Изобретение относится к области медицины, в частности, к способу получения богатой тромбоцитами плазмы [A61K35/16; A61K 35/19].The invention relates to the field of medicine, in particular to a method for obtaining platelet-rich plasma [A61K35/16; A61K 35/19].
Из уровня техники известен СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ БОГАТОЙ ТРОМБОЦИТАМИ ПЛАЗМЫ [RU2717448C1, опубл. 23.03.2020], включающий взятие венозной крови в пробирку без антикоагулянта и активаторов свертывания, ее охлаждение посредством размещения в камере при температуре 8-12°С с возможностью поддержания указанной температуры до 60 мин, центрифугирование образца крови с ускорением 300g в течение 5 мин при температуре в камере 8-12°С и отбором богатой тромбоцитами плазмы из нижней части пробирки в объеме 1/10 от исходного количества крови в пробирке.A METHOD FOR OBTAINING PLATELET-RICH PLASMA is known from the prior art [RU2717448C1, published 03/23/2020], which includes taking venous blood into a test tube without an anticoagulant and coagulation activators, cooling it by placing it in a chamber at a temperature of 8-12 ° C with the possibility of maintaining the specified temperature for up to 60 minutes, centrifuging the blood sample with an acceleration of 300 g for 5 minutes at a temperature in the chamber of 8-12 ° C and collecting platelet-rich plasma from the lower part of the test tube in a volume of 1/10 of the original amount of blood in the test tube.
Недостатком данного способа соблюдение температурного режима от 8 до 12°С и ограничения времени обработки до 60 минут, что усложняет процесс и создает риск оседания тромбоцитов вместе с эритроцитами, снижая эффективность их выделения и концентрации в конечной плазме.The disadvantage of this method is the requirement to maintain a temperature regime of 8 to 12°C and limit the processing time to 60 minutes, which complicates the process and creates the risk of platelet sedimentation along with erythrocytes, reducing the efficiency of their isolation and concentration in the final plasma.
Также из уровня техники известен СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ ОБОГАЩЕННОЙ ТРОМБОЦИТАМИ ПЛАЗМЫ [CN114010659A, опубл. 08.02.2022], характеризующийся следующими этапами: размещают периферическую венозную кровь в пробирке для сбора крови с разделительным гелем, содержащим антикоагулянт, и равномерно перемешивают; проводят первое центрифугирование в течение 9–11 минут при центробежной силе 300 G; проводят второе центрифугирование в течение 9-11 мин при центробежной силе 1200 G и после центрифугирования плазма делится на три слоя: самый нижний слой – эритроциты, верхний слой – плазма, бедная тромбоцитами, а пространство между ними заполнено слоем плазмы, богатой тромбоцитами; и извлекают сыворотку из плазмы, богатой тромбоцитами, на верхний слой разделительного геля для получения готового продукта.Also known from the prior art is a METHOD FOR OBTAINING PLATELET-RICH PLASMA [CN114010659A, published 08.02.2022], characterized by the following steps: placing peripheral venous blood in a blood collection tube with a separating gel containing an anticoagulant and mixing uniformly; performing the first centrifugation for 9-11 minutes at a centrifugal force of 300 G; performing the second centrifugation for 9-11 minutes at a centrifugal force of 1200 G and, after centrifugation, the plasma is divided into three layers: the bottommost layer is erythrocytes, the upper layer is platelet-poor plasma, and the space between them is filled with a layer of platelet-rich plasma; and extracting serum from the platelet-rich plasma onto the upper layer of the separating gel to obtain the finished product.
Недостатком данного способа является вероятность отсутствия четкой границы между слоями эритроцитов и тромбоцитов, что усложняет точное отделение богатой тромбоцитами плазмы без включения лейкоцитов или эритроцитов, что может уменьшить чистоту конечного продукта.A disadvantage of this method is the possibility of a lack of a clear boundary between the layers of red blood cells and platelets, which complicates the accurate separation of platelet-rich plasma without the inclusion of leukocytes or red blood cells, which may reduce the purity of the final product.
Наиболее близким по технической сущности является СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ ОБОГАЩЕННОЙ ТРОМБОЦИТАМИ ПЛАЗМЫ [CN111407778A, опубл14.07.2020], характеризующийся следующими этапами: берут образцы крови и добавляют антикоагулянт, проводят первичное центрифугирование и собирают жидкость без клеток крови в верхнем слое, проводят вторичное центрифугирование жидкости с использованием центробежной силы, в 4-7 раз превышающей первичную центробежную силу, и отсасывают плазму из верхнего слоя, пока оставшаяся в нижнем слое жидкость не составит 4-5% от объёма образцов крови, чтобы получить обогащённую тромбоцитами плазму.The closest in technical essence is the METHOD OF OBTAINING PLATELET-RICH PLASMA [CN111407778A, published on 14.07.2020], characterized by the following steps: taking blood samples and adding an anticoagulant, performing primary centrifugation and collecting fluid without blood cells in the upper layer, performing secondary centrifugation of the liquid using a centrifugal force 4-7 times greater than the primary centrifugal force, and sucking out plasma from the upper layer until the remaining liquid in the lower layer is 4-5% of the volume of blood samples to obtain platelet-rich plasma.
Основной технической проблемой прототипа, является ограничение объема конечной дозы концентрата плазмы, который составляет 4-5% от объема взятой венозной крови, при увеличении содержания тромбоцитов в плазме в 4-7 раз относительно объема взятой венозной крови, что может быть недостаточным для некоторых медицинских применений.The main technical problem of the prototype is the limitation of the volume of the final dose of plasma concentrate, which is 4-5% of the volume of venous blood taken, with an increase in the platelet content in plasma by 4-7 times relative to the volume of venous blood taken, which may be insufficient for some medical applications.
Задачей изобретения является устранение недостатков прототипа.The objective of the invention is to eliminate the shortcomings of the prototype.
Технический результат заключается в увеличении концентрации тромбоцитов в плазме крови от 3 до 8 раз по сравнению с их концентрацией в циркулирующем кровотоке, при этом конечный объем полученного концентрата плазмы составляет не менее 6% от исходного объема взятой венозной крови и достигается без использования дополнительных компонентов или соблюдения определенных температурных режимов.The technical result consists in increasing the concentration of platelets in blood plasma from 3 to 8 times compared to their concentration in the circulating blood flow, while the final volume of the obtained plasma concentrate is at least 6% of the initial volume of venous blood taken and is achieved without the use of additional components or compliance with certain temperature conditions.
Указанный технический результат достигается за счет того, что способ получения богатой тромбоцитами плазмы крови, характеризующийся взятием венозной крови, смешиванием венозной крови в первичных пробирках с ингибитором коагуляции, которые затем подвергают первому этапу центрифугирования, после которого из первичных пробирок готовую рабочую форму плазмы переносят в шприцы перед введением в ткани.The specified technical result is achieved due to the fact that the method for obtaining platelet-rich blood plasma is characterized by taking venous blood, mixing venous blood in primary test tubes with a coagulation inhibitor, which are then subjected to the first stage of centrifugation, after which the finished working form of plasma is transferred from the primary test tubes into syringes before being introduced into tissues.
Также указанный технический результат достигается за счет того, что способ получения богатой тромбоцитами плазмы крови, характеризующийся взятием венозной крови, смешиванием венозной крови в первичных пробирках с ингибитором коагуляции, которые затем подвергают первому этапу центрифугирования, после которого из первичных пробирок извлекают плазму во вторичные пробирки, которые подвергают второму этапу центрифугирования; после окончания второго этапа центрифугирования полученную плазму разделяют вертикально на 3 части, нижнюю 1/3 часть плазмы подвергают суспендированию, готовую рабочую форму плазмы затем переносят в шприцы перед введением в ткани.Also, the specified technical result is achieved due to the fact that the method for obtaining platelet-rich blood plasma is characterized by taking venous blood, mixing venous blood in primary tubes with a coagulation inhibitor, which are then subjected to the first stage of centrifugation, after which plasma is extracted from the primary tubes into secondary tubes, which are subjected to the second stage of centrifugation; after the end of the second stage of centrifugation, the obtained plasma is divided vertically into 3 parts, the lower 1/3 of the plasma is suspended, the finished working form of plasma is then transferred to syringes before being introduced into tissues.
В частном случае, взятие крови осуществляют в стерильные и апирогенные вакуумные пластиковые первичные пробирки размером 120/16 и общим объемом по 12 мл каждая первичная пробирка.In a particular case, blood is taken into sterile and apyrogenic vacuum plastic primary tubes measuring 120/16 and with a total volume of 12 ml for each primary tube.
В частном случае, каждая первичная пробирка содержит ингибитор коагуляции цитрат натрия 3,2 % объемом по 1 мл каждая и не содержит никаких дополнительных компонентов, включая разделительный гель.In this particular case, each primary tube contains 1 ml of the coagulation inhibitor sodium citrate 3.2% each and does not contain any additional components, including separating gel.
В частном случае, первый этап центрифугирования выполняют с центробежной силой 115 G в течение 5 минут.In a particular case, the first stage of centrifugation is performed with a centrifugal force of 115 G for 5 minutes.
В частном случае, после первого этапа центрифугирования полученную плазму от 2 до 3 мл в каждой первичной пробирке переносят в стерильные и апирогенные пластиковые вторичные пробирки размером 120/16 и общим объемом по 12 мл каждая вторичная пробирка, без ингибитора коагуляции и разделительного геля.In a particular case, after the first stage of centrifugation, the obtained plasma from 2 to 3 ml in each primary tube is transferred into sterile and apyrogenic plastic secondary tubes of size 120/16 and a total volume of 12 ml each secondary tube, without coagulation inhibitor and separating gel.
В частном случае, второй этап центрифугирования выполняют с центробежной силой 1000 G в течение 12 минут.In a particular case, the second stage of centrifugation is performed with a centrifugal force of 1000 G for 12 minutes.
В частном случае, после второго этапа центрифугирования с помощью шприца объемом 2 мл системы Луер - лок и иглы с маркировкой 18Gx1/2’’ – 60 mm отбирают верхние 2/3 части плазмы.In a particular case, after the second stage of centrifugation, the upper 2/3 of the plasma is collected using a 2 ml Luer-lock syringe and a needle marked 18Gx1/2’’ – 60 mm.
В частном случае, нижнюю 1/3 часть плазмы подвергают суспендированию в течение 1 минуты.In a particular case, the lower 1/3 of the plasma is suspended for 1 minute.
Краткое описание чертежейBrief description of the drawings
На фиг. 1 представлена схема получения плазмы крови с высоким содержанием тромбоцитов формы HP PRP и формы Extra PRP.Fig. 1 shows a diagram of the production of blood plasma with a high content of platelets in the form of HP PRP and the form of Extra PRP.
Способ получения богатой тромбоцитами плазмы крови осуществляется следующим образом.The method for obtaining platelet-rich blood plasma is as follows.
Предварительно осуществляют взятие венозной крови у пациента в стерильные и апирогенные вакуумные пластиковые первичные пробирки. Каждая первичная пробирка размером 120/16 и общим объемом по 12 мл содержит ингибитор коагуляции цитрат натрия 3,2 % объемом по 1 мл каждая и не содержит никаких дополнительных компонентов, включая разделительный гель. Для получения одной конечной дозы готового концентратора плазмы с высоким содержанием тромбоцитов формы HP PRP (High Potencial Platelet Rich Plasma) объемом от 3 до 4 мл осуществляют взятие венозной крови у пациента в объеме 11 мл в одной первичной пробирке. Взятие крови производится системой для вакуумного взятия крови с Луер - адаптером и холдером, маркировка иглы 21Gx3/4’’, длина катетера 17 см. Объем венозной крови в каждой первичной пробирке должен быть одинаковым. Использование стерильных и апирогенных пробирок указанного объема снижает риск загрязнения и обеспечивает оптимальное соотношение крови и ингибитора коагуляции, что положительно сказывается на сохранении тромбоцитов в активной форме и предотвращает их потерю в процессе центрифугирования. Цитрат натрия 3,2 % предотвращает свертывание крови, что позволяет сохранить тромбоциты в активной форме и распределить их равномерно в плазме перед центрифугированием. Соотношение венозной крови к цитрату натрия в пробирках выбрано таким образом, чтобы обеспечить оптимальный баланс антикоагулянтного эффекта, что позволяет стабилизировать кровь на время обработки, предотвращая свертывание без повреждения клеток. Отсутствие геля и других дополнительных компонентов также исключает возможное взаимодействие химических компонентов с тромбоцитами, что способствует сохранению их структурной целостности и активности. Такая среда предотвращает агрегацию или разрушение тромбоцитов, обеспечивая их более высокую концентрацию и функциональность в конечном продукте.First, venous blood is collected from the patient in sterile and apyrogenic vacuum plastic primary tubes. Each primary tube of size 120/16 and a total volume of 12 ml contains coagulation inhibitor sodium citrate 3.2% in a volume of 1 ml each and does not contain any additional components, including separating gel. To obtain one final dose of the ready-made plasma concentrator with a high platelet content of the HP PRP (High Potential Platelet Rich Plasma) form in a volume of 3 to 4 ml, venous blood is collected from the patient in a volume of 11 ml in one primary tube. Blood is collected using a vacuum blood collection system with a Luer adapter and holder, needle marking 21Gx3/4’’, catheter length 17 cm. The volume of venous blood in each primary tube should be the same. The use of sterile and apyrogenic tubes of the specified volume reduces the risk of contamination and ensures an optimal ratio of blood and coagulation inhibitor, which has a positive effect on preserving platelets in an active form and prevents their loss during centrifugation. Sodium citrate 3.2% prevents blood clotting, which allows preserving platelets in an active form and distributing them evenly in the plasma before centrifugation. The ratio of venous blood to sodium citrate in the tubes is selected in such a way as to ensure an optimal balance of the anticoagulant effect, which allows stabilizing the blood during processing, preventing clotting without damaging the cells. The absence of gel and other additional components also eliminates possible interaction of chemical components with platelets, which helps to preserve their structural integrity and activity. Such an environment prevents aggregation or destruction of platelets, ensuring their higher concentration and functionality in the final product.
После взятия крови в первичных пробирках смешивают венозную кровь с ингибитором коагуляции покачиванием от 4 до 5 раз с амплитудой от 15 до 20°, что минимизирует вероятность агрегации тромбоцитов и увеличивает их выживаемость.After blood collection, venous blood is mixed with a coagulation inhibitor in primary tubes by shaking 4 to 5 times with an amplitude of 15 to 20°, which minimizes the likelihood of platelet aggregation and increases their survival.
Далее каждую первичную пробирку, заполненную венозной кровью с ингибитором коагуляции, размещают в центрифуге ELMI CM - 6M standart напротив друг друга по диагонали, соблюдая принцип баланса и исключения излишней вибрации при центрифугировании. В случае, если для получения необходимого количества конечных доз готового концентратора плазмы получили нечетное количество пробирок, то используют противовес, представляющий собой пробирку, идентичную первичной пробирке и заполненную физиологическим раствором NaCl 0,9%. Объем физиологического раствора в пробирке – противовесе должен быть соизмерим с объемом венозной крови с ингибитором коагулянта в первичной пробирке, для сравнения объемов используют лабораторные весы I специального класса точности по ГОСТ Р 53228-2008. Затем выполняют первый этап центрифугирования с центробежной силой 115 G, что соответствует примерно 790 об/мин, в течение 5 минут при комнатной температуре. Указанный режим первого этапа центрифугирования обеспечивает оптимальное соотношение центробежной силы и времени проведения центрифугирования, при котором происходит эффективное разделение плазмы с осаждением эритроцитов и лейкоцитов, при этом тромбоциты остаются в верхнем слое плазмы, что обеспечивает их высокую концентрацию.Then, each primary tube filled with venous blood with a coagulation inhibitor is placed in the ELMI CM - 6M standart centrifuge opposite each other diagonally, observing the principle of balance and eliminating excessive vibration during centrifugation. If an odd number of tubes are obtained to obtain the required number of final doses of the finished plasma concentrator, a counterweight is used, which is a tube identical to the primary tube and filled with 0.9% NaCl physiological solution. The volume of the physiological solution in the counterweight tube should be commensurate with the volume of venous blood with a coagulant inhibitor in the primary tube; laboratory scales of special accuracy class I according to GOST R 53228-2008 are used to compare the volumes. Then, the first stage of centrifugation is performed with a centrifugal force of 115 G, which corresponds to approximately 790 rpm, for 5 minutes at room temperature. The specified mode of the first stage of centrifugation ensures an optimal ratio of centrifugal force and centrifugation time, during which effective separation of plasma occurs with sedimentation of erythrocytes and leukocytes, while platelets remain in the upper layer of plasma, which ensures their high concentration.
После окончания первого этапа центрифугирования устанавливают первичные пробирки в штатив и аккуратно отбирают из каждой первичной пробирки слой полученной плазмы с высоким содержанием тромбоцитов формы HP PRP и тромбоциты с уровня лейкоцитарно – тромбоцитарной пленки. Отбор слоя плазмы с высоким содержанием тромбоцитов формы HP PRP осуществляют с помощью шприца объемом 5 мл системы луер - лок и иглы с маркировкой 18Gx1/2’’ - 60 mm с применением техники «торнадо», которая предполагает вращение иглой для взятия слоя плазмы с высоким содержанием тромбоцитов формы HP PRP для создания воронки и захвата максимально возможного количества тромбоцитов с уровня лейкоцитарно – тромбоцитарной пленки. Отбор слоя плазмы с высоким содержанием тромбоцитов HP PRP должен быть выполнен в течение 1 минуты после первого этапа центрифугирования, поскольку клеточные элементы продолжают оседать и конечная концентрация тромбоцитов в слое плазмы может быть измененной от ожидаемой. Объем полученной плазмы с высоким содержанием тромбоцитов формы HP PRP составляет от 3 до 4 мл из каждой первичной пробирки. Конечная доза готового концентратора плазмы формы HP PRP имеет концентрацию тромбоцитов, соответствующую кратному увеличению от 3 до 4 раз относительно концентрации тромбоцитов в циркулирующем кровотоке.After completion of the first centrifugation step, the primary tubes are placed in a rack and the obtained HP PRP platelet-rich plasma layer and platelets from the buffy coat level are carefully collected from each primary tube. The HP PRP platelet-rich plasma layer is collected using a 5 ml luer-lock syringe and an 18Gx1/2’’ - 60 mm needle using the tornado technique, which involves rotating the needle to collect the HP PRP platelet-rich plasma layer to create a funnel and capture as many platelets as possible from the buffy coat level. The HP PRP platelet-rich plasma layer should be collected within 1 minute after the first centrifugation step, since cellular elements continue to settle and the final platelet concentration in the plasma layer may vary from the expected one. The volume of platelet rich plasma HP PRP obtained is 3 to 4 ml from each primary tube. The final dose of the finished plasma concentrator HP PRP has a platelet concentration corresponding to a multiple increase of 3 to 4 times the concentration of platelets in the circulating bloodstream.
Перед введением в ткани шприц объемом 5 мл системы Луер - лок подвергается механическому воздействию в виде покачивания для равномерного распределения клеточных элементов и осуществляют перенос в шприцы для инъекций объемом 1 мл с помощью адаптера Combifix, количество шприцов соответствует объему полученной плазмы с высоким содержанием тромбоцитов формы HP PRP.Before being introduced into the tissue, the 5 ml syringe of the Luer-lock system is subjected to mechanical action in the form of rocking to evenly distribute the cellular elements and is transferred into 1 ml injection syringes using the Combifix adapter, the number of syringes corresponds to the volume of the obtained plasma with a high content of platelets in the form of HP PRP.
Для получения одной конечной дозы готового концентратора плазмы с высоким содержанием тромбоцитов формы Extra PRP (Extra Platelet Rich Plasma) объемом от 1,3 до 2,0 мл используют две первичные пробирки, заполненные венозной кровью с ингибитором коагулянта, суммарный объем венозной крови для одной конечной дозы составляет 22 мл. После первого этапа центрифугирования извлекают плазму с высоким содержанием тромбоцитов из двух первичных пробирок. Для чего устанавливают первичные пробирки в штатив и аккуратно отбирают из каждой первичной пробирки плазму с высоким содержанием тромбоцитов в стерильные и апирогенные пластиковые вторичные пробирки размером 120/16 и общим объемом по 12 мл каждая вторичная пробирка, без ингибитора коагуляции и разделительного геля. Перенос в стерильные и апирогенные пробирки без антикоагулянта позволяет минимизировать примеси и создать условия для максимального осаждения тромбоцитов на следующем этапе. Объем полученной плазмы с высоким содержанием тромбоцитов формы HP PRP составляет от 2 до 3 мл в каждой вторичной пробирке. Объем плазмы в каждой вторичной пробирке должен быть идентичным, чтобы избежать излишней вибрации при центрифугировании.To obtain one final dose of the ready-made Extra PRP (Extra Platelet Rich Plasma) concentrator with a volume of 1.3 to 2.0 ml, two primary tubes filled with venous blood with a coagulant inhibitor are used, the total volume of venous blood for one final dose is 22 ml. After the first centrifugation stage, platelet-rich plasma is extracted from two primary tubes. For this purpose, the primary tubes are placed in a rack and platelet-rich plasma is carefully collected from each primary tube into sterile and apyrogenic plastic secondary tubes of 120/16 size and a total volume of 12 ml each secondary tube, without a coagulation inhibitor and separating gel. Transfer to sterile and apyrogenic tubes without anticoagulant allows to minimize impurities and to create conditions for maximum sedimentation of platelets in the next step. The volume of obtained plasma with a high content of platelets of the HP PRP form is from 2 to 3 ml in each secondary tube. The volume of plasma in each secondary tube should be identical to avoid excessive vibration during centrifugation.
Далее каждую вторичную пробирку, заполненную плазмой с высоким содержанием тромбоцитов формы HP PRP, размещают в центрифуге ELMI CM - 6M standart напротив друг друга по диагонали и выполняют второй этап центрифугирования с центробежной силой 1000 G, что соответствует примерно 2330 об/мин, в течение 12 минут при комнатной температуре. Указанный режим второго этапа центрифугирования обеспечивает оптимальное соотношение центробежной силы и времени проведения центрифугирования для максимального осаждения тромбоцитов в нижний слой плазмы, что также препятствует агрегации или повреждению тромбоцитов, сохраняя их функциональность и эффективность плазмы.Each secondary tube filled with HP PRP platelet-rich plasma is then placed diagonally opposite each other in the ELMI CM - 6M standart centrifuge and the second centrifugation stage is performed at a centrifugal force of 1000 G, which corresponds to approximately 2330 rpm, for 12 minutes at room temperature. This second centrifugation stage mode provides an optimal ratio of centrifugal force and centrifugation time for maximum sedimentation of platelets in the lower plasma layer, which also prevents platelet aggregation or damage, preserving their functionality and plasma efficiency.
После окончания второго этапа центрифугирования устанавливают вторичные пробирки в штатив и визуально делят каждую вторичную пробирку с полученной плазмой вертикально на 3 части. После чего с помощью шприца объемом 2 мл системы луер – лок и иглы с маркировкой 18Gx1/2’’ – 60 mm отбирают верхние 2/3 части плазмы, содержащие 0,2 % тромбоцитов относительно исходной концентрации тромбоцитов в циркулирующем кровотоке. Нижнюю 1/3 часть плазмы с высоким содержанием тромбоцитов формы Extra PRP подвергают суспендированию с помощью шприца, объемом 2 мл системы Луер - лок и иглы с маркировкой 18Gx1/2’’ - 60 mm в течение 1 минуты для равномерного распределения в рабочей дозе тромбоцитов, сконцентрированных после жесткого центрифугирования на дне пробирки. Конечная доза готового концентратора плазмы формы Extra PRP имеет концентрацию тромбоцитов, соответствующую кратному увеличению от 6 до 8 раз относительно концентрации тромбоцитов в циркулирующем кровотоке.After completion of the second centrifugation stage, place the secondary tubes in a rack and visually divide each secondary tube with the obtained plasma vertically into 3 parts. Then, using a 2 ml syringe with a Luer-lock system and a needle marked 18Gx1/2’’ – 60 mm, collect the upper 2/3 of the plasma containing 0.2% of platelets relative to the initial concentration of platelets in the circulating bloodstream. The lower 1/3 of the plasma with a high content of Extra PRP platelets is suspended using a 2 ml syringe with a Luer-lock system and a needle marked 18Gx1/2’’ – 60 mm for 1 minute to evenly distribute the platelets in the working dose, concentrated after rigorous centrifugation at the bottom of the tube. The final dose of the finished plasma concentrator Extra PRP has a platelet concentration corresponding to a multiple increase of 6 to 8 times the concentration of platelets in the circulating bloodstream.
Перед введением в ткани готовую рабочую форму плазмы с высоким содержанием тромбоцитов формы Extra PRP в течение 1 минуты после суспендирования отбирают с помощью иглы с маркировкой 18Gx1/2’’ – 60 mm в шприцы системы луер - лок, объемом 1 мл, количество шприцов соответствует объему полученной плазмы с высоким содержанием тромбоцитов формы Extra PRP.Before introducing into the tissues, the ready-to-use form of Extra PRP platelet-rich plasma is withdrawn within 1 minute after suspension using a needle marked 18Gx1/2’’ – 60 mm into 1 ml luer-lock syringes; the number of syringes corresponds to the volume of the obtained Extra PRP platelet-rich plasma.
Введение в ткани проводят в соответствии с показаниями для данной формы плазмы с применением игл с маркировкой 30 G x1/2’’ - 13 mm или 30 G x1/2’’ - 25 mm; или 32 G 0,23 – 6 mm супрапериостально или интралигаментарно, или внутримышечно, или подкожно, или внутрикожно.Introduction into tissues is carried out in accordance with the indications for a given form of plasma using needles marked 30 G x1/2’’ - 13 mm or 30 G x1/2’’ - 25 mm; or 32 G 0.23 – 6 mm supraperiosteally or intraligamentarily, or intramuscularly, or subcutaneously, or intradermally.
Введение в ткани плазмы с высоким содержанием тромбоцитов формы HP PRP и формы Extra PRP возможно в различных областях медицины для восстановления и стимуляции регенеративных процессов.The introduction of platelet-rich plasma in the form of HP PRP and Extra PRP into tissues is possible in various fields of medicine for restoration and stimulation of regenerative processes.
Применение инъекций плазмы с высоким содержанием тромбоцитов формы HP PRP показано для стимуляции ангиогенеза и восстановления функций соединительной ткани, включая активизацию фибробластов, остеобластов и хондробластов. В хирургии метод используется для лечения хронических трофических язв артериального и венозного генеза, особенно у пациентов с сахарным диабетом, а также для подготовки донорского ложе при кожных трансплантациях и повышения биосовместимости и гемосовместимости трансплантата. В ортопедии и травматологии метод показан для внутрисуставных инъекций, лечения разрывов связок в остром периоде, а также для терапии фасций, сухожилий и других соединительных структур, способствуя улучшению трофики тканей и усилению регенеративных процессов в мышечной и соединительной тканях. В дентальной имплантологии и оперативной стоматологии плазма HP PRP способствует ускоренному восстановлению объема костной ткани, особенно в сочетании с применением искусственной кости.The use of injections of platelet-rich plasma in the form of HP PRP is indicated for stimulating angiogenesis and restoring connective tissue functions, including activating fibroblasts, osteoblasts, and chondroblasts. In surgery, the method is used to treat chronic trophic ulcers of arterial and venous genesis, especially in patients with diabetes mellitus, as well as to prepare a donor bed for skin transplants and to improve the biocompatibility and hemocompatibility of the graft. In orthopedics and traumatology, the method is indicated for intra-articular injections, treating ligament ruptures in the acute period, as well as for the therapy of fascia, tendons, and other connective structures, improving tissue trophism and enhancing regenerative processes in muscle and connective tissues. In dental implantology and operative dentistry, HP PRP plasma promotes accelerated restoration of bone tissue volume, especially in combination with the use of artificial bone.
В других областях медицины, таких как гинекология, введение в ткани плазмы формы HP PRP применяются для повышения чувствительности клитора и улучшения оргастической функции. В неврологии метод помогает восстановить трофику и чувствительность тканей, регенерировать нервные волокна и устранить гипертонус мышц. В пластической хирургии инъекции плазмы используются для подготовки и реабилитации пациентов, а также для сочетания с процедурами, такими как липофилинг (fat grafting). В урологии метод показан для лечения эректильной дисфункции у мужчин, а в колопроктологии — для лечения анальных трещин.In other areas of medicine, such as gynecology, the introduction of HP PRP plasma into tissue is used to increase clitoral sensitivity and improve orgasmic function. In neurology, the method helps restore tissue trophism and sensitivity, regenerate nerve fibers, and eliminate muscle hypertonicity. In plastic surgery, plasma injections are used to prepare and rehabilitate patients, as well as in combination with procedures such as fat grafting. In urology, the method is indicated for the treatment of erectile dysfunction in men, and in proctology, for the treatment of anal fissures.
Плазма формы Extra PRP, благодаря еще более высокой концентрации тромбоцитов, также подходит для всех указанных областей применения, но её уникальные свойства делают её предпочтительной в случаях, требующих экстренного вмешательства и максимально ускоренного заживления. Extra PRP особо показана при таких состояниях, как ангиопатия, атрофические язвы, диабетическая стопа, некроз, ишемия, а также при осложнениях после ботулинотерапии и пластической хирургии. Высокая концентрация тромбоцитов в Extra PRP способствует интенсивной стимуляции регенеративных процессов, что особенно важно в ситуациях с острой нехваткой кровоснабжения или выраженным повреждением тканей.Extra PRP plasma, thanks to its even higher platelet concentration, is also suitable for all of the above areas of application, but its unique properties make it preferable in cases requiring emergency intervention and the fastest possible healing. Extra PRP is especially indicated for conditions such as angiopathy, atrophic ulcers, diabetic foot, necrosis, ischemia, as well as complications after botulinum therapy and plastic surgery. The high concentration of platelets in Extra PRP promotes intensive stimulation of regenerative processes, which is especially important in situations with acute lack of blood supply or severe tissue damage.
Для анализа количественного содержания тромбоцитов в готовом конечном концентрате плазмы была проведена экспериментальная работа в лаборатории экспериментальных исследований Национального Медицинского Университета им. А.А. Богомольца. Для исследования использовали образцы венозной крови 27 доноров-добровольцев в возрасте от 18 до 65 лет и разного пола (14 мужчин и 13 женщин). Факторы исключения из исследования – тяжелые или нестабильные соматические заболевания (сахарный диабет, рефрактерная сердечно-сосудистая и почечная недостаточность и т.д.), применение пациентом тромболитиков.To analyze the quantitative content of platelets in the finished final plasma concentrate, an experimental study was conducted in the laboratory of experimental research at the Bogomolets National Medical University. The study used venous blood samples from 27 volunteer donors aged 18 to 65 years and of different sexes (14 men and 13 women). Exclusion factors from the study were severe or unstable somatic diseases (diabetes mellitus, refractory cardiovascular and renal failure, etc.), the use of thrombolytics by the patient.
У каждого донора взяли венозную кровь из кубитальной вены в 5 стерильные и апирогенные вакуумные пластиковые пробирки объемом по 12 мл каждая, содержащие 1 мл цитрата натрия 3,2%, смешивали содержимое пробирок покачиванием с амплитудой от 15° до 20° в течение 4 – 5 раз. Из каждой пробирки отбирали небольшие аликвоты (10–50 мкл) для оценки исходного качества тромбоцитов доноров, затем пробирки распределяли по трем опытным группам с тем, чтобы в каждой группе были пробирки от каждого донора.Venous blood from each donor was collected from the cubital vein into 5 sterile and apyrogenic vacuum plastic tubes of 12 ml each containing 1 ml of sodium citrate 3.2%, the contents of the tubes were mixed by shaking with an amplitude of 15° to 20° for 4–5 times. Small aliquots (10–50 μl) were taken from each tube to assess the initial quality of donor platelets, then the tubes were distributed into three experimental groups so that each group contained tubes from each donor.
В первой опытной группе получали плазму с тромбоцитами в соответствии с решением согласно прототипу [CN111407778A, опубл14.07.2020] из двух образцов крови каждого донора, суммарный объем крови каждого донора составил 22 мл. Каждую пробирку размещали в центрифуге ELMI CM - 6M standart и проводили первый этап центрифугирования с центробежной силой 200 G в течение 8 минут, после чего переносили верхний слой плазмы в сухую стерильную и апирогенную пробирку и проводили второй этап центрифугирования с центробежной силой 1000 G в течение 10 минут. При этом каждый этап центрифугирования проводился в 5 очередей, в 4 из которых размещали по 12 пробирок с образцами материалов 6 доноров, а в 5 очереди размещали 6 образцов, равномерно распределенных в центрифуге с соблюдением баланса, с биоматериалами 3 доноров. После окончания второго этапа центрифугирования отбирали нижнюю часть плазмы с высоким содержанием тромбоцитов. Конечная доза готового концентратора плазмы прототипа составила от 0,9 до 1,1 мл.In the first experimental group, platelet-rich plasma was obtained in accordance with the prototype solution [CN111407778A, published on 14.07.2020] from two blood samples of each donor, the total blood volume of each donor was 22 ml. Each tube was placed in an ELMI CM - 6M standard centrifuge and the first stage of centrifugation was carried out with a centrifugal force of 200 G for 8 minutes, after which the upper plasma layer was transferred to a dry sterile and apyrogenic tube and the second stage of centrifugation was carried out with a centrifugal force of 1000 G for 10 minutes. In this case, each centrifugation stage was carried out in 5 lines, 4 of which contained 12 tubes with samples of materials from 6 donors, and the 5th line contained 6 samples, evenly distributed in the centrifuge while maintaining balance, with biomaterials from 3 donors. After the second centrifugation stage was completed, the lower part of the plasma with a high platelet content was collected. The final dose of the finished prototype plasma concentrator was from 0.9 to 1.1 ml.
Во второй опытной группе проводили разделения из одной пробирки образца венозной крови каждого донора на компоненты и получения плазмы с тромбоцитами формы HP PRP с верхнего слоя плазмы и с уровня лейкоцитарно – тромбоцитарной пленки согласно заявленному способу. Каждую пробирку образца крови размещали в центрифуге ELMI CM - 6M standart и проводили первый этап центрифугирования с центробежной силой 115 G в течение 5 минут. Центрифугирование проводили в три очереди по 9 образцов крови и 3 пробирки–противовеса, заполненными физиологическим раствором NaCl 0,9%, для соблюдения принципа баланса. Конечная доза готового концентратора плазмы формы HP PRP составила от 3 до 4 мл.In the second experimental group, a venous blood sample from each donor was separated into components from one test tube and platelet plasma of the HP PRP form was obtained from the upper plasma layer and from the level of the leukocyte-platelet film according to the claimed method. Each blood sample tube was placed in an ELMI CM - 6M standart centrifuge and the first centrifugation stage was carried out with a centrifugal force of 115 G for 5 minutes. Centrifugation was carried out in three stages with 9 blood samples and 3 counterweight test tubes filled with 0.9% physiological NaCl solution to maintain the balance principle. The final dose of the finished HP PRP plasma concentrator was from 3 to 4 ml.
В третьей опытной группе получали плазму с тромбоцитами формы Extra PRP из двух образцов крови каждого донора, суммарный объем крови каждого донора составил 22 мл. Каждую пробирку размещали в центрифуге ELMI CM - 6M standart и проводили первый этап центрифугирования с центробежной силой 115 G в течение 5 минут, после чего переносили верхний слой плазмы в сухую стерильную и апирогенную пробирку без ингибитора коагуляции и других добавок и проводили второй этап центрифугирования с центробежной силой 1000 G в течение 12 минут. При этом каждый этап центрифугирования проводился в 5 очередей, в 4 из которых размещали по 12 пробирок с образцами материалов 6 доноров, а в 5 очереди размещали 6 образцов, равномерно распределенных в центрифуге с соблюдением баланса, с биоматериалами 3 доноров. После окончания второго этапа центрифугирования полученную плазму разделяли вертикально на 3 части, нижнюю 1/3 часть плазмы подвергали суспендированию в течение 1 минуты. Конечная доза готового концентратора плазмы формы Extra PRP составила от 1,3 до 2,0 мл.In the third experimental group, Extra PRP platelet-rich plasma was obtained from two blood samples of each donor; the total blood volume of each donor was 22 ml. Each tube was placed in an ELMI CM - 6M standart centrifuge and the first centrifugation stage was carried out with a centrifugal force of 115 G for 5 minutes, after which the upper plasma layer was transferred to a dry sterile and apyrogenic tube without a coagulation inhibitor or other additives and the second centrifugation stage was carried out with a centrifugal force of 1000 G for 12 minutes. In this case, each centrifugation stage was carried out in 5 queues, 4 of which contained 12 tubes with samples of materials from 6 donors, and the 5th queue contained 6 samples, evenly distributed in the centrifuge while maintaining balance, with biomaterials from 3 donors. After the second centrifugation stage, the obtained plasma was divided vertically into 3 parts, the lower 1/3 of the plasma was suspended for 1 minute. The final dose of the finished plasma concentrator of the Extra PRP form was from 1.3 to 2.0 ml.
Отбор плазмы и ее перемещение во всех случаях проводили одноразовыми стерильными шприцами объемом 2 мл системы Луер – лок через одноразовые стерильные иглы с маркировкой 18Gx1/2’’ – 60 mm. На протяжении всего эксперимента осуществлялся контроль за сохранением стабильной комнатной температуры и влажности в лаборатории для чистоты эксперимента.Plasma collection and transfer in all cases was performed using disposable sterile 2 ml Luer-lock syringes through disposable sterile needles marked 18Gx1/2’’ – 60 mm. Throughout the experiment, control was exercised to maintain a stable room temperature and humidity in the laboratory to ensure the purity of the experiment.
Концентрацию тромбоцитов в крови и плазме определяли на лабораторном гематологическом анализаторе HemaLite 3000, также рассчитывали общее количество тромбоцитов в каждом образце (см. таблицу 1).The concentration of platelets in blood and plasma was determined on a HemaLite 3000 laboratory hematology analyzer, and the total number of platelets in each sample was also calculated (see Table 1).
Таблица 1 – Характеристика образцов плазмы, выделенной из крови пациентаTable 1 – Characteristics of plasma samples isolated from patient blood
образцаNo.
sample
относительно параметров цельной кровиChanging the parameter value for a sample
relative to whole blood parameters
(1 группа)Prototype CN111407778A
(1 group)
(2 группа)plasma form HP PRP
(Group 2)
(3 группа)Extra PRP plasma form
(Group 3)
Проведенное исследование показало, что применяемые режимы центрифугирования для получения богатой тромбоцитами плазмы демонстрируют различия в качестве и количестве тромбоцитов в плазме.The study showed that the centrifugation modes used to obtain platelet-rich plasma demonstrate differences in the quality and quantity of platelets in the plasma.
Способ получения плазмы с высоким содержанием тромбоцитов согласно прототипу обеспечивает увеличение концентрации тромбоцитов в плазме на 406–699 % относительно концентрации в исходной дозе забранной крови, что превосходит результат концентрации тромбоцитов в плазме по форме HP PRP, который демонстрирует увеличение концентрации на 301 – 393 %, но уступает максимальному результату концентрации тромбоцитов в плазме по форме Extra PRP, который демонстрирует увеличение концентрации на 600 – 797 %. Однако, способ получения плазмы с высоким содержанием тромбоцитов по прототипу требует большего объема цельной крови, что может служить ограничением в клинической практике, где доступное количество крови может быть ограничено.The method for producing platelet-rich plasma according to the prototype provides an increase in the concentration of platelets in plasma by 406-699% relative to the concentration in the initial dose of collected blood, which is superior to the result of the concentration of platelets in plasma in the form of HP PRP, which demonstrates an increase in concentration by 301-393%, but inferior to the maximum result of the concentration of platelets in plasma in the form of Extra PRP, which demonstrates an increase in concentration by 600-797%. However, the method for producing platelet-rich plasma according to the prototype requires a larger volume of whole blood, which may serve as a limitation in clinical practice, where the available amount of blood may be limited.
По общему числу тромбоцитов в плазме способ согласно прототипу и форма HP PRP согласно заявленному решению показали близкие результаты, однако способ по прототипу также требует большего объема цельной крови. В то же время общее число тромбоцитов в плазме по форме Extra PRP согласно заявленному решению превышает общее число тромбоцитов в плазме полученной по способу согласно прототипу в 1,28 – 2,09 раз. Таким образом, плазма по форме HP PRP и по форме Extra PRP согласно заявленному решению имеют больший терапевтический потенциал препарата за счет факторов роста и других биологически активных молекул, которые способствуют заживлению, регенерации и восстановлению тканей.In terms of the total number of platelets in plasma, the prototype method and the HP PRP form according to the claimed solution showed similar results, however, the prototype method also requires a larger volume of whole blood. At the same time, the total number of platelets in plasma in the Extra PRP form according to the claimed solution exceeds the total number of platelets in plasma obtained by the prototype method by 1.28 - 2.09 times. Thus, plasma in the HP PRP form and in the Extra PRP form according to the claimed solution have a greater therapeutic potential of the drug due to growth factors and other biologically active molecules that promote healing, regeneration and restoration of tissues.
Также общее число тромбоцитов с гранулами в плазмах по форме HP PRP и по форме Extra PRP согласно заявленному решению превышают данный показатель для плазмы полученной по способу согласно прототипу, что указывает на более качественное сохранение тромбоцитарной массы, содержащей биологические активные вещества, такие как тромбоцитарные факторы роста (PDGF, TGF-β), факторы ангиогенеза (VEGF) и молекулы, стимулирующие рост и восстановление клеток.Also, the total number of platelets with granules in plasmas in the HP PRP form and in the Extra PRP form, according to the stated solution, exceeds this indicator for plasma obtained by the method according to the prototype, which indicates better preservation of the platelet mass containing biologically active substances such as platelet growth factors (PDGF, TGF-β), angiogenesis factors (VEGF) and molecules that stimulate cell growth and restoration.
Таким образом, заявленное изобретение позволяет обеспечить высокую концентрацию тромбоцитов, в том числе тромбоцитов с гранулами, в конечном продукте, что значительно расширяет его терапевтический потенциал и повышает эффективность применения для стимуляции процессов восстановления и заживления тканей в медицинской практике. Кроме того, увеличение концентрации тромбоцитов в плазме крови в 3–8 раз по сравнению с их содержанием в циркулирующем кровотоке, а также получение конечного объема плазменного концентрата не менее 6% от исходного объема забираемой венозной крови достигается без использования дополнительных компонентов и без необходимости соблюдения температурных режимов, что делает способ более универсальным и простым в применении, а также повышает его доступность для клинической практики.Thus, the claimed invention allows to provide a high concentration of platelets, including platelets with granules, in the final product, which significantly expands its therapeutic potential and increases the efficiency of use for stimulating tissue restoration and healing processes in medical practice. In addition, an increase in the concentration of platelets in blood plasma by 3-8 times compared to their content in the circulating blood flow, as well as obtaining a final volume of plasma concentrate of at least 6% of the initial volume of venous blood taken is achieved without the use of additional components and without the need to maintain temperature conditions, which makes the method more universal and easy to use, and also increases its availability for clinical practice.
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| RU2846108C1true RU2846108C1 (en) | 2025-08-29 |
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN104436177B (en)* | 2013-09-24 | 2018-04-10 | 卫生福利部台中医院 | Medicinal composition for repairing wound and preparation method thereof |
| CN107376427B (en)* | 2017-07-06 | 2019-11-26 | 南方医科大学南方医院 | A kind of platelet rich plasma preparation method without exogenous additive |
| CN111407778A (en)* | 2019-11-20 | 2020-07-14 | 广东先康达生物科技有限公司 | Preparation method of platelet-rich plasma |
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN104436177B (en)* | 2013-09-24 | 2018-04-10 | 卫生福利部台中医院 | Medicinal composition for repairing wound and preparation method thereof |
| CN107376427B (en)* | 2017-07-06 | 2019-11-26 | 南方医科大学南方医院 | A kind of platelet rich plasma preparation method without exogenous additive |
| CN111407778A (en)* | 2019-11-20 | 2020-07-14 | 广东先康达生物科技有限公司 | Preparation method of platelet-rich plasma |
| Title |
|---|
| SINGHAL, P., et al. Efficacy of platelet-rich plasma in treatment of androgenic alopecia. Asian J Transfus Sci 2015;9:159-62. CROISE, B., et al. Optimized centrifugation preparation of the platelet rich plasma: Literature review. J Stomatol Oral Maxillofac Surg 121 (2020) 150-154. YAN, C.H., et al. The use of platelet-rich plasma in treatment of olfactory dysfunction: A pilot study/ Laryngoscope Investigative Otolaryngology. 2020;5:187-193. ЯСЮКЕВИЧ А.С. и др. Влияние типа антикоагулянта на гомогенность аутологичной плазмы, обогащенной тромбоцитами, получаемой путем двухэтапного центрифугирования из малого объема крови для лечебных целей. Прикладная спортивная наука. 2020. N 2 (12). Стр. 109-118. ЯСЮКЕВИЧ А.С. и др. Изучение влияния типа ротора лабораторной центрифуги на концентрацию тромбоцитов при получении плазмы, обогащенной тромбоцитами, ручным способом в поликлинических условиях. Прикладная спортивная наука. 2019. N 1(9). Стр. 76-86. БЕЛОБОРОДОВ В.А., КЕЛЬЧЕВСКАЯ Е.А. Переливание* |
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| JP5551250B2 (en) | Methods and compositions for delivering interleukin-1 receptor antagonists | |
| CN106727700B (en) | Method for preparing platelet rich plasma PRP and application of platelet rich plasma | |
| JP6731004B2 (en) | Method and apparatus for the preparation of enriched body fluids | |
| JP2012526781A (en) | Method for preparing at least one compound from blood and extraction device for use in carrying out the method | |
| KR20120002530A (en) | Activated Leukocyte Composition | |
| RU2846108C1 (en) | Method of producing platelet-rich blood plasma | |
| US20200164121A1 (en) | Method, device and kit for the preparation of prp | |
| RU2410127C1 (en) | Method of obtaining autogenic activated platelet-enriched plasma for dentistry | |
| US20200222601A1 (en) | Blood separation method | |
| Tey et al. | Variability in Platelet-Rich Plasma Preparations Used in Regenerative Medicine: A Systematic Review | |
| Ivanova et al. | Characteristics of autologous platelet rich plasma concentrates obtained by the buffy coat technique using different protocols | |
| Astuti et al. | Effect of Centrifugation speed and duration of the quantity of platelet rich plasma (PRP) | |
| UA136917U (en) | METHOD OF OBTAINING PLATE PLATUM RICH IN PLATES | |
| TWM605103U (en) | Apparatus and kit for producing platelet rich plasma and platelet rich fibrin | |
| RU2818845C1 (en) | Method of producing an autologous bone marrow cell concentrate | |
| CN217960832U (en) | Kit for preparing plasma injection | |
| RU2827075C1 (en) | Method of producing autologous bone marrow aspirate concentrate | |
| Marx et al. | Platelet rich plasma (PRP): A primer | |
| WO2018050289A1 (en) | Collection tube and calibrated transparent tube for fractionation in provision of platelets rich plasma | |
| Chetverikov | Original effective, safe technique of obtaining platelet rich plasma by centrifugation of the blood plasma in modified syringe containers | |
| KR20240022513A (en) | Methods and systems for producing mononuclear-platelet rich fibrin matrices, and compounds thereof | |
| UA141958U (en) | METHOD OF PREPARATION OF BLOOD PLASMA CONTAINING PLATELETS | |
| Menchisheva et al. | Preparation of platelet-rich plasma: existing methods, problems of standardization | |
| CN115645353A (en) | Preparation method of autologous platelet-rich gel | |
| UA137267U (en) | METHOD OF OBTAINING PLATELET GEL FOR HEALING WOUNDS AND TISSUES |