs were passed over the receptor surface and the affinity was determined using T200 Evaluation software or Biacore Insight Evaluation software. Values from blank control wells containing only buffer were subtracted from the values for all other wells. Flow cells were reconstituted with 50 mM Tris pH 8 or pH 9. Runs were performed at 15°C.
[000313] Мутации, произведенные в положении 434 для антител мАт3 против ТФР-β, оказали заметное влияние на аффинность указанных IgG к FcRn при рН 6. Мутация N434H привела к значительному повышению аффинности к FcRn при рН 6, сохраняя при этом слабую аффинность при рН 7,4. Данное исследование показывает, что повышение аффинности IgG к FcRn не зависит от доменов VHVL и является универсальным для любого собачьего антитела против ТФР-β.[000313] Mutations made at position 434 in the anti-TGF-β mAb3 antibodies had a marked effect on the affinity of these IgGs for FcRn at pH 6. The N434H mutation resulted in a significant increase in affinity for FcRn at pH 6, while maintaining weak affinity at pH 7.4. This study demonstrates that the increase in IgG affinity for FcRn is independent of the VHVL domains and is universal for any canine anti-TGF-β antibody.
[000314] Предпочтительные варианты осуществления данного изобретения описаны в данном документе, но следует понимать, что данное изобретение не ограничивается указанными точными вариантами осуществления данного изобретения, и что специалисты в данной области техники могут вносить в него различные изменения и модификации без отступления от объема или духа данного изобретения, определенных в прилагаемой формуле данного изобретения.[000314] Preferred embodiments of the present invention have been described herein, but it should be understood that the present invention is not limited to the precise embodiments of the present invention indicated, and that various changes and modifications can be made thereto by those skilled in the art without departing from the scope or spirit of the present invention as defined in the appended claims.
--->--->
ПЕРЕЧЕНЬ ПОСЛЕДОВАТЕЛЬНОСТЕЙSEQUENCE LIST
<110> Zoetis Services LLC<110> Zoetis Services LLC
Bergeron, Lisa MarieBergeron, Lisa Marie
Campos, Henry LuisCampos, Henry Luis
<120> ВАРИАНТЫ СОБАЧЬИХ АНТИТЕЛ<120> CANINE ANTIBODIES VARIANTS
<130> ZP000358A-PCT<130> ZP000358A-PCT
<150 63/084241<150 63/084241
<151> 28.09.2020<151> September 28, 2020
<160> 120<160> 120
<170> PatentIn, версия 3.5<170> PatentIn, version 3.5
<210> 1<210> 1
<211> 335<211> 335
<212> БЕЛОК<212> PROTEIN
<213> Canis familiaris<213> Canis familiaris
<400> 1<400> 1
Ala Ser Thr Thr Ala Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Cys GlyAla Ser Thr Thr Ala Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Cys Gly
1 5 10 151 5 10 15
Ser Thr Ser Gly Ser Thr Val Ala Leu Ala Cys Leu Val Ser Gly TyrSer Thr Ser Gly Ser Thr Val Ala Leu Ala Cys Leu Val Ser Gly Tyr
20 25 3020 25 30
Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ser Leu Thr SerPhe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ser Leu Thr Ser
35 40 4535 40 45
Gly Val His Thr Phe Pro Ser Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr SerGly Val His Thr Phe Pro Ser Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser
50 55 6050 55 60
Leu Ser Ser Met Val Thr Val Pro Ser Ser Arg Trp Pro Ser Glu ThrLeu Ser Ser Met Val Thr Val Pro Ser Ser Arg Trp Pro Ser Glu Thr
65 70 75 8065 70 75 80
Phe Thr Cys Asn Val Ala His Pro Ala Ser Lys Thr Lys Val Asp LysPhe Thr Cys Asn Val Ala His Pro Ala Ser Lys Thr Lys Val Asp Lys
85 90 9585 90 95
Pro Val Pro Lys Arg Glu Asn Gly Arg Val Pro Arg Pro Pro Asp CysPro Val Pro Lys Arg Glu Asn Gly Arg Val Pro Arg Pro Pro Asp Cys
100 105 110100 105 110
Pro Lys Cys Pro Ala Pro Glu Met Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe IlePro Lys Cys Pro Ala Pro Glu Met Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Ile
115 120 125115 120 125
Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Leu Ile Ala Arg Thr Pro GluPhe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Leu Ile Ala Arg Thr Pro Glu
130 135 140130 135 140
Val Thr Cys Val Val Val Asp Leu Asp Pro Glu Asp Pro Glu Val GlnVal Thr Cys Val Val Val Asp Leu Asp Pro Glu Asp Pro Glu Val Gln
145 150 155 160145 150 155 160
Ile Ser Trp Phe Val Asp Gly Lys Gln Met Gln Thr Ala Lys Thr GlnIle Ser Trp Phe Val Asp Gly Lys Gln Met Gln Thr Ala Lys Thr Gln
165 170 175165 170 175
Pro Arg Glu Glu Gln Phe Asn Gly Thr Tyr Arg Val Val Ser Val LeuPro Arg Glu Glu Gln Phe Asn Gly Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu
180 185 190180 185 190
Pro Ile Gly His Gln Asp Trp Leu Lys Gly Lys Gln Phe Thr Cys LysPro Ile Gly His Gln Asp Trp Leu Lys Gly Lys Gln Phe Thr Cys Lys
195 200 205195 200 205
Val Asn Asn Lys Ala Leu Pro Ser Pro Ile Glu Arg Thr Ile Ser LysVal Asn Asn Lys Ala Leu Pro Ser Pro Ile Glu Arg Thr Ile Ser Lys
210 215 220210 215 220
Ala Arg Gly Gln Ala His Gln Pro Ser Val Tyr Val Leu Pro Pro SerAla Arg Gly Gln Ala His Gln Pro Ser Val Tyr Val Leu Pro Pro Ser
225 230 235 240225 230 235 240
Arg Glu Glu Leu Ser Lys Asn Thr Val Ser Leu Thr Cys Leu Ile LysArg Glu Glu Leu Ser Lys Asn Thr Val Ser Leu Thr Cys Leu Ile Lys
245 250 255245 250 255
Asp Phe Phe Pro Pro Asp Ile Asp Val Glu Trp Gln Ser Asn Gly GlnAsp Phe Phe Pro Pro Asp Ile Asp Val Glu Trp Gln Ser Asn Gly Gln
260 265 270260 265 270
Gln Glu Pro Glu Ser Lys Tyr Arg Thr Thr Pro Pro Gln Leu Asp GluGln Glu Pro Glu Ser Lys Tyr Arg Thr Thr Pro Pro Gln Leu Asp Glu
275 280 285275 280 285
Asp Gly Ser Tyr Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Ser Val Asp Lys Ser ArgAsp Gly Ser Tyr Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Ser Val Asp Lys Ser Arg
290 295 300290 295 300
Trp Gln Arg Gly Asp Thr Phe Ile Cys Ala Val Met His Glu Ala LeuTrp Gln Arg Gly Asp Thr Phe Ile Cys Ala Val Met His Glu Ala Leu
305 310 315 320305 310 315 320
His His His Tyr Thr Gln Glu Ser Leu Ser His Ser Pro Gly LysHis His His Tyr Thr Gln Glu Ser Leu Ser His Ser Pro Gly Lys
325 330 335325 330 335
<210> 2<210> 2
<211> 335<211> 335
<212> БЕЛОК<212> PROTEIN
<213> Canis familiaris<213> Canis familiaris
<400> 2<400> 2
Ala Ser Thr Thr Ala Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Cys GlyAla Ser Thr Thr Ala Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Cys Gly
1 5 10 151 5 10 15
Ser Thr Ser Gly Ser Thr Val Ala Leu Ala Cys Leu Val Ser Gly TyrSer Thr Ser Gly Ser Thr Val Ala Leu Ala Cys Leu Val Ser Gly Tyr
20 25 3020 25 30
Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ser Leu Thr SerPhe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ser Leu Thr Ser
35 40 4535 40 45
Gly Val His Thr Phe Pro Ser Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr SerGly Val His Thr Phe Pro Ser Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser
50 55 6050 55 60
Leu Ser Ser Met Val Thr Val Pro Ser Ser Arg Trp Pro Ser Glu ThrLeu Ser Ser Met Val Thr Val Pro Ser Ser Arg Trp Pro Ser Glu Thr
65 70 75 8065 70 75 80
Phe Thr Cys Asn Val Ala His Pro Ala Ser Lys Thr Lys Val Asp LysPhe Thr Cys Asn Val Ala His Pro Ala Ser Lys Thr Lys Val Asp Lys
85 90 9585 90 95
Pro Val Pro Lys Arg Glu Asn Gly Arg Val Pro Arg Pro Pro Asp CysPro Val Pro Lys Arg Glu Asn Gly Arg Val Pro Arg Pro Pro Asp Cys
100 105 110100 105 110
Pro Lys Cys Pro Ala Pro Glu Met Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe IlePro Lys Cys Pro Ala Pro Glu Met Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Ile
115 120 125115 120 125
Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Leu Ile Ala Arg Thr Pro GluPhe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Leu Ile Ala Arg Thr Pro Glu
130 135 140130 135 140
Val Thr Cys Val Val Val Asp Leu Asp Pro Glu Asp Pro Glu Val GlnVal Thr Cys Val Val Val Asp Leu Asp Pro Glu Asp Pro Glu Val Gln
145 150 155 160145 150 155 160
Ile Ser Trp Phe Val Asp Gly Lys Gln Met Gln Thr Ala Lys Thr GlnIle Ser Trp Phe Val Asp Gly Lys Gln Met Gln Thr Ala Lys Thr Gln
165 170 175165 170 175
Pro Arg Glu Glu Gln Phe Asn Gly Thr Tyr Arg Val Val Ser Val LeuPro Arg Glu Glu Gln Phe Asn Gly Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu
180 185 190180 185 190
Pro Ile Gly His Gln Asp Trp Leu Lys Gly Lys Gln Phe Thr Cys LysPro Ile Gly His Gln Asp Trp Leu Lys Gly Lys Gln Phe Thr Cys Lys
195 200 205195 200 205
Val Asn Asn Lys Ala Leu Pro Ser Pro Ile Glu Arg Thr Ile Ser LysVal Asn Asn Lys Ala Leu Pro Ser Pro Ile Glu Arg Thr Ile Ser Lys
210 215 220210 215 220
Ala Arg Gly Gln Ala His Gln Pro Ser Val Tyr Val Leu Pro Pro SerAla Arg Gly Gln Ala His Gln Pro Ser Val Tyr Val Leu Pro Pro Ser
225 230 235 240225 230 235 240
Arg Glu Glu Leu Ser Lys Asn Thr Val Ser Leu Thr Cys Leu Ile LysArg Glu Glu Leu Ser Lys Asn Thr Val Ser Leu Thr Cys Leu Ile Lys
245 250 255245 250 255
Asp Phe Phe Pro Pro Asp Ile Asp Val Glu Trp Gln Ser Asn Gly GlnAsp Phe Phe Pro Pro Asp Ile Asp Val Glu Trp Gln Ser Asn Gly Gln
260 265 270260 265 270
Gln Glu Pro Glu Ser Lys Tyr Arg Thr Thr Pro Pro Gln Leu Asp GluGln Glu Pro Glu Ser Lys Tyr Arg Thr Thr Pro Pro Gln Leu Asp Glu
275 280 285275 280 285
Asp Gly Ser Tyr Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Ser Val Asp Lys Ser ArgAsp Gly Ser Tyr Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Ser Val Asp Lys Ser Arg
290 295 300290 295 300
Trp Gln Arg Gly Asp Thr Phe Ile Cys Ala Val Met His Glu Ala LeuTrp Gln Arg Gly Asp Thr Phe Ile Cys Ala Val Met His Glu Ala Leu
305 310 315 320305 310 315 320
His Asn His Tyr Thr Gln Glu Ser Leu Ser His Ser Pro Gly LysHis Asn His Tyr Thr Gln Glu Ser Leu Ser His Ser Pro Gly Lys
325 330 335325 330 335
<210> 3<210> 3
<211> 1005<211> 1005
<212> ДНК<212> DNA
<213> Canis familiaris<213> Canis familiaris
<400> 3<400> 3
gccagcacca cagctccctc cgtgttcccc ctggctccta gctgcggctc tacctccggc 60gccagcacca cagctccctc cgtgttcccc ctggctccta gctgcggctc tacctccggc 60
agcacagtgg ccctggcttg tctggtgtcc ggctacttcc ctgagccagt gaccgtgagc 120agcacagtgg ccctggcttg tctggtgtcc ggctacttcc ctgagccagt gaccgtgagc 120
tggaactccg gctccctgac ctccggagtg cacacatttc caagcgtgct gcagtcttcc 180tggaactccg gctccctgac ctccggagtg cacacatttc caagcgtgct gcagtcttcc 180
ggcctgtatt ctctgagctc tatggtgacc gtgccttcca gcaggtggcc atctgagaca 240ggcctgtatt ctctgagctc tatggtgacc gtgccttcca gcaggtggcc atctgagaca 240
ttcacctgca acgtggccca tcccgcttcc aagacaaagg tggacaagcc cgtgcctaag 300ttcacctgca acgtggccca tcccgcttcc aagacaaagg tggacaagcc cgtgcctaag 300
agggagaatg gaagggtgcc ccggccccct gattgcccta agtgtccagc tccagagatg 360agggaatg gaagggtgcc ccggccccct gattgcccta agtgtccagc tccagagatg 360
ctgggaggac catccgtgtt catctttcca cccaagccca aggataccct gctgatcgct 420ctgggaggac catccgtgtt catctttcca cccaagccca aggataccct gctgatcgct 420
agaacccctg aggtgacatg cgtggtggtg gacctggatc cagaggaccc cgaggtgcag 480agaacccctg aggtgacatg cgtggtggtg gacctggatc cagaggaccc cgaggtgcag 480
atctcttggt tcgtggatgg caagcagatg cagaccgcca agacacagcc tagggaggag 540atctcttggt tcgtggatgg caagcagatg cagaccgcca agacacagcc tagggaggag 540
cagtttaacg gcacctacag ggtggtgtcc gtgctgccaa tcggccacca ggactggctg 600cagtttaacg gcacctacag ggtggtgtcc gtgctgccaa tcggccacca ggactggctg 600
aagggcaagc agtttacctg caaggtgaac aataaggctc tgccttctcc aatcgagaga 660aagggcaagc agtttacctg caaggtgaac aataaggctc tgccttctcc aatcgagaga 660
acaatctcca aggccagggg ccaggctcat cagcctagcg tgtacgtgct gcctccatcc 720acaatctcca aggccagggg ccaggctcat cagcctagcg tgtacgtgct gcctccatcc 720
agagaggagc tgagcaagaa caccgtgtct ctgacatgtc tgatcaagga tttctttccc 780agagaggagc tgagcaagaa caccgtgtct ctgacatgtc tgatcaagga tttctttccc 780
cctgacatcg atgtggagtg gcagagcaat ggccagcagg agccagagtc taagtatcgc 840cctgacatcg atgtggagtg gcagagcaat ggccagcagg agccagagtc taagtatcgc 840
accacaccac cccagctgga cgaggatggc agctacttcc tgtatagcaa gctgtctgtg 900accacaccac cccagctgga cgaggatggc agctacttcc tgtatagcaa gctgtctgtg 900
gacaagtcta gatggcagcg cggcgatacc tttatctgtg ccgtgatgca cgaggcactg 960gacaagtcta gatggcagcg cggcgatacc tttatctgtg ccgtgatgca cgaggcactg 960
cacaatcact acacccagga gagtctgagc cacagcccag gaaaa 1005cacaatcact acacccagga gagtctgagc cacagcccag gaaaa 1005
<210> 4<210> 4
<211> 1005<211> 1005
<212> ДНК<212> DNA
<213> Canis familiaris<213> Canis familiaris
<400> 4<400> 4
gcctcaacaa ctgctcctag cgtgtttccc ctggccccta gctgcggaag tacctcaggc 60gcctcaacaa ctgctcctag cgtgtttccc ctggccccta gctgcggaag tacctcaggc 60
agcacagtgg ccctggcttg tctggtgtct ggatatttcc ctgagccagt gaccgtgagt 120agcacagtgg ccctggcttg tctggtgtct ggatatttcc ctgagccagt gaccgtgagt 120
tggaacagcg gctctctgac ctccggggtg cacacatttc catctgtgct gcagtctagt 180tggaacagcg gctctctgac ctccggggtg cacacatttc catctgtgct gcagtctagt 180
ggcctgtact ccctgtcaag catggtgact gtgccttcct ctaggtggcc atcagaaact 240ggcctgtact ccctgtcaag catggtgact gtgccttcct ctaggtggcc atcagaaact 240
ttcacctgca acgtggccca tcccgccagc aagaccaaag tggacaagcc cgtgcctaaa 300ttcacctgca acgtggccca tcccgccagc aagaccaaag tggacaagcc cgtgcctaaa 300
agggagaatg gaagggtgcc aagaccacct gattgcccta agtgtccagc tccagaaatg 360agggaatg gaagggtgcc aagaccacct gattgcccta agtgtccagc tccagaaatg 360
ctgggaggac caagcgtgtt catctttcca cccaagccca aagacacact gctgattgct 420ctgggaggac caagcgtgtt catctttcca cccaagccca aagacacact gctgattgct 420
agaactcccg aggtgacctg cgtggtggtg gacctggatc cagaggaccc cgaagtgcag 480agaactcccg aggtgacctg cgtggtggtg gacctggatc cagaggaccc cgaagtgcag 480
atctcctggt tcgtggatgg gaagcagatg cagacagcca aaactcagcc tcgggaggaa 540atctcctggt tcgtggatgg gaagcagatg cagacagcca aaactcagcc tcgggaggaa 540
cagtttaacg gaacctatag agtggtgtct gtgctgccaa ttggacacca ggactggctg 600cagtttaacg gaacctatag agtggtgtct gtgctgccaa ttggacacca ggactggctg 600
aagggcaaac agtttacatg caaggtgaac aacaaggccc tgcctagtcc aatcgagagg 660aagggcaaac agtttacatg caaggtgaac aacaaggccc tgcctagtcc aatcgagagg 660
actatttcaa aagctagggg acaggctcat cagccttccg tgtatgtgct gcctccatcc 720actatttcaa aagctagggg acaggctcat cagccttccg tgtatgtgct gcctccatcc 720
cgggaggaac tgtctaagaa cacagtgagt ctgacttgtc tgatcaaaga tttctttccc 780cgggaggaac tgtctaagaa cacagtgagt ctgacttgtc tgatcaaaga tttctttccc 780
cctgacattg atgtggagtg gcagagcaat gggcagcagg agccagaatc caagtacaga 840cctgacattg atgtggagtg gcagagcaat gggcagcagg agccagaatc caagtacaga 840
accacaccac cccagctgga cgaagatggc tcctatttcc tgtacagtaa gctgtcagtg 900accacaccac cccagctgga cgaagatggc tcctatttcc tgtacagtaa gctgtcagtg 900
gacaaatcta ggtggcagcg cggggatacc tttatctgcg ccgtgatgca cgaggctctg 960gacaaatcta ggtggcagcg cggggatacc tttatctgcg ccgtgatgca cgaggctctg 960
cacaatcatt acacacaaga aagtctgtca catagccccg gcaag 1005cacaatcatt acacacaaga aagtctgtca catagccccg gcaag 1005
<210> 5<210> 5
<211> 96<211> 96
<212> БЕЛОК<212> PROTEIN
<213> Canis familiaris<213> Canis familiaris
<400> 5<400> 5
Ala Ser Thr Thr Ala Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Cys GlyAla Ser Thr Thr Ala Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Cys Gly
1 5 10 151 5 10 15
Ser Thr Ser Gly Ser Thr Val Ala Leu Ala Cys Leu Val Ser Gly TyrSer Thr Ser Gly Ser Thr Val Ala Leu Ala Cys Leu Val Ser Gly Tyr
20 25 3020 25 30
Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ser Leu Thr SerPhe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ser Leu Thr Ser
35 40 4535 40 45
Gly Val His Thr Phe Pro Ser Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr SerGly Val His Thr Phe Pro Ser Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser
50 55 6050 55 60
Leu Ser Ser Met Val Thr Val Pro Ser Ser Arg Trp Pro Ser Glu ThrLeu Ser Ser Met Val Thr Val Pro Ser Ser Arg Trp Pro Ser Glu Thr
65 70 75 8065 70 75 80
Phe Thr Cys Asn Val Ala His Pro Ala Ser Lys Thr Lys Val Asp LysPhe Thr Cys Asn Val Ala His Pro Ala Ser Lys Thr Lys Val Asp Lys
85 90 9585 90 95
<210> 6<210> 6
<211> 20<211> 20
<212> БЕЛОК<212> PROTEIN
<213> Canis familiaris<213> Canis familiaris
<400> 6<400> 6
Pro Val Pro Lys Arg Glu Asn Gly Arg Val Pro Arg Pro Pro Asp CysPro Val Pro Lys Arg Glu Asn Gly Arg Val Pro Arg Pro Pro Asp Cys
1 5 10 151 5 10 15
Pro Lys Cys ProPro Lys Cys Pro
2020
<210> 7<210> 7
<211> 110<211> 110
<212> БЕЛОК<212> PROTEIN
<213> Canis familiaris<213> Canis familiaris
<400> 7<400> 7
Ala Pro Glu Met Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro LysAla Pro Glu Met Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Lys
1 5 10 151 5 10 15
Pro Lys Asp Thr Leu Leu Ile Ala Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys ValPro Lys Asp Thr Leu Leu Ile Ala Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val
20 25 3020 25 30
Val Val Asp Leu Asp Pro Glu Asp Pro Glu Val Gln Ile Ser Trp PheVal Val Asp Leu Asp Pro Glu Asp Pro Glu Val Gln Ile Ser Trp Phe
35 40 4535 40 45
Val Asp Gly Lys Gln Met Gln Thr Ala Lys Thr Gln Pro Arg Glu GluVal Asp Gly Lys Gln Met Gln Thr Ala Lys Thr Gln Pro Arg Glu Glu
50 55 6050 55 60
Gln Phe Asn Gly Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Pro Ile Gly HisGln Phe Asn Gly Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Pro Ile Gly His
65 70 75 8065 70 75 80
Gln Asp Trp Leu Lys Gly Lys Gln Phe Thr Cys Lys Val Asn Asn LysGln Asp Trp Leu Lys Gly Lys Gln Phe Thr Cys Lys Val Asn Asn Lys
85 90 9585 90 95
Ala Leu Pro Ser Pro Ile Glu Arg Thr Ile Ser Lys Ala ArgAla Leu Pro Ser Pro Ile Glu Arg Thr Ile Ser Lys Ala Arg
100 105 110100 105 110
<210> 8<210> 8
<211> 109<211> 109
<212> БЕЛОК<212> PROTEIN
<213> Canis familiaris<213> Canis familiaris
<400> 8<400> 8
Gly Gln Ala His Gln Pro Ser Val Tyr Val Leu Pro Pro Ser Arg GluGly Gln Ala His Gln Pro Ser Val Tyr Val Leu Pro Pro Ser Arg Glu
1 5 10 151 5 10 15
Glu Leu Ser Lys Asn Thr Val Ser Leu Thr Cys Leu Ile Lys Asp PheGlu Leu Ser Lys Asn Thr Val Ser Leu Thr Cys Leu Ile Lys Asp Phe
20 25 3020 25 30
Phe Pro Pro Asp Ile Asp Val Glu Trp Gln Ser Asn Gly Gln Gln GluPhe Pro Pro Asp Ile Asp Val Glu Trp Gln Ser Asn Gly Gln Gln Glu
35 40 4535 40 45
Pro Glu Ser Lys Tyr Arg Thr Thr Pro Pro Gln Leu Asp Glu Asp GlyPro Glu Ser Lys Tyr Arg Thr Thr Pro Pro Gln Leu Asp Glu Asp Gly
50 55 6050 55 60
Ser Tyr Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Ser Val Asp Lys Ser Arg Trp GlnSer Tyr Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Ser Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln
65 70 75 8065 70 75 80
Arg Gly Asp Thr Phe Ile Cys Ala Val Met His Glu Ala Leu His AsnArg Gly Asp Thr Phe Ile Cys Ala Val Met His Glu Ala Leu His Asn
85 90 9585 90 95
His Tyr Thr Gln Glu Ser Leu Ser His Ser Pro Gly LysHis Tyr Thr Gln Glu Ser Leu Ser His Ser Pro Gly Lys
100 105100 105
<210> 9<210> 9
<211> 291<211> 291
<212> ДНК<212> DNA
<213> Canis familiaris<213> Canis familiaris
<400> 9<400> 9
gcctcaacaa ctgctcctag cgtgtttccc ctggccccta gctgcggaag tacctcaggc 60gcctcaacaa ctgctcctag cgtgtttccc ctggccccta gctgcggaag tacctcaggc 60
agcacagtgg ccctggcttg tctggtgtct ggatatttcc ctgagccagt gaccgtgagt 120agcacagtgg ccctggcttg tctggtgtct ggatatttcc ctgagccagt gaccgtgagt 120
tggaacagcg gctctctgac ctccggggtg cacacatttc catctgtgct gcagtctagt 180tggaacagcg gctctctgac ctccggggtg cacacatttc catctgtgct gcagtctagt 180
ggcctgtact ccctgtcaag catggtgact gtgccttcct ctaggtggcc atcagaaact 240ggcctgtact ccctgtcaag catggtgact gtgccttcct ctaggtggcc atcagaaact 240
ttcacctgca acgtggccca tcccgccagc aagaccaaag tggacaagcc c 291ttcacctgca acgtggccca tcccgccagc aagaccaaag tggacaagcc c 291
<210> 10<210> 10
<211> 57<211> 57
<212> ДНК<212> DNA
<213> Canis familiaris<213> Canis familiaris
<400> 10<400> 10
gtgcctaaaa gggagaatgg aagggtgcca agaccacctg attgccctaa gtgtcca 57gtgcctaaaa gggagaatgg aagggtgcca agaccacctg attgccctaa gtgtcca 57
<210> 11<210> 11
<211> 330<211> 330
<212> ДНК<212> DNA
<213> Canis familiaris<213> Canis familiaris
<400> 11<400> 11
gctccagaaa tgctgggagg accaagcgtg ttcatctttc cacccaagcc caaagacaca 60gctccagaaa tgctgggagg accaagcgtg ttcatctttc cacccaagcc caaagacaca 60
ctgctgattg ctagaactcc cgaggtgacc tgcgtggtgg tggacctgga tccagaggac 120ctgctgattg ctagaactcc cgaggtgacc tgcgtggtgg tggacctgga tccagaggac 120
cccgaagtgc agatctcctg gttcgtggat gggaagcaga tgcagacagc caaaactcag 180cccgaagtgc agatctcctg gttcgtggat gggaagcaga tgcagacagc caaaactcag 180
cctcgggagg aacagtttaa cggaacctat agagtggtgt ctgtgctgcc aattggacac 240cctcgggagg aacagtttaa cggaacctat agagtggtgt ctgtgctgcc aattggacac 240
caggactggc tgaagggcaa acagtttaca tgcaaggtga acaacaaggc cctgcctagt 300caggactggc tgaagggcaa acagtttaca tgcaaggtga acaacaaggc cctgcctagt 300
ccaatcgaga ggactatttc aaaagctagg 330ccaatcgaga ggactatttc aaaagctagg 330
<210> 12<210> 12
<211> 327<211> 327
<212> ДНК<212> DNA
<213> Canis familiaris<213> Canis familiaris
<400> 12<400> 12
ggacaggctc atcagccttc cgtgtatgtg ctgcctccat cccgggagga actgtctaag 60ggacaggctc atcagccttc cgtgtatgtg ctgcctccat cccgggagga actgtctaag 60
aacacagtga gtctgacttg tctgatcaaa gatttctttc cccctgacat tgatgtggag 120aacacagtga gtctgacttg tctgatcaaa gatttctttc cccctgacat tgatgtggag 120
tggcagagca atgggcagca ggagccagaa tccaagtaca gaaccacacc accccagctg 180tggcagagca atgggcagca ggagccagaa tccaagtaca gaaccacacc accccagctg 180
gacgaagatg gctcctattt cctgtacagt aagctgtcag tggacaaatc taggtggcag 240gacgaagatg gctcctattt cctgtacagt aagctgtcag tggacaaatc taggtggcag 240
cgcggggata cctttatctg cgccgtgatg cacgaggctc tgcacaatca ttacacacaa 300cgcggggata cctttatctg cgccgtgatg cacgaggctc tgcacaatca ttacacacaa 300
gaaagtctgt cacatagccc cggcaag 327gaaagtctgt cacatagccc cggcaag 327
<210> 13<210> 13
<211> 5<211> 5
<212> БЕЛОК<212> PROTEIN
<213> Mus musculus<213> Mus musculus
<400> 13<400> 13
Tyr Tyr Asp Ile AsnTyr Tyr Asp Ile Asn
1 51 5
<210> 14<210> 14
<211> 5<211> 5
<212> БЕЛОК<212> PROTEIN
<213> Mus musculus<213> Mus musculus
<400> 14<400> 14
Asn Tyr Gly Met SerAsn Tyr Gly Met Ser
1 51 5
<210> 15<210> 15
<211> 17<211> 17
<212> БЕЛОК<212> PROTEIN
<213> Mus musculus<213> Mus musculus
<400> 15<400> 15
Trp Ile Phe Pro Gly Asp Gly Gly Thr Lys Tyr Asn Glu Thr Phe LysTrp Ile Phe Pro Gly Asp Gly Gly Thr Lys Tyr Asn Glu Thr Phe Lys
1 5 10 151 5 10 15
GlyGly
<210> 16<210> 16
<211> 17<211> 17
<212> БЕЛОК<212> PROTEIN
<213> Mus musculus<213> Mus musculus
<400> 16<400> 16
Thr Ile Ser Tyr Gly Gly Ser Tyr Thr Tyr Tyr Pro Asp Asn Ile LysThr Ile Ser Tyr Gly Gly Ser Tyr Thr Tyr Tyr Pro Asp Asn Ile Lys
1 5 10 151 5 10 15
GlyGly
<210> 17<210> 17
<211> 14<211> 14
<212> БЕЛОК<212> PROTEIN
<213> Mus musculus<213> Mus musculus
<400> 17<400> 17
Ala Arg Gly Gly Thr Ser Val Ile Arg Asp Ala Met Asp TyrAla Arg Gly Gly Thr Ser Val Ile Arg Asp Ala Met Asp Tyr
1 5 101 5 10
<210> 18<210> 18
<211> 11<211> 11
<212> БЕЛОК<212> PROTEIN
<213> Mus musculus<213> Mus musculus
<400> 18<400> 18
Val Arg Gly Tyr Gly Tyr Asp Thr Met Asp TyrVal Arg Gly Tyr Gly Tyr Asp Thr Met Asp Tyr
1 5 101 5 10
<210> 19<210> 19
<211> 15<211> 15
<212> БЕЛОК<212> PROTEIN
<213> Mus musculus<213> Mus musculus
<400> 19<400> 19
Arg Ala Ser Glu Ser Val Asp Asn Tyr Gly Ile Ser Phe Met HisArg Ala Ser Glu Ser Val Asp Asn Tyr Gly Ile Ser Phe Met His
1 5 10 151 5 10 15
<210> 20<210> 20
<211> 15<211> 15
<212> БЕЛОК<212> PROTEIN
<213> Mus musculus<213> Mus musculus
<400> 20<400> 20
Lys Ala Ser Gln Ser Val Ser Phe Ala Gly Thr Gly Leu Met HisLys Ala Ser Gln Ser Val Ser Phe Ala Gly Thr Gly Leu Met His
1 5 10 151 5 10 15
<210> 21<210> 21
<211> 7<211> 7
<212> БЕЛОК<212> PROTEIN
<213> Mus musculus<213> Mus musculus
<400> 21<400> 21
Arg Ala Ser Asn Leu Glu SerArg Ala Ser Asn Leu Glu Ser
1 51 5
<210> 22<210> 22
<211> 7<211> 7
<212> БЕЛОК<212> PROTEIN
<213> Mus musculus<213> Mus musculus
<400> 22<400> 22
Arg Ala Ser Asn Leu Glu AlaArg Ala Ser Asn Leu Glu Ala
1 51 5
<210> 23<210> 23
<211> 9<211> 9
<212> БЕЛОК<212> PROTEIN
<213> Mus musculus<213> Mus musculus
<400> 23<400> 23
Gln Gln Ser Asn Lys Asp Pro Leu ThrGln Gln Ser Asn Lys Asp Pro Leu Thr
1 51 5
<210> 24<210> 24
<211> 9<211> 9
<212> БЕЛОК<212> PROTEIN
<213> Mus musculus<213> Mus musculus
<400> 24<400> 24
Gln Gln Ser Arg Glu Tyr Pro Trp ThrGln Gln Ser Arg Glu Tyr Pro Trp Thr
1 51 5
<210> 25<210> 25
<211> 111<211> 111
<212> БЕЛОК<212> PROTEIN
<213> Mus musculus<213> Mus musculus
<400> 25<400> 25
Asp Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Ala Ser Leu Ala Val Ser Leu GlyAsp Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Ala Ser Leu Ala Val Ser Leu Gly
1 5 10 151 5 10 15
Gln Arg Ala Thr Ile Ser Cys Arg Ala Ser Glu Ser Val Asp Asn TyrGln Arg Ala Thr Ile Ser Cys Arg Ala Ser Glu Ser Val Asp Asn Tyr
20 25 3020 25 30
Gly Ile Ser Phe Met His Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Pro ProGly Ile Ser Phe Met His Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Pro Pro
35 40 4535 40 45
Lys Leu Leu Ile Tyr Arg Ala Ser Asn Leu Glu Ser Gly Ile Pro AlaLys Leu Leu Ile Tyr Arg Ala Ser Asn Leu Glu Ser Gly Ile Pro Ala
50 55 6050 55 60
Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Arg Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile AsnArg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Arg Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Asn
65 70 75 8065 70 75 80
Pro Val Glu Thr Asp Asp Val Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Ser AsnPro Val Glu Thr Asp Asp Val Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Ser Asn
85 90 9585 90 95
Lys Asp Pro Leu Thr Phe Gly Ala Gly Thr Lys Leu Glu Leu LysLys Asp Pro Leu Thr Phe Gly Ala Gly Thr Lys Leu Glu Leu Lys
100 105 110100 105 110
<210> 26<210> 26
<211> 111<211> 111
<212> БЕЛОК<212> PROTEIN
<213> Искусственный<213> Artificial
<220><220>
<223> Последовательность канинизированной вариабельной области<223> Caninized variable region sequence
легкой цепи мАт из Mus musculus и Canislight chain mAbs from Mus musculus and Canis
<400> 26<400> 26
Asp Ile Val Met Thr Gln Thr Pro Leu Ser Leu Ser Val Ser Pro GlyAsp Ile Val Met Thr Gln Thr Pro Leu Ser Leu Ser Val Ser Pro Gly
1 5 10 151 5 10 15
Glu Pro Ala Ser Ile Ser Cys Arg Ala Ser Glu Ser Val Asp Asn TyrGlu Pro Ala Ser Ile Ser Cys Arg Ala Ser Glu Ser Val Asp Asn Tyr
20 25 3020 25 30
Gly Ile Ser Phe Met His Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Pro ProGly Ile Ser Phe Met His Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Pro Pro
35 40 4535 40 45
Lys Leu Leu Ile Tyr Arg Ala Ser Asn Leu Glu Ser Gly Val Pro AspLys Leu Leu Ile Tyr Arg Ala Ser Asn Leu Glu Ser Gly Val Pro Asp
50 55 6050 55 60
Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Arg Ile SerArg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Arg Ile Ser
65 70 75 8065 70 75 80
Arg Val Glu Ala Asp Asp Ala Gly Val Tyr Tyr Cys Gln Gln Ser AsnArg Val Glu Ala Asp Asp Ala Gly Val Tyr Tyr Cys Gln Gln Ser Asn
85 90 9585 90 95
Lys Asp Pro Leu Thr Phe Gly Ala Gly Thr Lys Leu Glu Ile LysLys Asp Pro Leu Thr Phe Gly Ala Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys
100 105 110100 105 110
<210> 27<210> 27
<211> 111<211> 111
<212> БЕЛОК<212> PROTEIN
<213> Искусственный<213> Artificial
<220><220>
<223> Последовательность канинизированной вариабельной области легкой<223> Caninized light variable region sequence
цепи мАт из Mus musculus и Canischains of mAbs from Mus musculus and Canis
<400> 27<400> 27
Asp Ile Val Met Thr Gln Thr Pro Leu Ser Leu Ser Val Ser Pro GlyAsp Ile Val Met Thr Gln Thr Pro Leu Ser Leu Ser Val Ser Pro Gly
1 5 10 151 5 10 15
Glu Pro Ala Ser Ile Ser Cys Arg Ala Ser Glu Ser Val Asp Asn TyrGlu Pro Ala Ser Ile Ser Cys Arg Ala Ser Glu Ser Val Asp Asn Tyr
20 25 3020 25 30
Gly Ile Ser Phe Met His Trp Phe Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ser ProGly Ile Ser Phe Met His Trp Phe Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ser Pro
35 40 4535 40 45
Gln Leu Leu Ile Tyr Arg Ala Ser Asn Leu Glu Ser Gly Val Pro AspGln Leu Leu Ile Tyr Arg Ala Ser Asn Leu Glu Ser Gly Val Pro Asp
50 55 6050 55 60
Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Arg Ile SerArg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Arg Ile Ser
65 70 75 8065 70 75 80
Arg Val Glu Ala Asp Asp Ala Gly Val Tyr Tyr Cys Gln Gln Ser AsnArg Val Glu Ala Asp Asp Ala Gly Val Tyr Tyr Cys Gln Gln Ser Asn
85 90 9585 90 95
Lys Asp Pro Leu Thr Phe Gly Ala Gly Thr Lys Leu Glu Ile LysLys Asp Pro Leu Thr Phe Gly Ala Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys
100 105 110100 105 110
<210> 28<210> 28
<211> 111<211> 111
<212> БЕЛОК<212> PROTEIN
<213> Mus musculus<213> Mus musculus
<400> 28<400> 28
Asp Ile Leu Leu Thr Gln Ser Pro Ala Ser Leu Ala Val Ser Leu GlyAsp Ile Leu Leu Thr Gln Ser Pro Ala Ser Leu Ala Val Ser Leu Gly
1 5 10 151 5 10 15
Gln Arg Ala Ile Ile Ser Cys Lys Ala Ser Gln Ser Val Ser Phe AlaGln Arg Ala Ile Ile Ser Cys Lys Ala Ser Gln Ser Val Ser Phe Ala
20 25 3020 25 30
Gly Thr Gly Leu Met His Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Gln ProGly Thr Gly Leu Met His Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Gln Pro
35 40 4535 40 45
Lys Leu Leu Ile Tyr Arg Ala Ser Asn Leu Glu Ala Gly Val Pro ThrLys Leu Leu Ile Tyr Arg Ala Ser Asn Leu Glu Ala Gly Val Pro Thr
50 55 6050 55 60
Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Arg Thr Asp Phe Thr Leu Asn Ile HisArg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Arg Thr Asp Phe Thr Leu Asn Ile His
65 70 75 8065 70 75 80
Pro Val Glu Glu Glu Asp Ala Ala Thr Tyr Phe Cys Gln Gln Ser ArgPro Val Glu Glu Glu Asp Ala Ala Thr Tyr Phe Cys Gln Gln Ser Arg
85 90 9585 90 95
Glu Tyr Pro Trp Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu Ile LysGlu Tyr Pro Trp Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys
100 105 110100 105 110
<210> 29<210> 29
<211> 111<211> 111
<212> БЕЛОК<212> PROTEIN
<213> Искусственный<213> Artificial
<220><220>
<223> Последовательность канинизированной вариабельной области легкой<223> Caninized light variable region sequence
цепи мАт из Mus musculus и Canischains of mAbs from Mus musculus and Canis
<400> 29<400> 29
Glu Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Ala Ser Leu Ser Leu Ser Gln GluGlu Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Ala Ser Leu Ser Leu Ser Gln Glu
1 5 10 151 5 10 15
Glu Lys Val Thr Ile Thr Cys Lys Ala Ser Gln Ser Val Ser Phe AlaGlu Lys Val Thr Ile Thr Cys Lys Ala Ser Gln Ser Val Ser Phe Ala
20 25 3020 25 30
Gly Thr Gly Leu Met His Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala ProGly Thr Gly Leu Met His Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro
35 40 4535 40 45
Lys Leu Leu Ile Tyr Arg Ala Ser Asn Leu Glu Ala Gly Val Pro SerLys Leu Leu Ile Tyr Arg Ala Ser Asn Leu Glu Ala Gly Val Pro Ser
50 55 6050 55 60
Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Ser Phe Thr Ile SerArg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Ser Phe Thr Ile Ser
65 70 75 8065 70 75 80
Ser Leu Glu Pro Glu Asp Val Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln Ser ArgSer Leu Glu Pro Glu Asp Val Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln Ser Arg
85 90 9585 90 95
Glu Tyr Pro Trp Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile LysGlu Tyr Pro Trp Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys
100 105 110100 105 110
<210> 30<210> 30
<211> 121<211> 121
<212> БЕЛОК<212> PROTEIN
<213> Mus musculus<213> Mus musculus
<400> 30<400> 30
Gln Val Gln Leu Gln Gln Ser Gly Ala Glu Leu Val Lys Pro Gly AlaGln Val Gln Leu Gln Gln Ser Gly Ala Glu Leu Val Lys Pro Gly Ala
1 5 10 151 5 10 15
Ser Val Lys Leu Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Lys Tyr TyrSer Val Lys Leu Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Lys Tyr Tyr
20 25 3020 25 30
Asp Ile Asn Trp Val Arg Gln Arg Pro Glu Gln Gly Leu Glu Trp IleAsp Ile Asn Trp Val Arg Gln Arg Pro Glu Gln Gly Leu Glu Trp Ile
35 40 4535 40 45
Gly Trp Ile Phe Pro Gly Asp Gly Gly Thr Lys Tyr Asn Glu Thr PheGly Trp Ile Phe Pro Gly Asp Gly Gly Thr Lys Tyr Asn Glu Thr Phe
50 55 6050 55 60
Lys Gly Lys Ala Thr Leu Thr Thr Asp Lys Ser Ser Ser Thr Ala TyrLys Gly Lys Ala Thr Leu Thr Thr Asp Lys Ser Ser Ser Thr Ala Tyr
65 70 75 8065 70 75 80
Met Gln Leu Ser Arg Leu Thr Ser Glu Asp Ser Ala Val Tyr Phe CysMet Gln Leu Ser Arg Leu Thr Ser Glu Asp Ser Ala Val Tyr Phe Cys
85 90 9585 90 95
Ala Arg Gly Gly Thr Ser Val Ile Arg Asp Ala Met Asp Tyr Trp GlyAla Arg Gly Gly Thr Ser Val Ile Arg Asp Ala Met Asp Tyr Trp Gly
100 105 110100 105 110
Gln Gly Thr Ser Val Thr Val Ser SerGln Gly Thr Ser Val Thr Val Ser Ser
115 120115 120
<210> 31<210> 31
<211> 121<211> 121
<212> БЕЛОК<212> PROTEIN
<213> Искусственный<213> Artificial
<220><220>
<223> Последовательность канинизированной вариабельной области тяжелой<223> Sequence of the caninized heavy variable region
цепи мАт из Mus musculus и Canischains of mAbs from Mus musculus and Canis
<400> 31<400> 31
Glu Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly AlaGlu Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala
1 5 10 151 5 10 15
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Thr Ser Gly Tyr Thr Phe Lys Tyr TyrSer Val Lys Val Ser Cys Lys Thr Ser Gly Tyr Thr Phe Lys Tyr Tyr
20 25 3020 25 30
Asp Ile Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Ala Gly Leu Asp Trp MetAsp Ile Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Ala Gly Leu Asp Trp Met
35 40 4535 40 45
Gly Trp Ile Phe Pro Gly Asp Gly Gly Thr Lys Tyr Asn Glu Thr PheGly Trp Ile Phe Pro Gly Asp Gly Gly Thr Lys Tyr Asn Glu Thr Phe
50 55 6050 55 60
Lys Gly Arg Val Thr Leu Thr Ala Asp Thr Ser Thr Ser Thr Ala TyrLys Gly Arg Val Thr Leu Thr Ala Asp Thr Ser Thr Ser Thr Ala Tyr
65 70 75 8065 70 75 80
Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ala Gly Asp Ile Ala Val Tyr Tyr CysMet Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ala Gly Asp Ile Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 9585 90 95
Ala Arg Gly Gly Thr Ser Val Ile Arg Asp Ala Met Asp Tyr Trp GlyAla Arg Gly Gly Thr Ser Val Ile Arg Asp Ala Met Asp Tyr Trp Gly
100 105 110100 105 110
Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser SerGln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
115 120115 120
<210> 32<210> 32
<211> 118<211> 118
<212> БЕЛОК<212> PROTEIN
<213> Mus musculus<213> Mus musculus
<400> 32<400> 32
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Asp Leu Val Lys Pro Gly GlyGlu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Asp Leu Val Lys Pro Gly Gly
1 5 10 151 5 10 15
Ser Leu Lys Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Ser Phe Ser Asn TyrSer Leu Lys Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Ser Phe Ser Asn Tyr
20 25 3020 25 30
Gly Met Ser Trp Val Arg Gln Thr Pro Asp Lys Arg Leu Glu Trp ValGly Met Ser Trp Val Arg Gln Thr Pro Asp Lys Arg Leu Glu Trp Val
35 40 4535 40 45
Ala Thr Ile Ser Tyr Gly Gly Ser Tyr Thr Tyr Tyr Pro Asp Asn IleAla Thr Ile Ser Tyr Gly Gly Ser Tyr Thr Tyr Tyr Pro Asp Asn Ile
50 55 6050 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Thr Leu TyrLys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Thr Leu Tyr
65 70 75 8065 70 75 80
Leu Gln Met Ser Ser Leu Lys Ser Glu Asp Thr Ala Met Tyr Tyr CysLeu Gln Met Ser Ser Leu Lys Ser Glu Asp Thr Ala Met Tyr Tyr Cys
85 90 9585 90 95
Val Arg Gly Tyr Gly Tyr Asp Thr Met Asp Tyr Trp Gly Gln Gly ThrVal Arg Gly Tyr Gly Tyr Asp Thr Met Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr
100 105 110100 105 110
Ser Val Thr Val Ser SerSer Val Thr Val Ser Ser
115115
<210> 33<210> 33
<211> 118<211> 118
<212> БЕЛОК<212> PROTEIN
<213> Искусственный<213> Artificial
<220><220>
<223> Последовательность канинизированной вариабельной области тяжелой<223> Sequence of the caninized heavy variable region
цепи мАт из Mus musculus и Canischains of mAbs from Mus musculus and Canis
<400> 33<400> 33
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Asp Leu Val Lys Pro Gly GlyGlu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Asp Leu Val Lys Pro Gly Gly
1 5 10 151 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Val Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Asn TyrSer Leu Arg Leu Ser Cys Val Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Asn Tyr
20 25 3020 25 30
Gly Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Gln Trp ValGly Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Gln Trp Val
35 40 4535 40 45
Ala Thr Ile Ser Tyr Gly Gly Ser Tyr Thr Tyr Tyr Pro Asp Asn IleAla Thr Ile Ser Tyr Gly Gly Ser Tyr Thr Tyr Tyr Pro Asp Asn Ile
50 55 6050 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Thr Leu TyrLys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Thr Leu Tyr
65 70 75 8065 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Met Tyr Tyr CysLeu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Met Tyr Tyr Cys
85 90 9585 90 95
Val Arg Gly Tyr Gly Tyr Asp Thr Met Asp Tyr Trp Gly Gln Gly ThrVal Arg Gly Tyr Gly Tyr Asp Thr Met Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr
100 105 110100 105 110
Leu Val Thr Val Ser SerLeu Val Thr Val Ser Ser
115115
<210> 34<210> 34
<211> 159<211> 159
<212> БЕЛОК<212> PROTEIN
<213> Canis familiaris<213> Canis familiaris
<400> 34<400> 34
Met Leu Ser His Thr Gly Pro Ser Arg Phe Ala Leu Phe Leu Leu CysMet Leu Ser His Thr Gly Pro Ser Arg Phe Ala Leu Phe Leu Leu Cys
1 5 10 151 5 10 15
Ser Met Glu Thr Leu Leu Ser Ser His Met Ala Pro Thr His Gln LeuSer Met Glu Thr Leu Leu Ser Ser His Met Ala Pro Thr His Gln Leu
20 25 3020 25 30
Pro Pro Ser Asp Val Arg Lys Ile Ile Leu Glu Leu Gln Pro Leu SerPro Pro Ser Asp Val Arg Lys Ile Ile Leu Glu Leu Gln Pro Leu Ser
35 40 4535 40 45
Arg Gly Leu Leu Glu Asp Tyr Gln Lys Lys Glu Thr Gly Val Pro GluArg Gly Leu Leu Glu Asp Tyr Gln Lys Lys Glu Thr Gly Val Pro Glu
50 55 6050 55 60
Ser Asn Arg Thr Leu Leu Leu Cys Leu Thr Ser Asp Ser Gln Pro ProSer Asn Arg Thr Leu Leu Leu Cys Leu Thr Ser Asp Ser Gln Pro Pro
65 70 75 8065 70 75 80
Arg Leu Asn Ser Ser Ala Ile Leu Pro Tyr Phe Arg Ala Ile Arg ProArg Leu Asn Ser Ser Ala Ile Leu Pro Tyr Phe Arg Ala Ile Arg Pro
85 90 9585 90 95
Leu Ser Asp Lys Asn Ile Ile Asp Lys Ile Ile Glu Gln Leu Asp LysLeu Ser Asp Lys Asn Ile Ile Asp Lys Ile Ile Glu Gln Leu Asp Lys
100 105 110100 105 110
Leu Lys Phe Gln His Glu Pro Glu Thr Glu Ile Ser Val Pro Ala AspLeu Lys Phe Gln His Glu Pro Glu Thr Glu Ile Ser Val Pro Ala Asp
115 120 125115 120 125
Thr Phe Glu Cys Lys Ser Phe Ile Leu Thr Ile Leu Gln Gln Phe SerThr Phe Glu Cys Lys Ser Phe Ile Leu Thr Ile Leu Gln Gln Phe Ser
130 135 140130 135 140
Ala Cys Leu Glu Ser Val Phe Lys Ser Leu Asn Ser Gly Pro GlnAla Cys Leu Glu Ser Val Phe Lys Ser Leu Asn Ser Gly Pro Gln
145 150 155145 150 155
<210> 35<210> 35
<211> 477<211> 477
<212> ДНК<212> DNA
<213> Canis familiaris<213> Canis familiaris
<400> 35<400> 35
atgctctccc acacaggacc atccaggttt gccctgttcc tgctctgctc tatggaaacc 60atgctctccc acacaggacc atccaggttt gccctgttcc tgctctgctc tatggaaacc 60
ttgctgtcct cccatatggc acccacccat cagctaccac caagtgatgt acgaaaaatc 120ttgctgtcct cccatatggc acccacccat cagctaccac caagtgatgt acgaaaaatc 120
atcttggaat tacagccctt gtcgagggga cttttggaag actatcagaa gaaagagaca 180atcttggaat tacagccctt gtcgagggga cttttggaag actatcagaa gaaagagaca 180
ggggtgccag aatccaaccg taccttgctg ctgtgtctca cctctgattc ccaaccacca 240ggggtgccag aatccaaccg taccttgctg ctgtgtctca cctctgattc ccaaccacca 240
cgcctcaaca gctcagccat cttgccttat ttcagggcaa tcagaccatt atcagataag 300cgcctcaaca gctcagccat cttgccttat ttcagggcaa tcagaccatt atcagataag 300
aacattattg ataaaatcat agaacagctt gacaaactca aatttcaaca tgaaccagaa 360aacattattg ataaaatcat agaacagctt gacaaactca aatttcaaca tgaaccagaa 360
acagaaattt ctgtgcctgc agatactttt gaatgtaaaa gcttcatctt gacgatttta 420acagaaattt ctgtgcctgc agatactttt gaatgtaaaa gcttcatctt gacgatttta 420
cagcagttct cggcgtgcct ggaaagtgtg tttaagtcac taaactctgg acctcag 477cagcagttct cggcgtgcct ggaaagtgtg tttaagtcac taaactctgg acctcag 477
<210> 36<210> 36
<211> 333<211> 333
<212> ДНК<212> DNA
<213> Mus musculus<213> Mus musculus
<400> 36<400> 36
gacattgtgc tgacccaatc tccagcttct ttggctgtgt ctctagggca gagggccacc 60gacattgtgc tgacccaatc tccagcttct ttggctgtgt ctctagggca gagggccacc 60
atctcctgca gagccagcga aagtgttgat aattatggca ttagttttat gcactggtac 120atctcctgca gagccagcga aagtgttgat aattatggca ttagttttat gcactggtac 120
cagcagaaac caggacagcc acccaaactc ctcatctatc gtgcatccaa cctagaatct 180cagcagaaac caggacagcc acccaaactc ctcatctatc gtgcatccaa cctagaatct 180
gggatccctg ccaggttcag tggcagtggg tctaggacag acttcaccct caccattaat 240gggatccctg ccaggttcag tggcagtggg tctaggacag acttcaccct caccattaat 240
cctgtggaga ctgatgatgt tgcaacctat tactgtcagc aaagtaataa ggatccgctc 300cctgtggaga ctgatgatgt tgcaacctat tactgtcagc aaagtaataa ggatccgctc 300
acgttcggtg ctgggaccaa gctggagctg aaa 333acgttcggtg ctgggaccaa gctggagctg aaa 333
<210> 37<210> 37
<211> 363<211> 363
<212> ДНК<212> DNA
<213> Mus musculus<213> Mus musculus
<400> 37<400> 37
caggttcagc tgcagcagtc tggagctgaa ctggtaaagc ctggggcttc agtgaagttg 60caggttcagc tgcagcagtc tggagctgaa ctggtaaagc ctggggcttc agtgaagttg 60
tcctgcaagg cttctggcta caccttcaaa tactatgata taaactgggt gaggcagagg 120tcctgcaagg cttctggcta caccttcaaa tactatgata taaactgggt gaggcagagg 120
cctgaacagg gacttgagtg gattggatgg atttttcctg gagatggtgg tactaagtac 180cctgaacagg gacttgagtg gattggatgg atttttcctg gagatggtgg tactaagtac 180
aatgagacgt tcaagggcaa ggccacactg actacagaca aatcctccag cacagcctac 240aatgagacgt tcaagggcaa ggccacactg actacagaca aatcctccag cacagcctac 240
atgcagctca gcaggctgac atctgaggac tctgctgtct atttctgtgc aagagggggg 300atgcagctca gcaggctgac atctgaggac tctgctgtct atttctgtgc aagagggggg 300
acttcggtga taagggatgc tatggactac tggggtcaag gaacctcagt caccgtctcc 360acttcggtga taagggatgc tatggactac tggggtcaag gaacctcagt caccgtctcc 360
tca 363tca 363
<210> 38<210> 38
<211> 333<211> 333
<212> ДНК<212> DNA
<213> Mus musculus<213> Mus musculus
<400> 38<400> 38
gacattttgc tgacccaatc tccagcttct ttggctgtgt ctctagggca gagggccatc 60gacattttgc tgacccaatc tccagcttct ttggctgtgt ctctagggca gagggccatc 60
atctcctgca aggccagcca aagtgtcagt tttgctggta ctggtttaat gcactggtac 120atctcctgca aggccagcca aagtgtcagt tttgctggta ctggtttaat gcactggtac 120
caacagaaac caggacagca acccaaactc ctcatctatc gtgcatccaa cctagaagct 180caacagaaac caggacagca acccaaactc ctcatctatc gtgcatccaa cctagaagct 180
ggggttccta ccaggtttag tggcagtggg tctaggacag acttcaccct caatatccat 240ggggttccta ccaggtttag tggcagtggg tctaggacag acttcaccct caatatccat 240
cctgtggagg aggaggatgc tgcaacctat ttctgtcagc aaagcaggga atatccgtgg 300cctgtggagg aggaggatgc tgcaacctat ttctgtcagc aaagcaggga atatccgtgg 300
acgttcggtg gaggcaccaa gctggaaatc aaa 333acgttcggtg gaggcaccaa gctggaaatc aaa 333
<210> 39<210> 39
<211> 353<211> 353
<212> ДНК<212> DNA
<213> Mus musculus<213> Mus musculus
<400> 39<400> 39
gaggtgcagt tggtggagtc tgggggagac ttagtgaagc ctggagggtc cctgaaactc 60gaggtgcagt tggtggagtc tgggggagac ttagtgaagc ctggagggtc cctgaaactc 60
tcctgtgcag cctctggatt ctctttcagt aactatggca tgtcttgggt tcgccagact 120tcctgtgcag cctctggatt ctctttcagt aactatggca tgtcttgggt tcgccagact 120
ccagacaaga ggctggagtg ggtcgcaacc attagttatg gtggtagtta cacctactat 180ccagacaaga ggctggagtg ggtcgcaacc attagttatg gtggtagtta cacctactat 180
ccagacaata taaaggggcg attcaccatc tccagagaca atgccaagaa caccctgtac 240ccagacaata taaaggggcg attcaccatc tccagagaca atgccaagaa caccctgtac 240
ctgcaaatga gcagtctgaa gtctgaggac acagccatgt attactgtgt aagggggtat 300ctgcaaatga gcagtctgaa gtctgaggac acagccatgt attactgtgt aagggggtat 300
ggttacgata ctatggacta ctggggtcaa ggaacctcag tcaccgtctc gag 353ggttacgata ctatggacta ctggggtcaa ggaacctcag tcaccgtctc gag 353
<210> 40<210> 40
<211> 331<211> 331
<212> БЕЛОК<212> PROTEIN
<213> Canis familiaris<213> Canis familiaris
<400> 40<400> 40
Ala Ser Thr Thr Ala Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Cys GlyAla Ser Thr Thr Ala Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Cys Gly
1 5 10 151 5 10 15
Ser Thr Ser Gly Ser Thr Val Ala Leu Ala Cys Leu Val Ser Gly TyrSer Thr Ser Gly Ser Thr Val Ala Leu Ala Cys Leu Val Ser Gly Tyr
20 25 3020 25 30
Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ser Leu Thr SerPhe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ser Leu Thr Ser
35 40 4535 40 45
Gly Val His Thr Phe Pro Ser Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu His SerGly Val His Thr Phe Pro Ser Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu His Ser
50 55 6050 55 60
Leu Ser Ser Met Val Thr Val Pro Ser Ser Arg Trp Pro Ser Glu ThrLeu Ser Ser Met Val Thr Val Pro Ser Ser Arg Trp Pro Ser Glu Thr
65 70 75 8065 70 75 80
Phe Thr Cys Asn Val Val His Pro Ala Ser Asn Thr Lys Val Asp LysPhe Thr Cys Asn Val Val His Pro Ala Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys
85 90 9585 90 95
Pro Val Phe Asn Glu Cys Arg Cys Thr Asp Thr Pro Pro Cys Pro ValPro Val Phe Asn Glu Cys Arg Cys Thr Asp Thr Pro Pro Cys Pro Val
100 105 110100 105 110
Pro Glu Pro Leu Gly Gly Pro Ser Val Leu Ile Phe Pro Pro Lys ProPro Glu Pro Leu Gly Gly Pro Ser Val Leu Ile Phe Pro Pro Lys Pro
115 120 125115 120 125
Lys Asp Ile Leu Arg Ile Thr Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val ValLys Asp Ile Leu Arg Ile Thr Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val
130 135 140130 135 140
Leu Asp Leu Gly Arg Glu Asp Pro Glu Val Gln Ile Ser Trp Phe ValLeu Asp Leu Gly Arg Glu Asp Pro Glu Val Gln Ile Ser Trp Phe Val
145 150 155 160145 150 155 160
Asp Gly Lys Glu Val His Thr Ala Lys Thr Gln Ser Arg Glu Gln GlnAsp Gly Lys Glu Val His Thr Ala Lys Thr Gln Ser Arg Glu Gln Gln
165 170 175165 170 175
Phe Asn Gly Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Pro Ile Glu His GlnPhe Asn Gly Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Pro Ile Glu His Gln
180 185 190180 185 190
Asp Trp Leu Thr Gly Lys Glu Phe Lys Cys Arg Val Asn His Ile AspAsp Trp Leu Thr Gly Lys Glu Phe Lys Cys Arg Val Asn His Ile Asp
195 200 205195 200 205
Leu Pro Ser Pro Ile Glu Arg Thr Ile Ser Lys Ala Arg Gly Arg AlaLeu Pro Ser Pro Ile Glu Arg Thr Ile Ser Lys Ala Arg Gly Arg Ala
210 215 220210 215 220
His Lys Pro Ser Val Tyr Val Leu Pro Pro Ser Pro Lys Glu Leu SerHis Lys Pro Ser Val Tyr Val Leu Pro Pro Ser Pro Lys Glu Leu Ser
225 230 235 240225 230 235 240
Ser Ser Asp Thr Val Ser Ile Thr Cys Leu Ile Lys Asp Phe Tyr ProSer Ser Asp Thr Val Ser Ile Thr Cys Leu Ile Lys Asp Phe Tyr Pro
245 250 255245 250 255
Pro Asp Ile Asp Val Glu Trp Gln Ser Asn Gly Gln Gln Glu Pro GluPro Asp Ile Asp Val Glu Trp Gln Ser Asn Gly Gln Gln Glu Pro Glu
260 265 270260 265 270
Arg Lys His Arg Met Thr Pro Pro Gln Leu Asp Glu Asp Gly Ser TyrArg Lys His Arg Met Thr Pro Pro Gln Leu Asp Glu Asp Gly Ser Tyr
275 280 285275 280 285
Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Ser Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln GlyPhe Leu Tyr Ser Lys Leu Ser Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly
290 295 300290 295 300
Asp Pro Phe Thr Cys Ala Val Met His Glu Thr Leu Gln Asn His TyrAsp Pro Phe Thr Cys Ala Val Met His Glu Thr Leu Gln Asn His Tyr
305 310 315 320305 310 315 320
Thr Asp Leu Ser Leu Ser His Ser Pro Gly LysThr Asp Leu Ser Leu Ser His Ser Pro Gly Lys
325 330325 330
<210> 41<210> 41
<211> 993<211> 993
<212> ДНК<212> DNA
<213> Canis familiaris<213> Canis familiaris
<400> 41<400> 41
gcctccacca cggcgccctc ggttttccca ctggccccca gctgcgggtc cacttccggc 60gcctccacca cggcgccctc ggttttccca ctggccccca gctgcgggtc cacttccggc 60
tccacggtgg ccctggcctg cctggtgtca ggctacttcc ccgagcctgt aactgtgtcc 120tccacggtgg ccctggcctg cctggtgtca ggctacttcc ccgagcctgt aactgtgtcc 120
tggaactccg gctccttgac cagcggtgtg cacaccttcc cgtccgtcct gcagtcctca 180tggaactccg gctccttgac cagcggtgtg cacaccttcc cgtccgtcct gcagtcctca 180
gggcttcact ccctcagcag catggtgaca gtgccctcca gcaggtggcc cagcgagacc 240gggcttcact ccctcagcag catggtgaca gtgccctcca gcaggtggcc cagcgagacc 240
ttcacctgca acgtggtcca cccagccagc aacactaaag tagacaagcc agtgttcaat 300ttcacctgca acgtggtcca cccagccagc aacactaaag tagacaagcc agtgttcaat 300
gaatgcagat gcactgatac acccccatgc ccagtccctg aacctctggg agggccttcg 360gaatgcagat gcactgatac acccccatgc ccagtccctg aacctctggg agggccttcg 360
gtcctcatct ttcccccgaa acccaaggac atcctcagga ttacccgaac acccgaggtc 420gtcctcatct ttcccccgaa acccaaggac atcctcagga ttacccgaac acccgaggtc 420
acctgtgtgg tgttagatct gggccgtgag gaccctgagg tgcagatcag ctggttcgtg 480acctgtgtgg tgttagatct gggccgtgag gaccctgagg tgcagatcag ctggttcgtg 480
gatggtaagg aggtgcacac agccaagacc cagtctcgtg agcagcagtt caacggcacc 540gatggtaagg aggtgcacac agccaagacc cagtctcgtg agcagcagtt caacggcacc 540
taccgtgtgg tcagcgtcct ccccattgag caccaggact ggctcacagg gaaggagttc 600taccgtgtgg tcagcgtcct ccccattgag caccaggact ggctcacagg gaaggagttc 600
aagtgcagag tcaaccacat agacctcccg tctcccatcg agaggaccat ctctaaggcc 660aagtgcagag tcaaccacat agacctcccg tctcccatcg agaggaccat ctctaaggcc 660
agagggaggg cccataagcc cagtgtgtat gtcctgccgc catccccaaa ggagttgtca 720agagggaggg cccataagcc cagtgtgtat gtcctgccgc catccccaaa ggagttgtca 720
tccagtgaca cagtcagcat cacctgcctg ataaaagact tctacccacc tgacattgat 780tccagtgaca cagtcagcat cacctgcctg ataaaagact tctacccacc tgacattgat 780
gtggagtggc agagcaatgg acagcaggag cccgagagga agcaccgcat gaccccgccc 840gtggagtggc agagcaatgg acagcaggag cccgagagga agcaccgcat gaccccgccc 840
cagctggacg aggacgggtc ctacttcctg tacagcaagc tctctgtgga caagagccgc 900cagctggacg aggacgggtc ctacttcctg tacagcaagc tctctgtgga caagagccgc 900
tggcagcagg gagacccctt cacatgtgcg gtgatgcatg aaactctaca gaaccactac 960tggcagcagg gagacccctt cacatgtgcg gtgatgcatg aaactctaca gaaccactac 960
acagatctat ccctctccca ttctccgggt aaa 993acagatctat ccctctccca ttctccgggt aaa 993
<210> 42<210> 42
<211> 335<211> 335
<212> БЕЛОК<212> PROTEIN
<213> Canis familiaris<213> Canis familiaris
<400> 42<400> 42
Ala Ser Thr Thr Ala Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Cys GlyAla Ser Thr Thr Ala Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Cys Gly
1 5 10 151 5 10 15
Ser Thr Ser Gly Ser Thr Val Ala Leu Ala Cys Leu Val Ser Gly TyrSer Thr Ser Gly Ser Thr Val Ala Leu Ala Cys Leu Val Ser Gly Tyr
20 25 3020 25 30
Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ser Leu Thr SerPhe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ser Leu Thr Ser
35 40 4535 40 45
Gly Val His Thr Phe Pro Ser Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr SerGly Val His Thr Phe Pro Ser Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser
50 55 6050 55 60
Leu Ser Ser Met Val Thr Val Pro Ser Ser Arg Trp Pro Ser Glu ThrLeu Ser Ser Met Val Thr Val Pro Ser Ser Arg Trp Pro Ser Glu Thr
65 70 75 8065 70 75 80
Phe Thr Cys Asn Val Ala His Pro Ala Ser Lys Thr Lys Val Asp LysPhe Thr Cys Asn Val Ala His Pro Ala Ser Lys Thr Lys Val Asp Lys
85 90 9585 90 95
Pro Val Pro Lys Arg Glu Asn Gly Arg Val Pro Arg Pro Pro Asp CysPro Val Pro Lys Arg Glu Asn Gly Arg Val Pro Arg Pro Pro Asp Cys
100 105 110100 105 110
Pro Lys Cys Pro Ala Pro Glu Met Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe IlePro Lys Cys Pro Ala Pro Glu Met Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Ile
115 120 125115 120 125
Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Leu Ile Ala Arg Thr Pro GluPhe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Leu Ile Ala Arg Thr Pro Glu
130 135 140130 135 140
Val Thr Cys Val Val Val Asp Leu Asp Pro Glu Asp Pro Glu Val GlnVal Thr Cys Val Val Val Asp Leu Asp Pro Glu Asp Pro Glu Val Gln
145 150 155 160145 150 155 160
Ile Ser Trp Phe Val Asp Gly Lys Gln Met Gln Thr Ala Lys Thr GlnIle Ser Trp Phe Val Asp Gly Lys Gln Met Gln Thr Ala Lys Thr Gln
165 170 175165 170 175
Pro Arg Glu Glu Gln Phe Asn Gly Thr Tyr Arg Val Val Ser Val LeuPro Arg Glu Glu Gln Phe Asn Gly Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu
180 185 190180 185 190
Pro Ile Gly His Gln Asp Trp Leu Lys Gly Lys Gln Phe Thr Cys LysPro Ile Gly His Gln Asp Trp Leu Lys Gly Lys Gln Phe Thr Cys Lys
195 200 205195 200 205
Val Asn Asn Lys Ala Leu Pro Ser Pro Ile Glu Arg Thr Ile Ser LysVal Asn Asn Lys Ala Leu Pro Ser Pro Ile Glu Arg Thr Ile Ser Lys
210 215 220210 215 220
Ala Arg Gly Gln Ala His Gln Pro Ser Val Tyr Val Leu Pro Pro SerAla Arg Gly Gln Ala His Gln Pro Ser Val Tyr Val Leu Pro Pro Ser
225 230 235 240225 230 235 240
Arg Glu Glu Leu Ser Lys Asn Thr Val Ser Leu Thr Cys Leu Ile LysArg Glu Glu Leu Ser Lys Asn Thr Val Ser Leu Thr Cys Leu Ile Lys
245 250 255245 250 255
Asp Phe Phe Pro Pro Asp Ile Asp Val Glu Trp Gln Ser Asn Gly GlnAsp Phe Phe Pro Pro Asp Ile Asp Val Glu Trp Gln Ser Asn Gly Gln
260 265 270260 265 270
Gln Glu Pro Glu Ser Lys Tyr Arg Thr Thr Pro Pro Gln Leu Asp GluGln Glu Pro Glu Ser Lys Tyr Arg Thr Thr Pro Pro Gln Leu Asp Glu
275 280 285275 280 285
Asp Gly Ser Tyr Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Ser Val Asp Lys Ser ArgAsp Gly Ser Tyr Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Ser Val Asp Lys Ser Arg
290 295 300290 295 300
Trp Gln Arg Gly Asp Thr Phe Ile Cys Ala Val Met His Glu Ala LeuTrp Gln Arg Gly Asp Thr Phe Ile Cys Ala Val Met His Glu Ala Leu
305 310 315 320305 310 315 320
His Asn His Tyr Thr Gln Glu Ser Leu Ser His Ser Pro Gly LysHis Asn His Tyr Thr Gln Glu Ser Leu Ser His Ser Pro Gly Lys
325 330 335325 330 335
<210> 43<210> 43
<211> 1005<211> 1005
<212> ДНК<212> DNA
<213> Canis familiaris<213> Canis familiaris
<400> 43<400> 43
gcctcaacaa ctgctcctag cgtgtttccc ctggccccta gctgcggaag tacctcaggc 60gcctcaacaa ctgctcctag cgtgtttccc ctggccccta gctgcggaag tacctcaggc 60
agcacagtgg ccctggcttg tctggtgtct ggatatttcc ctgagccagt gaccgtgagt 120agcacagtgg ccctggcttg tctggtgtct ggatatttcc ctgagccagt gaccgtgagt 120
tggaacagcg gctctctgac ctccggggtg cacacatttc catctgtgct gcagtctagt 180tggaacagcg gctctctgac ctccggggtg cacacatttc catctgtgct gcagtctagt 180
ggcctgtact ccctgtcaag catggtgact gtgccttcct ctaggtggcc atcagaaact 240ggcctgtact ccctgtcaag catggtgact gtgccttcct ctaggtggcc atcagaaact 240
ttcacctgca acgtggccca tcccgccagc aagaccaaag tggacaagcc cgtgcctaaa 300ttcacctgca acgtggccca tcccgccagc aagaccaaag tggacaagcc cgtgcctaaa 300
agggagaatg gaagggtgcc aagaccacct gattgcccta agtgtccagc tccagaaatg 360agggaatg gaagggtgcc aagaccacct gattgcccta agtgtccagc tccagaaatg 360
ctgggaggac caagcgtgtt catctttcca cccaagccca aagacacact gctgattgct 420ctgggaggac caagcgtgtt catctttcca cccaagccca aagacacact gctgattgct 420
agaactcccg aggtgacctg cgtggtggtg gacctggatc cagaggaccc cgaagtgcag 480agaactcccg aggtgacctg cgtggtggtg gacctggatc cagaggaccc cgaagtgcag 480
atctcctggt tcgtggatgg gaagcagatg cagacagcca aaactcagcc tcgggaggaa 540atctcctggt tcgtggatgg gaagcagatg cagacagcca aaactcagcc tcgggaggaa 540
cagtttaacg gaacctatag agtggtgtct gtgctgccaa ttggacacca ggactggctg 600cagtttaacg gaacctatag agtggtgtct gtgctgccaa ttggacacca ggactggctg 600
aagggcaaac agtttacatg caaggtgaac aacaaggccc tgcctagtcc aatcgagagg 660aagggcaaac agtttacatg caaggtgaac aacaaggccc tgcctagtcc aatcgagagg 660
actatttcaa aagctagggg acaggctcat cagccttccg tgtatgtgct gcctccatcc 720actatttcaa aagctagggg acaggctcat cagccttccg tgtatgtgct gcctccatcc 720
cgggaggaac tgtctaagaa cacagtgagt ctgacttgtc tgatcaaaga tttctttccc 780cgggaggaac tgtctaagaa cacagtgagt ctgacttgtc tgatcaaaga tttctttccc 780
cctgacattg atgtggagtg gcagagcaat gggcagcagg agccagaatc caagtacaga 840cctgacattg atgtggagtg gcagagcaat gggcagcagg agccagaatc caagtacaga 840
accacaccac cccagctgga cgaagatggc tcctatttcc tgtacagtaa gctgtcagtg 900accacaccac cccagctgga cgaagatggc tcctatttcc tgtacagtaa gctgtcagtg 900
gacaaatcta ggtggcagcg cggggatacc tttatctgcg ccgtgatgca cgaggctctg 960gacaaatcta ggtggcagcg cggggatacc tttatctgcg ccgtgatgca cgaggctctg 960
cacaatcatt acacacaaga aagtctgtca catagccccg gcaag 1005cacaatcatt acacacaaga aagtctgtca catagccccg gcaag 1005
<210> 44<210> 44
<211> 106<211> 106
<212> БЕЛОК<212> PROTEIN
<213> Canis familiaris<213> Canis familiaris
<400> 44<400> 44
Arg Asn Asp Ala Gln Pro Ala Val Tyr Leu Phe Gln Pro Ser Pro AspArg Asn Asp Ala Gln Pro Ala Val Tyr Leu Phe Gln Pro Ser Pro Asp
1 5 10 151 5 10 15
Gln Leu His Thr Gly Ser Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Ser PheGln Leu His Thr Gly Ser Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Ser Phe
20 25 3020 25 30
Tyr Pro Lys Asp Ile Asn Val Lys Trp Lys Val Asp Gly Val Ile GlnTyr Pro Lys Asp Ile Asn Val Lys Trp Lys Val Asp Gly Val Ile Gln
35 40 4535 40 45
Asp Thr Gly Ile Gln Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Lys Asp Ser ThrAsp Thr Gly Ile Gln Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Lys Asp Ser Thr
50 55 6050 55 60
Tyr Ser Leu Ser Ser Thr Leu Thr Met Ser Ser Thr Glu Tyr Leu SerTyr Ser Leu Ser Ser Thr Leu Thr Met Ser Ser Thr Glu Tyr Leu Ser
65 70 75 8065 70 75 80
His Glu Leu Tyr Ser Cys Glu Ile Thr His Lys Ser Leu Pro Ser ThrHis Glu Leu Tyr Ser Cys Glu Ile Thr His Lys Ser Leu Pro Ser Thr
85 90 9585 90 95
Leu Ile Lys Ser Phe Gln Arg Ser Glu CysLeu Ile Lys Ser Phe Gln Arg Ser Glu Cys
100 105100 105
<210> 45<210> 45
<211> 318<211> 318
<212> ДНК<212> DNA
<213> Canis familiaris<213> Canis familiaris
<400> 45<400> 45
aggaacgacg cccagcctgc tgtgtatctg tttcagccct cccctgatca gctgcacact 60aggaacgacg cccagcctgc tgtgtatctg tttcagccct cccctgatca gctgcacact 60
ggctctgcta gtgtggtgtg tctgctgaac agcttctacc caaaggatat caatgtgaag 120ggctctgcta gtgtggtgtg tctgctgaac agcttctacc caaaggatat caatgtgaag 120
tggaaagtgg acggcgtgat ccaggatact gggattcagg agtccgtgac cgaacaggac 180tggaaagtgg acggcgtgat ccaggatact gggattcagg agtccgtgac cgaacaggac 180
aaagattcaa catatagcct gagctccact ctgaccatgt ctagtaccga gtacctgagc 240aaagattcaa catatagcct gagctccact ctgaccatgt ctagtaccga gtacctgagc 240
cacgaactgt attcctgcga gatcactcat aagtccctgc cctctaccct gatcaagagc 300cacgaactgt attcctgcga gatcactcat aagtccctgc cctctaccct gatcaagagc 300
ttccagagat cagagtgt 318ttccagagat cagagtgt 318
<210> 46<210> 46
<211> 333<211> 333
<212> ДНК<212> DNA
<213> Искусственная<213> Artificial
<220><220>
<223> Нуклеотидная последовательность, кодирующая последовательность<223> Nucleotide sequence, coding sequence
канинизированной вариабельной области легкой цепи мАт изcaninized variable region of the light chain of mAb from
Mus musculus и CanisMus musculus and Canis
<400> 46<400> 46
gagatcgtga tgacccagag ccccgccagc ctgagcctga gccaggaaga gaaagtcacc 60gagatcgtga tgacccagag ccccgccagc ctgagcctga gccaggaaga gaaagtcacc 60
atcacatgca aggccagcca gagcgtgtcc ttcgccggca caggcctgat gcactggtat 120atcacatgca aggccagcca gagcgtgtcc ttcgccggca caggcctgat gcactggtat 120
cagcagaagc ccggccaggc ccccaagctg ctgatctacc gggccagcaa cctggaagcc 180cagcagaagc ccggccaggc ccccaagctg ctgatctacc gggccagcaa cctggaagcc 180
ggcgtgccaa gcagattcag cggcagcggc tccggcaccg acttcagctt caccatcagc 240ggcgtgccaa gcagattcag cggcagcggc tccggcaccg acttcagctt caccatcagc 240
agcctcgaac ccgaggacgt ggccgtgtac tactgccagc agagcagaga gtacccctgg 300agcctcgaac ccgaggacgt ggccgtgtac tactgccagc agagcagaga gtacccctgg 300
accttcggcc agggtaccaa gctggagatc aag 333accttcggcc agggtaccaa gctggagatc aag 333
<210> 47<210> 47
<211> 354<211> 354
<212> ДНК<212> DNA
<213> Искусственная<213> Artificial
<220><220>
<223> Нуклеотидная последовательность, кодирующая последовательность<223> Nucleotide sequence, coding sequence
канинизированной вариабельной области тяжелой цепи мАт изcaninized variable region of the heavy chain of mAb from
Mus musculus и CanisMus musculus and Canis
<400> 47<400> 47
gaggtgcagc tggtggaatc tggcggcgac ctggtcaagc ctggcggcag cctgagactg 60gaggtgcagc tggtggaatc tggcggcgac ctggtcaagc ctggcggcag cctgagactg 60
agctgtgtgg ccagcggctt caccttcagc aactacggca tgagctgggt ccgacaggcc 120agctgtgtgg ccagcggctt caccttcagc aactacggca tgagctgggt ccgacaggcc 120
cctggcaagg gactgcagtg ggtggccacc atcagctacg gcggcagcta cacctactac 180cctggcaagg gactgcagtg ggtggccacc atcagctacg gcggcagcta cacctactac 180
cccgacaaca tcaagggccg gttcaccatc agccgggaca acgccaagaa caccctgtac 240cccgacaaca tcaagggccg gttcaccatc agccgggaca acgccaagaa caccctgtac 240
ctgcagatga acagcctgcg ggccgaggac accgccatgt actactgcgt gcggggctac 300ctgcagatga acagcctgcg ggccgaggac accgccatgt actactgcgt gcggggctac 300
ggctacgaca caatggacta ctggggccag ggcaccctcg tgaccgtctc gagc 354ggctacgaca caatggacta ctggggccag ggcaccctcg tgaccgtctc gagc 354
<210> 48<210> 48
<211> 333<211> 333
<212> ДНК<212> DNA
<213> Искусственная<213> Artificial
<220><220>
<223> Нуклеотидная последовательность, кодирующая последовательность<223> Nucleotide sequence, coding sequence
канинизированной вариабельной области легкой цепи мАт изcaninized variable region of the light chain of mAb from
Mus musculus и CanisMus musculus and Canis
<400> 48<400> 48
gatatagtga tgacacaaac tcctctcagt ctttccgtat caccgggaga accggcttcc 60gatatagtga tgacacaaac tcctctcagt ctttccgtat caccgggaga accggcttcc 60
atttcctgtc gggcctcaga gtctgtggac aactacggga tatccttcat gcactggtat 120atttcctgtc gggcctcaga gtctgtggac aactacggga tatccttcat gcactggtat 120
cagcagaaac ccggccagcc ccctaaactc cttatttaca gggccagtaa tctggaaagc 180cagcagaaac ccggccagcc ccctaaactc cttatttaca gggccagtaa tctggaaagc 180
ggtgtgcccg atcgatttag cggttccggg agcggcacag atttcaccct gcgaatctct 240ggtgtgcccg atcgatttag cggttccggg agcggcacag atttcaccct gcgaatctct 240
agagttgaag cggatgatgc aggagtatat tactgccagc aatccaataa ggatcccctt 300agagttgaag cggatgatgc aggagtatat tactgccagc aatccaataa ggatcccctt 300
acattcggcg cgggtaccaa gctggagatc aag 333acattcggcg cgggtaccaa gctggagatc aag 333
<210> 49<210> 49
<211> 363<211> 363
<212> ДНК<212> DNA
<213> Искусственная<213> Artificial
<220><220>
<223> Нуклеотидная последовательность, кодирующая последовательность<223> Nucleotide sequence, coding sequence
канинизированной вариабельной области тяжелой цепи мАт изcaninized variable region of the heavy chain of mAb from
Mus musculus и CanisMus musculus and Canis
<400> 49<400> 49
gaggtgcagc tggtgcagtc tggcgccgaa gtgaagaaac ctggcgccag cgtgaaggtg 60gaggtgcagc tggtgcagtc tggcgccgaa gtgaagaaac ctggcgccag cgtgaaggtg 60
tcctgcaaga ccagcggcta caccttcaag tactacgaca tcaactgggt ccgacaggcc 120tcctgcaaga ccagcggcta caccttcaag tactacgaca tcaactgggt ccgacaggcc 120
cctggcgccg gactggattg gatgggctgg atcttccccg gcgacggcgg caccaagtac 180cctggcgccg gactggattg gatgggctgg atcttccccg gcgacggcgg caccaagtac 180
aacgagacat tcaagggcag agtgaccctg accgccgaca ccagcaccag caccgcctac 240aacgagacat tcaagggcag agtgaccctg accgccgaca ccagcaccag caccgcctac 240
atggaactga gcagcctgag agccggcgat atcgctgtgt actactgcgc cagaggcggc 300atggaactga gcagcctgag agccggcgat atcgctgtgt actactgcgc cagaggcggc 300
accagcgtga tccgggacgc tatggactac tggggccagg gcaccctcgt gaccgtctcg 360accagcgtga tccgggacgc tatggactac tggggccagg gcaccctcgt gaccgtctcg 360
agc 363agc 363
<210> 50<210> 50
<211> 333<211> 333
<212> ДНК<212> DNA
<213> Искусственная<213> Artificial
<220><220>
<223> Нуклеотидная последовательность, кодирующая последовательность<223> Nucleotide sequence, coding sequence
канинизированной вариабельной области легкой цепи мАт изcaninized variable region of the light chain of mAb from
Mus musculus и CanisMus musculus and Canis
<400> 50<400> 50
gacattgtta tgactcagac gcccctgagc ctgagcgtct cccccggcga gcccgctagt 60gacattgtta tgactcagac gcccctgagc ctgagcgtct cccccggcga gcccgctagt 60
attagttgcc gggcatccga gtcagtggac aattatggca tcagctttat gcattggttt 120attagttgcc gggcatccga gtcagtggac aattatggca tcagctttat gcattggttt 120
cagcagaaac caggtcagtc ccctcaactc ctgatttaca gagcttccaa tctggaatca 180cagcagaaac caggtcagtc ccctcaactc ctgatttaca gagcttccaa tctggaatca 180
ggcgttcctg acagatttag cggatcaggc tccgggacag atttcaccct gcgcatcagt 240ggcgttcctg acagatttag cggatcaggc tccgggacag atttcaccct gcgcatcagt 240
cgcgtggaag ccgatgacgc aggcgtctat tattgtcaac agtccaacaa ggatcccctt 300cgcgtggaag ccgatgacgc aggcgtctat tattgtcaac agtccaacaa ggatcccctt 300
acattcggag ccggtaccaa gctggagatc aag 333acattcggag ccggtaccaa gctggagatc aag 333
<210> 51<210> 51
<211> 111<211> 111
<212> БЕЛОК<212> PROTEIN
<213> Искусственный<213> Artificial
<220><220>
<223> Последовательность канинизированной вариабельной области легкой<223> Caninized light variable region sequence
цепи мАт из Mus musculus и Canischains of mAbs from Mus musculus and Canis
<400> 51<400> 51
Asp Ile Val Met Thr Gln Thr Pro Leu Ser Leu Ser Val Ser Pro GlyAsp Ile Val Met Thr Gln Thr Pro Leu Ser Leu Ser Val Ser Pro Gly
1 5 10 151 5 10 15
Glu Pro Ala Ser Ile Ser Cys Arg Ala Ser Glu Ser Val Asp Asn TyrGlu Pro Ala Ser Ile Ser Cys Arg Ala Ser Glu Ser Val Asp Asn Tyr
20 25 3020 25 30
Gly Ile Ser Phe Met His Trp Phe Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ser ProGly Ile Ser Phe Met His Trp Phe Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ser Pro
35 40 4535 40 45
Gln Arg Leu Ile Tyr Arg Ala Ser Asn Leu Glu Ser Gly Val Pro AspGln Arg Leu Ile Tyr Arg Ala Ser Asn Leu Glu Ser Gly Val Pro Asp
50 55 6050 55 60
Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Arg Ile SerArg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Arg Ile Ser
65 70 75 8065 70 75 80
Arg Val Glu Ala Asp Asp Ala Gly Val Tyr Tyr Cys Gln Gln Ser AsnArg Val Glu Ala Asp Asp Ala Gly Val Tyr Tyr Cys Gln Gln Ser Asn
85 90 9585 90 95
Lys Asp Pro Leu Thr Phe Gly Ala Gly Thr Lys Leu Glu Ile LysLys Asp Pro Leu Thr Phe Gly Ala Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys
100 105 110100 105 110
<210> 52<210> 52
<211> 333<211> 333
<212> ДНК<212> DNA
<213> Искусственная<213> Artificial
<220><220>
<223> Нуклеотидная последовательность, кодирующая последовательность<223> Nucleotide sequence, coding sequence
канинизированной вариабельной области легкой цепи мАт изcaninized variable region of the light chain of mAb from
Mus musculus и CanisMus musculus and Canis
<400> 52<400> 52
gacatcgtga tgacccagac ccccctgagc ctgagcgtgt cccctggcga gcctgccagc 60gacatcgtga tgacccagac ccccctgagc ctgagcgtgt cccctggcga gcctgccagc 60
atcagctgca gagccagcga gagcgtggac aactacggca tcagcttcat gcactggttc 120atcagctgca gagccagcga gagcgtggac aactacggca tcagcttcat gcactggttc 120
cagcagaagc ccggccagag cccccagcgg ctgatctaca gagccagcaa cctggaaagc 180cagcagaagc ccggccagag cccccagcgg ctgatctaca gagccagcaa cctggaaagc 180
ggcgtgcccg atcggtttag cggctctggc agcggcaccg acttcaccct gcggatctct 240ggcgtgcccg atcggtttag cggctctggc agcggcaccg acttcaccct gcggatctct 240
cgggtggaag ccgatgacgc cggagtgtac tactgccagc agagcaacaa ggaccccctg 300cgggtggaag ccgatgacgc cggagtgtac tactgccagc agagcaacaa ggaccccctg 300
acctttggcg ccggtaccaa gctggagatc aag 333acctttggcg ccggtaccaa gctggagatc aag 333
<210> 53<210> 53
<211> 148<211> 148
<212> БЕЛОК<212> PROTEIN
<213> Искусственный<213> Artificial
<220><220>
<223> Полноразмерный белок ИЛ-31 собаки, кодируемый кодон-<223> The full-length canine IL-31 protein, encoded by the codon-
оптимизированной нуклеотидной последовательностьюoptimized nucleotide sequence
<400> 53<400> 53
Met Arg Gly Ser His His His His His His Gly Ser Ser His Met AlaMet Arg Gly Ser His His His His His Gly Ser Ser His Met Ala
1 5 10 151 5 10 15
Pro Thr His Gln Leu Pro Pro Ser Asp Val Arg Lys Ile Ile Leu GluPro Thr His Gln Leu Pro Pro Ser Asp Val Arg Lys Ile Ile Leu Glu
20 25 3020 25 30
Leu Gln Pro Leu Ser Arg Gly Leu Leu Glu Asp Tyr Gln Lys Lys GluLeu Gln Pro Leu Ser Arg Gly Leu Leu Glu Asp Tyr Gln Lys Lys Glu
35 40 4535 40 45
Thr Gly Val Pro Glu Ser Asn Arg Thr Leu Leu Leu Cys Leu Thr SerThr Gly Val Pro Glu Ser Asn Arg Thr Leu Leu Leu Cys Leu Thr Ser
50 55 6050 55 60
Asp Ser Gln Pro Pro Arg Leu Asn Ser Ser Ala Ile Leu Pro Tyr PheAsp Ser Gln Pro Pro Arg Leu Asn Ser Ser Ala Ile Leu Pro Tyr Phe
65 70 75 8065 70 75 80
Arg Ala Ile Arg Pro Leu Ser Asp Lys Asn Ile Ile Asp Lys Ile IleArg Ala Ile Arg Pro Leu Ser Asp Lys Asn Ile Ile Asp Lys Ile Ile
85 90 9585 90 95
Glu Gln Leu Asp Lys Leu Lys Phe Gln His Glu Pro Glu Thr Glu IleGlu Gln Leu Asp Lys Leu Lys Phe Gln His Glu Pro Glu Thr Glu Ile
100 105 110100 105 110
Ser Val Pro Ala Asp Thr Phe Glu Cys Lys Ser Phe Ile Leu Thr IleSer Val Pro Ala Asp Thr Phe Glu Cys Lys Ser Phe Ile Leu Thr Ile
115 120 125115 120 125
Leu Gln Gln Phe Ser Ala Cys Leu Glu Ser Val Phe Lys Ser Leu AsnLeu Gln Gln Phe Ser Ala Cys Leu Glu Ser Val Phe Lys Ser Leu Asn
130 135 140130 135 140
Ser Gly Pro GlnSer Gly Pro Gln
145145
<210> 54<210> 54
<211> 444<211> 444
<212> ДНК<212> DNA
<213> Искусственная<213> Artificial
<220><220>
<223> Кодон-оптимизированная нуклеотидная последовательность, кодирующая<223> Codon-optimized nucleotide sequence encoding
полноразмерный белок ИЛ-31 собакиfull-length canine IL-31 protein
<400> 54<400> 54
atgagaggat cccatcacca tcaccaccac ggctcatctc atatggctcc tactcaccaa 60atgagaggat cccatcacca tcaccaccac ggctcatctc atatggctcc tactcaccaa 60
ttaccaccct ccgatgtccg taaaattatt ctcgaattac aacctttatc ccgcggtctg 120ttaccaccct ccgatgtccg taaaattatt ctcgaattac aacctttatc ccgcggtctg 120
ctcgaagatt accaaaaaaa agaaacaggc gtcccagaaa gcaaccgtac attactcctt 180ctcgaagatt accaaaaaaa agaaacaggc gtcccagaaa gcaaccgtac attactcctt 180
tgccttacct ccgattccca accacctcgt cttaactcat cagccattct cccttatttc 240tgccttacct ccgattccca accacctcgt cttaactcat cagccattct cccttatttc 240
cgtgccattc gccctctttc tgataaaaat attattgaca aaattattga acaactcgac 300cgtgccattc gccctctttc tgataaaaat attattgaca aaattattga acaactcgac 300
aaattaaaat tccaacacga acccgaaacc gaaatctccg tacctgccga tacctttgaa 360aaattaaaat tccaacacga acccgaaacc gaaatctccg tacctgccga tacctttgaa 360
tgcaaatcct ttatcctcac tattttacaa caattctccg catgtctcga atccgtcttc 420tgcaaatcct ttatcctcac tattttacaa caattctccg catgtctcga atccgtcttc 420
aaatctctca attccggtcc acag 444aaatctctca attccggtcc acag 444
<210> 55<210> 55
<211> 375<211> 375
<212> ДНК<212> DNA
<213> Искусственная последовательность<213> Artificial sequence
<220><220>
<223> Вариабельная область тяжелой цепи ZTS-841<223> ZTS-841 heavy chain variable region
<400> 55<400> 55
gaggtgcagc tggtggagtc tgggggagat ttggtgaagc ctggggggtc cttgagactg 60gaggtgcagc tggtggagtc tgggggagat ttggtgaagc ctggggggtc cttgagactg 60
tcctgtgtgg cctctggatt caccttcagt agccacggca tgcactgggt ccgtcagtct 120tcctgtgtgg cctctggatt caccttcagt agccacggca tgcactgggt ccgtcagtct 120
ccagggaagg gactgcagtg ggtcgcagtt attaacagcg gtggaagtag cacatactac 180ccagggaagg gactgcagtg ggtcgcagtt attaacagcg gtggaagtag cacatactac 180
acagacgctg tgaagggccg attcaccatc tccagagaca acgccaagaa cacagtgtat 240agacgctg tgaagggccg attcaccatc tccagagaca acgccaagaa cacagtgtat 240
ctacagatga acagcctgag agccgaggac acggccatgt attactgtgc aaaggagtcc 300ctacagatga acagcctgag agccgaggac acggccatgt attactgtgc aaaggagtcc 300
gtcggggggt gggagcaact ggtcggacct cattttgact actggggcca gggaaccctg 360gtcggggggt gggagcaact ggtcggacct cattttgact actggggcca gggaaccctg 360
gtcatcgtct cgagc 375gtcatcgtct cgagc 375
<210> 56<210> 56
<211> 125<211> 125
<212> БЕЛОК<212> PROTEIN
<213> Искусственная последовательность<213> Artificial sequence
<220><220>
<223> Вариабельная область тяжелой цепи ZTS-841<223> ZTS-841 heavy chain variable region
<400> 56<400> 56
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Asp Leu Val Lys Pro Gly GlyGlu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Asp Leu Val Lys Pro Gly Gly
1 5 10 151 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Val Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser HisSer Leu Arg Leu Ser Cys Val Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser His
20 25 3020 25 30
Gly Met His Trp Val Arg Gln Ser Pro Gly Lys Gly Leu Gln Trp ValGly Met His Trp Val Arg Gln Ser Pro Gly Lys Gly Leu Gln Trp Val
35 40 4535 40 45
Ala Val Ile Asn Ser Gly Gly Ser Ser Thr Tyr Tyr Thr Asp Ala ValAla Val Ile Asn Ser Gly Gly Ser Ser Thr Tyr Tyr Thr Asp Ala Val
50 55 6050 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Thr Val TyrLys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Thr Val Tyr
65 70 75 8065 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Met Tyr Tyr CysLeu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Met Tyr Tyr Cys
85 90 9585 90 95
Ala Lys Glu Ser Val Gly Gly Trp Glu Gln Leu Val Gly Pro His PheAla Lys Glu Ser Val Gly Gly Trp Glu Gln Leu Val Gly Pro His Phe
100 105 110100 105 110
Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Ile Val Ser SerAsp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Ile Val Ser Ser
115 120 125115 120 125
<210> 57<210> 57
<211> 8<211> 8
<212> БЕЛОК<212> PROTEIN
<213> Canis familiaris<213> Canis familiaris
<400> 57<400> 57
Gly Phe Thr Phe Ser Ser His GlyGly Phe Thr Phe Ser Ser His Gly
1 51 5
<210> 58<210> 58
<211> 8<211> 8
<212> БЕЛОК<212> PROTEIN
<213> Canis familiaris<213> Canis familiaris
<400> 58<400> 58
Ile Asn Ser Gly Gly Ser Ser ThrIle Asn Ser Gly Gly Ser Ser Thr
1 51 5
<210> 59<210> 59
<211> 18<211> 18
<212> БЕЛОК<212> PROTEIN
<213> Canis familiaris<213> Canis familiaris
<400> 59<400> 59
Ala Lys Glu Ser Val Gly Gly Trp Glu Gln Leu Val Gly Pro His PheAla Lys Glu Ser Val Gly Gly Trp Glu Gln Leu Val Gly Pro His Phe
1 5 10 151 5 10 15
Asp TyrAsp Tyr
<210> 60<210> 60
<211> 330<211> 330
<212> ДНК<212> DNA
<213> Искусственная последовательность<213> Artificial sequence
<220><220>
<223> Вариабельная область легкой цепи ZTS-841<223> Variable region of the light chain of ZTS-841
<400> 60<400> 60
cagtctgtgc tgactcagcc gacctcagtg tcagggtccc ttggccagag ggtcaccatc 60cagtctgtgc tgactcagcc gacctcagtg tcagggtccc ttggccagag ggtcaccatc 60
tcctgctctg gaagcacgaa caacatcggt attcttggtg cgagctggta ccaactgttc 120tcctgctctg gaagcacgaa caacatcggt attcttggtg cgagctggta ccaactgttc 120
ccaggaaagg cccctaaact cctcgtgtac ggtaatggga atcgaccgtc aggggtccct 180cccaggaaagg cccctaaact cctcgtgtac ggtaatggga atcgaccgtc aggggtccct 180
gaccggtttt ccggcgccga ctctggcgac tcagtcaccc tgaccatcac tgggcttcag 240gaccggtttt ccggcgccga ctctggcgac tcagtcaccc tgaccatcac tgggcttcag 240
gctgaggacg aggctgatta ttactgccag tcctttgata ccacgcttgg tgctcatgtg 300gctgaggacg aggctgatta ttactgccag tcctttgata ccacgcttgg tgctcatgtg 300
ttcggcggag gcacccacct gaccgtcctt 330ttcggcggag gcacccacct gaccgtcctt 330
<210> 61<210> 61
<211> 110<211> 110
<212> БЕЛОК<212> PROTEIN
<213> Искусственная последовательность<213> Artificial sequence
<220><220>
<223> Вариабельная область легкой цепи ZTS-841<223> Variable region of the light chain of ZTS-841
<400> 61<400> 61
Gln Ser Val Leu Thr Gln Pro Thr Ser Val Ser Gly Ser Leu Gly GlnGln Ser Val Leu Thr Gln Pro Thr Ser Val Ser Gly Ser Leu Gly Gln
1 5 10 151 5 10 15
Arg Val Thr Ile Ser Cys Ser Gly Ser Thr Asn Asn Ile Gly Ile LeuArg Val Thr Ile Ser Cys Ser Gly Ser Thr Asn Asn Ile Gly Ile Leu
20 25 3020 25 30
Gly Ala Ser Trp Tyr Gln Leu Phe Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu LeuGly Ala Ser Trp Tyr Gln Leu Phe Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu
35 40 4535 40 45
Val Tyr Gly Asn Gly Asn Arg Pro Ser Gly Val Pro Asp Arg Phe SerVal Tyr Gly Asn Gly Asn Arg Pro Ser Gly Val Pro Asp Arg Phe Ser
50 55 6050 55 60
Gly Ala Asp Ser Gly Asp Ser Val Thr Leu Thr Ile Thr Gly Leu GlnGly Ala Asp Ser Gly Asp Ser Val Thr Leu Thr Ile Thr Gly Leu Gln
65 70 75 8065 70 75 80
Ala Glu Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Gln Ser Phe Asp Thr Thr LeuAla Glu Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Gln Ser Phe Asp Thr Thr Leu
85 90 9585 90 95
Gly Ala His Val Phe Gly Gly Gly Thr His Leu Thr Val LeuGly Ala His Val Phe Gly Gly Gly Thr His Leu Thr Val Leu
100 105 110100 105 110
<210> 62<210> 62
<211> 8<211> 8
<212> БЕЛОК<212> PROTEIN
<213> Canis familiaris<213> Canis familiaris
<400> 62<400> 62
Thr Asn Asn Ile Gly Ile Leu GlyThr Asn Asn Ile Gly Ile Leu Gly
1 51 5
<210> 63<210> 63
<211> 4<211> 4
<212> БЕЛОК<212> PROTEIN
<213> Canis familiaris<213> Canis familiaris
<400> 63<400> 63
Gly Asn Gly AsnGly Asn Gly Asn
11
<210> 64<210> 64
<211> 11<211> 11
<212> БЕЛОК<212> PROTEIN
<213> Canis familiaris<213> Canis familiaris
<400> 64<400> 64
Gln Ser Phe Asp Thr Thr Leu Gly Ala His ValGln Ser Phe Asp Thr Thr Leu Gly Ala His Val
1 5 101 5 10
<210> 65<210> 65
<211> 109<211> 109
<212> БЕЛОК<212> PROTEIN
<213> Canis familiaris<213> Canis familiaris
<400> 65<400> 65
Gly Gln Ala His Gln Pro Ser Val Tyr Val Leu Pro Pro Ser Arg GluGly Gln Ala His Gln Pro Ser Val Tyr Val Leu Pro Pro Ser Arg Glu
1 5 10 151 5 10 15
Glu Leu Ser Lys Asn Thr Val Ser Leu Thr Cys Leu Ile Lys Asp PheGlu Leu Ser Lys Asn Thr Val Ser Leu Thr Cys Leu Ile Lys Asp Phe
20 25 3020 25 30
Phe Pro Pro Asp Ile Asp Val Glu Trp Gln Ser Asn Gly Gln Gln GluPhe Pro Pro Asp Ile Asp Val Glu Trp Gln Ser Asn Gly Gln Gln Glu
35 40 4535 40 45
Pro Glu Ser Lys Tyr Arg Thr Thr Pro Pro Gln Leu Asp Glu Asp GlyPro Glu Ser Lys Tyr Arg Thr Thr Pro Pro Gln Leu Asp Glu Asp Gly
50 55 6050 55 60
Ser Tyr Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Ser Val Asp Lys Ser Arg Trp GlnSer Tyr Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Ser Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln
65 70 75 8065 70 75 80
Arg Gly Asp Thr Phe Ile Cys Ala Val Met His Glu Ala Leu His HisArg Gly Asp Thr Phe Ile Cys Ala Val Met His Glu Ala Leu His His
85 90 9585 90 95
His Tyr Thr Gln Glu Ser Leu Ser His Ser Pro Gly LysHis Tyr Thr Gln Glu Ser Leu Ser His Ser Pro Gly Lys
100 105100 105
<210> 66<210> 66
<211> 11<211> 11
<212> БЕЛОК<212> PROTEIN
<213> Canis familiaris<213> Canis familiaris
<400> 66<400> 66
His Glu Ala Leu His His His Tyr Thr Gln GluHis Glu Ala Leu His His His Tyr Thr Gln Glu
1 5 101 5 10
<210> 67<210> 67
<211> 657<211> 657
<212> ДНК<212> DNA
<213> Искусственная последовательность<213> Artificial sequence
<220><220>
<223> Легкая цепь ZTS-00008183<223> Light chain ZTS-00008183
<400> 67<400> 67
gagatcgtga tgacccagag ccccgccagc ctgagcctga gccaggaaga gaaagtcacc 60gagatcgtga tgacccagag ccccgccagc ctgagcctga gccaggaaga gaaagtcacc 60
atcacatgca aggccagcca gagcgtgtcc ttcgccggca caggcctgat gcactggtat 120atcacatgca aggccagcca gagcgtgtcc ttcgccggca caggcctgat gcactggtat 120
cagcagaagc ccggccaggc ccccaagctg ctgatctacc gggccagcaa cctggaagcc 180cagcagaagc ccggccaggc ccccaagctg ctgatctacc gggccagcaa cctggaagcc 180
ggcgtgccaa gcagattcag cggcagcggc tccggcaccg acttcagctt caccatcagc 240ggcgtgccaa gcagattcag cggcagcggc tccggcaccg acttcagctt caccatcagc 240
agcctcgaac ccgaggacgt ggccgtgtac tactgccagc agagcagaga gtacccctgg 300agcctcgaac ccgaggacgt ggccgtgtac tactgccagc agagcagaga gtacccctgg 300
accttcggcc agggtaccaa gctggaaatc aagcggaacg acgcccagcc cgccgtgtac 360accttcggcc agggtaccaa gctggaaatc aagcggaacg acgcccagcc cgccgtgtac 360
ctgttccagc ccagccccga tcagctgcac accggcagcg cttcagtcgt ctgcctgctg 420ctgttccagc ccagccccga tcagctgcac accggcagcg cttcagtcgt ctgcctgctg 420
aacagcttct accccaagga catcaacgtg aagtggaagg tggacggcgt gatccaggac 480aacagcttct accccaagga catcaacgtg aagtggaagg tggacggcgt gatccaggac 480
accggcatcc aggaaagcgt caccgagcag gacaaggaca gcacctacag cctgagcagc 540accggcatcc aggaaagcgt caccgagcag gacaaggaca gcacctacag cctgagcagc 540
accctgacca tgtccagcac cgagtacctg agccacgagc tgtatagctg cgagatcacc 600accctgacca tgtccagcac cgagtacctg agccacgagc tgtatagctg cgagatcacc 600
cacaagagcc tgcctagcac cctgatcaag agcttccagc ggagcgagtg ctagtag 657cacaagagcc tgcctagcac cctgatcaag agcttccagc ggagcgagtg ctagtag 657
<210> 68<210> 68
<211> 217<211> 217
<212> БЕЛОК<212> PROTEIN
<213> Искусственная последовательность<213> Artificial sequence
<220><220>
<223> Легкая цепь ZTS-00008183<223> Light chain ZTS-00008183
<400> 68<400> 68
Glu Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Ala Ser Leu Ser Leu Ser Gln GluGlu Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Ala Ser Leu Ser Leu Ser Gln Glu
1 5 10 151 5 10 15
Glu Lys Val Thr Ile Thr Cys Lys Ala Ser Gln Ser Val Ser Phe AlaGlu Lys Val Thr Ile Thr Cys Lys Ala Ser Gln Ser Val Ser Phe Ala
20 25 3020 25 30
Gly Thr Gly Leu Met His Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala ProGly Thr Gly Leu Met His Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro
35 40 4535 40 45
Lys Leu Leu Ile Tyr Arg Ala Ser Asn Leu Glu Ala Gly Val Pro SerLys Leu Leu Ile Tyr Arg Ala Ser Asn Leu Glu Ala Gly Val Pro Ser
50 55 6050 55 60
Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Ser Phe Thr Ile SerArg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Ser Phe Thr Ile Ser
65 70 75 8065 70 75 80
Ser Leu Glu Pro Glu Asp Val Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln Ser ArgSer Leu Glu Pro Glu Asp Val Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln Ser Arg
85 90 9585 90 95
Glu Tyr Pro Trp Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys ArgGlu Tyr Pro Trp Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys Arg
100 105 110100 105 110
Asn Asp Ala Gln Pro Ala Val Tyr Leu Phe Gln Pro Ser Pro Asp GlnAsn Asp Ala Gln Pro Ala Val Tyr Leu Phe Gln Pro Ser Pro Asp Gln
115 120 125115 120 125
Leu His Thr Gly Ser Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Ser Phe TyrLeu His Thr Gly Ser Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Ser Phe Tyr
130 135 140130 135 140
Pro Lys Asp Ile Asn Val Lys Trp Lys Val Asp Gly Val Ile Gln AspPro Lys Asp Ile Asn Val Lys Trp Lys Val Asp Gly Val Ile Gln Asp
145 150 155 160145 150 155 160
Thr Gly Ile Gln Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Lys Asp Ser Thr TyrThr Gly Ile Gln Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Lys Asp Ser Thr Tyr
165 170 175165 170 175
Ser Leu Ser Ser Thr Leu Thr Met Ser Ser Thr Glu Tyr Leu Ser HisSer Leu Ser Ser Thr Leu Thr Met Ser Ser Thr Glu Tyr Leu Ser His
180 185 190180 185 190
Glu Leu Tyr Ser Cys Glu Ile Thr His Lys Ser Leu Pro Ser Thr LeuGlu Leu Tyr Ser Cys Glu Ile Thr His Lys Ser Leu Pro Ser Thr Leu
195 200 205195 200 205
Ile Lys Ser Phe Gln Arg Ser Glu CysIle Lys Ser Phe Gln Arg Ser Glu Cys
210 215210 215
<210> 69<210> 69
<211> 1365<211> 1365
<212> ДНК<212> DNA
<213> Искусственная последовательность<213> Artificial sequence
<220><220>
<223> Тяжелая цепь ZTS-00008183<223> Heavy Chain ZTS-00008183
<400> 69<400> 69
gaggtgcagc tggtggaatc tggcggcgac ctggtcaagc ctggcggcag cctgagactg 60gaggtgcagc tggtggaatc tggcggcgac ctggtcaagc ctggcggcag cctgagactg 60
agctgtgtgg ccagcggctt caccttcagc aactacggca tgagctgggt ccgacaggcc 120agctgtgtgg ccagcggctt caccttcagc aactacggca tgagctgggt ccgacaggcc 120
cctggcaagg gactgcagtg ggtggccacc atcagctacg gcggcagcta cacctactac 180cctggcaagg gactgcagtg ggtggccacc atcagctacg gcggcagcta cacctactac 180
cccgacaaca tcaagggccg gttcaccatc agccgggaca acgccaagaa caccctgtac 240cccgacaaca tcaagggccg gttcaccatc agccgggaca acgccaagaa caccctgtac 240
ctgcagatga acagcctgcg ggccgaggac accgccatgt actactgcgt gcggggctac 300ctgcagatga acagcctgcg ggccgaggac accgccatgt actactgcgt gcggggctac 300
ggctacgaca caatggacta ctggggccag ggcaccctcg tgaccgtctc gagcgcctca 360ggctacgaca caatggacta ctggggccag ggcaccctcg tgaccgtctc gagcgcctca 360
acaactgctc ctagcgtgtt tcccctggcc cctagctgcg gaagtacctc aggcagcaca 420acaactgctc ctagcgtgtt tcccctggcc cctagctgcg gaagtacctc aggcagcaca 420
gtggccctgg cttgtctggt gtctggatat ttccctgagc cagtgaccgt gagttggaac 480gtggccctgg cttgtctggt gtctggatat ttccctgagc cagtgaccgt gagttggaac 480
agcggctctc tgacctccgg ggtgcacaca tttccatctg tgctgcagtc tagtggcctg 540agcggctctc tgacctccgg ggtgcacaca tttccatctg tgctgcagtc tagtggcctg 540
tactccctgt caagcatggt gactgtgcct tcctctaggt ggccatcaga aactttcacc 600tactccctgt caagcatggt gactgtgcct tcctctaggt ggccatcaga aactttcacc 600
tgcaacgtgg cccatcccgc cagcaagacc aaagtggaca agcccgtgcc taaaagggag 660tgcaacgtgg cccacccgc cagcaagacc aaagtggaca agcccgtgcc taaaagggag 660
aatggaaggg tgccaagacc acctgattgc cctaagtgtc cagctccaga aatgctggga 720aatggaaggg tgccaagacc acctgattgc cctaagtgtc cagctccaga aatgctggga 720
ggaccaagcg tgttcatctt tccacccaag cccaaagaca cactgctgat tgctagaact 780ggaccaagcg tgttcatctt tccacccaag cccaaagaca cactgctgat tgctagaact 780
cccgaggtga cctgcgtggt ggtggacctg gatccagagg accccgaagt gcagatctcc 840cccgaggtga cctgcgtggt ggtggacctg gatccagagg accccgaagt gcagatctcc 840
tggttcgtgg atgggaagca gatgcagaca gccaaaactc agcctcggga ggaacagttt 900tggttcgtgg atgggaagca gatgcagaca gccaaaactc agcctcggga ggaacagttt 900
aacggaacct atagagtggt gtctgtgctg ccaattggac accaggactg gctgaagggc 960aacggaacct atagagtggt gtctgtgctg ccaattggac accaggactg gctgaagggc 960
aaacagttta catgcaaggt gaacaacaag gccctgccta gtccaatcga gaggactatt 1020aaacagttta catgcaaggt gaacaacaag gccctgccta gtccaatcga gaggactatt 1020
tcaaaagcta ggggacaggc tcatcagcct tccgtgtatg tgctgcctcc atcccgggag 1080tcaaaagcta ggggacaggc tcatcagcct tccgtgtatg tgctgcctcc atcccggggag 1080
gaactgtcta agaacacagt gagtctgact tgtctgatca aagatttctt tccccctgac 1140gaactgtcta agaacacagt gagtctgact tgtctgatca aagatttctt tccccctgac 1140
attgatgtgg agtggcagag caatgggcag caggagccag aatccaagta cagaaccaca 1200attgatgtgg agtggcagag caatgggcag caggagccag aatccaagta cagaaccaca 1200
ccaccccagc tggacgaaga tggctcctat ttcctgtaca gtaagctgtc agtggacaaa 1260ccaccccagc tggacgaaga tggctcctat ttcctgtaca gtaagctgtc agtggacaaa 1260
tctaggtggc agcgcgggga tacctttatc tgcgccgtga tgcacgaggc tctgcaccat 1320tctaggtggc agcgcgggga tacctttatc tgcgccgtga tgcacgaggc tctgcaccat 1320
cattacacac aagaaagtct gtcacatagc cccggcaagt agtag 1365cattacacac aagaaagtct gtcacatagc cccggcaagt agtag 1365
<210> 70<210> 70
<211> 453<211> 453
<212> БЕЛОК<212> PROTEIN
<213> Искусственная последовательность<213> Artificial sequence
<220><220>
<223> Тяжелая цепь ZTS-00008183<223> Heavy Chain ZTS-00008183
<400> 70<400> 70
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Asp Leu Val Lys Pro Gly GlyGlu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Asp Leu Val Lys Pro Gly Gly
1 5 10 151 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Val Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Asn TyrSer Leu Arg Leu Ser Cys Val Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Asn Tyr
20 25 3020 25 30
Gly Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Gln Trp ValGly Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Gln Trp Val
35 40 4535 40 45
Ala Thr Ile Ser Tyr Gly Gly Ser Tyr Thr Tyr Tyr Pro Asp Asn IleAla Thr Ile Ser Tyr Gly Gly Ser Tyr Thr Tyr Tyr Pro Asp Asn Ile
50 55 6050 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Thr Leu TyrLys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Thr Leu Tyr
65 70 75 8065 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Met Tyr Tyr CysLeu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Met Tyr Tyr Cys
85 90 9585 90 95
Val Arg Gly Tyr Gly Tyr Asp Thr Met Asp Tyr Trp Gly Gln Gly ThrVal Arg Gly Tyr Gly Tyr Asp Thr Met Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr
100 105 110100 105 110
Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Thr Ala Pro Ser Val Phe ProLeu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Thr Ala Pro Ser Val Phe Pro
115 120 125115 120 125
Leu Ala Pro Ser Cys Gly Ser Thr Ser Gly Ser Thr Val Ala Leu AlaLeu Ala Pro Ser Cys Gly Ser Thr Ser Gly Ser Thr Val Ala Leu Ala
130 135 140130 135 140
Cys Leu Val Ser Gly Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp AsnCys Leu Val Ser Gly Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn
145 150 155 160145 150 155 160
Ser Gly Ser Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ser Val Leu GlnSer Gly Ser Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ser Val Leu Gln
165 170 175165 170 175
Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Met Val Thr Val Pro Ser SerSer Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Met Val Thr Val Pro Ser Ser
180 185 190180 185 190
Arg Trp Pro Ser Glu Thr Phe Thr Cys Asn Val Ala His Pro Ala SerArg Trp Pro Ser Glu Thr Phe Thr Cys Asn Val Ala His Pro Ala Ser
195 200 205195 200 205
Lys Thr Lys Val Asp Lys Pro Val Pro Lys Arg Glu Asn Gly Arg ValLys Thr Lys Val Asp Lys Pro Val Pro Lys Arg Glu Asn Gly Arg Val
210 215 220210 215 220
Pro Arg Pro Pro Asp Cys Pro Lys Cys Pro Ala Pro Glu Met Leu GlyPro Arg Pro Pro Asp Cys Pro Lys Cys Pro Ala Pro Glu Met Leu Gly
225 230 235 240225 230 235 240
Gly Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu LeuGly Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Leu
245 250 255245 250 255
Ile Ala Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Leu Asp ProIle Ala Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Leu Asp Pro
260 265 270260 265 270
Glu Asp Pro Glu Val Gln Ile Ser Trp Phe Val Asp Gly Lys Gln MetGlu Asp Pro Glu Val Gln Ile Ser Trp Phe Val Asp Gly Lys Gln Met
275 280 285275 280 285
Gln Thr Ala Lys Thr Gln Pro Arg Glu Glu Gln Phe Asn Gly Thr TyrGln Thr Ala Lys Thr Gln Pro Arg Glu Glu Gln Phe Asn Gly Thr Tyr
290 295 300290 295 300
Arg Val Val Ser Val Leu Pro Ile Gly His Gln Asp Trp Leu Lys GlyArg Val Val Ser Val Leu Pro Ile Gly His Gln Asp Trp Leu Lys Gly
305 310 315 320305 310 315 320
Lys Gln Phe Thr Cys Lys Val Asn Asn Lys Ala Leu Pro Ser Pro IleLys Gln Phe Thr Cys Lys Val Asn Asn Lys Ala Leu Pro Ser Pro Ile
325 330 335325 330 335
Glu Arg Thr Ile Ser Lys Ala Arg Gly Gln Ala His Gln Pro Ser ValGlu Arg Thr Ile Ser Lys Ala Arg Gly Gln Ala His Gln Pro Ser Val
340 345 350340 345 350
Tyr Val Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Leu Ser Lys Asn Thr Val SerTyr Val Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Leu Ser Lys Asn Thr Val Ser
355 360 365355 360 365
Leu Thr Cys Leu Ile Lys Asp Phe Phe Pro Pro Asp Ile Asp Val GluLeu Thr Cys Leu Ile Lys Asp Phe Phe Pro Pro Asp Ile Asp Val Glu
370 375 380370 375 380
Trp Gln Ser Asn Gly Gln Gln Glu Pro Glu Ser Lys Tyr Arg Thr ThrTrp Gln Ser Asn Gly Gln Gln Glu Pro Glu Ser Lys Tyr Arg Thr Thr
385 390 395 400385 390 395 400
Pro Pro Gln Leu Asp Glu Asp Gly Ser Tyr Phe Leu Tyr Ser Lys LeuPro Pro Gln Leu Asp Glu Asp Gly Ser Tyr Phe Leu Tyr Ser Lys Leu
405 410 415405 410 415
Ser Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Arg Gly Asp Thr Phe Ile Cys AlaSer Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Arg Gly Asp Thr Phe Ile Cys Ala
420 425 430420 425 430
Val Met His Glu Ala Leu His His His Tyr Thr Gln Glu Ser Leu SerVal Met His Glu Ala Leu His His His Tyr Thr Gln Glu Ser Leu Ser
435 440 445435 440 445
His Ser Pro Gly LysHis Ser Pro Gly Lys
450450
<210> 71<210> 71
<211> 5<211> 5
<212> БЕЛОК<212> PROTEIN
<213> Mus musculus<213> Mus musculus
<400> 71<400> 71
Ser Ser Trp Met AsnSer Ser Trp Met Asn
1 51 5
<210> 72<210> 72
<211> 17<211> 17
<212> БЕЛОК<212> PROTEIN
<213> Mus musculus<213> Mus musculus
<400> 72<400> 72
Gln Ile Tyr Pro Gly Asp Gly Asp Thr Asn Tyr Asn Gly Lys Phe LysGln Ile Tyr Pro Gly Asp Gly Asp Thr Asn Tyr Asn Gly Lys Phe Lys
1 5 10 151 5 10 15
GlyGly
<210> 73<210> 73
<211> 10<211> 10
<212> БЕЛОК<212> PROTEIN
<213> Mus musculus<213> Mus musculus
<400> 73<400> 73
Ala Arg His Tyr Asp Gly Ser Thr Asp TyrAla Arg His Tyr Asp Gly Ser Thr Asp Tyr
1 5 101 5 10
<210> 74<210> 74
<211> 11<211> 11
<212> БЕЛОК<212> PROTEIN
<213> Mus musculus<213> Mus musculus
<400> 74<400> 74
Arg Ala Ser Glu Asn Ile Tyr Ser Asn Leu AlaArg Ala Ser Glu Asn Ile Tyr Ser Asn Leu Ala
1 5 101 5 10
<210> 75<210> 75
<211> 7<211> 7
<212> БЕЛОК<212> PROTEIN
<213> Mus musculus<213> Mus musculus
<400> 75<400> 75
Ala Ala Thr Asn Leu Ala AspAla Ala Thr Asn Leu Ala Asp
1 51 5
<210> 76<210> 76
<211> 9<211> 9
<212> БЕЛОК<212> PROTEIN
<213> Mus musculus<213> Mus musculus
<400> 76<400> 76
Gln His Phe Trp Gly Thr Pro Tyr ThrGln His Phe Trp Gly Thr Pro Tyr Thr
1 51 5
<210> 77<210> 77
<211> 117<211> 117
<212> БЕЛОК<212> PROTEIN
<213> Искусственная последовательность<213> Artificial sequence
<220><220>
<223> Канинизированная последовательность – вариабельная область тяжелой<223> Caninized sequence is the variable region of heavy
цепи, сконструированная так, чтобы содержать последовательности изchains designed to contain sequences of
Mus musculus и CanisMus musculus and Canis
<400> 77<400> 77
Glu Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly AlaGlu Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala
1 5 10 151 5 10 15
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Thr Ser Gly Tyr Thr Phe Ile Ser SerSer Val Lys Val Ser Cys Lys Thr Ser Gly Tyr Thr Phe Ile Ser Ser
20 25 3020 25 30
Trp Met Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Ala Gly Leu Asp Trp MetTrp Met Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Ala Gly Leu Asp Trp Met
35 40 4535 40 45
Gly Gln Ile Tyr Pro Gly Asp Gly Asp Thr Asn Tyr Asn Gly Lys PheGly Gln Ile Tyr Pro Gly Asp Gly Asp Thr Asn Tyr Asn Gly Lys Phe
50 55 6050 55 60
Lys Gly Arg Val Thr Leu Thr Ala Asp Thr Ser Thr Ser Thr Ala TyrLys Gly Arg Val Thr Leu Thr Ala Asp Thr Ser Thr Ser Thr Ala Tyr
65 70 75 8065 70 75 80
Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ala Gly Asp Ile Ala Val Tyr Tyr CysMet Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ala Gly Asp Ile Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 9585 90 95
Ala Arg His Tyr Asp Gly Ser Thr Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr LeuAla Arg His Tyr Asp Gly Ser Thr Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu
100 105 110100 105 110
Val Thr Val Ser SerVal Thr Val Ser Ser
115115
<210> 78<210> 78
<211> 351<211> 351
<212> ДНК<212> DNA
<213> Искусственная последовательность<213> Artificial sequence
<220><220>
<223> Канинизированная последовательность – вариабельная область тяжелой<223> Caninized sequence is the variable region of heavy
цепи, сконструированная так, чтобы содержать последовательности изchains designed to contain sequences of
Mus musculus и CanisMus musculus and Canis
<400> 78<400> 78
gaggtgcagc tggtgcagtc cggagctgag gtgaagaagc caggagcttc cgtgaaggtg 60gaggtgcagc tggtgcagtc cggagctgag gtgaagaagc caggagcttc cgtgaaggtg 60
agctgcaaga catctggcta caccttcatc tccagctgga tgaactgggt gagacaggct 120agctgcaaga catctggcta caccttcatc tccagctgga tgaactgggt gagacaggct 120
ccaggagctg gcctggactg gatgggccag atctaccctg gcgacggcga tacaaactat 180ccaggagctg gcctggactg gatgggccag atctaccctg gcgacggcga tacaaactat 180
aatggcaagt ttaagggaag ggtgaccctg acagctgaca ccagcacatc taccgcttac 240aatggcaagt ttaagggaag ggtgaccctg acagctgaca ccagcacatc taccgcttac 240
atggagctgt cttccctgag ggccggcgat atcgccgtgt actattgtgc ccggcactat 300atggagctgt cttccctgag ggccggcgat atcgccgtgt actattgtgc ccggcactat 300
gacggctcca ccgattactg gggccagggc acactggtga ccgtctcgag c 351gacggctcca ccgattactg gggccagggc acactggtga ccgtctcgag c 351
<210> 79<210> 79
<211> 103<211> 103
<212> БЕЛОК<212> PROTEIN
<213> Искусственная последовательность<213> Artificial sequence
<220><220>
<223> Канинизированная последовательность – вариабельная область легкой<223> Caninized sequence – variable region of the lung
цепи, сконструированная так, чтобы содержать последовательности изchains designed to contain sequences of
Mus musculus и CanisMus musculus and Canis
<400> 79<400> 79
Glu Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Ala Ser Leu Ser Leu Ser Gln GlyGlu Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Ala Ser Leu Ser Leu Ser Gln Gly
1 5 10 151 5 10 15
Glu Lys Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Glu Asn Ile Tyr Ser AsnGlu Lys Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Glu Asn Ile Tyr Ser Asn
20 25 3020 25 30
Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Arg Pro Gly Gln Ala Pro Lys Leu Leu IleLeu Ala Trp Tyr Gln Gln Arg Pro Gly Gln Ala Pro Lys Leu Leu Ile
35 40 4535 40 45
Tyr Ala Ala Thr Asn Leu Ala Asp Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser GlyTyr Ala Ala Thr Asn Leu Ala Asp Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50 55 6050 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Ser Leu Thr Ile Ser Ser Leu Glu ProSer Gly Ser Gly Thr Asp Phe Ser Leu Thr Ile Ser Ser Leu Glu Pro
65 70 75 8065 70 75 80
Glu Asp Val Ala Val Tyr Tyr Cys Gln His Phe Trp Gly Thr Pro TyrGlu Asp Val Ala Val Tyr Tyr Cys Gln His Phe Trp Gly Thr Pro Tyr
85 90 9585 90 95
Thr Phe Gly Gln Gly Thr LysThr Phe Gly Gln Gly Thr Lys
100100
<210> 80<210> 80
<211> 306<211> 306
<212> ДНК<212> DNA
<213> Искусственная последовательность<213> Artificial sequence
<220><220>
<223> Канинизированная последовательность – вариабельная область легкой<223> Caninized sequence – variable region of the lung
цепи, сконструированная так, чтобы содержать последовательности изchains designed to contain sequences of
Mus musculus и CanisMus musculus and Canis
<400> 80<400> 80
gagatcgtga tgacccagtc ccctgcttct ctgtccctga gccagggcga gaaggtgacc 60gagatcgtga tgacccagtc ccctgcttct ctgtccctga gccagggcga gaaggtgacc 60
atcacatgca gggcctctga gaacatctac tccaatctgg cttggtatca gcagcggccc 120atcacatgca gggcctctga gaacatctac tccaatctgg cttggtatca gcagcggccc 120
ggacaggctc ctaagctgct gatctacgcc gctacaaacc tggctgacgg cgtgccaagc 180ggacaggctc ctaagctgct gatctacgcc gctacaaacc tggctgacgg cgtgccaagc 180
aggttctctg gatccggaag cggcaccgac ttttctctga caatctccag cctggagcca 240aggttctctg gatccggaag cggcaccgac ttttctctga caatctccag cctggagcca 240
gaggatgtgg ccgtgtacta ttgtcagcac ttctggggca ccccctatac atttggccag 300gaggatgtgg ccgtgtacta ttgtcagcac ttctggggca ccccctatac atttggccag 300
ggtacc 306ggtacc 306
<210> 81<210> 81
<211> 7<211> 7
<212> БЕЛОК<212> PROTEIN
<213> Homo sapiens<213> Homo sapiens
<400> 81<400> 81
Phe Ser Ser Tyr Gly Met HisPhe Ser Ser Tyr Gly Met His
1 51 5
<210> 82<210> 82
<211> 11<211> 11
<212> БЕЛОК<212> PROTEIN
<213> Homo sapiens<213> Homo sapiens
<400> 82<400> 82
Val Ile Ser Tyr Asp Gly Ser Ile Lys Tyr TyrVal Ile Ser Tyr Asp Gly Ser Ile Lys Tyr Tyr
1 5 101 5 10
<210> 83<210> 83
<211> 14<211> 14
<212> БЕЛОК<212> PROTEIN
<213> Homo sapiens<213> Homo sapiens
<400> 83<400> 83
Thr Gly Glu Tyr Ser Gly Tyr Asp Thr Asp Pro Gln Tyr SerThr Gly Glu Tyr Ser Gly Tyr Asp Thr Asp Pro Gln Tyr Ser
1 5 101 5 10
<210> 84<210> 84
<211> 11<211> 11
<212> БЕЛОК<212> PROTEIN
<213> Homo sapiens<213> Homo sapiens
<400> 84<400> 84
Arg Ala Ser Gln Gly Ile Gly Asp Asp Leu GlyArg Ala Ser Gln Gly Ile Gly Asp Asp Leu Gly
1 5 101 5 10
<210> 85<210> 85
<211> 7<211> 7
<212> БЕЛОК<212> PROTEIN
<213> Homo sapiens<213> Homo sapiens
<400> 85<400> 85
Gly Thr Ser Thr Leu Gln SerGly Thr Ser Thr Leu Gln Ser
1 51 5
<210> 86<210> 86
<211> 9<211> 9
<212> БЕЛОК<212> PROTEIN
<213> Homo sapiens<213> Homo sapiens
<400> 86<400> 86
Leu Gln Asp Ser Asn Tyr Pro Leu ThrLeu Gln Asp Ser Asn Tyr Pro Leu Thr
1 51 5
<210> 87<210> 87
<211> 123<211> 123
<212> БЕЛОК<212> PROTEIN
<213> Искусственная последовательность<213> Artificial sequence
<220><220>
<223> Канинизированная последовательность – вариабельная область тяжелой<223> Caninized sequence is the variable region of heavy
цепи, сконструированная так, чтобы содержать последовательности изchains designed to contain sequences of
Homo sapiens и CanisHomo sapiens and Canis
<400> 87<400> 87
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Asp Leu Val Lys Pro Gly GlyGlu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Asp Leu Val Lys Pro Gly Gly
1 5 10 151 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Val Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser TyrSer Leu Arg Leu Ser Cys Val Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr
20 25 3020 25 30
Gly Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Gln Trp ValGly Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Gln Trp Val
35 40 4535 40 45
Ala Val Ile Ser Tyr Asp Gly Ser Ile Lys Tyr Tyr Ala Asp Ala ValAla Val Ile Ser Tyr Asp Gly Ser Ile Lys Tyr Tyr Ala Asp Ala Val
50 55 6050 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Thr Leu TyrLys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Thr Leu Tyr
65 70 75 8065 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr CysLeu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 9585 90 95
Ala Arg Thr Gly Glu Tyr Ser Gly Tyr Asp Thr Asp Pro Gln Tyr SerAla Arg Thr Gly Glu Tyr Ser Gly Tyr Asp Thr Asp Pro Gln Tyr Ser
100 105 110100 105 110
Trp Gly Gln Gly Thr Thr Val Thr Val Ser SerTrp Gly Gln Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser
115 120115 120
<210> 88<210> 88
<211> 369<211> 369
<212> ДНК<212> DNA
<213> Искусственная последовательность<213> Artificial sequence
<220><220>
<223> Канинизированная последовательность – вариабельная область тяжелой<223> Caninized sequence is the variable region of heavy
цепи, сконструированная так, чтобы содержать последовательности изchains designed to contain sequences of
Homo sapiens и CanisHomo sapiens and Canis
<400> 88<400> 88
gaagtgcagc tggtggaatc tggcggcgac ctcgtgaagc ctggcggctc tctgagactg 60gaagtgcagc tggtggaatc tggcggcgac ctcgtgaagc ctggcggctc tctgagactg 60
tcctgtgtgg cctccggctt caccttctcc agctacggca tgcactgggt gcgacaggcc 120tcctgtgtgg cctccggctt caccttctcc agctacggca tgcactgggt gcgacaggcc 120
cctggaaaag gcctgcagtg ggtggccgtg atctcctacg acggctccat caagtactac 180cctggaaaag gcctgcagtg ggtggccgtg atctcctacg acggctccat caagtactac 180
gccgacgccg tgaagggccg gttcaccatc agcagagaca acgccaagaa caccctgtac 240gccgacgccg tgaagggccg gttcaccatc agcagagaca acgccaagaa caccctgtac 240
ctgcagatga actccctgcg ggccgaggac accgccgtgt actactgtgc tagaaccggc 300ctgcagatga actccctgcg ggccgaggac accgccgtgt actactgtgc tagaaccggc 300
gagtactccg gctacgatac cgacccccag tactcttggg gccagggcac cacagtgacc 360gagtactccg gctacgatac cgacccccag tactcttggg gccagggcac cacagtgacc 360
gtctcgagc 369gtctcgagc 369
<210> 89<210> 89
<211> 103<211> 103
<212> БЕЛОК<212> PROTEIN
<213> Искусственная последовательность<213> Artificial sequence
<220><220>
<223> Канинизированная последовательность – вариабельная область легкой<223> Caninized sequence – variable region of the lung
цепи, сконструированная так, чтобы содержать последовательности изchains designed to contain sequences of
Homo sapiens и CanisHomo sapiens and Canis
<400> 89<400> 89
Glu Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Ala Ser Leu Ser Leu Ser Gln GluGlu Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Ala Ser Leu Ser Leu Ser Gln Glu
1 5 10 151 5 10 15
Glu Lys Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Gly Ile Gly Asp AspGlu Lys Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Gly Ile Gly Asp Asp
20 25 3020 25 30
Leu Gly Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Lys Leu Leu IleLeu Gly Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Lys Leu Leu Ile
35 40 4535 40 45
Tyr Gly Thr Ser Thr Leu Gln Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser GlyTyr Gly Thr Ser Thr Leu Gln Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50 55 6050 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Ser Phe Thr Ile Ser Ser Leu Glu ProSer Gly Ser Gly Thr Asp Phe Ser Phe Thr Ile Ser Ser Leu Glu Pro
65 70 75 8065 70 75 80
Glu Asp Val Ala Val Tyr Tyr Cys Leu Gln Asp Ser Asn Tyr Pro LeuGlu Asp Val Ala Val Tyr Tyr Cys Leu Gln Asp Ser Asn Tyr Pro Leu
85 90 9585 90 95
Thr Phe Gly Ala Gly Thr LysThr Phe Gly Ala Gly Thr Lys
100100
<210> 90<210> 90
<211> 309<211> 309
<212> ДНК<212> DNA
<213> Искусственная последовательность<213> Artificial sequence
<220><220>
<223> Канинизированная последовательность – вариабельная область легкой<223> Caninized sequence – variable region of the lung
цепи, сконструированная так, чтобы содержать последовательности изchains designed to contain sequences of
Homo sapiens и CanisHomo sapiens and Canis
<400> 90<400> 90
gaaattgtga tgacccagag cccggcgagc ctgagcctga gccaggaaga aaaagtgacc 60gaaattgtga tgacccagag cccggcgagc ctgagcctga gccaggaaga aaaagtgacc 60
attacctgcc gcgcgagcca gggcattggc gatgatctgg gctggtatca gcagaaaccg 120attacctgcc gcgcgagcca gggcattggc gatgatctgg gctggtatca gcagaaaccg 120
ggccaggcgc cgaaactgct gatttatggc accagcaccc tgcagagcgg cgtgccgagc 180ggccaggcgc cgaaactgct gatttatggc accagcaccc tgcagagcgg cgtgccgagc 180
cgctttagcg gcagcggcag cggcaccgat tttagcttta ccattagcag cctggaaccg 240cgctttagcg gcagcggcag cggcaccgat tttagcttta ccattagcag cctggaaccg 240
gaagatgtgg cggtgtatta ttgcctgcag gatagcaact atccgctgac ctttggcgcg 300gaagatgtgg cggtgtatta ttgcctgcag gatagcaact atccgctgac ctttggcgcg 300
ggcaccaaa 309ggcaccaaa 309
<210> 91<210> 91
<211> 7<211> 7
<212> БЕЛОК<212> PROTEIN
<213> Mus musculus<213> Mus musculus
<400> 91<400> 91
Gly Tyr Ile Phe Ile Thr TyrGly Tyr Ile Phe Ile Thr Tyr
1 51 5
<210> 92<210> 92
<211> 6<211> 6
<212> БЕЛОК<212> PROTEIN
<213> Mus musculus<213> Mus musculus
<400> 92<400> 92
Phe Pro Ala Ser Gly SerPhe Pro Ala Ser Gly Ser
1 51 5
<210> 93<210> 93
<211> 12<211> 12
<212> БЕЛОК<212> PROTEIN
<213> Mus musculus<213> Mus musculus
<400> 93<400> 93
Gly Asp Gly Asn Tyr Ala Leu Asp Ala Met Asp TyrGly Asp Gly Asn Tyr Ala Leu Asp Ala Met Asp Tyr
1 5 101 5 10
<210> 94<210> 94
<211> 15<211> 15
<212> БЕЛОК<212> PROTEIN
<213> Mus musculus<213> Mus musculus
<400> 94<400> 94
Arg Ala Ser Glu Ser Val Asp Ser Tyr Gly Asn Ser Phe Met HisArg Ala Ser Glu Ser Val Asp Ser Tyr Gly Asn Ser Phe Met His
1 5 10 151 5 10 15
<210> 95<210> 95
<211> 7<211> 7
<212> БЕЛОК<212> PROTEIN
<213> Mus musculus<213> Mus musculus
<400> 95<400> 95
Leu Ala Ser Asn Leu Glu SerLeu Ala Ser Asn Leu Glu Ser
1 51 5
<210> 96<210> 96
<211> 9<211> 9
<212> БЕЛОК<212> PROTEIN
<213> Mus musculus<213> Mus musculus
<400> 96<400> 96
Gln Gln Asn Asn Glu Asp Pro Leu ThrGln Gln Asn Asn Glu Asp Pro Leu Thr
1 51 5
<210> 97<210> 97
<211> 118<211> 118
<212> БЕЛОК<212> PROTEIN
<213> Искусственная последовательность<213> Artificial sequence
<220><220>
<223> Канинизированная последовательность – вариабельная область тяжелой<223> Caninized sequence is the variable region of heavy
цепи, сконструированная так, чтобы содержать последовательности изchains designed to contain sequences of
Mus musculus и CanisMus musculus and Canis
<400> 97<400> 97
Glu Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly AlaGlu Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala
1 5 10 151 5 10 15
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Thr Ser Gly Tyr Thr Phe Ile Thr TyrSer Val Lys Val Ser Cys Lys Thr Ser Gly Tyr Thr Phe Ile Thr Tyr
20 25 3020 25 30
Trp Met Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Ala Gly Leu Asp Trp MetTrp Met Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Ala Gly Leu Asp Trp Met
35 40 4535 40 45
Gly Gln Ile Phe Pro Ala Ser Gly Ser Thr Asn Tyr Asn Glu Met PheGly Gln Ile Phe Pro Ala Ser Gly Ser Thr Asn Tyr Asn Glu Met Phe
50 55 6050 55 60
Glu Gly Arg Val Thr Leu Thr Ala Asp Thr Ser Thr Ser Thr Ala TyrGlu Gly Arg Val Thr Leu Thr Ala Asp Thr Ser Thr Ser Thr Ala Tyr
65 70 75 8065 70 75 80
Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ala Gly Asp Ile Ala Val Tyr Tyr CysMet Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ala Gly Asp Ile Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 9585 90 95
Ala Arg Gly Asp Gly Asn Tyr Ala Leu Asp Ala Met Asp Tyr Trp GlyAla Arg Gly Asp Gly Asn Tyr Ala Leu Asp Ala Met Asp Tyr Trp Gly
100 105 110100 105 110
Gln Gly Thr Leu Val ThrGln Gly Thr Leu Val Thr
115115
<210> 98<210> 98
<211> 354<211> 354
<212> ДНК<212> DNA
<213> Искусственная последовательность<213> Artificial sequence
<220><220>
<223> Канинизированная последовательность – вариабельная область тяжелой<223> Caninized sequence is the variable region of heavy
цепи, сконструированная так, чтобы содержать последовательности изchains designed to contain sequences of
Mus musculus и CanisMus musculus and Canis
<400> 98<400> 98
gaggtgcagt tggttcagtc cggcgccgag gtgaagaagc ccggggcctc tgtaaaggtc 60gaggtgcagt tggttcagtc cggcgccgag gtgaagaagc ccggggcctc tgtaaaggtc 60
agctgcaaga ctagcggata tacatttatc acatactgga tgaactgggt ccgacaagcc 120agctgcaaga ctagcggata tacatttatc acatactgga tgaactgggt ccgacaagcc 120
cctggtgccg gcctggattg gatgggccag atcttcccag caagcggatc taccaattac 180cctggtgccg gcctggattg gatgggccag atcttcccag caagcggatc taccaattac 180
aatgagatgt tcgagggtag ggtgaccctc acagctgata ccagtacttc aactgcatac 240aatgagatgt tcgagggtag ggtgaccctc acagctgata ccagtacttc aactgcatac 240
atggaactga gttccctgag agcaggcgac atcgcagttt actattgtgc ccgaggcgac 300atggaactga gttccctgag agcaggcgac atcgcagttt actattgtgc ccgaggcgac 300
ggcaattatg cactggatgc tatggactac tggggtcagg gaaccctggt gaca 354ggcaattatg cactggatgc tatggactac tggggtcagg gaaccctggt gaca 354
<210> 99<210> 99
<211> 104<211> 104
<212> БЕЛОК<212> PROTEIN
<213> Искусственная последовательность<213> Artificial sequence
<220><220>
<223> Канинизированная последовательность – вариабельная область легкой<223> Caninized sequence – variable region of the lung
цепи, сконструированная так, чтобы содержать последовательности изchains designed to contain sequences of
Mus musculus и CanisMus musculus and Canis
<400> 99<400> 99
Asp Ile Val Met Thr Gln Thr Pro Pro Ser Leu Ser Val Ser Pro ArgAsp Ile Val Met Thr Gln Thr Pro Pro Ser Leu Ser Val Ser Pro Arg
1 5 10 151 5 10 15
Glu Thr Ala Ser Ile Ser Cys Arg Ala Ser Glu Ser Val Asp Ser TyrGlu Thr Ala Ser Ile Ser Cys Arg Ala Ser Glu Ser Val Asp Ser Tyr
20 25 3020 25 30
Gly Asn Ser Phe Met His Trp Tyr Leu Gln Lys Pro Gly Gln Ser ProGly Asn Ser Phe Met His Trp Tyr Leu Gln Lys Pro Gly Gln Ser Pro
35 40 4535 40 45
Gln Leu Leu Ile Tyr Leu Ala Ser Asn Leu Glu Ser Gly Val Ser AspGln Leu Leu Ile Tyr Leu Ala Ser Asn Leu Glu Ser Gly Val Ser Asp
50 55 6050 55 60
Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Arg Ile SerArg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Arg Ile Ser
65 70 75 8065 70 75 80
Arg Val Glu Ala Asn Asp Thr Gly Val Tyr Tyr Cys Gln Gln Asn AsnArg Val Glu Ala Asn Asp Thr Gly Val Tyr Tyr Cys Gln Gln Asn Asn
85 90 9585 90 95
Glu Asp Pro Leu Thr Phe Gly GlnGlu Asp Pro Leu Thr Phe Gly Gln
100100
<210> 100<210> 100
<211> 312<211> 312
<212> ДНК<212> DNA
<213> Искусственная последовательность<213> Artificial sequence
<220><220>
<223> Канинизированная последовательность – вариабельная область легкой<223> Caninized sequence – variable region of the lung
цепи, сконструированная так, чтобы содержать последовательности изchains designed to contain sequences of
Mus musculus и CanisMus musculus and Canis
<400> 100<400> 100
gatattgtga tgacacagac tccaccctcc ctttctgtca gccctcggga gaccgcctcc 60gatattgtga tgacacagac tccaccctcc ctttctgtca gccctcggga gaccgcctcc 60
attagctgtc gcgccagtga gtccgtcgat tcctacggaa atagcttcat gcactggtat 120attagctgtc gcgccagtga gtccgtcgat tcctacggaa atagcttcat gcactggtat 120
ctgcagaaac caggtcagtc tcctcaattg ctgatctacc tggcttctaa cctggaaagc 180ctgcagaaac caggtcagtc tcctcaattg ctgatctacc tggcttctaa cctggaaagc 180
ggtgtgtcag ataggttttc cggaagtggt agcggaactg actttaccct gcgtatttcc 240ggtgtgtcag ataggttttc cggaagtggt agcggaactg actttaccct gcgtatttcc 240
cgagtggaag ccaatgacac tggtgtttac tactgtcagc agaataacga agaccccctg 300cgagtggaag ccaatgacac tggtgtttac tactgtcagc agaataacga agaccccctg 300
acctttggcc ag 312acctttggcc ag 312
<210> 101<210> 101
<211> 5<211> 5
<212> БЕЛОК<212> PROTEIN
<213> Homo sapiens<213> Homo sapiens
<400> 101<400> 101
Ser Asn Val Ile SerSer Asn Val Ile Ser
1 51 5
<210> 102<210> 102
<211> 17<211> 17
<212> БЕЛОК<212> PROTEIN
<213> Homo sapiens<213> Homo sapiens
<400> 102<400> 102
Gly Val Ile Pro Ile Val Asp Ile Ala Asn Tyr Ala Gln Arg Phe LysGly Val Ile Pro Ile Val Asp Ile Ala Asn Tyr Ala Gln Arg Phe Lys
1 5 10 151 5 10 15
GlyGly
<210> 103<210> 103
<211> 13<211> 13
<212> БЕЛОК<212> PROTEIN
<213> Homo sapiens<213> Homo sapiens
<400> 103<400> 103
Ala Ser Thr Leu Gly Leu Val Leu Asp Ala Met Asp TyrAla Ser Thr Leu Gly Leu Val Leu Asp Ala Met Asp Tyr
1 5 101 5 10
<210> 104<210> 104
<211> 12<211> 12
<212> БЕЛОК<212> PROTEIN
<213> Homo sapiens<213> Homo sapiens
<400> 104<400> 104
Arg Ala Ser Gln Ser Leu Gly Ser Ser Tyr Leu AlaArg Ala Ser Gln Ser Leu Gly Ser Ser Tyr Leu Ala
1 5 101 5 10
<210> 105<210> 105
<211> 7<211> 7
<212> БЕЛОК<212> PROTEIN
<213> Homo sapiens<213> Homo sapiens
<400> 105<400> 105
Gly Ala Ser Ser Arg Ala ProGly Ala Ser Ser Arg Ala Pro
1 51 5
<210> 106<210> 106
<211> 9<211> 9
<212> БЕЛОК<212> PROTEIN
<213> Homo sapiens<213> Homo sapiens
<400> 106<400> 106
Gln Gln Tyr Ala Asp Ser Pro Ile ThrGln Gln Tyr Ala Asp Ser Pro Ile Thr
1 51 5
<210> 107<210> 107
<211> 120<211> 120
<212> БЕЛОК<212> PROTEIN
<213> Искусственная последовательность<213> Artificial sequence
<220><220>
<223> Канинизированная последовательность – вариабельная область тяжелой<223> Caninized sequence is the variable region of heavy
цепи, сконструированная так, чтобы содержать последовательности изchains designed to contain sequences of
Homo sapiens и CanisHomo sapiens and Canis
<400> 107<400> 107
Glu Val Gln Leu Val Gln Ser Ala Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly AlaGlu Val Gln Leu Val Gln Ser Ala Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala
1 5 10 151 5 10 15
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Thr Ser Gly Tyr Ile Phe Ile Ser AsnSer Val Lys Val Ser Cys Lys Thr Ser Gly Tyr Ile Phe Ile Ser Asn
20 25 3020 25 30
Val Ile Ser Trp Val Gln Gln Ala Pro Gly Ala Gly Leu Glu Trp MetVal Ile Ser Trp Val Gln Gln Ala Pro Gly Ala Gly Leu Glu Trp Met
35 40 4535 40 45
Gly Gly Val Ile Pro Ile Val Asp Ile Ala Asn Tyr Ala Gln Arg PheGly Gly Val Ile Pro Ile Val Asp Ile Ala Asn Tyr Ala Gln Arg Phe
50 55 6050 55 60
Lys Gly Arg Val Thr Leu Thr Ala Asp Thr Ser Thr Asn Thr Val TyrLys Gly Arg Val Thr Leu Thr Ala Asp Thr Ser Thr Asn Thr Val Tyr
65 70 75 8065 70 75 80
Met Glu Leu Ser Asn Leu Arg Thr Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr CysMet Glu Leu Ser Asn Leu Arg Thr Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 9585 90 95
Ala Ser Thr Leu Gly Leu Val Leu Asp Ala Met Asp Tyr Trp Gly GlnAla Ser Thr Leu Gly Leu Val Leu Asp Ala Met Asp Tyr Trp Gly Gln
100 105 110100 105 110
Gly Thr Leu Val Thr Val Ser SerGly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
115 120115 120
<210> 108<210> 108
<211> 359<211> 359
<212> ДНК<212> DNA
<213> Искусственная последовательность<213> Artificial sequence
<220><220>
<223> Канинизированная последовательность – вариабельная область тяжелой<223> Caninized sequence is the variable region of heavy
цепи, сконструированная так, чтобы содержать последовательности изchains designed to contain sequences of
Homo sapiens и CanisHomo sapiens and Canis
<400> 108<400> 108
gaggtgcagc tggtgcagag cgccgctgag gtgaagaagc caggcgcctc cgtgaaggtg 60gaggtgcagc tggtgcagag cgccgctgag gtgaagaagc caggcgcctc cgtgaaggtg 60
agctgcaaga catctggcta catcttcatc tccaacgtga tcagctgggt gcagcaggct 120agctgcaaga catctggcta catcttcatc tccaacgtga tcagctgggt gcagcaggct 120
ccaggagctg gactggagtg gatgggcggc gtgatcccta tcgtggacat cgccaattac 180ccaggagctg gactggagtg gatgggcggc gtgatcccta tcgtggacat cgccaattac 180
gctcagaggt ttaagggccg ggtgaccctg acagccgata cctctacaaa caccgtgtat 240gctcagaggt ttaagggccg ggtgaccctg acagccgata cctctacaaa caccgtgtat 240
atggagctgt ccaatctgag gacagaggac accgccgtgt actattgtgc ttctaccctg 300atggagctgt ccaatctgag gacagaggac accgccgtgt actattgtgc ttctaccctg 300
ggcctggtgc tggacgctat ggattattgg ggccagggca cactggtgac cgtctcgag 359ggcctggtgc tggacgctat ggattattgg ggccagggca cactggtgac cgtctcgag 359
<210> 109<210> 109
<211> 108<211> 108
<212> БЕЛОК<212> PROTEIN
<213> Искусственная последовательность<213> Artificial sequence
<220><220>
<223> Канинизированная последовательность – вариабельная область легкой<223> Caninized sequence – variable region of the lung
цепи, сконструированная так, чтобы содержать последовательности изchains designed to contain sequences of
Homo sapiens и CanisHomo sapiens and Canis
<400> 109<400> 109
Glu Thr Val Leu Thr Gln Ser Pro Gly Thr Leu Ser Leu Ser Pro GlyGlu Thr Val Leu Thr Gln Ser Pro Gly Thr Leu Ser Leu Ser Pro Gly
1 5 10 151 5 10 15
Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Arg Ala Ser Gln Ser Leu Gly Ser SerGlu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Arg Ala Ser Gln Ser Leu Gly Ser Ser
20 25 3020 25 30
Tyr Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Arg Leu LeuTyr Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Arg Leu Leu
35 40 4535 40 45
Ile Tyr Gly Ala Ser Ser Arg Ala Pro Gly Val Pro Ala Arg Phe SerIle Tyr Gly Ala Ser Ser Arg Ala Pro Gly Val Pro Ala Arg Phe Ser
50 55 6050 55 60
Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu GluGly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Glu
65 70 75 8065 70 75 80
Pro Glu Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln Tyr Ala Asp Ser ProPro Glu Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln Tyr Ala Asp Ser Pro
85 90 9585 90 95
Ile Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile LysIle Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys
100 105100 105
<210> 110<210> 110
<211> 309<211> 309
<212> ДНК<212> DNA
<213> Искусственная последовательность<213> Artificial sequence
<220><220>
<223> Канинизированная последовательность – вариабельная область легкой<223> Caninized sequence – variable region of the lung
цепи, сконструированная так, чтобы содержать последовательности изchains designed to contain sequences of
Homo sapiens и CanisHomo sapiens and Canis
<400> 110<400> 110
gagaccgtgc tgacacagag ccctggcacc ctgtccctga gcccaggaga gagggccaca 60gagaccgtgc tgacacagag ccctggcacc ctgtccctga gcccaggaga gagggccaca 60
ctgtcttgcc gggcttctca gtccctgggc tccagctacc tggcctggta tcagcagaag 120ctgtcttgcc gggcttctca gtccctgggc tccagctacc tggcctggta tcagcagaag 120
ccaggccagg ctcccaggct gctgatctac ggagcctctt ccagagctcc aggcgtgcct 180ccaggccagg ctcccaggct gctgatctac ggagcctctt ccagagctcc aggcgtgcct 180
gctcgcttca gcggatctgg ctccggcacc gactttaccc tgacaatcag ctctctggag 240gctcgcttca gcggatctgg ctccggcacc gactttaccc tgacaatcag ctctctggag 240
cccgaggact tcgccgtgta ctattgtcag cagtatgctg attcccctat cacatttggc 300cccgaggact tcgccgtgta ctattgtcag cagtatgctg attcccctat cacatttggc 300
cagggtacc 309cagggtacc 309
<210> 111<210> 111
<211> 8<211> 8
<212> БЕЛОК<212> PROTEIN
<213> Homo sapiens<213> Homo sapiens
<400> 111<400> 111
Gly Tyr Thr Phe Ser Ser Asn ValGly Tyr Thr Phe Ser Ser Asn Val
1 51 5
<210> 112<210> 112
<211> 8<211> 8
<212> БЕЛОК<212> PROTEIN
<213> Homo sapiens<213> Homo sapiens
<400> 112<400> 112
Val Ile Pro Ile Val Asp Ile AlaVal Ile Pro Ile Val Asp Ile Ala
1 51 5
<210> 113<210> 113
<211> 10<211> 10
<212> БЕЛОК<212> PROTEIN
<213> Homo sapiens<213> Homo sapiens
<400> 113<400> 113
Leu Gly Leu Val Leu Asp Ala Met Asp TyrLeu Gly Leu Val Leu Asp Ala Met Asp Tyr
1 5 101 5 10
<210> 114<210> 114
<211> 12<211> 12
<212> БЕЛОК<212> PROTEIN
<213> Homo sapiens<213> Homo sapiens
<400> 114<400> 114
Arg Ala Ser Gln Ser Leu Gly Ser Ser Tyr Leu AlaArg Ala Ser Gln Ser Leu Gly Ser Ser Tyr Leu Ala
1 5 101 5 10
<210> 115<210> 115
<211> 7<211> 7
<212> БЕЛОК<212> PROTEIN
<213> Homo sapiens<213> Homo sapiens
<400> 115<400> 115
Gly Ala Ser Ser Arg Ala ProGly Ala Ser Ser Arg Ala Pro
1 51 5
<210> 116<210> 116
<211> 9<211> 9
<212> БЕЛОК<212> PROTEIN
<213> Homo sapiens<213> Homo sapiens
<400> 116<400> 116
Gln Gln Tyr Ala Asp Ser Pro Ile ThrGln Gln Tyr Ala Asp Ser Pro Ile Thr
1 51 5
<210> 117<210> 117
<211> 120<211> 120
<212> БЕЛОК<212> PROTEIN
<213> Искусственная последовательность<213> Artificial sequence
<220><220>
<223> Канинизированная последовательность – вариабельная область тяжелой<223> Caninized sequence is the variable region of heavy
цепи, сконструированная так, чтобы содержать последовательности изchains designed to contain sequences of
Homo sapiens и CanisHomo sapiens and Canis
<400> 117<400> 117
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Asp Leu Val Lys Pro Ala GlyGlu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Asp Leu Val Lys Pro Ala Gly
1 5 10 151 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Val Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Ser Ser AsnSer Leu Arg Leu Ser Cys Val Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Ser Ser Asn
20 25 3020 25 30
Val Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Gln Trp ValVal Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Gln Trp Val
35 40 4535 40 45
Gly Tyr Val Ile Pro Ile Val Asp Ile Ala Asn Tyr Ala Asp Ala ValGly Tyr Val Ile Pro Ile Val Asp Ile Ala Asn Tyr Ala Asp Ala Val
50 55 6050 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Thr Leu TyrLys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Thr Leu Tyr
65 70 75 8065 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Val Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr CysLeu Gln Met Asn Ser Leu Arg Val Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 9585 90 95
Thr Arg Thr Leu Gly Leu Val Leu Asp Ala Met Asp Tyr Trp Gly GlnThr Arg Thr Leu Gly Leu Val Leu Asp Ala Met Asp Tyr Trp Gly Gln
100 105 110100 105 110
Gly Thr Leu Val Thr Val Ser SerGly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
115 120115 120
<210> 118<210> 118
<211> 359<211> 359
<212> ДНК<212> DNA
<213> Искусственная последовательность<213> Artificial sequence
<220><220>
<223> Канинизированная последовательность – вариабельная область тяжелой<223> Caninized sequence is the variable region of heavy
цепи, сконструированная так, чтобы содержать последовательности изchains designed to contain sequences of
Homo sapiens и CanisHomo sapiens and Canis
<400> 118<400> 118
gaggtgcagc tggtggagag cggaggcgac ctggtgaagc cagctggctc tctgaggctg 60gaggtgcagc tggtggagag cggaggcgac ctggtgaagc cagctggctc tctgaggctg 60
tcctgcgtgg ctagcggcta caccttctcc agcaacgtga tgtcttgggt gagacaggct 120tcctgcgtgg ctagcggcta caccttctcc agcaacgtga tgtcttgggt gagacaggct 120
ccaggcaagg gactgcagtg ggtgggctac gtgatcccta tcgtggacat cgccaactat 180ccaggcaagg gactgcagtg ggtgggctac gtgatcccta tcgtggacat cgccaactat 180
gccgatgctg tgaagggcag gtttaccatc tctcgggaca acgctaagaa tacactgtac 240gccgatgctg tgaagggcag gtttaccatc tctcgggaca acgctaagaa tacactgtac 240
ctgcagatga actccctgag agtggaggat acagccgtgt actattgtac ccgcacactg 300ctgcagatga actccctgag agtggaggat acagccgtgt actattgtac ccgcacactg 300
ggcctggtgc tggacgctat ggattattgg ggccagggca ccctggtgac agtctcgag 359ggcctggtgc tggacgctat ggattattgg ggccagggca ccctggtgac agtctcgag 359
<210> 119<210> 119
<211> 108<211> 108
<212> БЕЛОК<212> PROTEIN
<213> Искусственная последовательность<213> Artificial sequence
<220><220>
<223> Канинизированная последовательность – вариабельная область легкой<223> Caninized sequence – variable region of the lung
цепи, сконструированная так, чтобы содержать последовательности изchains designed to contain sequences of
Homo sapiens и CanisHomo sapiens and Canis
<400> 119<400> 119
Glu Thr Val Leu Thr Gln Ser Pro Gly Thr Leu Ser Leu Ser Pro GlyGlu Thr Val Leu Thr Gln Ser Pro Gly Thr Leu Ser Leu Ser Pro Gly
1 5 10 151 5 10 15
Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Arg Ala Ser Gln Ser Leu Gly Ser SerGlu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Arg Ala Ser Gln Ser Leu Gly Ser Ser
20 25 3020 25 30
Tyr Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Arg Leu LeuTyr Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Arg Leu Leu
35 40 4535 40 45
Ile Tyr Gly Ala Ser Ser Arg Ala Pro Gly Val Pro Ala Arg Phe SerIle Tyr Gly Ala Ser Ser Arg Ala Pro Gly Val Pro Ala Arg Phe Ser
50 55 6050 55 60
Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu GluGly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Glu
65 70 75 8065 70 75 80
Pro Glu Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln Tyr Ala Asp Ser ProPro Glu Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln Tyr Ala Asp Ser Pro
85 90 9585 90 95
Ile Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile LysIle Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys
100 105100 105
<210> 120<210> 120
<211> 309<211> 309
<212> ДНК<212> DNA
<213> Искусственная последовательность<213> Artificial sequence
<220><220>
<223> Канинизированная последовательность – вариабельная область легкой<223> Caninized sequence – variable region of the lung
цепи, сконструированная так, чтобы содержать последовательности изchains designed to contain sequences of
Homo sapiens и CanisHomo sapiens and Canis
<400> 120<400> 120
gagaccgtgc tgacacagag ccctggcacc ctgtccctga gcccaggaga gagggccaca 60gagaccgtgc tgacacagag ccctggcacc ctgtccctga gcccaggaga gagggccaca 60
ctgtcttgcc gggcttctca gtccctgggc tccagctacc tggcctggta tcagcagaag 120ctgtcttgcc gggcttctca gtccctgggc tccagctacc tggcctggta tcagcagaag 120
ccaggccagg ctcccaggct gctgatctac ggagcctctt ccagagctcc aggcgtgcct 180ccaggccagg ctcccaggct gctgatctac ggagcctctt ccagagctcc aggcgtgcct 180
gctcgcttca gcggatctgg ctccggcacc gactttaccc tgacaatcag ctctctggag 240gctcgcttca gcggatctgg ctccggcacc gactttaccc tgacaatcag ctctctggag 240
cccgaggact tcgccgtgta ctattgtcag cagtatgctg attcccctat cacatttggc 300cccgaggact tcgccgtgta ctattgtcag cagtatgctg attcccctat cacatttggc 300
cagggtacc 309cagggtacc 309
<---<---
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| US63/084,241 | 2020-09-28 |
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| RU2846726C1true RU2846726C1 (en) | 2025-09-12 |
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| RU2019111899A (en)* | 2013-12-20 | 2019-10-03 | Интервет Интернэшнл Б.В. | DOG ANTIBODIES WITH MODIFIED CH2-CH3 SEQUENCES |
| WO2020116560A1 (en)* | 2018-12-05 | 2020-06-11 | 株式会社バイカ・セラピュティクス | Modified product of fc domain of antibody |
| WO2020142625A9 (en)* | 2019-01-03 | 2021-06-24 | Invetx Inc. | Compositions for increasing half-life of a therapeutic agent in canines and methods of use |
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| RU2019111899A (en)* | 2013-12-20 | 2019-10-03 | Интервет Интернэшнл Б.В. | DOG ANTIBODIES WITH MODIFIED CH2-CH3 SEQUENCES |
| WO2020116560A1 (en)* | 2018-12-05 | 2020-06-11 | 株式会社バイカ・セラピュティクス | Modified product of fc domain of antibody |
| WO2020142625A9 (en)* | 2019-01-03 | 2021-06-24 | Invetx Inc. | Compositions for increasing half-life of a therapeutic agent in canines and methods of use |
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| KR20230005156A (en) | canine antibody variants | |
| KR20250026872A (en) | Interleukin-31 monoclonal antibodies for veterinary use | |
| US20250026834A1 (en) | Feline antibody variants | |
| TW202233687A (en) | Mutations in feline antibody constant regions | |
| KR20230079148A (en) | canine antibody variants | |
| JP2022538374A (en) | Antigen-binding molecule that binds to PDGF-B and PDGF-D and use thereof | |
| CA3124356A1 (en) | Fn14 antibodies and uses thereof | |
| RU2846726C1 (en) | Embodiments of canine antibodies | |
| RU2847183C1 (en) | Versions of canine antibodies | |
| TWI814094B (en) | Feline antibody variants | |
| RU2840969C1 (en) | Versions of feline antibodies | |
| RU2838175C2 (en) | Ngf antibodies and related methods | |
| JP2024541576A (en) | Novel specific antagonist anti-SIRPg antibodies | |
| BR122024006370A2 (en) | POLYPEPTIDE, ITS USE, PHARMACEUTICAL COMPOSITION, KIT, MODIFIED IGG, VECTOR, ISOLATED CELL, FUSION MOLECULE, AND ITS MANUFACTURING METHOD | |
| BR122024007417A2 (en) | MODIFIED IGG, PHARMACEUTICAL COMPOSITION, KIT, POLYPEPTIDE, VECTOR, ISOLATED CELL, FUSION MOLECULE, IMMUNOGLOBULIN, ITS USE, AS WELL AS METHOD OF MANUFACTURING AN ANTIBODY OR A MOLECULE |