[ОБЛАСТЬ ТЕХНИКИ, К КОТОРОЙ ОТНОСИТСЯ ИЗОБРЕТЕНИЕ][FIELD OF TECHNOLOGY TO WHICH THE INVENTION RELATES]
Настоящее изобретение относится к гидрогелю из гиалуроновой кислоты, сшитому при использовании полиола со сшивателем, и филлеру, содержащему его.The present invention relates to a hyaluronic acid hydrogel cross-linked using a polyol with a cross-linker, and a filler containing the same.
[УРОВЕНЬ ТЕХНИКИ][STATE OF TECHNOLOGY]
В филлерах, разработанных для улучшения состояния кожи при морщинах, широко используют гиалуроновую кислоту - природный полимер, характеризующийся высокой биосовместимостью. В целях увеличения продолжительности нахождения гиалуроновой кислоты в организме в настоящее время для филлеров используют гидрогель из гиалуроновой кислоты, сшитый при использовании различных сшивателей. Однако, поскольку сшиватель в общем случае является высокотоксичным, имеет место недостаток, заключающийся в затруднительности его использования в больших количествах. В дополнение к этому, при низкой степени сшивания несмотря на наличие сшитого гидрогеля имеет место недостаток, заключающийся в быстром его разложении гиалуронидазой или активными формами кислорода (радикалами), так что для него трудно увеличить как стабильность, так и долговечность в организме.Fillers designed to improve the condition of wrinkled skin widely use hyaluronic acid, a natural polymer characterized by high biocompatibility. In order to increase the duration of hyaluronic acid in the body, hyaluronic acid hydrogel cross-linked using various cross-linkers is currently used for fillers. However, since the cross-linker is generally highly toxic, there is a disadvantage consisting in the difficulty of using it in large quantities. In addition, at a low degree of cross-linking, despite the presence of a cross-linked hydrogel, there is a disadvantage consisting in its rapid decomposition by hyaluronidase or active forms of oxygen (radicals), so that it is difficult to increase both its stability and durability in the body.
[РАСКРЫТИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ][DISCLOSURE OF INVENTION]
[ТЕХНИЧЕСКАЯ ПРОБЛЕМА][TECHNICAL PROBLEM]
В результате проведения неоднократных исследований для разрешения проблем предшествующего уровня техники, которые были описаны выше, изобретатели настоящего изобретения подтвердили, что при сшивании гиалуроновой кислоты при использовании полиола, такого как сахарный спирт, совместно с обычно используемым сшивателем превосходно улучшается стабильность в условиях действия гиалуронидазы, активных форм кислорода (радикалов) и/или нагревания, а также значительно снижается токсичность вследствие использования малого количества сшивателя, и поэтому может быть получен филлер, характеризующийся высокой биосовместимостью, совершив, тем самым, настоящее изобретение.As a result of conducting repeated studies to solve the problems of the prior art described above, the inventors of the present invention confirmed that by crosslinking hyaluronic acid using a polyol such as sugar alcohol together with a commonly used crosslinker, the stability under the action of hyaluronidase, reactive oxygen species (radicals) and/or heating is excellently improved, and toxicity is also significantly reduced due to the use of a small amount of the crosslinker, and therefore a filler characterized by high biocompatibility can be obtained, thereby completing the present invention.
В соответствии с этим, одна цель настоящего изобретения заключается в предложении гидрогеля из сшитой гиалуроновой кислоты, который снижает свою токсичность во время сшивания, что обеспечивает высокую безопасность и высокую долговечность в организме, и композиции для филлера, содержащего его.Accordingly, one object of the present invention is to provide a cross-linked hyaluronic acid hydrogel that reduces its toxicity during cross-linking, thereby ensuring high safety and high durability in the body, and a filler composition containing the same.
[ТЕХНИЧЕСКОЕ РЕШЕНИЕ][TECHNICAL SOLUTION]
В соответствии с одним аспектом настоящего изобретения предлагаются гидрогель из сшитой гиалуроновой кислоты, содержащий гиалуроновую кислоту или ее соль, сшиватель и полиол, в котором гиалуроновая кислота или ее соль являются сшитыми при использовании сшивателя и полиола, и филлер, содержащий гидрогель из сшитой гиалуроновой кислоты.According to one aspect of the present invention, there are provided a cross-linked hyaluronic acid hydrogel comprising hyaluronic acid or a salt thereof, a cross-linking agent and a polyol, in which the hyaluronic acid or a salt thereof is cross-linked using the cross-linking agent and the polyol, and a filler comprising the cross-linked hyaluronic acid hydrogel.
В соответствии с одним аспектом настоящего изобретения филлер предназначен для инъекции в мягкие ткани, например, для инъекции в кожу, и филлер может быть использован ради свойств заполнения, например, филлер используется таким образом, как при заполнении биологической ткани, улучшении состояния кожи при морщинах при заполнении морщин, ремоделировании лица или контурной пластике или восстановлении или увеличении объема мягкой ткани.According to one aspect of the present invention, the filler is intended for injection into soft tissue, such as for injection into skin, and the filler can be used for its filling properties, such as the filler is used in such a way as in filling biological tissue, improving the condition of skin wrinkles in filling wrinkles, facial remodeling or contouring, or restoring or increasing the volume of soft tissue.
В соответствии с одним аспектом настоящего изобретения полиол может представлять собой сахарный спирт.According to one aspect of the present invention, the polyol may be a sugar alcohol.
В соответствии с одним аспектом настоящего изобретения может быть предложен способ получения гидрогеля из сшитой гиалуроновой кислоты, включающий смешивание гиалуроновой кислоты или ее соли с полиолом и добавление смешанного раствора сшивателя и водного щелочного раствора к смеси гиалуроновой кислоты или ее соли и полиола и проведение реакции.According to one aspect of the present invention, a method for producing a hydrogel from cross-linked hyaluronic acid can be provided, comprising mixing hyaluronic acid or its salt with a polyol and adding a mixed solution of a cross-linker and an aqueous alkaline solution to the mixture of hyaluronic acid or its salt and polyol and carrying out a reaction.
В соответствии с одним аспектом настоящего изобретения предлагается предварительно заправленный шприц, заполненный филлером, содержащим сшитую гиалуроновую кислоту.According to one aspect of the present invention, there is provided a pre-filled syringe filled with a filler containing cross-linked hyaluronic acid.
[ВЫГОДНЫЕ ЭФФЕКТЫ][BENEFICIAL EFFECTS]
Увеличивается стойкость к действию гиалуронидазы, активных форм кислорода в организме и температуры хранения, поскольку в гидрогеле из сшитой гиалуроновой кислоты, соответствующем настоящему изобретению, используют сшиватель с полиолом. Поэтому филлер, содержащий данный гидрогель из сшитой гиалуроновой кислоты, характеризуется увеличенной стабильностью и уменьшенной токсичностью на протяжении периода хранения, демонстрируя высокую безопасность и превосходную долговечность в организме, и, таким образом, превосходными являются эффекты восстановления или увеличения объема мягких тканей и улучшения состояния кожи при морщинах.The resistance to the action of hyaluronidase, active oxygen species in the body and storage temperature is increased because the cross-linking agent with polyol is used in the cross-linked hyaluronic acid hydrogel according to the present invention. Therefore, the filler containing this cross-linked hyaluronic acid hydrogel is characterized by increased stability and decreased toxicity during the storage period, demonstrating high safety and excellent durability in the body, and thus the effects of restoring or increasing the volume of soft tissue and improving the skin condition of wrinkles are excellent.
[КРАТКОЕ ОПИСАНИЕ ЧЕРТЕЖЕЙ][BRIEF DESCRIPTION OF DRAWINGS]
ФИГУРА 1 представляет собой график, сопоставляющий результат по стойкости к действию фермента in vitro для гидрогеля из сшитой гиалуроновой кислоты, сшитого при использовании сшивателя и маннита из примера 1-1, соответствующего настоящему изобретению, с соответствующим результатом из сравнительных примеров от 2 до 4.FIGURE 1 is a graph comparing the result of in vitro enzyme resistance of the cross-linked hyaluronic acid hydrogel cross-linked using the cross-linker and mannitol of Example 1-1 according to the present invention with the corresponding result of Comparative Examples 2 to 4.
ФИГУРА 2 представляет собой график, сопоставляющий результат по стойкости к действию радикалов in vitro для гидрогеля из сшитой гиалуроновой кислоты, сшитого при использовании сшивателя и маннита из примера 1-1, соответствующего настоящему изобретению, с соответствующим результатом из сравнительных примеров от 2 до 4.FIGURE 2 is a graph comparing the result of in vitro radical resistance of the cross-linked hyaluronic acid hydrogel cross-linked using the cross-linker and mannitol of Example 1-1 according to the present invention with the corresponding result of Comparative Examples 2 to 4.
ФИГУРА 3 представляет собой график, сопоставляющий результат по стойкости к действию тепла in vitro для гидрогеля из сшитой гиалуроновой кислоты, сшитого при использовании сшивателя и маннита из примера 1-1, соответствующего настоящему изобретению, с соответствующим результатом из сравнительных примеров от 2 до 4.FIGURE 3 is a graph comparing the result of in vitro heat resistance of the cross-linked hyaluronic acid hydrogel cross-linked using the cross-linker and mannitol of Example 1-1 according to the present invention with the corresponding result of Comparative Examples 2 to 4.
ФИГУРА 4 представляет собой график, сопоставляющий результат по испытанию на биосовместимость in vitro для гидрогеля из сшитой гиалуроновой кислоты, сшитого при использовании сшивателя и маннита из примера 1-1, соответствующего настоящему изобретению, с соответствующим результатом из сравнительных примеров от 2 до 4.FIGURE 4 is a graph comparing the result of the in vitro biocompatibility test for the cross-linked hyaluronic acid hydrogel cross-linked using the cross-linker and mannitol of Example 1-1 according to the present invention with the corresponding result of Comparative Examples 2 to 4.
[ЛУЧШИЙ ВАРИАНТ ОСУЩЕСТВЛЕНИЯ][BEST IMPLEMENTATION OPTION]
Ниже в настоящем документе настоящее изобретение будет описываться подробно.The present invention will be described in detail below in this document.
Гиалуроновая кислота (ниже в настоящем документе также обозначаемая как «НА»), содержащаяся в гидрогеле из сшитой гиалуроновой кислоты настоящего изобретения, представляет собой биополимерное вещество, в котором линейно соединяются дисахаридные повторяющиеся звенья (дисахаридные звенья), состоящие из N-ацетил-D-глюкозамина и D-глюкуроновой кислоты, и в изобилии присутствует в стекловидном теле глаза, синовиальной жидкости суставов, петушином гребне и тому подобном и характеризуется превосходной биосовместимостью, и, таким образом, она широко используется для медицинского лечения и медицинских изделий или областей применения в косметике таким образом, как в случае офтальмологического хирургического аппарата, вискосапплементарной терапии для сустава, материалов для доставки лекарственных средств, глазных капель, добавок, улучшающих состояния кожи при морщинах, и тому подобного.Hyaluronic acid (hereinafter also referred to as "HA") contained in the cross-linked hyaluronic acid hydrogel of the present invention is a biopolymer substance in which disaccharide repeating units (disaccharide units) composed of N-acetyl-D-glucosamine and D-glucuronic acid are linearly linked, and is abundantly present in the vitreous body of the eye, synovial fluid of joints, cockscomb and the like, and is characterized by excellent biocompatibility, and thus it is widely used for medical treatment and medical products or applications in cosmetics such as in the case of an ophthalmological surgical apparatus, viscosupplement therapy for joint, drug delivery materials, eye drops, skin condition improving supplements for wrinkles, and the like.
Говоря конкретно, гиалуроновая кислота, содержащаяся в гидрогеле из гиалуроновой кислоты, соответствующем настоящему изобретению, может относиться к гиалуроновой кислоте или соли гиалуроновой кислоты. Соль гиалуроновой кислоты включает, например, все органические соли, такие как гиалуронат натрия, гиалуронат калия, гиалуронат кальция, гиалуронат магния, гиалуронат цинка, гиалуронат кобальта и гиалуронат тетрабутиламмония, но без ограничения только этим.Specifically, the hyaluronic acid contained in the hyaluronic acid hydrogel according to the present invention may refer to hyaluronic acid or a salt of hyaluronic acid. The salt of hyaluronic acid includes, for example, all organic salts such as sodium hyaluronate, potassium hyaluronate, calcium hyaluronate, magnesium hyaluronate, zinc hyaluronate, cobalt hyaluronate and tetrabutylammonium hyaluronate, but is not limited to these.
В настоящем изобретении среднемассовая молекулярная масса гиалуроновой кислоты, используемой для реакции сшивания, может составлять 1000000 Да и более, 1500000 Да и более, 2000000 Да и более, 2300000 Да и более или 2500000 Да и более, и, например, она находится в диапазоне от 1000000 до 1500000 Да, от 1000000 до 2000000 Да, от 1000000 до 3000000 Да, от 1000000 до 4000000 Да, от 1500000 до 2000000 Да, от 1500000 до 3000000 Да, от 1500000 до 4000000 Да, от 2000000 до 4000000 Да, от 2300000 до 4000000 Да, от 2000000 до 3700000 Да, от 2200000 до 3700000 Да или от 2500000 до 3500000 Да.In the present invention, the weight-average molecular weight of the hyaluronic acid used for the crosslinking reaction may be 1,000,000 Da or more, 1,500,000 Da or more, 2,000,000 Da or more, 2,300,000 Da or more, or 2,500,000 Da or more, and, for example, it is in the range of 1,000,000 to 1,500,000 Da, 1,000,000 to 2,000,000 Da, 1,000,000 to 3,000,000 Da, 1,000,000 to 4,000,000 Da, 1,500,000 to 2,000,000 Da, 1,500,000 to 3,000,000 Da, 1,500,000 to 4,000,000 Da, 2000000 to 4000000 Yes, from 2300000 to 4000000 Yes, from 2000000 to 3700000 Yes, from 2200000 to 3700000 Yes or from 2500000 to 3500000 Yes.
Гидрогель из сшитой гиалуроновой кислоты, соответствующий настоящему изобретению, характеризуется тем, что гиалуроновая кислота или ее соль являются сшитыми при использовании сшивателя и полиола.The hydrogel of cross-linked hyaluronic acid according to the present invention is characterized in that the hyaluronic acid or its salt is cross-linked using a cross-linker and a polyol.
Термин «сшитый», используемый в настоящем изобретении, относится к межмолекулярной связи, которая связывает отдельные полимерные молекулы или мономерные звенья с образованием более стабильной структуры, такой как гель. Как таковой сшитый полимер содержит, по меньшей мере, одну межмолекулярную связь, соединяющую, по меньшей мере, одну отдельную полимерную молекулу с другой.The term "crosslinked" as used in the present invention refers to an intermolecular bond that links individual polymer molecules or monomer units to form a more stable structure, such as a gel. As such, a crosslinked polymer contains at least one intermolecular bond that connects at least one individual polymer molecule to another.
Гидрогель из сшитой гиалуроновой кислоты, соответствующий настоящему изобретению, характеризуется тем, что гиалуроновая кислота или ее соль являются сшитыми при использовании сшивателя и полиола в отличие от обычного гидрогеля из гиалуроновой кислоты, сшитого только при использовании сшивателя.The cross-linked hyaluronic acid hydrogel according to the present invention is characterized in that the hyaluronic acid or its salt is cross-linked using a cross-linker and a polyol, in contrast to the conventional hyaluronic acid hydrogel, which is cross-linked only using a cross-linker.
Термин «сшиватель» обозначает любое соединение, способное индуцировать сшивание между цепями гиалуроновой кислоты, и в настоящем изобретении без ограничений может быть использован сшиватель, который может сшивать гиалуроновую кислоту или ее соль, и, например, он может варьироваться, например, как соединение, содержащее две и более эпоксидные функциональные группы. В качестве одного предпочтительного примера сшивателя он может включать эндогенные полиамин, альдегид, карбодиимид, дивинилсульфон в качестве неэпоксидного сшивателя. В дополнение к этому, эпоксидный сшиватель может включать бутандиолдиглицидиловый простой эфир (1,4-бутандиолдиглицидиловый простой эфир: BDDE), этиленгликольдиглицидиловый простой эфир (EGDGE), гександиолдиглицидиловый простой эфир (1,6-гександиолдиглицидиловый простой эфир), пропиленгликольдиглицидиловый простой эфир, полипропиленгликольдиглицидиловый простой эфир, политетраметиленгликольдиглицидиловый простой эфир, неопентилгликольдиглицидиловый простой эфир, полиглицеринполиглицидиловый простой эфир, диглицеринполиглицидиловый простой эфир, глицеринполиглицидиловый простой эфир, триметилпропанполиглицидиловый простой эфир, бисэпоксипропоксиэтилен(1,2-(бис(2,3-эпоксипропокси)этилен), пентаэритритполиглицидиловый простой эфир и сорбитполиглицидиловый простой эфир и тому подобное, и в их числе с точки зрения низкой токсичности в особенности предпочтительным является 1,4-бутандиолдиглициловый простой эфир на биэпоксидной основе.The term "crosslinker" means any compound capable of inducing crosslinking between hyaluronic acid chains, and in the present invention, a crosslinker that can crosslink hyaluronic acid or its salt can be used without limitation, and, for example, it can be varied as a compound containing two or more epoxy functional groups. As one preferable example of the crosslinker, it can include endogenous polyamine, aldehyde, carbodiimide, divinyl sulfone as a non-epoxy crosslinker. In addition, the epoxy crosslinker may include butanediol diglycidyl ether (1,4-butanediol diglycidyl ether: BDDE), ethylene glycol diglycidyl ether (EGDGE), hexanediol diglycidyl ether (1,6-hexanediol diglycidyl ether), propylene glycol diglycidyl ether, polypropylene glycol diglycidyl ether, polytetramethylene glycol diglycidyl ether, neopentyl glycol diglycidyl ether, polyglycerol polyglycidyl ether, diglycerol polyglycidyl ether, glycerol polyglycidyl ether, trimethylpropane polyglycidyl ether, bisepoxypropoxyethylene (1,2-(bis(2,3-epoxypropoxy)ethylene), pentaerythritol polyglycidyl ether and sorbitol polyglycidyl ether and the like, and among them, 1,4-butanediol diglycyl ether on a bisepoxy base is particularly preferable from the viewpoint of low toxicity.
Полиол, который сшивает гиалуроновую кислоту или ее приемлемую соль при использовании сшивателя, соединяется со сшивателем для сшивания гиалуроновой кислоты или ее приемлемой соли. Данный полиол относится к органической молекуле, содержащей 2 и более свободные гидрокси-группы, и это может быть полиол, содержащий от 2 до 20 атомов углерода, говоря более конкретно, сахарный спирт. Полиол, подходящий для использования в настоящем изобретении, может представлять собой насыщенное или ненасыщенное, линейное, разветвленное или циклическое алкилсодержащее соединение, которое в своей алкильной цепи содержит, по меньшей мере, 2 функциональные группы -ОН, например, 3 и более функциональные группы -ОН, а, говоря более конкретно, 4 и более функциональные группы -ОН. Неограничивающие примеры полиола представляют собой нижеследующее: глицерин, 1,3-пропандиол, изопренгликоль, пентиленгликоль, гексиленгликоль, гликоль, такой как этиленгликоль, пропиленгликоль, бутиленгликоль, диэтиленгликоль; полиглицерин, содержащий от 2 до 6 повторяющихся звеньев, например, диглицерин, эритрит, арабит, адонит, сорбит, маннит, ксилит, дульцит, глюкоза, фруктоза, ксилоза, трегалоза, мальтоза, сахароза, лактоза; и их производные и их смеси, такие как метилглюкозидфосфат. Говоря более конкретно, полиол может быть выбран из группы, состоящей из маннита, сорбита и ксилита. В настоящем изобретении в полиоле функциональная группа -ОН вступает в реакцию с активными формами кислорода, что делает активные формы кислорода неактивными, ингибируя, тем самым, разложение филлера активными формами кислорода.A polyol that crosslinks hyaluronic acid or an acceptable salt thereof using a crosslinker is combined with a crosslinker to crosslink hyaluronic acid or an acceptable salt thereof. This polyol refers to an organic molecule containing 2 or more free hydroxy groups, and it can be a polyol containing from 2 to 20 carbon atoms, more specifically, a sugar alcohol. The polyol suitable for use in the present invention can be a saturated or unsaturated, linear, branched or cyclic alkyl-containing compound that contains at least 2 -OH functional groups in its alkyl chain, for example, 3 or more -OH functional groups, and more specifically, 4 or more -OH functional groups. Non-limiting examples of polyol are the following: glycerol, 1,3-propanediol, isoprene glycol, pentylene glycol, hexylene glycol, glycol such as ethylene glycol, propylene glycol, butylene glycol, diethylene glycol; polyglycerol containing from 2 to 6 repeating units, for example, diglycerol, erythritol, arabitol, adonitol, sorbitol, mannitol, xylitol, dulcitol, glucose, fructose, xylose, trehalose, maltose, sucrose, lactose; and derivatives thereof and mixtures thereof, such as methyl glucoside phosphate. More specifically, the polyol can be selected from the group consisting of mannitol, sorbitol and xylitol. In the present invention, the -OH functional group in the polyol reacts with reactive oxygen species, which makes the reactive oxygen species inactive, thereby inhibiting the degradation of the filler by reactive oxygen species.
В рамках одного конкретного примера гиалуроновая кислота или ее приемлемая соль могут быть соединены со сшивателем и полиолом следующим образом:In one specific example, hyaluronic acid or a suitable salt thereof can be combined with a crosslinker and a polyol as follows:
Говоря другими словами, гидрокси-группа гиалуроновой кислоты или ее приемлемой соли соединяется с одной из эпоксидных групп на обоих концах сшивателя, а эпоксидная группа другого конца сшивателя и гидрокси-группа полиола соединяются с образованием системы гиалуроновая кислота-сшиватель-полиол. Кроме того еще, еще одна гидрокси-группа полиола непрерывно соединяется с гидрокси-группой новой гиалуроновой кислоты или ее приемлемой соли следующим далее образом, и в конечном счете получают гидрогель из сшитой гиалуроновойIn other words, the hydroxy group of hyaluronic acid or its acceptable salt is combined with one of the epoxy groups at both ends of the crosslinker, and the epoxy group of the other end of the crosslinker and the hydroxy group of the polyol are combined to form a hyaluronic acid-crosslinker-polyol system. In addition, another hydroxy group of the polyol is continuously combined with the hydroxy group of the new hyaluronic acid or its acceptable salt in the following manner, and ultimately a crosslinked hyaluronic acid hydrogel is obtained.
кислоты.acids.
Гидрогель из сшитой гиалуроновой кислоты, соответствующий настоящему изобретению, характеризуется степенью модифицирования (MoD) в диапазоне от приблизительно 3 до приблизительно 100, предпочтительно от приблизительно 3 до приблизительно 80, более предпочтительно от приблизительно 3 до приблизительно 50.The cross-linked hyaluronic acid hydrogel according to the present invention is characterized by a modification degree (MoD) in the range of from about 3 to about 100, preferably from about 3 to about 80, more preferably from about 3 to about 50.
В дополнение к этому, в настоящем изобретении термин «степень модифицирования (MoD)» относится к молярному соотношению между совокупным сшивателем, соединенным с гиалуроновой кислотой, и количеством молей совокупной единичной гиалуроновой кислоты, и это можно выразить так, как в представленном ниже уравнении 1.In addition, in the present invention, the term “modification degree (MoD)” refers to the molar ratio between the total crosslinker combined with hyaluronic acid and the number of moles of the total single hyaluronic acid, and this can be expressed as in Equation 1 below.
[Уравнение 1][Equation 1]
Степень модифицирования (MoD)=Количество молей сшивателя, соединенного с гиалуроновой кислотой/количество молей единичной гиалуроновой кислотыModification Degree (MoD) = Number of moles of crosslinker combined with hyaluronic acid / Number of moles of single hyaluronic acid
Гидрогель из сшитой гиалуроновой кислоты, соответствующий настоящему изобретению, может содержать совокупную гиалуроновую кислоту в количестве в диапазоне от приблизительно 10 мг/г до приблизительно 40 мг/г, предпочтительно от приблизительно 15 мг/г до приблизительно 35 мг/г, намного более предпочтительно от приблизительно 20 мг/г до приблизительно 30 мг/г, при расчете на совокупную массу гидрогеля из сшитой гиалуроновой кислоты.The cross-linked hyaluronic acid hydrogel according to the present invention may contain total hyaluronic acid in an amount in the range of from about 10 mg/g to about 40 mg/g, preferably from about 15 mg/g to about 35 mg/g, much more preferably from about 20 mg/g to about 30 mg/g, based on the total weight of the cross-linked hyaluronic acid hydrogel.
Гидрогель из сшитой гиалуроновой кислоты, соответствующий настоящему изобретению, демонстрирует эффект замещения разложения гиалуроновой кислоты активными формами кислорода, при котором полиол химически объединяется с гиалуроновой кислотой или ее солью и создает структурные помехи реализации механизма связывания и разложения для гиалуронидазы, и, тем самым, ему свойственно преимущество, заключающееся в том, что при инъекции филлера, содержащего гидрогель из сшитой гиалуроновой кислоты, в организм человека обнаруживается эффект ингибирования разложения филлера, так что после инъекции в организм увеличивается долговечность. В дополнение к этому, гидрогель из сшитой гиалуроновой кислоты может разлагаться, когда разрывается β-1-4-глюкозидная связь, где данная химическая связь между молекулами гиалуроновой кислоты является относительно слабой, под действием не только фермента, как это представлено выше, но также и тепла, и в соответствии с настоящим изобретением полиол характеризуется термической стабильностью, которая ингибирует термическое разложение такой гиалуроновой кислоты, и обнаруживает преимущество во время хранения, так что он является очень хорошо подходящим для использования в качестве филлера.The cross-linked hyaluronic acid hydrogel according to the present invention exhibits the effect of replacing the decomposition of hyaluronic acid with active oxygen species, in which a polyol chemically combines with hyaluronic acid or its salt and creates structural interference with the implementation of the binding and decomposition mechanism for hyaluronidase, and thus has the advantage that when a filler containing a cross-linked hyaluronic acid hydrogel is injected into a human body, an effect of inhibiting the decomposition of the filler is detected, so that durability is increased after injection into the body. In addition, the cross-linked hyaluronic acid hydrogel can be decomposed when the β-1-4-glucoside bond is broken, where this chemical bond between hyaluronic acid molecules is relatively weak, under the action of not only the enzyme as presented above but also heat, and according to the present invention, the polyol is characterized by thermal stability that inhibits the thermal decomposition of such hyaluronic acid, and exhibits an advantage during storage, so that it is very suitable for use as a filler.
В рамках еще одного аспекта настоящее изобретение относится к способу получения гидрогеля из сшитой гиалуроновой кислоты при использовании сшивателя и полиола. Говоря конкретно, способ получения гидрогеля из сшитой гиалуроновой кислоты, соответствующего настоящему изобретению, может включать (i) смешивание гиалуроновой кислоты или ее соли с полиолом; и (ii) добавление смешанного раствора сшивателя и водного щелочного раствора к смеси гиалуроновой кислоты или ее соли и полиола и проведение реакции.In another aspect, the present invention relates to a method for producing a cross-linked hyaluronic acid hydrogel using a cross-linking agent and a polyol. Specifically, the method for producing a cross-linked hyaluronic acid hydrogel according to the present invention may comprise (i) mixing hyaluronic acid or a salt thereof with a polyol; and (ii) adding a mixed solution of a cross-linking agent and an aqueous alkaline solution to a mixture of hyaluronic acid or a salt thereof and a polyol and carrying out a reaction.
В способе получения в том, что касается гиалуроновой кислоты или ее соли, сшивателя и полиола, равным образом может применяться то, что относится к гидрогелю из сшитой гиалуроновой кислоты, если только не будет утверждаться другого.In the method of production, in relation to the hyaluronic acid or its salt, the crosslinker and the polyol, the same may be applied as for the hydrogel of crosslinked hyaluronic acid, unless otherwise stated.
В дополнение к этому, среднемассовая молекулярная масса гиалуроновой кислоты или ее соли может составлять 1000000 Да и более, 1500000 Да и более, 2000000 Да и более, 2300000 Да и более или 2500000 Да и более, и, например, она находится в диапазоне от 1000000 до 1500000 Да, от 1000000 до 2000000 Да, от 1000000 до 3000000 Да, от 1000000 до 4000000 Да, от 1500000 до 2000000 Да, от 1500000 до 3000000 Да, от 1500000 до 4000000 Да, от 2000000 до 4000000 Да, от 2000000 до 3700000 Да, от 2200000 до 3700000 Да или от 2500000 до 3500000 Да.In addition, the average molecular weight of hyaluronic acid or its salt may be 1,000,000 Da or more, 1,500,000 Da or more, 2,000,000 Da or more, 2,300,000 Da or more, or 2,500,000 Da or more, and, for example, it is in the range of 1,000,000 to 1,500,000 Da, 1,000,000 to 2,000,000 Da, 1,000,000 to 3,000,000 Da, 1,000,000 to 4,000,000 Da, 1,500,000 to 2,000,000 Da, 1,500,000 to 3,000,000 Da, 1,500,000 to 4,000,000 Da, 2,000,000 to 4000000 Yes, from 2000000 to 3700000 Yes, from 2200000 to 3700000 Yes or from 2500000 to 3500000 Yes.
С другой стороны, концентрация полиола, используемого в способе получения, может находиться в диапазоне от 5 до 100% (моль.), от 10 до 100% (моль.), от 10 до 90% (моль.) или от 10 до 80% (моль.), при расчете на гиалуроновую кислоту или ее соль, но без ограничения только этим, и может быть надлежащим образом подстроена в зависимости от условий реакции.On the other hand, the concentration of the polyol used in the production method may be in a range of 5 to 100% (mol), 10 to 100% (mol), 10 to 90% (mol), or 10 to 80% (mol), based on hyaluronic acid or a salt thereof, but not limited thereto, and may be appropriately adjusted depending on the reaction conditions.
В дополнение к этому, водный щелочной раствор может быть использован без ограничений до тех пор, пока о нем будет известно, что это водный щелочной раствор, подходящий для использования при сшивании гиалуроновой кислоты, и, например, им может быть NaOH, KOH, NaHCO3, LiOH или их комбинация, а предпочтительно им может быть NaOH. Концентрация водного щелочного раствора может находиться в диапазоне от 0,1 до 0,5 н., но без ограничения только этим. Концентрация водного щелочного раствора, используемого в способе получения, может находиться в диапазоне от 5 до 100% (моль.), от 10 до 100% (моль.), от 10 до 90% (моль.) или от 10 до 80% (моль.), при расчете на гиалуроновую кислоту или ее соль, но без ограничения только этим, и она может быть надлежащим образом подстроена в зависимости от условий реакции.In addition, the aqueous alkaline solution can be used without limitation as long as it is known to be an aqueous alkaline solution suitable for use in crosslinking hyaluronic acid, and for example, it may be NaOH, KOH,NaHCO3 , LiOH or a combination thereof, and it may be preferably NaOH. The concentration of the aqueous alkaline solution may be in the range of 0.1 to 0.5N, but not limited thereto. The concentration of the aqueous alkaline solution used in the production method may be in the range of 5 to 100% (mol), 10 to 100% (mol), 10 to 90% (mol) or 10 to 80% (mol), based on hyaluronic acid or a salt thereof, but not limited thereto, and it can be appropriately adjusted depending on the reaction conditions.
При использовании концентрации сшивателя и/или полиола на уровне высокой концентрации, превышающей вышеупомянутый диапазон, получают филлер, характеризующийся избыточно высокой эластичностью, а при концентрации, меньшей, чем вышеупомянутый диапазон, эластичность чрезмерно низкая для демонстрации надлежащей вязкоэластичности. Говоря конкретно, реакция сшивания может быть проведена в результате перемешивания смеси из гиалуроновой кислоты или ее соли и полиола и сшивателя и водного щелочного раствора для их гомогенного смешивания, а после этого выдерживания их на протяжении определенного периода времени. Температура во время реакции сшивания может быть комнатной или более высокой температурой, предпочтительно находясь в температурном диапазоне от 25 до 65°С или от 27 до 55°С на протяжении от 1 до 22 часов или от 2 до 20 часов.When using a concentration of a crosslinker and/or a polyol at a high concentration level exceeding the above-mentioned range, a filler characterized by excessively high elasticity is obtained, and when the concentration is lower than the above-mentioned range, the elasticity is too low to demonstrate proper viscoelasticity. Specifically, the crosslinking reaction can be carried out by stirring a mixture of hyaluronic acid or its salt and a polyol and a crosslinker and an aqueous alkaline solution to mix them homogeneously, and then holding them for a certain period of time. The temperature during the crosslinking reaction can be room temperature or higher, preferably in a temperature range of 25 to 65 °C or 27 to 55 °C for 1 to 22 hours or 2 to 20 hours.
В способе получения, соответствующем настоящему изобретению, совокупная концентрация в реакции (то есть, соотношение между суммарной массой гиалуроновой кислоты и полиола и совокупной массой гиалуроновой кислоты, полиола и растворителя) может находиться в диапазоне от 5 до 30% (масс./масс.) или от 10 до 30% (масс./масс.).In the production method according to the present invention, the total concentration in the reaction (that is, the ratio between the total weight of hyaluronic acid and polyol and the total weight of hyaluronic acid, polyol and solvent) may be in the range of 5 to 30% (w/w) or 10 to 30% (w/w).
В одном конкретном примере настоящего изобретения вещество получали в результате смешивания маннита, сорбита или ксилита в количестве 10% (моль.) при расчете на гиалуроновую кислоту с гиалуроновой кислотой, смешивания смешанного раствора из раствора NaOH и 1,4-BDDE и выдерживания при температуре в диапазоне от 30 до 50°С на протяжении 2 часов, а после этого промывания/нейтрализации/набухания сшитого геля и вслед за этим измельчения его в порошок при использовании ячеистой сетки, а затем стерилизации.In one specific example of the present invention, a substance was obtained by mixing mannitol, sorbitol or xylitol in an amount of 10% (mol) based on hyaluronic acid with hyaluronic acid, mixing a mixed solution of NaOH solution and 1,4-BDDE and keeping it at a temperature in the range of 30 to 50°C for 2 hours, and then washing/neutralizing/swelling the cross-linked gel and then grinding it into powder using a mesh net, and then sterilizing.
В другом аспекте настоящее изобретение относится к филлеру, содержащему гидрогель из сшитой гиалуроновой кислоты.In another aspect, the present invention relates to a filler comprising a cross-linked hyaluronic acid hydrogel.
Филлер может содержать гидрогель из сшитой гиалуроновой кислоты в количестве в диапазоне от 0,5 до 10% (масс.), предпочтительно от 1 до 5% (масс.), при расчете на совокупную массу филлера.The filler may contain a cross-linked hyaluronic acid hydrogel in an amount in the range of 0.5 to 10% (wt.), preferably 1 to 5% (wt.), based on the total weight of the filler.
Кроме того еще, в дополнение к гидрогелю из сшитой гиалуроновой кислоты филлер, содержащий гидрогель из сшитой гиалуроновой кислоты, соответствующий настоящему изобретению, может дополнительно содержать анестетик для уменьшения болей у пациента во время инъекции.Furthermore, in addition to the cross-linked hyaluronic acid hydrogel, the filler containing the cross-linked hyaluronic acid hydrogel according to the present invention may further contain an anesthetic to reduce pain in the patient during injection.
Анестетик включает, по меньшей мере, один анестетик, известный на современном уровне техники, предпочтительно местный анестетик, и концентрация таких одного или нескольких анестетиков представляет собой количество, эффективное для облегчения болей, испытываемых при инъекции композиции. Пример анестетика может быть выбран из группы, состоящей из амбукаина, амоланона, амилокаина, беноксината, бензокаина, бетоксикаина, бифенамина, бупивакаина, бутакаина, бутамбена, бутаниликаина, бутетамина, бутоксикаина, картикаина, хлорпрокаина, кокаэтилена, кокаина, циклометикаина, дибукаина, диметизохина, диметокаина, диперодона, дициклонина, экгонидина, экгонина, этилхлорида, этидокаина, бета-эукаина, эупроцина, феналкомина, формокаина, гексилкаина, гидрокситетракаина, изобутил-п-аминобензоата, лейцинокаинмезилата, левоксадрола, лидокаина, мепивакаина, меприлкаина, метабутоксикаина, метилхлорида, миртекаина, наэпаина, октакаина, ортокаина, оксетазаина, паретоксикаина, фенакаина, фенола, пиперокаина, пиридокаина, полидоканола, прамоксина, прилокаина, прокаина, пропанокаина, пропаракаина, пропипокаина, пропоксикаина, псевдококаина, пиррокаина, ропивакаина, салицилового спирта, тетракаина, толикаина, тримекаина, золамина и их солей. В одном варианте осуществления анестетик может представлять собой лидокаин, например, в форме лидокаингидрохлорида.The anesthetic comprises at least one anesthetic known in the art, preferably a local anesthetic, and the concentration of such one or more anesthetics is an amount effective to relieve pain experienced upon injection of the composition. An example of an anesthetic may be selected from the group consisting of ambucaine, amolanone, amylocaine, benoxinate, benzocaine, betoxycaine, biphenamine, bupivacaine, butacaine, butamben, butanilicaine, butethamine, butoxycaine, carticaine, chloroprocaine, cocaethylene, cocaine, cyclomethicine, dibucaine, dimethisoquine, dimethocaine, diperodone, dicyclonine, ecgonidine, ecgonine, ethyl chloride, etidocaine, beta-eucaine, euprocin, phenalcomine, formocaine, hexylcaine, hydroxytetracaine, isobutyl-p-aminobenzoate, leucinocaine mesylate, levoxadrol, lidocaine, mepivacaine, meprylcaine, metabutoxycaine, methyl chloride, mirtecaine, naepaine, octacaine, orthocaine, oxetazine, parethoxycaine, menacaine, phenol, piperocaine, pyridocaine, polidocanol, pramoxine, prilocaine, procaine, propanocaine, proparacaine, propipocaine, propoxycaine, pseudococaine, pyrrocaine, ropivacaine, salicylic alcohol, tetracaine, tolycaine, trimecaine, zolamine and salts thereof. In one embodiment, the anesthetic may be lidocaine, such as lidocaine hydrochloride.
В филлере, содержащем гидрогель из сшитой гиалуроновой кислоты, соответствующий настоящему изобретению, концентрация анестетика, содержащегося в филлере, может находиться в диапазоне от приблизительно 0,1% (масс.) до приблизительно 1,0% (масс.) при расчете на совокупную массу филлера, например, от приблизительно 0,2% (масс.) до приблизительно 0,5% (масс.), от композиции. Она предпочтительно может составлять 0,3% (масс.).In the filler comprising the cross-linked hyaluronic acid hydrogel according to the present invention, the concentration of the anesthetic contained in the filler may be in the range of about 0.1% (w/w) to about 1.0% (w/w) based on the total weight of the filler, for example, about 0.2% (w/w) to about 0.5% (w/w) of the composition. It may preferably be 0.3% (w/w).
Концентрация анестетика в филлере, соответствующем настоящему изобретению, может быть терапевтически эффективной, и это означает концентрацию, подходящую для использования при получении преимуществ применительно к удобству методики и соблюдению пациентом режима и схемы лечения без причинения вреда пациенту.The concentration of the anesthetic in the filler according to the present invention may be therapeutically effective, and this means a concentration suitable for use in obtaining advantages in terms of convenience of the technique and patient compliance with the treatment regimen and schedule without causing harm to the patient.
В дополнение к этому, филлер, соответствующий настоящему изобретению, может дополнительно содержать буферный раствор, и буферный раствор может быть использован без ограничений до тех пор, пока его используют для получения гидрогеля из гиалуроновой кислоты. Пример предпочтительного буферного раствора может включать буферный раствор, содержащий один или несколько типов вариантов, выбираемых из группы, состоящей из лимонной кислоты, моногидрофосфата натрия, дигидрофосфата натрия, диэтилбарбитуровой кислоты, ацетата натрия, TAPS (трис(гидроксиметил)метиламино)пропансульфоната), бицина (2-бис(2-гидроксиэтил)амино)ацетата), Tris (трис(гидроксиметил)аммонийметана), трицина (N-(2-гидрокси-1,1-бис(гидроксиметил)этил)глицина), HEPES (4-(2-гидроксиэтил)-1-пиперазинэтансульфоната), TES (2-[[1,3-дигидрокси-2-(гидроксиметил)пропан-2-ил]амино]метансульфоната) и PIPES (пиперазин-N, N’-бис(2-этансульфоната)), но без ограничения только этим. Уровень содержания вышеупомянутых компонентов, содержащихся в буферном растворе, может быть надлежащим образом подстроен, но предпочтительно он может быть заключен в диапазоне концентраций от 0,3 до 2,0 г/л при расчете на буферный раствор.In addition, the filler according to the present invention may further contain a buffer solution, and the buffer solution can be used without limitation as long as it is used to produce a hyaluronic acid hydrogel. An example of a preferred buffer solution may include a buffer solution containing one or more types of variants selected from the group consisting of citric acid, sodium monohydrogen phosphate, sodium dihydrogen phosphate, diethylbarbituric acid, sodium acetate, TAPS (tris(hydroxymethyl)methylamino)propanesulfonate), bicine (2-bis(2-hydroxyethyl)amino)acetate), Tris (tris(hydroxymethyl)ammoniummethane), tricine (N-(2-hydroxy-1,1-bis(hydroxymethyl)ethyl)glycine), HEPES (4-(2-hydroxyethyl)-1-piperazineethanesulfonate), TES (2-[[1,3-dihydroxy-2-(hydroxymethyl)propan-2-yl]amino]methanesulfonate) and PIPES (piperazine-N,N'-bis(2-ethanesulfonate)), but not limited to these. The content level of the above-mentioned components contained in the buffer solution may be appropriately adjusted, but it may preferably be within a concentration range of 0.3 to 2.0 g/L based on the buffer solution.
В дополнение к этому, филлер, соответствующий настоящему изобретению, может дополнительно содержать изотонический агент, и данный изотонический агент может быть использован без ограничений до тех пор, пока его используют для получения филлера, и он может содержаться в буферном растворе. В качестве предпочтительного изотонического агента может быть использован хлорид натрия, но без ограничения только этим. Уровень содержания изотонического агента может быть надлежащим образом подстроен по мере надобности, и, например, он может быть заключен диапазоне от 7,0 до 9,0 г/л при расчете на буферный раствор, но без ограничения только этим.In addition, the filler according to the present invention may further contain an isotonic agent, and this isotonic agent can be used without limitation as long as it is used to produce the filler, and it can be contained in a buffer solution. As a preferable isotonic agent, sodium chloride can be used, but is not limited to this. The content level of the isotonic agent can be appropriately adjusted as needed, and for example, it can be in a range of 7.0 to 9.0 g/L based on the buffer solution, but is not limited to this.
В одном примере, соответствующем настоящему изобретению, использовали буферный раствор, содержащий хлорид натрия, моногидрофосфат натрия и дигидрофосфат натрия в воде для инъекций.In one example according to the present invention, a buffer solution containing sodium chloride, sodium monohydrogen phosphate and sodium dihydrogen phosphate in water for injection was used.
В рамках одного дополнительного аспекта филлер, содержащий гидрогель из сшитой гиалуроновой кислоты, соответствующий настоящему изобретению, в дополнение к вышеупомянутому компоненту может дополнительно содержать приемлемые компоненты, включенные в получение филлера.In one further aspect, the filler comprising the cross-linked hyaluronic acid hydrogel according to the present invention, in addition to the above-mentioned component, may further comprise suitable components included in the preparation of the filler.
Филлеру, содержащему гидрогель из сшитой гиалуроновой кислоты, соответствующий настоящему изобретению, свойственно преимущество, заключающееся в возможности значительного увеличения периода хранения в сопоставлении с обычными рецептурами филлера на основе гиалуроновой кислоты вследствие высокой термической стабильности. В дополнение к этому, он характеризуется высокой стойкостью к разложению гиалуронидазой и активными формами кислорода (радикалами), так что он может значительно увеличить долговечность после инъекции в организм человека. Поскольку он обнаруживает исключительно превосходные свойства применительно к биосовместимости и токсичности, он может оказаться очень хорошо подходящим для использования в косметических или терапевтических целях.The filler containing the cross-linked hyaluronic acid hydrogel according to the present invention has the advantage of being able to significantly extend the shelf life compared with conventional hyaluronic acid filler formulations due to its high thermal stability. In addition, it is characterized by high resistance to degradation by hyaluronidase and reactive oxygen species (radicals), so that it can significantly increase the durability after injection into the human body. Since it exhibits extremely excellent properties in terms of biocompatibility and toxicity, it may be very suitable for use in cosmetic or therapeutic purposes.
В рамках одного конкретного аспекта филлер, содержащий гидрогель из сшитой гиалуроновой кислоты, соответствующий настоящему изобретению, может быть использован для улучшения состояния кожи при морщинах в результате заполнения биологической ткани и заполнения морщин, ремоделирования лица или восстановления или увеличения объема мягкой ткани, такой как губы, нос, бедро, щека или грудь, и тому подобного. Филлер, содержащий гидрогель из гиалуроновой кислоты, может быть введен в форме введения, подходящей для такого использования, и это может быть предпочтительно инъекция, более предпочтительно инъекция из предварительно заполненного шприца (предварительно заправленного шприца).In one particular aspect, the filler comprising the cross-linked hyaluronic acid hydrogel according to the present invention can be used for improving the skin condition of wrinkles by filling biological tissue and filling wrinkles, facial remodeling, or restoring or increasing the volume of soft tissue such as lips, nose, thigh, cheek or breast, and the like. The filler comprising the hyaluronic acid hydrogel can be administered in an administration form suitable for such use, and it can be preferably an injection, more preferably an injection from a pre-filled syringe (pre-filled syringe).
В рамках другого аспекта настоящее изобретение относится к способу получения филлера, содержащего гидрогель из сшитой гиалуроновой кислоты, соответствующий вышеупомянутому, включающему следующие далее стадии:In another aspect, the present invention relates to a method for producing a filler comprising a cross-linked hyaluronic acid hydrogel according to the above, comprising the following steps:
(а) смешивание гиалуроновой кислоты или ее соли с полиолом;(a) mixing hyaluronic acid or its salt with a polyol;
(b) добавление смешанного раствора сшивателя и водного щелочного раствора к смеси гиалуроновой кислоты или ее соли и полиола и проведение реакции для получения гидрогеля из сшитой гиалуроновой кислоты;(b) adding a mixed solution of a crosslinker and an aqueous alkaline solution to a mixture of hyaluronic acid or its salt and a polyol and carrying out a reaction to obtain a hydrogel from crosslinked hyaluronic acid;
(с) черновая резка гидрогеля из гиалуроновой кислоты, полученного на стадии (b);(c) rough cutting of the hyaluronic acid hydrogel obtained in step (b);
(d) промывание и набухание подвергнутого черновой резке гидрогеля из гиалуроновой кислоты, полученного на стадии (b), при использовании буферного раствора; и(d) washing and swelling the roughly cut hyaluronic acid hydrogel obtained in step (b) using a buffer solution; and
(е) измельчение в порошок гидрогеля из гиалуроновой кислоты, подвергнутого промыванию и набуханию на стадии (d).(e) grinding into powder the hyaluronic acid hydrogel subjected to washing and swelling in step (d).
Стадии (а) и (b) являются стадиями получения гидрогеля из сшитой гиалуроновой кислоты в результате сшивания гиалуроновой кислоты или ее соли при использовании сшивателя и полиола применительно к водному щелочному раствору, и в том, что касается гиалуроновой кислоты или ее соли, сшивателя, полиола и гидрогеля из сшитой гиалуроновой кислоты, равным образом может применяться то, что было упомянуто для гидрогеля из сшитой гиалуроновой кислоты и способа его получения.Steps (a) and (b) are steps for obtaining a cross-linked hyaluronic acid hydrogel by cross-linking hyaluronic acid or its salt using a cross-linking agent and a polyol in relation to an aqueous alkaline solution, and with respect to the hyaluronic acid or its salt, the cross-linking agent, the polyol and the cross-linked hyaluronic acid hydrogel, what has been mentioned for the cross-linked hyaluronic acid hydrogel and the method for obtaining it can equally be applied.
В технологическом процессе черновой резки (стадия (с)) могут быть использованы различные технологические процессы черновой резки гидрогеля из гиалуроновой кислоты. В одном примере гидрогель из сшитой гиалуроновой кислоты, полученный после реакции, может быть получен с профилем брусков (или цилиндров), и их можно разделить до профиля полумесяца, например, на 6 частей при использовании режущего устройства, такого как соломорезка. После этого технологический процесс черновой резки может быть реализован в результате перепускания геля, разделенного так, как это описывалось выше, (предпочтительно два и более раза) при использовании режущего устройства, характеризующегося постоянным интервалом между лезвиями.In the rough cutting process (step (c)) various rough cutting processes of the hyaluronic acid hydrogel can be used. In one example, the cross-linked hyaluronic acid hydrogel obtained after the reaction can be obtained with a bar (or cylinder) profile, and they can be divided into a crescent profile, for example, into 6 parts using a cutting device such as a straw cutter. After this, the rough cutting process can be realized by passing the gel divided as described above (preferably two or more times) using a cutting device characterized by a constant interval between the blades.
Получение можно провести в соответствии с известными способами получения буферных растворов, используемыми на стадии (d). В дополнение к этому, в буферном растворе, кроме того, может дополнительно содержаться анестетик. Буферный раствор может быть использован без ограничений до тех пор, пока его используют для получения гидрогеля из гиалуроновой кислоты. В рамках примера данного предпочтительного буферного раствора используют буферный раствор, содержащий один или несколько типов вариантов, выбираемых из группы, состоящей из лимонной кислоты, моногидрофосфата натрия, дигидрофосфата натрия, диэтилбарбитуровой кислоты, ацетата натрия, TAPS (трис(гидроксиметил)метиламино)пропансульфоната), бицина (2-бис(2-гидроксиэтил)амино)ацетата), Tris (трис(гидроксиметил)аммонийметана), трицина (N-(2-гидрокси-1,1-бис(гидроксиметил)этил)глицина), HEPES (4-(2-гидроксиэтил)-1-пиперазинэтансульфоната), TES (2-[[1,3-дигидрокси-2-(гидроксиметил)пропан-2-ил]амино]метансульфоната) и PIPES (пиперазин-N, N’-бис(2-этансульфоната)), но без ограничения только этим.The preparation can be carried out in accordance with known methods for preparing buffer solutions used in step (d). In addition, the buffer solution may additionally contain an anesthetic. The buffer solution can be used without limitation as long as it is used to prepare a hydrogel from hyaluronic acid. In the example of this preferred buffer solution, a buffer solution containing one or more types of variants selected from the group consisting of citric acid, sodium monohydrogen phosphate, sodium dihydrogen phosphate, diethylbarbituric acid, sodium acetate, TAPS (tris(hydroxymethyl)methylamino)propanesulfonate), bicine (2-bis(2-hydroxyethyl)amino)acetate), Tris (tris(hydroxymethyl)ammoniummethane), tricine (N-(2-hydroxy-1,1-bis(hydroxymethyl)ethyl)glycine), HEPES (4-(2-hydroxyethyl)-1-piperazineethanesulfonate), TES (2-[[1,3-dihydroxy-2-(hydroxymethyl)propan-2-yl]amino]methanesulfonate) and PIPES (piperazine-N,N'-bis(2-ethanesulfonate)), but not limited to these, is used.
В дополнение к этому, промывание и набухание могут быть повторены один или два раза. При завершении промывания и набухания промывочный раствор может быть удален.In addition, the rinsing and swelling can be repeated once or twice. When the rinsing and swelling is completed, the rinsing solution can be removed.
Стадия (е) является стадией измельчения в порошок промытого и набухшего гидрогеля, и это измельчение в порошок может быть проведено по различным способам измельчения в порошок, но предпочтительно это экструзионное измельчение в порошок.Step (e) is a step of grinding the washed and swollen hydrogel into powder, and this grinding into powder can be carried out by various grinding methods, but it is preferably extrusion grinding into powder.
В рамках одного дополнительного аспекта филлер на основе сшитого гидрогеля, полученный после стадии (е), может проходить через технологический процесс стерилизации и/или пеноудаления и тому подобного, и он может быть заправлен, герметизирован и стерилизован в большом количестве в надлежащей емкости, например, предварительно заправленном шприце.In one further aspect, the cross-linked hydrogel filler obtained after step (e) may be subjected to a sterilization and/or defoaming process and the like, and may be filled, sealed and sterilized in bulk in a suitable container, such as a pre-filled syringe.
[ПРИНЦИП ИЗОБРЕТЕНИЯ][PRINCIPLE OF THE INVENTION]
Ниже в настоящем документе для содействия пониманию настоящего изобретения оно будет описано подробно при использовании примеров. Однако, следующие далее примеры предназначены только для иллюстрации содержания настоящего изобретения, но объем настоящего изобретения следующими далее примерами не ограничивается. Примеры настоящего изобретения представлены для более полного разъяснения настоящего изобретения специалистам в соответствующей области техники.In the following document, in order to facilitate understanding of the present invention, the present invention will be described in detail using examples. However, the following examples are intended only to illustrate the contents of the present invention, but the scope of the present invention is not limited by the following examples. The examples of the present invention are provided to more fully explain the present invention to those skilled in the art.
[Примеры][Examples]
Пример 1-1: Получение гидрогеля из сшитой гиалуроновой кислоты, сшитого при использовании маннита и сшивателя в соответствии с настоящим изобретением (1)Example 1-1: Preparation of a hydrogel of cross-linked hyaluronic acid cross-linked using mannitol and a cross-linker according to the present invention (1)
В целях получения гидрогеля из сшитой гиалуроновой кислоты, сшитого при использовании маннита и сшивателя в соответствии с настоящим изобретением, реализовали следующий далее технологический процесс.In order to obtain a hydrogel from cross-linked hyaluronic acid, cross-linked using mannitol and a cross-linker in accordance with the present invention, the following technological process was implemented.
Говоря конкретно, отвешивали натриевую соль гиалуроновой кислоты, имеющую среднюю молекулярную массу 3 миллиона Да, гидроксид натрия, BDDE (1,4-бутандиолдиглицидиловый простой эфир) в качестве сшивателя и маннит, соответственно.Specifically, sodium hyaluronic acid salt having an average molecular weight of 3 million Da, sodium hydroxide, BDDE (1,4-butanediol diglycidyl ether) as a crosslinker, and mannitol were weighed, respectively.
Отвешивали 1 г гиалуроновой кислоты и отвешивали 10% (моль.) маннита при расчете на массу гиалуроновой кислоты, а после этого их помещали в емкость смесителя и смешивали. В отдельную емкость (ампулу на 50 мл) добавляли водный раствор гидроксида натрия (NaOH) при концентрации 0,25 н., так чтобы совокупная концентрация в реакции составляла 10% (масс./масс.) при расчете на массу гиалуроновой кислоты, и добавляли и смешивали 1,4-бутандиолдиглицидиловый простой эфир (BDDE) в количестве 100% (моль.) при расчете на массу гиалуроновой кислоты. Смесь, содержащуюся в данной емкости, помещали в емкость смесителя, в которой смешивали гиалуроновую кислоту и маннит и смешивали при использовании смесителя, а после этого емкость смесителя помещали в водяную баню с постоянной температурой и завершали сшивание при одновременном выдерживании 50°С на протяжении 2 часов. Вслед за этим гидрогель из сшитой гиалуроновой кислоты, полученный после завершения реакции, подвергали черновой резке до определенного размера и при использовании буферного раствора (буферного раствора, полученного в результате растворения 1,26 г/л гидрата (додекагидрата) моногидрофосфата натрия, 0,46 г/л гидрата (моногидрата) дигидрофосфата натрия, 7 г/л хлорида натрия и 3 г/л лидокаингидрохлорида в емкости колбы на 500 мл, содержащей воду для инъекций) его промывали и набухали 6 раз на протяжении 1 часа в каждом случае. После измельчения в порошок гидрогеля из гиалуроновой кислоты, для которого завершили промывание и набухание, его перемещали в емкость колбы на 250 мл и измеряли массу и добавляли буферный раствор, так чтобы масса геля достигала целевой массы, и, тем самым, проводили первичную коррекцию содержимого. При завершении первичной коррекции содержимого гидрогель из гиалуроновой кислоты экструдировали из емкости колбы на 250 мл и измельчали в порошок при использовании ячеистой сетки. После этого измельченный в порошок гидрогель из гиалуроновой кислоты переводили в емкость колбы на 250 мл и гомогенизировали, а вслед за этим измеряли содержимое и добавляли буферный раствор и, тем самым, проводили вторичную коррекцию содержимого. Гидрогель из гиалуроновой кислоты, для которого завершили коррекцию содержимого, стерилизовали тепловой обработкой при температуре, составляющей 121°С и более, на протяжении 10 минут и более для получения гидрогеля из сшитой гиалуроновой кислоты, соответствующего настоящему изобретению.1 g of hyaluronic acid was weighed out and 10% (mol) of mannitol was weighed out based on the weight of hyaluronic acid, and then they were placed in a mixer container and mixed. In a separate container (50 ml ampoule), an aqueous solution of sodium hydroxide (NaOH) at a concentration of 0.25 N was added so that the total concentration in the reaction was 10% (w/w) based on the weight of hyaluronic acid, and 1,4-butanediol diglycidyl ether (BDDE) was added and mixed in an amount of 100% (mol) based on the weight of hyaluronic acid. The mixture contained in this container was placed in a mixer container in which hyaluronic acid and mannitol were mixed and mixed using a mixer, and then the mixer container was placed in a constant temperature water bath and crosslinking was completed while maintaining at 50°C for 2 hours. Following that, the crosslinked hyaluronic acid hydrogel obtained after completion of the reaction was roughly cut to a certain size and, using a buffer solution (a buffer solution obtained by dissolving 1.26 g/L sodium monohydrogen phosphate hydrate (dodecahydrate), 0.46 g/L sodium dihydrogen phosphate hydrate (monohydrate), 7 g/L sodium chloride, and 3 g/L lidocaine hydrochloride in a 500 ml flask container containing water for injection), it was washed and swelled 6 times for 1 hour each. After the hyaluronic acid hydrogel, which had completed washing and swelling, was ground into powder, it was transferred to a 250 ml flask container, and the mass was measured and a buffer solution was added so that the mass of the gel reached the target mass, thereby performing the primary adjustment of the contents. When the primary adjustment of the contents was completed, the hyaluronic acid hydrogel was extruded from the 250 ml flask container and ground into powder using a mesh net. After that, the powdered hyaluronic acid hydrogel was transferred to a 250 ml flask container and homogenized, and then the contents were measured and a buffer solution was added, thereby performing the secondary adjustment of the contents. The hyaluronic acid hydrogel for which the content correction was completed was sterilized by heat treatment at a temperature of 121°C or more for 10 minutes or more to obtain a cross-linked hyaluronic acid hydrogel according to the present invention.
Пример 1-2: Получение гидрогеля из сшитой гиалуроновой кислоты, сшитого при использовании маннита и сшивателя в соответствии с настоящим изобретением (2)Example 1-2: Obtaining a hydrogel of cross-linked hyaluronic acid cross-linked using mannitol and a cross-linker according to the present invention (2)
В целях получения гидрогеля из сшитой гиалуроновой кислоты, сшитого при использовании маннита и сшивателя в соответствии с настоящим изобретением, реализовали следующий далее технологический процесс.In order to obtain a hydrogel from cross-linked hyaluronic acid, cross-linked using mannitol and a cross-linker in accordance with the present invention, the following technological process was implemented.
Говоря конкретно, отвешивали натриевую соль гиалуроновой кислоты, имеющую среднюю молекулярную массу 3 миллиона Да, гидроксид натрия, BDDE (1,4-бутандиолдиглицидиловый простой эфир) в качестве сшивателя и маннит, соответственно.Specifically, sodium hyaluronic acid salt having an average molecular weight of 3 million Da, sodium hydroxide, BDDE (1,4-butanediol diglycidyl ether) as a crosslinker, and mannitol were weighed, respectively.
Отвешивали 2 г гиалуроновой кислоты и отвешивали 10% (моль.) маннита при расчете на массу гиалуроновой кислоты, а после этого их помещали в емкость смесителя и смешивали. В отдельную емкость (ампулу на 50 мл) добавляли водный раствор гидроксида натрия (NaOH) при концентрации 0,25 н., так чтобы совокупная концентрация в реакции составляла 15% (масс./масс.) при расчете на массу гиалуроновой кислоты, и добавляли и смешивали 1,4-бутандиолдиглицидиловый простой эфир (BDDE) в количестве 5% (моль.) при расчете на массу гиалуроновой кислоты. Смесь, содержащуюся в данной емкости, помещали в емкость смесителя, в которой смешивали гиалуроновую кислоту и маннит и смешивали при использовании смесителя, а после этого емкость смесителя помещали в водяную баню с постоянной температурой и завершали сшивание при одновременном выдерживании 30°С на протяжении 19 часов. Вслед за этим гидрогель из сшитой гиалуроновой кислоты, полученный после завершения реакции, подвергали черновой резке до определенного размера и при использовании буферного раствора (буферного раствора, полученного в результате растворения 1,26 г/л гидрата (додекагидрата) моногидрофосфата натрия, 0,46 г/л гидрата (моногидрата) дигидрофосфата натрия, 7 г/л хлорида натрия и 3 г/л лидокаингидрохлорида в емкости колбы на 500 мл, содержащей воду для инъекций) его промывали и набухали один раз на протяжении 2 часов и два раза на протяжении 1 часа. После измельчения в порошок гидрогеля из гиалуроновой кислоты, для которого завершили промывание и набухание, его перемещали в емкость колбы на 150 мл и измеряли массу и добавляли буферный раствор, так чтобы масса геля достигала целевой массы, и, тем самым, проводили первичную коррекцию содержимого. При завершении первичной коррекции содержимого гидрогель из гиалуроновой кислоты экструдировали из емкости колбы на 150 мл и измельчали в порошок при использовании ячеистой сетки. После этого измельченный в порошок гидрогель из гиалуроновой кислоты переводили в емкость колбы на 150 мл и гомогенизировали, а вслед за этим измеряли содержимое и добавляли буферный раствор и, тем самым, проводили вторичную коррекцию содержимого. Гидрогель из гиалуроновой кислоты, для которого завершили коррекцию содержимого, стерилизовали тепловой обработкой при температуре, составляющей 121°С и более, на протяжении 10 минут и более для получения гидрогеля из сшитой гиалуроновой кислоты, соответствующего настоящему изобретению.2 g of hyaluronic acid were weighed out and 10% (mol) of mannitol was weighed out based on the weight of hyaluronic acid, and then they were placed in a mixer container and mixed. In a separate container (50 ml ampoule), an aqueous solution of sodium hydroxide (NaOH) at a concentration of 0.25 N was added so that the total concentration in the reaction was 15% (w/w) based on the weight of hyaluronic acid, and 1,4-butanediol diglycidyl ether (BDDE) was added and mixed in an amount of 5% (mol) based on the weight of hyaluronic acid. The mixture contained in this container was placed in a mixer container in which hyaluronic acid and mannitol were mixed and mixed using a mixer, and then the mixer container was placed in a constant temperature water bath and crosslinking was completed while maintaining at 30°C for 19 hours. Following that, the crosslinked hyaluronic acid hydrogel obtained after completion of the reaction was roughly cut to a certain size and, using a buffer solution (a buffer solution obtained by dissolving 1.26 g/L of sodium monohydrogen phosphate hydrate (dodecahydrate), 0.46 g/L of sodium dihydrogen phosphate hydrate (monohydrate), 7 g/L of sodium chloride and 3 g/L of lidocaine hydrochloride in a 500 ml flask container containing water for injection), it was washed and swelled once for 2 hours and twice for 1 hour. After the hyaluronic acid hydrogel, which had completed washing and swelling, was ground into powder, it was transferred to a 150 ml flask container, and the mass was measured and a buffer solution was added so that the mass of the gel reached the target mass, thereby performing the primary adjustment of the contents. When the primary adjustment of the contents was completed, the hyaluronic acid hydrogel was extruded from the 150 ml flask container and ground into powder using a mesh net. After that, the powdered hyaluronic acid hydrogel was transferred to a 150 ml flask container and homogenized, and then the contents were measured and a buffer solution was added, thereby performing the secondary adjustment of the contents. The hyaluronic acid hydrogel for which the content correction was completed was sterilized by heat treatment at a temperature of 121°C or more for 10 minutes or more to obtain a cross-linked hyaluronic acid hydrogel according to the present invention.
Пример 2: Получение гидрогеля из сшитой гиалуроновой кислоты, сшитого при использовании сорбита и сшивателя в соответствии с настоящим изобретениемExample 2: Preparation of a hydrogel from cross-linked hyaluronic acid cross-linked using sorbitol and a cross-linker according to the present invention
В целях получения гидрогеля из сшитой гиалуроновой кислоты, сшитого при использовании сорбита и сшивателя в соответствии с настоящим изобретением, реализовали следующий далее технологический процесс.In order to obtain a hydrogel from cross-linked hyaluronic acid, cross-linked using sorbitol and a cross-linker in accordance with the present invention, the following technological process was implemented.
Говоря конкретно, отвешивали натриевую соль гиалуроновой кислоты, имеющую среднюю молекулярную массу 3 миллиона Да, гидроксид натрия, BDDE (1,4-бутандиолдиглицидиловый простой эфир) в качестве сшивателя и сорбит, соответственно.Specifically, sodium hyaluronic acid salt having an average molecular weight of 3 million Da, sodium hydroxide, BDDE (1,4-butanediol diglycidyl ether) as a crosslinker, and sorbitol were weighed, respectively.
Отвешивали 2 г гиалуроновой кислоты и отвешивали 10% (моль.) сорбита при расчете на массу гиалуроновой кислоты, а после этого их помещали в емкость смесителя и смешивали. В отдельную емкость (ампулу на 50 мл) добавляли водный раствор гидроксида натрия (NaOH) при концентрации 0,25 н., так чтобы совокупная концентрация в реакции составляла 15% (масс./масс.) при расчете на массу гиалуроновой кислоты, и добавляли и смешивали 1,4-бутандиолдиглицидиловый простой эфир (BDDE) в количестве 5% (моль.) при расчете на массу гиалуроновой кислоты. Смесь, содержащуюся в данной емкости, помещали в емкость смесителя, в которой смешивали гиалуроновую кислоту и сорбит и смешивали при использовании смесителя, а после этого емкость смесителя помещали в водяную баню с постоянной температурой и завершали сшивание при одновременном выдерживании 30°С на протяжении 19 часов. Вслед за этим гидрогель из сшитой гиалуроновой кислоты, полученный после завершения реакции, подвергали черновой резке до определенного размера и при использовании буферного раствора (буферного раствора, полученного в результате растворения 1,26 г/л гидрата (додекагидрата) моногидрофосфата натрия, 0,46 г/л гидрата (моногидрата) дигидрофосфата натрия, 7 г/л хлорида натрия и 3 г/л лидокаингидрохлорида в емкости колбы на 500 мл, содержащей воду для инъекций) его промывали и набухали один раз на протяжении 2 часов и два раза на протяжении 1 часа. После измельчения в порошок гидрогеля из гиалуроновой кислоты, для которого завершили промывание и набухание, его перемещали в емкость колбы на 150 мл и измеряли массу и добавляли буферный раствор, так чтобы масса геля достигала целевой массы, и, тем самым, проводили первичную коррекцию содержимого. При завершении первичной коррекции содержимого гидрогель из гиалуроновой кислоты экструдировали из емкости колбы на 150 мл и измельчали в порошок при использовании ячеистой сетки. После этого измельченный в порошок гидрогель из гиалуроновой кислоты переводили в емкость колбы на 150 мл и гомогенизировали, а вслед за этим измеряли содержимое и добавляли буферный раствор и, тем самым, проводили вторичную коррекцию содержимого. Гидрогель из гиалуроновой кислоты, для которого завершили коррекцию содержимого, стерилизовали тепловой обработкой при температуре, составляющей 121°С и более, на протяжении 10 минут и более для получения гидрогеля из сшитой гиалуроновой кислоты, соответствующего настоящему изобретению.2 g of hyaluronic acid were weighed out and 10% (mol) of sorbitol was weighed out based on the weight of hyaluronic acid, and then they were placed in a mixer container and mixed. In a separate container (50 ml ampoule), an aqueous solution of sodium hydroxide (NaOH) at a concentration of 0.25 N was added so that the total concentration in the reaction was 15% (w/w) based on the weight of hyaluronic acid, and 1,4-butanediol diglycidyl ether (BDDE) was added and mixed in an amount of 5% (mol) based on the weight of hyaluronic acid. The mixture contained in this container was placed in a mixer container in which hyaluronic acid and sorbitol were mixed and mixed using a mixer, and then the mixer container was placed in a constant temperature water bath and crosslinking was completed while maintaining at 30°C for 19 hours. Following that, the crosslinked hyaluronic acid hydrogel obtained after completion of the reaction was roughly cut to a certain size and, using a buffer solution (a buffer solution obtained by dissolving 1.26 g/L of sodium monohydrogen phosphate hydrate (dodecahydrate), 0.46 g/L of sodium dihydrogen phosphate hydrate (monohydrate), 7 g/L of sodium chloride and 3 g/L of lidocaine hydrochloride in a 500 ml flask container containing water for injection), it was washed and swelled once for 2 hours and twice for 1 hour. After the hyaluronic acid hydrogel, which had completed washing and swelling, was ground into powder, it was transferred to a 150 ml flask container, and the mass was measured and a buffer solution was added so that the mass of the gel reached the target mass, thereby performing the primary adjustment of the contents. When the primary adjustment of the contents was completed, the hyaluronic acid hydrogel was extruded from the 150 ml flask container and ground into powder using a mesh net. After that, the powdered hyaluronic acid hydrogel was transferred to a 150 ml flask container and homogenized, and then the contents were measured and a buffer solution was added, thereby performing the secondary adjustment of the contents. The hyaluronic acid hydrogel for which the content correction was completed was sterilized by heat treatment at a temperature of 121°C or more for 10 minutes or more to obtain a cross-linked hyaluronic acid hydrogel according to the present invention.
Пример 3: Получение гидрогеля из сшитой гиалуроновой кислоты, сшитого при использовании ксилита и сшивателя в соответствии с настоящим изобретениемExample 3: Preparation of a hydrogel from cross-linked hyaluronic acid cross-linked using xylitol and a cross-linker according to the present invention
В целях получения гидрогеля из сшитой гиалуроновой кислоты, сшитого при использовании ксилита и сшивателя в соответствии с настоящим изобретением, реализовали следующий далее технологический процесс.In order to obtain a hydrogel from cross-linked hyaluronic acid, cross-linked using xylitol and a cross-linker in accordance with the present invention, the following technological process was implemented.
Говоря конкретно, отвешивали натриевую соль гиалуроновой кислоты, имеющую среднюю молекулярную массу 3 миллиона Да, гидроксид натрия, BDDE (1,4-бутандиолдиглицидиловый простой эфир) в качестве сшивателя и ксилит, соответственно.Specifically, sodium hyaluronic acid salt having an average molecular weight of 3 million Da, sodium hydroxide, BDDE (1,4-butanediol diglycidyl ether) as a crosslinker, and xylitol were weighed, respectively.
Отвешивали 2 г гиалуроновой кислоты и отвешивали 10% (моль.) ксилита при расчете на массу гиалуроновой кислоты, а после этого их помещали в емкость смесителя и смешивали. В отдельную емкость (ампулу на 50 мл) добавляли водный раствор гидроксида натрия (NaOH) при концентрации 0,25 н., так чтобы совокупная концентрация в реакции составляла 15% (масс./масс.) при расчете на массу гиалуроновой кислоты, и добавляли и смешивали 1,4-бутандиолдиглицидиловый простой эфир (BDDE) в количестве 5% (моль.) при расчете на массу гиалуроновой кислоты. Смесь, содержащуюся в данной емкости, помещали в емкость смесителя, в которой смешивали гиалуроновую кислоту и ксилит и смешивали при использовании смесителя, а после этого емкость смесителя помещали в водяную баню с постоянной температурой и завершали сшивание при одновременном выдерживании 30°С на протяжении 19 часов. Вслед за этим гидрогель из сшитой гиалуроновой кислоты, полученный после завершения реакции, подвергали черновой резке до определенного размера и при использовании буферного раствора (буферного раствора, полученного в результате растворения 1,26 г/л гидрата (додекагидрата) моногидрофосфата натрия, 0,46 г/л гидрата (моногидрата) дигидрофосфата натрия, 7 г/л хлорида натрия и 3 г/л лидокаингидрохлорида в емкости колбы на 500 мл, содержащей воду для инъекций) его промывали и набухали один раз на протяжении 2 часов и два раза на протяжении 1 часа. После измельчения в порошок гидрогеля из гиалуроновой кислоты, для которого завершили промывание и набухание, его перемещали в емкость колбы на 150 мл и измеряли массу и добавляли буферный раствор, так чтобы масса геля достигала целевой массы, и, тем самым, проводили первичную коррекцию содержимого. При завершении первичной коррекции содержимого гидрогель из гиалуроновой кислоты экструдировали из емкости колбы на 150 мл и измельчали в порошок при использовании ячеистой сетки. После этого измельченный в порошок гидрогель из гиалуроновой кислоты переводили в емкость колбы на 150 мл и гомогенизировали, а вслед за этим измеряли содержимое и добавляли буферный раствор и, тем самым, проводили вторичную коррекцию содержимого. Гидрогель из гиалуроновой кислоты, для которого завершили коррекцию содержимого, стерилизовали тепловой обработкой при температуре, составляющей 121°С и более, на протяжении 10 минут и более для получения гидрогеля из сшитой гиалуроновой кислоты, соответствующего настоящему изобретению.2 g of hyaluronic acid were weighed out and 10% (mol) of xylitol was weighed out based on the weight of hyaluronic acid, and then they were placed in a mixer container and mixed. In a separate container (50 ml ampoule), an aqueous solution of sodium hydroxide (NaOH) at a concentration of 0.25 N was added so that the total concentration in the reaction was 15% (w/w) based on the weight of hyaluronic acid, and 1,4-butanediol diglycidyl ether (BDDE) was added and mixed in an amount of 5% (mol) based on the weight of hyaluronic acid. The mixture contained in this container was placed in a mixer container in which hyaluronic acid and xylitol were mixed and mixed using a mixer, and then the mixer container was placed in a constant temperature water bath and crosslinking was completed while maintaining at 30°C for 19 hours. Following that, the crosslinked hyaluronic acid hydrogel obtained after completion of the reaction was roughly cut to a certain size and, using a buffer solution (a buffer solution obtained by dissolving 1.26 g/L of sodium monohydrogen phosphate hydrate (dodecahydrate), 0.46 g/L of sodium dihydrogen phosphate hydrate (monohydrate), 7 g/L of sodium chloride and 3 g/L of lidocaine hydrochloride in a 500 ml flask container containing water for injection), it was washed and swelled once for 2 hours and twice for 1 hour. After the hyaluronic acid hydrogel, which had completed washing and swelling, was ground into powder, it was transferred to a 150 ml flask container, and the mass was measured and a buffer solution was added so that the mass of the gel reached the target mass, thereby performing the primary adjustment of the contents. When the primary adjustment of the contents was completed, the hyaluronic acid hydrogel was extruded from the 150 ml flask container and ground into powder using a mesh net. After that, the powdered hyaluronic acid hydrogel was transferred to a 150 ml flask container and homogenized, and then the contents were measured and a buffer solution was added, thereby performing the secondary adjustment of the contents. The hyaluronic acid hydrogel for which the content correction was completed was sterilized by heat treatment at a temperature of 121°C or more for 10 minutes or more to obtain a cross-linked hyaluronic acid hydrogel according to the present invention.
Сравнительный пример 1: Получение гидрогеля из сшитой гиалуроновой кислоты, сшитого при использовании сшивателя в соответствии с обычным способомComparative Example 1: Preparation of a hydrogel made of cross-linked hyaluronic acid cross-linked using a cross-linker according to a conventional method
В целях получения гидрогеля из сшитой гиалуроновой кислоты, сшитого при использовании сшивателя в соответствии с обычным способом, реализовали следующий далее технологический процесс.In order to obtain a hydrogel from cross-linked hyaluronic acid cross-linked using a cross-linker in accordance with a conventional method, the following technological process was implemented.
Говоря конкретно, отвешивали натриевую соль гиалуроновой кислоты, имеющую среднюю молекулярную массу 3 миллиона Да, гидроксид натрия и BDDE (1,4-бутандиолдиглицидиловый простой эфир) в качестве сшивателя, соответственно.Specifically, sodium hyaluronic acid salt having an average molecular weight of 3 million Da, sodium hydroxide and BDDE (1,4-butanediol diglycidyl ether) as a crosslinker were weighed, respectively.
Отвешивали 2 г гиалуроновой кислоты и в отдельную емкость (ампулу на 50 мл) добавляли водный раствор гидроксида натрия (NaOH) при концентрации 0,25 н., так чтобы совокупная концентрация в реакции составляла 15% (масс./масс.) при расчете на массу гиалуроновой кислоты, и добавляли и смешивали 1,4-бутандиолдиглицидиловый простой эфир (BDDE) в количестве 5% (моль.) при расчете на массу гиалуроновой кислоты. Смесь, содержащуюся в данной емкости, помещали в емкость смесителя, в которой смешивали гиалуроновую кислоту и смешивали при использовании смесителя, а после этого емкость смесителя помещали в водяную баню с постоянной температурой и завершали сшивание при одновременном выдерживании 30°С на протяжении 19 часов. Вслед за этим гидрогель из сшитой гиалуроновой кислоты, полученный после завершения реакции, подвергали черновой резке до определенного размера и при использовании буферного раствора (буферного раствора, полученного в результате растворения 1,26 г/л гидрата (додекагидрата) моногидрофосфата натрия, 0,46 г/л гидрата (моногидрата) дигидрофосфата натрия, 7 г/л хлорида натрия и 3 г/л лидокаингидрохлорида в емкости колбы на 500 мл, содержащей воду для инъекций) его промывали и набухали один раз на протяжении 2 часов и два раза на протяжении 1 часа. После измельчения в порошок гидрогеля из гиалуроновой кислоты, для которого завершили промывание и набухание, его перемещали в емкость колбы на 150 мл и измеряли массу и добавляли буферный раствор, так чтобы масса геля достигала целевой массы, и, тем самым, проводили первичную коррекцию содержимого. При завершении первичной коррекции содержимого гидрогель из гиалуроновой кислоты экструдировали из емкости колбы на 150 мл и измельчали в порошок при использовании ячеистой сетки. После этого измельченный в порошок гидрогель из гиалуроновой кислоты переводили в емкость колбы на 150 мл и гомогенизировали, а вслед за этим измеряли содержимое и добавляли буферный раствор и, тем самым, проводили вторичную коррекцию содержимого. Гидрогель из гиалуроновой кислоты, для которого завершили коррекцию содержимого, стерилизовали тепловой обработкой при температуре, составляющей 121°С и более, на протяжении 10 минут и более для получения гидрогеля из сшитой гиалуроновой кислоты, соответствующего настоящему изобретению.2 g of hyaluronic acid was weighed out, and an aqueous solution of sodium hydroxide (NaOH) at a concentration of 0.25 N was added to a separate container (50 ml ampoule) so that the total concentration in the reaction was 15% (w/w) based on the mass of hyaluronic acid, and 1,4-butanediol diglycidyl ether (BDDE) was added and mixed in an amount of 5% (mol) based on the mass of hyaluronic acid. The mixture contained in this container was placed in a mixer container in which hyaluronic acid was mixed and mixed using a mixer, and then the mixer container was placed in a constant temperature water bath and crosslinking was completed while maintaining at 30°C for 19 hours. Following this, the cross-linked hyaluronic acid hydrogel obtained after completion of the reaction was roughly cut to a certain size, and using a buffer solution (a buffer solution obtained by dissolving 1.26 g/L sodium monohydrogen phosphate hydrate (dodecahydrate), 0.46 g/L sodium dihydrogen phosphate hydrate (monohydrate), 7 g/L sodium chloride, and 3 g/L lidocaine hydrochloride in a 500 mL flask container containing water for injection), it was washed and swelled once for 2 hours and twice for 1 hour. After the hyaluronic acid hydrogel for which washing and swelling were completed was ground into powder, it was transferred to a 150 mL flask container, and the weight was measured and the buffer solution was added so that the weight of the gel reached the target weight, thereby performing the primary adjustment of the contents. When the primary correction of the contents was completed, the hyaluronic acid hydrogel was extruded from the 150 ml flask container and pulverized using a mesh net. Thereafter, the pulverized hyaluronic acid hydrogel was transferred to the 150 ml flask container and homogenized, and then the contents were measured and a buffer solution was added, thereby performing the secondary correction of the contents. The hyaluronic acid hydrogel for which the correction of the contents was completed was sterilized by heat treatment at a temperature of 121°C or more for 10 minutes or more to obtain the cross-linked hyaluronic acid hydrogel according to the present invention.
Сравнительные примеры 2, 3, 4, 5, 6 и 7Comparative examples 2, 3, 4, 5, 6 and 7
Доступные на коммерческих условиях кожные филлеры А, В, С, D, E и F подвергали испытаниям в качестве сравнительных примеров от 2 до 7, соответственно.Commercially available dermal fillers A, B, C, D, E and F were tested as comparative examples 2 through 7, respectively.
[Филлеры из сравнительных примеров 2-7][Fillers from comparative examples 2-7]
A: Juvederm voluma lidocaine, AllerganA: Juvederm volume lidocaine, Allergan
B: Restylane lidocaine, GaldermaB: Restylane lidocaine, Galderma
C: YVOIRE volume s, LG ChemC: YVOIRE volume s, LG Chem
D: Ellanse, SinclairD: Ellanse, Sinclair
E: Cleviel, Pharma Research ProductsE: Cleviel, Pharma Research Products
F: YVOIRE classic plus, LG ChemF: YVOIRE classic plus, LG Chem
Экспериментальный пример 1: Исследование вязкоэластических свойств гидрогеля из сшитой гиалуроновой кислоты, полученного в соответствии с настоящим изобретениемExperimental Example 1: Study of the Viscoelastic Properties of the Cross-Linked Hyaluronic Acid Hydrogel Obtained According to the Present Invention
Для исследования реологических свойств в полученных примерах 1-2, 2 и 3 и сравнительном примере 1 их анализировали при использовании реометра. Условия анализа представляют собой нижеследующее.To study the rheological properties in the obtained examples 1-2, 2 and 3 and comparative example 1, they were analyzed using a rheometer. The analysis conditions are as follows.
<Условия анализа><Analysis conditions>
Условия анализа для вибрационного и ротационного реометраAnalysis conditions for vibration and rotation rheometer
В случае испытания на комплексную вязкость (ƞ*)In case of complex viscosity test (ƞ*)
(1) Оборудование для испытаний: реометр (Anton Paar Ltd., MCR301)(1) Test equipment: Rheometer (Anton Paar Ltd., MCR301)
(2) Частота: 1 Гц(2) Frequency: 1Hz
(3) Температура: 25°С(3) Temperature: 25°C
(4) Деформация: 4%(4) Deformation: 4%
(5) Геометрия измерений: Пластина на 25 мм(5) Measurement geometry: 25mm plate
(9) Измерительный зазор: 1,0 мм(9) Measuring gap: 1.0 mm
Результат анализа продемонстрирован в таблице 1.The result of the analysis is shown in Table 1.
[Таблица 1][Table 1]
Как результат анализа комплексной вязкости каждого образца было подтверждено то, что комплексная вязкость из примеров 1-2, 2 и 3, которые представляли собой гидрогель из сшитой гиалуроновой кислоты, полученный при использовании маннита, сорбита и ксилита, которые являлись сахарными спиртами, была большей, чем в сравнительном примере 1, полученном при использовании только сшивателя.As a result of analyzing the complex viscosity of each sample, it was confirmed that the complex viscosity of Examples 1-2, 2 and 3, which were cross-linked hyaluronic acid hydrogel obtained using mannitol, sorbitol and xylitol, which were sugar alcohols, was greater than that of Comparative Example 1 obtained using only a cross-linker.
Экспериментальный пример 2-1: Исследование стойкости к действию фермента in vitro (1)Experimental Example 2-1: In vitro enzyme resistance study (1)
При инъекции в организм гидрогеля из сшитой гиалуроновой кислоты (НА) данный гидрогель из сшитой гиалуроновой кислоты подвергается прямому разложению, будучи атакованным гиалуронидазой для разложения. В результате прямой инъекции гиалуронидазы в образец возможными являются проверка тенденции к разложению и измерение стойкости к действию фермента. Говоря конкретно, при использовании реометра проводили испытание на стойкость к действию фермента in situ в соответствии со следующим далее методом.When the cross-linked hyaluronic acid (HA) hydrogel is injected into the body, the cross-linked hyaluronic acid hydrogel is directly degraded by being attacked by hyaluronidase to degrade. By directly injecting hyaluronidase into the sample, it is possible to check the degrading tendency and measure the enzyme resistance. Specifically, the in situ enzyme resistance test was performed using a rheometer according to the following method.
После измельчения в порошок гидрогеля из сшитой гиалуроновой кислоты, полученного в примерах 1-2, 2 и 3, и гидрогеля из сшитой гиалуроновой кислоты из сравнительного примера 1, соответственно, и после этого, в заключение, стерилизации 1 г стерилизованного образца отвешивали в ампулу на 50 мл, а вслед за этим добавляли и смешивали 200 мкл гиалуронидазы, полученной при 500 ед./мл. Образец, смешанный с ферментом, загружали в реометр и выставляли температуру на 37°С, а после этого в режиме реального времени измеряли комплексную вязкость образца. Чем выше будет стойкость к действию гиалуронидазы, тем выше будет остаточный уровень комплексной вязкости в сравнении с первоначальным значением комплексной вязкости. Это означает то, что чем выше будет остаточный уровень комплексной вязкости, тем выше будет стойкость к действию фермента. Исходя из измеренного результата рассчитывали значение %50 Hase (гиалуронидаза) (мин), и результат продемонстрирован в таблице 2. %50 Hase (мин) обозначает время, которое требуется для уменьшения комплексной вязкости гидрогеля из сшитой гиалуроновой кислоты до 50% от его первоначальных физических свойств вследствие разложения под действием фермента. Говоря другими словами, это значит, что чем большим будет значение %50 Hase (мин), тем большей будет стойкость гидрогеля из сшитой гиалуроновой кислоты.After the cross-linked hyaluronic acid hydrogel obtained in Examples 1 to 2, 2 and 3 and the cross-linked hyaluronic acid hydrogel of Comparative Example 1 were ground into powder, respectively, and then finally sterilized, 1 g of the sterilized sample was weighed into a 50 mL ampoule, and then 200 μL of hyaluronidase obtained at 500 U/mL was added and mixed. The sample mixed with the enzyme was loaded into a rheometer and the temperature was set to 37°C, and then the complex viscosity of the sample was measured in real time. The higher the resistance to the action of hyaluronidase, the higher the residual level of the complex viscosity will be compared with the original value of the complex viscosity. This means that the higher the residual level of the complex viscosity, the higher the resistance to the action of the enzyme. Based on the measured result, the %50 Hase (hyaluronidase) (min) value was calculated, and the result is shown in Table 2. %50 Hase (min) refers to the time required for the complex viscosity of the cross-linked hyaluronic acid hydrogel to decrease to 50% of its original physical property due to the decomposition by the enzyme. In other words, it means that the larger the %50 Hase (min) value is, the greater the durability of the cross-linked hyaluronic acid hydrogel will be.
[Таблица 2][Table 2]
Как это подтверждено в таблице 2, значения %50 Hase (мин) из примеров от 1 до 3 для гидрогеля из сшитой гиалуроновой кислоты, содержащего сахарный спирт и соответствующего настоящему изобретению, составляли 42 минуты, 45 минут и 41 минуту, соответственно, в то время как сравнительный пример 1, который представлял собой гидрогель из сшитой гиалуроновой кислоты, полученный по обычному способу, продемонстрировал значение %50 Hase (мин) 33 минуты, подтверждая, тем самым, демонстрацию гидрогелем из сшитой гиалуроновой кислоты, соответствующим настоящему изобретению, относительно высокой стойкости к действию фермента.As confirmed in Table 2, the %50 Hase (min) values of Examples 1 to 3 for the cross-linked hyaluronic acid hydrogel containing a sugar alcohol according to the present invention were 42 minutes, 45 minutes, and 41 minutes, respectively, while Comparative Example 1, which was a cross-linked hyaluronic acid hydrogel obtained by a conventional method, showed a %50 Hase (min) value of 33 minutes, thereby confirming that the cross-linked hyaluronic acid hydrogel according to the present invention exhibits relatively high resistance to the enzyme action.
Экспериментальный пример 2-2: Исследование стойкости к действию фермента in vitro (2)Experimental Example 2-2: In vitro enzyme resistance study (2)
При использовании реометра проводили испытание на стойкость к действию фермента in situ в соответствии со следующим далее методом.Using a rheometer, an in situ enzyme resistance test was performed according to the following method.
После измельчения в порошок гидрогеля из сшитой гиалуроновой кислоты, полученного в примере 1-1, и гидрогеля из сшитой гиалуроновой кислоты из сравнительных примеров от 2 до 4, соответственно, и после этого, в заключение, стерилизации 1 г стерилизованного образца отвешивали в ампулу на 50 мл, а вслед за этим добавляли и смешивали 10 мкл гиалуронидазы, полученной при 500 ед./мл. Образец, смешанный с ферментом, загружали в реометр и выставляли температуру на 37°С, а после этого в режиме реального времени измеряли комплексную вязкость образца. Исходя из измеренного результата рассчитывали значение %50 Hase (мин), и результат продемонстрирован на ФИГУРЕ 1.After pulverizing the cross-linked hyaluronic acid hydrogel obtained in Example 1-1 and the cross-linked hyaluronic acid hydrogel of Comparative Examples 2 to 4, respectively, and then finally sterilizing, 1 g of the sterilized sample was weighed into a 50 mL ampoule, and then 10 μL of hyaluronidase obtained at 500 U/mL was added and mixed. The sample mixed with the enzyme was loaded into a rheometer and the temperature was set to 37°C, and then the complex viscosity of the sample was measured in real time. Based on the measured result, the %50 Hase (min) value was calculated, and the result is shown in FIGURE 1.
Как это подтверждено на ФИГУРЕ 1, значение %50 Hase (мин) из примера 1-1 для гидрогеля из сшитой гиалуроновой кислоты, соответствующего настоящему изобретению, составляло 32 минуты, в то время как сравнительные примеры от 2 до 4, которые представляли собой гидрогель из сшитой гиалуроновой кислоты, полученный по обычному способу, продемонстрировал значения %50 Hase (мин) 10, 4 и 6 минут, соответственно, подтверждая, тем самым, демонстрацию гидрогелем из сшитой гиалуроновой кислоты, соответствующим настоящему изобретению, в три и более раза более высокой стойкости к действию фермента.As confirmed in FIGURE 1, the %50 Hase (min) value of Example 1-1 for the cross-linked hyaluronic acid hydrogel according to the present invention was 32 minutes, while Comparative Examples 2 to 4, which were cross-linked hyaluronic acid hydrogels obtained by a conventional method, showed %50 Hase (min) values of 10, 4, and 6 minutes, respectively, thereby confirming that the cross-linked hyaluronic acid hydrogel according to the present invention exhibits three times or more higher resistance to the enzyme action.
Экспериментальный пример 3-1: Исследование стойкости к действию радикалов in vitro (1)Experimental Example 3-1: In vitro study of radical resistance (1)
В целях измерения стойкости к индуцированному перокси-радикалами разложению гидрогеля из сшитой гиалуроновой кислоты, полученного в примере 1-1, и гидрогеля из сшитой гиалуроновой кислоты из сравнительных примеров от 2 до 4 так же, как и в эксперименте на стойкость к действию фермента, при использовании реометра проводили измерения в режиме реального времени в соответствии со следующим далее методом.In order to measure the resistance to peroxy radical-induced degradation of the cross-linked hyaluronic acid hydrogel obtained in Example 1-1 and the cross-linked hyaluronic acid hydrogel of Comparative Examples 2 to 4, in the same way as in the enzyme resistance experiment, measurements were carried out in real time using a rheometer in accordance with the following method.
После отвешивания 1 г стерилизованного образца в ампулу на 50 мл добавляли и смешивали 10 мкл 1-молярной перекиси водорода (Н2О2) и 10 мкл 1-молярной аскорбиновой кислоты. Смешанный образец загружали в реометр и температуру выставляли на 37°С, а после этого в режиме реального времени измеряли комплексную вязкость образца на протяжении 6 часов. Исходя из результата рассчитывали значение %50 Н2О2 (мин), что продемонстрировано на ФИГУРЕ 2. %50 H2О2 (мин) обозначает время, которое требуется для уменьшения комплексной вязкости гидрогеля из сшитой гиалуроновой кислоты до 50% от его первоначальных физических свойств (комплексной вязкости) вследствие разложения под действием активных форм кислорода (радикалов). Говоря другими словами, это значит, что чем большим будет значение %50 H2О2 (мин), тем большей будет стойкость гидрогеля из сшитой гиалуроновой кислоты к действию активных форм кислорода (радикалов).After weighing 1 g of the sterilized sample, 10 μl of 1 molar hydrogen peroxide (H2O2 ) and 10 μl of 1 molar ascorbic acid were added and mixed intoa 50 ml ampoule. The mixed sample was loaded into the rheometer and the temperature was set to 37°C, and then the complex viscosity of the sample was measured in real time for 6 hours. Based on the result, the value of %50H2O2 (min) was calculated, which is shown in FIGURE 2. %50H2O2 (min ) refers to the time required for the complex viscosityof the cross-linked hyaluronic acid hydrogel to decrease to 50% of its original physical properties (complex viscosity) due to decomposition under the action of active oxygen species (radicals). In other words, this means that the higher the %50H2O2 (min) value, the greater the resistance of thecross -linked hyaluronic acid hydrogel to the action of active oxygen forms (radicals).
Как это подтверждено на ФИГУРЕ 2, значение %50 H2О2 (мин) из примера 1 для гидрогеля из сшитой гиалуроновой кислоты, соответствующего настоящему изобретению, составляло приблизительно 32 минуты, в то время как сравнительные примеры от 2 до 4, которые представляли собой доступный на коммерческих условиях гидрогель из сшитой гиалуроновой кислоты, продемонстрировали значение %50 H2О2 (мин) 5, 7,5 и 18 минут, соответственно, подтверждая, тем самым, демонстрацию гидрогелем из сшитой гиалуроновой кислоты из примера 1-1, соответствующим настоящему изобретению, в три и более раза более высокой стойкости к действию фермента.As confirmed in FIGURE 2, the %50H2O2 (min) valueof Example 1 for the cross-linked hyaluronic acid hydrogel according to the present invention was approximately 32 minutes, while Comparative Examples 2 to 4, which were commercially available cross-linked hyaluronic acid hydrogels, showed a %50H2O2 (min) valueof 5, 7.5, and 18 minutes, respectively, thereby confirming that the cross-linked hyaluronic acid hydrogel of Example 1-1 according to the present invention exhibits three times or more higher resistance to the enzyme action.
Экспериментальный пример 3-2: Исследование стойкости к действию радикалов in vitro (2)Experimental Example 3-2: In vitro study of radical resistance (2)
В целях измерения стойкости к индуцированному перокси-радикалами разложению гидрогеля из сшитой гиалуроновой кислоты, содержащего сахарные спирты и полученного в примерах 1-2, 2 и 3, и гидрогеля из сшитой гиалуроновой кислоты из сравнительного примера 1 так же, как и в эксперименте на стойкость к действию фермента, при использовании реометра проводили измерения в режиме реального времени в соответствии со следующим далее методом.In order to measure the resistance to peroxy radical-induced degradation of the cross-linked hyaluronic acid hydrogel containing sugar alcohols obtained in Examples 1-2, 2 and 3 and the cross-linked hyaluronic acid hydrogel of Comparative Example 1, as in the enzyme resistance experiment, measurements were carried out in real time using a rheometer in accordance with the following method.
После отвешивания 1 г стерилизованного образца в ампулу на 50 мл добавляли и смешивали 10 мкл 1-молярной перекиси водорода (Н2О2) и 10 мкл 1-молярной аскорбиновой кислоты. Смешанный образец загружали в реометр и температуру выставляли на 37°С, а после этого в режиме реального времени измеряли комплексную вязкость образца на протяжении 6 часов. Исходя из результата рассчитывали значение %50 Н2О2 (мин), что продемонстрировано в таблице 3. %50 H2О2 (мин) обозначает время, которое требуется для уменьшения комплексной вязкости гидрогеля из сшитой гиалуроновой кислоты до 50% от его первоначальных физических свойств (комплексной вязкости) вследствие разложения под действием активных форм кислорода (радикалов). Говоря другими словами, это значит, что чем большим будет значение %50 H2О2 (мин), тем большей будет стойкость гидрогеля из сшитой гиалуроновой кислоты к действию активных форм кислорода (радикалов).After weighing 1 g of the sterilized sample, 10 μl of 1 molar hydrogen peroxide (H2O2 ) and 10 μl of 1 molar ascorbic acid were added and mixed intoa 50 ml ampoule. The mixed sample was loaded into the rheometer and the temperature was set to 37°C, and then the complex viscosityof the sample was measured in real time for 6 hours. Based on the result, the value of %50H2O2 (min) was calculated, which is shown in Table 3. %50H2O2 (min ) refers to the time required for the complex viscosity of the cross-linked hyaluronic acid hydrogel to decrease to 50% of its original physical properties (complex viscosity) due to decomposition under the action of active oxygen species (radicals). In other words, this means that the higher the %50H2O2 (min) value, the greater the resistance of thecross -linked hyaluronic acid hydrogel to the action of active oxygen forms (radicals).
[Таблица 3][Table 3]
Как это подтверждено в таблице 3, значение %50 H2О2 (мин) из примеров 1-2, 2 и 3 для гидрогеля из сшитой гиалуроновой кислоты, содержащего сахарный спирт и соответствующего настоящему изобретению, составляло 16,5 минуты, 18,4 минуты и 17,6 минуты, соответственно, в то время как сравнительный пример 1, который представлял собой гидрогель из сшитой гиалуроновой кислоты, полученный по обычному способу, продемонстрировал значение %50 H2О2 (мин) 14,6 минуты, подтверждая, тем самым, демонстрацию гидрогелем из сшитой гиалуроновой кислоты, соответствующим настоящему изобретению, относительно высокой стойкости к действию радикалов.As confirmed in Table 3, the value of %50H2O2 (min ) of Examples 1 to 2, 2 and 3 for the cross-linked hyaluronic acid hydrogel containing a sugar alcohol according to the present invention were 16.5 minutes, 18.4 minutes and 17.6 minutes, respectively, while Comparative Example 1, which was a cross-linked hyaluronic acid hydrogel obtained by a conventional method, showed a value of %50H2O2 (min) of 14.6 minutes, thereby confirming that the cross-linked hyaluronic acid hydrogel according to the present inventionexhibits relatively high radical resistance.
Экспериментальный пример 4: Исследование стойкости к действию тепла in vitroExperimental Example 4: In vitro Heat Resistance Study
Гидрогель из сшитой гиалуроновой кислоты, полученный в примере 1-1, и гидрогель из сшитой гиалуроновой кислоты из сравнительных примеров от 2 до 4 хранили в суровых условиях (55°С±2°С, 75% ОВ±5% ОВ) на протяжении 4 часов и при использовании реометра измеряли комплексную вязкость при 0,02 Гц и рассчитывали остаточный уровень (%) комплексной вязкости, а результат продемонстрирован на ФИГУРЕ 3 (единица измерения: сПз). Остаточный уровень комплексной вязкости (%) представляет собой соотношение между текущей комплексной вязкостью и первоначальной комплексной вязкостью, и это означает, что чем большим будет данное значение, тем лучшей будет стабильность физических свойств (комплексной вязкости).The cross-linked hyaluronic acid hydrogel obtained in Example 1-1 and the cross-linked hyaluronic acid hydrogel of Comparative Examples 2 to 4 were stored under a harsh condition (55°C±2°C, 75%RH±5%RH) for 4 hours, and the complex viscosity was measured at 0.02 Hz using a rheometer, and the residual level (%) of the complex viscosity was calculated, and the result is shown in FIGURE 3 (unit: cP). The residual level of the complex viscosity (%) is the ratio between the current complex viscosity and the original complex viscosity, and it means that the larger this value is, the better the stability of the physical properties (complex viscosity) will be.
Как это продемонстрировано на ФИГУРЕ 3, у гидрогеля из сшитой гиалуроновой кислоты из примера 1-1, соответствующего настоящему изобретению, сохраняется (выдерживается) остаточный уровень комплексной вязкости, составляющий приблизительно 93% и более, в сопоставлении со сшитой гиалуроновой кислотой из сравнительных примеров от 1 до 3, в то время как сравнительные примеры от 2 до 4 демонстрируют низкий остаточный уровень комплексной вязкости, и поэтому может быть подтверждено, что гидрогель из сшитой гиалуроновой кислоты, соответствующий настоящему изобретению, демонстрирует исключительно превосходную стабильность к действию тепла.As shown in FIGURE 3, the cross-linked hyaluronic acid hydrogel of Example 1-1 according to the present invention maintains (maintains) a residual complex viscosity of approximately 93% or more, compared with the cross-linked hyaluronic acid of Comparative Examples 1 to 3, while Comparative Examples 2 to 4 exhibit a low residual complex viscosity, and therefore it can be confirmed that the cross-linked hyaluronic acid hydrogel according to the present invention exhibits extremely excellent thermal stability.
Экспериментальный пример 5: Исследование биосовместимости in vivoExperimental Example 5: In vivo Biocompatibility Study
В целях подтверждения биосовместимости гидрогеля из сшитой гиалуроновой кислоты, полученного в примере 1-1, и гидрогеля из сшитой гиалуроновой кислоты из сравнительных примеров от 5 до 7 проводили испытание следующим образом.In order to confirm the biocompatibility of the cross-linked hyaluronic acid hydrogel obtained in Example 1-1 and the cross-linked hyaluronic acid hydrogel of Comparative Examples 5 to 7, a test was conducted as follows.
При использовании кроликов-самцов (New Zealand White rabbit, Orient Bio) 6 грызунам на одну группу подкожно вводили 0,3 мл образца и по истечении 4 недель проводили гистопатологическое исследование. Эксперимент проводили в соответствии с документом ISO10993-6 Annex E (Examples of evaluation of local biological effects after implantation). Результат по кожной реакции оценивали при использовании индекса раздражения. Индекс раздражения представляет собой оценочное значение реакции ткани на вещество при введении вещества животному, и означает, что чем большим будет данное значение, тем меньшей будет биосовместимость, и отсутствие раздражения оценивали как 0,0~2,9, а слабое раздражение составляло 3,0~8,9, и умеренное раздражение составляло 9,0~15,0, а серьезное раздражение составляло > 15,0, и результат продемонстрирован на ФИГУРЕ 4. Как это продемонстрировано на ФИГУРЕ 4, индекс раздражения из сравнительных примеров 5 и 6 составляет приблизительно 18 и 8, соответственно, в то время как индекс раздражения из примера 1 демонстрирует значение индекса раздражения, составляющее приблизительно 5, и поэтому он обнаруживает низкий или подобный уровень в сопоставлении с доступными на коммерческих условиях филлерами для улучшения состояния кожи при морщинах, и, таким образом, можно было подтвердить то, что обнаруживается надлежащая биосовместимость в качестве филлера для инъекций в организм.Using male rabbits (New Zealand White rabbit, Orient Bio), 6 rodents per group were injected subcutaneously with 0.3 ml of the sample and histopathological examination was performed after 4 weeks. The experiment was carried out in accordance with ISO10993-6 Annex E (Examples of evaluation of local biological effects after implantation). The result of the skin reaction was assessed using the irritation index. The irritation index is an evaluation value of the tissue reaction to a substance when the substance is administered to an animal, and means that the larger the value is, the lower the biocompatibility will be, and no irritation was evaluated as 0.0~2.9, and mild irritation was 3.0~8.9, and moderate irritation was 9.0~15.0, and severe irritation was > 15.0, and the result is shown in FIGURE 4. As shown in FIGURE 4, the irritation index of Comparative Examples 5 and 6 are approximately 18 and 8, respectively, while the irritation index of Example 1 shows an irritation index value of approximately 5, and therefore it exhibits a low or similar level in comparison with commercially available fillers for improving skin wrinkles, and thus it could be confirmed that proper biocompatibility as a filler for injection into the body is exhibited.
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| KR10-2021-0002116 | 2021-01-07 |
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| RU2838899C1true RU2838899C1 (en) | 2025-04-23 |
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US20110171310A1 (en)* | 2010-01-13 | 2011-07-14 | Allergan Industrie, Sas | Hydrogel compositions comprising vasoconstricting and anti-hemorrhagic agents for dermatological use |
| RU2493815C2 (en)* | 2008-11-07 | 2013-09-27 | Антэ С.А. | Sterilised by heating injected composition, which contains hyaluronic acid or one of its salts, polyols and lidocaine |
| US8574629B2 (en)* | 2008-08-01 | 2013-11-05 | Anteis S.A. | Injectable hydrogel with an enhanced remanence and with an enhanced ability to create volume |
| WO2017001056A1 (en)* | 2015-06-30 | 2017-01-05 | Merz Pharma Gmbh & Co. Kgaa | Method for producing crosslinked hyaluronic acid |
| RU2653729C2 (en)* | 2012-10-24 | 2018-05-14 | Теоксан | Dermal injectable sterile composition |
| WO2020009555A1 (en)* | 2018-07-06 | 2020-01-09 | 주식회사 엘지화학 | Hyaluronic acid filler having high viscoelasticity and high cohesiveness |
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US8574629B2 (en)* | 2008-08-01 | 2013-11-05 | Anteis S.A. | Injectable hydrogel with an enhanced remanence and with an enhanced ability to create volume |
| RU2493815C2 (en)* | 2008-11-07 | 2013-09-27 | Антэ С.А. | Sterilised by heating injected composition, which contains hyaluronic acid or one of its salts, polyols and lidocaine |
| US20110171310A1 (en)* | 2010-01-13 | 2011-07-14 | Allergan Industrie, Sas | Hydrogel compositions comprising vasoconstricting and anti-hemorrhagic agents for dermatological use |
| RU2653729C2 (en)* | 2012-10-24 | 2018-05-14 | Теоксан | Dermal injectable sterile composition |
| WO2017001056A1 (en)* | 2015-06-30 | 2017-01-05 | Merz Pharma Gmbh & Co. Kgaa | Method for producing crosslinked hyaluronic acid |
| WO2020009555A1 (en)* | 2018-07-06 | 2020-01-09 | 주식회사 엘지화학 | Hyaluronic acid filler having high viscoelasticity and high cohesiveness |
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| CN112423798B (en) | Hyaluronic acid filler with high viscoelasticity and high cohesion | |
| RU2770541C1 (en) | Filler with hyaluronic acid, exhibiting high lifting ability and low injection force | |
| EP3900751B1 (en) | Filler having excellent filler properties comprising hyaluronic acid hydrogel | |
| KR101747441B1 (en) | Hyaluronic Acid-Based Gels Including Anesthetic Agents | |
| EP3538066B1 (en) | Hyaluronic acid dermal fillers crosslinked with citric acid, method for making same and uses thereof | |
| KR102566288B1 (en) | Injectable composition comprising anesthetics, buffer solution and hyaluronic acid hydrogel, and method for preparing the same | |
| EP4245328A1 (en) | Crosslinked hyaluronic acid hydrogel crosslinked using crosslinker and polyol, and filler comprising same | |
| RU2838899C1 (en) | Hydrogel of cross-linked hyaluronic acid cross-linked using cross-linking agent and polyol, and filler containing thereof | |
| EP4356935A1 (en) | Hyaluronic acid cross-linked product, and filler composition comprising same | |
| RU2779473C1 (en) | Filler exhibiting excellent filler properties, containing a hyaluronic acid hydrogel | |
| EP4631536A1 (en) | Cross-linked hyaluronic acid gel having good spreadability and stability, and use thereof | |
| HK40029946A (en) | Hyaluronic acid-based gels including anesthetic agents | |
| BR112021012042B1 (en) | FILLER COMPRISING CROSS-LINKED HYALURONIC ACID HYDROGEL, METHOD FOR PREPARING THE SAME, SYRINGE COMPRISING THE FILLER AND USE OF THE SAID FILLER FOR PREPARING A REAGENT OR A DEVICE FOR ELIMINATION OF WRINKLES |