Область изобретенияField of invention
Настоящее изобретение относится к антителу или его фрагменту, содержащему по меньшей мере одну гетерологичную аминокислотную, последовательность, включенную вовнутрь по меньшей мере одного CDR участка указанного антитела или его фрагмента, где указанная по меньшей мере одна гетерологичная аминокислотная последовательность содержит N-терминальную линкерную последовательность (Ntls), предсердный натрийуретический пептид (ANP) и C-терминальную линкерную последовательность (Ctls). Необязательно, по меньшей мере часть указанного по меньшей мере одного CDR участка замещена указанной по меньшей мере одной гетерологичной аминокислотной последовательностью, включенной в него. По меньшей мере 12 аминокислотных остатков присутствуют между аминокислотным остатком HC (тяжелая цепь) res25 по Кэботу и первым аминокислотным остатком ANP в случае включения указанной гетерологичной аминокислотной последовательности в CDRH1; аминокислотным остатком HC res51 по Кэботу и первым аминокислотным остатком ANP в случае включения указанной гетерологичной аминокислотной последовательности в CDRH2; аминокислотным остатком HC res92 по Кэботу и первым аминокислотным остатком ANP в случае включения указанной гетерологичной аминокислотной последовательности в CDRH3; аминокислотным остатком LC (легкой цепи) res26 по Кэботу и первым аминокислотным остатком ANP в случае включения указанной гетерологичной аминокислотной последовательности в CDRL1; аминокислотным остатком LC res49 по Кэботу и первым аминокислотным остатком ANP в случае включения указанной гетерологичной аминокислотной последовательности в CDRL2; и/или аминокислотным остатком LC res88 по Кэботу и первым аминокислотным остатком ANP в случае включения указанной гетерологичной аминокислотной последовательности в CDRL3. Кроме того, по меньшей мере 9 аминокислотных остатков присутствуют между последним аминокислотным остатком ANP и аминокислотным остатком HC res35a по Кэботу в случае включения указанной гетерологичной аминокислотной последовательности в CDRH1; аминокислотным остатком HC res57 по Кэботу в случае включения указанной гетерологичной аминокислотной последовательности в CDRH2; аминокислотным остатком HC res106 по Кэботу в случае включения указанной гетерологичной аминокислотной последовательности в CDRH3; аминокислотным остатком LC res 32 по Кэботу в случае включения указанной гетерологичной аминокислотной последовательности в CDRL1; аминокислотным остатком LC res57 по Кэботу в случае включения указанной гетерологичной аминокислотной последовательности в CDRL2; и/или аминокислотным остатком LC res98 по Кэботу в случае включения указанной гетерологичной аминокислотной последовательности в CDRL3. Кроме того, настоящее изобретение относится к антителу или его фрагменту для применения в способе лечения, композиции, содержащей антитело или его фрагмент, нуклеиновой кислоте или смеси нуклеиновых кислот, кодирующей антитело или его фрагмент, клетке-хозяину, содержащей такую нуклеиновую кислоту или смесь нуклеиновых кислот, и к способу получения антитела или его фрагмента.The present invention relates to an antibody or fragment thereof comprising at least one heterologous amino acid sequence included within at least one CDR region of said antibody or fragment thereof, wherein said at least one heterologous amino acid sequence comprises an N-terminal linker sequence (Ntls ), atrial natriuretic peptide (ANP) and C-terminal linker sequence (Ctls). Optionally, at least a portion of said at least one CDR region is replaced by said at least one heterologous amino acid sequence included therein. At least 12 amino acid residues are present between the HC (heavy chain) amino acid residue of Cabot res25 and the first amino acid residue of ANP when the heterologous amino acid sequence is included in CDRH1; the amino acid residue HC res51 according to Cabot and the first amino acid residue of ANP in the case of inclusion of the specified heterologous amino acid sequence in CDRH2; the amino acid residue HC res92 according to Cabot and the first amino acid residue of ANP in the case of inclusion of the specified heterologous amino acid sequence in CDRH3; the amino acid residue LC (light chain) res26 according to Cabot and the first amino acid residue ANP in the case of inclusion of the specified heterologous amino acid sequence in CDRL1; the amino acid residue LC res49 according to Cabot and the first amino acid residue of ANP in the case of inclusion of the specified heterologous amino acid sequence in CDRL2; and/or the amino acid residue LC res88 according to Cabot and the first amino acid residue of ANP in the case of inclusion of the specified heterologous amino acid sequence in CDRL3. In addition, at least 9 amino acid residues are present between the last amino acid residue of ANP and the Cabot amino acid residue of HC res35a when the heterologous amino acid sequence is included in CDRH1; the amino acid residue HC res57 according to Cabot in the case of inclusion of the specified heterologous amino acid sequence in CDRH2; amino acid residue HC res106 according to Cabot in the case of inclusion of the specified heterologous amino acid sequence in CDRH3; amino acid residue LC res 32 according to Cabot in the case of inclusion of the specified heterologous amino acid sequence in CDRL1; the amino acid residue LC res57 according to Cabot in the case of inclusion of the specified heterologous amino acid sequence in CDRL2; and/or the amino acid residue LC res98 according to Cabot in the case of inclusion of the specified heterologous amino acid sequence in CDRL3. In addition, the present invention relates to an antibody or fragment thereof for use in a method of treatment, a composition containing the antibody or fragment thereof, a nucleic acid or mixture of nucleic acids encoding the antibody or fragment thereof, a host cell containing such a nucleic acid or mixture of nucleic acids , and to a method for producing the antibody or fragment thereof.
Предшествующий уровень техники настоящего изобретенияBACKGROUND OF THE INVENTION
Натрийуретические пептиды представляют собой семейство трех структурно родственных пептидов с нейрогуморальным действием. Предсердный натрийуретический пептид (ANP) представляет собой пептид из 28 аминокислот, содержащий центральную кольцевую структуру, образованную дисульфидным мостиком между цистеиновыми остатками 7 и 23. Человеческий ANP экспрессируется в клетках миоцитов предсердий в виде пре-прогормона длиной 153 аминокислоты. Расщепление сигнального пептида дает форму прогормона, которая затем дополнительно расщепляется на зрелый ANP и N-концевой остаток, известный как NT-proANP. Подобно ANP, также мозговой натрийуретический пептид (BNP) и натрийуретический пептид C-типа (CNP) продуцируются из белков-предшественников и содержат центральную кольцевую структуру. BNP в основном продуцируется и высвобождается кардиомиоцитами левого и правого предсердий сердца, тогда как BNP в основном продуцируется кардиомиоцитами желудочков. CNP синтезируется эндотелиальными клетками кровеносных сосудов. Помимо этих мест, натрийуретические пептиды также продуцируются в меньших количествах в других частях тела, например, в мозге, почках и надпочечниках. Натрийуретический пептид кодируется тремя отдельными генами, NPPA, NPPB, и NPPC. Аминокислотные последовательности трех пептидов являются высоко консервативными у млекопитающих (Potter et al., Handb Exp Pharmacol. 2009; (191):341-66). Тем не менее, были описаны значительные модификации последовательности натрийуретических пептидов, такие как усечения, аминокислотные замены, а также химерные слияния (например, CD-NP (McKie et al., Curr Heart Fail Rep.2010 Sep; 7 (3): 93-9)), которые приводят к мощным натрийуретическим пептидам, которые активируют клеточные рецепторы или связываются с ними и могут вызывать соответствующие физиологические эффекты.Natriuretic peptides are a family of three structurally related peptides with neurohumoral effects. Atrial natriuretic peptide (ANP) is a 28 amino acid peptide containing a central ring structure formed by a disulfide bridge between cysteine residues 7 and 23. Human ANP is expressed in atrial myocyte cells as a 153 amino acid long pre-prohormone. Cleavage of the signal peptide produces a prohormone form, which is then further cleaved into mature ANP and an N-terminal residue known as NT-proANP. Like ANP, also brain natriuretic peptide (BNP) and C-type natriuretic peptide (CNP) are produced from precursor proteins and contain a central ring structure. BNP is mainly produced and released by cardiomyocytes of the left and right atria of the heart, whereas BNP is mainly produced by ventricular cardiomyocytes. CNP is synthesized by endothelial cells of blood vessels. In addition to these sites, natriuretic peptides are also produced in smaller quantities in other parts of the body, such as the brain, kidneys and adrenal glands. Natriuretic peptide is encoded by three separate genes, NPPA, NPPB, and NPPC. The amino acid sequences of the three peptides are highly conserved among mammals (Potter et al., Handb Exp Pharmacol. 2009; (191):341-66). However, significant modifications to the natriuretic peptide sequence have been described, such as truncations, amino acid substitutions, as well as chimeric fusions (eg, CD-NP (McKie et al., Curr Heart Fail Rep.2010 Sep; 7(3):93- 9)), which lead to potent natriuretic peptides that activate or bind to cellular receptors and can cause corresponding physiological effects.
Натрийуретические пептиды связываются с тремя различными типами мембраносвязанных рецепторов - NPR-A, NPR-B и NPR-C, тем самым опосредуя их биологические эффекты. ANP и BNP с наибольшим сродством связываются с NPR-A; напротив, CNP имеет самое высокое сродство к рецептору NPR-B. NPR-A и NPR-B содержат (партикулярно) домен гуанилатциклазы (pGC), ферментативная активность которого вызывает повышение (внутриклеточного) циклического гуанозинмонофосфата (cGMP). В качестве вторичного посредника cGMP регулирует различные клеточные процессы. Рецептор NPR-C не проявляет активности в отношении гуанилатциклазы и также называется рецептором «клиренса», поскольку он может связывать натрийуретические пептиды, что приводит к их разрушению посредством эндоцитоза. Описана дополнительная сигнальная функция рецептора NPR-C посредством модуляции cAMP (Anand-Srivastava, Peptides. 2005 Jun; 26 (6): 1044-59).Natriuretic peptides bind to three different types of membrane-bound receptors - NPR-A, NPR-B and NPR-C, thereby mediating their biological effects. ANP and BNP bind with the highest affinity to NPR-A; in contrast, CNP has the highest affinity for the NPR-B receptor. NPR-A and NPR-B contain a (particular) guanylate cyclase (pGC) domain, the enzymatic activity of which causes an increase in (intracellular) cyclic guanosine monophosphate (cGMP). As a second messenger, cGMP regulates various cellular processes. The NPR-C receptor has no guanylate cyclase activity and is also called a clearance receptor because it can bind natriuretic peptides, leading to their destruction through endocytosis. An additional signaling function of the NPR-C receptor through modulation of cAMP has been described (Anand-Srivastava, Peptides. 2005 Jun; 26 (6): 1044-59).
Сердечные гормоны ANP и BNP выделяются при растяжении желудочков и предсердий, например. из-за чрезмерного объема плазмы. Они оказывают сосудорасширяющее действие за счет расслабления гладких мышц сосудов и приводят к снижению кровяного давления. В почках ANP вызывает среди прочего увеличение экскреции с мочой (диурез), а также повышение концентрации ионов натрия в моче (натрийурез). Полагают, что ANP представляет собой компенсаторный антагонист ренин-ангиотензин-альдостероновой системы (РААС), которая чрезмерно активируется при ряде сердечно-сосудистых заболеваний. Кроме того, ANP оказывает и другие нейрогуморальные эффекты, включая ингибирующее действие на симпатическую нервную систему, а также комплексное регулирующее действие на барорефлекс (Woods et al., Clin Exp Pharmacol Physiol. 2004 Nov; 31 (11): 791-4). Противовоспалительные, антигипертрофические и антифиброзные эффекты ANP, а также BNP и CNP были продемонстрированы на животных моделях для различных заболеваний (например, Knowles et al., 2001, J. Clin. Invest. 107: 975-984; Dahrouj et al., J Pharmacol Exp Ther. 2013 Jan; 344 (1): 96-102; Baliga et al., Br J Pharmacol. 2014 Jul; 171 (14): 3463-75; Mitaka et al. Intensive Care Med Exp.2014 Dec; 2 (1): 28; Werner et al., Basic Res Cardiol. 2016 Mar; 111 (2): 22; Kimura et al., Respir Res. 2016 Feb 19; 17: 19). Активация NPR-B посредством CNP играет существенную роль в росте костей (Yasoda et al., Clin. Calcium. 2009 Jul; 19 (7): 1003-8) и целостности эндотелия сосудов (Moyes et al., J Clin Invest. 2014 Sep; 124 (9): 4039-51).The cardiac hormones ANP and BNP are released when the ventricles and atria are stretched, for example. due to excessive plasma volume. They have a vasodilatory effect by relaxing the smooth muscles of blood vessels and lead to a decrease in blood pressure. In the kidneys, ANP causes, among other things, an increase in urinary excretion (diuresis) as well as an increase in the concentration of sodium ions in the urine (natriuresis). ANP is believed to be a compensatory antagonist of the renin-angiotensin-aldosterone system (RAAS), which is overactivated in a number of cardiovascular diseases. In addition, ANP has other neurohumoral effects, including an inhibitory effect on the sympathetic nervous system, as well as a complex regulatory effect on the baroreflex (Woods et al., Clin Exp Pharmacol Physiol. 2004 Nov; 31 (11): 791-4). Anti-inflammatory, antihypertrophic, and antifibrotic effects of ANP, as well as BNP and CNP, have been demonstrated in animal models for various diseases (eg, Knowles et al., 2001, J. Clin. Invest. 107: 975-984; Dahrouj et al., J Pharmacol Exp Ther 2013 Jan; 344 (1): 96-102; Br J Pharmacol 2014 Jul; 171 (14): 3463-75; 1): 28; Werner et al., Basic Res Cardiol. 111 (2): 22; Kimura et al., 2016 Feb 17: 19). Activation of NPR-B by CNP plays an essential role in bone growth (Yasoda et al., Clin. Calcium. 2009 Jul; 19(7): 1003-8) and vascular endothelial integrity (Moyes et al., J Clin Invest. 2014 Sep ; 124 (9): 4039-51).
Широкий спектр физиологических эффектов натрийуретических пептидов и их рецепторов делает их привлекательными целями при открытии новых лекарственных средств (Lumsden et al., Curr Pharm Des. 2010; 16 (37): 4080-8; Buglioni et al., Annu Rev Med. 2016; 67: 229-43). Например, натрийуретическая система cGMP может подавляться при различных патофизиологических состояниях, что может приводить к гипертонии, повышенной клеточной пролиферации, фиброзу, воспалению, эндотелиальной дисфункции, диабету, метаболическому синдрому, атеросклерозу, сердечной недостаточности, инфаркту миокарда, легочной гипертензии, глазным и почечным заболеваниям, костным заболеваниям, инсульту и/или сексуальная дисфункция.The wide range of physiological effects of natriuretic peptides and their receptors makes them attractive targets for drug discovery (Lumsden et al., Curr Pharm Des. 2010; 16(37): 4080-8; Buglioni et al., Annu Rev Med. 2016; 67: 229-43). For example, the cGMP natriuretic system can be suppressed in various pathophysiological conditions, which can lead to hypertension, increased cellular proliferation, fibrosis, inflammation, endothelial dysfunction, diabetes, metabolic syndrome, atherosclerosis, heart failure, myocardial infarction, pulmonary hypertension, eye and kidney diseases, bone diseases, stroke and/or sexual dysfunction.
Основным препятствием для терапевтического использования натрийуретических пептидов является их очень короткий период полужизни в плазме, составляющий всего несколько минут, в организме (Hunt et al., J Clin Endocrinol Metab. 1994 Jun; 78 (6): 1428-35; Kimura et al., Eur J Clin Pharmacol.2007 Jul; 63 (7): 699-702). Помимо эндоцитоза рецептором NPR-C, натрийуретические пептиды эффективно протеолитически расщепляются ферментами неприлизином (NEP) и разлагающим инсулин ферментом (IDE). Связанные с этим краткосрочные биологические эффекты вводимых натрийуретических пептидов ограничивают их терапевтическое использование в основном при до острых показаний. Например, инфузии рекомбинантного карперитида (ANP) и несиритида (BNP) одобрены для лечения острой декомпенсированной сердечной недостаточности в разных странах.A major obstacle to the therapeutic use of natriuretic peptides is their very short plasma half-life of only a few minutes in the body (Hunt et al., J Clin Endocrinol Metab. 1994 Jun; 78(6): 1428-35; Kimura et al. , Eur J Clin Pharmacol.2007 Jul;63(7):699-702). In addition to endocytosis by the NPR-C receptor, natriuretic peptides are efficiently degraded proteolytically by the enzymes neprilysin (NEP) and insulin degrading enzyme (IDE). The associated short-term biological effects of administered natriuretic peptides limit their therapeutic use mainly to pre-acute indications. For example, recombinant carperitide (ANP) and nesiritide (BNP) infusions are approved for the treatment of acute decompensated heart failure in various countries.
Лечению хронических заболеваний в значительной степени способствовало бы обеспечение агонистов NPR-A и NPR-B с увеличенным периодом полужизни в плазме, более высокой протеолитической стабильностью и увеличенной продолжительностью действия.The treatment of chronic diseases would greatly benefit from the provision of NPR-A and NPR-B agonists with extended plasma half-lives, higher proteolytic stability, and extended duration of action.
В последние годы были описаны несколько производных и вариантов натрийуретических пептидов, например, CD-NP (McKie et al., Curr Heart Fail Rep.2010 Sep; 7 (3): 93-9), ZD100 / MANP (McKie et al., Hypertension. 2010 Dec; 56 (6): 1152-9), PL-3994 (Edelson et al., Pulm Pharmacol Ther. 2013 Apr; 26 (2): 229-38), Ularitide (Anker et al., Eur Heart J. 2015 Mar 21; 36 (12): 715-2), ANX-042 (Pan et al., Proc Natl Acad Sci USA. 2009 Jul. 7; 106 (27): 11282-7) и BMN-111 (Wendt et al., J. Pharmacol Exp Ther. 2015 Apr; 353 (1): 132-49). Период полужизни CD-NP составляет около 18.5 мин (Lee et al., BMC Pharmacology 2007, 7 (Suppl I): P38). Другие производные ANP и CNP раскрыты в US 9,193,777 и EP 2 432 489 A, соответственно.In recent years, several derivatives and variants of natriuretic peptides have been described, such as CD-NP (McKie et al., Curr Heart Fail Rep.2010 Sep; 7(3):93-9), ZD100/MANP (McKie et al., Hypertension. 2010 Dec; 56 (6): 1152-9), PL-3994 (Edelson et al., Pulm Pharmacol Ther. 2013 Apr; 26 (2): 229-38), Ularitide (Anker et al., Eur Heart J. 2015 Mar 21; 36 (12): 715-2), ANX-042 (Pan et al., Proc Natl Acad Sci USA. 2009 Jul. 7; 106 (27): 11282-7) and BMN-111 ( Wendt et al. J Pharmacol Exp Ther 2015 Apr; 353 (1): 132-49). The half-life of CD-NP is about 18.5 min (Lee et al., BMC Pharmacology 2007, 7 (Suppl I): P38). Other ANP and CNP derivatives are disclosed in US 9,193,777 and EP 2,432,489 A, respectively.
Кроме того, слияния натрийуретического пептида, включая слияния с Fc, слияние с альбумином и ПЭГилированные натрийуретические пептиды, были описаны. Слияния натрийуретический пептид-Fc, например, описаны в US 2010/0310561, WO 2008/154226, WO 2010/117760, WO 2006/107124, WO 2008/136611 и WO 2008/079995. Слияния натрийуретический пептид-альбумин описаны в US 7,521,424 и US 2014/0148390, и ПЭГилированные натрийуретические пептиды описаны в US 2014/0148390.In addition, natriuretic peptide fusions, including Fc fusions, albumin fusions, and PEGylated natriuretic peptides, have been described. Natriuretic peptide-Fc fusions are, for example, described in US 2010/0310561, WO 2008/154226, WO 2010/117760, WO 2006/107124, WO 2008/136611 and WO 2008/079995. Natriuretic peptide-albumin fusions are described in US 7,521,424 and US 2014/0148390, and PEGylated natriuretic peptides are described in US 2014/0148390.
В WO 2005/060642 описано создание библиотек антител с привитыми пептидами ANP и BNP, полученных вставкой ANP или BNP с двумя рандомизированными фланкирующими аминокислотами на обоих концах в участок CDRH3 человеческого антитела, специфичного к столбнячному токсоиду. Аналогичным образом, в WO 2005/082004 раскрывается создание библиотеки антител с привитым миметиком ANP, полученной заменой всего исходного участка CDRH3 антитела 2G12 на пептид-миметик ANP, фланкированный двумя случайными аминокислотными остатками с каждой стороны. Ни одна из WO 2005/060642 и WO 2005/082004 не раскрывает какие-либо специфические антитела с привитым натрийуретическим пептидом, не говоря уже о функциональных характеристиках таких антител.WO 2005/060642 describes the construction of ANP and BNP peptide-grafted antibody libraries made by inserting ANP or BNP with two randomized flanking amino acids at either end into the CDRH3 region of a human tetanus toxoid-specific antibody. Similarly, WO 2005/082004 discloses the creation of an ANP mimetic-grafted antibody library obtained by replacing the entire original CDRH3 region of antibody 2G12 with an ANP mimetic peptide flanked by two random amino acid residues on each side. Neither WO 2005/060642 and WO 2005/082004 disclose any specific natriuretic peptide grafted antibodies, let alone the functional characteristics of such antibodies.
Задача настоящего изобретенияObjective of the present invention
Исходя из предшествующего уровня техники задача настоящего изобретения состоит в обеспечении агонистов рецептора натрийуретического пептида с повышенной стабильностью в сыворотке по сравнению с натрийуретическими пептидами дикого типа природного происхождения.Based on the prior art, it is an object of the present invention to provide natriuretic peptide receptor agonists with increased serum stability compared to naturally occurring wild-type natriuretic peptides.
Сущность изобретенияThe essence of the invention
Вышеуказанная задача решается объектами изобретения, раскрытыми в независимых пунктах формулы изобретения. Авторами настоящего изобретения неожиданно было обнаружено, что биологически активные варианты натрийуретического пептида со значительно увеличенной стабильностью в сыворотке по сравнению с натрийуретическими пептидами дикого типа природного происхождения могут быть получены посредством включения аминокислотной последовательности натрийуретического пептида в один из CDR участков молекулы иммуноглобулина или ее фрагмента, несмотря на короткую длину и высокую консервативность последовательности участков CDR иммуноглобулина, что создает значительные конформационные ограничения для включения биологически активных пептидов. Однако активность натрийуретических пептидов, включенных в участок CDR иммуноглобулина, как было показано, значительно различается. Авторы настоящего изобретения обнаружили, что решающим фактором для успешного включения с получением биологически активного варианта натрийуретического пептида является число аминокислотных остатков между включенным натрийуретическим пептидом и ближайшими соседними соединениями CDR-каркаса, N-терминальными и C-терминальными от включенного натрийуретического пептида. Ниже определенного числа N-терминальных и C-терминальных фланкирующих аминокислотных остатков между натрийуретическим пептидом и соседними соединениями CDR-каркаса образуются только слитые конструкции натрийуретического пептида и иммуноглобулина без биологической активности или с резко пониженной биологической активностью. Было обнаружено, что специфические линкерные последовательности, фланкирующие включенный натрийуретический пептид, являются особенно предпочтительными для достижения высокой пептидной активности, хороших уровней экспрессии и/или низких уровней фрагментации белка.The above problem is solved by the objects of the invention disclosed in the independent claims of the invention. The inventors of the present invention have surprisingly discovered that biologically active natriuretic peptide variants with significantly increased serum stability compared to wild-type natriuretic peptides of natural origin can be obtained by incorporating the amino acid sequence of a natriuretic peptide into one of the CDR regions of an immunoglobulin molecule or fragment thereof, despite short length and highly conserved sequence of immunoglobulin CDR regions, which creates significant conformational restrictions for the inclusion of biologically active peptides. However, the activity of natriuretic peptides included in the immunoglobulin CDR region has been shown to vary significantly. The present inventors have discovered that the critical factor for successful incorporation to produce a biologically active natriuretic peptide variant is the number of amino acid residues between the incorporated natriuretic peptide and the nearest adjacent CDR framework junctions N-terminal and C-terminal of the incorporated natriuretic peptide. Below a certain number of N-terminal and C-terminal flanking amino acid residues between the natriuretic peptide and adjacent CDR-framework compounds, only natriuretic peptide-immunoglobulin fusion constructs are formed without biological activity or with sharply reduced biological activity. It has been found that specific linker sequences flanking the included natriuretic peptide are particularly preferred to achieve high peptide activity, good expression levels and/or low levels of protein fragmentation.
Таким образом, первым объектом настоящего изобретения является антитело или его фрагмент, содержащее по меньшей мере одну гетерологичную аминокислотную, последовательность, включенную вовнутрь по меньшей мере одного CDR участка указанного антитела или его фрагмента, где указанная по меньшей мере одна гетерологичная аминокислотная последовательность содержит N-терминальную линкерную последовательность (Ntls), натрийуретический пептид и C-терминальную линкерную последовательность (Ctls), где необязательно по меньшей мере часть указанного по меньшей мере одного CDR участка замещена указанной по меньшей мере одной гетерологичной аминокислотной последовательностью, включенной в него, и гдеThus, the first object of the present invention is an antibody or fragment thereof comprising at least one heterologous amino acid sequence included within at least one CDR region of said antibody or fragment thereof, wherein said at least one heterologous amino acid sequence comprises an N-terminal a linker sequence (Ntls), a natriuretic peptide, and a C-terminal linker sequence (Ctls), wherein optionally at least a portion of said at least one CDR region is replaced by said at least one heterologous amino acid sequence included therein, and wherein
a) по меньшей мере 12 аминокислотных остатков присутствуют междуa) at least 12 amino acid residues are present between
i) аминокислотным остатком HC res25 по Кэботу (в тяжелой цепи, имеющей аминокислотную последовательность SEQ ID NO 65, это соответствует res S25) и первым аминокислотным остатком натрийуретического пептида в случае включения указанной гетерологичной аминокислотной последовательности в CDRH1;i) the amino acid residue HC res25 according to Cabot (in the heavy chain having the amino acid sequence SEQ ID NO 65, this corresponds to res S25) and the first amino acid residue of the natriuretic peptide in the case of inclusion of the specified heterologous amino acid sequence in CDRH1;
ii) аминокислотным остатком HC res51 по Кэботу (в тяжелой цепи, имеющей аминокислотную последовательность SEQ ID NO 65, это соответствует res I51) и первым аминокислотным остатком натрийуретического пептида в случае включения указанной гетерологичной аминокислотной последовательности в CDRH2;ii) the amino acid residue HC res51 according to Cabot (in the heavy chain having the amino acid sequence SEQ ID NO 65, this corresponds to res I51) and the first amino acid residue of the natriuretic peptide in the case of inclusion of the specified heterologous amino acid sequence in CDRH2;
iii) аминокислотным остатком HC res92 по Кэботу (в тяжелой цепи, имеющей аминокислотную последовательность SEQ ID NO 65, это соответствует res C96) и первым аминокислотным остатком натрийуретического пептида в случае включения указанной гетерологичной аминокислотной последовательности в CDRH3;iii) the amino acid residue HC res92 according to Cabot (in the heavy chain having the amino acid sequence SEQ ID NO 65, this corresponds to res C96) and the first amino acid residue of the natriuretic peptide in the case of inclusion of the specified heterologous amino acid sequence in CDRH3;
iv) аминокислотным остатком LC res26 по Кэботу (в легкой цепи, имеющей аминокислотную последовательность SEQ ID NO 66, это соответствует res S25) и первым аминокислотным остатком натрийуретического пептида в случае включения указанной гетерологичной аминокислотной последовательности в CDRL1;iv) the amino acid residue LC res26 according to Cabot (in the light chain having the amino acid sequence SEQ ID NO 66, this corresponds to res S25) and the first amino acid residue of the natriuretic peptide in the case of inclusion of the specified heterologous amino acid sequence in CDRL1;
v) аминокислотным остатком LC res49 по Кэботу (в легкой цепи, имеющей аминокислотную последовательность SEQ ID NO 66, это соответствует res Y51) и первым аминокислотным остатком натрийуретического пептида в случае включения указанной гетерологичной аминокислотной последовательности в CDRL2; и/илиv) the amino acid residue LC res49 according to Cabot (in the light chain having the amino acid sequence SEQ ID NO 66, this corresponds to res Y51) and the first amino acid residue of the natriuretic peptide in the case of inclusion of the specified heterologous amino acid sequence in CDRL2; and/or
vi) аминокислотным остатком LC res88 по Кэботу (в легкой цепи, имеющей аминокислотную последовательность SEQ ID NO 66, это соответствует res C90) и первым аминокислотным остатком натрийуретического пептида в случае включения указанной гетерологичной аминокислотной последовательности в CDRL3; и гдеvi) the amino acid residue LC res88 according to Cabot (in the light chain having the amino acid sequence SEQ ID NO 66, this corresponds to res C90) and the first amino acid residue of the natriuretic peptide in the case of inclusion of the specified heterologous amino acid sequence in CDRL3; and where
b) по меньшей мере 9 аминокислотных остатков присутствуют между последним аминокислотным остатком натрийуретического пептида иb) at least 9 amino acid residues are present between the last amino acid residue of the natriuretic peptide and
i) аминокислотным остатком HC res35a по Кэботу (в тяжелой цепи, имеющей аминокислотную последовательность SEQ ID NO 65, это соответствует res M34) в случае включения указанной гетерологичной аминокислотной последовательности в CDRH1;i) the amino acid residue HC res35a according to Cabot (in the heavy chain having the amino acid sequence SEQ ID NO 65, this corresponds to res M34) in the case of inclusion of the specified heterologous amino acid sequence in CDRH1;
ii) аминокислотным остатком HC res57 по Кэботу (в тяжелой цепи, имеющей аминокислотную последовательность SEQ ID NO 65, это соответствует res T58) в случае включения указанной гетерологичной аминокислотной последовательности в CDRH2;ii) the amino acid residue HC res57 according to Cabot (in the heavy chain having the amino acid sequence SEQ ID NO 65, this corresponds to res T58) in the case of inclusion of the specified heterologous amino acid sequence in CDRH2;
iii) аминокислотным остатком HC res106 по Кэботу (в тяжелой цепи, имеющей аминокислотную последовательность SEQ ID NO 65, это соответствует res G111) в случае включения указанной гетерологичной аминокислотной последовательности в CDRH3;iii) the amino acid residue HC res106 according to Cabot (in the heavy chain having the amino acid sequence SEQ ID NO 65, this corresponds to res G111) in the case of inclusion of the specified heterologous amino acid sequence in CDRH3;
iv) аминокислотным остатком LC res 32 по Кэботу (в легкой цепи, имеющей аминокислотную последовательность SEQ ID NO 66, это соответствует res D34) в случае включения указанной гетерологичной аминокислотной последовательности в CDRL1;iv) amino acid residue LC res 32 according to Cabot (in the light chain having the amino acid sequence SEQ ID NO 66, this corresponds to res D34) in the case of inclusion of the specified heterologous amino acid sequence in CDRL1;
v) аминокислотным остатком LC res57 по Кэботу (в легкой цепи, имеющей аминокислотную последовательность SEQ ID NO 66, это соответствует res G59) в случае включения указанной гетерологичной аминокислотной последовательности в CDRL2; и/илиv) the amino acid residue LC res57 according to Cabot (in the light chain having the amino acid sequence SEQ ID NO 66, this corresponds to res G59) in the case of inclusion of the specified heterologous amino acid sequence in CDRL2; and/or
vi) аминокислотным остатком LC res98 по Кэботу (в легкой цепи, имеющей аминокислотную последовательность SEQ ID NO 66, это соответствует res F102) в случае включения указанной гетерологичной аминокислотной последовательности в CDRL3.vi) the amino acid residue LC res98 according to Cabot (in the light chain having the amino acid sequence SEQ ID NO 66, this corresponds to res F102) in the case of inclusion of the specified heterologous amino acid sequence in CDRL3.
Другими объектами настоящего изобретения являются антитело или его фрагмент для применения в способе лечения, композиция, содержащая антитело или его фрагмент, нуклеиновая кислота или смесь нуклеиновых кислот, кодирующая антитело или его фрагмент клетка-хозяин, содержащая такую нуклеиновую кислоту или смесь нуклеиновых кислот, и способ получения антитела или его фрагмента.Other objects of the present invention are an antibody or fragment thereof for use in a method of treatment, a composition containing the antibody or fragment thereof, a nucleic acid or mixture of nucleic acids encoding the antibody or fragment thereof, a host cell containing such nucleic acid or mixture of nucleic acids, and a method obtaining an antibody or its fragment.
Подробное описание настоящего изобретенияDetailed Description of the Present Invention
Настоящее изобретение может стать более понятным посредством последующего подробного описания настоящего изобретения и примеров, приведенных в настоящем документе.The present invention can be better understood by the following detailed description of the present invention and the examples given herein.
Согласно первому аспекту настоящее изобретение относится к антителу или его фрагменту, содержащему по меньшей мере одну гетерологичную аминокислотную, последовательность, включенную вовнутрь по меньшей мере одного CDR участка указанного антитела или его фрагмента, где указанная по меньшей мере одна гетерологичная аминокислотная последовательность содержит N-терминальную линкерную последовательность (Ntls), натрийуретический пептид и C-терминальную линкерную последовательность (Ctls), где необязательно по меньшей мере часть указанного по меньшей мере одного CDR участка замещена указанной по меньшей мере одной гетерологичной аминокислотной последовательностью, включенной в него.According to a first aspect, the present invention provides an antibody or fragment thereof comprising at least one heterologous amino acid sequence included within at least one CDR region of said antibody or fragment thereof, wherein said at least one heterologous amino acid sequence comprises an N-terminal linker sequence (Ntls), a natriuretic peptide and a C-terminal linker sequence (Ctls), where optionally at least a portion of said at least one CDR region is replaced by said at least one heterologous amino acid sequence included therein.
Авторы настоящего изобретения обнаружили, что биологически активные варианты натрийуретического пептида со значительно увеличенной стабильностью в сыворотке по сравнению с натрийуретическими пептидами дикого типа природного происхождения, могут быть получены посредством включения аминокислотной последовательности натрийуретического пептида в один из CDR участков молекулы иммуноглобулина или ее фрагмента. Это обнаружение было совершенно неожиданным. Как хорошо известно в данной области техники, короткая длина и высокая консервативность последовательности участков CDR иммуноглобулина, что особенно выражено в CDRL1, CDRL2, CDRL3, CDRH1 и CDRH2, создает значительные конформационные ограничения для включения биологически активных пептидов в окружающие иммуноглобулин последовательности могут отрицательно влиять на экспрессию, складывание и/или биологическую активность включенного пептида. Авторы настоящего изобретения неожиданно обнаружили, что активность натрийуретических пептидов, включенных в участок CDR иммуноглобулина, значительно меняется в зависимости от точного пути конструирования антитела с привитым натрийуретическим пептидом. Решающим фактором успешного включения с получением функционального, т.е. биологически активного варианта натрийуретического пептида, как показано, является число аминокислотных остатков между включенным натрийуретическим пептидом и ближайшими соседними соединениями CDR-каркаса, N-терминальными и C-терминальными от включенного натрийуретического пептида. Ниже определенного числа N-термнальных и C-терминальных фланкирующих аминокислотных остатков между натрийуретическим пептидом и соседними соединениями CDR-каркаса образуются только слитые конструкции натрийуретического пептида и иммуноглобулина без биологической активности.The present inventors have discovered that biologically active natriuretic peptide variants with significantly increased serum stability compared to wild-type natriuretic peptides of natural origin can be obtained by incorporating the amino acid sequence of a natriuretic peptide into one of the CDR regions of an immunoglobulin molecule or fragment thereof. This discovery was completely unexpected. As is well known in the art, the short length and high sequence conservation of immunoglobulin CDR regions, particularly expressed in CDRL1, CDRL2, CDRL3, CDRH1 and CDRH2, creates significant conformational constraints for the incorporation of biologically active peptides into the surrounding immunoglobulin sequences, which can negatively affect expression , folding and/or biological activity of the included peptide. The inventors of the present invention have unexpectedly discovered that the activity of natriuretic peptides included in the CDR region of an immunoglobulin varies significantly depending on the exact route of construction of the natriuretic peptide-grafted antibody. The decisive factor for successful inclusion with obtaining functional, i.e. a biologically active variant of a natriuretic peptide is shown to be the number of amino acid residues between the included natriuretic peptide and the nearest adjacent CDR-framework junctions N-terminal and C-terminal of the included natriuretic peptide. Below a certain number of N-terminal and C-terminal flanking amino acid residues between the natriuretic peptide and adjacent CDR-framework compounds, only natriuretic peptide-immunoglobulin fusion constructs are formed without biological activity.
Термины «включенный», «вставленный», «интегрированный», «привитый» и «внедренный», а также «включение», «вставка», «интеграция», «прививание» и «внедрение» используются в настоящем документе взаимозаменяемо. В контексте настоящего изобретения эти термины относятся к образованию гибридных полинуклеиновых кислот или гибридных полипептидов путем введения гетерологичной последовательности в исходную последовательность антитела или фрагмента антитела. Такое включение может быть осуществлено любыми способами. Обычно антитело или его фрагмент, содержащий натрийуретический пептид, фланкированный N-терминальной и C-терминальной линкерной последовательностью, получают с помощью методики и экспрессии рекомбинантной ДНК, как описано в данном документе.The terms “incorporated,” “inserted,” “integrated,” “grafted,” and “embedded,” as well as “incorporated,” “inserted,” “integrated,” “grafted,” and “embedded,” are used interchangeably herein. In the context of the present invention, these terms refer to the formation of hybrid polynucleic acids or hybrid polypeptides by introducing a heterologous sequence into the original sequence of an antibody or antibody fragment. Such inclusion can be accomplished by any means. Typically, an antibody or fragment thereof containing a natriuretic peptide flanked by an N-terminal and C-terminal linker sequence is produced using recombinant DNA techniques and expression as described herein.
Включение натрийуретического пептида, фланкированного N-терминальной и C-терминальной линкерной последовательностью, в CDR участок исходной последовательности антитела или его фрагмента, может привести к делеции по меньшей мере части указанного CDR участка. Например, клонирование последовательности нуклеиновой кислоты, кодирующей указанную гетерологичную аминокислотную последовательность, содержащую N-терминальную линкерную последовательность, натрийуретический пептид и C-терминальную линкерную последовательность, может быть осуществлено таким образом, что часть CDR-кодирующей последовательности замещается включенной гетерологичной последовательностью нуклеиновой кислоты. Согласно другим частным вариантам осуществления, включение гетерологичной аминокислотной последовательности, содержащей натрийуретический пептид, не приводит к делеции аминокислотных остатков CDR участка, в который гетерологичная аминокислотная последовательность вставлена.Incorporation of a natriuretic peptide flanked by an N-terminal and C-terminal linker sequence into a CDR region of the parent antibody sequence or fragment thereof may result in the deletion of at least a portion of said CDR region. For example, cloning of a nucleic acid sequence encoding said heterologous amino acid sequence comprising an N-terminal linker sequence, a natriuretic peptide and a C-terminal linker sequence may be accomplished such that a portion of the CDR coding sequence is replaced by an included heterologous nucleic acid sequence. In other particular embodiments, inclusion of a heterologous amino acid sequence comprising a natriuretic peptide does not result in deletion of the amino acid residues of the CDR region into which the heterologous amino acid sequence is inserted.
В контексте настоящего изобретения термин «гетерологичная последовательность последовательностей» относится к аминокислотной последовательности, которая не происходит из исходного «пустого» антитела или его фрагмента, в который она включена. Внедрение гетерологической аминокислотной последовательности в антитело или его фрагмент, таким образом, дает сконструированную рекомбинантную молекулу антитела, состоящую из аминокислотных последовательностей различного происхождения.In the context of the present invention, the term “heterologous sequence sequence” refers to an amino acid sequence that is not derived from the original “empty” antibody or fragment thereof in which it is included. The introduction of a heterologous amino acid sequence into an antibody or fragment thereof thus produces an engineered recombinant antibody molecule consisting of amino acid sequences of different origins.
Термин «натрийуретический пептид» относится к пептидам, которые могут вызывать натрийурез, выведение натрия почками. Натрийуретические пептиды включает включают атриальный натрийуретический пептид (ANP), мозговой натрийуретический пептид (BNP), натрийуретический пептид C-типа (CNP), натрийуретический пептид мамб (DNP) и Уродилатин. Натрийуретические пептиды в контексте настоящего изобретения могут быть любого происхождения. Натрийуретические пептиды включают натуральные натрийуретические пептиды, такие как натрийуретический пептид дикого типа и их мутантные варианты, а также гомолог гомологичные натрийуретические пептиды другого вида. Однако этот термин также включает искусственно созданные натрийуретические пептиды, такие как модифицированные химерные варианты отдельных натрийуретических пептидов. Известно, что использование кодонов у разных видов различно. Таким образом, при экспрессии гетерологичного белка в клетке-мишени может быть необходимо или, по меньшей мере, полезно адаптировать последовательность нуклеиновой кислоты к использованию кодона клеткой-мишенью. Способы разработки и конструирования производных данного белка хорошо известны любому специалисту в данной области техники.The term "natriuretic peptide" refers to peptides that can cause natriuresis, the excretion of sodium by the kidneys. Natriuretic peptides include atrial natriuretic peptide (ANP), brain natriuretic peptide (BNP), C-type natriuretic peptide (CNP), mamb natriuretic peptide (DNP) and Urodilatin. Natriuretic peptides in the context of the present invention can be of any origin. Natriuretic peptides include natural natriuretic peptides, such as wild-type natriuretic peptide and mutant variants thereof, as well as other homologous natriuretic peptides. However, the term also includes man-made natriuretic peptides, such as modified chimeric variants of individual natriuretic peptides. Codon usage is known to vary between species. Thus, when expressing a heterologous protein in a target cell, it may be necessary, or at least beneficial, to tailor the nucleic acid sequence to the codon usage of the target cell. Methods for developing and constructing derivatives of this protein are well known to anyone skilled in the art.
Согласно частным вариантам осуществления натрийуретический пептид выбран из натрийуретического пептида дикого типа любого вида и функционального варианта любого такого натрийуретического пептида дикого типа. В контексте настоящего изобретения термин “функциональный вариант натрийуретического пептида” или “вариант функционального натрийуретического пептида” относится к натрийуретическому пептиду любого происхождения, включая природные и сконструированные пептиды, которые различны по аминокислотной последовательности и/или последовательности нуклеиновой кислоты, кодирующей аминокислотную последовательность данного натрийуретического пептида, как например натрийуретического пептида дикого типа данного вида, но все еще функционально активны. В контексте настоящего изобретения термин «функционально активный» относится к способности варианта натрийуретического пептида выполнять биологические функции природного натрийуретического пептида, в частности натрийуретического пептида дикого типа. В частности, «функционально активный» означает, что вариант натрийуретического пептида способен связываться со своим соответствующим рецептором. В случае лигандов NPR-A и NPR-B, «функционально активный», в частности, означает способность опосредовать увеличение (внутриклеточного) циклического гуанозинмонофосфата (cGMP) посредством связывания с одним или обоими этими рецепторами.In particular embodiments, the natriuretic peptide is selected from any wild-type natriuretic peptide and a functional variant of any such wild-type natriuretic peptide. In the context of the present invention, the term “functional natriuretic peptide variant” or “functional natriuretic peptide variant” refers to a natriuretic peptide of any origin, including natural and engineered peptides that differ in amino acid sequence and/or nucleic acid sequence encoding the amino acid sequence of the natriuretic peptide, such as the wild-type natriuretic peptide of the species, but are still functionally active. In the context of the present invention, the term "functionally active" refers to the ability of a variant natriuretic peptide to perform the biological functions of a naturally occurring natriuretic peptide, in particular a wild-type natriuretic peptide. In particular, “functionally active” means that the natriuretic peptide variant is capable of binding to its corresponding receptor. In the case of the NPR-A and NPR-B ligands, “functionally active” specifically means the ability to mediate an increase in (intracellular) cyclic guanosine monophosphate (cGMP) through binding to one or both of these receptors.
Согласно частным вариантам осуществления функциональные варианты натрийуретического пептида способны осуществлять одну или несколько биологических функций данного натрийуретического пептида, такого как натрийуретический пептид дикого типа данного вида на по меньшей мере около 50%, в частности по меньшей мере около 60%, по меньшей мере около 70%, по меньшей мере около 80% и самое большее, в частности, по меньшей мере около 90%, где одна или несколько биологических функций включают без ограничение, связывание натрийуретического пептида с его соответствующим рецептором и/или индукцию увеличения внутриклеточного cGMP.In particular embodiments, functional variants of a natriuretic peptide are capable of performing one or more of the biological functions of a given natriuretic peptide, such as a wild-type natriuretic peptide of a given species, by at least about 50%, in particular at least about 60%, at least about 70% , at least about 80% and at most, in particular at least about 90%, where one or more biological functions include, without limitation, binding a natriuretic peptide to its corresponding receptor and/or inducing an increase in intracellular cGMP.
Функциональная активность натрийуретических пептидов может быть измерена любыми методами, включая методы in vitro, которые позволяют либо измерить повышение (внутриклеточного) циклического гуанозинмонофосфата (cGMP), либо измерить изменения клеточных процессов, регулируемых cGMP, включая методы описанный в примерах 3 и 5. Согласно частным вариантам осуществления, вариант натрийуретического пептида (непривитый) считается функционально активным, если его значение EC50, определенное с помощью флуоресцентного анализа, описанного в примере 3, ниже 500 нМ, более конкретно ниже 250 нМ, более конкретно ниже 150 нМ, более конкретно ниже 100 нМ, более конкретно ниже 50 нМ, наиболее конкретно ниже 25 нМ.The functional activity of natriuretic peptides can be measured by any methods, including in vitro methods that either measure increases in (intracellular) cyclic guanosine monophosphate (cGMP) or measure changes in cellular processes regulated by cGMP, including methods described in Examples 3 and 5. In particular embodiments implementation, the natriuretic peptide variant (non-grafted) is considered functionally active if its EC50 value, determined using the fluorescence assay described in Example 3, is below 500 nM, more specifically below 250 nM, more specifically below 150 nM, more specifically below 100 nM, more specifically below 50 nM, most particularly below 25 nM.
Включение такого функционального варианта натрийуретического пептида в один из CDR участков молекулы иммуноглобулина или ее фрагмента, как описано в данном документе, дает иммуноглобулин, привитый натрийуретическим пептидом, с функциональной активностью натрийуретического пептида, и значительно повышенную стабильность в сыворотке по сравнению с непривитым функциональным вариантом натрийуретического пептида, как показано в примерах. Привитый натрийуретическим пептидом иммуноглобулин считается биологически активным (то есть функциональным), если он дает значительный положительный сигнал любым методом, который измеряет увеличение (внутриклеточного) циклического гуанозинмонофосфата (cGMP) прямо или косвенно путем оценки изменений в клеточных процессах, регулируемых cGMP. В частности, функциональную активность иммуноглобулина с привитым натрийуретическим пептидом можно оценить методами, описанными в примерах 3 и 5. В случае иммуноглобулинов, привитых натрийуретическим пептидом, значимость обычно оценивается на основании i) сравнения с отрицательным образцом, таким как пустой каркас иммуноглобулина, например, конструкция №209, антитело, содержащее SEQ ID NO 65 и SEQ ID NO 66, TPP-5657, ii) сравнение с положительным образцом, например, конструкция №117, антитело, содержащее SEQ ID NO 67 и SEQ ID NO 66, TPP-5661, и iii) дозозависимость.Incorporation of such a functional natriuretic peptide variant into one of the CDR regions of an immunoglobulin molecule or fragment thereof, as described herein, provides a natriuretic peptide-grafted immunoglobulin with the functional activity of a natriuretic peptide, and significantly increased stability in serum compared to an ungrafted functional natriuretic peptide variant. , as shown in the examples. A natriuretic peptide-grafted immunoglobulin is considered biologically active (i.e., functional) if it produces a significant positive signal by any method that measures an increase in (intracellular) cyclic guanosine monophosphate (cGMP), either directly or indirectly by assessing changes in cGMP-regulated cellular processes. In particular, the functional activity of a natriuretic peptide-grafted immunoglobulin can be assessed by the methods described in Examples 3 and 5. In the case of natriuretic peptide-grafted immunoglobulins, significance is usually assessed based on i) comparison with a negative sample, such as an empty immunoglobulin scaffold, e.g. construct No. 209, antibody containing SEQ ID NO 65 and SEQ ID NO 66, TPP-5657, ii) comparison with a positive sample, for example, construct No. 117, antibody containing SEQ ID NO 67 and SEQ ID NO 66, TPP-5661, and iii) dose dependence.
Несмотря на то, что функциональный вариант натрийуретического пептида согласно настоящему изобретению может содержать любое количество мутаций, включающих добавления, делеции и/или замены одной или нескольких аминокислот по сравнению с эталонным натрийуретическим пептидом, функциональный вариант натрийуретического пептида обычно будет сохранять ключевые характеристики. соответствующего натрийуретического пептида, таких как ключевые остатки в центральном кольцевом домене. Консервативные остатки натрийуретических пептидов описаны, например, в Lincoln R. Potter et al. (Handb Exp Pharmacol. 2009; (191): 341-366). Таким образом, согласно частным вариантам осуществления, функциональный вариант натрийуретического пептида на по меньшей мере 60%, по меньшей мере 65%, по меньшей мере 70%, по меньшей мере 75%, по меньшей мере 80%, по меньшей мере 85%, по меньшей мере 90% или по меньшей мере 95% идентичен последовательности согласно последовательности, показанной ниже:Although the functional variant of the natriuretic peptide of the present invention may contain any number of mutations including additions, deletions and/or substitutions of one or more amino acids compared to the reference natriuretic peptide, the functional variant of the natriuretic peptide will generally retain key characteristics. the corresponding natriuretic peptide, such as key residues in the central ring domain. Conserved natriuretic peptide residues are described, for example, in Lincoln R. Potter et al. (Handb Exp Pharmacol. 2009;(191):341-366). Thus, in particular embodiments, the natriuretic peptide variant is at least 60%, at least 65%, at least 70%, at least 75%, at least 80%, at least 85% functional at least 90% or at least 95% sequence identity according to the sequence shown below:
X1CFGX2X3X4DRIX5X6X7SX8LGCX1 CFGX2 X3 X4 DRIX5 X6 X7 SX8 LGC
где X1 и X5 представляют собой G или S;where X1 and X5 represent G or S;
X3 представляет собой R или K;X3 represents R or K;
X6 представляет собой A или S; иX6 represents A or S; And
X2, X4, X7 и X8 могут представлять собой любую аминокислоту.X2 , X4 , X7 and X8 can be any amino acid.
На самом деле, натрийуретические пептиды любого типа могут быть включены в участок CDR иммуноглобулина или его фрагмента, как описано в настоящем документе. В частности, авторы настоящего изобретения обнаружили, что присутствие одного типа натрийуретического пептида достаточно для удовлетворения обоих минимальных требований достаточной биологической активности привитого натрийуретического пептида, и в частности подходящие N-концевые и C-концевые аминокислотные последовательности могут быть обеспечены другими типами натрийуретических пептидов. Не желая ограничиваться теорией, полагают, что эти схожие требования для успешного внедрения натрийуретического пептида в молекулу иммуноглобулина среди различных типов натрийуретического пептида могут быть обусловлены структурным сходством и/или механизмами действия в семействе натрийуретических пептидов.In fact, natriuretic peptides of any type can be included in the CDR region of an immunoglobulin or fragment thereof, as described herein. In particular, the present inventors have discovered that the presence of one type of natriuretic peptide is sufficient to satisfy both of the minimum requirements for sufficient biological activity of a grafted natriuretic peptide, and in particular suitable N-terminal and C-terminal amino acid sequences can be provided by other types of natriuretic peptides. Without wishing to be bound by theory, it is believed that these similar requirements for successful insertion of a natriuretic peptide into an immunoglobulin molecule among different types of natriuretic peptide may be due to structural similarities and/or mechanisms of action within the natriuretic peptide family.
Согласно частным вариантам осуществления натрийуретический пептид выбран из группы, состоящей из человеческого ANP, имеющего последовательность SEQ ID NO 23, человеческого BNP, имеющего последовательность согласно SEQ ID NO 24, человеческого CNP, имеющего последовательность согласно SEQ ID NO 25, и пептида, имеющего последовательность на по меньшей мере 60%, 65%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95% или по меньшей мере 98% идентичную последовательности согласно любой из SEQ ID NO 23 - 25. Снова, натрийуретический пептид, имеющий последовательность, отличную от человеческих натрийуретических пептидов ANP, BNP и CNP дикого типа, может иметь любое естественное происхождение, например мутантная версия натрийуретического пептида человека дикого типа, или гомолог другого вида, или сконструированный натрийуретический пептид. Способы разработки и конструирования вариантов пептидов хорошо известны специалисту в данной области техники.In particular embodiments, the natriuretic peptide is selected from the group consisting of human ANP having the sequence of SEQ ID NO 23, human BNP having the sequence of SEQ ID NO 24, human CNP having the sequence of SEQ ID NO 25, and a peptide having the sequence of at least 60%, 65%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, or at least 98% sequence identity to any of SEQ ID NOs 23 to 25. Again, a natriuretic peptide having the sequence other than the wild-type human natriuretic peptides ANP, BNP and CNP may be of any natural origin, such as a mutant version of the wild-type human natriuretic peptide, or a homolog of another species, or an engineered natriuretic peptide. Methods for developing and constructing peptide variants are well known to one skilled in the art.
Согласно таким частным вариантам осуществления натрийуретический пептид, имеющий последовательность, на по меньшей мере 60%, 65%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95% или по меньшей мере 98% идентичную последовательности согласно любой из SEQ ID NO 23 - 25, представляет собой функциональный вариант натрийуретического пептида.In such particular embodiments, a natriuretic peptide having a sequence that is at least 60%, 65%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, or at least 98% identical to the sequence of any of SEQ ID NO 23 - 25, is a functional variant of natriuretic peptide.
«Процент (%) идентичности последовательности" относительно ссылочной полинуклеотидной или полипептидной последовательности, соответственно, определяли как процент остатков нуклеиновой кислоты или аминокислотных остатков, соответственно, в последовательности-кандидате, которые идентичны по остаткам нуклеиновой кислоты или аминокислотным остаткам, соответственно в ссылочной полинуклеотидной или полипептидной последовательности, соответственно, после выравнивания последовательностей и введение гэпов при необходимости, для достижения максимального процента идентичности последовательности. Консервативные замены не рассматриваются как часть идентичности последовательности. Согласно частным вариантам осуществления, любые гэпы, введенные в кандидатную последовательность и/или эталонную последовательность, не могут в общей сложности превышать более 50%, более 40%, более 30%, более 25%, более 20%, более 15% или более 10% от общего количества остатков эталонной последовательности. Согласно конкретному варианту осуществления идентичность последовательности в процентах определяется без введения каких-либо гэпов в кандидатную или эталонную последовательность (т.е. с использованием выравнивания без пробелов). Выравнивание с целью определения процента идентичности аминокислотной последовательности может быть достигнуто различными способами, которые находятся в пределах компетентности специалистов в данной области техники, например, с использованием общедоступного программного обеспечения, такое как BLAST, BLAST 2, ALIGN или Megalign (DNASTAR). Специалисты в данной области техники могут определить соответствующие параметры для выравнивания последовательностей, включая любые алгоритмы, необходимые для достижения максимального выравнивания сравниваемых полноразмерных последовательностей."Percentage (%) sequence identity" relative to the reference polynucleotide or polypeptide sequence, respectively, was defined as the percentage of nucleic acid residues or amino acid residues, respectively, in the candidate sequence that are identical in nucleic acid residues or amino acid residues, respectively, in the reference polynucleotide or polypeptide sequences, respectively, after sequence alignment and introducing gaps as necessary to achieve the maximum percentage of sequence identity. Conservative substitutions are not considered part of the sequence identity. In particular embodiments, any gaps introduced into the candidate sequence and/or reference sequence cannot be included. in total exceed more than 50%, more than 40%, more than 30%, more than 25%, more than 20%, more than 15%, or more than 10% of the total number of residues of the reference sequence. In a particular embodiment, the percentage sequence identity is determined without introducing any - or gaps into a candidate or reference sequence (i.e. using alignment without spaces). Alignment to determine percent amino acid sequence identity can be achieved in a variety of ways that are within the skill in the art, for example, using publicly available software such as BLAST, BLAST 2, ALIGN or Megalign (DNASTAR). Those skilled in the art can determine appropriate parameters for sequence alignment, including any algorithms necessary to achieve maximum alignment of the full-length sequences being compared.
Натрийуретический пептид, который имеет определенный процент идентичности с последовательностью данного эталонного натрийуретического пептида, например, человеческий ANP, имеющий аминокислотную последовательность SEQ ID NO 23, может содержать одну или несколько мутаций, включающих добавление, делецию и/или замену одной или нескольких аминокислот по сравнению с эталонным натрийуретическим пептидом. Согласно настоящему изобретению указанные удаленные, добавленные и/или замещенные аминокислоты могут быть последовательными аминокислотами или могут быть разбросаны по длине аминокислотной последовательности натрийуретического пептида, которая имеет данный процент идентичности с последовательностью эталонного натрийуретического пептида, например, человеческий ANP, имеющий аминокислотную последовательность SEQ ID NO 23. На уровне ДНК, последовательность нуклеиновой кислоты, кодирующая натрийуретический пептид, которая имеет данный процент идентичности с последовательностью данного эталонного натрийуретического пептида может отличаться в большей степени из-за вырожденности генетического кода.A natriuretic peptide that has a certain percentage of sequence identity with a given reference natriuretic peptide, for example, human ANP having the amino acid sequence of SEQ ID NO 23, may contain one or more mutations including the addition, deletion and/or substitution of one or more amino acids compared to reference natriuretic peptide. According to the present invention, said deleted, added and/or substituted amino acids may be consecutive amino acids or may be scattered throughout the amino acid sequence of a natriuretic peptide that has a given percentage identity to the sequence of a reference natriuretic peptide, for example, human ANP having the amino acid sequence of SEQ ID NO 23 At the DNA level, the nucleic acid sequence encoding a natriuretic peptide that has a given percentage of identity with the sequence of a given reference natriuretic peptide may differ to a large extent due to the degeneracy of the genetic code.
Согласно настоящему изобретению любое количество аминокислот может быть добавлено, удалено и/или заменено, до тех пор, пока сохраняется указанная идентичность с последовательностью эталонного натрийуретического пептида. Согласно частным вариантам осуществления предусмотренная идентичность аминокислотной последовательности соблюдается, и вариант натрийуретического пептида является биологически активным, т.е. является функциональным вариантом натрийуретического пептида. Предпочтительно, чтобы биологическая активность натрийуретического пептида, который имеет заданный процент идентичной последовательности с последовательностью данного эталонного натрийуретического пептида, например, человеческого ANP, имеющего аминокислотную последовательность SEQ ID NO 23, снижается менее чем на 90%, менее чем на 80%, менее чем на 70%, менее чем на 60%, менее чем на 50%, менее чем на 25% или менее чем на 10% по сравнению с указанным эталонным натрийуретическим пептидом, как измерено согласно описанному выше анализу.According to the present invention, any number of amino acids can be added, removed and/or replaced as long as the specified identity with the sequence of the reference natriuretic peptide is maintained. In particular embodiments, the intended amino acid sequence identity is maintained and the natriuretic peptide variant is biologically active, i.e. is a functional variant of natriuretic peptide. Preferably, the biological activity of a natriuretic peptide that has a predetermined percentage of sequence identity with that of a given reference natriuretic peptide, e.g., human ANP having the amino acid sequence of SEQ ID NO 23, is reduced by less than 90%, less than 80%, less than 70%, less than 60%, less than 50%, less than 25%, or less than 10% compared to the specified reference natriuretic peptide, as measured according to the assay described above.
Термин "антитело", как применяется в описании настоящего изобретения, описывает иммуноглобулиновые молекулы, предпочтительно состоящие из четырех полипептидных цепей, двух тяжелых (Н) цепей и двух легких (L) цепей, которые, как правило, связываются дисульфидными мостиками. Каждая тяжелая цепь содержит вариабельный домен тяжелой цепи (сокращаемые в настоящем изобретении как VH) и константный домен тяжелой цепи. Константный домен тяжелой цепи может содержать, например, три домена СН1, СН2 и СН3. Каждая легкая цепь содержит вариабельный домен легкой цепи (сокращаемый в настоящем изобретении как VL) и константный домен легкой цепи. Константный домен легкой цепи содержит один домен (CL). Домены VL и VH могут быть дополнительно подразделены на гипервариабельные участки, называемые участками, определяющими комплементарность (CDR), вкрапленные в области, которые являются более консервативными, называемые каркасными участками (FR). Каждый VH и VL, как правило, состоит из трех CDR и до четырех FR. расположенных от N-конца к С-концу, например, в следующем порядке: FR1, CDR1, FR2, CDR2, FR3, CDR3, FR4.The term "antibody" as used herein describes immunoglobulin molecules, preferably consisting of four polypeptide chains, two heavy (H) chains and two light (L) chains, which are typically linked by disulfide bridges. Each heavy chain contains a heavy chain variable domain (abbreviated as VH in the present invention) and a heavy chain constant domain. The heavy chain constant domain may contain, for example, three domains CH1, CH2 and CH3. Each light chain contains a light chain variable domain (abbreviated as VL in the present invention) and a light chain constant domain. The light chain constant domain contains one domain (CL). The VL and VH domains can be further subdivided into hypervariable regions called complementarity determining regions (CDRs) interspersed with regions that are more conserved called framework regions (FRs). Each VH and VL typically consists of three CDRs and up to four FRs. located from N-terminus to C-terminus, for example, in the following order: FR1, CDR1, FR2, CDR2, FR3, CDR3, FR4.
Как применяется в описании настоящего изобретения, термин «участки, определяющие комплементарность» (CDR; например, CDR1, CDR2 и CDR3), относится к аминокислотным остаткам вариабельного домена антитела, присутствие которого необходимо для связывания антигена. Каждый вариабельный домен, как правило, имеет три участка CDR, идентифицируемые как CDR1, CDR2 и CDR3. Каждый участок, определяющий комплементарность, может содержать аминокислотные остатки из "участка, определяющего комплементарность", как определено по Кэботу (например, около остатков 24-34 (L1), 50-56 (L2) и 89-97 (L3) в вариабельной области легкой цепи и 31-35 (Н1), 50-65 (Н2) и 95-102 (Н3) в вариабельном домене тяжелой цепи; (Kabat et al., Sequences of Proteins of Immunological Interest, 5th Ed. Public Health Service, National Institutes of Health, Bethesda, MD. (1991)) и/или остатки из "гипервариабельной петли" (например, около остатков 26-32 (L1), 50-52 (L2) и 91-96 (L3) в вариабельной области легкой цепи и 26-32 (Н1), 53-55 (Н2) и 96-101 (НЗ) в вариабельном домене тяжелой цепи (Chothia and Lesk; J Mol Biol 196:901-917 (1987)). В некоторых случаях участок, определяющий комплементарность, может включать аминокислоты как из участка CDR, определенного в соответствии с Кэботом, так и из гипервариабельной петли.As used herein, the term “complementarity determining regions” (CDRs; eg, CDR1, CDR2, and CDR3) refers to the amino acid residues of an antibody variable domain whose presence is required for antigen binding. Each variable domain typically has three CDR regions, identified as CDR1, CDR2 and CDR3. Each complementarity determining region may contain amino acid residues from a “complementarity determining region” as defined by Cabot (for example, around residues 24-34 (L1), 50-56 (L2) and 89-97 (L3) in the variable region light chain and 31-35 (H1), 50-65 (H2) and 95-102 (H3) in the heavy chain variable domain (Kabat et al., Sequences of Proteins of Immunological Interest, 5th Ed. Public Health Service, National; Institutes of Health, Bethesda, MD. (1991)) and/or residues from the "hypervariable loop" (eg, around residues 26-32 (L1), 50-52 (L2) and 91-96 (L3) in the lung variable region chains and 26-32 (H1), 53-55 (H2) and 96-101 (HC) in the heavy chain variable domain (Chothia and Lesk; J Mol Biol 196:901-917 (1987)). complementarity determining may include amino acids from both the Cabot CDR region and the hypervariable loop.
В зависимости от аминокислотной последовательности константного домена их тяжелых цепей интактные антитела могут быть отнесены к различным "классам". Существует пять главных классов интактных антител: IgA, IgD, IgE, IgG и IgM - и некоторые из них могут дополнительно разделяться на "подклассы" (изотипы), например, IgGI, IgG2, IgG3, IgG4, IgA и IgA2. В контексте настоящего изобретения термин “антитело” включает молекулы иммуноглобулина любого первичного класса - включая IgG, IgE, IgM, IgD, IgA и IgY - и любого подкласса - включая IgG1, lgG2, lgG3, lgG4, IgA1 и Ig A2 - природного происхождения или полученные рекомбинантными средствами и включает все в общем известные антитела. Предпочтительным классом иммуноглобулинов для применения согласно настоящему изобретению является IgG. Термин “антитело” также относится к другим белковым каркасам, которые способны ориентировать вставки CDR антител в ту же самую активную конформацию связывания, что и в природных антителах, так что связывание антигена-мишени, наблюдаемое с этими химерными белками, сохраняется относительно связывающей активности природного антитела, из которого были получены CDR.Depending on the amino acid sequence of the constant domain of their heavy chains, intact antibodies can be classified into different "classes". There are five main classes of intact antibodies: IgA, IgD, IgE, IgG and IgM - and some of these can be further divided into "subclasses" (isotypes), such as IgGI, IgG2, IgG3, IgG4, IgA and IgA2. In the context of the present invention, the term “antibody” includes immunoglobulin molecules of any primary class - including IgG, IgE, IgM, IgD, IgA and IgY - and any subclass - including IgG1, IgG2, IgG3, IgG4, IgA1 and IgA2 - naturally occurring or prepared recombinant means and includes all generally known antibodies. The preferred class of immunoglobulins for use in the present invention is IgG. The term “antibody” also refers to other protein scaffolds that are capable of orienting antibody CDR inserts into the same active binding conformation as in natural antibodies, such that the target antigen binding observed with these chimeric proteins is maintained relative to the binding activity of the natural antibody. , from which the CDRs were derived.
В контексте настоящего изобретения термин «фрагмент» антитела/иммуноглобулина относится к любой части антитела /иммуноглобулина, которая содержит по меньшей мере один участок CDR. В частности, фрагмент антитела согласно настоящему изобретению сохраняет способность увеличивать время полужизни в сыворотке биологически активного пептида, предпочтительно натрийуретического пептида, включенного в него. Фрагменты антитела согласно настоящему изобретению включают фрагменты Fab, Fab', Fab'-SH, F(ab')2 и Fv; диатела; однодоменные антитела (Dabs); линейные антитела; одноцепочечные молекул антител (scFv) и дисульфид-стабилизированные фрагменты антитела Fv (dsFv); а также мультиспецифические фрагменты антитела и фрагменты, содержащие домен VL или VH, которые получают из интактных иммуноглобулинов или получают рекомбинантными средствами.In the context of the present invention, the term "fragment" of an antibody/immunoglobulin refers to any portion of an antibody/immunoglobulin that contains at least one CDR region. In particular, the antibody fragment of the present invention retains the ability to increase the serum half-life of a biologically active peptide, preferably a natriuretic peptide, included therein. Antibody fragments of the present invention include Fab, Fab', Fab'-SH, F(ab')2 and Fv fragments; diabodies; single domain antibodies (Dabs); linear antibodies; single-chain antibody molecules (scFv) and disulfide-stabilized Fv antibody fragments (dsFv); as well as multispecific antibody fragments and VL or VH domain-containing fragments that are derived from intact immunoglobulins or produced by recombinant means.
F(ab')2 или Fab могут быть разработаны для минимизации или полного удаления межмолекулярных дисульфидных взаимодействий, которые происходят между доменами CH1 и CL. Фрагменты антител в соответствии с настоящим изобретением могут включать вариабельный (вариабельные) участок (участки) отдельно или в комбинации со всеми или частично из следующего: шарнирная область, домены CH1, CH2, CH3 и CL. Также включены фрагменты антител, содержащие любую комбинацию вариабельного (вариабельных) участка (участков) с шарнирной областью, доменом CH1, CH2, CH3 и CL.F(ab')2 or Fab can be designed to minimize or completely remove the intermolecular disulfide interactions that occur between the CH1 and CL domains. Antibody fragments of the present invention may include variable region(s) alone or in combination with all or part of the following: hinge region, CH1, CH2, CH3 and CL domains. Also included are antibody fragments containing any combination of variable region(s) with a hinge region, CH1, CH2, CH3 and CL domain.
Антитело или его фрагмент составляет каркас, который придает стабильность включенному в него натрийуретическому пептиду. Например, время полужизни в сыворотке натрийуретического пептида, включенного в участок CDR антитела, как описано в настоящем документе, может быть увеличено по сравнению с временем полужизни в сыворотке натрийуретического пептида природного происхождения.The antibody or fragment thereof constitutes a scaffold that imparts stability to the natriuretic peptide included therein. For example, the serum half-life of a natriuretic peptide included in the CDR region of an antibody as described herein may be increased compared to the serum half-life of a naturally occurring natriuretic peptide.
В принципе, гетерологичная аминокислотная последовательность, содержащая натрийуретический пептид, может быть включена в любую молекулу иммуноглобулина или ее фрагмент.В частности, иммуноглобулины любого вида (включая, но не ограничиваясь этим, человека, крупного рогатого скота, мыши, крысы, свиньи, собаки, акулы, ламы и верблюда) и любого первичного класса и подкласса могут использоваться в соответствии с настоящим изобретением. Однако для терапевтического использования может быть предпочтительным человеческое или гуманизированное антитело. В контексте настоящего изобретения термин «человеческое антитело» относится к антителам, имеющим аминокислотную последовательность человеческого иммуноглобулина, и включает антитела, выделенные из библиотек иммуноглобулинов человека, из В-клеток человека или от животных, трансгенных в отношении одного или нескольких иммуноглобулинов человека. а также синтетические человеческие антитела. Согласно частному варианту осуществления аминокислотные последовательности легкой цепи и тяжелой цепи вариабельного домена происходят из последовательностей человеческой зародышевой линии LV 1-40 и HV 3-23 соответственно (для получения дополнительной информации см. Пример 1).In principle, a heterologous amino acid sequence containing a natriuretic peptide can be included in any immunoglobulin molecule or fragment thereof. In particular, immunoglobulins of any kind (including, but not limited to, human, bovine, mouse, rat, pig, dog, shark, llama and camel) and any primary class and subclass may be used in accordance with the present invention. However, for therapeutic use, a human or humanized antibody may be preferred. As used herein, the term “human antibody” refers to antibodies having the amino acid sequence of a human immunoglobulin and includes antibodies isolated from human immunoglobulin libraries, from human B cells, or from animals transgenic for one or more human immunoglobulins. as well as synthetic human antibodies. In a particular embodiment, the amino acid sequences of the light chain and heavy chain of the variable domain are derived from human germline sequences LV 1-40 and HV 3-23, respectively (for more information, see Example 1).
В контексте настоящего изобретения термин «гуманизированное антитело» или «фрагмент гуманизированного антитела» относится к антителу или его фрагменту, которое (i) происходит из источника, отличного от человека (например, трансгенная мышь, несущая гетерологичную иммунную систему), антитело которой основано на последовательности зародышевой линии человека; или (ii) химерное, где вариабельный домен имеет нечеловеческое происхождение, а константный домен имеет человеческое происхождение, или (iii) с привитыми CDR, где CDR вариабельного домена имеют нечеловеческое происхождение, в то время как один или несколько каркасов вариабельного домена имеют человеческое происхождение, и константный домен (если таковой имеется) имеет человеческое происхождение.As used herein, the term “humanized antibody” or “humanized antibody fragment” refers to an antibody or fragment thereof that (i) is derived from a non-human source (e.g., a transgenic mouse harboring a heterologous immune system) whose antibody is based on the sequence human germline; or (ii) chimeric, where the variable domain is of non-human origin and the constant domain is of human origin, or (iii) grafted CDRs, where the variable domain CDRs are of non-human origin while one or more variable domain scaffolds are of human origin, and the constant domain (if any) is of human origin.
Антитело или его фрагмент согласно настоящему изобретению может быть моноспецифическим, биспецифическим, триспецифическим или более мультиспецифическим.The antibody or fragment thereof of the present invention may be monospecific, bispecific, trispecific, or more multispecific.
В контексте настоящего изобретения термин «содержит» или «содержащий» означает «включая, но не ограничиваясь этим». Термин является открытым, означая наличие любых заявленных функций, элементов, целых чисел, стадий или компонентов, но не исключая наличие или добавление одной или нескольких других функций, элементов, целых чисел, стадий, компонентов или их группы. Термин «содержащий», таким образом, включает более ограничительные термины «состоящий из» и «по существу состоящий из». Согласно одному варианту осуществления термин «содержащий», используемый по всей заявке и, в частности, в формуле изобретения, может быть заменен термином «состоящий из».In the context of the present invention, the term “comprises” or “comprising” means “including, but not limited to.” The term is open-ended, meaning the presence of any stated functions, elements, integers, steps or components, but not excluding the presence or addition of one or more other functions, elements, integers, stages, components, or group thereof. The term “comprising” thus includes the more restrictive terms “consisting of” and “essentially consisting of.” According to one embodiment, the term "comprising" as used throughout the application and in particular in the claims may be replaced by the term "consisting of".
В контексте настоящего изобретения термин “около” или “приблизительно” означает в пределах от 80% до 120%, альтернативно в пределах от 90% до 110%, включая в пределах от 95% до 105% от данного значения.In the context of the present invention, the term “about” or “approximately” means in the range of 80% to 120%, alternatively in the range of 90% to 110%, including in the range of 95% to 105% of this value.
В антителе или его фрагменте согласно настоящему изобретению, a) по меньшей мере 12 аминокислотных остатков присутствуют междуIn an antibody or fragment thereof according to the present invention, a) at least 12 amino acid residues are present between
i) аминокислотным остатком HC res25 по Кэботу (в тяжелой цепи, имеющей аминокислотную последовательность SEQ ID NO 65, это соответствует res S25) и первым аминокислотным остатком натрийуретического пептида в случае включения гетерологичной аминокислотной последовательности в CDRH1;i) the amino acid residue HC res25 according to Cabot (in the heavy chain having the amino acid sequence SEQ ID NO 65, this corresponds to res S25) and the first amino acid residue of the natriuretic peptide in the case of inclusion of a heterologous amino acid sequence in CDRH1;
ii) аминокислотным остатком HC res51 по Кэботу (в тяжелой цепи, имеющей аминокислотную последовательность SEQ ID NO 65, это соответствует res I51) и первым аминокислотным остатком натрийуретического пептида в случае включения гетерологичной аминокислотной последовательности в CDRH2;ii) the amino acid residue HC res51 according to Cabot (in the heavy chain having the amino acid sequence SEQ ID NO 65, this corresponds to res I51) and the first amino acid residue of the natriuretic peptide in the case of inclusion of a heterologous amino acid sequence in CDRH2;
iii) аминокислотным остатком HC res92 по Кэботу (в тяжелой цепи, имеющей аминокислотную последовательность SEQ ID NO 65, это соответствует res C96) и первым аминокислотным остатком натрийуретического пептида в случае включения гетерологичной аминокислотной последовательности в CDRH3;iii) the amino acid residue HC res92 according to Cabot (in the heavy chain having the amino acid sequence SEQ ID NO 65, this corresponds to res C96) and the first amino acid residue of the natriuretic peptide in the case of inclusion of a heterologous amino acid sequence in CDRH3;
iv) аминокислотным остатком LC res26 по Кэботу (в легкой цепи, имеющей аминокислотную последовательность SEQ ID NO 66, это соответствует res S25) и первым аминокислотным остатком натрийуретического пептида в случае включения гетерологичной аминокислотной последовательности в CDRL1;iv) the amino acid residue LC res26 according to Cabot (in the light chain having the amino acid sequence SEQ ID NO 66, this corresponds to res S25) and the first amino acid residue of the natriuretic peptide in the case of inclusion of a heterologous amino acid sequence in CDRL1;
v) аминокислотным остатком LC res49 по Кэботу (в легкой цепи, имеющей аминокислотную последовательность SEQ ID NO 66, это соответствует res Y51) и первым аминокислотным остатком натрийуретического пептида в случае включения гетерологичной аминокислотной последовательности в CDRL2; и/илиv) the amino acid residue LC res49 according to Cabot (in the light chain having the amino acid sequence SEQ ID NO 66, this corresponds to res Y51) and the first amino acid residue of the natriuretic peptide in the case of inclusion of a heterologous amino acid sequence in CDRL2; and/or
vi) аминокислотным остатком LC res88 по Кэботу (в легкой цепи, имеющей аминокислотную последовательность SEQ ID NO 66, это соответствует res C90) и первым аминокислотным остатком натрийуретического пептида в случае включения гетерологичной аминокислотной последовательности в CDRL3;vi) the amino acid residue LC res88 according to Cabot (in the light chain having the amino acid sequence SEQ ID NO 66, this corresponds to res C90) and the first amino acid residue of the natriuretic peptide in the case of inclusion of a heterologous amino acid sequence in CDRL3;
и b) по меньшей мере 9 аминокислотных остатков присутствуют между последним аминокислотным остатком натрийуретического пептида иand b) at least 9 amino acid residues are present between the last amino acid residue of the natriuretic peptide and
i) аминокислотным остатком HC res35a по Кэботу (в тяжелой цепи, имеющей аминокислотную последовательность SEQ ID NO 65, это соответствует res M34) в случае включения гетерологичной аминокислотной последовательности в CDRH1;i) the amino acid residue HC res35a according to Cabot (in the heavy chain having the amino acid sequence SEQ ID NO 65, this corresponds to res M34) in the case of inclusion of a heterologous amino acid sequence in CDRH1;
ii) аминокислотным остатком HC res57 по Кэботу (в тяжелой цепи, имеющей аминокислотную последовательность SEQ ID NO 65, это соответствует res T58) в случае включения гетерологичной аминокислотной последовательности в CDRH2;ii) the amino acid residue HC res57 according to Cabot (in the heavy chain having the amino acid sequence of SEQ ID NO 65, this corresponds to res T58) in the case of inclusion of a heterologous amino acid sequence in CDRH2;
iii) аминокислотным остатком HC res106 по Кэботу (в тяжелой цепи, имеющей аминокислотную последовательность SEQ ID NO 65, это соответствует res G111) в случае включения гетерологичной аминокислотной последовательности в CDRH3;iii) the amino acid residue HC res106 according to Cabot (in the heavy chain having the amino acid sequence SEQ ID NO 65, this corresponds to res G111) in the case of inclusion of a heterologous amino acid sequence in CDRH3;
iv) аминокислотным остатком LC res 32 по Кэботу (в легкой цепи, имеющей аминокислотную последовательность SEQ ID NO 66, это соответствует res D34) в случае включения гетерологичной аминокислотной последовательности в CDRL1;iv) amino acid residue LC res 32 according to Cabot (in the light chain having the amino acid sequence SEQ ID NO 66, this corresponds to res D34) in the case of inclusion of a heterologous amino acid sequence in CDRL1;
v) аминокислотным остатком LC res57 по Кэботу (в легкой цепи, имеющей аминокислотную последовательность SEQ ID NO 66, это соответствует res G59) в случае включения гетерологичной аминокислотной последовательности в CDRL2; и/илиv) the amino acid residue LC res57 according to Cabot (in the light chain having the amino acid sequence SEQ ID NO 66, this corresponds to res G59) in the case of inclusion of a heterologous amino acid sequence in CDRL2; and/or
vi) аминокислотным остатком LC res98 по Кэботу (в легкой цепи, имеющей аминокислотную последовательность SEQ ID NO 66, это соответствует res F102) в случае включения гетерологичной аминокислотной последовательности в CDRL3.vi) the amino acid residue LC res98 according to Cabot (in the light chain having the amino acid sequence SEQ ID NO 66, this corresponds to res F102) in the case of inclusion of a heterologous amino acid sequence in CDRL3.
Название перечисленных выше аминокислотных остатков относится к положению аминокислоты в исходной молекуле иммуноглобулина до включения гетерологичной аминокислотной последовательности. В контексте настоящего изобретения перечисленные выше аминокислотные остатки называются «эталонными аминокислотами» или «ссылочными аминокислотами». Эти эталонные аминокислотные остатки лежат на соединениях каркаса CDR или рядом с ними, но не обязательно соответствуют стандартным определениям границ CDR (стандартные определения границ CDR представляют собой аминокислотные остатки S25 и W36 для CDRH1; S49 и R67 для CDRH2; K98 и W108 для CDRH3; C22 и W37 для CDRL1; Y51 и G59 для CDRL2; C90 и F102 для CDRL3. Jarasch and Skerra, Proteins 2017 Jan; 85 (1): 65-71).The name of the amino acid residues listed above refers to the position of the amino acid in the original immunoglobulin molecule before inclusion of the heterologous amino acid sequence. In the context of the present invention, the amino acid residues listed above are referred to as “reference amino acids” or “reference amino acids”. These reference amino acid residues lie at or near CDR backbone junctions, but do not necessarily correspond to standard CDR boundary definitions (standard CDR boundary definitions are amino acid residues S25 and W36 for CDRH1; S49 and R67 for CDRH2; K98 and W108 for CDRH3; C22 and W37 for CDRL1; Y51 and G59 for CDRL2; C90 and F102 for CDRL3, Proteins 2017 Jan;
Ближайшая соседняя N-концевая эталонная аминокислота от вставленного натрийуретического пептида плюс аминокислотное удлинение, присутствующее между указанной эталонной аминокислотой и первым аминокислотным остатком, вставленного натрийуретического пептида, в настоящем документе обозначают как «N-концевой последовательностью». N-концевая последовательность содержит Ntls. Согласно частным вариантам осуществления N-концевая последовательность состоит из Ntls плюс соседней N-концевой эталонной аминокислоты.The nearest adjacent N-terminal reference amino acid of the inserted natriuretic peptide plus the amino acid extension present between the reference amino acid and the first amino acid residue of the inserted natriuretic peptide is herein referred to as the "N-terminal sequence". The N-terminal sequence contains Ntls. In particular embodiments, the N-terminal sequence consists of Ntls plus an adjacent N-terminal reference amino acid.
Аминокислотное удлинение, присутствующее между аминокислотным остатком вставленного натрийуретического пептида и ближайшей соседней эталонной C-концевой аминокислотой от вставленного натрийуретического пептида, плюс указанная эталонная аминокислота в настоящем документе обозначают как “C-концевая последовательность”. C-концевая последовательность содержит Ctls. Согласно частным вариантам осуществления C-концевая последовательность состоит из Ctls плюс соседней C- концевой эталонной аминокислоты.The amino acid extension present between the amino acid residue of the inserted natriuretic peptide and the nearest adjacent reference C-terminal amino acid from the inserted natriuretic peptide plus said reference amino acid is herein referred to as the “C-terminal sequence”. The C-terminal sequence contains Ctls. In particular embodiments, the C-terminal sequence consists of Ctls plus an adjacent C-terminal reference amino acid.
Согласно частным вариантам осуществления, Ntls содержит GS линкерную последовательность; PN линкерную последовательность; аминокислотную последовательность, которая является частью каркаса человеческого антитела IgG или последовательность, которая на по меньшей мере 80% идентична ей, в частности аминокислотную последовательность, которая является частью каркаса домена fab человеческого антитела IgG или последовательность, которая на по меньшей мере 80% идентична ей, более конкретно последовательность согласно любой из SEQ ID NO 1, 2 или 4, или последовательность, которая на по меньшей мере 80% идентична последовательности согласно любой из SEQ ID NO 1, 2 или 4; последовательность согласно любой из SEQ ID NO 6, 7, 9, 11, 13, 15, 16, 17, 19 или 21; или последовательность, которая на по меньшей мере 60%, по меньшей мере 70%, по меньшей мере 80%, по меньшей мере 90% или по меньшей мере 95% идентична последовательности согласно любой из SEQ ID NO 6, 7, 9, 11, 13, 15, 16, 17, 19 или 21. Ntls также может содержать любую комбинацию перечисленных выше аминокислотных последовательностей.In particular embodiments, Ntls contains a GS linker sequence; PN linker sequence; an amino acid sequence that is part of the framework of a human IgG antibody or a sequence that is at least 80% identical thereto, in particular an amino acid sequence that is part of the framework of the fab domain of a human IgG antibody or a sequence that is at least 80% identical thereto, more specifically, a sequence according to any of SEQ ID NOs 1, 2 or 4, or a sequence that is at least 80% identical to a sequence according to any of SEQ ID NOs 1, 2 or 4; sequence according to any of SEQ ID NOs 6, 7, 9, 11, 13, 15, 16, 17, 19 or 21; or a sequence that is at least 60%, at least 70%, at least 80%, at least 90%, or at least 95% identical to the sequence of any of SEQ ID NOs 6, 7, 9, 11, 13, 15, 16, 17, 19, or 21. Ntls may also contain any combination of the amino acid sequences listed above.
Согласно таким частным вариантам осуществления, Ntls содержит GS линкерную последовательность; PN линкерную последовательность; аминокислотную последовательность, которая является частью каркаса человеческого антитела IgG или последовательность, которая на по меньшей мере 80% идентична ей, в частности аминокислотную последовательность, которая является частью каркаса домена fab человеческого антитела IgG или последовательность, которая на по меньшей мере 80% идентична ей, более конкретно последовательность согласно любой из SEQ ID NO 1, 2 или 4, или последовательность, которая на по меньшей мере 80% идентична последовательности согласно любой из SEQ ID NO 1, 2 или 4; последовательность согласно любой из SEQ ID NO 6, 7, 9, 11, 13, 15 или 21; последовательность, которая на по меньшей мере 60%, по меньшей мере 70%, по меньшей мере 80%, по меньшей мере 90%, или по меньшей мере 95% идентична последовательности согласно любой из SEQ ID NO 6, 7, 9, 11, 13, 15, или 21; или любую их комбинацию.In such particular embodiments, Ntls comprises a GS linker sequence; PN linker sequence; an amino acid sequence that is part of the framework of a human IgG antibody or a sequence that is at least 80% identical thereto, in particular an amino acid sequence that is part of the framework of the fab domain of a human IgG antibody or a sequence that is at least 80% identical thereto, more specifically, a sequence according to any of SEQ ID NOs 1, 2 or 4, or a sequence that is at least 80% identical to a sequence according to any of SEQ ID NOs 1, 2 or 4; sequence according to any of SEQ ID NOs 6, 7, 9, 11, 13, 15 or 21; a sequence that is at least 60%, at least 70%, at least 80%, at least 90%, or at least 95% identical to the sequence of any of SEQ ID NOs 6, 7, 9, 11, 13, 15, or 21; or any combination thereof.
Согласно частным вариантам осуществления, Ctls содержит GS линкерную последовательность; PN линкерную последовательность; аминокислотную последовательность, которая является частью каркаса человеческого антитела IgG или последовательность, которая на по меньшей мере 80% идентична ей, в частности аминокислотную последовательность, которая является частью каркаса домена fab человеческого антитела IgG или последовательность, которая на по меньшей мере 80% идентична ей, более конкретно последовательность согласно любой из SEQ ID NO 1, 3 или 5, или последовательность, которая на по меньшей мере 80% идентична последовательности согласно любой из SEQ ID NO 1, 3 или 5; последовательность согласно любой из SEQ ID NO 6, 8, 10, 12, 14, 15, 17, 18, 19, 20 или 22; или последовательность, которая на по меньшей мере 60%, по меньшей мере 70%, по меньшей мере 80%, по меньшей мере 90% или по меньшей мере 95% идентична последовательности согласно любой из SEQ ID NO 6, 8, 10, 12, 14, 15, 17, 18, 19, 20 или 22. Ctls также может содержать любую комбинацию перечисленных выше аминокислотных последовательностей.In particular embodiments, Ctls comprises a GS linker sequence; PN linker sequence; an amino acid sequence that is part of the framework of a human IgG antibody or a sequence that is at least 80% identical thereto, in particular an amino acid sequence that is part of the framework of the fab domain of a human IgG antibody or a sequence that is at least 80% identical thereto, more specifically, a sequence according to any of SEQ ID NOs 1, 3 or 5, or a sequence that is at least 80% identical to a sequence according to any of SEQ ID NOs 1, 3 or 5; sequence according to any of SEQ ID NOs 6, 8, 10, 12, 14, 15, 17, 18, 19, 20 or 22; or a sequence that is at least 60%, at least 70%, at least 80%, at least 90%, or at least 95% identical to the sequence of any of SEQ ID NOs 6, 8, 10, 12, 14, 15, 17, 18, 19, 20, or 22. Ctls may also contain any combination of the amino acid sequences listed above.
Согласно частным вариантам осуществления, Ctls содержит GS линкерную последовательность; PN линкерную последовательность; аминокислотную последовательность, которая является частью каркаса человеческого антитела IgG или последовательность, которая на по меньшей мере 80% идентична ей, в частности аминокислотную последовательность, которая является частью каркаса домена fab человеческого антитела IgG или последовательность, которая на по меньшей мере 80% идентична ей, более конкретно последовательность согласно любой из SEQ ID NO 1, 3 или 5, или последовательность, которая на по меньшей мере 80% идентична последовательности согласно любой из SEQ ID NO 1, 3 или 5; последовательность согласно любой из SEQ ID NO 6, 8, 10, 12, 14, 15, 20 или 22; последовательность, которая на по меньшей мере 60%, по меньшей мере 70%, по меньшей мере 80%, по меньшей мере 90% или по меньшей мере 95% идентична последовательности согласно любой из SEQ ID NO 6, 8, 10, 12, 14, 15, 20 или 22; или любую их комбинацию.In particular embodiments, Ctls comprises a GS linker sequence; PN linker sequence; an amino acid sequence that is part of the framework of a human IgG antibody or a sequence that is at least 80% identical thereto, in particular an amino acid sequence that is part of the framework of the fab domain of a human IgG antibody or a sequence that is at least 80% identical thereto, more specifically, a sequence according to any of SEQ ID NOs 1, 3 or 5, or a sequence that is at least 80% identical to a sequence according to any of SEQ ID NOs 1, 3 or 5; sequence according to any of SEQ ID NOs 6, 8, 10, 12, 14, 15, 20 or 22; a sequence that is at least 60%, at least 70%, at least 80%, at least 90%, or at least 95% identical to the sequence of any of SEQ ID NOs 6, 8, 10, 12, 14 , 15, 20 or 22; or any combination thereof.
Согласно частным вариантам осуществления идентичность последовательности между последовательностью, содержащейся в Ntls и/или Ctls и любой из SEQ ID NO 1 - 22 составляет по меньшей мере 60%, в частности по меньшей мере 65%, по меньшей мере 70%, по меньшей мере 75%, по меньшей мере 80%, по меньшей мере 85%, по меньшей мере 90%, по меньшей мере 95% или 100%.In particular embodiments, the sequence identity between the sequence contained in Ntls and/or Ctls and any of SEQ ID NOs 1 to 22 is at least 60%, in particular at least 65%, at least 70%, at least 75 %, at least 80%, at least 85%, at least 90%, at least 95% or 100%.
В контексте настоящего изобретения термин “GS линкерная последовательность” относится к пептидному линкеру, содержащему в основном глициновые и сериновые остатки. В частности, по меньшей мере 60%, по меньшей мере 65%, по меньшей мере 70%, по меньшей мере 75%, по меньшей мере 80%, по меньшей мере 85%, по меньшей мере 90%, по меньшей мере 95% или 100% аминокислотных остатков GS линкерной последовательности согласно настоящему изобретению выбраны из глициновых и сериновых остатков. GS линкерная последовательность согласно настоящему изобретению может, например, содержать от 1 до 30 аминокислотных остатков в общем. В частности, GS линкерная последовательность согласно настоящему изобретению не содержит более 3, 2 или 1 аминокислотных остатков, отличных от глицина или серина.In the context of the present invention, the term “GS linker sequence” refers to a peptide linker containing primarily glycine and serine residues. In particular, at least 60%, at least 65%, at least 70%, at least 75%, at least 80%, at least 85%, at least 90%, at least 95% or 100% of the amino acid residues of the GS linker sequence according to the present invention are selected from glycine and serine residues. The GS linker sequence according to the present invention may, for example, contain from 1 to 30 amino acid residues in total. In particular, the GS linker sequence according to the present invention does not contain more than 3, 2 or 1 amino acid residues other than glycine or serine.
В контексте настоящего изобретения термин “PN линкерная последовательность” относится к пептидному линкеру, содержащему в основном пролиновый и аспарагиновый остатки. В частности, по меньшей мере 60%, по меньшей мере 65%, по меньшей мере 70%, по меньшей мере 75%, по меньшей мере 80%, по меньшей мере 85%, по меньшей мере 90%, по меньшей мере 95% или 100% аминокислотных остатков PN линкерной последовательности согласно настоящему изобретению выбраны из пролинового и аспарагинового остатка. PN линкерная последовательность согласно настоящему изобретению может, например, содержать от 1 до 30 аминокислотных остатков в общем. В частности, PN линкерная последовательность согласно настоящему не содержит более 3, 2 или 1 аминокислотных остатков, отличных от пролина или аспарагина. Другие аминокислотные остатки, которые могут присутствовать в PN линкерной последовательности согласно настоящему изобретению, представляют собой, например, остатки лизина или глутаминовой кислоты.In the context of the present invention, the term “PN linker sequence” refers to a peptide linker containing mainly proline and aspartic residues. In particular, at least 60%, at least 65%, at least 70%, at least 75%, at least 80%, at least 85%, at least 90%, at least 95% or 100% of the amino acid residues of the PN linker sequence according to the present invention are selected from a proline and an aspartic residue. The PN linker sequence according to the present invention may, for example, contain from 1 to 30 amino acid residues in total. In particular, the PN linker sequence according to the present does not contain more than 3, 2 or 1 amino acid residues other than proline or asparagine. Other amino acid residues that may be present in the PN linker sequence according to the present invention are, for example, lysine or glutamic acid residues.
Согласно частным вариантам осуществления линкерная последовательность, содержащаяся в Ntls и/или Ctls и выбранная из GS линкерной последовательности; PN линкерной последовательности; линкерной последовательности каркаса антитела IgG человека; последовательности каркаса fab домена IgG человека; последовательности, которая по меньшей мере на 80% идентична последовательности линкерной последовательности, последовательности каркаса fab домена IgG человека или последовательности согласно любой из SEQ ID NO: 1-5; и последовательности, которая на по меньшей мере 60% идентична последовательности согласно любой из SEQ ID NO: 6 - 22, содержит по меньшей мере 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 или 10 аминокислотных остатков. Линкерная последовательность, содержащаяся в Ntls и/или Ctls, может, например, содержать до 30, 28, 26, 25, 24, 23, 22, 21, 20, 19, 18, 17, 16, 15, 14, 13, 12, 11 или 10 аминокислотных остатков.In particular embodiments, the linker sequence contained in Ntls and/or Ctls and selected from the GS linker sequence; PN linker sequence; a human IgG antibody backbone linker sequence; human IgG fab domain framework sequences; a sequence that is at least 80% identical to the sequence of a linker sequence, a human IgG fab domain framework sequence, or a sequence according to any of SEQ ID NOs: 1-5; and a sequence that is at least 60% identical to the sequence according to any of SEQ ID NO: 6 to 22, contains at least 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 or 10 amino acid residues. The linker sequence contained in Ntls and/or Ctls may, for example, contain up to 30, 28, 26, 25, 24, 23, 22, 21, 20, 19, 18, 17, 16, 15, 14, 13, 12 , 11 or 10 amino acid residues.
В случае линкеров, содержащих последовательность каркаса антитела IgG человека или последовательность, которая на по меньшей мере 80% идентична ей, может быть особенно предпочтительно использована последовательность участка каркаса, которая примыкает к CDR, в которую включена гетерологичная аминокислотная последовательность. Например, Ntls и/или Ctls могут содержать линкер, содержащий аминокислотную последовательность, которая является частью каркасного участка FRH2 или FRH3 в случае, если гетерологическая аминокислотная последовательность включена в домен CDRH2. Подобным образом, Ntls и/или Ctls могут содержать линкер, содержащий аминокислотную последовательность, которая является частью каркасного участка FRL2 или FRL3 в случае, если гетерологическая аминокислотная последовательность включена в участок CDRL2.In the case of linkers containing a human IgG antibody framework sequence or a sequence that is at least 80% identical thereto, it may be particularly preferable to use a framework sequence that is adjacent to a CDR in which the heterologous amino acid sequence is included. For example, Ntls and/or Ctls may contain a linker containing an amino acid sequence that is part of the FRH2 or FRH3 framework when the heterologous amino acid sequence is included in the CDRH2 domain. Likewise, Ntls and/or Ctls may contain a linker containing an amino acid sequence that is part of the FRL2 or FRL3 framework region if a heterologous amino acid sequence is included in the CDRL2 region.
Согласно частным вариантам осуществления, Ntls состоит из GS линкерной последовательности; PN линкерной последовательности; аминокислотной последовательности, которая является частью каркаса антитела IgG человека или последовательности, которая на по меньшей мере 80% идентична ей, в частности аминокислотной последовательности, которая является частью каркаса домена fab человеческого антитела IgG, или последовательности, которая на по меньшей мере 80% идентична ей, более конкретно последовательности согласно любой из SEQ ID NO 1, 2 или 4 или последовательности, которая на по меньшей мере 80% идентична последовательности согласно любой из SEQ ID NO 1, 2 или 4; последовательности согласно любой из SEQ ID NO 6, 7, 9, 11, 13, 15, 16, 17, 19 или 21; последовательности, которая на по меньшей мере 60%, по меньшей мере 70%, по меньшей мере 80%, по меньшей мере 90% или по меньшей мере 95% идентична последовательности согласно любой из SEQ ID NO 6, 7, 9, 11, 13, 15, 16, 17, 19 или 21; или любой их комбинации.In particular embodiments, Ntls consists of a GS linker sequence; PN linker sequence; an amino acid sequence that is part of the framework of a human IgG antibody or a sequence that is at least 80% identical thereto, in particular an amino acid sequence that is part of the framework of the fab domain of a human IgG antibody or a sequence that is at least 80% identical thereto , more specifically, a sequence according to any of SEQ ID NOs 1, 2 or 4 or a sequence that is at least 80% identical to a sequence according to any of SEQ ID NOs 1, 2 or 4; sequences according to any of SEQ ID NOs 6, 7, 9, 11, 13, 15, 16, 17, 19 or 21; a sequence that is at least 60%, at least 70%, at least 80%, at least 90%, or at least 95% identical to the sequence of any of SEQ ID NOs 6, 7, 9, 11, 13 , 15, 16, 17, 19 or 21; or any combination thereof.
Согласно частным вариантам осуществления Ctls состоит из GS линкерной последовательности; PN линкерной последовательности; аминокислотной последовательности, которая является частью каркаса человеческого антитела IgG, или последовательности, которая на по меньшей мере 80% идентична ей, в частности аминокислотной последовательности, которая является частью каркаса домена fab человеческого антитела IgG или последовательности, которая на по меньшей мере 80% идентична ей, более конкретно последовательности согласно любой из SEQ ID NO 1, 3 или 5, последовательности, которая на по меньшей мере 80% идентична последовательности согласно любой из SEQ ID NO 1, 3 или 5; последовательности согласно любой из SEQ ID NO 6, 8, 10, 12, 14, 15, 17, 18, 19, 20 или 22; последовательности, которая на по меньшей мере 60%, по меньшей мере 70%, по меньшей мере 80%, по меньшей мере 90% или по меньшей мере 95% идентична последовательности согласно любой из SEQ ID NO 6, 8, 10, 12, 14, 15, 17, 18, 19, 20 или 22; или любой их комбинации.In particular embodiments, Ctls consists of a GS linker sequence; PN linker sequence; an amino acid sequence that is part of the framework of a human IgG antibody, or a sequence that is at least 80% identical thereto, in particular an amino acid sequence that is part of the framework of the fab domain of a human IgG antibody or a sequence that is at least 80% identical thereto , more specifically, a sequence according to any of SEQ ID NOs 1, 3 or 5, a sequence that is at least 80% identical to a sequence according to any of SEQ ID NOs 1, 3 or 5; sequences according to any of SEQ ID NOs 6, 8, 10, 12, 14, 15, 17, 18, 19, 20 or 22; a sequence that is at least 60%, at least 70%, at least 80%, at least 90%, or at least 95% identical to the sequence of any of SEQ ID NOs 6, 8, 10, 12, 14 , 15, 17, 18, 19, 20 or 22; or any combination thereof.
Согласно частным вариантам осуществления, как Ntls, так и Ctls содержат по меньшей мере одну из вышеперечисленных линкерных последовательностей или любую их комбинацию. На самом деле, любая из вышеперечисленных линкерных последовательностей Ntls может быть комбинирована с любой из вышеперечисленных линкерных последовательностей Ctls. На самом деле, любая линкерная последовательность может быть комбинирована с GS линкером. В качестве неограничивающего примера GS Ctls линкер может быть комбинирован с Ntls линкером, содержащим последовательность согласно любой из SEQ ID NO 6, 9 или 15 или последовательность, которая на по меньшей мере 60% идентична последовательности согласно любой из SEQ ID NO 6, 9 или 15Другим неограничивающим примером является GS Ntls линкер, комбинированный с Ctls линкером, содержащим последовательность согласно SEQ ID NO 15 или последовательность, которая на по меньшей мере 60% идентична ей.In particular embodiments, both Ntls and Ctls contain at least one of the above linker sequences or any combination thereof. In fact, any of the above Ntls linker sequences can be combined with any of the above Ctls linker sequences. In fact, any linker sequence can be combined with a GS linker. As a non-limiting example, a GS Ctls linker may be combined with an Ntls linker comprising a sequence of any of SEQ ID NOs 6, 9 or 15 or a sequence that is at least 60% identical to a sequence of any of SEQ ID NOs 6, 9 or 15 Other a non-limiting example is a GS Ntls linker combined with a Ctls linker containing the sequence of SEQ ID NO 15 or a sequence that is at least 60% identical thereto.
Вышеуказанные линкерные последовательности оказались особенно полезными для достижения хороших активностей натрийуретических пептидов при достаточной общей длине N-концевой и C-концевой фланкирующих последовательностей. Не желая быть связанными теорией, полагают, что указанные выше линкерные пептидные удлинения приводят к конформации/складке, которая способствует благоприятному состоянию системы при представлении биологически активного натрийуретического пептида соответствующему рецептору с минимальными стерическими затруднениями.The above linker sequences have proven to be particularly useful in achieving good natriuretic peptide activities with sufficient total length of N-terminal and C-terminal flanking sequences. Without wishing to be bound by theory, it is believed that the above linker peptide extensions result in a conformation/fold that favors the system in presenting the biologically active natriuretic peptide to the appropriate receptor with minimal steric hindrance.
Согласно частным вариантам осуществления i) Ntls содержит GS линкерную последовательность; PN линкерную последовательность; последовательность согласно SEQ ID NO 2, 4, 9, 11, 13 или 15; последовательность, которая на по меньшей мере 60% идентична последовательности согласно SEQ ID NO 2, 4, 9, 11, 13 или 15; или любую их комбинацию, и ii) Ctls содержит GS линкерную последовательность; PN линкерную последовательность; последовательность согласно SEQ ID NO 3, 5, 12, 14, 15 или 20; последовательность, которая на по меньшей мере 60% идентична последовательности согласно SEQ ID NO 3, 5, 12, 14, 15 или 20; или любую их комбинацию. Эти последовательности линкеров оказались особенно полезными, так как они не только для достижения высоких активностей натрийуретического пептида, хороших уровней экспрессии при рекомбинантной экспрессии и минимальной фрагментации белка или ее отсутствия, как показано в Таблице 9.In particular embodiments, i) Ntls contains a GS linker sequence; PN linker sequence; sequence according to SEQ ID NO 2, 4, 9, 11, 13 or 15; a sequence that is at least 60% identical to the sequence of SEQ ID NO 2, 4, 9, 11, 13 or 15; or any combination thereof, and ii) Ctls contains a GS linker sequence; PN linker sequence; sequence according to SEQ ID NO 3, 5, 12, 14, 15 or 20; a sequence that is at least 60% identical to the sequence of SEQ ID NO 3, 5, 12, 14, 15 or 20; or any combination thereof. These linker sequences have proven to be particularly useful in not only achieving high natriuretic peptide activities, good expression levels when expressed recombinantly, and minimal or no protein fragmentation, as shown in Table 9.
Эти линкерные последовательности оказались особенно полезными, поскольку они не только обеспечивают высокую активность натрийуретического пептида, но также обладают хорошими уровнями экспрессии при рекомбинантной экспрессии и не склонны к фрагментации белка при экспрессии (см. Таблицу 9).These linker sequences have proven to be particularly useful because they not only provide high natriuretic peptide activity, but also have good expression levels when expressed recombinantly and are not prone to protein fragmentation when expressed (see Table 9).
Согласно частным вариантам осуществления, Ntls и Ctls каждая содержит GS линкерную последовательность; Ntls и Ctls каждая содержит PN линкерную последовательность; Ntls и Ctls каждая содержит аминокислотную последовательность, которая является частью каркаса человеческого антитела IgG или последовательность, которая на по меньшей мере 80% идентична ей, в частности аминокислотную последовательность, которая является частью каркаса домена fab человеческого антитела IgG или последовательность, которая на по меньшей мере 80% идентична ей, более конкретно Ntls содержит последовательность согласно любой из SEQ ID NO 1, 2 или 4 или последовательность, которая на по меньшей мере 80% идентична последовательности согласно любой из SEQ ID NO 1, 2 или 4, и Ctls содержит последовательность согласно любой из SEQ ID NO 1, 3 или 5 или последовательность, которая на по меньшей мере 80% идентична ей; Ntls и Ctls каждая содержит последовательность согласно SEQ ID NO 6 или последовательность, которая на по меньшей мере 60% идентична ей; Ntls содержит последовательность согласно SEQ ID NO 7 или последовательность, которая на по меньшей мере 60% идентична ей, и Ctls содержит последовательность согласно SEQ ID NO 8 или последовательность, которая на по меньшей мере 60% идентична ей; Ntls содержит последовательность согласно SEQ ID NO 9 или последовательность, которая на по меньшей мере 60% идентична ей, и Ctls содержит последовательность согласно SEQ ID NO 10 или последовательность, которая на по меньшей мере 60% идентична ей; Ntls содержит последовательность согласно SEQ ID NO 11 или последовательность, которая на по меньшей мере 60% идентична ей, и Ctls содержит последовательность согласно SEQ ID NO 12 или последовательность, которая на по меньшей мере 60% идентична ей; Ntls содержит последовательность согласно SEQ ID NO 13 или последовательность, которая на по меньшей мере 60% идентична ей, и Ctls содержит последовательность согласно SEQ ID NO 14 или последовательность, которая на по меньшей мере 60% идентична ей; Ntls и Ctls каждая содержит последовательность согласно SEQ ID NO 15 или последовательность, которая на по меньшей мере 60% идентична ей; Ntls содержит последовательность согласно SEQ ID NO 16 или последовательность, которая на по меньшей мере 60% идентична ей, и Ctls содержит последовательность согласно SEQ ID NO 17 или последовательность, которая на по меньшей мере 60% идентична ей; Ntls содержит последовательность согласно SEQ ID NO 17 или последовательность, которая на по меньшей мере 60% идентична ей, и Ctls содержит последовательность согласно SEQ ID NO 18 или последовательность, которая на по меньшей мере 60% идентична ей; Ntls и Ctls каждая содержит последовательность согласно SEQ ID NO 19 или последовательность, которая на по меньшей мере 60% идентична ей; Ntls содержит последовательность согласно SEQ ID NO 9 или последовательность, которая на по меньшей мере 60% идентична ей, и Ctls содержит последовательность согласно SEQ ID NO 20 или последовательность, которая на по меньшей мере 60% идентична ей; или Ntls содержит последовательность согласно SEQ ID NO 21 или последовательность, которая на по меньшей мере 60% идентична ей, и Ctls содержит последовательность согласно SEQ ID NO 22 или последовательность, которая на по меньшей мере 60% идентична ей.In particular embodiments, Ntls and Ctls each contain a GS linker sequence; Ntls and Ctls each contain a PN linker sequence; Ntls and Ctls each contain an amino acid sequence that is part of the framework of a human IgG antibody or a sequence that is at least 80% identical thereto, in particular an amino acid sequence that is part of the fab domain framework of a human IgG antibody or a sequence that is at least 80% identical thereto, more specifically Ntls contains a sequence according to any of SEQ ID NOs 1, 2 or 4 or a sequence that is at least 80% identical to a sequence according to any of SEQ ID NOs 1, 2 or 4, and Ctls contains a sequence according to any of SEQ ID NOs 1, 3 or 5 or a sequence that is at least 80% identical thereto; Ntls and Ctls each contain a sequence according to SEQ ID NO 6 or a sequence that is at least 60% identical thereto; Ntls contains the sequence of SEQ ID NO 7 or a sequence that is at least 60% identical thereto, and Ctls contains the sequence of SEQ ID NO 8 or a sequence that is at least 60% identical thereto; Ntls contains the sequence of SEQ ID NO 9 or a sequence that is at least 60% identical thereto, and Ctls contains the sequence of SEQ ID NO 10 or a sequence that is at least 60% identical thereto; Ntls contains the sequence of SEQ ID NO 11 or a sequence that is at least 60% identical thereto, and Ctls contains the sequence of SEQ ID NO 12 or a sequence that is at least 60% identical thereto; Ntls contains the sequence of SEQ ID NO 13 or a sequence that is at least 60% identical thereto, and Ctls contains the sequence of SEQ ID NO 14 or a sequence that is at least 60% identical thereto; Ntls and Ctls each contain a sequence according to SEQ ID NO 15 or a sequence that is at least 60% identical to it; Ntls contains the sequence of SEQ ID NO 16 or a sequence that is at least 60% identical thereto, and Ctls contains the sequence of SEQ ID NO 17 or a sequence that is at least 60% identical thereto; Ntls contains the sequence of SEQ ID NO 17 or a sequence that is at least 60% identical thereto, and Ctls contains the sequence of SEQ ID NO 18 or a sequence that is at least 60% identical thereto; Ntls and Ctls each contain a sequence according to SEQ ID NO 19 or a sequence that is at least 60% identical thereto; Ntls contains the sequence of SEQ ID NO 9 or a sequence that is at least 60% identical thereto, and Ctls contains the sequence of SEQ ID NO 20 or a sequence that is at least 60% identical thereto; or Ntls contains the sequence of SEQ ID NO 21 or a sequence that is at least 60% identical thereto, and Ctls contains the sequence of SEQ ID NO 22 or a sequence that is at least 60% identical thereto.
Согласно таким частным вариантам осуществления, Ntls и Ctls каждая содержит GS линкерную последовательность; Ntls и Ctls каждая содержит PN линкерную последовательность; Ntls и Ctls каждая содержит аминокислотную последовательность, которая является частью каркаса человеческого антитела IgG или последовательность, которая на по меньшей мере 80% идентична ей, в частности аминокислотную последовательность, которая является частью каркаса домена fab человеческого антитела IgG или последовательность, которая на по меньшей мере 80% идентична ей, более конкретно Ntls содержит последовательность согласно любой из SEQ ID NO 1, 2 или 4 или последовательность, которая на по меньшей мере 80% идентична последовательности согласно любой из SEQ ID NO 1, 2 или 4, и Ctls содержит последовательность согласно любой из SEQ ID NO 1, 3 или 5 или последовательность, которая на по меньшей мере 80% идентична ей; Ntls и Ctls каждая содержит последовательность согласно SEQ ID NO 6 или последовательность, которая на по меньшей мере 60% идентична ей; Ntls содержит последовательность согласно SEQ ID NO 7 или последовательность, которая на по меньшей мере 60% идентична ей, и Ctls содержит последовательность согласно SEQ ID NO 8 или последовательность, которая на по меньшей мере 60% идентична ей; Ntls содержит последовательность согласно SEQ ID NO 9 или последовательность, которая на по меньшей мере 60% идентична ей, и Ctls содержит последовательность согласно SEQ ID NO 10 или последовательность, которая на по меньшей мере 60% идентична ей; Ntls содержит последовательность согласно SEQ ID NO 11 или последовательность, которая на по меньшей мере 60% идентична ей, и Ctls содержит последовательность согласно SEQ ID NO 12 или последовательность, которая на по меньшей мере 60% идентична ей; Ntls содержит последовательность согласно SEQ ID NO 13 или последовательность, которая на по меньшей мере 60% идентична ей, и Ctls содержит последовательность согласно SEQ ID NO 14 или последовательность, которая на по меньшей мере 60% идентична ей; Ntls и Ctls каждая содержит последовательность согласно SEQ ID NO 15 или последовательность, которая на по меньшей мере 60% идентична ей; Ntls содержит последовательность согласно SEQ ID NO 9 или последовательность, которая на по меньшей мере 60% идентична ей, и Ctls содержит последовательность согласно SEQ ID NO 20 или последовательность, которая на по меньшей мере 60% идентична ей; или Ntls содержит последовательность согласно SEQ ID NO 21 или последовательность, которая на по меньшей мере 60% идентична ей, и Ctls содержит последовательность согласно SEQ ID NO 22 или последовательность, которая на по меньшей мере 60% идентична ей.In such particular embodiments, Ntls and Ctls each contain a GS linker sequence; Ntls and Ctls each contain a PN linker sequence; Ntls and Ctls each contain an amino acid sequence that is part of the framework of a human IgG antibody or a sequence that is at least 80% identical thereto, in particular an amino acid sequence that is part of the fab domain framework of a human IgG antibody or a sequence that is at least 80% identical thereto, more specifically Ntls contains a sequence according to any of SEQ ID NOs 1, 2 or 4 or a sequence that is at least 80% identical to a sequence according to any of SEQ ID NOs 1, 2 or 4, and Ctls contains a sequence according to any of SEQ ID NOs 1, 3 or 5 or a sequence that is at least 80% identical thereto; Ntls and Ctls each contain a sequence according to SEQ ID NO 6 or a sequence that is at least 60% identical thereto; Ntls contains the sequence of SEQ ID NO 7 or a sequence that is at least 60% identical thereto, and Ctls contains the sequence of SEQ ID NO 8 or a sequence that is at least 60% identical thereto; Ntls contains the sequence of SEQ ID NO 9 or a sequence that is at least 60% identical thereto, and Ctls contains the sequence of SEQ ID NO 10 or a sequence that is at least 60% identical thereto; Ntls contains the sequence of SEQ ID NO 11 or a sequence that is at least 60% identical thereto, and Ctls contains the sequence of SEQ ID NO 12 or a sequence that is at least 60% identical thereto; Ntls contains the sequence of SEQ ID NO 13 or a sequence that is at least 60% identical thereto, and Ctls contains the sequence of SEQ ID NO 14 or a sequence that is at least 60% identical thereto; Ntls and Ctls each contain a sequence according to SEQ ID NO 15 or a sequence that is at least 60% identical to it; Ntls contains the sequence of SEQ ID NO 9 or a sequence that is at least 60% identical thereto, and Ctls contains the sequence of SEQ ID NO 20 or a sequence that is at least 60% identical thereto; or Ntls contains the sequence of SEQ ID NO 21 or a sequence that is at least 60% identical thereto, and Ctls contains the sequence of SEQ ID NO 22 or a sequence that is at least 60% identical thereto.
Согласно таким частным вариантам осуществления, Ntls и Ctls каждая содержит GS линкерную последовательность; Ntls и Ctls каждая содержит PN линкерную последовательность; Ntls содержит последовательность согласно SEQ ID NO 2 или последовательность, которая на по меньшей мере 80% идентична ей, и Ctls содержит последовательность согласно SEQ ID NO 3 или последовательность, которая на по меньшей мере 80% идентична ей; Ntls содержит последовательность согласно SEQ ID NO 4 или последовательность, которая на по меньшей мере 80% идентична ей, и Ctls содержит последовательность согласно SEQ ID NO 5 или последовательность, которая на по меньшей мере 80% идентична ей; Ntls содержит последовательность согласно SEQ ID NO 11 или последовательность, которая на по меньшей мере 60% идентична ей, и Ctls содержит последовательность согласно SEQ ID NO 12 или последовательность, которая на по меньшей мере 60% идентична ей; Ntls содержит последовательность согласно SEQ ID NO 13 или последовательность, которая на по меньшей мере 60% идентична ей, и Ctls содержит последовательность согласно SEQ ID NO 14 или последовательность, которая на по меньшей мере 60% идентична ей; Ntls и Ctls каждая содержит последовательность согласно SEQ ID NO 15 или последовательность, которая на по меньшей мере 60% идентична ей; или Ntls содержит последовательность согласно SEQ ID NO 9 или последовательность, которая на по меньшей мере 60% идентична ей, и Ctls содержит последовательность согласно SEQ ID NO 20 или последовательность, которая на по меньшей мере 60% идентична ей. Эти комбинации линкеров оказались особенно полезными для достижения высоких активностей натрийуретического пептида, хороших уровней экспрессии при рекомбинантной экспрессии и минимальной фрагментации белка или ее отсутствия, как показано в Таблице 9.In such particular embodiments, Ntls and Ctls each contain a GS linker sequence; Ntls and Ctls each contain a PN linker sequence; Ntls contains the sequence of SEQ ID NO 2 or a sequence that is at least 80% identical thereto, and Ctls contains the sequence of SEQ ID NO 3 or a sequence that is at least 80% identical thereto; Ntls contains the sequence of SEQ ID NO 4 or a sequence that is at least 80% identical thereto, and Ctls contains the sequence of SEQ ID NO 5 or a sequence that is at least 80% identical thereto; Ntls contains the sequence of SEQ ID NO 11 or a sequence that is at least 60% identical thereto, and Ctls contains the sequence of SEQ ID NO 12 or a sequence that is at least 60% identical thereto; Ntls contains the sequence of SEQ ID NO 13 or a sequence that is at least 60% identical thereto, and Ctls contains the sequence of SEQ ID NO 14 or a sequence that is at least 60% identical thereto; Ntls and Ctls each contain a sequence according to SEQ ID NO 15 or a sequence that is at least 60% identical to it; or Ntls contains the sequence of SEQ ID NO 9 or a sequence that is at least 60% identical thereto, and Ctls contains the sequence of SEQ ID NO 20 or a sequence that is at least 60% identical thereto. These linker combinations have proven particularly useful in achieving high natriuretic peptide activities, good expression levels when expressed recombinantly, and minimal or no protein fragmentation, as shown in Table 9.
Согласно частным вариантам осуществления, Ntls дополнительно содержит якорный элемент A1 на ее С-терминальном конце, и/или Ctls дополнительно содержит якорный элемент A2 на ее N-терминальном конце, где A1 и A2 преимущественно содержат глициновый и сериновый остатки. Согласно частным вариантам осуществления, A1 и/или A2 содержат по меньшей мере 1, 2, 3, 4, или 5 аминокислотных остатков. A1 и/или A2 могут содержать до 10, 9, 8, 7, 6 или 5 аминокислотных остатков в общем. Согласно частным вариантам осуществления, по меньшей мере 60%, по меньшей мере 70%, по меньшей мере 80%, по меньшей мере 90%, или 100% аминокислотных остатков A1 и/или A2 выбраны из глициновых и сериновых остатков. В частности, A1 и/или A2 не содержит/содержат более 3, 2 или 1 аминокислотным остатков, отличных от глицина и серинаIn particular embodiments, Ntls further comprises an A1 anchor element at its C-terminal end, and/or Ctls further comprises an A2 anchor element at its N-terminal end, wherein A1 and A2 predominantly contain glycine and serine residues. In particular embodiments, A1 and/or A2 contain at least 1, 2, 3, 4, or 5 amino acid residues. A1 and/or A2 may contain up to 10, 9, 8, 7, 6 or 5 amino acid residues in total. In particular embodiments, at least 60%, at least 70%, at least 80%, at least 90%, or 100% of the amino acid residues A1 and/or A2 are selected from glycine and serine residues. In particular, A1 and/or A2 do not contain/contain more than 3, 2 or 1 amino acid residues other than glycine and serine
Согласно частным вариантам осуществления Ntls состоит из i) якорного элемента A1 на ее С-терминальном конце и ii) GS линкерной последовательности; PN линкерной последовательности; аминокислотной последовательности, которая является частью каркаса человеческого антитела IgG, или последовательности, которая на по меньшей мере 80% идентична ей, в частности аминокислотной последовательности, которая является частью каркаса домена fab человеческого антитела IgG, или последовательности, которая на по меньшей мере 80% идентична ей, более конкретно последовательности согласно любой из SEQ ID NO 1, 2 или 4, или последовательности, которая на по меньшей мере 80% идентична последовательности согласно любой из SEQ ID NO 1, 2 или 4; последовательности согласно любой из SEQ ID NO 6, 7, 9, 11, 13, 15, 16, 17, 19 или 21; последовательности, которая на по меньшей мере 60% идентична последовательности согласно любой из SEQ ID NO 6, 7, 9, 11, 13, 15, 16, 17, 19 или 21; или любой их комбинацию.In particular embodiments, Ntls consists of i) an A1 anchor element at its C-terminal end and ii) a GS linker sequence; PN linker sequence; an amino acid sequence that is part of the framework of a human IgG antibody, or a sequence that is at least 80% identical thereto, in particular an amino acid sequence that is part of the framework of the fab domain of a human IgG antibody, or a sequence that is at least 80% identical thereto, more particularly a sequence according to any of SEQ ID NOs 1, 2 or 4, or a sequence that is at least 80% identical to a sequence according to any of SEQ ID NOs 1, 2 or 4; sequences according to any of SEQ ID NOs 6, 7, 9, 11, 13, 15, 16, 17, 19 or 21; a sequence that is at least 60% identical to the sequence of any of SEQ ID NOs 6, 7, 9, 11, 13, 15, 16, 17, 19 or 21; or any combination thereof.
Согласно частным вариантам осуществления, Ctls состоит из i) якорного элемента A2 на ее N-терминальном конце и ii) GS линкерной последовательности; PN линкерной последовательности; аминокислотной последовательности, которая является частью каркаса человеческого антитела IgG, или последовательности, которая на по меньшей мере 80% идентична ей, в частности аминокислотной последовательности, которая является частью каркаса домена fab человеческого антитела IgG, или последовательности, которая на по меньшей мере 80% идентична ей, более конкретно последовательности согласно любой из SEQ ID NO 1, 3 или 5; последовательности, которая на по меньшей мере 80% идентична последовательности согласно любой из SEQ ID NO 1, 3 или 5; последовательности согласно любой из SEQ ID NO 6, 8, 10, 12, 14, 15, 17, 18, 19, 20 или 22; последовательности, которая на по меньшей мере 60% идентична последовательности согласно любой из SEQ ID NO 6, 8, 10, 12, 14, 15, 17, 18, 19, 20 или 22; или любой их комбинацию.In particular embodiments, Ctls consists of i) an A2 anchor element at its N-terminal end and ii) a GS linker sequence; PN linker sequence; an amino acid sequence that is part of the framework of a human IgG antibody, or a sequence that is at least 80% identical thereto, in particular an amino acid sequence that is part of the framework of the fab domain of a human IgG antibody, or a sequence that is at least 80% identical thereto, more particularly the sequence according to any of SEQ ID NOs 1, 3 or 5; a sequence that is at least 80% identical to the sequence according to any of SEQ ID NOs 1, 3 or 5; sequences according to any of SEQ ID NOs 6, 8, 10, 12, 14, 15, 17, 18, 19, 20 or 22; a sequence that is at least 60% identical to the sequence of any of SEQ ID NOs 6, 8, 10, 12, 14, 15, 17, 18, 19, 20 or 22; or any combination thereof.
Согласно частным вариантам осуществления, Ntls и/или Ctls содержат (содержит) по меньшей мере 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 или 10 аминокислотных остатков в общем. Ntls и/или Ctls могут, например, содержать до 30, 28, 26, 25, 24, 23, 22, 21, 20, 19, 18, 17, 16, 15, 14, 13, 12, 11 или 10 аминокислотных остатков в общем.In particular embodiments, Ntls and/or Ctls contain at least 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, or 10 amino acid residues in total. Ntls and/or Ctls may, for example, contain up to 30, 28, 26, 25, 24, 23, 22, 21, 20, 19, 18, 17, 16, 15, 14, 13, 12, 11 or 10 amino acid residues All in all.
Согласно частным вариантам осуществления, аминокислотное удлинение, присутствующее междуIn particular embodiments, the amino acid extension present between
i) аминокислотным остатком HC res25 по Кэботу и первым аминокислотным остатком натрийуретического пептида в случае включения указанной гетерологичной аминокислотной последовательности в CDRH1;i) the amino acid residue HC res25 according to Cabot and the first amino acid residue of the natriuretic peptide in the case of inclusion of the specified heterologous amino acid sequence in CDRH1;
ii) аминокислотным остатком HC res51 по Кэботу и первым аминокислотным остатком натрийуретического пептида в случае включения указанной гетерологичной аминокислотной последовательности в CDRH2;ii) the amino acid residue HC res51 according to Cabot and the first amino acid residue of the natriuretic peptide in the case of inclusion of the specified heterologous amino acid sequence in CDRH2;
iii) аминокислотным остатком HC res92 по Кэботу и первым аминокислотным остатком натрийуретического пептида в случае включения указанной гетерологичной аминокислотной последовательности в CDRH3;iii) the amino acid residue HC res92 according to Cabot and the first amino acid residue of the natriuretic peptide in the case of inclusion of the specified heterologous amino acid sequence in CDRH3;
iv) аминокислотным остатком LC res26 по Кэботу и первым аминокислотным остатком натрийуретического пептида в случае включения указанной гетерологичной аминокислотной последовательности в CDRL1;iv) the amino acid residue LC res26 according to Cabot and the first amino acid residue of the natriuretic peptide in the case of inclusion of the specified heterologous amino acid sequence in CDRL1;
v) аминокислотным остатком LC res49 по Кэботу и первым аминокислотным остатком натрийуретического пептида в случае включения указанной гетерологичной аминокислотной последовательности в CDRL2; и/илиv) the amino acid residue LC res49 according to Cabot and the first amino acid residue of the natriuretic peptide in the case of inclusion of the specified heterologous amino acid sequence in CDRL2; and/or
vi) аминокислотным остатком LC res88 по Кэботу и первым аминокислотным остатком натрийуретического пептида в случае включения указанной гетерологичной аминокислотной последовательности в CDRL3vi) the amino acid residue LC res88 according to Cabot and the first amino acid residue of the natriuretic peptide in the case of inclusion of the specified heterologous amino acid sequence in CDRL3
содержит последовательность согласно любой из SEQ ID NO 26 - 38 или последовательность, которая на по меньшей мере 80%, 85%, 90%, 95% или по меньшей мере 98% идентична последовательности согласно любой из SEQ ID NO 26 - 38.contains a sequence according to any of SEQ ID NOs 26 - 38, or a sequence that is at least 80%, 85%, 90%, 95% or at least 98% identical to a sequence according to any one of SEQ ID NOs 26 - 38.
Согласно частным вариантам осуществления, аминокислотное удлинение, присутствующее между последним аминокислотным остатком натрийуретического пептида иIn particular embodiments, the amino acid extension present between the last amino acid residue of the natriuretic peptide and
i) аминокислотным остатком HC res35a по Кэботу в случае включения указанной гетерологичной аминокислотной последовательности в CDRH1;i) the amino acid residue HC res35a according to Cabot in the case of inclusion of the specified heterologous amino acid sequence in CDRH1;
ii) аминокислотным остатком HC res57 по Кэботу в случае включения указанной гетерологичной аминокислотной последовательности в CDRH2;ii) the amino acid residue HC res57 according to Cabot in the case of inclusion of the specified heterologous amino acid sequence in CDRH2;
iii) аминокислотным остатком HC res106 по Кэботу в случае включения указанной гетерологичной аминокислотной последовательности в CDRH3;iii) amino acid residue HC res106 according to Cabot in the case of inclusion of the specified heterologous amino acid sequence in CDRH3;
iv) аминокислотным остатком LC res 32 по Кэботу в случае включения указанной гетерологичной аминокислотной последовательности в CDRL1;iv) amino acid residue LC res 32 according to Cabot in the case of inclusion of the specified heterologous amino acid sequence in CDRL1;
v) аминокислотным остатком LC res57 по Кэботу в случае включения указанной гетерологичной аминокислотной последовательности в CDRL2; и/илиv) the amino acid residue LC res57 according to Cabot in the case of inclusion of the specified heterologous amino acid sequence in CDRL2; and/or
vi) аминокислотным остатком LC res98 по Кэботу в случае включения указанной гетерологичной аминокислотной последовательности в CDRL3vi) amino acid residue LC res98 according to Cabot in the case of inclusion of the specified heterologous amino acid sequence in CDRL3
содержит последовательность согласно любой из SEQ ID NO 39 - 51 или последовательность, которая на по меньшей мере 80%, 85%, 90%, 95% или по меньшей мере 98% идентична последовательности согласно любой из SEQ ID NO 39 - 51.contains a sequence according to any of SEQ ID NOs 39 to 51, or a sequence that is at least 80%, 85%, 90%, 95% or at least 98% identical to a sequence according to any of SEQ ID NOs 39 to 51.
Согласно частным вариантам осуществления, гетерологичная аминокислотная последовательность состоит из Ntls, натрийуретического пептида и Ctls.In particular embodiments, the heterologous amino acid sequence consists of Ntls, natriuretic peptide, and Ctls.
Согласно частным вариантам осуществления, аминокислотное удлинение, присутствующее междуIn particular embodiments, the amino acid extension present between
i) аминокислотным остатком HC res25 по Кэботу и аминокислотным остатком HC res35a по Кэботу в случае включения указанной гетерологичной аминокислотной последовательности в CDRH1;i) the amino acid residue HC res25 according to Cabot and the amino acid residue HC res35a according to Cabot in the case of inclusion of the specified heterologous amino acid sequence in CDRH1;
ii) аминокислотным остатком HC res51 по Кэботу и аминокислотным остатком HC res57 по Кэботу в случае включения указанной гетерологичной аминокислотной последовательности в CDRH2;ii) the amino acid residue HC res51 according to Cabot and the amino acid residue HC res57 according to Cabot in the case of inclusion of the specified heterologous amino acid sequence in CDRH2;
iii) аминокислотным остатком HC res92 по Кэботу и аминокислотным остатком HC res106 по Кэботу в случае включения указанной гетерологичной аминокислотной последовательности в CDRH3;iii) amino acid residue HC res92 according to Cabot and amino acid residue HC res106 according to Cabot in the case of inclusion of the specified heterologous amino acid sequence in CDRH3;
iv) аминокислотным остатком LC res26 по Кэботу и аминокислотным остатком LC res 32 по Кэботу в случае включения указанной гетерологичной аминокислотной последовательности в CDRL1;iv) amino acid residue LC res26 according to Cabot and amino acid residue LC res 32 according to Cabot in the case of inclusion of the specified heterologous amino acid sequence in CDRL1;
v) аминокислотным остатком LC res49 по Кэботу и аминокислотным остатком LC res57 по Кэботу в случае включения указанной гетерологичной аминокислотной последовательности в CDRL2; и/илиv) the amino acid residue LC res49 according to Cabot and the amino acid residue LC res57 according to Cabot in the case of inclusion of the specified heterologous amino acid sequence in CDRL2; and/or
vi) аминокислотным остатком LC res88 по Кэботу and аминокислотным остатком LC res98 по Кэботу в случае включения указанной гетерологичной аминокислотной последовательности в CDRL3vi) amino acid residue LC res88 according to Cabot and amino acid residue LC res98 according to Cabot in case of inclusion of the specified heterologous amino acid sequence in CDRL3
содержит последовательность согласно любой из SEQ ID NO 52 - 64, или последовательность, которая на по меньшей мере 80%, 85%, 90%, 95% или по меньшей мере 98% идентична последовательности согласно любой из SEQ ID NO 52 - 64.contains a sequence according to any of SEQ ID NOs 52 - 64, or a sequence that is at least 80%, 85%, 90%, 95% or at least 98% identical to the sequence according to any one of SEQ ID NOs 52 - 64.
Согласно частным вариантам осуществления, антитело или его фрагмент содержит по меньшей мере два натрийуретических пептида. Согласно частным вариантам осуществления, оба натрийуретических пептида содержатся в гетерологичной аминокислотной последовательности, дополнительно содержащей Ntls и Ctls, и включены в CDR участок указанного антитела или его фрагмента, как описано в настоящем документе. По меньшей мере два натрийуретических пептида могут быть включены в два соответствующих участка CDR двух легких цепей или двух тяжелых цепей, или по меньшей мере два натрийуретических пептида могут быть включены в два отдельных участка CDR. По меньшей мере два натрийуретических пептида могут быть одинаковы или различными. Согласно таким частным вариантам осуществления, антитело или его фрагмент содержит по меньшей мере два различных натрийуретических пептида, которые включены в по меньшей мере два CDR участка.In particular embodiments, the antibody or fragment thereof contains at least two natriuretic peptides. In particular embodiments, both natriuretic peptides are contained in a heterologous amino acid sequence further comprising Ntls and Ctls, and are included in the CDR region of said antibody or fragment thereof, as described herein. At least two natriuretic peptides may be included in two corresponding CDR regions of two light chains or two heavy chains, or at least two natriuretic peptides may be included in two separate CDR regions. The at least two natriuretic peptides may be the same or different. In such particular embodiments, the antibody or fragment thereof comprises at least two different natriuretic peptides that are included in at least two CDR regions.
Из-за димерной структуры молекул антител включение одной последовательности нуклеиновой кислоты, кодирующей гетерологичную аминокислотную последовательность (Ntls-натрийуретический пептид-Ctls), в нуклеиновую кислоту, кодирующую легкую или тяжелую цепь молекулы иммуноглобулина, как правило, дает белок антитела, несущий два натрийуретических пептида, расположенных в соответствующих участках CDR двух идентичных легких или двух идентичных тяжелых цепей. Однако также предусматривается вставка двух нуклеиновых кислот, кодирующих натрийуретический пептид, в два разных CDR кодирующих участка последовательности нуклеиновой кислоты, кодирующих легкую и/или тяжелую цепь, таким образом получая молекулу антитела с четырьмя натрийуретическими пептидами, расположенными в двух соответствующих парах CDR димерного антитела. Также охватываются димерные молекулы иммуноглобулинов, легкие цепи и/или тяжелые цепи которых не идентичны, например, включая димерные антитела, несущие один натрийуретический пептид, а также димерные антитела, несущие два разных натрийуретических пептида в двух соответствующих участках CDR двух легких или двух тяжелые цепей.Because of the dimeric structure of antibody molecules, the incorporation of one nucleic acid sequence encoding a heterologous amino acid sequence (Ntls-natriuretic peptide-Ctls) into a nucleic acid encoding the light or heavy chain of an immunoglobulin molecule typically produces an antibody protein carrying two natriuretic peptides, located in the corresponding CDR regions of two identical light or two identical heavy chains. However, it is also contemplated to insert two nucleic acids encoding a natriuretic peptide into two different CDR coding regions of the nucleic acid sequence encoding the light and/or heavy chain, thereby producing an antibody molecule with four natriuretic peptides located in two corresponding pairs of CDRs of the dimeric antibody. Also covered are dimeric immunoglobulin molecules whose light chains and/or heavy chains are not identical, for example, including dimeric antibodies carrying a single natriuretic peptide, as well as dimeric antibodies carrying two different natriuretic peptides in two corresponding CDR regions of two light or two heavy chains.
Согласно частным вариантам осуществления, натрийуретические пептиды вставлены в CDRH1 и CDRH2, CDRH1 и CDRH3, CDRH2 и CDRH3, CDRH1 и CDRL1, CDRH1 и CDRL2, CDRH1 и CDRL3, CDRH2 и CDRL1, или CDRH2 и CDRL2. Согласно частным вариантам осуществления, антитело или его фрагмент содержит одну ANP и одну BNP молекулу; одну ANP и одну CNP молекулу; или одну BNP и одну CNP молекулу.In particular embodiments, the natriuretic peptides are inserted into CDRH1 and CDRH2, CDRH1 and CDRH3, CDRH2 and CDRH3, CDRH1 and CDRL1, CDRH1 and CDRL2, CDRH1 and CDRL3, CDRH2 and CDRL1, or CDRH2 and CDRL2. In particular embodiments, the antibody or fragment thereof comprises one ANP and one BNP molecule; one ANP and one CNP molecule; or one BNP and one CNP molecule.
Согласно частным вариантам осуществления, натрийуретический пептид, содержащийся в по меньшей мере одной гетерологичной аминокислотной последовательности, выключенной в по меньшей мере один участок CDR указанного антитела или его фрагмента, представляет собой ANP, и антитело или его фрагмент содержит по меньшей мере один дополнительный натрийуретический пептид. Согласно частным вариантам осуществления, по меньшей мере один дополнительный натрийуретический пептид также содержится в гетерологичной аминокислотной последовательности, дополнительно содержащей Ntls и Ctls и включенной в участок CDR указанного антитела или его фрагмента. Согласно частным вариантам осуществления, ANP и по меньшей мере один дополнительный натрийуретический пептид включены в два соответствующих участка CDR либо двух легких, либо двух тяжелых цепей антитела или его фрагмента. Согласно другим частным вариантам осуществления, ANP и по меньшей мере один дополнительный натрийуретический пептид включены в по меньшей два отдельных участка CDR. В частности, указанный по меньшей мере один дополнительный натрийуретический пептид выбран из ANP, BNP и CNP, более конкретно из BNP и CNP.In particular embodiments, the natriuretic peptide contained in at least one heterologous amino acid sequence inserted into at least one CDR region of the antibody or fragment thereof is an ANP, and the antibody or fragment thereof contains at least one additional natriuretic peptide. In particular embodiments, at least one additional natriuretic peptide is also contained in a heterologous amino acid sequence further comprising Ntls and Ctls and included in the CDR region of said antibody or fragment thereof. In particular embodiments, ANP and at least one additional natriuretic peptide are included in two corresponding CDR regions of either two light or two heavy chains of an antibody or fragment thereof. In other particular embodiments, ANP and at least one additional natriuretic peptide are included in at least two separate CDR regions. In particular, said at least one additional natriuretic peptide is selected from ANP, BNP and CNP, more particularly from BNP and CNP.
«Пустая» молекула антитела, не несущая гетерологичной аминокислотной последовательности, содержащей натрийуретический пептид, которая состоит из двух тяжелых цепей, имеющих последовательность согласно SEQ ID NO 65, и двух легких цепей, имеющих последовательность согласно SEQ ID NO 66, называется TPP-5657. Согласно частным вариантам осуществления молекула антитела, состоящая из двух тяжелых цепей, имеющих последовательность согласно SEQ ID NO 65, или последовательность, имеющую по меньшей мере 80%, по меньшей мере 85%, по меньшей мере 90% или по меньшей мере 95% идентичность последовательности с ними. и две легкие цепи, имеющие последовательность согласно SEQ ID NO 66, или последовательность, имеющую по меньшей мере 80%, по меньшей мере 85%, по меньшей мере 90% или по меньшей мере 95% идентичности последовательности с ними, служит в качестве исходного или родительского антитела, в которое включают гетерологичную аминокислотную последовательность, включающую натрийуретический пептид. Согласно таким частным вариантам осуществления гетерологичная аминокислотная последовательность, содержащая натрийуретический пептид включена в CDR участок одной или обеих тяжелых цепей такой молекулы антитела.An "empty" antibody molecule that does not carry a heterologous amino acid sequence containing a natriuretic peptide, which consists of two heavy chains having the sequence of SEQ ID NO 65, and two light chains having the sequence of SEQ ID NO 66, is called TPP-5657. In particular embodiments, an antibody molecule consisting of two heavy chains having a sequence according to SEQ ID NO 65, or a sequence having at least 80%, at least 85%, at least 90%, or at least 95% sequence identity with them. and two light chains having the sequence according to SEQ ID NO 66, or a sequence having at least 80%, at least 85%, at least 90% or at least 95% sequence identity with them, serves as parent or a parent antibody that includes a heterologous amino acid sequence including a natriuretic peptide. In such particular embodiments, the heterologous amino acid sequence comprising a natriuretic peptide is included in the CDR region of one or both heavy chains of such an antibody molecule.
Согласно таким частным вариантам осуществления, тяжелая цепь (цепи), содержащая (содержащие) по меньшей мере одну гетерологичную аминокислотную последовательность, включенную в по меньшей мере один из ее CDR участков, имеет последовательность согласно любой из SEQ ID NO 67 - 79, или последовательность, которая на по меньшей мере 80%, по меньшей мере 85%, по меньшей мере 90% или по меньшей мере 95% идентична последовательности согласно любой из SEQ ID NO 67 - 79. Согласно частным вариантам осуществления, антитело согласно настоящему изобретению состоит из двух идентичных тяжелых цепей, имеющих последовательность согласно любой из SEQ ID NO 67 - 79, или последовательность, которая на по меньшей мере 80%, по меньшей мере 85%, по меньшей мере 90% или по меньшей мере 95% идентична последовательности согласно любой из SEQ ID NO 67 - 79, и две идентичные легкие цепи, имеющие последовательность согласно SEQ ID NO 66, или последовательность, которая на по меньшей мере 80%, по меньшей мере 85%, по меньшей мере 90% или по меньшей мере 95% идентична ей.In such particular embodiments, the heavy chain(s) comprising at least one heterologous amino acid sequence included in at least one of its CDR regions has a sequence according to any of SEQ ID NOs 67 to 79, or a sequence which is at least 80%, at least 85%, at least 90%, or at least 95% identical to the sequence of any of SEQ ID NOs 67 to 79. In particular embodiments, the antibody of the present invention consists of two identical heavy chains having a sequence according to any of SEQ ID NOs 67 to 79, or a sequence that is at least 80%, at least 85%, at least 90% or at least 95% identical to the sequence according to any one of SEQ ID Nos. NOs 67 to 79, and two identical light chains having the sequence of SEQ ID NO 66, or a sequence that is at least 80%, at least 85%, at least 90%, or at least 95% identical thereto.
Согласно другим частным вариантам осуществления, гетерологичная аминокислотная последовательность, содержащая натрийуретический пептид, включена в CDR участок одной или обеих легких цепей такой молекулы антитела. Согласно таким частным вариантам осуществления, легкая цепь (цепи), содержащая (содержащие) по меньшей мере одну гетерологичную аминокислотную последовательность, включенную в по меньшей мере один из ее CDR участков, имеет (имеют) последовательность согласно любой из SEQ ID NO 80 или 81, последовательность, которая на по меньшей мере 80%, по меньшей мере 85%, по меньшей мере 90% или по меньшей мере 95% идентична последовательности согласно любой из SEQ ID NO 80 или 81. Согласно частным вариантам осуществления, антитело согласно настоящему изобретению состоит из двух идентичных легких цепей, имеющих последовательность согласно любой из SEQ ID NO 80 или 81, или последовательность, которая на по меньшей мере 80%, по меньшей мере 85%, по меньшей мере 90% или по меньшей мере 95% идентична последовательности согласно любой из SEQ ID NO 80 или 81, и две идентичные тяжелые цепи, имеющие последовательность согласно SEQ ID NO 65, или последовательность, которая на по меньшей мере 80%, по меньшей мере 85%, по меньшей мере 90% или по меньшей мере 95% идентичную им.In other particular embodiments, the heterologous amino acid sequence comprising a natriuretic peptide is included in the CDR region of one or both light chains of such an antibody molecule. In such particular embodiments, the light chain(s) comprising at least one heterologous amino acid sequence included in at least one of its CDR regions has a sequence according to either SEQ ID NO 80 or 81, a sequence that is at least 80%, at least 85%, at least 90%, or at least 95% identical to the sequence of any of SEQ ID NO 80 or 81. In particular embodiments, the antibody of the present invention consists of two identical light chains having a sequence according to any of SEQ ID NO 80 or 81, or a sequence that is at least 80%, at least 85%, at least 90% or at least 95% identical to the sequence according to any of SEQ ID NO 80 or 81, and two identical heavy chains having the sequence of SEQ ID NO 65, or a sequence that is at least 80%, at least 85%, at least 90%, or at least 95% identical them.
В таблице ниже показан состав тяжелой и легкой цепей примерных антител согласно настоящему изобретению.The table below shows the heavy and light chain composition of exemplary antibodies of the present invention.
Таблица 1: Примерные конструкции антитела с привитым натрийуретическим пептидомTable 1: Exemplary Natriuretic Peptide Grafted Antibody Designs
Антитела согласно настоящему изобретению или их фрагменты включают природные очищенные продукты, продукты процедур химического синтеза и продукты, полученные с помощью рекомбинантных методов. В зависимости от происхождения антитело или его фрагмент согласно настоящему изобретению может быть гликозилированным или негликозилированным.Antibodies of the present invention or fragments thereof include natural purified products, products of chemical synthesis procedures and products obtained by recombinant methods. Depending on the origin, the antibody or fragment thereof of the present invention may be glycosylated or non-glycosylated.
Например, стандартные методики рекомбинантной ДНК можно использовать для приготовления и/или получения нуклеиновых кислот, кодирующих тяжелую и легкую цепи, включения этих нуклеиновых кислот в экспрессионные векторы и введения векторов в клетки-хозяева для рекомбинантной экспрессии (см., например, Sambrook, Fritsch and Maniatis (eds.), Molecular Cloning; A Laboratory Manual, Second Edition, Cold Spring Harbor, N.Y., (1989); Ausubel, F. M. et al. (eds.) Current Protocols in Molecular Biology, Greene Publishing Associates, (1989); Goeddel, Gene Expression Technology, Methods in Enzymology 185, Academic Press, San Diego, Calif. (1990); and US 4,816,397 by Boss et al.).For example, standard recombinant DNA techniques can be used to prepare and/or obtain nucleic acids encoding the heavy and light chains, incorporate these nucleic acids into expression vectors, and introduce the vectors into host cells for recombinant expression (see, e.g., Sambrook, Fritsch and Maniatis (eds.), Molecular Cloning; A Laboratory Manual, Second Edition, Cold Spring Harbor, N.Y., (1989); Ausubel, F. M. et al. (eds.) Current Protocols in Molecular Biology, Greene Publishing Associates, (1989); Goeddel, Gene Expression Technology, Methods in Enzymology 185, Academic Press, San Diego, Calif. (1990); and US 4,816,397 by Boss et al.
Таким образом, согласно второму аспекту настоящее изобретение относится к нуклеиновой кислоте или смеси нуклеиновых кислот, кодирующей антитело или его фрагмент согласно настоящему изобретению. Эти последовательности нуклеиновых кислот могут быть оптимизированы в некоторых случаях для экспрессии в млекопитающих. Молекулы ДНК согласно настоящему изобретению не ограничиваются последовательностями, раскрытыми в данном документе, но также включают их варианты.Thus, according to a second aspect, the present invention provides a nucleic acid or mixture of nucleic acids encoding an antibody or fragment thereof according to the present invention. These nucleic acid sequences may be optimized in some cases for expression in mammals. The DNA molecules of the present invention are not limited to the sequences disclosed herein, but also include variants thereof.
Настоящее изобретение дополнительно обеспечивает конструкции рекомбинантных нуклеиновых кислот, содержащие одну или несколько последовательность нуклеиновой кислоты согласно настоящему изобретению. Конструкция рекомбинантной нуклеиновой кислоты согласно настоящему изобретению может, например, содержать вектор нуклеиновой кислоты, такой как плазмида, в который была вставлена молекула нуклеиновой кислоты, кодирующая антитело или его фрагмент согласно настоящему изобретению. Понятно, что на дизайн вектора экспрессии, включая выбор регуляторных последовательностей, влияют такие факторы, как выбор клетки-хозяина, желаемый уровень экспрессии белка и то, желательна ли конститутивная или индуцибельная экспрессия.The present invention further provides recombinant nucleic acid constructs comprising one or more nucleic acid sequences according to the present invention. The recombinant nucleic acid construct of the present invention may, for example, comprise a nucleic acid vector, such as a plasmid, into which a nucleic acid molecule encoding an antibody or fragment thereof has been inserted. It is understood that the design of an expression vector, including the choice of regulatory sequences, is influenced by factors such as the choice of host cell, the desired level of protein expression, and whether constitutive or inducible expression is desired.
Полезные экспрессионные векторы для использования в бактериях конструируются путем вставки одной или нескольких последовательностей нуклеиновой кислоты согласно настоящему изобретению вместе с подходящими сигналами инициирования трансляции и терминации в функционирующую рамку считывания с функциональным промотором. Бактериальные экспрессионные векторы, как правило, содержат один или несколько фенотипически селектируемых маркеров и сайт инициации репликации, чтобы гарантировать поддержания вектора и, если требуется, обеспечить амплификацию в бактериальном хозяине. Бактериальные экспрессионные векторы могут содержать элементы, полученные из коммерчески доступных плазмид, как например, хорошо известный клонирующий вектор pBR322 (ATCC 37017). Ряд бактериальных экспрессионных векторов может быть успешно выбран в зависимости от предполагаемого использования экспрессируемого антитела или его фрагмента. Например, если желательно большое количество такого антитела, могут быть желательны векторы, опосредующие высокий уровень экспрессии слитых белков антител, которые легко очищаются.Useful expression vectors for use in bacteria are constructed by inserting one or more nucleic acid sequences of the present invention together with suitable translation initiation and termination signals into a functional reading frame with a functional promoter. Bacterial expression vectors typically contain one or more phenotypically selectable markers and an origin of replication to ensure maintenance of the vector and, if desired, to allow amplification in a bacterial host. Bacterial expression vectors may contain elements derived from commercially available plasmids, such as the well known cloning vector pBR322 (ATCC 37017). A number of bacterial expression vectors can be advantageously selected depending on the intended use of the antibody or fragment thereof to be expressed. For example, if a large amount of such antibody is desired, vectors that mediate high levels of expression of antibody fusion proteins that are easily purified may be desirable.
Конструкции рекомбинантных нуклеиновых кислот, предназначенные для экспрессии антител в эукариотической клетке-хозяине, могут содержать регуляторные последовательности, которые способны контролировать экспрессию открытой рамки считывания в эукариотической клетке, предпочтительно промотор и сигнал полиаденилирования. Промоторы и сигналы полиаденилирования предпочтительно выбираются так, чтобы они функционировали в пределах определенного типа клеток, предназначенных для экспрессии антител. Примеры подходящих промоторов включают, но не ограничиваются ими, промоторы цитомегаловируса (CMV), такие как сильный немедленно-ранний промотор CMV, вируса обезьян 40 (SV40), вируса опухоли молочной железы мыши (MMTV), вируса иммунодефицита человека (ВИЧ), как например промотор длинных концевых повторов ВИЧ (LTR), вируса Молони, вируса Эпштейна-Барра (EBV), аденовируса (например, главный поздний промотор аденовируса (AdMLP)), полиомы и вируса саркомы Рауса (RSV), синтетический промотор CAG состоящий из элемента раннего энхансера CMV, промотор, первый экзон и первый интрон гена бета-актина курицы и акцептор сплайсинга гена бета-глобина кролика, а также промоторы из генов млекопитающих, таких как актин, миозин, гемоглобин, мышечный креатин и металлотионеин. Согласно конкретному варианту осуществления кассета эукариотической экспрессии содержит промотор CMV. В контексте настоящего изобретения термин «промотор CMV» относится к сильному немедленно-раннему промотору цитомегаловируса.Recombinant nucleic acid constructs intended for expression of antibodies in a eukaryotic host cell may contain regulatory sequences that are capable of controlling the expression of the open reading frame in the eukaryotic cell, preferably a promoter and a polyadenylation signal. Promoters and polyadenylation signals are preferably selected to function within the specific cell type intended for antibody expression. Examples of suitable promoters include, but are not limited to, cytomegalovirus (CMV) promoters such as the strong CMV immediate-early promoter, simian virus 40 (SV40), mouse mammary tumor virus (MMTV), human immunodeficiency virus (HIV) such as for example promoter of HIV long terminal repeats (LTR), Moloney virus, Epstein-Barr virus (EBV), adenovirus (e.g. adenovirus major late promoter (AdMLP)), polyoma and Rous sarcoma virus (RSV), synthetic CAG promoter consisting of an early enhancer element CMV, the promoter, first exon and first intron of the chicken beta-actin gene and the splice acceptor of the rabbit beta-globin gene, as well as promoters from mammalian genes such as actin, myosin, hemoglobin, muscle creatine and metallothionein. In a specific embodiment, the eukaryotic expression cassette comprises a CMV promoter. In the context of the present invention, the term “CMV promoter” refers to the strong immediate-early promoter of cytomegalovirus.
Примеры подходящих сигналов полиаденилирования включают, но не ограничиваются ими, сайт полиаденилирования бычьего гормона роста (BGH), сигналы полиаденилирования SV40 и сигналы полиаденилирования LTR.Examples of suitable polyadenylation signals include, but are not limited to, bovine growth hormone (BGH) polyadenylation site, SV40 polyadenylation signals, and LTR polyadenylation signals.
Кроме того, рекомбинантная последовательность нуклеиновой кислоты может содержать одну или несколько энхансерных последовательностей. Энхансер может быть, например, энхансером актина, миозина, гемоглобина, мышечного креатина или вирусным энхансером млекопитающих, например, энхансер из CMV, RSV, SV40 или EBV. Для дальнейшего описания вирусных регуляторных элементов и их последовательностей, см., например, US 5,168,062 от Stinski, US 4,510,245 от Bell et al. и US 4,968,615 от Schaffner et al.In addition, the recombinant nucleic acid sequence may contain one or more enhancer sequences. The enhancer may be, for example, an actin enhancer, myosin enhancer, hemoglobin enhancer, muscle creatine enhancer, or a mammalian viral enhancer, such as an enhancer from CMV, RSV, SV40, or EBV. For further description of viral regulatory elements and their sequences, see, for example, US 5,168,062 from Stinski, US 4,510,245 from Bell et al. and US 4,968,615 from Schaffner et al.
Регуляторные последовательности и кодоны, как правило, зависят от вида, поэтому для максимального увеличения продукции белка регуляторные последовательности и кодоны предпочтительно выбирают так, чтобы они были эффективными для видов /типов клеток, предназначенных для экспрессии антител. Специалист в данной области техники может получить молекулы рекомбинантной ДНК, которые являются функциональными у данного вида субъектов.Regulatory sequences and codons are generally species dependent, so to maximize protein production, regulatory sequences and codons are preferably selected to be effective for the species/cell types being targeted for antibody expression. One skilled in the art can obtain recombinant DNA molecules that are functional in a given type of subject.
Рекомбинантные экспрессионные векторы млекопитающих могут также включать точки начала репликации и селектируемые маркеры (см., например, US 4,399,216, US 4,634,665 и US 5,179,017). Подходящие селективные маркеры включают гены, которые придают устойчивость к лекарственным средствам, как например G418, пуромицин, гигромицин, бластицидин, цеоцин/блеомицин или метотрексат, или селективный маркер, которые используют ауксотрофии, как например глютаминсинтетаза, на клетке-хозяине, в которую был введен вектор. Например, ген дигидрофолатредуктазы (DHFR) придает устойчивость к метотрексату, ген neo обеспечивает устойчивость к G418, ген bsd из Aspergillus terreus придает устойчивость к бластидину, пуромицин-N-ацетилтрансферазу придает устойчивость к пуромицину, продукт гена Sh ble придает устойчивость к цеоцину, а устойчивость к гигромицину обеспечивается геном устойчивости к гигромицину E.coli (hyg или hph). Селектируемые маркеры, такие как DHFR или глютаминсинтетаза, также полезны для методов амплификации в сочетании с MTX и MSX.Recombinant mammalian expression vectors may also include origins of replication and selectable markers (see, for example, US 4,399,216, US 4,634,665 and US 5,179,017). Suitable selectable markers include genes that confer drug resistance, such as G418, puromycin, hygromycin, blasticidin, ceocin/bleomycin or methotrexate, or a selectable marker that utilizes an auxotrophy, such as glutamine synthetase, on the host cell into which it was introduced vector. For example, the dihydrofolate reductase (DHFR) gene confers resistance to methotrexate, the neo gene confers resistance to G418, the bsd gene from Aspergillus terreus confers resistance to blastidine, puromycin N-acetyltransferase confers resistance to puromycin, the product of the Sh ble gene confers resistance to ceocin, and resistance to hygromycin is provided by the hygromycin resistance gene of E. coli (hyg or hph). Selectable markers such as DHFR or glutamine synthetase are also useful for amplification methods in combination with MTX and MSX.
Согласно некоторым вариантам осуществления последовательности нуклеиновой кислоты, кодирующие тяжелые и легкие цепи, вставлены в отдельные векторы. Согласно другим вариантам осуществления последовательности нуклеиновой кислоты, кодирующие тяжелые и легкие цепи, вставлены в один и тот же вектор. Кроме того, последовательности нуклеиновой кислоты, кодирующие вариабельные домены тяжелых и/или легких цепей, могут быть превращены, например, в полинуклеотидные последовательности, кодирующие полноразмерные цепи антитела, Fab фрагменты или scFv. Фрагмент ДНК, кодирующий VL- или VH может быть функционально связан, (таким образом, что аминокислотные последовательности, закодированные двумя фрагментами ДНК, оказались в одной рамке считывания) к другому фрагменту ДНК, кодирующему, например, константный домен антитела или гибкий линкер. В качестве примера, чтобы создать полинуклеотидную последовательность, которая кодирует scFv, нуклеиновые кислоты, кодирующие VH и VL, могут быть функционально связаны с другим фрагментом, кодирующим гибкий линкер, таким образом, чтобы последовательности VH и VL могли бы быть экспрессированы как белок с непрерывной единственной цепью с областями VL и VH, соединенными гибким линкером (см., например, Bird et al. (1988) Science 242:423-426; Huston et al. (1988) Proc. Natl. Acad. Sci. USA 85:5879-5883; McCafferty et al, Nature (1990) 348:552-554). Последовательности человеческих константных доменов тяжелой цепи и легкой цепи известны специалистам в данной области техники (см., например, Kabat, E. A., el al. (1991) Sequences of Proteins of Immunological Interest, Fifth Edition, U.S. Department of Health and Human Services, NIH Publication No. 91-3242) и фрагменты ДНК, охватывающие эти области, могут быть получены стандартной амплификацией с помощью ПЦР.In some embodiments, the nucleic acid sequences encoding the heavy and light chains are inserted into separate vectors. In other embodiments, the nucleic acid sequences encoding the heavy and light chains are inserted into the same vector. In addition, nucleic acid sequences encoding heavy and/or light chain variable domains can be converted, for example, into polynucleotide sequences encoding full-length antibody chains, Fab fragments or scFvs. A DNA fragment encoding VL or VH may be operably linked (such that the amino acid sequences encoded by the two DNA fragments are in the same reading frame) to another DNA fragment encoding, for example, an antibody constant domain or a flexible linker. As an example, to create a polynucleotide sequence that encodes a scFv, the nucleic acids encoding VH and VL can be operably linked to another fragment encoding a flexible linker such that the VH and VL sequences can be expressed as a protein with a contiguous single chain with VL and VH regions connected by a flexible linker (see, for example, Bird et al. (1988) Science 242:423-426; Huston et al. (1988) Proc. Natl. Acad. Sci. USA 85:5879- 5883; McCafferty et al, Nature (1990) 348:552-554). The sequences of the human heavy chain and light chain constant domains are known to those skilled in the art (see, for example, Kabat, E. A., el al. (1991) Sequences of Proteins of Immunological Interest, Fifth Edition, U.S. Department of Health and Human Services, NIH Publication No. 91-3242) and DNA fragments covering these regions can be obtained by standard PCR amplification.
Согласно частным вариантам осуществления, последовательности нуклеиновой кислоты, кодирующие тяжелую цепь, в которую гетерологичная аминокислотная последовательность, содержащая натрийуретический пептид, включена содержат последовательность согласно любой из SEQ ID NO 82 или 83 или последовательность, на по меньшей мере 80%, по меньшей мере 85%, по меньшей мере 90% или по меньшей мере 95% идентичную последовательности согласно любой из SEQ ID NO 82 или 83. Согласно таким частным вариантам осуществления, последовательность нуклеиновой кислоты, кодирующая легкую цепь, содержит последовательность согласно SEQ ID NO 84 или последовательность на по меньшей мере 80%, по меньшей мере 85%, по меньшей мере 90% или по меньшей мере 95% идентичную ей.In particular embodiments, the nucleic acid sequences encoding a heavy chain into which a heterologous amino acid sequence containing a natriuretic peptide is included comprise a sequence according to any of SEQ ID NO 82 or 83, or a sequence of at least 80%, at least 85% , at least 90% or at least 95% identical to the sequence of either SEQ ID NO 82 or 83. In such particular embodiments, the nucleic acid sequence encoding the light chain comprises a sequence of SEQ ID NO 84 or a sequence of at least at least 80%, at least 85%, at least 90% or at least 95% identical to it.
Согласно третьему аспекту настоящее изобретение относится к клетке-хозяину, содержащей нуклеиновую кислоту или смесь нуклеиновых кислот согласно настоящему изобретению. В контексте настоящего изобретения термины «клетка-хозяин», «линия клеток-хозяев» и «культура клеток-хозяев» используются взаимозаменяемо и относятся к клеткам, в которые была введена экзогенная нуклеиновая кислота, включая потомство таких клеток. К клеткам-хозяевам относятся «трансформанты», «трансформированные клетки», «трансфектанты», «трансфицированные клетки» и «трансдуцированные клетки», которые включают первично трансформированную/трансфицированную/трансдуцированную клетку и потомство, полученное из нее, независимо от количества пассажей. Потомство не может быть полностью идентичным по содержанию нуклеиновой кислоты в родительской клетке, и содержащаяся экзогенная нуклеиновая кислота может содержать мутации. В настоящую заявку включено мутантное потомство, которое имеет ту же функцию или биологическую активность, что и скринированные или отобранные в первоначально трансформированной клетке.According to a third aspect, the present invention relates to a host cell containing a nucleic acid or mixture of nucleic acids according to the present invention. In the context of the present invention, the terms "host cell", "host cell line" and "host cell culture" are used interchangeably and refer to cells into which exogenous nucleic acid has been introduced, including the progeny of such cells. Host cells include "transformants", "transformed cells", "transfectants", "transfected cells" and "transduced cells", which include the primary transformed/transfected/transduced cell and the progeny derived from it, regardless of the number of passages. The offspring may not be completely identical in nucleic acid content to the parent cell, and the exogenous nucleic acid contained may contain mutations. Included herein are mutant progeny that have the same function or biological activity as those screened or selected in the originally transformed cell.
Трансфекцию экспрессирующего вектора в клетку-хозяина можно проводить с использованием стандартных методов, таких как электропорация, нуклеофекция, кальций-фосфатная преципитация, липофекция, трансфекция на основе поликатиона, такая как трансфекция на основе поликатиона, такая как трансфекция на основе полиэтиленимина (PEI) и трансфекция DEAE-декстраном.Transfection of an expression vector into a host cell can be carried out using standard methods such as electroporation, nucleofection, calcium phosphate precipitation, lipofection, polycation-based transfection such as polycation-based transfection such as polyethylenimine (PEI)-based transfection and transfection DEAE-dextran.
Подходящие клетки-хозяева включают прокариотические и эукариотические клетки. Примерами прокариотических клеток-хозяев являются бактерии и включают, без ограничения, Escherichia coli, Bacillus subtilis, Salmonella typhimurium и различные виды в пределах родов Pseudomonas, Streptomyces и Staphylococcus.Suitable host cells include prokaryotic and eukaryotic cells. Examples of prokaryotic host cells are bacteria and include, but are not limited to, Escherichia coli, Bacillus subtilis, Salmonella typhimurium and various species within the genera Pseudomonas, Streptomyces and Staphylococcus.
Неограничивающие примеры эукариотических клеток-хозяев включают дрожжи, насекомые и клетки насекомых, растения и растительные клетки, трансгенных животных и клетки млекопитающих. Подходящие клетки-хозяева млекопитающих для экспрессии антител включают яичник китайского хомячка (CHO клетки), такие как CHO-K1, CHO-S, CHO-K1SV [включая dhfr- CHO клетки, описанные в Urlaub and Chasin, (1980) Proc. Natl. Acad. Sci. USA 77:4216-4220 и Urlaub et al., Cell. 1983 Jun;33(2):405-12, с применением DHFR селектируемого маркера, например, как описано в R. J. Kaufman and P. A. Sharp (1982) Mol. Biol. 159:601-621; и другие нокаутные клетки, примеры которых приведены в Fan et al., Biotechnol Bioeng. 2012 Apr;109(4):1007-15], NS0 миеломные клетки, COS клетки, HEK293 клетки, HKB11 клетки, BHK21 клетки, CAP клетки, EB66 клетки, и SP2 клетки.Non-limiting examples of eukaryotic host cells include yeast, insects and insect cells, plants and plant cells, transgenic animals and mammalian cells. Suitable mammalian host cells for antibody expression include Chinese hamster ovary (CHO cells) such as CHO-K1, CHO-S, CHO-K1SV [including dhfr-CHO cells described in Urlaub and Chasin, (1980) Proc. Natl. Acad. Sci. USA 77:4216-4220 and Urlaub et al., Cell. 1983 Jun;33(2):405-12, using a DHFR selectable marker, for example, as described in R. J. Kaufman and P. A. Sharp (1982) Mol. Biol. 159:601-621; and other knockout cells, examples of which are given in Fan et al., Biotechnol Bioeng. 2012 Apr;109(4):1007-15], NS0 myeloma cells, COS cells, HEK293 cells, HKB11 cells, BHK21 cells, CAP cells, EB66 cells, and SP2 cells.
Экспрессия также может быть временной или полустабильной в экспрессионных системах экспрессии, таких как клетки HEK293, HEK293T, HEK293-EBNA, HEK293E, HEK293-6E, HEK293-Freestyle, HKB11, Expi293F, 293EBNALT75, CHO Freestyle, CHO-S, CHO-K1, CHO-K1SV, CHOEBNALT85, CHOS-XE, CHO-3E7 или CAP-T (например, Durocher et al., Nucleic Acids Res. 2002 Jan 15;30(2):E9).Expression may also be transient or semi-stable in expression systems such as HEK293, HEK293T, HEK293-EBNA, HEK293E, HEK293-6E, HEK293-Freestyle, HKB11, Expi293F, 293EBNALT75, CHO Freestyle, CHO-S, CHO-K1, CHO-K1SV, CHOEBNALT85, CHOS-XE, CHO-3E7, or CAP-T (eg, Durocher et al., Nucleic Acids Res. 2002 Jan 15;30(2):E9).
Согласно четвертому аспекту настоящее изобретение относится к способу получения антитела или его фрагмента, включающему культивирование клетки-хозяина согласно настоящему изобретению. В частности, клетку-хозяин согласно настоящему изобретению культивируют в условиях, подходящих для экспрессии антитела или его фрагмента.According to a fourth aspect, the present invention relates to a method for producing an antibody or fragment thereof, comprising culturing a host cell according to the present invention. In particular, the host cell of the present invention is cultured under conditions suitable for expression of the antibody or fragment thereof.
Экспрессия антител может быть конститутивной или регулируемой (например, индуцибельной). Для индуцибельной экспрессии антител клетку-хозяин согласно настоящему изобретению обычно выращивают до подходящей плотности клеток с последующей дерепрессией/индукцией выбранного промотора подходящими способами (например, температурным сдвигом или химической индукцией, такой как добавление или удаление низкомолекулярных индукторов, таких как тетрациклин в сочетании с системой Tet), и культивированием клетки-хозяина в течение дополнительного периода.Antibody expression may be constitutive or regulated (eg, inducible). For inducible expression of antibodies, the host cell of the present invention is typically grown to a suitable cell density followed by derepression/induction of the selected promoter by suitable means (e.g., temperature shift or chemical induction such as the addition or removal of small molecule inducers such as tetracycline in combination with the Tet system ), and culturing the host cell for an additional period.
Согласно частным вариантам осуществления способ получения антитела или его фрагмента согласно настоящему изобретению дополнительно включает стадию выделения антитела или его фрагмента из культуры клеток-хозяев. Клетки можно, например, собирать центрифугированием, разрушать физическими или химическими средствами, а антитело или его фрагмент можно дополнительно очищать из полученного неочищенного экстракта. Согласно некоторым вариантам осуществления экспрессионный вектор сконструирован таким образом, что экспрессируемое антитело или его фрагмент секретируется в культуральную среду, в которой выращиваются клетки-хозяева. В этом случае антитело или его фрагмент можно непосредственно выделить из культуральной среды с использованием стандартных методов очистки белка.In particular embodiments, a method for producing an antibody or fragment thereof according to the present invention further includes the step of isolating the antibody or fragment thereof from a culture of host cells. Cells can, for example, be collected by centrifugation, disrupted by physical or chemical means, and the antibody or fragment thereof can be further purified from the resulting crude extract. In some embodiments, the expression vector is constructed such that the antibody or fragment thereof to be expressed is secreted into the culture medium in which the host cells are grown. In this case, the antibody or its fragment can be directly isolated from the culture medium using standard protein purification methods.
Согласно частным вариантам осуществления способ согласно настоящему изобретению дополнительно включает стадию очистки выделенного антитела или его фрагмента. В частности, антитело очищают (1) до более чем 90%, как определено, например, с помощью аналитической хроматографии или SDS-капиллярного гель-электрофореза(например, на приборе Caliper LabChip GXII, GX 90 или Biorad Bioanalyzer) и, более конкретно, очистка дает гомогенность антител по меньшей мере около 92,5%, 95%, 98% или 99%; альтернативно, антитело очищают (2) до степени, достаточной для получения по меньшей мере 15 остатков N-концевой или внутренней аминокислотной последовательности, или (3) до гомогенности с помощью SDS-PAGE в восстанавливающих или невосстанавливающих условиях с использованием кумасси синего или, желательно, серебряного красителя.In particular embodiments, the method of the present invention further includes the step of purifying the isolated antibody or fragment thereof. In particular, the antibody is purified (1) to greater than 90%, as determined, for example, by analytical chromatography or SDS capillary gel electrophoresis (for example, on a Caliper LabChip GXII, GX 90 or Biorad Bioanalyzer) and, more specifically, purification results in antibody homogeneity of at least about 92.5%, 95%, 98%, or 99%; alternatively, the antibody is purified (2) to an extent sufficient to obtain at least 15 residues of N-terminal or internal amino acid sequence, or (3) to homogeneity by SDS-PAGE under reducing or non-reducing conditions using Coomassie blue or, preferably, silver dye.
Антитела или их фрагменты согласно настоящему изобретению могут быть выделены и очищены из рекомбинантных клеточных культур известными методами включающими, но не ограниченные этим: осаждением сульфатом аммония или этанолом, экстракцией кислотой, хроматография с использованием белка А, хроматография с использованием белка G, эксклюзионная хроматография по размеру, анионная или катионная ионообменная хроматография, хроматография на фосфоцеллюлозе, гидрофобная хроматография, аффинная хроматография, хроматография на гидроксиапатите и хроматография с использованием белка лектина. Высокоэффективная жидкостная хроматография ("ВЭЖХ") может также использоваться для очистки (см., например, Colligan, Current Protocols in Immunology или Current Protocols in Protein Science, John Wiley & Sons, NY, N.Y., (1997-2001), например, Chapters 1, 4, 6, 8, 9, 10).Antibodies or fragments thereof according to the present invention can be isolated and purified from recombinant cell cultures by known methods including, but not limited to: ammonium sulfate or ethanol precipitation, acid extraction, protein A chromatography, protein G chromatography, size exclusion chromatography , anionic or cationic ion exchange chromatography, phosphocellulose chromatography, hydrophobic chromatography, affinity chromatography, hydroxyapatite chromatography and lectin protein chromatography. High performance liquid chromatography (“HPLC”) can also be used for purification (see, for example, Colligan, Current Protocols in Immunology or Current Protocols in Protein Science, John Wiley & Sons, NY, N.Y., (1997-2001), for example, Chapters 1, 4, 6, 8, 9, 10).
согласно пятому аспекту настоящее изобретение относится к композиции, содержащей антитело или его фрагмент согласно настоящему изобретению. В частности, композиция согласно настоящему изобретению представляет собой фармацевтическую композицию, подходящую для применения в способе лечения, где антитело или его фрагмент согласно настоящему изобретению содержится в количестве, эффективном для достижения намеченной цели, то есть предотвращения или лечения определенного болезненного состояния.According to a fifth aspect, the present invention relates to a composition containing an antibody or fragment thereof according to the present invention. In particular, the composition of the present invention is a pharmaceutical composition suitable for use in a method of treatment wherein the antibody or fragment thereof of the present invention is contained in an amount effective to achieve the intended purpose, that is, the prevention or treatment of a particular disease state.
Композиция необязательно дополнительно содержит по меньшей мере один фармацевтически приемлемое вспомогательное вещество. В контексте настоящего изобретения термин «вспомогательное вещество» относится к природному или синтетическому веществу, составленному вместе с активным ингредиентом в лекарственное средство. Подходящие вспомогательные вещества включают антиадгезивные вещества, связующие, покрытия, дезинтегрирующие вещества, ароматизаторы, красители, смазывающие вещества, глиданты, сорбенты, консерванты и подсластители. Конкретные примеры фармацевтически приемлемых вспомогательных веществ включают, но не ограничиваются ими, физиологический раствор, забуференный физиологический раствор, декстрозу и воду. В контексте настоящего изобретения термин «фармацевтически приемлемый» относится к молекулярным компонентам и другим ингредиентам фармацевтических композиций, которые являются физиологически переносимыми и обычно не вызывают нежелательных реакций при введении млекопитающему (например, человеку). Термин «фармацевтически приемлемый» также может означать одобренный регулирующим органом федерального правительства или правительства штата или перечисленный в Фармакопее США или другой общепризнанной фармакопее для использования у млекопитающих и, более конкретно, у людей.The composition optionally further contains at least one pharmaceutically acceptable excipient. In the context of the present invention, the term "excipient" refers to a natural or synthetic substance formulated together with an active ingredient into a drug. Suitable excipients include anti-adhesives, binders, coatings, disintegrants, flavors, colorants, lubricants, glidants, sorbents, preservatives and sweeteners. Specific examples of pharmaceutically acceptable excipients include, but are not limited to, saline, buffered saline, dextrose, and water. In the context of the present invention, the term "pharmaceutically acceptable" refers to molecular components and other ingredients of pharmaceutical compositions that are physiologically tolerable and generally do not cause adverse reactions when administered to a mammal (eg, a human). The term "pharmaceutically acceptable" can also mean approved by a regulatory agency of the federal or state government or listed in the United States Pharmacopoeia or other generally accepted pharmacopoeia for use in mammals and, more specifically, in humans.
Композиция согласно настоящему изобретению может дополнительно содержать один или несколько дополнительных терапевтически активных агентов.The composition according to the present invention may further contain one or more additional therapeutically active agents.
Фармацевтическая композиция может быть в форме раствора, суспензии, капсулы с энтеросолюбильным покрытием, лиофилизированного порошка или любой другой формы, подходящей для предполагаемого использования.The pharmaceutical composition may be in the form of a solution, suspension, enteric-coated capsule, lyophilized powder, or any other form suitable for the intended use.
Фармацевтические композиции для перорального введения могут быть составлены с использованием фармацевтически приемлемых вспомогательных веществ, известных специалистам в данной области техники, в дозировках, подходящих для перорального введения. Такие вспомогательные вещества позволяют фармацевтическим композициям быть сформулированными в виде таблеток, пилюль, драже, капсул, жидкостей, гелей, сиропов, паст, суспензий и т.п., для проглатывания пациентом.Pharmaceutical compositions for oral administration can be formulated using pharmaceutically acceptable excipients known to those skilled in the art in dosages suitable for oral administration. Such excipients allow the pharmaceutical compositions to be formulated as tablets, pills, dragees, capsules, liquids, gels, syrups, pastes, suspensions, and the like, for ingestion by the patient.
Фармацевтические препараты для перорального использования могут быть получены путем комбинирования активных соединений с твердым вспомогательным веществом, при необходимости размалывая (гранулируя) получающуюся смесь, и перерабатывая смесь гранул после добавления подходящих вспомогательных средств при необходимости, чтобы получить таблетки или ядро драже. Подходящими вспомогательными веществами являются углеводные или белковые наполнители, такие как сахара, включая лактозу, сахарозу, маннит или сорбит; крахмал из кукурузы, пшеницы, риса, картофеля или других растений; целлюлозы, такие как метил целлюлоза, гидроксипропилметилцеллюлоза, или натрий карбоксиметилцеллюлоза; и камеди, включая гуммиарабик и трагакантовую камедь; и белки, такие как желатин и коллаген. При необходимости могут быть добавлены вещества для улучшения распадаемости таблеток или солюбилизирующие агенты, такие как поперечно сшитый поливинилпирролидон, агар, альгиновая кислота или ее соль, такая как альгинат натрия.Pharmaceutical preparations for oral use can be prepared by combining the active compounds with a solid excipient, grinding (granulating) the resulting mixture if necessary, and processing the granule mixture after adding suitable excipients if necessary to obtain tablets or dragee cores. Suitable excipients include carbohydrate or protein excipients such as sugars including lactose, sucrose, mannitol or sorbitol; starch from corn, wheat, rice, potatoes or other plants; celluloses such as methyl cellulose, hydroxypropyl methyl cellulose, or sodium carboxymethyl cellulose; and gums, including gum arabic and gum tragacanth; and proteins such as gelatin and collagen. If necessary, tablet disintegrating agents or solubilizing agents such as cross-linked polyvinylpyrrolidone, agar, alginic acid or a salt thereof such as sodium alginate may be added.
Ядра драже снабжаются подходящими покрытия, такими как концентрированные растворы сахаров, которые могут также содержать гуммиарабик, тальк, поливинилпирролидон, гель карбопола, полиэтиленгликоль и/или диоксид титана, глазировочные растворы, и подходящие органические растворители или смеси растворителей. Красители или пигменты могут быть добавлены к таблеткам или покрытиям драже для идентификации продукта или характеризации количества активного соединения, то есть дозировку.The dragee cores are provided with suitable coatings, such as concentrated sugar solutions, which may also contain gum arabic, talc, polyvinylpyrrolidone, carbopol gel, polyethylene glycol and/or titanium dioxide, coating solutions, and suitable organic solvents or mixtures of solvents. Dyes or pigments may be added to tablets or dragee coatings to identify the product or characterize the amount of active compound, i.e. dosage.
Фармацевтические препараты, которые могут использоваться перорально, включают твердые капсулы, приготовленные из желатина, так же как мягкие, герметические капсулы, приготовленные из желатина и покрытия такого как глицерин или сорбит.Твердые капсулы могут содержать активные ингредиенты, смешанные с наполнителем или связующими веществами, такими как лактоза или крахмалы, лубрикантами, такими как тальк или стеарат магния, и при необходимости, стабилизаторами. В мягких капсулах активные соединения могут быть растворены или диспергированы в подходящих жидкостях, таких как жирные масла, жидкий парафин или жидкий полиэтиленгликоль с или без стабилизаторов.Pharmaceutical preparations that can be administered orally include hard capsules prepared from gelatin, as well as soft, sealed capsules prepared from gelatin and a coating such as glycerin or sorbitol. Hard capsules may contain active ingredients mixed with filler or binders such as such as lactose or starches, lubricants such as talc or magnesium stearate, and, if necessary, stabilizers. In soft capsules, the active compounds may be dissolved or dispersed in suitable liquids such as fatty oils, liquid paraffin or liquid polyethylene glycol with or without stabilizers.
Фармацевтические композиции для парентерального введения включают водные растворы терапевтически активных агентов. Для инъекции фармацевтические композиции в соответствии с настоящим изобретением могут быть составлены в водных растворах, предпочтительно в физиологически совместимых буферах, таких как раствор Хэнка, раствор Рингера или забуференный физиологический раствор. Водные инъекционные суспензии могут содержать вещества, которые увеличивают вязкость суспензий, такие как карбоксиметилцеллюлоза натрия, сорбит или декстран. Дополнительно, суспензии активного агента могут быть получены в виде соответствующих масляных инъекционных суспензий. Подходящие липофильные растворители или носители включают жирные масла, такие как кунжутное масло или синтетические сложные эфиры жирных кислот, такие как этилолеат или триглицериды или липосомы. При необходимости, суспензии могут также содержать подходящие стабилизирующие агенты или агенты, которые повышают растворимость терапевтически активного агента, что позволяет получить препарат высококонцентрированных растворов.Pharmaceutical compositions for parenteral administration include aqueous solutions of therapeutically active agents. For injection, the pharmaceutical compositions of the present invention can be formulated in aqueous solutions, preferably in physiologically compatible buffers such as Hank's solution, Ringer's solution or buffered saline. Aqueous injection suspensions may contain substances that increase the viscosity of the suspensions, such as sodium carboxymethylcellulose, sorbitol or dextran. Additionally, suspensions of the active agent can be prepared as appropriate oily injection suspensions. Suitable lipophilic solvents or carriers include fatty oils such as sesame oil or synthetic fatty acid esters such as ethyl oleate or triglycerides or liposomes. If necessary, the suspensions may also contain suitable stabilizing agents or agents that increase the solubility of the therapeutically active agent, allowing the preparation of highly concentrated solutions.
Для местного или назального введения используются в композиции пенетранты, соответствующие конкретному барьеру, через который должен быть пройден. Такие пенетранты известны специалистам в данной области техники.For topical or nasal administration, penetrants appropriate to the specific barrier to be penetrated are used in the composition. Such penetrants are known to those skilled in the art.
Фармацевтические композиции в соответствии с настоящим изобретением могут производиться способом, который известен специалистам в данной области техники, например, посредством обычного смешивания, растворения, гранулирования, создания драже, отмачивания, эмульгирования, заключения в капсулу, включения или процессов лиофилизации.The pharmaceutical compositions of the present invention can be manufactured in a manner known to those skilled in the art, for example, through conventional mixing, dissolving, granulating, drageeing, soaking, emulsifying, encapsulating, encapsulating, or lyophilization processes.
Фармацевтическая композиция может обеспечиваться в виде соли и может быть сформирована с кислотами, включая, но не ограничиваясь этим: хлористоводородную, серную, уксусную, молочную, винную, яблочную, янтарную и т.д. Соли имеют тенденцию быть более растворимыми в водных или других протонных растворителях, которые являются соответствующими формами свободного основания. В других случаях предпочтительными препаратами могут быть лиофилизованные порошки в 1 мМ - 50 мМ гистидина, 0,1%-2% сахарозы, 2%-7% маннита в интервале рН от 4,5 до 7,5, которые объединяются с буфером пред использованием.The pharmaceutical composition may be provided as a salt and may be formed with acids including, but not limited to: hydrochloric, sulfuric, acetic, lactic, tartaric, malic, succinic, etc. Salts tend to be more soluble in aqueous or other protic solvents, which are the corresponding free base forms. In other cases, the preferred preparations may be lyophilized powders in 1 mM - 50 mM histidine, 0.1% - 2% sucrose, 2% - 7% mannitol in the pH range of 4.5 to 7.5, which are combined with buffer before use .
Дополнительные сведения о методах составления и введения можно найти в последнем выпуске Remington's Pharmaceutical Sciences (Ed. Maack Publishing Co, Easton, Pa.).Additional information on formulation and administration methods can be found in the latest issue of Remington's Pharmaceutical Sciences (Ed. Maack Publishing Co, Easton, Pa.).
После приготовления фармацевтической композиции, содержащей антитело или его фрагмент согласно настоящему изобретению, она может быть помещена в соответствующий контейнер и помечена для лечения указанного состояния. Для введения антитела или его фрагмента согласно настоящему изобретению такая маркировка будет включать количество, частоту и способ введения.After preparing a pharmaceutical composition containing an antibody or fragment thereof according to the present invention, it can be placed in an appropriate container and labeled for the treatment of the specified condition. For administration of an antibody or fragment thereof according to the present invention, such labeling will include the amount, frequency and route of administration.
Настоящее изобретение также относится к фармацевтическим упаковкам и наборам, содержащим один или несколько контейнеров, заполненных одним или несколькими ингредиентами вышеупомянутых композиций согласно настоящему изобретению. С таким контейнером (контейнерами) может быть связано уведомление в форме, предписанной государственным агентством, регулирующим производство, использование или продажу фармацевтических или биологических продуктов, отражающее одобрение агентством производства, использования или продажи продукта для введения человеку.The present invention also relates to pharmaceutical packages and kits containing one or more containers filled with one or more ingredients of the above-mentioned compositions according to the present invention. Such container(s) may be accompanied by a notice in a form prescribed by the government agency regulating the manufacture, use, or sale of pharmaceutical or biological products reflecting the agency's approval of the manufacture, use, or sale of the product for administration to humans.
Согласно шестому аспекту настоящее изобретение относится к антителу или его фрагменту согласно настоящему изобретению или композиции согласно настоящему изобретению для применения в способе лечения.According to a sixth aspect, the present invention relates to an antibody or fragment thereof according to the present invention or a composition according to the present invention for use in a method of treatment.
В частности, такой способ лечения включает введение субъекту, нуждающемуся в этом, терапевтически эффективного количества антитела или его фрагмента согласно настоящему изобретению. Субъект может быть человеком или животным, не являющимся человеком (например, кроликом, крысой, мышью, собакой, обезьяной или другим приматом более низкого порядка).In particular, such a method of treatment includes administering to a subject in need thereof a therapeutically effective amount of an antibody or fragment thereof according to the present invention. The subject may be a human or a non-human animal (eg, rabbit, rat, mouse, dog, monkey, or other lower order primate).
В контексте настоящего изобретения термин «терапевтически эффективное количество» определяется как количество антитела или его фрагмента в соответствии с настоящим изобретением, которое достаточно для предотвращения или облегчения симптомов любого из расстройств и заболеваний, упомянутых в настоящем документе - либо в виде разовой дозы, либо в соответствии с режимом множественного приема, отдельно или в комбинации с другими агентами. Согласно частным вариантам осуществления, указанное «терапевтически эффективное количество» токсикологически переносимо. Определение эффективной дозы находится в пределах компетенции специалистов в данной области техники. Терапевтически эффективное количество терапевтического агента обычно в значительной степени зависит от конкретных характеристик пациента, таких как возраст, вес, пол и болезненное состояние, время, частота и способ введения, комбинация (комбинации) лекарственных средств и природа заболевания, которое лечат.Обычные дозировки антител варьируются от 0,1 до 100000 микрограммов, вплоть до общей дозы около 10 г, в зависимости от пути введения.In the context of the present invention, the term "therapeutically effective amount" is defined as an amount of an antibody or fragment thereof in accordance with the present invention that is sufficient to prevent or alleviate the symptoms of any of the disorders and diseases mentioned herein - either in a single dose or in accordance with with a multiple-dose regimen, alone or in combination with other agents. In particular embodiments, said “therapeutically effective amount” is toxicologically tolerable. Determination of the effective dose is within the competence of those skilled in the art. The therapeutically effective amount of a therapeutic agent usually depends largely on the specific characteristics of the patient, such as age, weight, sex and disease state, timing, frequency and route of administration, drug combination(s), and the nature of the disease being treated. Typical antibody dosages vary. from 0.1 to 100,000 micrograms, up to a total dose of about 10 g, depending on the route of administration.
Общее руководство для его определения может быть найдено, например, в публикациях Международной конференции по вопросам гармонизации (International Conference on Harmonization) и в REMINGTON'S PHARMACEUTICAL SCIENCES, chapters 27 and 28, pp.484-528 (18th ed., Alfonso R. Gennaro, Ed., Easton, Pa.: Mack Pub. Co., 1990). Более тщательное определение терапевтически эффективного количества будет зависеть от таких факторов как токсичность и эффективность лекарства, которая может быть определена с использованием способов, известных специалистам в данной области техники и, которые можно найти в вышеупомянутых ссылках.General guidance for its determination can be found, for example, in the publications of the International Conference on Harmonization and in REMINGTON'S PHARMACEUTICAL SCIENCES, chapters 27 and 28, pp.484-528 (18th ed., Alfonso R. Gennaro, Ed., Easton, Pa.: Mack Pub. Co., 1990). More careful determination of a therapeutically effective amount will depend on factors such as toxicity and drug efficacy, which can be determined using methods known to those skilled in the art and which can be found in the above-mentioned references.
Вкратце, терапевтическая эффективность и токсичность терапевтических агентов могут быть определены в анализах клеточных культур или на животных моделях, например, как ED50 (доза, терапевтически эффективная для 50% населения) и LD50 (доза, летальная для 50% популяции), соответственно. Соотношение доз ED50 и LD50 является терапевтическим индексом.Briefly, the therapeutic efficacy and toxicity of therapeutic agents can be determined in cell culture assays or animal models, for example, as ED50 (dose therapeutically effective in 50% of the population) and LD50 (dose lethal in 50% of the population), respectively. The ratio of ED50 and LD50 doses is the therapeutic index.
Антитело или его фрагмент согласно настоящему изобретению подходит для лечения и/или профилактики сердечно-сосудистых, почечных, легочных, скелетных, глазных, тромбоэмболических и фиброзных заболеваний и нарушений, карликовости, ахондроплазии, а также других нарушений, связанных с cGMP и/или натрийуретическим пептидом. Таким образом, согласно частному варианту осуществления, антитело или его фрагмент предназначен для использования для лечения и/или профилактики любого из этих расстройств и заболеваний или любой их комбинации.The antibody or fragment thereof of the present invention is suitable for the treatment and/or prevention of cardiovascular, renal, pulmonary, skeletal, ophthalmic, thromboembolic and fibrotic diseases and disorders, dwarfism, achondroplasia, and other disorders associated with cGMP and/or natriuretic peptide . Thus, according to a particular embodiment, the antibody or fragment thereof is intended for use in the treatment and/or prevention of any of these disorders and diseases or any combination thereof.
Антитело или его фрагмент согласно настоящему изобретению поэтому могут применяться в качестве лекарственных средств для лечения и/или профилактики сердечно-сосудистых заболеваний, например, артериальной и легочной гипертензии, резистентной и рефрактерной гипертензии, острой и хронической сердечной недостаточности, ишемической болезни сердца, синдрома облитерирующего бронхиолита (BOS), опухолевых и онкологических заболеваний, реакции трансплантат против хозяина, серповидно-клеточной анемии, стабильной и нестабильной стенокардии, периферических и сердечных сосудистых заболеваний, аритмии, нарушений ритма предсердий и желудочков, а также нарушений проводимости таких как, например, атриовентрикулярная блокада степени I-III (AB блок I-III), суправентрикулярной тахиаритмии, мерцательной аритмии, трепетания предсердий, фибрилляции желудочков, трепетания желудочков, вентрикулярной тахиаритмии, пируэтной тахикардии, экстрасистолы предсердий и желудочков, преждевременной деполяризации, исходящей из АВ соединения, синдрома слабости синусового узла, обморока, атриовентрикулярной узловой реципрокной тахикардии, синдрома Вольфа-Паркинсона-Уайта, острого коронарного синдрома (ACS), аутоиммунного заболевания сердца (перикардит, эндокардит, вальвулит, аортит, кардиомиопатии), шока, такого как шок кардиологического типа, септический шок и анафилактический шок, аневризмы, кардиомиопатии боксеров (преждевременное желудочковое сокращение (PVC)), кроме того, для лечения и/или профилактики тромбоэмболических заболеваний и ишемий, таких как миокардиальная ишемия, инфаркт миокарда, инсульт, гипертрофия сердца, транзисторные и ишемические атаки, преэклампсия, воспалительные сердечно-сосудистые заболевания, спазмы коронарных артерий и периферических артерий, образования отеков, таких как, например, отек легких, отек мозга, почечный отек или отек из-за сердечной недостаточности, нарушения периферического кровообращения, реперфузионные повреждения, артериальные и венозные тромбозы, микроальбуминурия, слабость сердечной мышцы, эндотелиальная дисфункция, микро- и макрососудистые повреждения (васкулит), а также для предотвращения рестенозов, например, после тромболитической терапии, чрескожно-транслюминальной ангиопластики (PTA), чрескожно-транслюминальной коронарной ангиопластики (PTCA), трансплантаций сердца и операций по шунтированию, а также микро- и макрососудистых повреждений (васкулит), повышенных уровней фибриногена и липопротеинов низкой плотности (LDL) и повышенных концентраций ингибитора активатора плазминогена 1 (PAI-1), а также для лечения и/или профилактики эректильной дисфункции и женской сексуальной дисфункции.The antibody or fragment thereof according to the present invention can therefore be used as drugs for the treatment and/or prevention of cardiovascular diseases, for example, arterial and pulmonary hypertension, resistant and refractory hypertension, acute and chronic heart failure, coronary heart disease, bronchiolitis obliterans syndrome (BOS), tumors and oncological diseases, graft-versus-host disease, sickle cell anemia, stable and unstable angina, peripheral and cardiac vascular diseases, arrhythmias, atrial and ventricular arrhythmias, as well as conduction disorders such as atrioventricular block. I-III (AB block I-III), supraventricular tachyarrhythmia, atrial fibrillation, atrial flutter, ventricular fibrillation, ventricular flutter, ventricular tachyarrhythmia, torsades de pointes, atrial and ventricular extrasystoles, premature depolarization emanating from the AV junction, sick sinus syndrome, syncope, atrioventricular nodal reentrant tachycardia, Wolff-Parkinson-White syndrome, acute coronary syndrome (ACS), autoimmune heart disease (pericarditis, endocarditis, valvulitis, aortitis, cardiomyopathies), shock such as cardiac-type shock, septic shock and anaphylactic shock, aneurysms, boxer's cardiomyopathy (premature ventricular contraction (PVC)), in addition, for the treatment and/or prevention of thromboembolic diseases and ischemia, such as myocardial ischemia, myocardial infarction, stroke, cardiac hypertrophy, transistor and ischemic attacks, preeclampsia, inflammatory cardiovascular vascular diseases, spasms of the coronary arteries and peripheral arteries, edema formations such as, for example, pulmonary edema, cerebral edema, renal edema or edema due to heart failure, peripheral circulatory disorders, reperfusion injuries, arterial and venous thrombosis, microalbuminuria, cardiac weakness muscle, endothelial dysfunction, micro- and macrovascular damage (vasculitis), and also to prevent restenosis, for example, after thrombolytic therapy, percutaneous transluminal angioplasty (PTA), percutaneous transluminal coronary angioplasty (PTCA), heart transplantation and bypass surgery, as well as micro- and macrovascular damage (vasculitis), increased fibrinogen and low-density lipoprotein (LDL) levels and increased concentrations of plasminogen activator inhibitor 1 (PAI-1), and for the treatment and/or prevention of erectile dysfunction and female sexual dysfunction.
В контексте настоящего изобретения термин «сердечная недостаточность» включает в себя как острые, так и хронические формы проявления сердечной недостаточности, также как и специфические или родственные нозологические формы этого, такие как острая декомпенсированная сердечная недостаточность, недостаточность правых отделов сердца, недостаточность левых отделов сердца, глобальная сердечная недостаточность, ишемическая кардиомиопатия, дилатационная кардиомиопатия, гипертрофическая кардиомиопатия, идиопатическая кардиомиопатия, врожденный порок сердца, порок клапанов сердца, сердечная недостаточность при пороках клапанов сердца, стеноз митрального клапана, недостаточность митрального клапана, стеноз аортального клапана, недостаточность клапана аорты, трикуспидальный стеноз, недостаточность трехстворчатого клапана, стеноз клапана легочной артерии, недостаточность клапана легочной артерии, комбинированные пороки клапанов сердца, воспаление сердечной мышцы (миокардит), хронический миокардит, острый миокардит, вирусный миокардит, сердечная недостаточность, вызванная диабетом, токсическая алкогольная кардиомиопатия, кардиальные болезни накопления, а также диастолическая и систолическая сердечная недостаточность, сердечная недостаточность со сниженной фракцией выброса (HFrEF), сердечная недостаточность с сохраненной фракцией выброса (HFpEF) и острые фазы обострения существующей хронической сердечной недостаточности (обострение сердечной недостаточности).In the context of the present invention, the term “heart failure” includes both acute and chronic forms of heart failure, as well as specific or related clinical entities thereof, such as acute decompensated heart failure, right heart failure, left heart failure, global heart failure, ischemic cardiomyopathy, dilated cardiomyopathy, hypertrophic cardiomyopathy, idiopathic cardiomyopathy, congenital heart disease, valvular heart disease, heart failure with valvular heart disease, mitral valve stenosis, mitral valve insufficiency, aortic valve stenosis, aortic valve insufficiency, tricuspid stenosis, tricuspid valve insufficiency, pulmonary valve stenosis, pulmonary valve insufficiency, combined heart valve defects, inflammation of the heart muscle (myocarditis), chronic myocarditis, acute myocarditis, viral myocarditis, heart failure caused by diabetes, toxic alcohol cardiomyopathy, cardiac storage diseases, and also diastolic and systolic heart failure, heart failure with reduced ejection fraction (HFrEF), heart failure with preserved ejection fraction (HFpEF) and acute phases of exacerbation of existing chronic heart failure (exacerbation of heart failure).
Кроме того, антитело или его фрагмент согласно настоящему изобретению также можно использовать для лечения и/или профилактики артериосклероза, заболевания периферических артерий (PAD), нарушения липидного обмена, гиполипопротеинемии, дислипидемии, гипертриглицеридемии, гиперлипидемии, гиперхолестеринемии, абеталипопротеинемии, ситостеролемии, ксантоматоза, болезни Танжера, ожирения, тучности и комбинированной гиперлипидемии и метаболического синдрома.In addition, the antibody or fragment thereof according to the present invention can also be used for the treatment and/or prevention of arteriosclerosis, peripheral arterial disease (PAD), lipid disorders, hypolipoproteinemia, dyslipidemia, hypertriglyceridemia, hyperlipidemia, hypercholesterolemia, abetalipoproteinemia, sitosterolemia, xanthomatosis, Tangier disease , obesity, obesity and combined hyperlipidemia and metabolic syndrome.
Антитело или его фрагмент согласно настоящему изобретению дополнительно могут применяться для лечения и/или профилактики первичного и вторичного феномена Рейно, нарушений микроциркуляции, перемежающейся хромоты, периферических и автономных нейропатий, диабетических микроангиопатий, диабетической ретинопатии, диабетических язв на конечностях, гангрены, CREST-синдрома, эритематоза, оникомикоза, а также ревматических заболеваний, и для заживления ран.The antibody or fragment thereof according to the present invention can additionally be used for the treatment and/or prevention of primary and secondary Raynaud's phenomenon, microcirculatory disorders, intermittent claudication, peripheral and autonomic neuropathies, diabetic microangiopathies, diabetic retinopathy, diabetic limb ulcers, gangrene, CREST syndrome, erythematosis, onycomycosis, as well as rheumatic diseases, and for wound healing.
Антитело или его фрагмент согласно настоящему изобретению также подходят для лечения и/или профилактики заболеваний мочеполовой системы, таких как, например, синдрома аденомы предстательной железы (BPS), гиперплазии предстательной железы (BPH), доброкачественной гиперплазии предстательной железы (BPE), нарушения опорожнения мочевого пузыря (BOO), симптомы со стороны нижних мочевыводящих путей (LUTS, включая кошачий урологический синдром (FUS)), нарушения мочеполовой системы, включая нейрогенный гиперактивный мочевой пузырь (OAB) и (IC), недержание мочи (UI), например, смешанное недержание мочи при напряжении, неотложное недержание мочи, стрессовое недержание мочи или недержание мочи от переполнения (MUI, UUI, SUI, OUI), боль в тазовой области, доброкачественные и злокачественные заболевания органов мужской и женской мочеполовой системы.The antibody or fragment thereof according to the present invention is also suitable for the treatment and/or prevention of diseases of the genitourinary system, such as, for example, prostate syndrome (BPS), prostatic hyperplasia (BPH), benign prostatic hyperplasia (BPE), voiding disorders bladder (BOO), lower urinary tract symptoms (LUTS, including feline urological syndrome (FUS)), genitourinary disorders, including neurogenic overactive bladder (OAB) and (IC), urinary incontinence (UI), e.g. mixed incontinence stress urine, urge urinary incontinence, stress urinary incontinence or overflow incontinence (MUI, UUI, SUI, OUI), pelvic pain, benign and malignant diseases of the male and female genitourinary system.
Антитело или его фрагмент согласно настоящему изобретению также подходит для лечения и/или профилактики заболеваний почек, в частности, острой и хронической почечной недостаточности, а также острого и хронического нарушения почек. В контексте настоящего изобретения термин «почечная недостаточность» охватывает как острые, так и хронические проявления почечной недостаточности, а также лежащие в основе или связанные с ними почечные нарушения, такие как почечная гипоперфузия, интрадиализная гипотензия, обструктивная уропатия, гломерулопатии, гломерулонефрит, острый гломерулонефрит, гломерулосклероз, тубулоинтерстициальные заболевания, нефропатические нарушения, такие как первичное и врожденное заболевание почек, нефрит, иммунологические заболевания почек, такие как отторжение трансплантата почки и иммунокомплексные заболевания почек, нефропатия, вызванная токсичными веществами, нефропатия, вызванная контрастными веществами, диабетическая и недиабетическая нефропатия, пиелонефрит, кисты почек, нефросклероз, гипертонический нефросклероз и нефротический синдром, которые можно охарактеризовать диагностически, например, аномально сниженным креатинином и/или экскрецией воды, аномально повышенными концентрациями в крови мочевины, азота, калия и/или креатинина, измененной активностью почечных ферментов, например глутамилсинтетазы, измененной осмолярностью или объемом мочи, повышенной микроальбуминурией, макроальбуминурией, поражением клубочков и артериол, расширением канальцев, гиперфосфатемией и/или необходимостью диализа. Настоящее изобретение также охватывает применение антитела или его фрагмента согласно настоящему изобретению для лечения и/или профилактики последствий почечной недостаточности, например, отека легких, сердечной недостаточности, уремии, анемии, электролитных нарушений (например, гиперкалиемии, гипонатриемии) и нарушений в костном и углеводном обмене.The antibody or fragment thereof according to the present invention is also suitable for the treatment and/or prevention of kidney diseases, in particular acute and chronic renal failure, as well as acute and chronic kidney disorder. In the context of the present invention, the term "renal failure" covers both acute and chronic manifestations of renal failure, as well as underlying or associated renal disorders, such as renal hypoperfusion, intradialytic hypotension, obstructive uropathy, glomerulopathies, glomerulonephritis, acute glomerulonephritis, glomerulosclerosis, tubulointerstitial diseases, nephropathic disorders such as primary and congenital kidney disease, nephritis, immunological kidney diseases such as kidney transplant rejection and immune complex kidney diseases, toxic substance-induced nephropathy, contrast media-induced nephropathy, diabetic and non-diabetic nephropathy, pyelonephritis , renal cysts, nephrosclerosis, hypertensive nephrosclerosis and nephrotic syndrome, which can be characterized diagnostically by, for example, abnormally reduced creatinine and/or water excretion, abnormally increased blood concentrations of urea, nitrogen, potassium and/or creatinine, altered activity of renal enzymes, such as glutamyl synthetase , altered osmolarity or urine volume, increased microalbuminuria, macroalbuminuria, glomerular and arteriolar damage, tubular dilation, hyperphosphatemia and/or the need for dialysis. The present invention also includes the use of an antibody or fragment thereof according to the present invention for the treatment and/or prevention of the consequences of renal failure, for example, pulmonary edema, heart failure, uremia, anemia, electrolyte disorders (eg, hyperkalemia, hyponatremia) and disorders of bone and carbohydrate metabolism .
Кроме того, антитело или его фрагмент согласно настоящему изобретению также подходят для лечения и/или профилактики астматических расстройств, легочной артериальной гипертензии (PAH) и других форм легочной гипертензии (PH), включая болезнь левых отделов сердца, ВИЧ, серповидно-клеточную анемию, тромбоэмболии (CTEPH), саркоидоз, COPD или легочную гипертензию, связанную с фиброзом легких, хроническую обструктивную болезнь легких (COPD), острый респираторный дистресс-синдром (ARDS), острое повреждение легких (ALI), дефицит альфа-1-антитрипсина (AATD), фиброз легких, эмфизему легких (например, эмфизема легких, вызванную сигаретным дымом). Синдром облитерирующего бронхиолита (BOS) и муковисцидоз (CF).In addition, the antibody or fragment thereof of the present invention is also suitable for the treatment and/or prevention of asthmatic disorders, pulmonary arterial hypertension (PAH) and other forms of pulmonary hypertension (PH), including left heart disease, HIV, sickle cell disease, thromboembolism (CTEPH), sarcoidosis, COPD or pulmonary hypertension associated with pulmonary fibrosis, chronic obstructive pulmonary disease (COPD), acute respiratory distress syndrome (ARDS), acute lung injury (ALI), alpha-1 antitrypsin deficiency (AATD), pulmonary fibrosis, pulmonary emphysema (eg, emphysema caused by cigarette smoke). Bronchiolitis obliterans syndrome (BOS) and cystic fibrosis (CF).
Антитело или его фрагмент согласно настоящему изобретению также подходит для борьбы с расстройствами центральной нервной системы, характеризующимися нарушениями системы NO/cGMP. Оно подходит, в частности, для улучшения восприятия, концентрации, обучения или памяти после когнитивных нарушений, подобных тем, которые возникают, в частности, в связи с ситуациями/заболеваниями/синдромами, такими как легкие когнитивные нарушения, возрастные нарушения обучения и памяти, связанные с возрастом потери памяти, сосудистая деменция, черепно-мозговая травма, инсульт, деменция, возникающая после инсульта (постинсультная деменция), посттравматическая черепно-мозговая травма, общие нарушения концентрации, нарушения концентрации внимания у детей с проблемами обучения и памяти, болезнь Альцгеймера, деменция с тельцами Леви, деменция с дегенерацией лобные доли, включая синдром Пика, болезнь Паркинсона, прогрессирующий надъядерный паралич, деменцию с кортикобазальной дегенерацией, амиолатеральный склероз (ALS), болезнь Хантингтона, демиелинизацию, рассеянный склероз, таламическую дегенерацию, деменцию Крейцфельда-Якоба, деменцию при ВИЧ, шизофрению с деменцией психоз или корсаковский синдром. Оно также подходит для лечения и/или профилактики заболеваний центральной нервной системы, таких как состояния тревоги, напряжения и депрессии, сексуальных дисфункций и нарушений сна, связанных с ЦНС, а также для контроля патологических нарушений приема пищи, стимуляторов и веществ, вызывающих привыкание.The antibody or fragment thereof of the present invention is also suitable for combating central nervous system disorders characterized by disturbances of the NO/cGMP system. It is suitable in particular for improving perception, concentration, learning or memory after cognitive impairments such as those arising in particular in connection with situations/diseases/syndromes such as mild cognitive impairment, age-related learning and memory impairments associated with age, memory loss, vascular dementia, traumatic brain injury, stroke, dementia occurring after a stroke (post-stroke dementia), post-traumatic brain injury, general concentration disorders, concentration disorders in children with learning and memory problems, Alzheimer's disease, dementia with Lewy bodies, dementia with frontal lobe degeneration including Pick's syndrome, Parkinson's disease, progressive supranuclear palsy, dementia with corticobasal degeneration, amyolateral sclerosis (ALS), Huntington's disease, demyelination, multiple sclerosis, thalamic degeneration, Creutzfeldt-Jakob dementia, dementia with HIV, schizophrenia with dementia, psychosis or Korsakoff's syndrome. It is also suitable for the treatment and/or prevention of diseases of the central nervous system, such as anxiety, tension and depression, sexual dysfunctions and sleep disorders associated with the central nervous system, as well as for the control of pathological eating disorders, stimulants and addictive substances.
Антитело или его фрагмент согласно настоящему изобретению, кроме того, также подходит для контроля церебрального кровотока и, таким образом, представляет собой эффективные агенты для контроля мигрени. Оно также подходит для профилактики и контроля последствий церебрального инфаркта (Apoplexia cerebri), таких как инсульт, церебральная ишемия и черепно-мозговая травма. Его также можно использовать для контроля состояния боли и тиннитуса.The antibody or fragment thereof of the present invention is furthermore also suitable for controlling cerebral blood flow and thus represents an effective agent for the control of migraine. It is also suitable for the prevention and control of the consequences of cerebral infarction (Apoplexia cerebri), such as stroke, cerebral ischemia and traumatic brain injury. It can also be used to control pain and tinnitus conditions.
Кроме того, антитело или его фрагмент согласно настоящему изобретению обладает противовоспалительным действием и, следовательно, может использоваться в качестве противовоспалительных средств для лечения и/или профилактики сепсиса (SIRS), полиорганной недостаточности (MODS, MOF), воспалительных заболеваний почек, хронические кишечные воспаления (IBD, болезнь Крона, UC), панкреатита, перитонита, ревматоидных заболеваний, воспалительных заболеваний кожи и воспалительных заболеваний глаз.In addition, the antibody or fragment thereof according to the present invention has an anti-inflammatory effect and, therefore, can be used as anti-inflammatory agents for the treatment and/or prevention of sepsis (SIRS), multiple organ failure (MODS, MOF), inflammatory kidney diseases, chronic intestinal inflammation ( IBD, Crohn's disease, UC), pancreatitis, peritonitis, rheumatoid diseases, inflammatory skin diseases and inflammatory eye diseases.
Кроме того, антитело или его фрагмент согласно настоящему изобретению может также применяться для лечения и/или профилактики аутоиммунных заболеваний.In addition, the antibody or fragment thereof according to the present invention can also be used for the treatment and/or prevention of autoimmune diseases.
Антитело или его фрагмент также подходит для лечения и/или профилактики фиброзных заболеваний внутренних органов, например, легких, сердца, почек, репродуктивной системы, костного мозга и, в частности, печени, а также дерматологических фиброзов и фиброзных поражений глаз. В контексте настоящего изобретения термин фиброзные заболевания включает, в частности, следующие термины: фиброз печени, цирроз печени, фиброз легких, эндомиокардиальный фиброз, нефропатия, гломерулонефрит, интерстициальный фиброз почек, фиброзное повреждение в результате диабета, миома матки, эндометриоз, фиброз костного мозга и подобные фиброзные расстройства, склеродермия, морфея, келоиды, гипертрофические рубцы (также после хирургических процедур), невусы, диабетическая ретинопатия, пролиферативная витроретинопатия и нарушения соединительной ткани (например, саркоидоз).The antibody or fragment thereof is also suitable for the treatment and/or prevention of fibrotic diseases of internal organs, for example, lungs, heart, kidneys, reproductive system, bone marrow and in particular the liver, as well as dermatological fibroses and fibrotic lesions of the eyes. As used herein, the term fibrotic diseases includes, but is not limited to, the following terms: liver fibrosis, liver cirrhosis, pulmonary fibrosis, endomyocardial fibrosis, nephropathy, glomerulonephritis, renal interstitial fibrosis, fibrotic damage due to diabetes, uterine fibroids, endometriosis, bone marrow fibrosis, and similar fibrotic disorders, scleroderma, morphea, keloids, hypertrophic scars (also after surgical procedures), nevi, diabetic retinopathy, proliferative vitroretinopathy and connective tissue disorders (eg sarcoidosis).
Антитело или его фрагмент согласно настоящему изобретению также подходит для борьбы с послеоперационными рубцами, например, в результате операций по поводу глаукомы.The antibody or fragment thereof according to the present invention is also suitable for combating post-surgical scars, for example, resulting from glaucoma surgery.
Антитело или его фрагмент согласно настоящему изобретению можно также использовать в косметических целях для стареющей и ороговевшей кожи.The antibody or fragment thereof according to the present invention can also be used for cosmetic purposes for aging and keratinized skin.
Более того, антитело или его фрагмент согласно настоящему изобретению подходит для лечения и/или профилактики гепатита, новообразований, остеопороза, глаукомы и гастропареза.Moreover, the antibody or fragment thereof according to the present invention is suitable for the treatment and/or prevention of hepatitis, neoplasms, osteoporosis, glaucoma and gastroparesis.
Антитело или его фрагмент согласно настоящему изобретению, кроме того, подходит для лечения и/или профилактики глазных заболеваний, таких как офтальмологические заболевания, реагирующие на натрийуретический пептид, заболевания сетчатки, глаукома, включая первичную открытоугольную глаукому (POAG), закрытоугольную глаукому и врожденную/развивающуюся глаукому, ретинопатии, травмы глаза, невропатии зрительного нерва, глазную гипертензию, повышенное внутриглазное давление, диабетическую ретинопатию, дегенерацию желтого пятна (AMD), возрастные заболевания глаз, отек желтого пятна, склерит, увеит, сухость глаз, ссадина эпителия роговицы, язва роговицы.The antibody or fragment thereof of the present invention is further useful for the treatment and/or prevention of ocular diseases such as natriuretic peptide-responsive ophthalmic diseases, retinal diseases, glaucoma, including primary open angle glaucoma (POAG), angle closure glaucoma and congenital/developmental glaucoma. glaucoma, retinopathy, eye trauma, optic neuropathy, ocular hypertension, increased intraocular pressure, diabetic retinopathy, macular degeneration (AMD), age-related eye diseases, macular edema, scleritis, uveitis, dry eye, corneal abrasion, corneal ulcer.
Более того, антитело или его фрагмент согласно настоящему изобретению подходит для лечения заболеваний костей и хрящей, таких как заболевания костей и хрящей, чувствительные к натрийуретическим пептидам, артрит, дегенеративные заболевания хрящевой ткани, остеоартрит, дегенерация хряща, переломы костей, дисплазия скелета, ахондроплазия, остеопороз, несовершенный остеогенез, костная болезнь Педжета (PDB), метаболическое заболевание костей, возрастные заболевания костей, остеомиелит, остеонекроз, рахит, остеомаляция, травмы и заболевания пластин роста, дефекты, связанные с заменой суставов и костей, синдром Марфана, спортивные травмы, мышечные дистрофии, мышечная дистрофия Дюшенна.Moreover, the antibody or fragment thereof according to the present invention is suitable for the treatment of bone and cartilage diseases such as natriuretic peptide-sensitive bone and cartilage diseases, arthritis, degenerative cartilage diseases, osteoarthritis, cartilage degeneration, bone fractures, skeletal dysplasia, achondroplasia, osteoporosis, osteogenesis imperfecta, Paget's disease of bone (PDB), metabolic bone disease, age-related bone diseases, osteomyelitis, osteonecrosis, rickets, osteomalacia, growth plate injuries and diseases, defects associated with joint and bone replacement, Marfan syndrome, sports injuries, muscle dystrophy, Duchenne muscular dystrophy.
Таким образом, согласно другому аспекту настоящее изобретение относится к применению антитела или его фрагмент согласно настоящему изобретению для лечения и/или профилактики нарушений, в частности указанных выше нарушений.Thus, according to another aspect, the present invention relates to the use of an antibody or fragment thereof according to the present invention for the treatment and/or prevention of disorders, in particular the above disorders.
Согласно частным вариантам осуществления, антитело или его фрагмент согласно настоящему изобретению предназначено для применения в способе лечения и/или профилактики сердечной недостаточности, стенокардии, гипертонии, легочной гипертензии, ишемии, сосудистых заболеваний, почечной недостаточности, тромбоэмболических расстройств, фиброзных расстройств, заболеваний скелета и костей, глазных заболеваний и артериосклероза.In particular embodiments, an antibody or fragment thereof of the present invention is for use in a method of treating and/or preventing heart failure, angina pectoris, hypertension, pulmonary hypertension, ischemia, vascular disease, renal failure, thromboembolic disorders, fibrotic disorders, skeletal and bone diseases , eye diseases and arteriosclerosis.
Согласно другому аспекту настоящее изобретение относится к применению антитела или его фрагмента согласно настоящему изобретению для получения лекарственного средства для лечения и/или профилактики нарушений, особенно вышеупомянутых нарушений.According to another aspect, the present invention relates to the use of an antibody or fragment thereof according to the present invention for the preparation of a medicament for the treatment and/or prevention of disorders, especially the above-mentioned disorders.
Согласно частным вариантам осуществления настоящее изобретение относится к применению антитела или его фрагмента согласно настоящему изобретению для получения лекарственного средства для лечения и/или профилактики сердечной недостаточности, стенокардии, гипертензии, легочной гипертензии, ишемии, сосудистых расстройств, почечной недостаточности, тромбоэмболических расстройств, фиброзных нарушений, заболеваний с деменцией, артериосклероза, скелетных и костных заболеваний, глазных расстройств, карликовости, ахондроплазии и эректильной дисфункции.In particular embodiments, the present invention relates to the use of an antibody or fragment thereof according to the present invention for the preparation of a medicament for the treatment and/or prevention of heart failure, angina pectoris, hypertension, pulmonary hypertension, ischemia, vascular disorders, renal failure, thromboembolic disorders, fibrotic disorders, diseases with dementia, arteriosclerosis, skeletal and bone diseases, eye disorders, dwarfism, achondroplasia and erectile dysfunction.
Согласно другому аспекту настоящее изобретение относится к способу лечения и/или профилактики нарушений, в частности нарушений, упомянутых выше, с использованием эффективного количества по меньшей мере одного антитела или его фрагмента согласно настоящему изобретению.According to another aspect, the present invention relates to a method of treating and/or preventing disorders, in particular the disorders mentioned above, using an effective amount of at least one antibody or fragment thereof according to the present invention.
Согласно частным вариантам осуществления настоящее изобретение относится к способу лечения и/или профилактики сердечной недостаточности, стенокардии, гипертензии, легочной гипертензии, ишемии, сосудистых нарушений, почечной недостаточности, тромбоэмболических нарушений, фиброзных нарушений, опухолевых и онкологических заболеваний, заболеваний скелета и костей, глазных нарушений, карликовости, ахондроплазии и артериосклероза с использованием эффективного количества по меньшей мере одного антитела или его фрагмента согласно настоящему изобретению.According to particular embodiments, the present invention relates to a method for the treatment and/or prevention of heart failure, angina pectoris, hypertension, pulmonary hypertension, ischemia, vascular disorders, renal failure, thromboembolic disorders, fibrotic disorders, tumor and oncological diseases, skeletal and bone diseases, eye disorders , dwarfism, achondroplasia and arteriosclerosis using an effective amount of at least one antibody or fragment thereof according to the present invention.
Антитело согласно настоящему изобретению или его фрагмент согласно настоящему изобретению можно вводить как единственный фармацевтический агент или в комбинации с одним или несколькими дополнительными терапевтическими агентами, и в некоторых случаях само антитело может быть модифицировано. Например, антитело или его фрагмент могут быть конъюгированы с химическим соединением, например, для дальнейшего увеличения эффективности, стабильности и/или времени полужизни. В частности, антитело или его фрагмент согласно настоящему изобретению может быть ПЭГилирован и/или HESилирован.An antibody of the present invention or a fragment thereof of the present invention may be administered as a single pharmaceutical agent or in combination with one or more additional therapeutic agents, and in some cases the antibody itself may be modified. For example, an antibody or fragment thereof may be conjugated to a chemical compound, for example, to further increase potency, stability and/or half-life. In particular, the antibody or fragment thereof according to the present invention may be PEGylated and/or HESylated.
Таким образом, согласно частным вариантам осуществления, антитело или его фрагмент согласно настоящему изобретению используют в комбинации с по меньшей мере одним дополнительным терапевтическим агентом в способе лечения, в частности для указанных выше целей.Thus, according to particular embodiments, an antibody or fragment thereof according to the present invention is used in combination with at least one additional therapeutic agent in a method of treatment, in particular for the above purposes.
Настоящее изобретение также обеспечивает фармацевтические комбинации, содержащие по меньшей мере одно антитело или его фрагмент согласно настоящему изобретению и по меньшей мере одно дополнительное терапевтическое средство.The present invention also provides pharmaceutical combinations comprising at least one antibody or fragment thereof of the present invention and at least one additional therapeutic agent.
В контексте настоящего изобретения термин «фармацевтическая комбинация» используется, как известно специалистам в данной области техники, причем такая комбинация может быть фиксированной комбинацией, нефиксированной комбинацией или набором частей.In the context of the present invention, the term "pharmaceutical combination" is used as known to those skilled in the art, and such combination may be a fixed combination, a non-fixed combination or a set of parts.
В контексте настоящего изобретения термин «фиксированная комбинация» используется, как известно специалистам в данной области, и определяется как комбинация, в которой, например, первый активный ингредиент, такой как одно или несколько антител или их фрагментов в соответствии с настоящим изобретением, и дополнительный активный ингредиент присутствует вместе в одной стандартной дозе или в одном единственном объекте, например, в составе одной дозы. Одним из примеров «фиксированной комбинации» является фармацевтическая композиция, в которой первый активный ингредиент и дополнительный активный ингредиент присутствуют в смеси для одновременного введения, например, в составе. Другим примером «фиксированной комбинации» является фармацевтическая комбинация, в которой первый активный ингредиент и дополнительный активный ингредиент присутствуют в одной единице, но не в смеси. Таким образом, настоящее изобретение обеспечивает такие фармацевтические композиции, содержащие по меньшей мере одно антитело или его фрагмент и по меньшей мере одно дополнительное терапевтическое средство, в частности, для использования при лечении и/или профилактики вышеупомянутых нарушений.In the context of the present invention, the term "fixed combination" is used as known to those skilled in the art and is defined as a combination in which, for example, a first active ingredient, such as one or more antibodies or fragments thereof according to the present invention, and an additional active the ingredient is present together in one unit dose or in one single entity, e.g., in a single dose. One example of a "fixed combination" is a pharmaceutical composition in which the first active ingredient and the additional active ingredient are present in a mixture for simultaneous administration, for example, in a composition. Another example of a "fixed combination" is a pharmaceutical combination in which the first active ingredient and the additional active ingredient are present in one unit, but not in a mixture. Thus, the present invention provides such pharmaceutical compositions containing at least one antibody or fragment thereof and at least one additional therapeutic agent, in particular for use in the treatment and/or prevention of the above-mentioned disorders.
В контексте настоящего изобретения термины «нефиксированная комбинация» и «набор частей» используются, как известно специалистам в данной области, и определяются как комбинация, в которой первый активный ингредиент и дополнительный активный ингредиент присутствуют в более чем одной единице, например, в отдельных лекарственных формах. Одним из примеров нефиксированной комбинации или набора частей является комбинация, в которой первый активный ингредиент и дополнительный активный ингредиент присутствуют отдельно.In the context of the present invention, the terms "unfixed combination" and "set of parts" are used as known to those skilled in the art and are defined as a combination in which the first active ingredient and the additional active ingredient are present in more than one unit, for example, in separate dosage forms . One example of a non-fixed combination or set of parts is a combination in which the first active ingredient and the additional active ingredient are present separately.
Компоненты нефиксированной комбинации или набора частей можно вводить отдельно, последовательно, одновременно, в одно и то же время или в хронологическом порядке.The components of a non-fixed combination or set of parts can be introduced separately, sequentially, simultaneously, at the same time, or in chronological order.
Антитело или его фрагмент согласно настоящему изобретению можно вводить одновременно с указанным дополнительным терапевтически активным агентом, до или после него. В контексте настоящего изобретения термин «одновременно с» означает введение антитела или его фрагмента согласно настоящему изобретению и, по меньшей мере, одного дополнительного терапевтически активного агента в тот же день, более конкретно в течение 12 часов, более конкретно в течение 2 часов.The antibody or fragment thereof of the present invention may be administered simultaneously with, before, or after said additional therapeutically active agent. In the context of the present invention, the term "simultaneously with" means the administration of an antibody or fragment thereof according to the present invention and at least one additional therapeutically active agent on the same day, more particularly within 12 hours, more particularly within 2 hours.
Согласно частным вариантам осуществления введение антитела или его фрагмента согласно настоящему изобретению и одного другого терапевтически активного агента происходит в течение восьми недель подряд, более конкретно в течение от одной до шести недель подряд. Антитело или его фрагмент согласно настоящему изобретению и по меньшей мере один другой терапевтически активный агент может вводиться одним и тем же путем или разными путями.In particular embodiments, administration of an antibody or fragment thereof of the present invention and one other therapeutically active agent occurs over eight consecutive weeks, more particularly over one to six consecutive weeks. An antibody or fragment thereof of the present invention and at least one other therapeutically active agent may be administered by the same route or by different routes.
Антитело или его фрагмент согласно настоящему изобретению можно, например, комбинировать с известными агентами той же группы лечения по показаниям, такими как агенты, используемые для лечения и/или профилактики заболеваний и/или состояний, связанных с гипертонией, сердечной недостаточностью, легочной гипертензией, COPD, астмой, муковисцидозом, ахондроплазией, гиперфосфатемией, хронической болезнью почек (CKD), кальцинозом мягких тканей, кальцинозом, связанным с хроническим заболеванием почек, кальцинозом, связанным с нехроническим заболеванием почек, медиальным кальцинозом, включая медиальный склероз Менкеберга, атеросклерозом, кальцинозом интимы, гипертрофией сердца, связанной с CKD, почечной дистрофией, связанной с CKD, остеопорозом, постменопаузальным остеопорозом, сахарным диабетом II, хроническим заболеванием почек, старением, гипофосфатурией, гиперпаратиреозом, нарушениями, связанными с витамином D, дефицитом витамина К, коагулянтами-антагонистами витамина К, болезнью Кавасаки, ACDC (артериальной кальцинозом в результате дефицита CD73), GACI (обобщенным артериальным кальцинозом младенцев), IBGC (идиопатическим кальцинозом подкорковых узлов), PXE (эластической псевдоксантомой), ревматоидным артритом, синдромом Синглтона-Мертена, P-талассемией, кальцификацией, гетеротрофной оссификацией, преждевременной кальцификацией плаценты, кальцинозом матки, фибромиомой матки с кальцинозом, болезнью Фара, микрокальцинатом и кальцинозом аортального клапана.An antibody or fragment thereof according to the present invention can, for example, be combined with known agents of the same group of treatments for indications, such as agents used for the treatment and/or prevention of diseases and/or conditions associated with hypertension, heart failure, pulmonary hypertension, COPD , asthma, cystic fibrosis, achondroplasia, hyperphosphatemia, chronic kidney disease (CKD), soft tissue calcification, calcification associated with chronic kidney disease, calcification associated with non-chronic kidney disease, medial calcification including Mönckeberg medial sclerosis, atherosclerosis, intimal calcification, hypertrophy heart disease associated with CKD, renal dystrophy associated with CKD, osteoporosis, postmenopausal osteoporosis, diabetes mellitus II, chronic kidney disease, aging, hypophosphaturia, hyperparathyroidism, vitamin D disorders, vitamin K deficiency, vitamin K antagonist coagulants, disease Kawasaki, ACDC (arterial calcification due to CD73 deficiency), GACI (generalized arterial calcification of infants), IBGC (idiopathic subcortical ganglion calcification), PXE (pseudoxanthoma elasticum), rheumatoid arthritis, Singleton-Merten syndrome, P-thalassemia, calcification, heterotrophic ossification , premature placental calcification, uterine calcification, uterine fibroids with calcification, Fahr's disease, microcalcification and aortic valve calcification.
Предпочтительные примеры подходящих дополнительных терапевтических агентов для объединения с антителом или его фрагментом согласно настоящему изобретению:Preferred examples of suitable additional therapeutic agents for combination with an antibody or fragment thereof according to the present invention:
органические нитраты и NO-донаторы, как, например, нитропруссид натрия, нитроглицерин, изосорбид мононитрат, изосорбод динитрат, мол-сидомин или SIN-1, а также ингалятивный NO;organic nitrates and NO-donators, such as sodium nitroprusside, nitroglycerin, isosorbide mononitrate, isosorbide dinitrate, mol-sidomine or SIN-1, as well as inhaled NO;
соединения, которые ингибируют распад циклического гуанозинмонофос-фата (cGMP), например, ингибиторы фосфодиэстеразы (POE) 1, 2 и/или 5, в частности POE 5-ингибиторы, такие как силденафил, варденафил, тадала-фил, уденафил, дазантафил, аванафил, мироденафил, лоденафил или PF-00489791;compounds that inhibit the breakdown of cyclic guanosine monophosphate (cGMP), for example phosphodiesterase (POE) 1, 2 and/or 5 inhibitors, in particular POE 5 inhibitors such as sildenafil, vardenafil, tadalafil, udenafil, dazantafil, avanafil , mirodenafil, lodenafil or PF-00489791;
средства с антитромботическим действием, в качестве примера и предпочтительно, из группы ингибиторов агрегации тромбоцитов, антикоагулянтов или профибринолитических веществ;agents with antithrombotic action, by way of example and preferably, from the group of platelet aggregation inhibitors, anticoagulants or profibrinolytic substances;
активные вещества, снижающие кровяное давление, например, и предпочтительно, из группы антагонистов кальция, антагонистов ангиотензина AII, ингибиторов ACE, ингибиторов ACE, NEP-ингибиторов, ингибиторов вазопептидазы, антагонистов эндотелина, ингибиторов ренина, блокаторов альфа-рецепторов, блокаторов бета-рецепторов, антагонистов минералокортикоидных рецепторов, ингибиторов rho-киназы и диуретиков;active substances that lower blood pressure, for example and preferably from the group of calcium antagonists, angiotensin AII antagonists, ACE inhibitors, ACE inhibitors, NEP inhibitors, vasopeptidase inhibitors, endothelin antagonists, renin inhibitors, alpha receptor blockers, beta receptor blockers, mineralocorticoid receptor antagonists, rho-kinase inhibitors and diuretics;
антиаритмические средства, в качестве примера и предпочтительно из группы блокаторов натриевых каналов, блокаторов бета-рецепторов, блокаторов калиевых каналов, антагонистов кальция, блокаторов If-каналов, дигиталиса, парасимпатолитиков (ваголитиков), симпатомиметиков и других антиаритмических средств, таких как аденозин, агонисты рецептора аденозина, а также вернакалант;antiarrhythmics, by way of example and preferably from the group of sodium channel blockers, beta receptor blockers, potassium channel blockers, calcium antagonists, If channel blockers, digitalis, parasympatholytics (vagolytics), sympathomimetics and other antiarrhythmics such as adenosine, receptor agonists adenosine, as well as vernakalant;
положительные инотропные средства, например, сердечный гликозид (дигоксин), бета-адренергические и допаминргические агонисты, такие как изопреналин, адреналин, норадреналин, допамин или добутамин;positive inotropes such as cardiac glycoside (digoxin), beta-adrenergic and dopaminergic agonists such as isoprenaline, epinephrine, norepinephrine, dopamine or dobutamine;
антагонисты рецепторы вазопрессина, в качестве примера и предпочтительно из группы кониваптана, толваптана, ликсиваптана, мозаваптана, сатаваптана, SR-121463, RWJ 676070 или BAY 86-8050, а также соединений, описанных в WO 2010/105770, WO2011/104322 и WO 2016/071212;vasopressin receptor antagonists, by way of example and preferably from the group of conivaptan, tolvaptan, lixivaptan, mozavaptan, satavaptan, SR-121463, RWJ 676070 or BAY 86-8050, as well as compounds described in WO 2010/105770, WO2011/104322 and WO 2 016 /071212;
активные вещества, изменяющие жировой обмен, в качестве примера и предпочтительно из группы агонистов тиреоидного рецептора, ингибиторов PCSK9, ингибиторов синтеза холестерина, таких как, например и предпочтительно, ингибиторы HMG-CoA-редуктазы или синтеза сквалена, ингибиторы ACAT, ингибиторы СЕТР, ингибиторы MTP, PPAR-альфа-, PPAR-гамма- и/или PPAR-дельта-агонисты, ингибиторы абсорбции холестерина, ингибиторы липазы, адсорберы полимерной желчной кислоты, ингибиторы реабсорбции желчных кислот и антагонисты липопротеина (а).active substances that modify fat metabolism, by way of example and preferably from the group of thyroid receptor agonists, PCSK9 inhibitors, cholesterol synthesis inhibitors, such as, for example and preferably, HMG-CoA reductase or squalene synthesis inhibitors, ACAT inhibitors, CETP inhibitors, MTP inhibitors , PPAR alpha, PPAR gamma and/or PPAR delta agonists, cholesterol absorption inhibitors, lipase inhibitors, polymeric bile acid adsorbers, bile acid reabsorption inhibitors and lipoprotein(a) antagonists.
противовоспалительные средства, например и предпочтительно, из группы глюкокортикоидов, такие как, например и предпочтительно, преднизон, преднизолон, метилпреднизолон, триамцинолон, дексаметазон, бекломета-зон, бетаметазон, флунизолид, будесонид или флутиказон, а также нестеро-идные противовоспалительные агенты (NSAID), например и предпочтительно, ацетилсалициловая кислота (аспирин), ибупрофен и напроксен, производные 5-амино салициловой кислоты, антагонисты лейкотриена, ингибиторы TNF-альфа и антагонисты хемокинового рецептора, такие как ингибиторы CCR1, 2 и/или 5;anti-inflammatory drugs, for example and preferably, from the group of glucocorticoids, such as, for example and preferably, prednisone, prednisolone, methylprednisolone, triamcinolone, dexamethasone, beclomethasone, betamethasone, flunisolide, budesonide or fluticasone, as well as non-steroidal anti-inflammatory agents (NSAIDs) for example and preferably, acetylsalicylic acid (aspirin), ibuprofen and naproxen, 5-amino salicylic acid derivatives, leukotriene antagonists, TNF-alpha inhibitors and chemokine receptor antagonists such as CCR1, 2 and/or 5 inhibitors;
агенты, которые ингибируют каскад сигнальных трансдукций, например, и предпочтительно, из группы ингибиторов киназы, например и предпочтительно, из группы ингибиторов тирозинкиназы и/или серин/треонинкиназы;agents that inhibit the signal transduction cascade, for example and preferably from the group of kinase inhibitors, for example and preferably from the group of tyrosine kinase and/or serine/threonine kinase inhibitors;
средства, которые ингибируют деградацию и модификацию внеклеточного матрикса, например и предпочтительно, из группы ингибиторов матриксных металлопротеаз (MMP), например и предпочтительно, ингибиторы химазы, стромелизина, коллагеназ, желатиназ и аггреканаз (предпочтительно из группы MMP-1, MMP-3, MMP-8, MMP-9, MMP-10, MMP-11 и с-13), а также металлоэластазы (MMP-12) и нейтрофилэластаза (HNE), например, сивелестат или DX-890;agents that inhibit the degradation and modification of the extracellular matrix, for example and preferably from the group of matrix metalloprotease (MMP) inhibitors, for example and preferably inhibitors of chymase, stromelysin, collagenases, gelatinases and aggrecanases (preferably from the group of MMP-1, MMP-3, MMP -8, MMP-9, MMP-10, MMP-11 and c-13), as well as metalloelastase (MMP-12) and neutrophil elastase (HNE), such as sivelestat or DX-890;
агенты, которые блокируют связывание серотонина с его рецептором, например, и предпочтительно антагонисты 5-HT2b-рецептора;agents that block the binding of serotonin to its receptor, for example and preferably 5-HT2b receptor antagonists;
антифиброзные агенты, например и предпочтительно нинтеданиб, пирфенидон, антагонисты рецептора аденозина A2b, антагонисты сфингозин-1-фосфатного рецептора 3 (S1P3), ингибиторы аутотаксина, антагонисты рецептора 1 лизофосфатидной кислоты (LPA-1) и рецептора 2 лизофосфатидной кислоты (LPA-2), ингибиторы лизилоксидазы (LOX), ингибиторы лизилоксидаза подобного белка-2, ингибиторы CTGF, антагонисты IL-13, антагонисты интегрина, антагонисты TGF-бета, ингибиторы передачи сигналов wnt, антагонисты CCR2;antifibrotic agents, for example and preferably nintedanib, pirfenidone, adenosine A2b receptor antagonists, sphingosine-1-phosphate receptor 3 (S1P3) antagonists, autotaxin inhibitors, lysophosphatidic acid receptor 1 (LPA-1) and lysophosphatidic acid receptor 2 (LPA-2) antagonists , lysyl oxidase (LOX) inhibitors, lysyl oxidase-like protein-2 inhibitors, CTGF inhibitors, IL-13 antagonists, integrin antagonists, TGF-beta antagonists, wnt signaling inhibitors, CCR2 antagonists;
агенты, которые действуют как бронходилататоры, например, предпочтительно антагонисты рецептора 5-HT2b; β2 («бета-два»)- адренергические агонисты (короткого и длительного действия), антихолинергические средства и теофиллин;agents that act as bronchodilators, for example, preferably 5-HT2b receptor antagonists; β2 (“beta two”) - adrenergic agonists (short- and long-acting), anticholinergics and theophylline;
агенты, которые являются антагонистами цитокинов и хемокинов, например и предпочтительно антагонистами TGF-бета, CTGF, IL-1, IL-4, IL-5, IL-6, IL-8, IL-13, IL-25, IL-33, TSLP и интегрины;agents that are antagonists of cytokines and chemokines, for example and preferably antagonists of TGF-beta, CTGF, IL-1, IL-4, IL-5, IL-6, IL-8, IL-13, IL-25, IL-33 , TSLP and integrins;
органические нитраты и NO-донаторы, как, например, нитропруссид натрия, нитроглицерин, изосорбид мононитрат, изосорбод динитрат, мол-сидомин или SIN-1, а также ингаляционный NO;organic nitrates and NO-donators, such as sodium nitroprusside, nitroglycerin, isosorbide mononitrate, isosorbide dinitrate, mol-sidomine or SIN-1, as well as inhaled NO;
NO-независимые, однако гем-зависимые стимуляторы растворимой гуанилатциклазы, как например и предпочтительно соединения, раскрытые в WO 00/06568, WO 00/06569, WO 02/42301, WO 03/095451, WO 2011/147809, WO 2012/004258, WO 2012/028647 и WO 2012/059549;NO-independent but heme-dependent stimulators of soluble guanylate cyclase, such as for example and preferably the compounds disclosed in WO 00/06568, WO 00/06569, WO 02/42301, WO 03/095451, WO 2011/147809, WO 2012/004258, WO 2012/028647 and WO 2012/059549;
NO-независимые, однако гем-зависимые активаторы растворимой гуанилатциклазы, как например и предпочтительно соединения, раскрытые в WO 01/19355, WO 01/19776, WO 01/19778, WO 01/19780, WO 02/070462 и WO 02/070510;NO-independent but heme-dependent activators of soluble guanylate cyclase, such as for example and preferably the compounds disclosed in WO 01/19355, WO 01/19776, WO 01/19778, WO 01/19780, WO 02/070462 and WO 02/070510;
агенты, стимулирующие синтез cGMP, например, модуляторы sGC, например и предпочтительно, риоцигуат, цинацигуат, верицигуат;agents that stimulate cGMP synthesis, for example, sGC modulators, for example and preferably, riociguat, cinaciguat, vericiguat;
аналоги простациклина или агонисты IP-рецепторов, например и предпочтительно илопрост, берапрост, трепростинил, эпопростенол или селексипаг;prostacyclin analogues or IP receptor agonists, for example and preferably iloprost, beraprost, treprostinil, epoprostenol or selexipag;
антагонисты рецепторов эндотелина, например и предпочтительно бозентан, дарузентан, амбрисентан или ситаксентан;endothelin receptor antagonists, for example and preferably bosentan, darusentan, ambrisentan or sitaxentan;
средства, которые ингибируют растворимую эпоксидгидролазу (sEH), например и предпочтительно, N,N'-дициклогексилмочевина, 12-(3-адамантан-1-ил-уреидо)-додекановая кислота или 1-адамантан-1-ил-3-{5-[2-(2-этоксиэтокси)этокси]пентил}-мочевина;agents that inhibit soluble epoxide hydrolase (sEH), for example and preferably N,N'-dicyclohexylurea, 12-(3-adamantan-1-yl-ureido)-dodecanoic acid or 1-adamantan-1-yl-3-{5 -[2-(2-ethoxyethoxy)ethoxy]pentyl}-urea;
средства, которые влияют на метаболизмом глюкозы, например и предпочтительно, инсулин, бигуанид, тиазолидиндион, сульфонилмочевина, акарбоза, ингибиторы DPP4, аналоги GLP-1 или ингибиторы SGLT-1;agents that affect glucose metabolism, for example and preferably insulin, biguanide, thiazolidinedione, sulfonylurea, acarbose, DPP4 inhibitors, GLP-1 analogues or SGLT-1 inhibitors;
натрийуретические пептиды, например и предпочтительно, предсердный натрийуретический пептид (ANP), натрийуретический пептид типа B (BNP, Несиритид), натрийуретический пептид типа C (CNP) или уродилатин;natriuretic peptides, for example and preferably atrial natriuretic peptide (ANP), B-type natriuretic peptide (BNP, Nesiritide), C-type natriuretic peptide (CNP) or urodilatin;
производные натрийуретических пептидов, например и предпочтительно, восоритид, цендеретид, PL 3994natriuretic peptide derivatives, for example and preferably, vosoritide, cenderetide, PL 3994
активаторы сердечного миозина, например и предпочтительно, омекамтив мекарбил (CK-1827452);cardiac myosin activators, for example and preferably omecamtiv mecarbil (CK-1827452);
кальций-сенсибилизаторы, например и предпочтительно, левосимендан;calcium sensitizers, for example and preferably levosimendan;
средства, которые влияют на энергетический метаболизм сердца, например и предпочтительно, этомоксир, дихлорацетат, ранолазин или триметазидин, полные или частичные агонисты аденозиновых рецепторов A1, такие как GS-9667 (ранее известный как CVT-3619), кападенозон, неладенозон и не-ладенозон биаланат;agents that affect cardiac energy metabolism, for example and preferably, etomoxir, dichloroacetate, ranolazine or trimetazidine, full or partial adenosine A1 receptor agonists such as GS-9667 (formerly known as CVT-3619), capadenozone, non-ladenozone and non-ladenozone bialanate;
агенты, влияющие на частоту сердечных сокращений, например и предпочтительно, ивабрадин.agents that affect heart rate, for example and preferably ivabradine.
Под средствами с антитромботическим действием предпочтительно понимают соединения из группы ингибиторов агрегации тромбоцитов, антикоагулянтов или профибринолитических веществ.Antithrombotic agents are preferably understood to mean compounds from the group of platelet aggregation inhibitors, anticoagulants or profibrinolytic substances.
Согласно частным вариантам осуществления, антитело или его фрагмент согласно настоящему изобретению вводят в комбинации с ингибитором агрегации тромбоцитов, например и предпочтительно, аспирином, клопидогрелем, прасугрелем, тикагрелором, тиклопидином или дипиридамолом.In particular embodiments, an antibody or fragment thereof of the present invention is administered in combination with a platelet aggregation inhibitor, for example and preferably aspirin, clopidogrel, prasugrel, ticagrelor, ticlopidine or dipyridamole.
Согласно частным вариантам осуществления, антитело или его фрагмент согласно настоящему изобретению вводят в комбинации с ингибитором тромбина, таким как например и предпочтительно, ксимелагатран, дабигатран, мелагатран, бивалирудин или клексан.In particular embodiments, an antibody or fragment thereof of the present invention is administered in combination with a thrombin inhibitor, such as, for example and preferably, ximelagatran, dabigatran, melagatran, bivalirudin or clexane.
Согласно частным вариантам осуществления, антитело или его фрагмент согласно настоящему изобретению вводят в комбинации с GPIIb/IIIa-антагонистами, такими как например и предпочтительно, тирофибан или абсиксимаб.In particular embodiments, an antibody or fragment thereof of the present invention is administered in combination with GPIIb/IIIa antagonists, such as, for example and preferably, tirofiban or abciximab.
Согласно частным вариантам осуществления, антитело или его фрагмент согласно настоящему изобретению вводят в комбинации с ингибитором фактора Ха, таким как например и предпочтительно, ривароксабан (BAY 59-7939), DU-176b, апиксабан, бетриксабан, отамиксабан, фидексабан, разаксабан, летаксабан, эрибаксабан, фондапаринукс, идапаринукс, PMD-3112, дарексабан (YM-150), KFA-1982, EMD-503982, MCM-17, MLN-1021, DX 9065a, DPC 906, JTV 803, SSR-126512 или SSR-128428.In particular embodiments, an antibody or fragment thereof of the present invention is administered in combination with a factor Xa inhibitor, such as, for example and preferably, rivaroxaban (BAY 59-7939), DU-176b, apixaban, betrixaban, otamixaban, fidexaban, rasaxaban, letaxaban, eribaxaban, fondaparinux, idaparinux, PMD-3112, darexaban (YM-150), KFA-1982, EMD-503982, MCM-17, MLN-1021, DX 9065a, DPC 906, JTV 803, SSR-126512, or SSR-128428.
Согласно частным вариантам осуществления, антитело или его фрагмент согласно настоящему изобретению вводят в комбинации с гепарином или производным гепарина с низкой молекулярной массой весом (LMW).In particular embodiments, an antibody or fragment thereof of the present invention is administered in combination with heparin or a low molecular weight (LMW) heparin derivative.
Согласно частным вариантам осуществления, антитело или его фрагмент согласно настоящему изобретению вводят в комбинации с антагонистом витамина К, таким как например и предпочтительно кумарин.In particular embodiments, an antibody or fragment thereof of the present invention is administered in combination with a vitamin K antagonist, such as, for example and preferably, coumarin.
Под средствами, понижающими кровяное давление, предпочтительно понимают соединения из группы антагонистов кальция, антагонистов ангиотензина AII, ингибиторов фермента АСЕ, антагонистов эндотелина, ингибиторов ренина, блокаторов альфа-рецепторов, блокаторов бета-рецепторов, антагонистов мине-ралкортикоидных рецепторов, ингибиторов rho-киназы и диуретиков.Blood pressure lowering agents preferably mean compounds from the group of calcium antagonists, angiotensin AII antagonists, ACE inhibitors, endothelin antagonists, renin inhibitors, alpha receptor blockers, beta receptor blockers, mineralcorticoid receptor antagonists, rho-kinase inhibitors and diuretics.
Согласно частным вариантам осуществления, антитело или его фрагмент согласно настоящему изобретению вводят в комбинации с антагонистом кальция, таким как например и предпочтительно нифедипин, амлодипин, верапамил или дилтиазем.In particular embodiments, an antibody or fragment thereof of the present invention is administered in combination with a calcium antagonist, such as, for example and preferably, nifedipine, amlodipine, verapamil or diltiazem.
Согласно частным вариантам осуществления, антитело или его фрагмент согласно настоящему изобретению вводят в комбинации с блокатором альфа-1-рецепторов, таким как например и предпочтительно празосин.In particular embodiments, an antibody or fragment thereof of the present invention is administered in combination with an alpha-1 receptor blocker, such as, for example and preferably, prazosin.
Согласно частным вариантам осуществления, антитело или его фрагмент согласно настоящему изобретению вводят в комбинации с блокатором бета-рецепторов, таким как например и предпочтительно пропранолол, атенолол, тимолол, пиндолол, альпренолол, окспренолол, пенбутолол, бупранолол, метипранолол, надолол, мепиндолол, каразалол, соталол, метопролол, бетаксолол, целипролол, бисопролол, картеолол, эсмолол, лабеталол, карведилол, адапролол, ландиолол, небиволол, эпанолол или бусиндолол.In particular embodiments, an antibody or fragment thereof of the present invention is administered in combination with a beta receptor blocker, such as, for example and preferably, propranolol, atenolol, timolol, pindolol, alprenolol, oxprenolol, penbutolol, bupranolol, metypranolol, nadolol, mepindolol, carazalol, sotalol, metoprolol, betaxolol, celiprolol, bisoprolol, carteolol, esmolol, labetalol, carvedilol, adaprolol, landiolol, nebivolol, epanolol or busindolol.
Согласно частным вариантам осуществления, антитело или его фрагмент согласно настоящему изобретению вводят в комбинации с антагонистом ангиотензина AII, таким как например и предпочтительно лосартан, кандесартан, валсартан, телмисартан или эмбусартан, или двойным антагонистом ангиотензина AII/ингибитором неприлизина, в качестве примера и предпочтительно с LCZ696 (валсартан/сакубитрил).In particular embodiments, an antibody or fragment thereof of the present invention is administered in combination with an angiotensin AII antagonist, such as, for example and preferably, losartan, candesartan, valsartan, telmisartan, or embusartan, or a dual angiotensin AII antagonist/neprilysin inhibitor, for example and preferably with LCZ696 (valsartan/sacubitril).
Согласно частным вариантам осуществления, антитело или его фрагмент согласно настоящему изобретению вводят в комбинации с ингибитором АСЕ, таким как например и предпочтительно эналаприл, каптоприл, лизиноприл, рамиприл, делаприл, фозиноприл, квиноприл, периндоприл или трандоприл.In particular embodiments, an antibody or fragment thereof of the present invention is administered in combination with an ACE inhibitor, such as, for example and preferably, enalapril, captopril, lisinopril, ramipril, delapril, fosinopril, quinopril, perindopril, or trandopril.
Согласно частным вариантам осуществления, антитело или его фрагмент согласно настоящему изобретению вводят в комбинации с антагонистом эндотелина, таким как например и предпочтительно бозентан, дарузентан, амбризентан или ситаксзентан.In particular embodiments, an antibody or fragment thereof of the present invention is administered in combination with an endothelin antagonist, such as, for example and preferably, bosentan, darusentan, ambrisentan, or sitaxentan.
Согласно частным вариантам осуществления, антитело или его фрагмент согласно настоящему изобретению вводят в комбинации с ингибитором ренина, таким как например и предпочтительно алискирен, SPP-600 или SPP-800.In particular embodiments, an antibody or fragment thereof of the present invention is administered in combination with a renin inhibitor, such as for example and preferably aliskiren, SPP-600 or SPP-800.
Согласно частным вариантам осуществления, антитело или его фрагмент согласно настоящему изобретению вводят в комбинации с антагонистом минералкортикоидных рецепторов, таким как например и предпочтительно спиронолактон или эплеренон.In particular embodiments, an antibody or fragment thereof of the present invention is administered in combination with a mineralcorticoid receptor antagonist, such as, for example and preferably, spironolactone or eplerenone.
Согласно частным вариантам осуществления, антитело или его фрагмент согласно настоящему изобретению вводят в комбинации с петлевым диуретиком, например, фуросемидом, торасемидом, буметанидом и пиретанидом, с калийсберегающими диуретиками, например, амилоридом и триамтереном, с антагонистами альдостерона, например, спироно-лактоном, канреноатом калия и эплереноном, а также тиазидными диуретиками, например, гидрохлортиазидом, хлорталионом, ксипамидом и идапамидом.In particular embodiments, the antibody or fragment thereof according to the present invention is administered in combination with a loop diuretic, for example, furosemide, torsemide, bumetanide and piretanide, with potassium-sparing diuretics, for example, amiloride and triamterene, with aldosterone antagonists, for example, spirono-lactone, canrenoate potassium and eplerenone, as well as thiazide diuretics, such as hydrochlorothiazide, chlorthalion, xipamide and idapamide.
Под средствами, изменяющими жировой обмен, понимают предпочтительно со-единения из группы ингибиторов СЕТР, агонистов тироидных рецепторов, ин-гибиторов синтеза холестерина, таких как ингибиторы HMG-CoA-редуктазы или синтеза сквалена, ингибиторов АСАТ, ингибиторов МТР, агонистов PPAR-альфа, PPAR-гамма и/или PPAR-дельта рецепторов, ингибиторов абсорбции хо-лестерина, полимерных адсорбентов желчной кислоты, ингибиторов реабсорбции желчной кислоты, ингибиторов липазы, а также антагонистов липопротеина (а).Agents that alter fat metabolism preferably mean compounds from the group of CETP inhibitors, thyroid receptor agonists, cholesterol synthesis inhibitors, such as HMG-CoA reductase or squalene synthesis inhibitors, ACAT inhibitors, MTP inhibitors, PPAR-alpha agonists, PPAR gamma and/or PPAR delta receptors, cholesterol absorption inhibitors, polymeric bile acid adsorbents, bile acid reabsorption inhibitors, lipase inhibitors, and lipoprotein (a) antagonists.
Согласно частным вариантам осуществления, антитело или его фрагмент согласно настоящему изобретению вводят в комбинации с ингибитором СЕТР, таким как например и предпочтительно торсетрапиб (СР-529 414), JJT-705 или СЕТР-вакцина (Avant).In particular embodiments, an antibody or fragment thereof of the present invention is administered in combination with a CETP inhibitor, such as, for example and preferably, torsetrapib (CP-529 414), JJT-705, or a CETP vaccine (Avant).
Согласно частным вариантам осуществления, антитело или его фрагмент согласно настоящему изобретению вводят в комбинации с агонистом тироидных рецепторов, таким как например и предпочтительно D-тироксин, 3,5,3'-трийодотиронин (Т3), CGS 23425 или акситиром (CGS 26214).In particular embodiments, an antibody or fragment thereof of the present invention is administered in combination with a thyroid receptor agonist, such as, for example and preferably, D-thyroxine, 3,5,3'-triiodothyronine (T3), CGS 23425, or Axithyre (CGS 26214).
Согласно частным вариантам осуществления, антитело или его фрагмент согласно настоящему изобретению вводят в комбинации с ингибитором HMG-CoA-редуктазы из класса статинов, таким как например и предпочтительно ловастатин, симвастатин, правастатин, флувастатин, аторвастатин, розувастатин или питавастатин.In particular embodiments, an antibody or fragment thereof of the present invention is administered in combination with an HMG-CoA reductase inhibitor of the statin class, such as, for example and preferably, lovastatin, simvastatin, pravastatin, fluvastatin, atorvastatin, rosuvastatin or pitavastatin.
Согласно частным вариантам осуществления, антитело или его фрагмент согласно настоящему изобретению вводят в комбинации с ингибитором синтеза сквалена, таким как например и предпочтительно BMS-188494 или ТАК-475.In particular embodiments, an antibody or fragment thereof of the present invention is administered in combination with a squalene synthesis inhibitor, such as, for example and preferably, BMS-188494 or TAK-475.
Согласно частным вариантам осуществления, антитело или его фрагмент согласно настоящему изобретению вводят в комбинации с ингибитором АСАТ, таким как например и предпочтительно авазимиб, мелинамид, пактимиб, эфлусимиб или SMP-797.In particular embodiments, an antibody or fragment thereof of the present invention is administered in combination with an ACAT inhibitor, such as, for example and preferably, avasimibe, melinamide, pactimib, eflusimibe, or SMP-797.
Согласно частным вариантам осуществления, антитело или его фрагмент согласно настоящему изобретению вводят в комбинации с ингибитором МТР, таким как например и предпочтительно имплитапид, BMS-201038, R-103757 или JTT-130.In particular embodiments, an antibody or fragment thereof of the present invention is administered in combination with an MTP inhibitor, such as, for example and preferably, implitapide, BMS-201038, R-103757, or JTT-130.
Согласно частным вариантам осуществления, антитело или его фрагмент согласно настоящему изобретению вводят в комбинации с агонистом PPAR-гамма рецепторов, таким как например и предпочтительно пиоглитазон или росиглитазон.In particular embodiments, an antibody or fragment thereof of the present invention is administered in combination with a PPAR gamma receptor agonist, such as, for example and preferably, pioglitazone or rosiglitazone.
Согласно частным вариантам осуществления, антитело или его фрагмент согласно настоящему изобретению вводят в комбинации с агонистом PPAR-дельта рецепторов, таким как например и предпочтительно GW-501516 или BAY 68-5042.In particular embodiments, an antibody or fragment thereof of the present invention is administered in combination with a PPAR delta receptor agonist, such as, for example and preferably, GW-501516 or BAY 68-5042.
Согласно частным вариантам осуществления, антитело или его фрагмент согласно настоящему изобретению вводят в комбинации с ингибитором абсорбции холестерина, таким как например и предпочтительно эзетимиб, тиквесид или памаквесид.In particular embodiments, an antibody or fragment thereof of the present invention is administered in combination with a cholesterol absorption inhibitor, such as for example and preferably ezetimibe, ticqueside or pamaqueside.
Согласно частным вариантам осуществления, антитело или его фрагмент согласно настоящему изобретению вводят в комбинации с ингибитором липазы, таким как например и предпочтительно орлистат.In particular embodiments, an antibody or fragment thereof of the present invention is administered in combination with a lipase inhibitor, such as for example and preferably orlistat.
Согласно частным вариантам осуществления, антитело или его фрагмент согласно настоящему изобретению вводят в комбинации с полимерным адсорбентом желчной кислоты, в качестве примера и предпочтительно с холестирамином, колестиполом, колесолвамом, CholestaGel или колестимидом.In particular embodiments, an antibody or fragment thereof of the present invention is administered in combination with a polymeric bile acid adsorbent, for example and preferably cholestyramine, colestipol, colesolvam, CholestaGel or colestimide.
Согласно частным вариантам осуществления, антитело или его фрагмент согласно настоящему изобретению вводят в комбинации с ингибитором реабсорбции желчных кислот, в качестве примера и предпочтительно с ингибиторами ASBT (=IBAT), например, AZD-7806, S-8921, АК 105, BARI-1741, SC-435 или SC-635.In particular embodiments, an antibody or fragment thereof according to the present invention is administered in combination with a bile acid reabsorption inhibitor, as an example and preferably with ASBT inhibitors (=IBAT), for example, AZD-7806, S-8921, AK 105, BARI-1741 , SC-435 or SC-635.
Согласно частным вариантам осуществления, антитело или его фрагмент согласно настоящему изобретению вводят в комбинации с антагонистом липопротеина (а), в качестве примера и предпочтительно с гемкабеном кальцием (CI-1027) или никотиновой кислотой.In particular embodiments, an antibody or fragment thereof of the present invention is administered in combination with a lipoprotein(a) antagonist, for example and preferably gemcabene calcium (CI-1027) or niacin.
Согласно частным вариантам осуществления, антитело или его фрагмент согласно настоящему изобретению вводят в комбинации с антагонистом липопротеина (а), в качестве примера и предпочтительно с гемкабеном кальцием (CI-1027) или никотиновой кислотой.In particular embodiments, an antibody or fragment thereof of the present invention is administered in combination with a lipoprotein(a) antagonist, for example and preferably gemcabene calcium (CI-1027) or niacin.
Согласно частным вариантам осуществления, антитело или его фрагмент согласно настоящему изобретению вводят в комбинации с модуляторами sGC, в качестве примера и предпочтительно с риоцигуатом, цинацигуатом или верицигуатом.In particular embodiments, an antibody or fragment thereof of the present invention is administered in combination with sGC modulators, by way of example and preferably with riociguat, cinaciguat or vericiguat.
Согласно частным вариантам осуществления, антитело или его фрагмент согласно настоящему изобретению вводят в комбинации со средством, влияющим на метаболизм глюкозы, в качестве примера и предпочтительно с инсулином, сульфонилмочевиной, акарбозой, DPP4 ингибиторами, GLP-1 аналогами или SGLT-1 ингибиторами.In particular embodiments, an antibody or fragment thereof of the present invention is administered in combination with an agent affecting glucose metabolism, by way of example and preferably with insulin, sulfonylurea, acarbose, DPP4 inhibitors, GLP-1 analogues or SGLT-1 inhibitors.
Согласно частным вариантам осуществления, антитело или его фрагмент согласно настоящему изобретению вводят в комбинации с антагонистом TGFбета, в качестве примера и предпочтительно с пирфенидоном и фрезолимумабом.In particular embodiments, an antibody or fragment thereof of the present invention is administered in combination with a TGFbeta antagonist, for example and preferably pirfenidone and frezolimumab.
Согласно частным вариантам осуществления, антитело или его фрагмент согласно настоящему изобретению вводят в комбинации с антагонистом CCR2, в качестве примера и предпочтительно с CCX-140.In particular embodiments, an antibody or fragment thereof of the present invention is administered in combination with a CCR2 antagonist, for example and preferably CCX-140.
Согласно частным вариантам осуществления, антитело или его фрагмент согласно настоящему изобретению вводят в комбинации с антагонистом TNFальфа, в качестве примера и предпочтительно с адалимумабом.In particular embodiments, an antibody or fragment thereof of the present invention is administered in combination with a TNFalpha antagonist, by way of example and preferably with adalimumab.
Согласно частным вариантам осуществления, антитело или его фрагмент согласно настоящему изобретению вводят в комбинации с ингибитором галектина-3, в качестве примера и предпочтительно с GCS-100.In particular embodiments, an antibody or fragment thereof of the present invention is administered in combination with a galectin-3 inhibitor, for example and preferably GCS-100.
Согласно частным вариантам осуществления, антитело или его фрагмент согласно настоящему изобретению вводят в комбинации с ингибитором Nrf-2, в качестве примера и предпочтительно с бардоксолоном.In particular embodiments, an antibody or fragment thereof of the present invention is administered in combination with an Nrf-2 inhibitor, for example and preferably bardoxolone.
Согласно частным вариантам осуществления, антитело или его фрагмент согласно настоящему изобретению вводят в комбинации с агонистом BMP-7, в качестве примера и предпочтительно с THR-184.In particular embodiments, an antibody or fragment thereof of the present invention is administered in combination with a BMP-7 agonist, for example and preferably THR-184.
Согласно частным вариантам осуществления, антитело или его фрагмент согласно настоящему изобретению вводят в комбинации с ингибитором NOX1/4, в качестве примера и предпочтительно с GKT-137831.In particular embodiments, an antibody or fragment thereof of the present invention is administered in combination with a NOX1/4 inhibitor, for example and preferably GKT-137831.
Согласно частным вариантам осуществления, антитело или его фрагмент согласно настоящему изобретению вводят в комбинации с лекарственным средством, которое влияет на метаболизм витамина D, в качестве примера и предпочтительно с кальцитриолом, альфакальцидолом, доксеркальциферолом, максакальцитолом, парикальцитолом, холекальциферолом или паракальцитолом.In particular embodiments, an antibody or fragment thereof of the present invention is administered in combination with a drug that affects vitamin D metabolism, for example and preferably calcitriol, alfacalcidol, doxercalciferol, maxacalcitol, paricalcitol, cholecalciferol or paracalcitol.
Согласно частным вариантам осуществления, антитело или его фрагмент согласно настоящему изобретению вводят в комбинации с цитостатическим средством, в качестве примера и предпочтительно с циклофосфамидом.In particular embodiments, an antibody or fragment thereof according to the present invention is administered in combination with a cytotoxic agent, for example and preferably cyclophosphamide.
Согласно частным вариантам осуществления, антитело или его фрагмент согласно настоящему изобретению вводят в комбинации с иммуноподавляющим средством, в качестве примера и предпочтительно с циклоспорином.In particular embodiments, an antibody or fragment thereof according to the present invention is administered in combination with an immunosuppressive agent, for example and preferably cyclosporine.
Согласно частным вариантам осуществления, антитело или его фрагмент согласно настоящему изобретению вводят в комбинации с фосфатным связующим, в качестве примера и предпочтительно с колестиланом, севеламер гидрохлоридом и севеламер карбонатом, лантаном и карбонатом лантана.In particular embodiments, an antibody or fragment thereof of the present invention is administered in combination with a phosphate binder, eg and preferably colestilane, sevelamer hydrochloride and sevelamer carbonate, lanthanum and lanthanum carbonate.
Согласно частным вариантам осуществления, антитело или его фрагмент согласно настоящему изобретению вводят в комбинации с натрий-фосфатным со-транспортером почечного проксимального канальца, в качестве примера и предпочтительно с ниацином или никотинамидом.In particular embodiments, an antibody or fragment thereof of the present invention is administered in combination with a renal proximal tubule sodium phosphate co-transporter, for example and preferably niacin or nicotinamide.
Согласно частным вариантам осуществления, антитело или его фрагмент согласно настоящему изобретению вводят в комбинации с кальцимиметиком для лечения гиперпаратиреоза.In particular embodiments, an antibody or fragment thereof of the present invention is administered in combination with a calcimimetic for the treatment of hyperparathyroidism.
Согласно частным вариантам осуществления, антитело или его фрагмент согласно настоящему изобретению вводят в комбинации со средствами для лечения дефицита железа, в качестве примера и предпочтительно с продуктами железа.In particular embodiments, an antibody or fragment thereof of the present invention is administered in combination with agents for the treatment of iron deficiency, by way of example and preferably with iron products.
Согласно частным вариантам осуществления, антитело или его фрагмент согласно настоящему изобретению вводят в комбинации со средствами для лечения гиперурикемии, в качестве примера и предпочтительно с аллопуринолом или расбуриказом.In particular embodiments, an antibody or fragment thereof of the present invention is administered in combination with agents for the treatment of hyperuricemia, for example and preferably allopurinol or rasburicase.
Согласно частным вариантам осуществления, антитело или его фрагмент согласно настоящему изобретению вводят в комбинации с гликопротеиновым гормоном для лечения анемии, в качестве примера и предпочтительно с эритропоэтиом.In particular embodiments, an antibody or fragment thereof of the present invention is administered in combination with a glycoprotein hormone for the treatment of anemia, by way of example and preferably with erythropoiesis.
Согласно частным вариантам осуществления, антитело или его фрагмент согласно настоящему изобретению вводят в комбинации с биологическими средствами для иммунной терапии, в качестве примера и предпочтительно с абатацептом, ритуксимабом, экулизумабом или белимумаом.In particular embodiments, an antibody or fragment thereof according to the present invention is administered in combination with biological agents for immune therapy, by way of example and preferably with abatacept, rituximab, eculizumab or belimumab.
Согласно частным вариантам осуществления, антитело или его фрагмент согласно настоящему изобретению вводят в комбинации с антагонистами вазопрессина (группа ваптанов) для лечения сердечной недостаточности, в качестве примера и предпочтительно с толваптаном, кониваптаном, ликсиваптаном, мозаваптаном, сатаваптаном или релковаптаном.In particular embodiments, an antibody or fragment thereof of the present invention is administered in combination with vasopressin antagonists (vaptan group) for the treatment of heart failure, for example and preferably with tolvaptan, conivaptan, lixivaptan, mozavaptan, satavaptan or relkovaptan.
Согласно частным вариантам осуществления, антитело или его фрагмент согласно настоящему изобретению вводят в комбинации с ингибиторами Jak, в качестве примера и предпочтительно с рук-солитинибом, тофацитинибом, барицитинибом, CYT387, GSK2586184, лестаур-тинибом, пакритинибом (SB1518) или TG101348.In particular embodiments, an antibody or fragment thereof of the present invention is administered in combination with Jak inhibitors, by way of example and preferably with ruc-solitinib, tofacitinib, baricitinib, CYT387, GSK2586184, lestaurtinib, pacritinib (SB1518) or TG101348.
Согласно частным вариантам осуществления, антитело или его фрагмент согласно настоящему изобретению вводят в комбинации с аналогами простациклина для терапии микротромбов.In particular embodiments, an antibody or fragment thereof of the present invention is administered in combination with prostacyclin analogues for the treatment of microthrombi.
Согласно частным вариантам осуществления, антитело или его фрагмент согласно настоящему изобретению вводят в комбинации с щелочным лекарственным средством, в качестве примера и предпочтительно с бикарбонатом натрия.In particular embodiments, the antibody or fragment thereof of the present invention is administered in combination with an alkaline drug, for example and preferably sodium bicarbonate.
Согласно частным вариантам осуществления, антитело или его фрагмент согласно настоящему изобретению вводят в комбинации с ингибитором mTOR, в качестве примера и предпочтительно с эверолимусом или рапамицином.In particular embodiments, an antibody or fragment thereof of the present invention is administered in combination with an mTOR inhibitor, for example and preferably everolimus or rapamycin.
Согласно частным вариантам осуществления, антитело или его фрагмент согласно настоящему изобретению вводят в комбинации с ингибитором NHE3, в качестве примера и предпочтительно с AZD1722 или тенапанором.In particular embodiments, an antibody or fragment thereof of the present invention is administered in combination with an NHE3 inhibitor, for example and preferably AZD1722 or tenapanor.
Согласно частным вариантам осуществления, антитело или его фрагмент согласно настоящему изобретению вводят в комбинации с модулятором eNOS, в качестве примера и предпочтительно с сапроптерином.In particular embodiments, an antibody or fragment thereof of the present invention is administered in combination with an eNOS modulator, for example and preferably sapropterin.
Согласно частным вариантам осуществления, антитело или его фрагмент согласно настоящему изобретению вводят в комбинации с ингибитором CTGF, в качестве примера и предпочтительно с FG-3019.In particular embodiments, an antibody or fragment thereof of the present invention is administered in combination with a CTGF inhibitor, for example and preferably FG-3019.
Антитело или его фрагмент для применения в способе лечения согласно настоящему изобретению может быть составлен любым обычным способом с использованием одного или нескольких физиологически приемлемых носителей или вспомогательных веществ. Антитело или его фрагмент согласно настоящему изобретению можно вводить любыми подходящими средствами, которые могут варьироваться в зависимости от типа заболевания, подлежащего лечению. Возможные пути введения включают энтеральное (например, пероральное), парентеральное (например, внутривенное, внутриартериальное, внутрибрюшинное, внутримышечное, подкожное, внутрисердечное, внутрижелудочковое, интратекальное, интрамедуллярное, внутриочаговое), внутрилегочное и интраназальное введение. Кроме того, антитело или его фрагмент согласно настоящему изобретению можно вводить путем импульсной инфузии, например, с уменьшающимися дозами антитела или его фрагмента. Предпочтительно дозирование производят посредством инъекций, наиболее предпочтительно внутривенных или подкожных инъекций, частично в зависимости от того, является ли состояние острым или хроническим. Вводимое количество будет зависеть от множества факторов, таких как клинические симптомы, пол, возраст и/или вес индивидуума, вводятся ли другие лекарства и других. Квалифицированному специалисту понятно, что путь введения будет варьироваться в зависимости от заболевания или состояния, которое необходимо лечить.An antibody or fragment thereof for use in a treatment method of the present invention may be formulated in any conventional manner using one or more physiologically acceptable carriers or excipients. The antibody or fragment thereof of the present invention can be administered by any suitable means, which may vary depending on the type of disease being treated. Possible routes of administration include enteral (eg, oral), parenteral (eg, intravenous, intraarterial, intraperitoneal, intramuscular, subcutaneous, intracardiac, intraventricular, intrathecal, intramedullary, intralesional), intrapulmonary, and intranasal. In addition, the antibody or fragment thereof of the present invention can be administered by pulse infusion, for example, with decreasing doses of the antibody or fragment thereof. Preferably, dosage is administered by injection, most preferably intravenous or subcutaneous injection, depending in part on whether the condition is acute or chronic. The amount administered will depend on a variety of factors, such as clinical symptoms, gender, age and/or weight of the individual, whether other medications are being administered, and others. One skilled in the art will appreciate that the route of administration will vary depending on the disease or condition being treated.
Способы парентеральной доставки включают местное, внутриартериальное, внутриопухолевое, внутримышечное, подкожное, интрамедуллярное, интратекальное, внутрижелудочковое, внутривенное, внутрибрюшинное или интраназальное введение.Methods of parenteral delivery include topical, intraarterial, intratumoral, intramuscular, subcutaneous, intramedullary, intrathecal, intraventricular, intravenous, intraperitoneal, or intranasal administration.
Согласно частным вариантам осуществления способ лечения включает однократное или многократное введение антитела или его фрагмента или фармацевтической композиции, содержащей его. Разовые дозы введений могут быть одинаковыми или разными. В частности, способ лечения включает 1, 2, 3, 4, 5 или 6 введений антитела или его фрагмента согласно настоящему изобретению, где предпочтительно множество введений происходит в течение от одного до шести последовательных месяцев. Антитело или его фрагмент согласно настоящему изобретению можно, например, вводить каждые 3-4 дня, каждую неделю, один раз каждые две недели или один раз каждые три недели, в зависимости от его времени полужизни и скорости выведения.According to particular embodiments, the method of treatment includes single or multiple administration of an antibody or fragment thereof or a pharmaceutical composition containing it. Single doses of administration may be the same or different. In particular, the method of treatment includes 1, 2, 3, 4, 5 or 6 administrations of an antibody or fragment thereof according to the present invention, where preferably multiple administrations occur over one to six consecutive months. The antibody or fragment thereof of the present invention can, for example, be administered every 3-4 days, every week, once every two weeks, or once every three weeks, depending on its half-life and clearance rate.
Краткое описание чертежейBrief description of drawings
Фиг. 1. Средние концентрации в плазме TPP-10992 и TPP-5661 после внутривенного введения 5 мг/кг крысе.Fig. 1. Mean plasma concentrations of TPP-10992 and TPP-5661 after intravenous administration of 5 mg/kg in rats.
Фиг. 2. Средние концентрации в плазме TPP-12897 после внутрибрюшинного введения 5 мг/кг мышам.Fig. 2. Mean plasma concentrations of TPP-12897 following intraperitoneal administration of 5 mg/kg to mice.
Фиг. 3. Устойчивость ANP (A-C), TPP-10992 (D-F) и TPP-5661 (G-I) к протеолитическому расщеплению. Активность ANP, TPP-10992 и TPP-5661 тестировали на стабильной клеточной линии рецептора ANP крысы непосредственно (A, D, G) или после 4 ч инкубации при 37°C с 0,6 мкг/мл NEP (B, E, H) или 0,6 мкг/мл IDE (C, F, I).Fig. 3. Resistance of ANP (A-C), TPP-10992 (D-F) and TPP-5661 (G-I) to proteolytic cleavage. The activity of ANP, TPP-10992 and TPP-5661 was tested in a stable rat ANP receptor cell line directly (A, D, G) or after 4 h incubation at 37°C with 0.6 μg/ml NEP (B, E, H) or 0.6 μg/ml IDE (C, F, I).
Фиг. 4. Устойчивость BNP (A-C) и TPP-11155 (D-F) к протеолитическому расщеплению. Активность BNP и TPP-11155 тестировали на стабильной клеточной линии рецептора BNP крысы непосредственно (A, D), или после 4 ч инкубации при 37°C с 0,6 мкг/мл NEP (B, E) или 0.6 мкг/мл IDE (C, F).Fig. 4. Resistance of BNP (A-C) and TPP-11155 (D-F) to proteolytic degradation. The activity of BNP and TPP-11155 was tested in a stable rat BNP receptor cell line directly (A, D), or after 4 h incubation at 37°C with 0.6 μg/ml NEP (B, E) or 0.6 μg/ml IDE ( C, F).
Фиг. 5. Устойчивость CNP (A-C) и TPP-12897 (D-F) к протеолитическому расщеплению. Активность CNP и TPP-11155 тестировали на стабильной клеточной линии рецептора CNP крысы непосредственно (A, D), или после 4 ч инкубации при 37°C с 0,6 мкг/мл NEP (B, E) или 0.6 мкг/мл IDE (C, F).Fig. 5. Resistance of CNP (A-C) and TPP-12897 (D-F) to proteolytic cleavage. The activity of CNP and TPP-11155 was tested in a stable rat CNP receptor cell line directly (A, D), or after 4 h incubation at 37°C with 0.6 μg/ml NEP (B, E) or 0.6 μg/ml IDE ( C, F).
Фиг. 6. Пептид ANP и TPP-10992 индуцировали кривые зависимости реакции вазодилатации от дозы в аортальных кольцах с PE-сокращением. Кривые "концентрация-ответ" (0,0001-10 мкМ; n=3 крысы) на пептид ANP (светлые кружки) и TPP-10992 (темные кружки) в аортальных кольцах эндотелий-интактных крыс, сокращенных фенилэфрином (1 мкМ). Экспериментальные значения были рассчитаны относительно максимальных изменений сокращения, производимого фенилэфрином в каждой ткани, которое было принято за 100%. Эффективность пептида ANP и TPP-10992 составляла -7,4 и -6,7, соответственно (значения logEC50). Данные представляют собой среднее значение±S.E.M. для 2 экспериментов.Fig. 6. ANP peptide and TPP-10992 induced dose-response vasodilation curves in PE-contracted aortic rings. Concentration-response curves (0.0001-10 µM; n=3 rats) to ANP peptide (open circles) and TPP-10992 (closed circles) in the aortic rings of endothelium-intact rats contracted with phenylephrine (1 µM). Experimental values were calculated relative to the maximum change in contraction produced by phenylephrine in each tissue, which was set to 100%. The efficiencies of ANP peptide and TPP-10992 were -7.4 and -6.7, respectively (logEC50 values). Data represent mean±SEM of 2 experiments.
Фиг. 7. Пептид ANP и TPP-5661 индуцировали кривые зависимости реакции вазодилатации от дозы в аортальных кольцах с PE-сокращением. Кривые "концентрация-ответ" (0,0001-10 мкМ; n=3 крысы) на пептид ANP (светлые кружки) и TPP-5661 (темные кружки) в аортальных кольцах эндотелий-интактных крыс, сокращенных фенилэфрином (1 мкМ). Экспериментальные значения были рассчитаны относительно максимальных изменений сокращения, производимого фенилэфрином в каждой ткани, которое было принято за 100%. Эффективность пептида ANP и TPP-5661 составляла -7,4 и -6,5, соответственно (значения logEC50). Данные представляют собой среднее значение±S.E.M. для 2 экспериментов.Fig. 7. ANP peptide and TPP-5661 induced dose-response vasodilation curves in PE-contracted aortic rings. Concentration-response curves (0.0001-10 µM; n=3 rats) to ANP peptide (open circles) and TPP-5661 (closed circles) in the aortic rings of endothelium-intact rats contracted with phenylephrine (1 µM). Experimental values were calculated relative to the maximum change in contraction produced by phenylephrine in each tissue, which was set to 100%. The efficiencies of ANP peptide and TPP-5661 were -7.4 and -6.5, respectively (logEC50 values). Data represent mean±SEM of 2 experiments.
Фиг. 8. Гемодинамический эффект ANP у крыс в сознании. Крысиный ANP вводили внутрибрюшинно в момент 0 часов. Доза 500 мкг ANP привела к снижению среднего артериального давления (MAP) примерно на 25% с продолжительностью эффекта около 6-8 часов.Fig. 8. Hemodynamic effect of ANP in conscious rats. Rat ANP was administered intraperitoneally at 0 hours. A dose of 500 μg of ANP resulted in a reduction in mean arterial pressure (MAP) of approximately 25% with a duration of effect of approximately 6–8 hours.
Фиг. 9. Гемодинамический эффект TPP-5661 у крыс в сознании. TPP-5661 вводили внутрибрюшинно в момент 0 часов. Доза 15 мг/кг привела к снижению среднего артериального давления (MAP) примерно на 20% с продолжительностью эффекта более 6 дней.Fig. 9. Hemodynamic effect of TPP-5661 in conscious rats. TPP-5661 was administered intraperitoneally at 0 hours. A dose of 15 mg/kg resulted in a reduction in mean arterial pressure (MAP) of approximately 20% with a duration of effect of more than 6 days.
Фиг. 10. Гемодинамический эффект PP-10992 у крыс в сознании. TPP-10992 вводили внутрибрюшинно в момент 0 часов. Доза 30 мг/кг привела к снижению среднего артериального давления (MAP) примерно на 20% с максимальным эффектом на момент времени 48 часов и продолжительностью эффекта более 6 днейFig. 10. Hemodynamic effect of PP-10992 in conscious rats. TPP-10992 was administered intraperitoneally at 0 hours. The 30 mg/kg dose resulted in a reduction in mean arterial pressure (MAP) of approximately 20% with a maximum effect at 48 hours and duration of effect greater than 6 days
Фиг. 11. Активность конструкций антител с привитыми BNP на клетках hNPRA. Активность очищенных образцов соединений на стабильных клетках hNPRA-CHO k1 оценивали путем сравнения с эталонными образцами TPP-5661 и TPP-5657. Образцы тестировали в серии разведений в четыре раза.Fig. 11. Activity of BNP-grafted antibody constructs on hNPRA cells. The activity of purified compound samples on stable hNPRA-CHO k1 cells was assessed by comparison with reference samples TPP-5661 and TPP-5657. Samples were tested in a series of fourfold dilutions.
Фиг. 12. Различные изотипы человеческого IgG обеспечивают одинаково подходящие каркасы антител. Примерное определение активности соединений 9, 33, 65, 91, 127 и 191 IgG1 (TPP-10294, TPP-10277, TPP-10279, TPP-10282, TPP-10269 и TPP-10355, соответственно), изотипов IgG2 и IgG4. Активность очищенных образцов соединения на стабильных клетках hNPRA-CHO k1 оценивали путем сравнения с контрольными образцами соединения 117 человеческого IgG1 TPP-5661 и соединения 209 человеческого IgG1 TPP-5657. Образцы тестировали в серии разведений в четыре разаFig. 12. Different isotypes of human IgG provide equally suitable antibody scaffolds. Approximate determination of the activity of IgG1 compounds 9, 33, 65, 91, 127 and 191 (TPP-10294, TPP-10277, TPP-10279, TPP-10282, TPP-10269 and TPP-10355, respectively), IgG2 and IgG4 isotypes. The activity of purified compound samples on stable hNPRA-CHO k1 cells was assessed by comparison with control samples of TPP-5661 human IgG1 compound 117 and TPP-5657 human IgG1 compound 209. Samples were tested in a series of fourfold dilutions
Фиг. 13. Одинаково подходящие каркасы антител IgG происходят из разных видов. Примерное определение активности соединения 117 человеческого IgG1 (TPP-5661) и соединения 9 человеческого IgG1 (TPP-10294) и их нечеловеческих аналогов IgG1. Активность очищенных образцов соединения на стабильных клетках hNPRA-CHO k1 оценивали путем сравнения с контрольным образцом соединения 209 человеческого IgG1 (TPP-5657). Образцы тестировали в серии разведений в четыре раза.Fig. 13. Equally suitable IgG antibody scaffolds come from different species. Approximate determination of the activity of human IgG1 compound 117 (TPP-5661) and human IgG1 compound 9 (TPP-10294) and their non-human IgG1 analogues. The activity of purified compound samples on stable hNPRA-CHO k1 cells was assessed by comparison with a control sample of human IgG1 compound 209 (TPP-5657). Samples were tested in a series of fourfold dilutions.
Фиг. 14. Одинаково подходящие каркасы антител человека IgG происходят из различных последовательностей зародышевой линии. Активность очищенных образцов соединения на стабильных клетках hNPRA-CHO k1 оценивали путем сравнения с эталонным образцом TPP-10992. Образцы тестировали в серии разведений в четыре раза.Fig. 14. Equally suitable human IgG antibody frameworks are derived from different germline sequences. The activity of purified compound samples on stable hNPRA-CHO k1 cells was assessed by comparison with the reference sample TPP-10992. Samples were tested in a series of fourfold dilutions.
Фиг. 15. Защитные эффекты TPP-12899 против LPS, IL-1β и проницаемости эндотелиального барьера, индуцированной тромбином, как оценено с помощью измерения импеданса в реальном времени.Fig. 15. Protective effects of TPP-12899 against LPS, IL-1β and thrombin-induced endothelial barrier permeability as assessed by real-time impedance measurements.
Фиг. 16. Терапевтические эффекты TPP-13992 на выживаемость (A), прирост массы тела (B), соотношение белок/креатинин в моче (C) и массу левого предсердия (D); (n=8-12 (здоровый контроль, n=5), среднее±SEM, однофакторный дисперсионный анализ по сравнению с TPP-10155 (изотип-специфическое контрольное антитело).Fig. 16. Therapeutic effects of TPP-13992 on survival (A), weight gain (B), urinary protein/creatinine ratio (C), and left atrial mass (D); (n=8-12 (healthy control, n=5), mean±SEM, one-way ANOVA compared with TPP-10155 (isotype-specific control antibody).
Фиг. 17. Гемодинамическая оценка после введения плацебо, 0,1, 0,3 и 1,0 мг/кг TPP-10992. TPP-10992 показывает дозозависимое и длительное (>5 дней) снижение артериального давления. **p<0,01, ****p<0,0001 по сравнению с группой плацебо с использованием однофакторного теста ANOVA для повторных измерений с критерием множественного сравнения Тьюки.Fig. 17. Hemodynamic assessment after administration of placebo, 0.1, 0.3 and 1.0 mg/kg TPP-10992. TPP-10992 shows a dose-dependent and long-lasting (>5 days) reduction in blood pressure. **p<0.01, ****p<0.0001 compared with placebo group using one-way repeated measures ANOVA test with Tukey's multiple comparison test.
ПримерыExamples
Пример 1. Конструкция кандидата TPP-5661Example 1: TPP-5661 Candidate Design
Кандидат TPP-5661 конструировали посредством слияния гетерологичной аминокислотной последовательности, содержащей Ntls, крысиный ANP дикого типа и Ctls, с C-концом HV 3-23 (SEQ ID NO 85) посредством замещения двух C-концевых остатков HV 3-23 на два N-концевых остатка гетерологичной аминокислотной последовательности, и с N-концом IGHJ1 (SEQ ID NO 86) посредством замещения девяти N-концевых остатков IGHJ1 на 9 C-концевых остатка гетерологичной аминокислотной последовательности. Соответствующая последовательность тяжелой цепи полной длины SEQ ID NO 67 дополнительно содержит аминокислотную последовательность Constant-H (SEQ ID NO 87).Candidate TPP-5661 was constructed by fusing a heterologous amino acid sequence containing Ntls, wild-type rat ANP and Ctls to the C terminus of HV 3-23 (SEQ ID NO 85) by replacing the two C-terminal residues of HV 3-23 with two N- terminal residues of the heterologous amino acid sequence, and with the N-terminus of IGHJ1 (SEQ ID NO 86) by replacing the nine N-terminal residues of IGHJ1 with the 9 C-terminal residues of the heterologous amino acid sequence. The corresponding full length heavy chain sequence SEQ ID NO 67 further contains the amino acid sequence Constant-H (SEQ ID NO 87).
Спаривание последовательности тяжелой цепи полной длины SEQ ID NO 67, несущей вставленный ANP крысы (rANP), с последовательностью легкой цепи полной длины SEQ ID NO 66, выполненное путем объединения последовательностей LV 1-40 (SEQ ID NO 88), IGLJ2 (SEQ ID NO 89) и Constant-L (SEQ ID NO 90) дает полный IgG кандидат TPP-5661 (см. Таблицу 1).Pairing of the full length heavy chain sequence SEQ ID NO 67 carrying the inserted rat ANP (rANP) with the full length light chain sequence SEQ ID NO 66, made by combining the sequences LV 1-40 (SEQ ID NO 88), IGLJ2 (SEQ ID NO 89) and Constant-L (SEQ ID NO 90) gives the full IgG candidate TPP-5661 (see Table 1).
Ниже показана последовательность тяжелой цепи полной длины (SEQ ID NO 67); включенная гетерологичная аминокислотная последовательность (Ntls-rANP-Ctls) подчеркнута; последовательности, полученные из HV 3-23 и IGHJ1, выделены жирным шрифтом:The full length heavy chain sequence (SEQ ID NO 67) is shown below; the included heterologous amino acid sequence (Ntls-rANP-Ctls) is underlined; sequences derived from HV 3-23 and IGHJ1 are in bold:
EVQLLESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSSYAMSWVRQAPGKGLEWVSAISGSGGSTYYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCTSVHQETKKYQSSPDGGSGGSLRRSSCFGGRIDRIGAQSGLGCNSFRYGSYSYTYNYEWHVDVWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGEVQLLESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSSYAMSWVRQAPGKGLEWVSAISGSGGSTYYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCTSVHQETKKYQSSPDGGSGGSLRRSSCFGGRIDRIGAQSGLGCNSFRYGSYSYTYNYEWHVDVWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPE PVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKA KGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPG
Сконструированная и синтезированная конструкция антитела была клонирована в соответствии с хорошо известными в данной области техники методами и подтверждена секвенированием ДНК с использованием плазмида-специфических олигонуклеотидов.The designed and synthesized antibody construct was cloned according to methods well known in the art and confirmed by DNA sequencing using plasmid-specific oligonucleotides.
Пример 2. Вставка NP в участки CDR антитела приводит к увеличенному времени полужизни в сывороткеExample 2 Insertion of NP into Antibody CDR Regions Results in Increased Serum Half-Life
Определение фармакокинетических параметров in vivoDetermination of pharmacokinetic parameters in vivo
Фармакокинетические параметры TPP-10992 (SEQ ID NO 76 и SEQ ID NO 66) и TPP-5661 (SEQ ID NO 67 и SEQ ID NO 66) определяли после внутривенного введения 5 мг/кг самцам крыс Wistar (n=3). TPP-10992 и TPP-5661 вводили в виде болюса через хвостовую вену. Образцы крови собирали из яремной вены через ранее имплантированные катетеры с временными интервалами до 14 дней (336 часов). Образованную EDTA-плазму хранили при -20°С до дальнейшего анализаThe pharmacokinetic parameters of TPP-10992 (SEQ ID NO 76 and SEQ ID NO 66) and TPP-5661 (SEQ ID NO 67 and SEQ ID NO 66) were determined after intravenous administration of 5 mg/kg to male Wistar rats (n=3). TPP-10992 and TPP-5661 were administered as a bolus via the tail vein. Blood samples were collected from the jugular vein through previously implanted catheters at time intervals of up to 14 days (336 hours). The resulting EDTA plasma was stored at -20°C until further analysis.
Количественное определение TPP-10992 и TPP-5661 в образцах плазмы проводили с использованием формата анти-IgG человека анализа ELISA(иммуноферментный анализ). Фармакокинетические параметры рассчитывали на основе временных профилей концентрации в плазме с использованием некомпартментного анализа данных.Quantification of TPP-10992 and TPP-5661 in plasma samples was performed using the anti-human IgG ELISA (enzyme-linked immunosorbent assay) format. Pharmacokinetic parameters were calculated from time profiles of plasma concentrations using non-compartmental data analysis.
Средние концентрации в плазме TPP-10992 и TPP-5661 после внутривенного введения с течением времени графически изображены на Фиг. 1.The mean plasma concentrations of TPP-10992 and TPP-5661 after intravenous administration over time are graphically depicted in FIG. 1.
Средний клиренс и время полужизни TPP-10992 и TPP-5661 приведены в Таблице 2 ниже.The average clearance and half-life of TPP-10992 and TPP-5661 are shown in Table 2 below.
Таблица 2. Средний клиренс (CL) и время полужизни (t1/2) для TPP-10992 и TPP-5661 после внутривенного введения 5 мг/кг крысе.Table 2. Mean clearance (CL) and half-life (t1/2 ) for TPP-10992 and TPP-5661 after intravenous administration of 5 mg/kg in rats.
Определение фармакокинетических параметров in vivoDetermination of pharmacokinetic parameters in vivo
Фармакокинетические параметры TPP-12897 определяли после внутрибрюшинного введения самкам мышей Balb/c (n=3). Образцы крови собирали в период от 15 минут до 72 часов после применения. Образованную EDTA-плазму хранили при -20°С до дальнейшего анализа. Количественное определение TPP-12897 в образцах плазмы проводили с помощью анти-IgG человека формата анализа ELISA (иммуноглобулин G).Pharmacokinetic parameters of TPP-12897 were determined after intraperitoneal administration to female Balb/c mice (n=3). Blood samples were collected from 15 minutes to 72 hours after application. The resulting EDTA plasma was stored at -20°C until further analysis. Quantification of TPP-12897 in plasma samples was performed using an anti-human IgG ELISA (immunoglobulin G) assay format.
Фармакокинетические параметры рассчитывали из временных профилей концентрации в плазме с использованием некомпартментного анализа данных.Pharmacokinetic parameters were calculated from time profiles of plasma concentrations using non-compartmental data analysis.
Средние концентрации TPP-12897 в плазме после внутрибрюшинного введения с течением времени графически изображены на Фиг. 2.The mean plasma concentrations of TPP-12897 following intraperitoneal administration over time are graphically depicted in FIG. 2.
Средняя площадь под кривой (AUC) и время полужизни TPP-12897 приведены в Таблице 3 ниже.The average area under the curve (AUC) and half-life of TPP-12897 are shown in Table 3 below.
Таблица 3. Средняя площадь под кривой (AUC) и время полужизни (t1/2) для TPP-12897 после внутрибрюшинного введения 5 мг/кг мышам.Table 3. Average area under the curve (AUC) and half-life (t1/2 ) for TPP-12897 after intraperitoneal administration of 5 mg/kg to mice.
Пример 3. In vitro, ex vivo и in vivo эффективность ANP-привитых антителExample 3. In vitro, ex vivo and in vivo effectiveness of ANP-grafted antibodies
Данные по активности ANP-привитых антител на клеточной линии рецептора NPR-AData on the activity of ANP-grafted antibodies on the NPR-A receptor cell line
Клеточную линию крысиного рецептора ANP (NPR-A) на основе люминесценции получали, как описано ранее (Wunder et al. (2013), Eur J Pharmacol. 698: 131). Соответственно, линия клеток крысиного рецептора ANP (NPR-A) на основе флуоресценции была получена путем котрансфекции линии клеток CHO, стабильно экспрессирующих флуоресцентный кальций-сенсорный белок GCaMP6, плазмидными конструкциями, кодирующими CNGA2 (биосенсор cGMP) и крысиный NPR-A.A luminescence-based rat ANP receptor (NPR-A) cell line was generated as described previously (Wunder et al. (2013), Eur J Pharmacol. 698: 131). Accordingly, a fluorescence-based rat ANP receptor (NPR-A) cell line was generated by cotransfecting a CHO cell line stably expressing the fluorescent calcium sensing protein GCaMP6 with plasmid constructs encoding CNGA2 (a cGMP biosensor) and rat NPR-A.
Клетки GCaMP6 рецептора ANP культивировали в течение одного дня на черных 384-луночных микротитровальных планшетах с прозрачным дном (2500 клеток/лунка). После удаления среды для культивирования клеток репортерные клетки загружали в течение 20 мин с Tyrode (130 мМ NaCl, 5 мМ KCl, 2 мМ CaCl2, 20 мМ HEPES, 1 мМ MgCl2, 4,8 мМ NaHCO3 при pH 7,4), содержащим черный маскирующий краситель, при 37°C и 5% CO2. IBMX (0,2 мМ) использовали для предотвращения расщепления cGMP эндогенными фосфодиэстеразами.ANP receptor GCaMP6 cells were cultured for one day in black 384-well clear-bottom microtiter plates (2500 cells/well). After removal of cell culture medium, reporter cells were loaded for 20 min with Tyrode (130 mM NaCl, 5 mM KCl, 2 mMCaCl2 , 20 mM HEPES, 1 mM MgCl2, 4.8 mMNaHCO3 at pH 7.4), containing black masking dye, at 37°C and 5% CO2 . IBMX (0.2 mM) was used to prevent cGMP degradation by endogenous phosphodiesterases.
Измерения флуоресценции (3 мин, кинетический режим) начинали сразу после добавления агониста. Рецепторные лиганды добавляли в Tyrode, содержащий черный маскирующий краситель и 0,1% BSA. Измерения проводили на FLIPR Tetra®.Fluorescence measurements (3 min, kinetic mode) began immediately after the addition of the agonist. Receptor ligands were added to Tyrode containing black masking dye and 0.1% BSA. Measurements were carried out on FLIPR Tetra®.
ANP (Bachem, H-2100) стимулировал зависимые от концентрации сигналы флуоресценции на линии клеток NPR-A со значениями EC50 0,22 нМ. TPP-5661 и TPP-10992 стимулировали линию репортерных клеток рецептора ANP крысы со значениями EC50 17 нМ и 180 нМ, соответственно. Конструкция контрольного антитела TPP-5657 не стимулировала значимо клеточную линию NPR-A (тестировали до максимальной концентрации 460 нМ).ANP (Bachem, H-2100) stimulated concentration-dependent fluorescence signals in the NPR-A cell line with EC50 values of 0.22 nM. TPP-5661 and TPP-10992 stimulated a rat ANP receptor reporter cell line with EC50 values of 17 nM and 180 nM, respectively. The control antibody construct TPP-5657 did not significantly stimulate the NPR-A cell line (tested to a maximum concentration of 460 nM).
Чтобы определить чувствительность к протеолитической деградации, активность рецепторных лигандов также была охарактеризована после 4 часов инкубации с 0,6 мкг/мл нейтральной эндопептидазы (NEP, R&D Systems, 1182-ZNC) или 0,6 мкг/мл фермента, разрушающего инсулин (IDE, Merck, 407241-50UG) при 37°C.To determine sensitivity to proteolytic degradation, the activity of receptor ligands was also characterized after 4 hours of incubation with 0.6 μg/ml neutral endopeptidase (NEP, R&D Systems, 1182-ZNC) or 0.6 μg/ml insulin degrading enzyme (IDE, Merck, 407241-50UG) at 37°C.
На Фиг. 3 графически изображена стабильность ANP (A-C), TPP-10992 (D-F) и TPP-5661 (G-I) от протеолитического расщепления. Как показано на Фиг. 3, натрийуретический пептид ANP (Bachem, H-2100) показал высокую чувствительность к расщеплению NEP и IDE. Напротив, TPP-5661 и TPP-10992 показали высокую устойчивость к протеолитическому расщеплению NEP и IDE.In FIG. 3 graphically depicts the stability of ANP (A-C), TPP-10992 (D-F), and TPP-5661 (G-I) against proteolytic degradation. As shown in FIG. 3, the natriuretic peptide ANP (Bachem, H-2100) showed high sensitivity to NEP and IDE cleavage. In contrast, TPP-5661 and TPP-10992 showed high resistance to proteolytic degradation by NEP and IDE.
Данные по активности BNP-привитых антител на клеточной линии рецептора NPR-AData on the activity of BNP-grafted antibodies on the NPR-A receptor cell line
Клеточную линию крысиного рецептора BNP (NPR-A) на основе люминесценции получали, как описано ранее (Wunder et al. (2013), Eur J Pharmacol. 698: 131). Соответственно, линия клеток крысиного рецептора BNP (NPR-A) на основе флуоресценции была получена путем котрансфекции линии клеток CHO, стабильно экспрессирующих флуоресцентный кальций-сенсорный белок GCaMP6, плазмидными конструкциями, кодирующими CNGA2 (биосенсор cGMP) и крысиный NPR-A.A luminescence-based rat BNP receptor (NPR-A) cell line was generated as previously described (Wunder et al. (2013), Eur J Pharmacol. 698: 131). Accordingly, a fluorescence-based rat BNP receptor (NPR-A) cell line was generated by cotransfecting a CHO cell line stably expressing the fluorescent calcium sensing protein GCaMP6 with plasmid constructs encoding CNGA2 (a cGMP biosensor) and rat NPR-A.
Клетки GCaMP6 рецептора BNP культивировали в течение одного дня на черных 384-луночных микротитровальных планшетах с прозрачным дном (2500 клеток/лунка). После удаления среды для культивирования клеток репортерные клетки загружали в течение 20 мин с Tyrode (130 мМ NaCl, 5 мМ KCl, 2 мМ CaCl2, 20 мМ HEPES, 1 мМ MgCl2, 4,8 мМ NaHCO3 при pH 7,4), содержащим черный маскирующий краситель, при 37°C и 5% CO2. IBMX (0,2 мМ) использовали для предотвращения расщепления cGMP эндогенными фосфодиэстеразами.GCaMP6 BNP receptor cells were cultured for one day in black 384-well clear-bottom microtiter plates (2500 cells/well). After removal of cell culture medium, reporter cells were loaded for 20 min with Tyrode (130 mM NaCl, 5 mM KCl, 2 mMCaCl2 , 20 mM HEPES, 1 mM MgCl2, 4.8 mMNaHCO3 at pH 7.4), containing black masking dye, at 37°C and 5% CO2 . IBMX (0.2 mM) was used to prevent cGMP degradation by endogenous phosphodiesterases.
Измерения флуоресценции (3 мин, кинетический режим) начинали сразу после добавления агониста. Рецепторные лиганды добавляли в Tyrode, содержащий черный маскирующий краситель и 0,1% BSA. Измерения проводили на FLIPR Tetra®.Fluorescence measurements (3 min, kinetic mode) began immediately after the addition of the agonist. Receptor ligands were added to Tyrode containing black masking dye and 0.1% BSA. Measurements were carried out on FLIPR Tetra®.
BNP (Bachem, H-5968) стимулировал зависимые от концентрации сигналы флуоресценции на линии клеток NPR-A со значением EC50 2,9 нМ. TPP-9902, TPP-11153, TPP-1154, TPP-11155, TPP-11156 и TPP-11157 стимулировали репортерную клеточную линию рецептора BNP крысы со значениями EC50 2,3 мкМ,>1,9 мкМ, 7 нМ, 12 нМ, 1,2 мкМ и 11 нМ, соответственно. Конструкция контрольного антитела TPP-5657 не стимулировала значимо клеточную линию NPR-A (тестировали до максимальной концентрации 460 нМ).BNP (Bachem, H-5968) stimulated concentration-dependent fluorescence signals in the NPR-A cell line with an EC50 value of 2.9 nM. TPP-9902, TPP-11153, TPP-1154, TPP-11155, TPP-11156 and TPP-11157 stimulated a rat BNP receptor reporter cell line with EC50 values of 2.3 µM, >1.9 µM, 7 nM, 12 nM , 1.2 µM and 11 nM, respectively. The control antibody construct TPP-5657 did not significantly stimulate the NPR-A cell line (tested to a maximum concentration of 460 nM).
Чтобы определить чувствительность к протеолитическому расщеплению, активность рецепторных лигандов также была охарактеризована после 4 часов инкубации с 0,6 мкг/мл нейтральной эндопептидазы (NEP, R&D Systems, 1182-ZNC) или 0,6 мкг/мл фермента, разрушающего инсулин (IDE, Merck, 407241-50UG) при 37°C. Натрийуретический пептид BNP (Bachem, H-5968) показал высокую чувствительность к расщеплению NEP и IDE. Напротив, TPP-11155 и TPP-11157 показали высокую устойчивость к протеолитическому расщеплению NEP и IDE.To determine sensitivity to proteolytic cleavage, the activity of receptor ligands was also characterized after 4 hours of incubation with 0.6 μg/ml neutral endopeptidase (NEP, R&D Systems, 1182-ZNC) or 0.6 μg/ml insulin degrading enzyme (IDE, Merck, 407241-50UG) at 37°C. The natriuretic peptide BNP (Bachem, H-5968) showed high sensitivity to NEP and IDE cleavage. In contrast, TPP-11155 and TPP-11157 showed high resistance to proteolytic degradation by NEP and IDE.
На Фиг. 4 графически изображена устойчивость BNP (A-C) и TPP-11155 (D-F) к протеолитическому расщеплению.In FIG. 4 graphically depicts the resistance of BNP (A-C) and TPP-11155 (D-F) to proteolytic degradation.
Данные по активности CNP-привитых антител на клеточной линии рецептора NPR-BData on the activity of CNP-grafted antibodies on the NPR-B receptor cell line
Была создана линия репортерных клеток рецептора CNP крысы (NPR-B) на основе люминесценции, и измерения люминесценции были выполнены, как описано ранее (Wunder et al. (2013), Eur J Pharmacol. 698: 131).A luminescence-based rat CNP receptor (NPR-B) reporter cell line was generated and luminescence measurements were performed as previously described (Wunder et al. (2013), Eur J Pharmacol. 698: 131).
Клетки рецептора CNP (2500 клеток/лунка) культивировали в течение 1 дня на непрозрачных 384-луночных микротитровальных планшетах. После удаления среды для культивирования клеток клетки нагружали в течение 3 ч 2,5 мкг/мл целентеразина в не содержащем Ca2+Tyrode (130 мМ NaCl, 5 мМ KCl, 20 мМ HEPES, 1 мМ MgCl2, 4,8 мМ NaHCO3 при pH 7,4) при 37°C и 5% CO2. Рецепторные лиганды добавляли в течение 10 мин в не содержащий Ca2+Tyrode, содержащий 0,1% BSA. IBMX (0,2 мМ) использовали для предотвращения расщепления cGMP эндогенными фосфодиэстеразами. Непосредственно перед добавлением ионов кальция (конечная концентрация 3 мМ) измерения люминесценции начинали с использованием камеры устройства с зарядовой связью (CCD) в светонепроницаемой коробке. Люминесценцию контролировали непрерывно в течение 50 с.CNP receptor cells (2500 cells/well) were cultured for 1 day in opaque 384-well microtiter plates. After removal of cell culture medium, cells were loaded for 3 h with 2.5 μg/ml coelenterazine in Ca2+ -free Tyrode (130 mM NaCl, 5 mM KCl, 20 mM HEPES, 1 mM MgCl2 , 4.8 mM NaHCO3 at pH 7.4) at 37°C and 5% CO2 . Receptor ligands were added over 10 min to Ca2+ -free Tyrode containing 0.1% BSA. IBMX (0.2 mM) was used to prevent cGMP degradation by endogenous phosphodiesterases. Immediately before the addition of calcium ions (final concentration 3 mM), luminescence measurements were started using a charge-coupled device (CCD) chamber in a light-proof box. Luminescence was monitored continuously for 50 s.
CNP (Bachem, H-1296) стимулировал зависимые от концентрации сигналы люминесценции на клеточной линии NPR-B крыс со значением EC50 0,024 нМ. TPP-9465, TPP-12377, TPP-12378, TPP-12897 и TPP-12899 стимулировали линию репортерных клеток рецептора CNP крысы со значениями EC50 5,2 нМ, 4,1 нМ, 25 нМ, 10 нМ и 3,2 нМ, соответственно. TPP-12374 стимулировал репортерную клеточную линию рецептора CNP крысы со значениями EC50 150 нМ, а TPP-12375, TPP-12376 показали лишь слабое указание активности.CNP (Bachem, H-1296) stimulated concentration-dependent luminescence signals in the rat NPR-B cell line with an EC50 value of 0.024 nM. TPP-9465, TPP-12377, TPP-12378, TPP-12897 and TPP-12899 stimulated the rat CNP receptor reporter cell line with EC50 values of 5.2 nM, 4.1 nM, 25 nM, 10 nM and 3.2 nM , respectively. TPP-12374 stimulated a rat CNP receptor reporter cell line with EC50 values of 150 nM, and TPP-12375, TPP-12376 showed only a weak indication of activity.
Чтобы определить чувствительность к протеолитическому расщеплению, активность рецепторных лигандов также была охарактеризована после 4 часов инкубации с 0,6 мкг/мл нейтральной эндопептидазы (NEP, R&D Systems, 1182-ZNC) или 0,6 мкг/мл фермента, разрушающего инсулин (IDE, Merck, 407241-50UG) при 37°CTo determine sensitivity to proteolytic cleavage, the activity of receptor ligands was also characterized after 4 hours of incubation with 0.6 μg/ml neutral endopeptidase (NEP, R&D Systems, 1182-ZNC) or 0.6 μg/ml insulin degrading enzyme (IDE, Merck, 407241-50UG) at 37°C
В отличие от натрийуретического пептида CNP (Bachem, H-1296), TPP-12377, TPP-12897 и TPP-12899 показали высокую устойчивость к протеолитическому расщеплению под действием NEP и IDE.In contrast to the natriuretic peptide CNP (Bachem, H-1296), TPP-12377, TPP-12897, and TPP-12899 showed high resistance to proteolytic degradation by NEP and IDE.
На Фиг. 5 графически изображена устойчивость CNP (A-C) и TPP-12897 (D-F) к протеолитическому расщеплению.In FIG. Figure 5 graphically depicts the resistance of CNP (A-C) and TPP-12897 (D-F) to proteolytic cleavage.
Данные по активности антител, привитых ANP, определяли с выделенными аортными кольцами крысANP-grafted antibody activity data were determined with isolated rat aortic rings
Все эксперименты проводили в соответствии с установленными правилами и одобрены местным комитетом по экспериментам на животных. Самцов крыс Sprague-Dawley (весом 250-300 г) анестезировали пентобарбиталом натрия (40 мг/кг внутрибрюшинно), умерщвляли декапитацией и обескровливали. Грудную аорту вырезали и помещали в ледяной буфер Кребса следующего состава: 130 мМ NaCl, 14,9 мМ NaHCO3, 5,5 мМ декстрозы, 4,7 мМ KCl, 1,18 мМ KH2PO4, 1,17 мМ MgSO47H2O и 1,6 мМ CaCl22H2O. Сосуд вставляли в чашку Сильгарда Петри, наполненную охлажденным раствором Кребса, очищали от жира и соединительной ткани и разрезали на кольцевые сегменты длиной примерно 3-4 мм. аортные кольца устанавливали вертикально в камеры объемом 50 мл (ADIinstruments), содержащей раствор Кребса, при 37°C, непрерывно барботируемый смесью 95% O2 и 5% CO2. Изменения изометрической силы регистрировали с помощью системы сбора данных PowerLab (программное обеспечение Lab Chart 7.0)All experiments were performed in accordance with established guidelines and approved by the local Animal Experimentation Committee. Male Sprague-Dawley rats (weighing 250–300 g) were anesthetized with sodium pentobarbital (40 mg/kg i.p.), sacrificed by decapitation, and bled. The thoracic aorta was excised and placed in ice-cold Krebs buffer with the following composition: 130 mM NaCl, 14.9 mM NaHCO3 , 5.5 mM dextrose, 4.7 mM KCl, 1.18 mM KH2 PO4 , 1.17 mM MgSO4 7H2 O and 1.6 mm CaCl2 2H2 O. The vessel was inserted into a Sylgard Petri dish filled with a cooled Krebs solution, cleaned of fat and connective tissue and cut into ring segments approximately 3-4 mm long. aortic rings were mounted vertically in 50 ml chambers (ADIinstruments) containing Krebs solution at 37°C, continuously bubbled with a mixture of 95% O2 and 5% CO2 . Changes in isometric strength were recorded using a PowerLab data acquisition system (Lab Chart 7.0 software)
После периода уравновешивания аортные кольца обрабатывали 80 мМ KCl для проверки жизнеспособности ткани. Затем определяли целостность эндотелия препаратов путем проверки чувствительности к ацетилхолину (ACh, 1 мкМ) в сосудах, предварительно сокращенных фенилэфрином (PE, 1 мкМ). После вымывания и периода уравновешивания использовали фенилэфрин (PE, 1 мкМ) для индукции сокращения, после чего натрийуретический пептид и IgG, привитые натрийуретическим пептидом, оценивали на вазорелаксацию. Пептид крысиного ANP (ADH-GM-10057T, Santai Labs) использовали в качестве эталона.After the equilibration period, aortic rings were treated with 80 mM KCl to test tissue viability. The endothelial integrity of the preparations was then determined by testing sensitivity to acetylcholine (ACh, 1 μM) in vessels preconstricted with phenylephrine (PE, 1 μM). After a washout and equilibration period, phenylephrine (PE, 1 μM) was used to induce contraction, after which natriuretic peptide and natriuretic peptide-grafted IgG were assessed for vasorelaxation. Rat ANP peptide (ADH-GM-10057T, Santai Labs) was used as reference.
Как показано на Фиг. 6, как пептид ANP, так и TPP-10992 индуцировали дозозависимую вазодилатацию в PE-сокращенных аортных кольцах.As shown in FIG. 6, both ANP peptide and TPP-10992 induced dose-dependent vasodilation in PE-contracted aortic rings.
Как показано на Фиг. 7, как пептид ANP, так и TPP-5661 индуцировали дозозависимую вазодилатацию в PE-сокращенных аортных кольцах.As shown in FIG. 7, both ANP peptide and TPP-5661 induced dose-dependent vasodilation in PE-contracted aortic rings.
Данные по активности антител, привитых ANP, полученные на крысах в сознанииData on the activity of antibodies inoculated with ANP obtained in conscious rats
Артериальное давление и частоту сердечных сокращений контролировали у свободно движущихся находящихся в сознании животных с помощью радиотелеметрии (Data Sciences International). Для этих исследований использовали самок крыс со спонтанной гипертензией (SHR/N Crl BR, Charles River) с массой тела 210-300 г.Всех животных содержали в индивидуальных клетках при температуре окружающей среды 22-24°C и поддерживали 12-часовой цикл свет/темнота со свободным доступом к стандартному лабораторному корму для крыс и воде. Имплантацию телеметра (HD-10, DSI) проводили как минимум за 14 дней до того, как животных использовали для измерения артериального давления. Операция проводилась в асептических условиях. После бритья брюшной стенки был сделан разрез брюшной полости по средней линии, и сенсорный катетер, заполненный жидкостью, был вставлен выше по ходу потока в обнаженную нисходящую аорту между подвздошной бифуркацией и почечными артериями. Согласно рекомендациям DSI, кончик телеметрического катетера располагали каудально по отношению к почечным артериям и закрепляли тканевым клеем. Корпус передатчика прикрепляли к внутренней брюшной стенке перед закрытием брюшной полости. Для послеоперационной защиты от инфекций и против боли вводили разовую дозу антибиотика (Oxytetracyclin® 10%, 60 мг/кг подкожно, 0,06 мл/100 г массы тела, Beta-Pharma GmbH & Co, Германия) и анальгетика (Rimadyl®, 4 мг/кг подкожно, Pfizer, Германия). Сбор телеметрических данных выполнялся с помощью программного обеспечения DSI, которое было предопределено для выборки гемодинамических данных в течение 10 секунд, повторяемых каждые 5 минут.Сбор данных был начат менее чем за 2 часа до введения лекарственного средства и закончен после завершения циклов измерения. Данные выражены в% от базовых значений±SEM для по меньшей мере 4 животных на группу. Базальное значение для каждого животного рассчитывали как среднее значение, измеренное за два часа до применения вещества (7:00 - 9:00 утра). Затем данные выражали как среднее значение каждые полчаса, начиная с 15 минут после применения. Всем животным вводили однократное внутрибрюшинное (ip) введение тестируемых веществ, растворенных в фосфатно-солевом буфере (PBS). Введение лекарственного средства проводили в момент времени 9:00 утра (0 часов).Blood pressure and heart rate were monitored in freely moving, conscious animals using radiotelemetry (Data Sciences International). For these studies, female spontaneously hypertensive rats (SHR/N Crl BR, Charles River) weighing 210–300 g were used. All animals were housed in individual cages at an ambient temperature of 22–24°C and maintained on a 12-hour light/light cycle. darkness with free access to standard laboratory rat chow and water. Telemeter implantation (HD-10, DSI) was performed at least 14 days before animals were used for blood pressure measurements. The operation was carried out under aseptic conditions. After shaving the abdominal wall, a midline abdominal incision was made and a fluid-filled sensing catheter was inserted upstream into the exposed descending aorta between the iliac bifurcation and the renal arteries. According to DSI guidelines, the tip of the telemetry catheter was positioned caudal to the renal arteries and secured with tissue adhesive. The transmitter body was attached to the inner abdominal wall before closure of the abdominal cavity. For postoperative protection against infection and pain, a single dose of antibiotic (Oxytetracyclin® 10%, 60 mg/kg subcutaneously, 0.06 ml/100 g body weight, Beta-Pharma GmbH & Co, Germany) and analgesic (Rimadyl®, 4 mg/kg subcutaneously, Pfizer, Germany). Telemetry data collection was performed using DSI software, which was predefined to sample hemodynamic data for 10 seconds, repeated every 5 minutes. Data collection began less than 2 hours before drug administration and ended after completion of the measurement cycles. Data are expressed as % of baseline ± SEM for at least 4 animals per group. The basal value for each animal was calculated as the average of the values measured two hours before application of the substance (7:00 - 9:00 am). Data were then expressed as an average every half hour starting 15 minutes after application. All animals received a single intraperitoneal (ip) injection of test substances dissolved in phosphate-buffered saline (PBS). The drug was administered at 9:00 am (0 hours).
Гемодинамический эффект пептида ANP графически изображен на Фиг. 8. Гемодинамический эффект TPP-5661 графически изображен на Фиг. 9. Гемодинамический эффект TPP-10992 графически изображен на Фиг. 10The hemodynamic effect of ANP peptide is graphically depicted in FIG. 8. The hemodynamic effect of TPP-5661 is graphically depicted in FIG. 9. The hemodynamic effect of TPP-10992 is graphically depicted in FIG. 10
Пример 4. Получение различных конструкций антитела, привитого NPExample 4: Preparation of Various NP-Grafted Antibody Constructs
Для конструкций с включением натрийуретического пептида в участок CDR, отличный от CDRH3, предположительно функционально нейтральный CDRH3 был сконструирован путем слияния удлинения из трех остатков Leu Thr Gly (IGHD7-27*01) с С-концом HV 3-23 и N-концом IGHJ1 (по сравнению с Примером 1). Соответствующая последовательность тяжелой цепи полной длины SEQ ID NO 65 дополнительно содержит аминокислотную последовательность Constant-H (SEQ ID NO 87).For constructs incorporating a natriuretic peptide into a CDR region other than CDRH3, a putative functionally neutral CDRH3 was constructed by fusing a three-residue extension of Leu Thr Gly (IGHD7-27*01) to the C terminus of HV 3-23 and the N terminus of IGHJ1 ( compared to Example 1). The corresponding full length heavy chain sequence SEQ ID NO 65 further contains the amino acid sequence Constant-H (SEQ ID NO 87).
Спаривание последовательности тяжелой цепи полной длины SEQ ID NO 65 без какой-либо вставки натрийуретического пептида с последовательностью легкой цепи полной длины SEQ ID NO 66, описанной в примере 1, дает синтетический и предположительно нейтральный IgG отрицательный контроль TPP-5657.Pairing the full length heavy chain sequence of SEQ ID NO 65 without any natriuretic peptide insertion with the full length light chain sequence of SEQ ID NO 66 described in Example 1 provides the synthetic and presumably neutral IgG negative control TPP-5657.
Сконструированная и синтезированная конструкция антитела была клонирована в соответствии с хорошо известными в данной области техники методами и подтверждена секвенированием ДНК с использованием плазмидоспецифичных олигонуклеотидов.The designed and synthesized antibody construct was cloned according to methods well known in the art and confirmed by DNA sequencing using plasmid-specific oligonucleotides.
Исходя из этого каркаса антитела были созданы следующие конструкции антител с привитыми ANP.From this antibody scaffold, the following ANP-grafted antibody constructs were generated.
Таблица 4. Конструирование конструкций антитела, привитого ANPTable 4. Construction of ANP-grafted antibody constructs
N-конце-вая1#aa
N-terminal1
C-конце-вая2#aa
C-terminal2
1 Число аминокислотных остатков, присутствующих между соответствующим N-концевым эталонным аминокислотным остатком и первой аминокислотой вставленного натрийуретического пептида;1 The number of amino acid residues present between the corresponding N-terminal reference amino acid residue and the first amino acid of the inserted natriuretic peptide;
2 Число аминокислотных остатков, присутствующих между последней аминокислотой вставленного натрийуретического пептида и соответствующим C-концевым эталонным аминокислотным остатком.2 The number of amino acid residues present between the last amino acid of the inserted natriuretic peptide and the corresponding C-terminal reference amino acid residue.
Таблица 4 (продолжение). Конструирование конструкций антитела с привитым ANPTable 4 (continued). Construction of ANP-grafted antibody constructs
3 N-концевая последовательность соответствует ближайшей соседней N-концевой аминокислоте от вставленного натрийуретического пептида, плюс аминокислотное удлинение, присутствующее между указанной эталонной аминокислотой и первым аминокислотным остатком вставленного натрийуретического пептида3 N-terminal sequence corresponds to the nearest adjacent N-terminal amino acid from the inserted natriuretic peptide, plus the amino acid extension present between the specified reference amino acid and the first amino acid residue of the inserted natriuretic peptide
4 C-концевая последовательность соответствует аминокислотному удлинению, присутствующему между последним аминокислотным остатком вставленного натрийуретического пептида и ближайшей соседней C-концевой эталонной аминокислотой от вставленного натрийуретического пептида, плюс указанная эталонная аминокислота.4 The C-terminal sequence corresponds to the amino acid extension present between the last amino acid residue of the inserted natriuretic peptide and the nearest adjacent C-terminal reference amino acid from the inserted natriuretic peptide, plus the specified reference amino acid.
Кроме того, следующие конструкции человеческих антител IgG1 с привитыми BNP были получены на основе каркаса антител TPP-5657.In addition, the following BNP-grafted human IgG1 antibody constructs were derived from the TPP-5657 antibody scaffold.
Таблица 5. Конструирование конструкций антитела, привитого BNPTable 5. Construction of BNP-grafted antibody constructs
N-концевая1#aa
N-terminal1
C-концевая2#aa
C-terminal2
1 Число аминокислотных остатков, присутствующих между соответствующим N-концевым эталонным аминокислотным остатком и первой аминокислотой вставленного натрийуретического пептида;1 The number of amino acid residues present between the corresponding N-terminal reference amino acid residue and the first amino acid of the inserted natriuretic peptide;
2 Число аминокислотных остатков, присутствующих между последней аминокислотой вставленного натрийуретического пептида и соответствующим C-концевым эталонным аминокислотным остатком2 Number of amino acid residues present between the last amino acid of the inserted natriuretic peptide and the corresponding C-terminal reference amino acid residue
3Соответствующее ANP соединение относится к конструкции антитела с привитым ANP с тем же локусом вставки и содержащей ту же N-концевую и C-концевую последовательность.3 A corresponding ANP compound refers to an ANP-grafted antibody construct with the same insertion locus and containing the same N-terminal and C-terminal sequence.
Таблица 5 (продолжение). Конструирование конструкций антитела, привитого BNPTable 5 (continued). Construction of BNP-grafted antibody constructs
3 N-концевая последовательность соответствует ближайшей соседней N-концевой аминокислоте от вставленного натрийуретического пептида, плюс аминокислотное удлинение, присутствующее между указанной эталонной аминокислотой и первым аминокислотным остатком вставленного натрийуретического пептида3 N-terminal sequence corresponds to the nearest adjacent N-terminal amino acid from the inserted natriuretic peptide, plus the amino acid extension present between the specified reference amino acid and the first amino acid residue of the inserted natriuretic peptide
4 C-концевая последовательность соответствует аминокислотному удлинению, присутствующему между последним аминокислотным остатком вставленного натрийуретического пептида и ближайшей соседней C-концевой эталонной аминокислотой от вставленного натрийуретического пептида, плюс указанная эталонная аминокислота4 The C-terminal sequence corresponds to the amino acid extension present between the last amino acid residue of the inserted natriuretic peptide and the nearest adjacent C-terminal reference amino acid from the inserted natriuretic peptide, plus the specified reference amino acid
Кроме того, были получены следующие конструкции IgG1 человека с привитым CNP.In addition, the following CNP-grafted human IgG1 constructs were prepared.
Таблица 6. Конструирование конструкций антител, привитых CNPTable 6. Construction of CNP-grafted antibody constructs.
N-кон-цевая1#aa
N-terminal1
C-кон-цевая2#aa
C-terminal2
pcsµg/ml
pcs
1 Число аминокислотных остатков, присутствующих между соответствующим N-концевым эталонным аминокислотным остатком и первой аминокислотой вставленного натрийуретического пептида;1 The number of amino acid residues present between the corresponding N-terminal reference amino acid residue and the first amino acid of the inserted natriuretic peptide;
2 Число аминокислотных остатков, присутствующих между последней аминокислотой вставленного натрийуретического пептида и соответствующим C-концевым эталонным аминокислотным остатком2 Number of amino acid residues present between the last amino acid of the inserted natriuretic peptide and the corresponding C-terminal reference amino acid residue
3Соответствующее ANP соединение относится к конструкции антитела с привитым ANP с тем же локусом вставки и содержащей ту же N-концевую и C-концевую последовательность3 A corresponding ANP compound refers to an ANP-grafted antibody construct with the same insertion locus and containing the same N-terminal and C-terminal sequence
Таблица 6 (продолжение). Конструирование конструкций антител, привитых CNPTable 6 (continued). Construction of CNP-grafted antibody constructs
3 N-концевая последовательность соответствует ближайшей соседней N-концевой аминокислоте от вставленного натрийуретического пептида, плюс аминокислотное удлинение, присутствующее между указанной эталонной аминокислотой и первым аминокислотным остатком вставленного натрийуретического пептида3 N-terminal sequence corresponds to the nearest adjacent N-terminal amino acid from the inserted natriuretic peptide, plus the amino acid extension present between the specified reference amino acid and the first amino acid residue of the inserted natriuretic peptide
4 C-концевая последовательность соответствует аминокислотному удлинению, присутствующему между последним аминокислотным остатком вставленного натрийуретического пептида и ближайшей соседней C-концевой эталонной аминокислотой от вставленного натрийуретического пептида, плюс указанная эталонная аминокислота4 The C-terminal sequence corresponds to the amino acid extension present between the last amino acid residue of the inserted natriuretic peptide and the nearest adjacent C-terminal reference amino acid from the inserted natriuretic peptide, plus the specified reference amino acid
Пример 5: In vitro активности полученных конструкцийExample 5: In vitro activities of the resulting constructs
Все конструкции были транзиентно экспрессированы в клетках HEK293 в соответствии с хорошо известными в данной области техники методами, с достижением плотности клеток около 2x10^6 клеток/мл, общей концентрации ДНК около 1 мкг/мл для двух плазмид, кодирующих легкую и тяжелую цепи, при 5-дневной инкубации для экспрессии.All constructs were transiently expressed in HEK293 cells according to methods well known in the art, achieving a cell density of approximately 2 x 10^6 cells/ml, a total DNA concentration of approximately 1 μg/ml for two plasmids encoding the light and heavy chains, at 5-day incubation for expression.
Необработанные образцы (rcs) были экспрессированы в объеме культуры 0,4 мл, и супернатант, отделенный центрифугированием, был непосредственно использован для тестирования. Концентрацию соединения оценивали с помощью IgG-Fc количественного анализа ELISA в соответствии с хорошо известными в данной области техники способами. Вкратце, супернатант, разведенный 1: 1500, и серия 2-кратных разведений контрольной сыворотки человека (Bethyl, RS-110-4), начиная с 400 нг/мл, были иммобилизованы на черных микротитровальных планшетах Maxisorp 384 (MTP), покрытых анти-человеческим Fc. [Sigma I2136] при разведении 1: 440 в 1x покрывающем буфере (Candor, 121125) в течение 1 часа, 37°C. После блокирования с помощью 100%-ного блока SMART (Candor, 113125) применяли анти-человеческий Fc-HRP [Sigma, A0170] при разведении 1: 10000 для обнаружения антител в rcs и эталонных образцах. Кривые зависимости от дозы эталонного образца использовали для количественной оценки концентраций соединений, показанных в таблицах 7 и 8, столбец «мкг/мл rcs». Все образцы применяли четыре раза.Raw samples (rcs) were expressed in a 0.4 ml culture volume, and the supernatant separated by centrifugation was directly used for testing. The concentration of the compound was assessed using an IgG-Fc quantitative ELISA assay according to methods well known in the art. Briefly, the supernatant, diluted 1:1500, and a series of 2-fold dilutions of control human serum (Bethyl, RS-110-4), starting at 400 ng/ml, were immobilized on black Maxisorp 384 microtiter plates (MTP) coated with anti- human Fc. [Sigma I2136] at a dilution of 1:440 in 1x coating buffer (Candor, 121125) for 1 hour, 37°C. After blocking with 100% SMART block (Candor, 113125), anti-human Fc-HRP [Sigma, A0170] was used at a 1:10,000 dilution to detect antibodies in rcs and reference samples. Dose-response curves of the reference sample were used to quantify the concentrations of the compounds shown in Tables 7 and 8, column “μg/ml rcs”. All samples were used four times.
Выделенные образцы соединений (ics) были получены одностадийной очисткой через белок-A из 6 мл экспрессионной культуры и в соответствии с хорошо известными в данной области техники способами. Кислотные элюаты нейтрализовали добавлением 8% (об./об.) 1 М Трис/HCl с pH 9,0, определяли количественно по абсорбции при 280 нм и нормализовали до концентрации 125 нМ.Isolated compound samples (ics) were obtained by one-step protein-A purification from a 6 ml expression culture and in accordance with methods well known in the art. Acidic eluates were neutralized by adding 8% (v/v) 1 M Tris/HCl pH 9.0, quantified by absorbance at 280 nm, and normalized to a concentration of 125 nM.
Образцы очищенных соединений (pcs) были получены путем двухэтапной очистки через белок-А и последующей SEC в буфере PBS из экспрессионной культуры объемом по меньшей мере 35 мл. Значения, приведенные в таблицах 7 и 8, столбец «мкг/мл pcs», относятся к концентрации соединения в супернатанте экспрессионной культуры, определенной аналитической хроматографией на белке А.Purified compound samples (pcs) were obtained by two-step protein-A purification followed by SEC in PBS buffer from an expression culture of at least 35 ml. The values given in Tables 7 and 8, column "μg/ml pcs", refer to the concentration of the compound in the expression culture supernatant as determined by analytical Protein A chromatography.
Все активности, показанные в таблицах 7 и 8, были измерены на клетках с гетерологичной сверхэкспрессией человеческого NPRA (hNPRA) с использованием количественного анализа cGMP, проводимого в соответствии с инструкциями производителя (cisbio; 62GM2PEH). Вкратце, анализ количественно определяет cGMP в буферном растворе или супернатантах клеточной культуры на основе конкуренции между cGMP, продуцируемым клеткой в результате стимуляции NPRA через образец (натрийуретический пептид), и cGMP, меченным d2, за связывание с антителом, меченным криптатом. Образец cGMP и меченный d2 cGMP конкурируют за связывание с ограниченным количеством сайтов на анти-cGMP антителах, меченных криптатом, и, следовательно, специфический флуоресцентный сигнал HTRF® (т.е. перенос энергии) обратно пропорционален концентрации cGMP в образце.All activities shown in Tables 7 and 8 were measured on cells heterologously overexpressing human NPRA (hNPRA) using a quantitative cGMP assay performed according to the manufacturer's instructions (cisbio; 62GM2PEH). Briefly, the assay quantifies cGMP in buffer solution or cell culture supernatants based on competition between cGMP produced by the cell as a result of NPRA stimulation through the sample (natriuretic peptide) and d2-labeled cGMP for binding to cryptate-labeled antibody. The cGMP sample and d2-labeled cGMP compete for binding to a limited number of sites on the cryptate-labeled anti-cGMP antibodies, and therefore the specific HTRF® fluorescent signal (ie, energy transfer) is inversely proportional to the concentration of cGMP in the sample.
Данные кривой доза-ответ были проанализированы с помощью GraphPad Prism (версия 7.00 для Windows, GraphPad Software, La Jolla California USA) и EC50 были нанесены на график в соответствии с Y=дно+(вершина-дно)/(1+10^((LogEC50-X)*склон)) с применением ограничений для дна, вершины и склона (общее значение для всех наборов данных соответствующего эксперимента).Dose-response curve data were analyzed using GraphPad Prism (version 7.00 for Windows, GraphPad Software, La Jolla California USA) and EC50 was plotted according to Y=bottom+(top-bottom)/(1+10^( (LogEC50-X)*slope)) using bottom, top and slope constraints (common to all data sets of the corresponding experiment).
Активность необработанного образца соединения в отношении стабильных клеток hNPRA-CHO k1 сначала оценивали путем сравнения с отрицательным контролем TPP-5657 и с положительным образцом, в частности TPP-5661. Контроли и rcs тестировали с четырьмя повторениями в двух концентрациях с коэффициентом относительного разбавления 5, чтобы получить флуоресцентный сигнал (s) в динамическом диапазоне анализа. Окно анализа определялось как разница в сигнале неактивных (макс.сигнал, s_max) и высокоактивных образцов (мин. сигнал, s_min), и для обеих концентраций соединения активность в% была рассчитана как 100*(s_max - s) / (s_max - s_min). Значения, перечисленные в таблице 7, столбцы «активность rcs» и «stdev активность rcs», представляют собой среднее значение результатов для двух концентраций и соответствующее стандартное отклонение. Сигналы rcs, составляющие менее половины сигнала эталонного соединения TPP-5661 (36%), были оценены как неактивные (n.a.).The activity of the untreated sample of the compound against stable hNPRA-CHO k1 cells was first assessed by comparison with the negative control TPP-5657 and with the positive sample, specifically TPP-5661. Controls and rcs were tested in four replicates at two concentrations with a relative dilution factor of 5 to obtain the fluorescent signal (s) over the dynamic range of the assay. The analysis window was defined as the difference in signal between inactive (max signal, s_max) and highly active samples (min signal, s_min), and for both compound concentrations, the % activity was calculated as 100*(s_max - s) / (s_max - s_min) . The values listed in Table 7, columns “rcs activity” and “stdev rcs activity”, represent the average of the results for the two concentrations and the corresponding standard deviation. rcs signals representing less than half the signal of the reference compound TPP-5661 (36%) were assessed as inactive (n.a.).
Активность нескольких необработанных образцов соединений на стабильных клетках hNPRA-CHO k1 повторно оценивали путем сравнения с эталонным образцом TPP-5661 в серии 2,5-кратных разведений (8 концентраций), начиная с 5-кратного разведения. Подходящее значение «logEC50» в качестве меры активности rcs было установлено по отношению к соответствующему значению эталонного rcs TPP-5661 путем вычисления дельты «logEC50» _соединение - «logEC50» _TPP-5661; итоговые значения приведены в таблице 7, столбец «относительная активность rcs». Примечательно, что концентрации соединения в rcs не учитывались, и, следовательно, на указанные значения в равной мере влияют активность соединения и концентрация. Все образцы применяли четыре раза.The activity of several crude sample compounds on stable hNPRA-CHO k1 cells was re-evaluated by comparison with the reference sample TPP-5661 in a series of 2.5-fold dilutions (8 concentrations), starting with a 5-fold dilution. The appropriate "logEC50" value as a measure of rcs activity was established relative to the corresponding TPP-5661 reference rcs value by calculating the delta "logEC50"_connection - "logEC50"_TPP-5661; the total values are given in Table 7, column “relative rcs activity”. It is noteworthy that compound concentrations in rcs were not taken into account, and therefore the reported values are equally influenced by compound activity and concentration. All samples were used four times.
Активность выделенных образцов соединений на стабильных клетках hNPRA-CHO k1 оценивали путем определения ЕС50 и сравнения с эталонным образцом TPP-5661. Образцы тестировали в серии 2,5-кратных разведений от 80 нМ до 0,13 нМ. Соответствующее значение logEC50 в качестве меры активности ics было установлено по отношению к соответствующему значению эталонного ics TPP-5661 (-8,8) путем вычисления дельты logEC50_compound - logEC50_TPP-5661; результирующие значения приведены в таблице 7, столбец «отн. logEC50 ics». Все образцы применяли четыре раза.The activity of isolated sample compounds on stable hNPRA-CHO k1 cells was assessed by determining the EC50 and comparing with the reference sample TPP-5661. Samples were tested in a series of 2.5-fold dilutions from 80 nM to 0.13 nM. The corresponding logEC50 value as a measure of ics activity was set relative to the corresponding value of the reference TPP-5661 ics (-8.8) by calculating the delta logEC50_compound - logEC50_TPP-5661; the resulting values are given in Table 7, column “rel. logEC50 ics". All samples were used four times.
Активность очищенных образцов соединений на стабильных клетках hNPRA-CHO k1 оценивали в нескольких экспериментах путем определения ЕС50 и сравнения с эталонным образцом TPP-5661. Образцы испытывали в серии разведений по меньшей мере в четыре раза. Значения, указанные в таблице 7, столбцы «отн. logEC50 pcs 1, 3 и 4» являются результатом серии 5-кратных разведений (≥4 концентрации), начиная с 20 или 25 нМ. Значения приведены в таблице 7, столбец «отн. logEC50 pcs 2» являются результатом серии 10-кратных разведений (4 концентрации), начиная с 25 нМ. Значения, указанные в таблице 7, столбцы «отн. logEC50 pcs 5, 6, 7, 8 и 9» являются результатом серии 2,5-кратных разведений с 8 или 12 концентрациями, начиная с 40 до 200 нМ, соответственно. Соответствующее значение logEC50 в качестве меры активности pcs было установлено по отношению к соответствующему значению эталонного TPP-5661 в соответствующем эксперименте (в среднем -9,2, стандартное отклонение 0,5) путем вычисления дельты logEC50_compound - logEC50_TPP-5661.The activity of purified compound samples on stable hNPRA-CHO k1 cells was assessed in several experiments by determining the EC50 and comparing with the reference sample TPP-5661. Samples were tested in a series of at least fourfold dilutions. The values indicated in Table 7, columns “rel. logEC50 pcs 1, 3 and 4" are the result of a series of 5-fold dilutions (≥4 concentrations) starting at 20 or 25 nM. The values are given in Table 7, column “rel. logEC50 pcs 2" are the result of a series of 10-fold dilutions (4 concentrations) starting at 25 nM. The values indicated in Table 7, columns “rel. logEC50 pcs 5, 6, 7, 8 and 9" are the result of a series of 2.5-fold dilutions with 8 or 12 concentrations starting from 40 to 200 nM, respectively. The corresponding logEC50 value as a measure of pcs activity was set relative to the corresponding value of the reference TPP-5661 in the corresponding experiment (mean -9.2, standard deviation 0.5) by calculating the logEC50_compound - logEC50_TPP-5661 delta.
Активность очищенных образцов соединения на транзиентных клетках hNPRA-HEK293 оценивали в трех экспериментах путем определения ЕС50 и сравнения с эталонным образцом TPP-5661. Образцы тестировали в серии 5-кратных разведений от 1000 нМ до 0,013 нМ. Подходящее значение logEC50 в качестве меры активности pcs устанавливали по отношению к соответствующему значению эталонного TPP-5661 в соответствующем эксперименте (среднее значение трех экспериментов -9,0, стандартное отклонение 0,4) путем вычисления дельты logEC50_compound - logEC50_TPP-5661; результирующие значения приведены в таблице 7, столбцы «отн. logEC50* pcs». Все образцы применяли дважды.The activity of purified compound samples on transient hNPRA-HEK293 cells was assessed in three experiments by determining the EC50 and comparing with the reference sample TPP-5661. Samples were tested in a series of 5-fold dilutions from 1000 nM to 0.013 nM. The appropriate logEC50 value as a measure of pcs activity was set relative to the corresponding value of the reference TPP-5661 in the corresponding experiment (average of three experiments -9.0, standard deviation 0.4) by calculating the delta logEC50_compound - logEC50_TPP-5661; the resulting values are given in Table 7, columns “rel. logEC50* pcs". All samples were used twice.
Обобщенная качественная оценка активности соединений приведена в графе «качественная активность», значения указаны в столбце «среднее отн. logEC50» рассчитывались как среднее данных относительных значений logEC50. Соединения, показывающие значения ЕС50>50 раз по сравнению с эталонным соединением TPP-5661, что означает среднее отн. logEC50>1,7, были качественно оценены как неактивные («-»), соединения, показывающие относительный logEC50 от 0,7 до 1,7, были оценены как активные («+»), соединения, показывающие относительное logEC50<0,7, были оценены как очень активные («++“); самые высокие активности наблюдались при относительном logEC50 ниже -0,7 («+++»). Соединения, показывающие активность в rcs без подтверждения, как ics или pcs, помечены единым «y», а соединения, оцененные как неактивные («na» в столбце «активность rcs»), вероятно, из-за их очень низкого уровня экспрессии (≤1 мкг / мл, «n.e.» в столбце «мкг/мл rcs»), отмечены соответствующим образом.A generalized qualitative assessment of the activity of compounds is given in the column “qualitative activity”; the values are indicated in the column “average rel. logEC50" were calculated as the average of the relative logEC50 values. Compounds showing EC50 values >50 times the reference compound TPP-5661, which means average rel. logEC50 >1.7 were qualitatively rated as inactive ("-"), compounds showing a relative logEC50 between 0.7 and 1.7 were rated as active ("+"), compounds showing a relative logEC50 <0.7 , were rated as very active (“++“); the highest activities were observed at relative logEC50 below -0.7 (“+++”). Compounds showing activity in rcs without confirmation as ics or pcs are labeled with a single “y”, and compounds scored as inactive (“na” in the “rcs activity” column), likely due to their very low expression level (≤ 1 μg/ml, "n.e." in the "μg/ml rcs" column, are marked as such.
Таблица 7. Уровни экспрессии и активности конструкций антитела, привитого предсердным натрийуретическим пептидомTable 7. Expression and Activity Levels of Atrial Natriuretic Peptide-Grafted Antibody Constructs
Не определено (n.d.), нет активности (n.a.), не экспрессируется (n.e.), не доступно (na)Not determined (n.d.), no activity (n.a.), not expressed (n.e.), not available (na)
logE
C50
icsrel.
logE
C50
ics
logE
C50
pcs 1rel.
logE
C50
pcs 1
logE
C50
pcs 2rel.
logE
C50
pcs 2
logE
C50
pcs 3rel.
logE
C50
pcs 3
logE
C50
pcs 4rel.
logE
C50
pcs 4
logE
C50
pcs 5rel.
logE
C50
pcs 5
logE
C50
pcs 6rel.
logE
C50
pcs 6
logE
C50
pcs 7rel.
logE
C50
pcs 7
logE
C50
pcs 8rel.
logE
C50
pcs 8
logE
C50
pcs 9rel.
logE
C50
pcs 9
logE
C50
* pcsrel.
logE
C50
*pcs
logE
C50*
pcsrel.
logE
C50*
pcs
logEC
50*
pcsrel.
logEC
50*
pcs
50Average rel. logEC
50
1 Число аминокислотных остатков, присутствующих между соответствующим N-концевым эталонным аминокислотным остатком и первой аминокислотой вставленного натрийуретического пептида;1 The number of amino acid residues present between the corresponding N-terminal reference amino acid residue and the first amino acid of the inserted natriuretic peptide;
2 Число аминокислотных остатков, присутствующих между последней аминокислотой вставленного натрийуретического пептида и соответствующим C-концевым эталонным аминокислотным остатком2 Number of amino acid residues present between the last amino acid of the inserted natriuretic peptide and the corresponding C-terminal reference amino acid residue
Достоверные данные для соединений #104 и #135 не были получены. 12 соединений (#54, #61, #89, #139, #162, #168, #170, #171, #172, #173, #176, #196) показали очень низкие уровни экспрессии (≤ 1 мкг/мл в rcs) и соответственно отсутствие активности; активность соединения #61 была показана после обработки соединения (pcs). 7 соединений (#7, #24, #70, #83, #90, #154, #167) в большинстве случаев показали низкую активность как rcs, хотя их уровни экспрессии были очень низкими; активность соединений #24 и #90 были подтверждены при обработке соединения (pcs). Активность не наблюдалась для rcs соединений #18, #26, #29, #92, #96, #101, #104, #158, #164, #179; однако, активность соединений #18, #92, #158, #164 была показана при применении более высоких концентраций (относительная активность rcs); отсутствие активности соединения #26 было подтверждено таким образом.No reliable data were obtained for compounds #104 and #135. 12 compounds (#54, #61, #89, #139, #162, #168, #170, #171, #172, #173, #176, #196) showed very low expression levels (≤ 1 μg/ml in rcs) and, accordingly, lack of activity; The activity of compound #61 was shown after treatment of the compound (pcs). 7 compounds (#7, #24, #70, #83, #90, #154, #167) showed low activity as rcs in most cases, although their expression levels were very low; The activity of compounds #24 and #90 were confirmed by processing compound (pcs). No activity was observed for rcs compounds #18, #26, #29, #92, #96, #101, #104, #158, #164, #179; however, activity of compounds #18, #92, #158, #164 was shown when higher concentrations were used (relative rcs activity); the lack of activity of compound #26 was confirmed in this way.
Таблица 8. Уровни экспрессии и активности конструкций антитела, привитого мозговым натрийуретическим пептидомTable 8. Expression and Activity Levels of Brain Natriuretic Peptide-Grafted Antibody Constructs
не доступно (na)not available (na)
1 Число аминокислотных остатков, присутствующих между соответствующим N-концевым эталонным аминокислотным остатком и первой аминокислотой вставленного натрийуретического пептида;1 The number of amino acid residues present between the corresponding N-terminal reference amino acid residue and the first amino acid of the inserted natriuretic peptide;
2 Число аминокислотных остатков, присутствующих между последней аминокислотой вставленного натрийуретического пептида и соответствующим C-концевым эталонным аминокислотным остатком2 Number of amino acid residues present between the last amino acid of the inserted natriuretic peptide and the corresponding C-terminal reference amino acid residue
3Соответствующее ANP соединение относится к конструкции ANP-привитого антитела в одними и теми же локусами вставки и содержащей ту же N-концевую и C-концевую последовательность3 A corresponding ANP compound refers to an ANP-grafted antibody construct at the same insertion loci and containing the same N-terminal and C-terminal sequence
Очищенные образцы соединений тестировали, как описано в примере 3, в четырехкратных сериях разведений на стабильных клетках hNPRA-CHO k1. Активности конструкций BNP-привитых антител графически изображены на Фиг. 11.Purified compound samples were tested as described in Example 3 in a fourfold dilution series on stable hNPRA-CHO k1 cells. The activities of the BNP-grafted antibody constructs are graphically depicted in FIG. eleven.
TPP-11156, TPP-9902 и TPP-11153 показали значительную активность на клетках hNPRA по сравнению с TPP-1154, TPP-11155, и TPP-11157. Противоположные результаты наблюдались на rNPRA с EC50<20нМ для TPP-1154, TPP-11155, и TPP-11157, и EC50>1 мкМ для TPP-9902, TPP-11153, и TPP-11156 (см. Пример 3). Это можно объяснить присутствием последовательности BNP человека в TPP-11156, TPP-9902 и TPP-11153, тогда как TPP-1154, TPP-11155 и TPP-11157 содержат последовательность крысиного BNP (см. Таблицу 5). В отличие от всех других конструкций антитела, привитого BNP человека, TPP-18031 и TPP-18032 с низким числом добавленных N- и C-концевых аминокислот в BNP не показали активность на hNPRA.TPP-11156, TPP-9902, and TPP-11153 showed significant activity on hNPRA cells compared to TPP-1154, TPP-11155, and TPP-11157. Opposite results were observed on rNPRA with EC50 <20 nM for TPP-1154, TPP-11155, and TPP-11157, and EC50 >1 μM for TPP-9902, TPP-11153, and TPP-11156 (see Example 3). This can be explained by the presence of human BNP sequence in TPP-11156, TPP-9902 and TPP-11153, whereas TPP-1154, TPP-11155 and TPP-11157 contain rat BNP sequence (see Table 5). In contrast to all other human BNP-grafted antibody constructs, TPP-18031 and TPP-18032, with low amounts of added N- and C-terminal amino acids in BNP, did not show activity on hNPRA.
Пример 6. Специфические линкерные последовательности являются особенно предпочтительными для достижения хорошей гомогенности и уровней экспрессииExample 6 Specific linker sequences are particularly preferred to achieve good homogeneity and expression levels
Чистоту очищенных образцов соединения (пример 5, таблица 7, столбец «% чистоты pcs») определяли с помощью капиллярного гель-электрофореза в соответствии с инструкциями производителя (LabChip GX, Caliper Life Sciences) в восстанавливающих условиях. Чистоту в% рассчитывали как сумму площадей пиков, соответствующих интактной легкой и тяжелой цепи, относительно суммы всех наблюдаемых пиков.The purity of purified compound samples (Example 5, Table 7, "% pcs purity" column) was determined by capillary gel electrophoresis according to the manufacturer's instructions (LabChip GX, Caliper Life Sciences) under reducing conditions. The % purity was calculated as the sum of the peak areas corresponding to the intact light and heavy chains relative to the sum of all peaks observed.
Ntls последовательности, содержащие GS линкерную последовательность, PN линкерную последовательность или последовательность согласно SEQ ID NO 2, 4, 9, 11, 13 или 15, и Ctls последовательности, содержащие GS линкерную последовательность, PN линкерную последовательность или последовательность согласно SEQ ID NO 3, 5, 12, 14, 15 и 20, как было доказано, являются особенно полезными, так как они не только обеспечивают высокие активности натрийуретического пептида (при условии, что по меньшей мере 12 аминокислотных остатков присутствуют между соответствующим N-концевым эталонным аминокислотным остатком и первой аминокислотой вставленного натрийуретического пептида), но также хорошие уровни экспрессии (в отличие, например, от последовательностей, используемых в соединениях #186, #195 и #202) и (в отличие, например, от последовательностей, используемых в соединениях 6 и 7) при низкой степени негомогенности (см. Таблицу 9). WB случае линкерных последовательностей, содержащих GS линкерную последовательность, а также линкерных последовательностей, содержащих PN линкерную последовательность, наблюдалась очень хорошая чистота, равная в среднем 98% Подобным образом, хорошие значения наблюдались для соединений с линкерами, содержащими последовательности SEQ ID NO 2, 3, 4, 5, 9, 11, 12, 13, 14, 15 и 20. А именно, Ntls, имеющая последовательность согласно SEQ ID NO 9, только в комбинации с Ctls, имеющим последовательность согласно SEQ ID NO 20, приводил к соединениям с очень хорошей чистотой; соединения с комбинацией Ntls, имеющего последовательность согласно SEQ ID NO 11, и Ctls, имеющая последовательность согласно SEQ ID NO 12, показали очень хорошую чистоту, только когда SEQ ID NO 11 была фланкирована с Asp (D) на N-концевом сайте, но не Thr (T) или Val (V), и когда SEQ ID NO 12 VNHLRSEKLT была фланкирована с Gly (G) на C-концевом сайте, но не Tyr (Y) или Phe (F), как в соединениях #126 и #135.Ntls sequences containing a GS linker sequence, a PN linker sequence or a sequence according to SEQ ID NO 2, 4, 9, 11, 13 or 15, and Ctls sequences containing a GS linker sequence, a PN linker sequence or a sequence according to SEQ ID NO 3, 5 , 12, 14, 15 and 20 have been shown to be particularly useful since they not only provide high natriuretic peptide activities (provided that at least 12 amino acid residues are present between the corresponding N-terminal reference amino acid residue and the first amino acid inserted natriuretic peptide), but also good expression levels (unlike, for example, the sequences used in compounds #186, #195 and #202) and (unlike, for example, the sequences used in compounds 6 and 7) at low degree of inhomogeneity (see Table 9). WB for linker sequences containing a GS linker sequence, as well as linker sequences containing a PN linker sequence, very good purities were observed, averaging 98%. Similarly, good values were observed for compounds with linkers containing the sequences SEQ ID NOs 2, 3, 4, 5, 9, 11, 12, 13, 14, 15 and 20. Namely, Ntls having the sequence of SEQ ID NO 9, only in combination with Ctls having the sequence of SEQ ID NO 20, resulted in compounds with very good cleanliness; compounds with the combination of Ntls having the sequence of SEQ ID NO 11 and Ctls having the sequence of SEQ ID NO 12 showed very good purity only when SEQ ID NO 11 was flanked with Asp (D) at the N-terminal site, but not Thr (T) or Val (V), and when SEQ ID NO 12 VNHLRSEKLT was flanked with Gly (G) at the C-terminal site, but not Tyr (Y) or Phe (F), as in compounds #126 and #135 .
Таблица 9. Эффекты Ntls и Ctls на чистоту антитела (фрагмент Таблицы 7)Table 9. Effects of Ntls and Ctls on Antibody Purity (Table 7 excerpt)
GSGSGSSGFTFGS
GSGSGS
GSGGSGGSGFTFGSGS
GSGGSGG
SGSGGGSGGSG
SGSG
SGSGGGSGGSGFTFGSGSG
SGSGGGSGG
GSGMGSGSGGS
GSGM
GSGSGSGSP
DGGSGGSGFTFGSGS
GSGSGSGSP
DGGSGGG
SGSGSGMGSYGSGSG
SGSGSGM
GSGSGSGS
PDGGSGGSGFTFGSGS
GSGSGSGS
PDGGSGGG
GSGSGMGSYGSGSGS
GSGSGM
GSGGCAKSPDG
GSGG
GSGGCAKSPDG
GSGG
GQGGSYQHW
GQG
SGSGSPDG
GSGGYGSGSGSG
SGSGSPDG
GSGG
SGSGSGNR
PSGGSYGSGG
SSGSGSGNR
PSG
SGSGSDG
GSGGCGSGSGSG
SSGSGSDG
GSGG
GSGSGFGSGSGSGS
GSGSGF
GSGSGSPD
GGSGGCGSGSGS
GSGSGSPD
GGSGG
SGSGSGFGSYGSGSG
SGSGSGF
SGSGSGSP
DGGSGGCGGSGSG
SSGSGSGSP
DGGSGGG
SGSGSGGFGSYGSGSG
SSGSGSGGF
NPNPGGISGPNPNK
NPNPGG
PNPGSTGSNENPN
PNPGST
NPNPNPG
SGGISGPNPNK
NPPNPPG
SGG
NPNPGSTGSNPNENP
NPNPGST
NPNPNSPD
GGSGGISGPNPNK
NPNPNSPD
GGSGG
PNPNPGSTGSYNPNEN
PNNPPGST
NPNPNSPD
GGSGGISGPNPNP
NPNPNSPD
GGSGG
PNPNPGSTGSYNPNPN
PNNPPGST
NPNPNPD
GGSGGCAKVHPNP
NPNPNPD
GGSGG
NPHVDVW
GQGGSNPNPNP
NPHVDVW
GQG
NPNPNSPD
GGSGGCAKVHPNP
NPNPNSPD
GGSGG
NPNPHVD
VWGQGGSYNPNP
NPNPHVD
VWGQG
PNPNPNPN
GGSGGCAAWNPN
PNPNPNPN
GGSGG
NPNPNVFGSNPNPNP
NPNPNVF
VNHKPDG
GSGGISGTYISN
VNHKPDG
GSGG
KKVEGSTGSNTKVD
KKVEGST
NVNHKP
DGGSGGISGSTYIS
NVNHKP
DGGSGGG
KKVEGGSTGSNTKVD
KKVEGGST
SNVNHKP
DGGSGGCAKTQTYI
SNVNHKP
DGGSGGG
KKAEYFQ
HWGQGGSNTKVD
KKAEYFQ
HWGQG
LAITGPD
GGSGGISGTSAS
LAITGPD
GGSGG
SKSGGSTGSDRFSG
SKSGGST
LAITGPD
GGSGGISGSTSAS
LAITGPD
GGSGG
SKSGGGSTGSDRFSG
SKSGGGST
EKEKVST
AVGGYGVPKEK
EKEKVST
AVGG
PKEKEK
EKVGGSAPLEV
PKEKEK
EKVG
HQSPTPG
GSGGISVVVTS
HQSPTPG
GSGG
KSLASTGGSTPL
KSLAST
HQAPGEG
GSGGISVVVTS
HQAPGEG
GSGG
SLASTGGSTPLK
SLAST
HQAPGEG
GSGGISVVVTS
HQAPGEG
GSGG
KSLASTGSTPKL
KSLAST
HPTPGEG
GSGGISVVVTS
HPTPGEG
GSGG
KSLASTGEKKKL
KSLAST
HQSPTPG
GSGGISVVVTS
HQSPTPG
GSGG
KSLASTGEKKKL
KSLAST
HQAPGSG
GSGGISVVVTS
HQAPGSG
GSGG
KSLASTGEKKKL
KSLAST
HQAPSPG
STGGISVVVTS
HQAPSPG
STGG
KSLASTGEKKKL
KSLAST
HQAPTSG
GSGGISVVVTS
HQAPTSG
GSGG
KSLASTGEKKKL
KSLAST
VKLELG
HRAPDG
GSGGCQSYDQ
VKLELG
HRAPDG
GSGG
RSEKLT
GVVFGSVNHL
RSEKLT
GVVF
VKLELG
HRPDG
GSGGCQSYDQ
VKLELG
HRPDG
GSGG
KLTGVVFGSNHLRSE
KLTGVVF
LELGHRAP
DGGSGGCQSYDK
LELGHRAP
DGGSGGG
SEKGVVFGSVNHLR
SEKGVVF
KLELGHR
PDGGSGGCAKLTQV
KLELGHR
PDGGSGGG
EKLTYF
QHWGQGGSNHLRS
EKLTYF
QHWGQG
VQVKLEL
GHRPDG
GSGGCAKLTA
VQVKLEL
GHRPDG
GSGG
EKLTFNY
FQHWGQGGSNHLRS
EKLTFNY
FQHWGQG
NVRAPD
GGSGGISGSAVV
NVRAPD
GGSGG
AIGGSTGSKGDKI
AIGGST
AVVNVR
APDGGS
GGISGSSG
AVVNVR
APDGGS
GG
IAIWTT
GSTGSKGDK
IAIWTT
GST
VNVRAD
GGSGGISGSAV
VNVRAD
GGSGG
AIGGSTGSGDKI
AIGGST
IEILDRH
PDGGSGGSPAVVY
IEILDRH
PDGGSGGG
PISNGSG
FVVAMGSGREV
PISNGSG
FVVAM
IEILDRHP
DGGSGGSGAVVY
IEILDRHP
DGGSGGG
PISNGSG
FVVAMGSGREV
PISNGSG
FVVAM
FILPIEV
YGGSGGCQSYDG
FILPIEV
YGGSGG
DYDLFG
VVFGSKVRF
DYDLFG
VVF
FILPIEVY
PDGGSGGCQSYDG
FILPIEVY
PDGGSGGG
DYDLFG
VVFGSKVRF
DYDLFG
VVF
FILPIEV
YFPDGG
SGGCQSYDG
FILPIEV
YFPDGG
SGG
RFDYDL
FGVVFGSRKV
RFDYDL
FGVVF
1 Число аминокислотных остатков, присутствующих между соответствующим N-концевым эталонным аминокислотным остатком и первой аминокислотой вставленного натрийуретического пептида;1 The number of amino acid residues present between the corresponding N-terminal reference amino acid residue and the first amino acid of the inserted natriuretic peptide;
2 Число аминокислотных остатков, присутствующих между последней аминокислотой вставленного натрийуретического пептида и соответствующим C-концевым эталонным аминокислотным остатком2 Number of amino acid residues present between the last amino acid of the inserted natriuretic peptide and the corresponding C-terminal reference amino acid residue
3 N-концевая последовательность соответствует ближайшей соседней N-концевой аминокислоте от вставленного натрийуретического пептида, плюс аминокислотное удлинение, присутствующее между указанной эталонной аминокислотой и первым аминокислотным остатком вставленного натрийуретического пептида3 N-terminal sequence corresponds to the nearest adjacent N-terminal amino acid from the inserted natriuretic peptide, plus the amino acid extension present between the specified reference amino acid and the first amino acid residue of the inserted natriuretic peptide
4 C-концевая последовательность соответствует аминокислотному удлинению, присутствующему между последним аминокислотным остатком вставленного натрийуретического пептида и ближайшей соседней C-концевой эталонной аминокислотой от вставленного натрийуретического пептида, плюс указанная эталонная аминокислота4 The C-terminal sequence corresponds to the amino acid extension present between the last amino acid residue of the inserted natriuretic peptide and the nearest adjacent C-terminal reference amino acid from the inserted natriuretic peptide, plus the specified reference amino acid
Пример 7. Изотипы IgG1, IgG2 и IgG4 обеспечивают в равной степени подходящие каркасы антителExample 7 IgG1, IgG2 and IgG4 Isotypes Provide Equally Suitable Antibody Scaffolds
Соединения 9, 33, 65, 91, 127 и 191 (человеческий IgG1 TPP-10294, TPP-10277, TPP-10279, TPP-10282, TPP-10269 и TPP-10355, соответственно) были созданы на основе различных изотипов IgG. Очищенные образцы соединений тестировали, как описано в примере 3, в четырехкратных сериях разведений на стабильных клетках hNPRA-CHO k1. Активности привитых ANP конструкций изотипов IgG2 и IgG4 человека (например, соединения 9 IgG4 TPP-10992) аналогичны их соответствующему изотипу IgG1, как графически изображено на Фиг. 12Compounds 9, 33, 65, 91, 127, and 191 (human IgG1 TPP-10294, TPP-10277, TPP-10279, TPP-10282, TPP-10269, and TPP-10355, respectively) were designed from different IgG isotypes. Purified compound samples were tested as described in Example 3 in a fourfold dilution series on stable hNPRA-CHO k1 cells. The activities of ANP-grafted human IgG2 and IgG4 isotype constructs (eg, TPP-10992 IgG4 Compound 9) are similar to their corresponding IgG1 isotype, as graphically depicted in FIG. 12
Пример 8. Человеческие и нечеловеческие IgG обеспечивают в равной степени подходящие каркасы антителExample 8 Human and Non-Human IgG Provide Equally Suitable Antibody Scaffolds
Соединение 9 (человеческий IgG1 TPP-10294 и IgG4 TPP-10992) и соединение 117 (человеческий IgG1 TPP-5665) были получены на основе изотипов нечеловеческого IgG. Очищенные образцы соединений тестировали, как описано в примере 3, в четырехкратных сериях разведений на стабильных клетках hNPRA-CHO k1. Конструкции крысиного и мышиного изотипа с привитым ANP, например, соединение 9 крысиного IgG1 TPP-13992, показали активность, аналогичную их соответствующему изотипу человеческого IgG (Фиг. 13).Compound 9 (human IgG1 TPP-10294 and IgG4 TPP-10992) and compound 117 (human IgG1 TPP-5665) were derived from non-human IgG isotypes. Purified compound samples were tested as described in Example 3 in a fourfold dilution series on stable hNPRA-CHO k1 cells. ANP-grafted rat and murine isotype constructs, such as rat IgG1 compound 9 TPP-13992, showed activity similar to their corresponding human IgG isotype (Figure 13).
Пример 9. Человеческие IgG, содержащие различные последовательности зародышевой линии, обеспечивают одинаково подходящие каркасы антителExample 9 Human IgGs Containing Different Germline Sequences Provide Equally Suitable Antibody Scaffolds
Были сконструированы 22 дополнительных антитела IgG4 с привитыми ANP (соединения A - S). В каждом случае ANP был включен в CDRH1. Тяжелые цепи этих конструкций содержат различные последовательности HV и CDRH3 и были спарены с различными легкими цепями лямбда или каппа. Структура соединений A - S представлена в таблицах 10 и 11.Twenty-two additional ANP-grafted IgG4 antibodies (compounds A to S) were constructed. In each case, ANP was included in CDRH1. The heavy chains of these constructs contain different HV and CDRH3 sequences and were paired with different lambda or kappa light chains. The structure of compounds A - S is presented in tables 10 and 11.
Таблица 10. Конструирование ANP-привитых конструкций антител A - STable 10. Construction of ANP-grafted antibody constructs A - S
1 Число аминокислотных остатков, присутствующих между соответствующим N-концевым эталонным аминокислотным остатком и первой аминокислотой вставленного натрийуретического пептида;1 The number of amino acid residues present between the corresponding N-terminal reference amino acid residue and the first amino acid of the inserted natriuretic peptide;
2 Число аминокислотных остатков, присутствующих между последней аминокислотой вставленного натрийуретического пептида и соответствующим C-концевым эталонным аминокислотным остатком2 Number of amino acid residues present between the last amino acid of the inserted natriuretic peptide and the corresponding C-terminal reference amino acid residue
3 N-концевая последовательность соответствует ближайшей соседней N-концевой аминокислоте от вставленного натрийуретического пептида, плюс аминокислотное удлинение, присутствующее между указанной эталонной аминокислотой и первым аминокислотным остатком вставленного натрийуретического пептида3 N-terminal sequence corresponds to the nearest adjacent N-terminal amino acid from the inserted natriuretic peptide, plus the amino acid extension present between the specified reference amino acid and the first amino acid residue of the inserted natriuretic peptide
4 C-концевая последовательность соответствует аминокислотному удлинению, присутствующему между последним аминокислотным остатком вставленного натрийуретического пептида и ближайшей соседней C-концевой эталонной аминокислотой от вставленного натрийуретического пептида, плюс указанная эталонная аминокислота4 The C-terminal sequence corresponds to the amino acid extension present between the last amino acid residue of the inserted natriuretic peptide and the nearest adjacent C-terminal reference amino acid from the inserted natriuretic peptide, plus the specified reference amino acid
Таблица 11. Конструирование ANP-привитых конструкций антител A - STable 11. Construction of ANP-grafted antibody constructs A - S
Очищенные образцы соединений конструкций на основе IgG каркаса A - S, содержащие различные последовательности зародышевой линии, тестировали, как описано в Примере 3, в четырехкратных сериях разведений на стабильных клетках hNPRA-CHO k1. Примерные данные по активности графически изображены на Фиг. 14.Purified samples of compounds from the IgG framework A - S constructs containing various germline sequences were tested as described in Example 3 in a four-fold dilution series on stable hNPRA-CHO k1 cells. Exemplary activity data is graphically depicted in FIG. 14.
Пример 10. CNP-привитой IgG защищает от индуцированной проницаемости эндотелиального барьераExample 10: CNP-grafted IgG protects against induced endothelial barrier permeability
Проницаемость эндотелиального монослоя оценивали путем измерения импеданса в реальном времени с помощью системы xCELLigence RTCA с использованием микротитровальных луночных планшетов, покрытых микроэлектродами (E-планшеты). Изменения относительного импеданса выражали в виде значений безразмерного клеточного индекса (CI).Endothelial monolayer permeability was assessed by real-time impedance measurements with the xCELLigence RTCA system using microtiter well plates coated with microelectrodes (E-plates). Changes in relative impedance were expressed as dimensionless cellular index (CI) values.
Первичные эндотелиальные клетки легочной артерии человека (HPAEC) высевали при низких пассированиях на Е-планшеты, предварительно покрытые коллагеном. После образования плотного монослоя и клеточного барьера с постоянными значениями CI, HPAEC предварительно обрабатывали указанными концентрациями соединения TPP-12899 или соответствующей конструкцией антитела отрицательного контроля TPP-5657, с последующим нарушением барьера EC разрушающими агонистами LPS (200 нг/мл), IL-1β (0,5 нг/мл) или тромбин (2 Ед/мл). CI регистрировали каждые 10 минут для отслеживания воздействия на рост клеток и проницаемость монослоя. Все индексы клеток были нормализованы в последней точке регистрации перед нанесением тестируемого вещества (=нормализованный CI).Primary human pulmonary artery endothelial cells (HPAEC) were seeded at low passaging on E-plates pre-coated with collagen. After formation of a dense monolayer and a cell barrier with constant CI values, HPAEC were pretreated with the indicated concentrations of compound TPP-12899 or the corresponding negative control antibody construct TPP-5657, followed by disruption of the EC barrier with the disruptive agonists LPS (200 ng/ml), IL-1β ( 0.5 ng/ml) or thrombin (2 U/ml). CI was recorded every 10 minutes to monitor the effects on cell growth and monolayer permeability. All cell indices were normalized at the last recording point before application of the test substance (=normalized CI).
Эксперименты проводили при n=4 с 3 техническими повторениями в каждом случае. Результаты выражали как среднее значение±SEM. Данные были статистически проанализированы с использованием однофакторного дисперсионного анализа с последующим многократным пост-тестом Сидака; Значения p<0,05 считались значимыми.Experiments were performed at n=4 with 3 technical replicates per case. Results were expressed as mean±SEM. Data were statistically analyzed using one-way analysis of variance followed by Sidak's multiple post-test; P values <0.05 were considered significant.
На Фиг. 15 графически изображено влияние на проницаемость эндотелиального монослоя, выраженное в виде значений индекса клеток. Как показано на Фиг. 15, предварительная обработка человеческих эндотелиальных монослойных культур ТРР-12899 защищала от индуцированной проницаемости эндотелиального барьера дозозависимым образом. Это не зависело от применяемого агента, разрушающего барьер; как при быстром и сильном действии тромбина, так и при длительных провоспалительных стимулах наблюдались значительные эффекты LPS и IL-1β. Соответствующий отрицательный контроль не показал эффекта.In FIG. 15 graphically depicts the effect on the permeability of the endothelial monolayer, expressed as cell index values. As shown in FIG. 15, pretreatment of human endothelial monolayer cultures with TPP-12899 protected against induced endothelial barrier permeability in a dose-dependent manner. This was independent of the barrier disrupting agent used; Significant effects of LPS and IL-1β were observed with both rapid and potent thrombin exposure and long-term proinflammatory stimuli. The corresponding negative control showed no effect.
Пример 11. Долгосрочные эффекты ANP -привитого IgG на крысиной модели хронической сердечной недостаточности (TGR(mRenR2)27Example 11 Long-term effects of ANP-grafted IgG in a rat model of chronic heart failure (TGR(mRenR2)27
Крысиная модель TGR (mRenR2) 27 показывает гипертензию и эндотелиальную дисфункцию, а также повреждение органов-мишеней. Использовали самцов ренин-трансгенных крыс (Ganten D., Nature. 1990; 344 (6266): 541-4) в возрасте 8 недель. Неселективный ингибитор синтетаз оксида азота L-NAME (метиловый сложный эфир Nω-нитро-L-аргинина) хронически вводили с питьевой водой (20 мг/л) во всех исследуемых группах для индукции эндотелиальной дисфункции. TPP-13992, крысиный аналог IgG1 TPP-10294, использованный в примере 8, и TPP-10155, контрольное антитело изотипа IgG1 крысы, вводили один раз в неделю внутрибрюшинно. Оценивали массу тела и выживаемость. Группу плацебо обрабатывали носителем (PBS), а здоровую контрольную группу обрабатывали пищей с каптоприлом после отлучения от груди. Пищу и воду давали по желанию. Проводили ежедневное наблюдение за поведением и общим состоянием здоровья животных. По окончании эксперимента (14 неделя) крысам вводили анестезию. Затем крыс обескровливали и сердце извлекали из грудной полости для анализа. В конце исследования собирали мочу для определения различных параметров мочи, например, соотношение белок/креатинин в моче. Фиг. 16 графически изображает терапевтические эффекты TPP-13992 на выживаемость, увеличение массы тела, соотношение белок/креатинин в моче и массу левого предсердия.The rat model of TGR (mRenR2) 27 shows hypertension and endothelial dysfunction as well as end organ damage. Male renin transgenic rats (Ganten D., Nature. 1990; 344 (6266): 541-4) at 8 weeks of age were used. The non-selective nitric oxide synthetase inhibitor L-NAME (Nω-nitro-L-arginine methyl ester) was chronically administered in drinking water (20 mg/L) in all study groups to induce endothelial dysfunction. TPP-13992, a rat IgG1 analogue of TPP-10294 used in Example 8, and TPP-10155, a rat IgG1 isotype control antibody, were administered once weekly intraperitoneally. Body weight and survival were assessed. The placebo group was treated with vehicle (PBS) and the healthy control group was treated with captopril food after weaning. Food and water were provided upon request. The behavior and general health of the animals were monitored on a daily basis. At the end of the experiment (week 14), the rats were given anesthesia. The rats were then bled and the heart was removed from the chest cavity for analysis. At the end of the study, urine was collected to determine various urine parameters, such as urine protein/creatinine ratio. Fig. 16 graphically depicts the therapeutic effects of TPP-13992 on survival, weight gain, urinary protein/creatinine ratio, and left atrial weight.
Пример. 12. Гемодинамические эффекты ANP-привитого IgG у здоровых собак породы бигльExample. 12. Hemodynamic effects of ANP-inoculated IgG in healthy Beagle dogs
Влияния TPP-10992 на сердечно-сосудистые параметры и параметры ЭКГ после однократного подкожного введения оценивали в первичном фармакодинамическом исследовании на гончих собаках, находящихся в сознании, с телеметрическим оборудованием.The effects of TPP-10992 on cardiovascular and ECG parameters following a single subcutaneous administration were assessed in a primary pharmacodynamic study in conscious beagle dogs with telemetry equipment.
Телеметрические устройства (DSI™, США) были имплантированы хирургическим путем для измерения кровяного давления, а также частоты сердечных сокращений, после чего последовал период восстановления, позволяющий закрыть рану. В день исследования были активированы телеметрические датчики для непрерывных гемодинамических измерений. Передаваемые сигналы собирали приемниками телеметрии, расположенными в помещении для животных. Все собранные данные были обработаны программой сбора данных и усреднены за заранее определенный период в 12 часов. В качестве носителя для TPP-10992 использовали NaCl (0,9%), а дозы 0,1 мг/кг, 0,3 мг/кг и 1,0 мг/кг массы тела применяли посредством подкожной инъекции.Telemetry devices (DSI™, USA) were surgically implanted to measure blood pressure as well as heart rate, followed by a recovery period to allow wound closure. On the day of the study, telemetry sensors were activated for continuous hemodynamic measurements. Transmitted signals were collected by telemetry receivers located in the animal room. All collected data were processed by the data acquisition program and averaged over a predetermined period of 12 hours. NaCl (0.9%) was used as vehicle for TPP-10992, and doses of 0.1 mg/kg, 0.3 mg/kg, and 1.0 mg/kg body weight were administered by subcutaneous injection.
Результаты представлены графически на Фиг. 17. У здоровых собак TPP-10992 показал дозозависимое и продолжительное (>5 дней) снижение артериального давления, которое было значительным при дозе 1,0 мг/кг подкожно (по сравнению с плацебо). Никакого влияния на частоту сердечных сокращений не наблюдалось.The results are presented graphically in Fig. 17. In healthy dogs, TPP-10992 showed a dose-dependent and sustained (>5 days) reduction in blood pressure that was significant at a dose of 1.0 mg/kg subcutaneously (compared with placebo). No effect on heart rate was observed.
--->--->
Перечень последовательностейList of sequences
<110> Bayer AG<110> Bayer AG
<120> АНТИТЕЛА С ПРИВИТЫМ ПРЕДСЕРДНЫМ НАТРИЙУРЕТИЧЕСКИМ ПЕПТИДОМ<120> ANTIBODIES GRAFTED WITH ATRIAL NATRIOURETIC PEPTIDE
<130> BHC 18 1 016<130> BHC 18 1 016
<160> 447<160> 447
<170> PatentIn version 3.5<170> Patent In version 3.5
<210> 1<210> 1
<211> 10<211> 10
<212> PRT<212>PRT
<213> искусственная<213> artificial
<220><220>
<223> линкерная последовательность<223> linker sequence
<400> 1<400> 1
Ser Tyr Ala Met Ser Trp Val Arg Gln AlaSer Tyr Ala Met Ser Trp Val Arg Gln Ala
1 5 101 5 10
<210> 2<210> 2
<211> 10<211> 10
<212> PRT<212>PRT
<213> искусственная<213> artificial
<220><220>
<223> линкерная последовательность<223> linker sequence
<400> 2<400> 2
Thr Tyr Ile Ser Asn Val Asn His Lys ProThr Tyr Ile Ser Asn Val Asn His Lys Pro
1 5 101 5 10
<210> 3<210> 3
<211> 9<211> 9
<212> PRT<212>PRT
<213> искусственная<213> artificial
<220><220>
<223> линкерная последовательность<223> linker sequence
<400> 3<400> 3
Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Lys ValSer Asn Thr Lys Val Asp Lys Lys Val
1 515
<210> 4<210> 4
<211> 10<211> 10
<212> PRT<212>PRT
<213> искусственная<213> artificial
<220><220>
<223> линкерная последовательность<223> linker sequence
<400> 4<400> 4
Gly Thr Ser Ala Ser Leu Ala Ile Thr GlyGly Thr Ser Ala Ser Leu Ala Ile Thr Gly
1 5 101 5 10
<210> 5<210> 5
<211> 9<211> 9
<212> PRT<212>PRT
<213> искусственная<213> artificial
<220><220>
<223> линкерная последовательность<223> linker sequence
<400> 5<400> 5
Asp Arg Phe Ser Gly Ser Lys Ser GlyAsp Arg Phe Ser Gly Ser Lys Ser Gly
1 515
<210> 6<210> 6
<211> 15<211> 15
<212> PRT<212>PRT
<213> искусственная<213> artificial
<220><220>
<223> линкерная последовательность<223> linker sequence
<400> 6<400> 6
Ser Ala Leu Leu Lys Ser Lys Leu Arg Ala Leu Leu Thr Ala ProSer Ala Leu Leu Lys Ser Lys Leu Arg Ala Leu Leu Thr Ala Pro
1 5 10 151 5 10 15
<210> 7<210> 7
<211> 14<211> 14
<212> PRT<212>PRT
<213> искусственная<213> artificial
<220><220>
<223> линкерная последовательность<223> linker sequence
<400> 7<400> 7
Val His Gln Glu Thr Lys Lys Tyr Gln Ser Ser Pro Asp GlyVal His Gln Glu Thr Lys Lys Tyr Gln Ser Ser Pro Asp Gly
1 5 101 5 10
<210> 8<210> 8
<211> 17<211> 17
<212> PRT<212>PRT
<213> искусственная<213> artificial
<220><220>
<223> линкерная последовательность<223> linker sequence
<400> 8<400> 8
Ser Tyr Ser Tyr Thr Tyr Asn Tyr Glu Trp His Val Asp Val Trp GlySer Tyr Ser Tyr Thr Tyr Asn Tyr Glu Trp His Val Asp Val Trp Gly
1 5 10 151 5 10 15
GlnGln
<210> 9<210> 9
<211> 12<211> 12
<212> PRT<212>PRT
<213> искусственная<213> artificial
<220><220>
<223> линкерная последовательность<223> linker sequence
<400> 9<400> 9
Ser Val Val Val Thr Ser His Gln Ala Pro Gly GluSer Val Val Val Thr Ser His Gln Ala Pro Gly Glu
1 5 101 5 10
<210> 10<210> 10
<211> 10<211> 10
<212> PRT<212>PRT
<213> искусственная<213> artificial
<220><220>
<223> линкерная последовательность<223> linker sequence
<400> 10<400> 10
Gly Glu Lys Lys Lys Leu Lys Ser Leu AlaGly Glu Lys Lys Lys Leu Lys Ser Leu Ala
1 5 101 5 10
<210> 11<210> 11
<211> 10<211> 10
<212> PRT<212>PRT
<213> искусственная<213> artificial
<220><220>
<223> линкерная последовательность<223> linker sequence
<400> 11<400> 11
Gln Val Lys Leu Glu Leu Gly His Arg AlaGln Val Lys Leu Glu Leu Gly His Arg Ala
1 5 101 5 10
<210> 12<210> 12
<211> 10<211> 10
<212> PRT<212>PRT
<213> искусственная<213> artificial
<220><220>
<223> линкерная последовательность<223> linker sequence
<400> 12<400> 12
Val Asn His Leu Arg Ser Glu Lys Leu ThrVal Asn His Leu Arg Ser Glu Lys Leu Thr
1 5 101 5 10
<210> 13<210> 13
<211> 7<211> 7
<212> PRT<212>PRT
<213> искусственная<213> artificial
<220><220>
<223> линкерная последовательность<223> linker sequence
<400> 13<400> 13
Ala Val Val Asn Val Arg AlaAla Val Val Asn Val Arg Ala
1 515
<210> 14<210> 14
<211> 7<211> 7
<212> PRT<212>PRT
<213> искусственная<213> artificial
<220><220>
<223> линкерная последовательность<223> linker sequence
<400> 14<400> 14
Lys Gly Asp Lys Ile Ala IleLys Gly Asp Lys Ile Ala Ile
1 515
<210> 15<210> 15
<211> 10<211> 10
<212> PRT<212>PRT
<213> искусственная<213> artificial
<220><220>
<223> линкерная последовательность<223> linker sequence
<400> 15<400> 15
Val Pro Lys Glu Lys Glu Lys Glu Lys ValVal Pro Lys Glu Lys Glu Lys Glu Lys Val
1 5 101 5 10
<210> 16<210> 16
<211> 12<211> 12
<212> PRT<212>PRT
<213> искусственная<213> artificial
<220><220>
<223> линкерная последовательность<223> linker sequence
<400> 16<400> 16
Ala Thr Lys Ala Val Ser Val Leu Lys Gly Asp GlyAla Thr Lys Ala Val Ser Val Leu Lys Gly Asp Gly
1 5 101 5 10
<210> 17<210> 17
<211> 9<211> 9
<212> PRT<212>PRT
<213> искусственная<213> artificial
<220><220>
<223> линкерная последовательность<223> linker sequence
<400> 17<400> 17
Gln Gly Ile Ile Asn Phe Glu Gln LysGln Gly Ile Ile Asn Phe Glu Gln Lys
1 515
<210> 18<210> 18
<211> 11<211> 11
<212> PRT<212>PRT
<213> искусственная<213> artificial
<220><220>
<223> линкерная последовательность<223> linker sequence
<400> 18<400> 18
Gly Pro Val Lys Val Trp Gly Ser Ile Lys GlyGly Pro Val Lys Val Trp Gly Ser Ile Lys Gly
1 5 101 5 10
<210> 19<210> 19
<211> 7<211> 7
<212> PRT<212>PRT
<213> искусственная<213> artificial
<220><220>
<223> линкерная последовательность<223> linker sequence
<400> 19<400> 19
Tyr Glu Lys Glu Lys Glu LysTyr Glu Lys Glu Lys Glu Lys
1 515
<210> 20<210> 20
<211> 10<211> 10
<212> PRT<212>PRT
<213> искусственная<213> artificial
<220><220>
<223> линкерная последовательность<223> linker sequence
<400> 20<400> 20
Gly Gly Ser Thr Pro Leu Lys Ser Leu AlaGly Gly Ser Thr Pro Leu Lys Ser Leu Ala
1 5 101 5 10
<210> 21<210> 21
<211> 14<211> 14
<212> PRT<212>PRT
<213> искусственная<213> artificial
<220><220>
<223> линкерная последовательность<223> linker sequence
<400> 21<400> 21
Gly Ile Thr Gly Thr Lys Lys Tyr Gln Ser Ser Pro Asp GlyGly Ile Thr Gly Thr Lys Lys Tyr Gln Ser Ser Pro Asp Gly
1 5 101 5 10
<210> 22<210> 22
<211> 17<211> 17
<212> PRT<212>PRT
<213> искусственная<213> artificial
<220><220>
<223> линкерная последовательность<223> linker sequence
<400> 22<400> 22
Ser Tyr Ser Tyr Thr Tyr Asn Tyr Ala Glu Tyr Phe Gln His Trp GlySer Tyr Ser Tyr Thr Tyr Asn Tyr Ala Glu Tyr Phe Gln His Trp Gly
1 5 10 151 5 10 15
GlnGln
<210> 23<210> 23
<211> 28<211> 28
<212> PRT<212>PRT
<213> человека<213> person
<400> 23<400> 23
Ser Leu Arg Arg Ser Ser Cys Phe Gly Gly Arg Met Asp Arg Ile GlySer Leu Arg Arg Ser Ser Cys Phe Gly Gly Arg Met Asp Arg Ile Gly
1 5 10 151 5 10 15
Ala Gln Ser Gly Leu Gly Cys Asn Ser Phe Arg TyrAla Gln Ser Gly Leu Gly Cys Asn Ser Phe Arg Tyr
20 2520 25
<210> 24<210> 24
<211> 28<211> 28
<212> PRT<212>PRT
<213> человека<213> person
<400> 24<400> 24
Met Val Gln Gly Ser Gly Cys Phe Gly Arg Lys Met Asp Arg Ile SerMet Val Gln Gly Ser Gly Cys Phe Gly Arg Lys Met Asp Arg Ile Ser
1 5 10 151 5 10 15
Ser Ser Ser Gly Leu Gly Cys Lys Val Leu Arg ArgSer Ser Ser Gly Leu Gly Cys Lys Val Leu Arg Arg
20 2520 25
<210> 25<210> 25
<211> 22<211> 22
<212> PRT<212>PRT
<213> человека<213> person
<400> 25<400> 25
Gly Leu Ser Lys Gly Cys Phe Gly Leu Lys Leu Asp Arg Ile Gly SerGly Leu Ser Lys Gly Cys Phe Gly Leu Lys Leu Asp Arg Ile Gly Ser
1 5 10 151 5 10 15
Met Ser Gly Leu Gly CysMet Ser Gly Leu Gly Cys
2020
<210> 26<210> 26
<211> 15<211> 15
<212> PRT<212>PRT
<213> искусственная<213> artificial
<220><220>
<223> N-концевая последовательность (без эталонной aa)<223> N-terminal sequence (without reference aa)
<400> 26<400> 26
Gly Phe Thr Phe Gly Ser Gly Ser Gly Ser Gly Gly Ser Gly GlyGly Phe Thr Phe Gly Ser Gly Ser Gly Ser Gly Gly Ser Gly Gly
1 5 10 151 5 10 15
<210> 27<210> 27
<211> 23<211> 23
<212> PRT<212>PRT
<213> искусственная<213> artificial
<220><220>
<223> N-концевая последовательность (без эталонной aa)<223> N-terminal sequence (without reference aa)
<400> 27<400> 27
Gly Phe Thr Phe Gly Ser Gly Ser Gly Ser Gly Ser Gly Ser Gly SerGly Phe Thr Phe Gly Ser Gly Ser Gly Ser Gly Ser Gly Ser Gly Ser
1 5 10 151 5 10 15
Pro Asp Gly Gly Ser Gly GlyPro Asp Gly Gly Ser Gly Gly
2020
<210> 28<210> 28
<211> 19<211> 19
<212> PRT<212>PRT
<213> искусственная<213> artificial
<220><220>
<223> N-концевая последовательность (без эталонной aa)<223> N-terminal sequence (without reference aa)
<400> 28<400> 28
Gly Ser Gly Ser Gly Ser Gly Ser Gly Ser Gly Ser Pro Asp Gly GlyGly Ser Gly Ser Gly Ser Gly Ser Gly Ser Gly Ser Pro Asp Gly Gly
1 5 10 151 5 10 15
Ser Gly GlySer Gly Gly
<210> 29<210> 29
<211> 20<211> 20
<212> PRT<212>PRT
<213> искусственная<213> artificial
<220><220>
<223> N-концевая последовательность (без эталонной aa)<223> N-terminal sequence (without reference aa)
<400> 29<400> 29
Ser Gly Ser Gly Ser Gly Ser Gly Ser Gly Ser Gly Ser Pro Asp GlySer Gly Ser Gly Ser Gly Ser Gly Ser Gly Ser Gly Ser Pro Asp Gly
1 5 10 151 5 10 15
Gly Ser Gly GlyGly Ser Gly Gly
2020
<210> 30<210> 30
<211> 17<211> 17
<212> PRT<212>PRT
<213> искусственная<213> artificial
<220><220>
<223> N-концевая последовательность (без эталонной aa)<223> N-terminal sequence (without reference aa)
<400> 30<400> 30
Ser Gly Pro Asn Pro Asn Lys Asn Pro Asn Pro Asn Pro Gly Ser GlySer Gly Pro Asn Pro Asn Lys Asn Pro Asn Pro Asn Pro Gly Ser Gly
1 5 10 151 5 10 15
GlyGly
<210> 31<210> 31
<211> 20<211> 20
<212> PRT<212>PRT
<213> искусственная<213> artificial
<220><220>
<223> N-концевая последовательность (без эталонной aa)<223> N-terminal sequence (without reference aa)
<400> 31<400> 31
Ser Gly Pro Asn Pro Asn Pro Asn Pro Asn Pro Asn Ser Pro Asp GlySer Gly Pro Asn Pro Asn Pro Asn Pro Asn Pro Asn Ser Pro Asp Gly
1 5 10 151 5 10 15
Gly Ser Gly GlyGly Ser Gly Gly
2020
<210> 32<210> 32
<211> 20<211> 20
<212> PRT<212>PRT
<213> искусственная<213> artificial
<220><220>
<223> N-концевая последовательность (без эталонной aa)<223> N-terminal sequence (without reference aa)
<400> 32<400> 32
Ala Lys Val His Pro Asn Pro Asn Pro Asn Pro Asn Ser Pro Asp GlyAla Lys Val His Pro Asn Pro Asn Pro Asn Pro Asn Ser Pro Asp Gly
1 5 10 151 5 10 15
Gly Ser Gly GlyGly Ser Gly Gly
2020
<210> 33<210> 33
<211> 19<211> 19
<212> PRT<212>PRT
<213> искусственная<213> artificial
<220><220>
<223> N-концевая последовательность (без эталонной aa)<223> N-terminal sequence (without reference aa)
<400> 33<400> 33
Ala Ala Trp Asn Pro Asn Pro Asn Pro Asn Pro Asn Pro Asn Gly GlyAla Ala Trp Asn Pro Asn Pro Asn Pro Asn Pro Asn Pro Asn Gly Gly
1 5 10 151 5 10 15
Ser Gly GlySer Gly Gly
<210> 34<210> 34
<211> 20<211> 20
<212> PRT<212>PRT
<213> искусственная<213> artificial
<220><220>
<223> N-концевая последовательность (без эталонной aa)<223> N-terminal sequence (without reference aa)
<400> 34<400> 34
Ala Lys Gly Ile Thr Gly Thr Lys Lys Tyr Gln Ser Ser Pro Asp GlyAla Lys Gly Ile Thr Gly Thr Lys Lys Tyr Gln Ser Ser Pro Asp Gly
1 5 10 151 5 10 15
Gly Ser Gly GlyGly Ser Gly Gly
2020
<210> 35<210> 35
<211> 19<211> 19
<212> PRT<212>PRT
<213> искусственная<213> artificial
<220><220>
<223> N-концевая последовательность (без эталонной aa)<223> N-terminal sequence (without reference aa)
<400> 35<400> 35
Ser Gly Ser Thr Tyr Ile Ser Asn Val Asn His Lys Pro Asp Gly GlySer Gly Ser Thr Tyr Ile Ser Asn Val Asn His Lys Pro Asp Gly Gly
1 5 10 151 5 10 15
Ser Gly GlySer Gly Gly
<210> 36<210> 36
<211> 18<211> 18
<212> PRT<212>PRT
<213> искусственная<213> artificial
<220><220>
<223> N-концевая последовательность (без эталонной aa)<223> N-terminal sequence (without reference aa)
<400> 36<400> 36
Ser Gly Thr Ser Ala Ser Leu Ala Ile Thr Gly Pro Asp Gly Gly SerSer Gly Thr Ser Ala Ser Leu Ala Ile Thr Gly Pro Asp Gly Gly Ser
1 5 10 151 5 10 15
Gly GlyGly Gly
<210> 37<210> 37
<211> 17<211> 17
<212> PRT<212>PRT
<213> искусственная<213> artificial
<220><220>
<223> N-концевая последовательность (без эталонной aa)<223> N-terminal sequence (without reference aa)
<400> 37<400> 37
Gly Val Pro Lys Glu Lys Glu Lys Glu Lys Val Ser Thr Ala Val GlyGly Val Pro Lys Glu Lys Glu Lys Glu Lys Val Ser Thr Ala Val Gly
1 5 10 151 5 10 15
GlyGly
<210> 38<210> 38
<211> 17<211> 17
<212> PRT<212>PRT
<213> искусственная<213> artificial
<220><220>
<223> N-концевая последовательность (без эталонной aa)<223> N-terminal sequence (without reference aa)
<400> 38<400> 38
Ser Val Val Val Thr Ser His Gln Ala Pro Gly Glu Gly Gly Ser GlySer Val Val Val Thr Ser His Gln Ala Pro Gly Glu Gly Gly Ser Gly
1 5 10 151 5 10 15
GlyGly
<210> 39<210> 39
<211> 11<211> 11
<212> PRT<212>PRT
<213> искусственная<213> artificial
<220><220>
<223> C-концевая последовательность (без эталонной aa)<223> C-terminal sequence (without reference aa)
<400> 39<400> 39
Gly Gly Ser Gly Gly Ser Gly Ser Gly Ser GlyGly Gly Ser Gly Gly Ser Gly Ser Gly Ser Gly
1 5 101 5 10
<210> 40<210> 40
<211> 14<211> 14
<212> PRT<212>PRT
<213> искусственная<213> artificial
<220><220>
<223> C-концевая последовательность (без эталонной aa)<223> C-terminal sequence (without reference aa)
<400> 40<400> 40
Gly Ser Tyr Gly Ser Gly Ser Gly Ser Gly Ser Gly Ser GlyGly Ser Tyr Gly Ser Gly Ser Gly Ser Gly Ser Gly Ser Gly
1 5 101 5 10
<210> 41<210> 41
<211> 17<211> 17
<212> PRT<212>PRT
<213> искусственная<213> artificial
<220><220>
<223> C-концевая последовательность (без эталонной aa)<223> C-terminal sequence (without reference aa)
<400> 41<400> 41
Gly Ser Tyr Gly Ser Gly Gly Ser Gly Ser Gly Ser Gly Asn Arg ProGly Ser Tyr Gly Ser Gly Gly Ser Gly Ser Gly Ser Gly Asn Arg Pro
1 5 10 151 5 10 15
SerSer
<210> 42<210> 42
<211> 15<211> 15
<212> PRT<212>PRT
<213> искусственная<213> artificial
<220><220>
<223> C-концевая последовательность (без эталонной aa)<223> C-terminal sequence (without reference aa)
<400> 42<400> 42
Gly Ser Tyr Gly Ser Gly Ser Gly Ser Gly Ser Gly Ser Gly SerGly Ser Tyr Gly Ser Gly Ser Gly Ser Gly Ser Gly Ser Gly Ser
1 5 10 151 5 10 15
<210> 43<210> 43
<211> 14<211> 14
<212> PRT<212>PRT
<213> искусственная<213> artificial
<220><220>
<223> C-концевая последовательность (без эталонной aa)<223> C-terminal sequence (without reference aa)
<400> 43<400> 43
Gly Ser Asn Pro Asn Glu Asn Pro Asn Pro Asn Pro Gly SerGly Ser Asn Pro Asn Glu Asn Pro Asn Pro Asn Pro Gly Ser
1 5 101 5 10
<210> 44<210> 44
<211> 15<211> 15
<212> PRT<212>PRT
<213> искусственная<213> artificial
<220><220>
<223> C-концевая последовательность (без эталонной aa)<223> C-terminal sequence (without reference aa)
<400> 44<400> 44
Gly Ser Tyr Asn Pro Asn Pro Asn Pro Asn Pro Asn Pro Gly SerGly Ser Tyr Asn Pro Asn Pro Asn Pro Asn Pro Asn Pro Gly Ser
1 5 10 151 5 10 15
<210> 45<210> 45
<211> 18<211> 18
<212> PRT<212>PRT
<213> искусственная<213> artificial
<220><220>
<223> C-концевая последовательность (без эталонной aa)<223> C-terminal sequence (without reference aa)
<400> 45<400> 45
Gly Ser Tyr Asn Pro Asn Pro Asn Pro Asn Pro His Val Asp Val TrpGly Ser Tyr Asn Pro Asn Pro Asn Pro Asn Pro His Val Asp Val Trp
1 5 10 151 5 10 15
Gly GlnGly Gln
<210> 46<210> 46
<211> 14<211> 14
<212> PRT<212>PRT
<213> искусственная<213> artificial
<220><220>
<223> C-концевая последовательность (без эталонной aa)<223> C-terminal sequence (without reference aa)
<400> 46<400> 46
Gly Ser Asn Pro Asn Pro Asn Pro Asn Pro Asn Pro Asn ValGly Ser Asn Pro Asn Pro Asn Pro Asn Pro Asn Pro Asn Val
1 5 101 5 10
<210> 47<210> 47
<211> 18<211> 18
<212> PRT<212>PRT
<213> искусственная<213> artificial
<220><220>
<223> C-концевая последовательность (без эталонной aa)<223> C-terminal sequence (without reference aa)
<400> 47<400> 47
Gly Ser Tyr Ser Tyr Thr Tyr Asn Tyr Ala Glu Tyr Phe Gln His TrpGly Ser Tyr Ser Tyr Thr Tyr Asn Tyr Ala Glu Tyr Phe Gln His Trp
1 5 10 151 5 10 15
Gly GlnGly Gln
<210> 48<210> 48
<211> 14<211> 14
<212> PRT<212>PRT
<213> искусственная<213> artificial
<220><220>
<223> C-концевая последовательность (без эталонной aa)<223> C-terminal sequence (without reference aa)
<400> 48<400> 48
Gly Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Lys Val Glu Gly Gly SerGly Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Lys Val Glu Gly Gly Ser
1 5 101 5 10
<210> 49<210> 49
<211> 13<211> 13
<212> PRT<212>PRT
<213> искусственная<213> artificial
<220><220>
<223> C-концевая последовательность (без эталонной aa)<223> C-terminal sequence (without reference aa)
<400> 49<400> 49
Gly Ser Asp Arg Phe Ser Gly Ser Lys Ser Gly Gly SerGly Ser Asp Arg Phe Ser Gly Ser Lys Ser Gly Gly Ser
1 5 101 5 10
<210> 50<210> 50
<211> 16<211> 16
<212> PRT<212>PRT
<213> искусственная<213> artificial
<220><220>
<223> C-концевая последовательность (без эталонной aa)<223> C-terminal sequence (without reference aa)
<400> 50<400> 50
Gly Ser Ala Pro Leu Glu Val Pro Lys Glu Lys Glu Lys Glu Lys ValGly Ser Ala Pro Leu Glu Val Pro Lys Glu Lys Glu Lys Glu Lys Val
1 5 10 151 5 10 15
<210> 51<210> 51
<211> 11<211> 11
<212> PRT<212>PRT
<213> искусственная<213> artificial
<220><220>
<223> C-концевая последовательность (без эталонной aa)<223> C-terminal sequence (without reference aa)
<400> 51<400> 51
Gly Gly Ser Thr Pro Leu Lys Ser Leu Ala SerGly Gly Ser Thr Pro Leu Lys Ser Leu Ala Ser
1 5 101 5 10
<210> 52<210> 52
<211> 54<211> 54
<212> PRT<212>PRT
<213> искусственная<213> artificial
<220><220>
<223> N-концевая последовательность-NP-C-концевая последовательность<223> N-terminal sequence-NP-C-terminal sequence
(без(without
эталонной aas)reference aas)
<400> 52<400> 52
Gly Phe Thr Phe Gly Ser Gly Ser Gly Ser Gly Gly Ser Gly Gly SerGly Phe Thr Phe Gly Ser Gly Ser Gly Ser Gly Gly Ser Gly Gly Ser
1 5 10 151 5 10 15
Leu Arg Arg Ser Ser Cys Phe Gly Gly Arg Met Asp Arg Ile Gly AlaLeu Arg Arg Ser Ser Cys Phe Gly Gly Arg Met Asp Arg Ile Gly Ala
20 25 3020 25 30
Gln Ser Gly Leu Gly Cys Asn Ser Phe Arg Tyr Gly Gly Ser Gly GlyGln Ser Gly Leu Gly Cys Asn Ser Phe Arg Tyr Gly Gly Ser Gly Gly
35 40 4535 40 45
Ser Gly Ser Gly Ser GlySer Gly Ser Gly Ser Gly
5050
<210> 53<210> 53
<211> 65<211> 65
<212> PRT<212>PRT
<213> искусственная<213> artificial
<220><220>
<223> N-концевая последовательность-NP-C-концевая последовательность<223> N-terminal sequence-NP-C-terminal sequence
(без(without
эталонной aas)reference aas)
<400> 53<400> 53
Gly Phe Thr Phe Gly Ser Gly Ser Gly Ser Gly Ser Gly Ser Gly SerGly Phe Thr Phe Gly Ser Gly Ser Gly Ser Gly Ser Gly Ser Gly Ser
1 5 10 151 5 10 15
Pro Asp Gly Gly Ser Gly Gly Ser Leu Arg Arg Ser Ser Cys Phe GlyPro Asp Gly Gly Ser Gly Gly Ser Leu Arg Arg Ser Ser Cys Phe Gly
20 25 3020 25 30
Gly Arg Met Asp Arg Ile Gly Ala Gln Ser Gly Leu Gly Cys Asn SerGly Arg Met Asp Arg Ile Gly Ala Gln Ser Gly Leu Gly Cys Asn Ser
35 40 4535 40 45
Phe Arg Tyr Gly Ser Tyr Gly Ser Gly Ser Gly Ser Gly Ser Gly SerPhe Arg Tyr Gly Ser Tyr Gly Ser Gly Ser Gly Ser Gly Ser Gly Ser
50 55 6050 55 60
GlyGly
6565
<210> 54<210> 54
<211> 64<211> 64
<212> PRT<212>PRT
<213> искусственная<213> artificial
<220><220>
<223> N-концевая последовательность-NP-C-концевая последовательность<223> N-terminal sequence-NP-C-terminal sequence
(без(without
эталонной aas)reference aas)
<400> 54<400> 54
Gly Ser Gly Ser Gly Ser Gly Ser Gly Ser Gly Ser Pro Asp Gly GlyGly Ser Gly Ser Gly Ser Gly Ser Gly Ser Gly Ser Pro Asp Gly Gly
1 5 10 151 5 10 15
Ser Gly Gly Ser Leu Arg Arg Ser Ser Cys Phe Gly Gly Arg Met AspSer Gly Gly Ser Leu Arg Arg Ser Ser Cys Phe Gly Gly Arg Met Asp
20 25 3020 25 30
Arg Ile Gly Ala Gln Ser Gly Leu Gly Cys Asn Ser Phe Arg Tyr GlyArg Ile Gly Ala Gln Ser Gly Leu Gly Cys Asn Ser Phe Arg Tyr Gly
35 40 4535 40 45
Ser Tyr Gly Ser Gly Gly Ser Gly Ser Gly Ser Gly Asn Arg Pro SerSer Tyr Gly Ser Gly Gly Ser Gly Ser Gly Ser Gly Asn Arg Pro Ser
50 55 6050 55 60
<210> 55<210> 55
<211> 63<211> 63
<212> PRT<212>PRT
<213> искусственная<213> artificial
<220><220>
<223> N-концевая последовательность-NP-C-концевая последовательность<223> N-terminal sequence-NP-C-terminal sequence
(без(without
эталонной aas)reference aas)
<400> 55<400> 55
Ser Gly Ser Gly Ser Gly Ser Gly Ser Gly Ser Gly Ser Pro Asp GlySer Gly Ser Gly Ser Gly Ser Gly Ser Gly Ser Gly Ser Pro Asp Gly
1 5 10 151 5 10 15
Gly Ser Gly Gly Ser Leu Arg Arg Ser Ser Cys Phe Gly Gly Arg MetGly Ser Gly Gly Ser Leu Arg Arg Ser Ser Cys Phe Gly Gly Arg Met
20 25 3020 25 30
Asp Arg Ile Gly Ala Gln Ser Gly Leu Gly Cys Asn Ser Phe Arg TyrAsp Arg Ile Gly Ala Gln Ser Gly Leu Gly Cys Asn Ser Phe Arg Tyr
35 40 4535 40 45
Gly Ser Tyr Gly Ser Gly Ser Gly Ser Gly Ser Gly Ser Gly SerGly Ser Tyr Gly Ser Gly Ser Gly Ser Gly Ser Gly Ser Gly Ser
50 55 6050 55 60
<210> 56<210> 56
<211> 59<211> 59
<212> PRT<212>PRT
<213> искусственная<213> artificial
<220><220>
<223> N-концевая последовательность-NP-C-концевая последовательность<223> N-terminal sequence-NP-C-terminal sequence
(wo ref(wo ref
aas)aas)
<400> 56<400> 56
Ser Gly Pro Asn Pro Asn Lys Asn Pro Asn Pro Asn Pro Gly Ser GlySer Gly Pro Asn Pro Asn Lys Asn Pro Asn Pro Asn Pro Gly Ser Gly
1 5 10 151 5 10 15
Gly Ser Leu Arg Arg Ser Ser Cys Phe Gly Gly Arg Met Asp Arg IleGly Ser Leu Arg Arg Ser Ser Cys Phe Gly Gly Arg Met Asp Arg Ile
20 25 3020 25 30
Gly Ala Gln Ser Gly Leu Gly Cys Asn Ser Phe Arg Tyr Gly Ser AsnGly Ala Gln Ser Gly Leu Gly Cys Asn Ser Phe Arg Tyr Gly Ser Asn
35 40 4535 40 45
Pro Asn Glu Asn Pro Asn Pro Asn Pro Gly SerPro Asn Glu Asn Pro Asn Pro Asn Pro Gly Ser
50 5550 55
<210> 57<210> 57
<211> 63<211> 63
<212> PRT<212>PRT
<213> искусственная<213> artificial
<220><220>
<223> N-концевая последовательность-NP-C-концевая последовательность<223> N-terminal sequence-NP-C-terminal sequence
(без(without
эталонной aas)reference aas)
<400> 57<400> 57
Ser Gly Pro Asn Pro Asn Pro Asn Pro Asn Pro Asn Ser Pro Asp GlySer Gly Pro Asn Pro Asn Pro Asn Pro Asn Pro Asn Ser Pro Asp Gly
1 5 10 151 5 10 15
Gly Ser Gly Gly Ser Leu Arg Arg Ser Ser Cys Phe Gly Gly Arg MetGly Ser Gly Gly Ser Leu Arg Arg Ser Ser Cys Phe Gly Gly Arg Met
20 25 3020 25 30
Asp Arg Ile Gly Ala Gln Ser Gly Leu Gly Cys Asn Ser Phe Arg TyrAsp Arg Ile Gly Ala Gln Ser Gly Leu Gly Cys Asn Ser Phe Arg Tyr
35 40 4535 40 45
Gly Ser Tyr Asn Pro Asn Pro Asn Pro Asn Pro Asn Pro Gly SerGly Ser Tyr Asn Pro Asn Pro Asn Pro Asn Pro Asn Pro Gly Ser
50 55 6050 55 60
<210> 58<210> 58
<211> 66<211> 66
<212> PRT<212>PRT
<213> искусственная<213> artificial
<220><220>
<223> N-концевая последовательность-NP-C-концевая последовательность<223> N-terminal sequence-NP-C-terminal sequence
(без(without
эталонной aas)reference aas)
<400> 58<400> 58
Ala Lys Val His Pro Asn Pro Asn Pro Asn Pro Asn Ser Pro Asp GlyAla Lys Val His Pro Asn Pro Asn Pro Asn Pro Asn Ser Pro Asp Gly
1 5 10 151 5 10 15
Gly Ser Gly Gly Ser Leu Arg Arg Ser Ser Cys Phe Gly Gly Arg MetGly Ser Gly Gly Ser Leu Arg Arg Ser Ser Cys Phe Gly Gly Arg Met
20 25 3020 25 30
Asp Arg Ile Gly Ala Gln Ser Gly Leu Gly Cys Asn Ser Phe Arg TyrAsp Arg Ile Gly Ala Gln Ser Gly Leu Gly Cys Asn Ser Phe Arg Tyr
35 40 4535 40 45
Gly Ser Tyr Asn Pro Asn Pro Asn Pro Asn Pro His Val Asp Val TrpGly Ser Tyr Asn Pro Asn Pro Asn Pro Asn Pro His Val Asp Val Trp
50 55 6050 55 60
Gly GlnGly Gln
6565
<210> 59<210> 59
<211> 61<211> 61
<212> PRT<212>PRT
<213> искусственная<213> artificial
<220><220>
<223> N-концевая последовательность-NP-C-концевая последовательность<223> N-terminal sequence-NP-C-terminal sequence
(без(without
эталонной aas)reference aas)
<400> 59<400> 59
Ala Ala Trp Asn Pro Asn Pro Asn Pro Asn Pro Asn Pro Asn Gly GlyAla Ala Trp Asn Pro Asn Pro Asn Pro Asn Pro Asn Pro Asn Gly Gly
1 5 10 151 5 10 15
Ser Gly Gly Ser Leu Arg Arg Ser Ser Cys Phe Gly Gly Arg Met AspSer Gly Gly Ser Leu Arg Arg Ser Ser Cys Phe Gly Gly Arg Met Asp
20 25 3020 25 30
Arg Ile Gly Ala Gln Ser Gly Leu Gly Cys Asn Ser Phe Arg Tyr GlyArg Ile Gly Ala Gln Ser Gly Leu Gly Cys Asn Ser Phe Arg Tyr Gly
35 40 4535 40 45
Ser Asn Pro Asn Pro Asn Pro Asn Pro Asn Pro Asn ValSer Asn Pro Asn Pro Asn Pro Asn Pro Asn Pro Asn Val
50 55 6050 55 60
<210> 60<210> 60
<211> 66<211> 66
<212> PRT<212>PRT
<213> искусственная<213> artificial
<220><220>
<223> N-концевая последовательность-NP-C-концевая последовательность<223> N-terminal sequence-NP-C-terminal sequence
(без(without
эталонной aas)reference aas)
<400> 60<400> 60
Ala Lys Gly Ile Thr Gly Thr Lys Lys Tyr Gln Ser Ser Pro Asp GlyAla Lys Gly Ile Thr Gly Thr Lys Lys Tyr Gln Ser Ser Pro Asp Gly
1 5 10 151 5 10 15
Gly Ser Gly Gly Ser Leu Arg Arg Ser Ser Cys Phe Gly Gly Arg MetGly Ser Gly Gly Ser Leu Arg Arg Ser Ser Cys Phe Gly Gly Arg Met
20 25 3020 25 30
Asp Arg Ile Gly Ala Gln Ser Gly Leu Gly Cys Asn Ser Phe Arg TyrAsp Arg Ile Gly Ala Gln Ser Gly Leu Gly Cys Asn Ser Phe Arg Tyr
35 40 4535 40 45
Gly Ser Tyr Ser Tyr Thr Tyr Asn Tyr Ala Glu Tyr Phe Gln His TrpGly Ser Tyr Ser Tyr Thr Tyr Asn Tyr Ala Glu Tyr Phe Gln His Trp
50 55 6050 55 60
Gly GlnGly Gln
6565
<210> 61<210> 61
<211> 61<211> 61
<212> PRT<212>PRT
<213> искусственная<213> artificial
<220><220>
<223> N-концевая последовательность-NP-C-концевая последовательность<223> N-terminal sequence-NP-C-terminal sequence
(без(without
эталонной aas)reference aas)
<400> 61<400> 61
Ser Gly Ser Thr Tyr Ile Ser Asn Val Asn His Lys Pro Asp Gly GlySer Gly Ser Thr Tyr Ile Ser Asn Val Asn His Lys Pro Asp Gly Gly
1 5 10 151 5 10 15
Ser Gly Gly Ser Leu Arg Arg Ser Ser Cys Phe Gly Gly Arg Met AspSer Gly Gly Ser Leu Arg Arg Ser Ser Cys Phe Gly Gly Arg Met Asp
20 25 3020 25 30
Arg Ile Gly Ala Gln Ser Gly Leu Gly Cys Asn Ser Phe Arg Tyr GlyArg Ile Gly Ala Gln Ser Gly Leu Gly Cys Asn Ser Phe Arg Tyr Gly
35 40 4535 40 45
Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Lys Val Glu Gly Gly SerSer Asn Thr Lys Val Asp Lys Lys Val Glu Gly Gly Ser
50 55 6050 55 60
<210> 62<210> 62
<211> 59<211> 59
<212> PRT<212>PRT
<213> искусственная<213> artificial
<220><220>
<223> N-концевая последовательность-NP-C-концевая последовательность<223> N-terminal sequence-NP-C-terminal sequence
(без(without
эталонной aas)reference aas)
<400> 62<400> 62
Ser Gly Thr Ser Ala Ser Leu Ala Ile Thr Gly Pro Asp Gly Gly SerSer Gly Thr Ser Ala Ser Leu Ala Ile Thr Gly Pro Asp Gly Gly Ser
1 5 10 151 5 10 15
Gly Gly Ser Leu Arg Arg Ser Ser Cys Phe Gly Gly Arg Met Asp ArgGly Gly Ser Leu Arg Arg Ser Ser Cys Phe Gly Gly Arg Met Asp Arg
20 25 3020 25 30
Ile Gly Ala Gln Ser Gly Leu Gly Cys Asn Ser Phe Arg Tyr Gly SerIle Gly Ala Gln Ser Gly Leu Gly Cys Asn Ser Phe Arg Tyr Gly Ser
35 40 4535 40 45
Asp Arg Phe Ser Gly Ser Lys Ser Gly Gly SerAsp Arg Phe Ser Gly Ser Lys Ser Gly Gly Ser
50 5550 55
<210> 63<210> 63
<211> 61<211> 61
<212> PRT<212>PRT
<213> искусственная<213> artificial
<220><220>
<223> N-концевая последовательность-NP-C-концевая последовательность<223> N-terminal sequence-NP-C-terminal sequence
(без(without
эталонной aas)reference aas)
<400> 63<400> 63
Gly Val Pro Lys Glu Lys Glu Lys Glu Lys Val Ser Thr Ala Val GlyGly Val Pro Lys Glu Lys Glu Lys Glu Lys Val Ser Thr Ala Val Gly
1 5 10 151 5 10 15
Gly Ser Leu Arg Arg Ser Ser Cys Phe Gly Gly Arg Met Asp Arg IleGly Ser Leu Arg Arg Ser Ser Cys Phe Gly Gly Arg Met Asp Arg Ile
20 25 3020 25 30
Gly Ala Gln Ser Gly Leu Gly Cys Asn Ser Phe Arg Tyr Gly Ser AlaGly Ala Gln Ser Gly Leu Gly Cys Asn Ser Phe Arg Tyr Gly Ser Ala
35 40 4535 40 45
Pro Leu Glu Val Pro Lys Glu Lys Glu Lys Glu Lys ValPro Leu Glu Val Pro Lys Glu Lys Glu Lys Glu Lys Val
50 55 6050 55 60
<210> 64<210> 64
<211> 56<211> 56
<212> PRT<212>PRT
<213> искусственная<213> artificial
<220><220>
<223> N-концевая последовательность-NP-C-концевая последовательность<223> N-terminal sequence-NP-C-terminal sequence
(без(without
эталонной aas)reference aas)
<400> 64<400> 64
Ser Val Val Val Thr Ser His Gln Ala Pro Gly Glu Gly Gly Ser GlySer Val Val Val Thr Ser His Gln Ala Pro Gly Glu Gly Gly Ser Gly
1 5 10 151 5 10 15
Gly Ser Leu Arg Arg Ser Ser Cys Phe Gly Gly Arg Met Asp Arg IleGly Ser Leu Arg Arg Ser Ser Cys Phe Gly Gly Arg Met Asp Arg Ile
20 25 3020 25 30
Gly Ala Gln Ser Gly Leu Gly Cys Asn Ser Phe Arg Tyr Gly Gly SerGly Ala Gln Ser Gly Leu Gly Cys Asn Ser Phe Arg Tyr Gly Gly Ser
35 40 4535 40 45
Thr Pro Leu Lys Ser Leu Ala SerThr Pro Leu Lys Ser Leu Ala Ser
50 5550 55
<210> 65<210> 65
<211> 447<211> 447
<212> PRT<212>PRT
<213> человека<213> person
<400> 65<400> 65
Glu Val Gln Leu Leu Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly GlyGlu Val Gln Leu Leu Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1 5 10 151 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser TyrSer Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr
20 25 3020 25 30
Ala Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp ValAla Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 4535 40 45
Ser Ala Ile Ser Gly Ser Gly Gly Ser Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser ValSer Ala Ile Ser Gly Ser Gly Gly Ser Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val
50 55 6050 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu TyrLys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr
65 70 75 8065 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr CysLeu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 9585 90 95
Ala Lys Leu Thr Gly Ala Glu Tyr Phe Gln His Trp Gly Gln Gly ThrAla Lys Leu Thr Gly Ala Glu Tyr Phe Gln His Trp Gly Gln Gly Thr
100 105 110100 105 110
Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe ProLeu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro
115 120 125115 120 125
Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu GlyLeu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly
130 135 140130 135 140
Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp AsnCys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn
145 150 155 160145 150 155 160
Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu GlnSer Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln
165 170 175165 170 175
Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser SerSer Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser
180 185 190180 185 190
Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro SerSer Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser
195 200 205195 200 205
Asn Thr Lys Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys ThrAsn Thr Lys Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr
210 215 220210 215 220
His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro SerHis Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser
225 230 235 240225 230 235 240
Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser ArgVal Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg
245 250 255245 250 255
Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp ProThr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro
260 265 270260 265 270
Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn AlaGlu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala
275 280 285275 280 285
Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val ValLys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val
290 295 300290 295 300
Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu TyrSer Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr
305 310 315 320305 310 315 320
Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys ThrLys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr
325 330 335325 330 335
Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr LeuIle Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu
340 345 350340 345 350
Pro Pro Ser Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr CysPro Pro Ser Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys
355 360 365355 360 365
Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu SerLeu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser
370 375 380370 375 380
Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu AspAsn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp
385 390 395 400385 390 395 400
Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys SerSer Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser
405 410 415405 410 415
Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu AlaArg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala
420 425 430420 425 430
Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro GlyLeu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly
435 440 445435 440 445
<210> 66<210> 66
<211> 217<211> 217
<212> PRT<212>PRT
<213> человека<213> person
<400> 66<400> 66
Gln Ser Val Leu Thr Gln Pro Pro Ser Val Ser Gly Ala Pro Gly GlnGln Ser Val Leu Thr Gln Pro Pro Ser Val Ser Gly Ala Pro Gly Gln
1 5 10 151 5 10 15
Arg Val Thr Ile Ser Cys Thr Gly Ser Ser Ser Asn Ile Gly Ala GlyArg Val Thr Ile Ser Cys Thr Gly Ser Ser Ser Asn Ile Gly Ala Gly
20 25 3020 25 30
Tyr Asp Val His Trp Tyr Gln Gln Leu Pro Gly Thr Ala Pro Lys LeuTyr Asp Val His Trp Tyr Gln Gln Leu Pro Gly Thr Ala Pro Lys Leu
35 40 4535 40 45
Leu Ile Tyr Gly Asn Ser Asn Arg Pro Ser Gly Val Pro Asp Arg PheLeu Ile Tyr Gly Asn Ser Asn Arg Pro Ser Gly Val Pro Asp Arg Phe
50 55 6050 55 60
Ser Gly Ser Lys Ser Gly Thr Ser Ala Ser Leu Ala Ile Thr Gly LeuSer Gly Ser Lys Ser Gly Thr Ser Ala Ser Leu Ala Ile Thr Gly Leu
65 70 75 8065 70 75 80
Gln Ala Glu Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Gln Ser Tyr Asp Ser SerGln Ala Glu Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Gln Ser Tyr Asp Ser Ser
85 90 9585 90 95
Leu Ser Gly Val Val Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Thr Val Leu GlyLeu Ser Gly Val Val Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Thr Val Leu Gly
100 105 110100 105 110
Gln Pro Lys Ala Ala Pro Ser Val Thr Leu Phe Pro Pro Ser Ser GluGln Pro Lys Ala Ala Pro Ser Val Thr Leu Phe Pro Pro Ser Ser Glu
115 120 125115 120 125
Glu Leu Gln Ala Asn Lys Ala Thr Leu Val Cys Leu Ile Ser Asp PheGlu Leu Gln Ala Asn Lys Ala Thr Leu Val Cys Leu Ile Ser Asp Phe
130 135 140130 135 140
Tyr Pro Gly Ala Val Thr Val Ala Trp Lys Ala Asp Ser Ser Pro ValTyr Pro Gly Ala Val Thr Val Ala Trp Lys Ala Asp Ser Ser Pro Val
145 150 155 160145 150 155 160
Lys Ala Gly Val Glu Thr Thr Thr Pro Ser Lys Gln Ser Asn Asn LysLys Ala Gly Val Glu Thr Thr Thr Pro Ser Lys Gln Ser Asn Asn Lys
165 170 175165 170 175
Tyr Ala Ala Ser Ser Tyr Leu Ser Leu Thr Pro Glu Gln Trp Lys SerTyr Ala Ala Ser Ser Tyr Leu Ser Leu Thr Pro Glu Gln Trp Lys Ser
180 185 190180 185 190
His Arg Ser Tyr Ser Cys Gln Val Thr His Glu Gly Ser Thr Val GluHis Arg Ser Tyr Ser Cys Gln Val Thr His Glu Gly Ser Thr Val Glu
195 200 205195 200 205
Lys Thr Val Ala Pro Thr Glu Cys SerLys Thr Val Ala Pro Thr Glu Cys Ser
210 215210 215
<210> 67<210> 67
<211> 499<211> 499
<212> PRT<212>PRT
<213> искусственная<213> artificial
<220><220>
<223> NP привитая HC<223> NP grafted HC
<400> 67<400> 67
Glu Val Gln Leu Leu Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly GlyGlu Val Gln Leu Leu Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1 5 10 151 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser TyrSer Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr
20 25 3020 25 30
Ala Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp ValAla Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 4535 40 45
Ser Ala Ile Ser Gly Ser Gly Gly Ser Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser ValSer Ala Ile Ser Gly Ser Gly Gly Ser Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val
50 55 6050 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu TyrLys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr
65 70 75 8065 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr CysLeu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 9585 90 95
Thr Ser Val His Gln Glu Thr Lys Lys Tyr Gln Ser Ser Pro Asp GlyThr Ser Val His Gln Glu Thr Lys Lys Tyr Gln Ser Ser Pro Asp Gly
100 105 110100 105 110
Gly Ser Gly Gly Ser Leu Arg Arg Ser Ser Cys Phe Gly Gly Arg IleGly Ser Gly Gly Ser Leu Arg Arg Ser Ser Cys Phe Gly Gly Arg Ile
115 120 125115 120 125
Asp Arg Ile Gly Ala Gln Ser Gly Leu Gly Cys Asn Ser Phe Arg TyrAsp Arg Ile Gly Ala Gln Ser Gly Leu Gly Cys Asn Ser Phe Arg Tyr
130 135 140130 135 140
Gly Ser Tyr Ser Tyr Thr Tyr Asn Tyr Glu Trp His Val Asp Val TrpGly Ser Tyr Ser Tyr Thr Tyr Asn Tyr Glu Trp His Val Asp Val Trp
145 150 155 160145 150 155 160
Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly ProGly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro
165 170 175165 170 175
Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly ThrSer Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr
180 185 190180 185 190
Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val ThrAla Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr
195 200 205195 200 205
Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe ProVal Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro
210 215 220210 215 220
Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val ThrAla Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr
225 230 235 240225 230 235 240
Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val AsnVal Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn
245 250 255245 250 255
His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys SerHis Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys Ser
260 265 270260 265 270
Cys Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu LeuCys Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu
275 280 285275 280 285
Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr LeuGly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu
290 295 300290 295 300
Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val SerMet Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser
305 310 315 320305 310 315 320
His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val GluHis Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu
325 330 335325 330 335
Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser ThrVal His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr
340 345 350340 345 350
Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu AsnTyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn
355 360 365355 360 365
Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala ProGly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro
370 375 380370 375 380
Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro GlnIle Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln
385 390 395 400385 390 395 400
Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln ValVal Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val
405 410 415405 410 415
Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala ValSer Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val
420 425 430420 425 430
Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr ProGlu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro
435 440 445435 440 445
Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu ThrPro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr
450 455 460450 455 460
Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser ValVal Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val
465 470 475 480465 470 475 480
Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser LeuMet His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu
485 490 495485 490 495
Ser Pro GlySer Pro Gly
<210> 68<210> 68
<211> 499<211> 499
<212> PRT<212>PRT
<213> искусственная<213> artificial
<220><220>
<223> NP привитая HC<223> NP grafted HC
<400> 68<400> 68
Glu Val Gln Leu Leu Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly GlyGlu Val Gln Leu Leu Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1 5 10 151 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser TyrSer Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr
20 25 3020 25 30
Ala Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp ValAla Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 4535 40 45
Ser Ala Ile Ser Gly Ser Gly Gly Ser Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser ValSer Ala Ile Ser Gly Ser Gly Gly Ser Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val
50 55 6050 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu TyrLys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr
65 70 75 8065 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr CysLeu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 9585 90 95
Thr Ser Val His Gln Glu Thr Lys Lys Tyr Gln Ser Ser Pro Asp GlyThr Ser Val His Gln Glu Thr Lys Lys Tyr Gln Ser Ser Pro Asp Gly
100 105 110100 105 110
Gly Ser Gly Gly Ser Leu Arg Arg Ser Ser Cys Phe Gly Gly Arg MetGly Ser Gly Gly Ser Leu Arg Arg Ser Ser Cys Phe Gly Gly Arg Met
115 120 125115 120 125
Asp Arg Ile Gly Ala Gln Ser Gly Leu Gly Cys Asn Ser Phe Arg TyrAsp Arg Ile Gly Ala Gln Ser Gly Leu Gly Cys Asn Ser Phe Arg Tyr
130 135 140130 135 140
Gly Ser Tyr Ser Tyr Thr Tyr Asn Tyr Glu Trp His Val Asp Val TrpGly Ser Tyr Ser Tyr Thr Tyr Asn Tyr Glu Trp His Val Asp Val Trp
145 150 155 160145 150 155 160
Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly ProGly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro
165 170 175165 170 175
Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly ThrSer Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr
180 185 190180 185 190
Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val ThrAla Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr
195 200 205195 200 205
Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe ProVal Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro
210 215 220210 215 220
Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val ThrAla Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr
225 230 235 240225 230 235 240
Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val AsnVal Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn
245 250 255245 250 255
His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys SerHis Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys Ser
260 265 270260 265 270
Cys Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu LeuCys Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu
275 280 285275 280 285
Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr LeuGly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu
290 295 300290 295 300
Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val SerMet Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser
305 310 315 320305 310 315 320
His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val GluHis Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu
325 330 335325 330 335
Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser ThrVal His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr
340 345 350340 345 350
Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu AsnTyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn
355 360 365355 360 365
Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala ProGly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro
370 375 380370 375 380
Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro GlnIle Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln
385 390 395 400385 390 395 400
Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln ValVal Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val
405 410 415405 410 415
Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala ValSer Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val
420 425 430420 425 430
Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr ProGlu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro
435 440 445435 440 445
Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu ThrPro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr
450 455 460450 455 460
Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser ValVal Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val
465 470 475 480465 470 475 480
Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser LeuMet His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu
485 490 495485 490 495
Ser Pro GlySer Pro Gly
<210> 69<210> 69
<211> 504<211> 504
<212> PRT<212>PRT
<213> искусственная<213> artificial
<220><220>
<223> NP привитая HC<223> NP grafted HC
<400> 69<400> 69
Glu Val Gln Leu Leu Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly GlyGlu Val Gln Leu Leu Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1 5 10 151 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser TyrSer Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr
20 25 3020 25 30
Ala Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp ValAla Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 4535 40 45
Ser Ala Ile Ser Gly Ser Gly Ser Gly Ser Gly Ser Gly Ser Gly SerSer Ala Ile Ser Gly Ser Gly Ser Gly Ser Gly Ser Gly Ser Gly Ser
50 55 6050 55 60
Pro Asp Gly Gly Ser Gly Gly Ser Leu Arg Arg Ser Ser Cys Phe GlyPro Asp Gly Gly Ser Gly Gly Ser Leu Arg Arg Ser Ser Cys Phe Gly
65 70 75 8065 70 75 80
Gly Arg Met Asp Arg Ile Gly Ala Gln Ser Gly Leu Gly Cys Asn SerGly Arg Met Asp Arg Ile Gly Ala Gln Ser Gly Leu Gly Cys Asn Ser
85 90 9585 90 95
Phe Arg Tyr Gly Ser Tyr Gly Ser Gly Ser Gly Ser Gly Ser Gly SerPhe Arg Tyr Gly Ser Tyr Gly Ser Gly Ser Gly Ser Gly Ser Gly Ser
100 105 110100 105 110
Gly Ser Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val Lys Gly Arg Phe Thr Ile SerGly Ser Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser
115 120 125115 120 125
Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr Leu Gln Met Asn Ser Leu ArgArg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg
130 135 140130 135 140
Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala Lys Leu Thr Gly Ala GluAla Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala Lys Leu Thr Gly Ala Glu
145 150 155 160145 150 155 160
Tyr Phe Gln His Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser AlaTyr Phe Gln His Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Ala
165 170 175165 170 175
Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys SerSer Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser
180 185 190180 185 190
Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr PheThr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe
195 200 205195 200 205
Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser GlyPro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly
210 215 220210 215 220
Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser LeuVal His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu
225 230 235 240225 230 235 240
Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr TyrSer Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr
245 250 255245 250 255
Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys LysIle Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Lys
260 265 270260 265 270
Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys ProVal Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro
275 280 285275 280 285
Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro LysAla Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys
290 295 300290 295 300
Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys ValPro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val
305 310 315 320305 310 315 320
Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp TyrVal Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr
325 330 335325 330 335
Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu GluVal Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu
340 345 350340 345 350
Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu HisGln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His
355 360 365355 360 365
Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn LysGln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys
370 375 380370 375 380
Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly GlnAla Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln
385 390 395 400385 390 395 400
Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Asp Glu LeuPro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Asp Glu Leu
405 410 415405 410 415
Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr ProThr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro
420 425 430420 425 430
Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn AsnSer Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn
435 440 445435 440 445
Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe LeuTyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu
450 455 460450 455 460
Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn ValTyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val
465 470 475 480465 470 475 480
Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr GlnPhe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln
485 490 495485 490 495
Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro GlyLys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly
500500
<210> 70<210> 70
<211> 504<211> 504
<212> PRT<212>PRT
<213> искусственная<213> artificial
<220><220>
<223> NP привитая HC<223> NP grafted HC
<400> 70<400> 70
Glu Val Gln Leu Leu Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly GlyGlu Val Gln Leu Leu Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1 5 10 151 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser TyrSer Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr
20 25 3020 25 30
Ala Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp ValAla Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 4535 40 45
Ser Ala Ile Ser Gly Pro Asn Pro Asn Pro Asn Pro Asn Pro Asn SerSer Ala Ile Ser Gly Pro Asn Pro Asn Pro Asn Pro Asn Pro Asn Ser
50 55 6050 55 60
Pro Asp Gly Gly Ser Gly Gly Ser Leu Arg Arg Ser Ser Cys Phe GlyPro Asp Gly Gly Ser Gly Gly Ser Leu Arg Arg Ser Ser Cys Phe Gly
65 70 75 8065 70 75 80
Gly Arg Met Asp Arg Ile Gly Ala Gln Ser Gly Leu Gly Cys Asn SerGly Arg Met Asp Arg Ile Gly Ala Gln Ser Gly Leu Gly Cys Asn Ser
85 90 9585 90 95
Phe Arg Tyr Gly Ser Tyr Asn Pro Asn Pro Asn Pro Asn Pro Asn ProPhe Arg Tyr Gly Ser Tyr Asn Pro Asn Pro Asn Pro Asn Pro Asn Pro
100 105 110100 105 110
Gly Ser Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val Lys Gly Arg Phe Thr Ile SerGly Ser Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser
115 120 125115 120 125
Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr Leu Gln Met Asn Ser Leu ArgArg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg
130 135 140130 135 140
Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala Lys Leu Thr Gly Ala GluAla Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala Lys Leu Thr Gly Ala Glu
145 150 155 160145 150 155 160
Tyr Phe Gln His Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser AlaTyr Phe Gln His Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Ala
165 170 175165 170 175
Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys SerSer Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser
180 185 190180 185 190
Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr PheThr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe
195 200 205195 200 205
Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser GlyPro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly
210 215 220210 215 220
Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser LeuVal His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu
225 230 235 240225 230 235 240
Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr TyrSer Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr
245 250 255245 250 255
Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys LysIle Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Lys
260 265 270260 265 270
Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys ProVal Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro
275 280 285275 280 285
Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro LysAla Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys
290 295 300290 295 300
Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys ValPro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val
305 310 315 320305 310 315 320
Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp TyrVal Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr
325 330 335325 330 335
Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu GluVal Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu
340 345 350340 345 350
Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu HisGln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His
355 360 365355 360 365
Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn LysGln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys
370 375 380370 375 380
Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly GlnAla Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln
385 390 395 400385 390 395 400
Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Asp Glu LeuPro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Asp Glu Leu
405 410 415405 410 415
Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr ProThr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro
420 425 430420 425 430
Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn AsnSer Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn
435 440 445435 440 445
Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe LeuTyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu
450 455 460450 455 460
Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn ValTyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val
465 470 475 480465 470 475 480
Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr GlnPhe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln
485 490 495485 490 495
Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro GlyLys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly
500500
<210> 71<210> 71
<211> 499<211> 499
<212> PRT<212>PRT
<213> искусственная<213> artificial
<220><220>
<223> NP привитая HC<223> NP grafted HC
<400> 71<400> 71
Glu Val Gln Leu Leu Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly GlyGlu Val Gln Leu Leu Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1 5 10 151 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser TyrSer Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr
20 25 3020 25 30
Ala Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp ValAla Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 4535 40 45
Ser Ala Ile Ser Gly Ser Gly Gly Ser Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser ValSer Ala Ile Ser Gly Ser Gly Gly Ser Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val
50 55 6050 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu TyrLys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr
65 70 75 8065 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr CysLeu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 9585 90 95
Ala Lys Val His Pro Asn Pro Asn Pro Asn Pro Asn Ser Pro Asp GlyAla Lys Val His Pro Asn Pro Asn Pro Asn Pro Asn Ser Pro Asp Gly
100 105 110100 105 110
Gly Ser Gly Gly Ser Leu Arg Arg Ser Ser Cys Phe Gly Gly Arg MetGly Ser Gly Gly Ser Leu Arg Arg Ser Ser Cys Phe Gly Gly Arg Met
115 120 125115 120 125
Asp Arg Ile Gly Ala Gln Ser Gly Leu Gly Cys Asn Ser Phe Arg TyrAsp Arg Ile Gly Ala Gln Ser Gly Leu Gly Cys Asn Ser Phe Arg Tyr
130 135 140130 135 140
Gly Ser Tyr Asn Pro Asn Pro Asn Pro Asn Pro His Val Asp Val TrpGly Ser Tyr Asn Pro Asn Pro Asn Pro Asn Pro His Val Asp Val Trp
145 150 155 160145 150 155 160
Gly Gln Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly ProGly Gln Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro
165 170 175165 170 175
Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly ThrSer Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr
180 185 190180 185 190
Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val ThrAla Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr
195 200 205195 200 205
Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe ProVal Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro
210 215 220210 215 220
Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val ThrAla Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr
225 230 235 240225 230 235 240
Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val AsnVal Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn
245 250 255245 250 255
His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys SerHis Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys Ser
260 265 270260 265 270
Cys Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu LeuCys Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu
275 280 285275 280 285
Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr LeuGly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu
290 295 300290 295 300
Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val SerMet Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser
305 310 315 320305 310 315 320
His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val GluHis Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu
325 330 335325 330 335
Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser ThrVal His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr
340 345 350340 345 350
Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu AsnTyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn
355 360 365355 360 365
Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala ProGly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro
370 375 380370 375 380
Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro GlnIle Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln
385 390 395 400385 390 395 400
Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln ValVal Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val
405 410 415405 410 415
Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala ValSer Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val
420 425 430420 425 430
Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr ProGlu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro
435 440 445435 440 445
Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu ThrPro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr
450 455 460450 455 460
Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser ValVal Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val
465 470 475 480465 470 475 480
Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser LeuMet His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu
485 490 495485 490 495
Ser Pro GlySer Pro Gly
<210> 72<210> 72
<211> 504<211> 504
<212> PRT<212>PRT
<213> искусственная<213> artificial
<220><220>
<223> NP привитая HC<223> NP grafted HC
<400> 72<400> 72
Glu Val Gln Leu Leu Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly GlyGlu Val Gln Leu Leu Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1 5 10 151 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Gly Ser GlySer Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Gly Ser Gly
20 25 3020 25 30
Ser Gly Ser Gly Ser Gly Ser Gly Ser Pro Asp Gly Gly Ser Gly GlySer Gly Ser Gly Ser Gly Ser Gly Ser Pro Asp Gly Gly Ser Gly Gly
35 40 4535 40 45
Ser Leu Arg Arg Ser Ser Cys Phe Gly Gly Arg Met Asp Arg Ile GlySer Leu Arg Arg Ser Ser Cys Phe Gly Gly Arg Met Asp Arg Ile Gly
50 55 6050 55 60
Ala Gln Ser Gly Leu Gly Cys Asn Ser Phe Arg Tyr Gly Ser Tyr GlyAla Gln Ser Gly Leu Gly Cys Asn Ser Phe Arg Tyr Gly Ser Tyr Gly
65 70 75 8065 70 75 80
Ser Gly Ser Gly Ser Gly Ser Gly Ser Gly Met Ser Trp Val Arg GlnSer Gly Ser Gly Ser Gly Ser Gly Ser Gly Met Ser Trp Val Arg Gln
85 90 9585 90 95
Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val Ser Ala Ile Ser Gly Ser GlyAla Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val Ser Ala Ile Ser Gly Ser Gly
100 105 110100 105 110
Gly Ser Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val Lys Gly Arg Phe Thr Ile SerGly Ser Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser
115 120 125115 120 125
Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr Leu Gln Met Asn Ser Leu ArgArg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg
130 135 140130 135 140
Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala Lys Leu Thr Gly Ala GluAla Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala Lys Leu Thr Gly Ala Glu
145 150 155 160145 150 155 160
Tyr Phe Gln His Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser AlaTyr Phe Gln His Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Ala
165 170 175165 170 175
Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys SerSer Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser
180 185 190180 185 190
Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr PheThr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe
195 200 205195 200 205
Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser GlyPro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly
210 215 220210 215 220
Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser LeuVal His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu
225 230 235 240225 230 235 240
Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr TyrSer Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr
245 250 255245 250 255
Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys LysIle Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Lys
260 265 270260 265 270
Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys ProVal Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro
275 280 285275 280 285
Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro LysAla Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys
290 295 300290 295 300
Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys ValPro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val
305 310 315 320305 310 315 320
Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp TyrVal Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr
325 330 335325 330 335
Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu GluVal Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu
340 345 350340 345 350
Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu HisGln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His
355 360 365355 360 365
Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn LysGln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys
370 375 380370 375 380
Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly GlnAla Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln
385 390 395 400385 390 395 400
Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Asp Glu LeuPro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Asp Glu Leu
405 410 415405 410 415
Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr ProThr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro
420 425 430420 425 430
Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn AsnSer Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn
435 440 445435 440 445
Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe LeuTyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu
450 455 460450 455 460
Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn ValTyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val
465 470 475 480465 470 475 480
Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr GlnPhe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln
485 490 495485 490 495
Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro GlyLys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly
500500
<210> 73<210> 73
<211> 500<211> 500
<212> PRT<212>PRT
<213> искусственная<213> artificial
<220><220>
<223> NP привитая HC<223> NP grafted HC
<400> 73<400> 73
Glu Val Gln Leu Leu Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly GlyGlu Val Gln Leu Leu Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1 5 10 151 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser TyrSer Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr
20 25 3020 25 30
Ala Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp ValAla Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 4535 40 45
Ser Ala Ile Ser Gly Pro Asn Pro Asn Lys Asn Pro Asn Pro Asn ProSer Ala Ile Ser Gly Pro Asn Pro Asn Lys Asn Pro Asn Pro Asn Pro
50 55 6050 55 60
Gly Ser Gly Gly Ser Leu Arg Arg Ser Ser Cys Phe Gly Gly Arg MetGly Ser Gly Gly Ser Leu Arg Arg Ser Ser Cys Phe Gly Gly Arg Met
65 70 75 8065 70 75 80
Asp Arg Ile Gly Ala Gln Ser Gly Leu Gly Cys Asn Ser Phe Arg TyrAsp Arg Ile Gly Ala Gln Ser Gly Leu Gly Cys Asn Ser Phe Arg Tyr
85 90 9585 90 95
Gly Ser Asn Pro Asn Glu Asn Pro Asn Pro Asn Pro Gly Ser Thr TyrGly Ser Asn Pro Asn Glu Asn Pro Asn Pro Asn Pro Gly Ser Thr Tyr
100 105 110100 105 110
Tyr Ala Asp Ser Val Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn SerTyr Ala Asp Ser Val Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser
115 120 125115 120 125
Lys Asn Thr Leu Tyr Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp ThrLys Asn Thr Leu Tyr Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr
130 135 140130 135 140
Ala Val Tyr Tyr Cys Ala Lys Leu Thr Gly Ala Glu Tyr Phe Gln HisAla Val Tyr Tyr Cys Ala Lys Leu Thr Gly Ala Glu Tyr Phe Gln His
145 150 155 160145 150 155 160
Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys GlyTrp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly
165 170 175165 170 175
Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly GlyPro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly
180 185 190180 185 190
Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro ValThr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val
195 200 205195 200 205
Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr PheThr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe
210 215 220210 215 220
Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val ValPro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val
225 230 235 240225 230 235 240
Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn ValThr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val
245 250 255245 250 255
Asn His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Lys Val Glu Pro LysAsn His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys
260 265 270260 265 270
Ser Cys Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu LeuSer Cys Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu
275 280 285275 280 285
Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp ThrLeu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr
290 295 300290 295 300
Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp ValLeu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val
305 310 315 320305 310 315 320
Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly ValSer His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val
325 330 335325 330 335
Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn SerGlu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser
340 345 350340 345 350
Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp LeuThr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu
355 360 365355 360 365
Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro AlaAsn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala
370 375 380370 375 380
Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu ProPro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro
385 390 395 400385 390 395 400
Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn GlnGln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln
405 410 415405 410 415
Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile AlaVal Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala
420 425 430420 425 430
Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr ThrVal Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr
435 440 445435 440 445
Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys LeuPro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu
450 455 460450 455 460
Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys SerThr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser
465 470 475 480465 470 475 480
Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu SerVal Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser
485 490 495485 490 495
Leu Ser Pro GlyLeu Ser Pro Gly
500500
<210> 74<210> 74
<211> 502<211> 502
<212> PRT<212>PRT
<213> искусственная<213> artificial
<220><220>
<223> NP привитая HC<223> NP grafted HC
<400> 74<400> 74
Glu Val Gln Leu Leu Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly GlyGlu Val Gln Leu Leu Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1 5 10 151 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser TyrSer Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr
20 25 3020 25 30
Ala Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp ValAla Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 4535 40 45
Ser Ala Ile Ser Gly Ser Thr Tyr Ile Ser Asn Val Asn His Lys ProSer Ala Ile Ser Gly Ser Thr Tyr Ile Ser Asn Val Asn His Lys Pro
50 55 6050 55 60
Asp Gly Gly Ser Gly Gly Ser Leu Arg Arg Ser Ser Cys Phe Gly GlyAsp Gly Gly Ser Gly Gly Ser Leu Arg Arg Ser Ser Cys Phe Gly Gly
65 70 75 8065 70 75 80
Arg Met Asp Arg Ile Gly Ala Gln Ser Gly Leu Gly Cys Asn Ser PheArg Met Asp Arg Ile Gly Ala Gln Ser Gly Leu Gly Cys Asn Ser Phe
85 90 9585 90 95
Arg Tyr Gly Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Lys Val Glu Gly Gly SerArg Tyr Gly Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Lys Val Glu Gly Gly Ser
100 105 110100 105 110
Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg AspThr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp
115 120 125115 120 125
Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala GluAsn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu
130 135 140130 135 140
Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala Lys Leu Thr Gly Ala Glu Tyr PheAsp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala Lys Leu Thr Gly Ala Glu Tyr Phe
145 150 155 160145 150 155 160
Gln His Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser ThrGln His Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr
165 170 175165 170 175
Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr SerLys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser
180 185 190180 185 190
Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro GluGly Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu
195 200 205195 200 205
Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val HisPro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His
210 215 220210 215 220
Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser SerThr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser
225 230 235 240225 230 235 240
Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile CysVal Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys
245 250 255245 250 255
Asn Val Asn His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Lys Val GluAsn Val Asn His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Lys Val Glu
260 265 270260 265 270
Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala ProPro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro
275 280 285275 280 285
Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro LysGlu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys
290 295 300290 295 300
Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val ValAsp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val
305 310 315 320305 310 315 320
Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val AspAsp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp
325 330 335325 330 335
Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln TyrGly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr
340 345 350340 345 350
Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln AspAsn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp
355 360 365355 360 365
Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala LeuTrp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu
370 375 380370 375 380
Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro ArgPro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg
385 390 395 400385 390 395 400
Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Asp Glu Leu Thr LysGlu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Asp Glu Leu Thr Lys
405 410 415405 410 415
Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser AspAsn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp
420 425 430420 425 430
Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr LysIle Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys
435 440 445435 440 445
Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr SerThr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser
450 455 460450 455 460
Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe SerLys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser
465 470 475 480465 470 475 480
Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys SerCys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser
485 490 495485 490 495
Leu Ser Leu Ser Pro GlyLeu Ser Leu Ser Pro Gly
500500
<210> 75<210> 75
<211> 500<211> 500
<212> PRT<212>PRT
<213> искусственная<213> artificial
<220><220>
<223> NP привитая HC<223> NP grafted HC
<400> 75<400> 75
Glu Val Gln Leu Leu Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly GlyGlu Val Gln Leu Leu Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1 5 10 151 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser TyrSer Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr
20 25 3020 25 30
Ala Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp ValAla Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 4535 40 45
Ser Ala Ile Ser Gly Thr Ser Ala Ser Leu Ala Ile Thr Gly Pro AspSer Ala Ile Ser Gly Thr Ser Ala Ser Leu Ala Ile Thr Gly Pro Asp
50 55 6050 55 60
Gly Gly Ser Gly Gly Ser Leu Arg Arg Ser Ser Cys Phe Gly Gly ArgGly Gly Ser Gly Gly Ser Leu Arg Arg Ser Ser Cys Phe Gly Gly Arg
65 70 75 8065 70 75 80
Met Asp Arg Ile Gly Ala Gln Ser Gly Leu Gly Cys Asn Ser Phe ArgMet Asp Arg Ile Gly Ala Gln Ser Gly Leu Gly Cys Asn Ser Phe Arg
85 90 9585 90 95
Tyr Gly Ser Asp Arg Phe Ser Gly Ser Lys Ser Gly Gly Ser Thr TyrTyr Gly Ser Asp Arg Phe Ser Gly Ser Lys Ser Gly Gly Ser Thr Tyr
100 105 110100 105 110
Tyr Ala Asp Ser Val Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn SerTyr Ala Asp Ser Val Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser
115 120 125115 120 125
Lys Asn Thr Leu Tyr Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp ThrLys Asn Thr Leu Tyr Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr
130 135 140130 135 140
Ala Val Tyr Tyr Cys Ala Lys Leu Thr Gly Ala Glu Tyr Phe Gln HisAla Val Tyr Tyr Cys Ala Lys Leu Thr Gly Ala Glu Tyr Phe Gln His
145 150 155 160145 150 155 160
Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys GlyTrp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly
165 170 175165 170 175
Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly GlyPro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly
180 185 190180 185 190
Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro ValThr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val
195 200 205195 200 205
Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr PheThr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe
210 215 220210 215 220
Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val ValPro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val
225 230 235 240225 230 235 240
Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn ValThr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val
245 250 255245 250 255
Asn His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Lys Val Glu Pro LysAsn His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys
260 265 270260 265 270
Ser Cys Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu LeuSer Cys Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu
275 280 285275 280 285
Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp ThrLeu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr
290 295 300290 295 300
Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp ValLeu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val
305 310 315 320305 310 315 320
Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly ValSer His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val
325 330 335325 330 335
Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn SerGlu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser
340 345 350340 345 350
Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp LeuThr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu
355 360 365355 360 365
Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro AlaAsn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala
370 375 380370 375 380
Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu ProPro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro
385 390 395 400385 390 395 400
Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn GlnGln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln
405 410 415405 410 415
Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile AlaVal Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala
420 425 430420 425 430
Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr ThrVal Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr
435 440 445435 440 445
Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys LeuPro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu
450 455 460450 455 460
Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys SerThr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser
465 470 475 480465 470 475 480
Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu SerVal Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser
485 490 495485 490 495
Leu Ser Pro GlyLeu Ser Pro Gly
500500
<210> 76<210> 76
<211> 501<211> 501
<212> PRT<212>PRT
<213> искусственная<213> artificial
<220><220>
<223> NP привитая HC<223> NP grafted HC
<400> 76<400> 76
Glu Val Gln Leu Leu Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly GlyGlu Val Gln Leu Leu Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1 5 10 151 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Gly Ser GlySer Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Gly Ser Gly
20 25 3020 25 30
Ser Gly Ser Gly Ser Gly Ser Gly Ser Pro Asp Gly Gly Ser Gly GlySer Gly Ser Gly Ser Gly Ser Gly Ser Pro Asp Gly Gly Ser Gly Gly
35 40 4535 40 45
Ser Leu Arg Arg Ser Ser Cys Phe Gly Gly Arg Met Asp Arg Ile GlySer Leu Arg Arg Ser Ser Cys Phe Gly Gly Arg Met Asp Arg Ile Gly
50 55 6050 55 60
Ala Gln Ser Gly Leu Gly Cys Asn Ser Phe Arg Tyr Gly Ser Tyr GlyAla Gln Ser Gly Leu Gly Cys Asn Ser Phe Arg Tyr Gly Ser Tyr Gly
65 70 75 8065 70 75 80
Ser Gly Ser Gly Ser Gly Ser Gly Ser Gly Met Ser Trp Val Arg GlnSer Gly Ser Gly Ser Gly Ser Gly Ser Gly Met Ser Trp Val Arg Gln
85 90 9585 90 95
Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val Ser Ala Ile Ser Gly Ser GlyAla Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val Ser Ala Ile Ser Gly Ser Gly
100 105 110100 105 110
Gly Ser Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val Lys Gly Arg Phe Thr Ile SerGly Ser Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser
115 120 125115 120 125
Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr Leu Gln Met Asn Ser Leu ArgArg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg
130 135 140130 135 140
Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala Lys Leu Thr Gly Ala GluAla Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala Lys Leu Thr Gly Ala Glu
145 150 155 160145 150 155 160
Tyr Phe Gln His Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser AlaTyr Phe Gln His Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Ala
165 170 175165 170 175
Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Cys Ser Arg SerSer Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Cys Ser Arg Ser
180 185 190180 185 190
Thr Ser Glu Ser Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr PheThr Ser Glu Ser Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe
195 200 205195 200 205
Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser GlyPro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly
210 215 220210 215 220
Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser LeuVal His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu
225 230 235 240225 230 235 240
Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Lys Thr TyrSer Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Lys Thr Tyr
245 250 255245 250 255
Thr Cys Asn Val Asp His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys ArgThr Cys Asn Val Asp His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Arg
260 265 270260 265 270
Val Glu Ser Lys Tyr Gly Pro Pro Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro GluVal Glu Ser Lys Tyr Gly Pro Pro Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu
275 280 285275 280 285
Phe Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys AspPhe Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp
290 295 300290 295 300
Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val AspThr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp
305 310 315 320305 310 315 320
Val Ser Gln Glu Asp Pro Glu Val Gln Phe Asn Trp Tyr Val Asp GlyVal Ser Gln Glu Asp Pro Glu Val Gln Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly
325 330 335325 330 335
Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Phe AsnVal Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Phe Asn
340 345 350340 345 350
Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp TrpSer Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp
355 360 365355 360 365
Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Gly Leu ProLeu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Gly Leu Pro
370 375 380370 375 380
Ser Ser Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg GluSer Ser Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu
385 390 395 400385 390 395 400
Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Gln Glu Glu Met Thr Lys AsnPro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Gln Glu Glu Met Thr Lys Asn
405 410 415405 410 415
Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp IleGln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile
420 425 430420 425 430
Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys ThrAla Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr
435 440 445435 440 445
Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser ArgThr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Arg
450 455 460450 455 460
Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Glu Gly Asn Val Phe Ser CysLeu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Glu Gly Asn Val Phe Ser Cys
465 470 475 480465 470 475 480
Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser LeuSer Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu
485 490 495485 490 495
Ser Leu Ser Leu GlySer Leu Ser Leu Gly
500500
<210> 77<210> 77
<211> 493<211> 493
<212> PRT<212>PRT
<213> искусственная<213> artificial
<220><220>
<223> NP привитая HC<223> NP grafted HC
<400> 77<400> 77
Glu Val Gln Leu Leu Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly GlyGlu Val Gln Leu Leu Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1 5 10 151 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Gly Ser GlySer Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Gly Ser Gly
20 25 3020 25 30
Ser Gly Ser Gly Gly Ser Gly Gly Ser Leu Arg Arg Ser Ser Cys PheSer Gly Ser Gly Gly Ser Gly Gly Ser Leu Arg Arg Ser Ser Cys Phe
35 40 4535 40 45
Gly Gly Arg Met Asp Arg Ile Gly Ala Gln Ser Gly Leu Gly Cys AsnGly Gly Arg Met Asp Arg Ile Gly Ala Gln Ser Gly Leu Gly Cys Asn
50 55 6050 55 60
Ser Phe Arg Tyr Gly Gly Ser Gly Gly Ser Gly Ser Gly Ser Gly MetSer Phe Arg Tyr Gly Gly Ser Gly Gly Ser Gly Ser Gly Ser Gly Met
65 70 75 8065 70 75 80
Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val Ser AlaSer Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val Ser Ala
85 90 9585 90 95
Ile Ser Gly Ser Gly Gly Ser Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val Lys GlyIle Ser Gly Ser Gly Gly Ser Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val Lys Gly
100 105 110100 105 110
Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr Leu GlnArg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr Leu Gln
115 120 125115 120 125
Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala LysMet Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala Lys
130 135 140130 135 140
Leu Thr Gly Ala Glu Tyr Phe Gln His Trp Gly Gln Gly Thr Leu ValLeu Thr Gly Ala Glu Tyr Phe Gln His Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val
145 150 155 160145 150 155 160
Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu AlaThr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala
165 170 175165 170 175
Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys LeuPro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu
180 185 190180 185 190
Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser GlyVal Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly
195 200 205195 200 205
Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser SerAla Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser
210 215 220210 215 220
Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser LeuGly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu
225 230 235 240225 230 235 240
Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser Asn ThrGly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser Asn Thr
245 250 255245 250 255
Lys Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His ThrLys Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His Thr
260 265 270260 265 270
Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val PheCys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe
275 280 285275 280 285
Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr ProLeu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro
290 295 300290 295 300
Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu ValGlu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val
305 310 315 320305 310 315 320
Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys ThrLys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr
325 330 335325 330 335
Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser ValLys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val
340 345 350340 345 350
Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys CysLeu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys
355 360 365355 360 365
Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile SerLys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser
370 375 380370 375 380
Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro ProLys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro
385 390 395 400385 390 395 400
Ser Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu ValSer Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val
405 410 415405 410 415
Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn GlyLys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly
420 425 430420 425 430
Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser AspGln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp
435 440 445435 440 445
Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg TrpGly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp
450 455 460450 455 460
Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu HisGln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His
465 470 475 480465 470 475 480
Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro GlyAsn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly
485 490485 490
<210> 78<210> 78
<211> 497<211> 497
<212> PRT<212>PRT
<213> искусственная<213> artificial
<220><220>
<223> NP привитая HC<223> NP grafted HC
<400> 78<400> 78
Glu Val Gln Leu Leu Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly GlyGlu Val Gln Leu Leu Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1 5 10 151 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser TyrSer Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr
20 25 3020 25 30
Ala Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp ValAla Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 4535 40 45
Ser Ala Ile Ser Val Val Val Thr Ser His Gln Ala Pro Gly Glu GlySer Ala Ile Ser Val Val Val Thr Ser His Gln Ala Pro Gly Glu Gly
50 55 6050 55 60
Gly Ser Gly Gly Ser Leu Arg Arg Ser Ser Cys Phe Gly Gly Arg MetGly Ser Gly Gly Ser Leu Arg Arg Ser Ser Cys Phe Gly Gly Arg Met
65 70 75 8065 70 75 80
Asp Arg Ile Gly Ala Gln Ser Gly Leu Gly Cys Asn Ser Phe Arg TyrAsp Arg Ile Gly Ala Gln Ser Gly Leu Gly Cys Asn Ser Phe Arg Tyr
85 90 9585 90 95
Gly Gly Ser Thr Pro Leu Lys Ser Leu Ala Ser Thr Tyr Tyr Ala AspGly Gly Ser Thr Pro Leu Lys Ser Leu Ala Ser Thr Tyr Tyr Ala Asp
100 105 110100 105 110
Ser Val Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn ThrSer Val Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr
115 120 125115 120 125
Leu Tyr Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val TyrLeu Tyr Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr
130 135 140130 135 140
Tyr Cys Ala Lys Leu Thr Gly Ala Glu Tyr Phe Gln His Trp Gly GlnTyr Cys Ala Lys Leu Thr Gly Ala Glu Tyr Phe Gln His Trp Gly Gln
145 150 155 160145 150 155 160
Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser ValGly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val
165 170 175165 170 175
Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala AlaPhe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala
180 185 190180 185 190
Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val SerLeu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser
195 200 205195 200 205
Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala ValTrp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val
210 215 220210 215 220
Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val ProLeu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro
225 230 235 240225 230 235 240
Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His LysSer Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys
245 250 255245 250 255
Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys AspPro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp
260 265 270260 265 270
Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly GlyLys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly
275 280 285275 280 285
Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met IlePro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile
290 295 300290 295 300
Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His GluSer Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu
305 310 315 320305 310 315 320
Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val HisAsp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His
325 330 335325 330 335
Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr ArgAsn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg
340 345 350340 345 350
Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly LysVal Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys
355 360 365355 360 365
Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile GluGlu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu
370 375 380370 375 380
Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val TyrLys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr
385 390 395 400385 390 395 400
Thr Leu Pro Pro Ser Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser LeuThr Leu Pro Pro Ser Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu
405 410 415405 410 415
Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu TrpThr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp
420 425 430420 425 430
Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro ValGlu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val
435 440 445435 440 445
Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val AspLeu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp
450 455 460450 455 460
Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met HisLys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His
465 470 475 480465 470 475 480
Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser ProGlu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro
485 490 495485 490 495
GlyGly
<210> 79<210> 79
<211> 499<211> 499
<212> PRT<212>PRT
<213> искусственная<213> artificial
<220><220>
<223> NP привитая HC<223> NP grafted HC
<400> 79<400> 79
Glu Val Gln Leu Leu Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly GlyGlu Val Gln Leu Leu Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1 5 10 151 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser TyrSer Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr
20 25 3020 25 30
Ala Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp ValAla Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 4535 40 45
Ser Ala Ile Ser Gly Ser Gly Gly Ser Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser ValSer Ala Ile Ser Gly Ser Gly Gly Ser Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val
50 55 6050 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu TyrLys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr
65 70 75 8065 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr CysLeu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 9585 90 95
Ala Lys Gly Ile Thr Gly Thr Lys Lys Tyr Gln Ser Ser Pro Asp GlyAla Lys Gly Ile Thr Gly Thr Lys Lys Tyr Gln Ser Ser Pro Asp Gly
100 105 110100 105 110
Gly Ser Gly Gly Ser Leu Arg Arg Ser Ser Cys Phe Gly Gly Arg MetGly Ser Gly Gly Ser Leu Arg Arg Ser Ser Cys Phe Gly Gly Arg Met
115 120 125115 120 125
Asp Arg Ile Gly Ala Gln Ser Gly Leu Gly Cys Asn Ser Phe Arg TyrAsp Arg Ile Gly Ala Gln Ser Gly Leu Gly Cys Asn Ser Phe Arg Tyr
130 135 140130 135 140
Gly Ser Tyr Ser Tyr Thr Tyr Asn Tyr Ala Glu Tyr Phe Gln His TrpGly Ser Tyr Ser Tyr Thr Tyr Asn Tyr Ala Glu Tyr Phe Gln His Trp
145 150 155 160145 150 155 160
Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly ProGly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro
165 170 175165 170 175
Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly ThrSer Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr
180 185 190180 185 190
Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val ThrAla Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr
195 200 205195 200 205
Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe ProVal Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro
210 215 220210 215 220
Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val ThrAla Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr
225 230 235 240225 230 235 240
Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val AsnVal Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn
245 250 255245 250 255
His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys SerHis Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys Ser
260 265 270260 265 270
Cys Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu LeuCys Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu
275 280 285275 280 285
Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr LeuGly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu
290 295 300290 295 300
Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val SerMet Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser
305 310 315 320305 310 315 320
His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val GluHis Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu
325 330 335325 330 335
Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser ThrVal His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr
340 345 350340 345 350
Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu AsnTyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn
355 360 365355 360 365
Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala ProGly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro
370 375 380370 375 380
Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro GlnIle Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln
385 390 395 400385 390 395 400
Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln ValVal Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val
405 410 415405 410 415
Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala ValSer Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val
420 425 430420 425 430
Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr ProGlu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro
435 440 445435 440 445
Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu ThrPro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr
450 455 460450 455 460
Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser ValVal Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val
465 470 475 480465 470 475 480
Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser LeuMet His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu
485 490 495485 490 495
Ser Pro GlySer Pro Gly
<210> 80<210> 80
<211> 267<211> 267
<212> PRT<212>PRT
<213> искусственная<213> artificial
<220><220>
<223> NP привитая LC<223> NP grafted LC
<400> 80<400> 80
Gln Ser Val Leu Thr Gln Pro Pro Ser Val Ser Gly Ala Pro Gly GlnGln Ser Val Leu Thr Gln Pro Pro Ser Val Ser Gly Ala Pro Gly Gln
1 5 10 151 5 10 15
Arg Val Thr Ile Ser Cys Thr Gly Ser Ser Ser Asn Ile Gly Ala GlyArg Val Thr Ile Ser Cys Thr Gly Ser Ser Ser Asn Ile Gly Ala Gly
20 25 3020 25 30
Tyr Asp Val His Trp Tyr Gln Gln Leu Pro Gly Thr Ala Pro Lys LeuTyr Asp Val His Trp Tyr Gln Gln Leu Pro Gly Thr Ala Pro Lys Leu
35 40 4535 40 45
Leu Ile Tyr Gly Asn Ser Asn Arg Pro Ser Gly Val Pro Asp Arg PheLeu Ile Tyr Gly Asn Ser Asn Arg Pro Ser Gly Val Pro Asp Arg Phe
50 55 6050 55 60
Ser Gly Ser Lys Ser Gly Thr Ser Ala Ser Leu Ala Ile Thr Gly LeuSer Gly Ser Lys Ser Gly Thr Ser Ala Ser Leu Ala Ile Thr Gly Leu
65 70 75 8065 70 75 80
Gln Ala Glu Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Ala Ala Trp Asn Pro AsnGln Ala Glu Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Ala Ala Trp Asn Pro Asn
85 90 9585 90 95
Pro Asn Pro Asn Pro Asn Pro Asn Gly Gly Ser Gly Gly Ser Leu ArgPro Asn Pro Asn Pro Asn Pro Asn Gly Gly Ser Gly Gly Ser Leu Arg
100 105 110100 105 110
Arg Ser Ser Cys Phe Gly Gly Arg Met Asp Arg Ile Gly Ala Gln SerArg Ser Ser Cys Phe Gly Gly Arg Met Asp Arg Ile Gly Ala Gln Ser
115 120 125115 120 125
Gly Leu Gly Cys Asn Ser Phe Arg Tyr Gly Ser Asn Pro Asn Pro AsnGly Leu Gly Cys Asn Ser Phe Arg Tyr Gly Ser Asn Pro Asn Pro Asn
130 135 140130 135 140
Pro Asn Pro Asn Pro Asn Val Phe Gly Ser Gly Thr Lys Val Thr ValPro Asn Pro Asn Pro Asn Val Phe Gly Ser Gly Thr Lys Val Thr Val
145 150 155 160145 150 155 160
Leu Gly Gln Pro Lys Ala Ala Pro Ser Val Thr Leu Phe Pro Pro SerLeu Gly Gln Pro Lys Ala Ala Pro Ser Val Thr Leu Phe Pro Pro Ser
165 170 175165 170 175
Ser Glu Glu Leu Gln Ala Asn Lys Ala Thr Leu Val Cys Leu Ile SerSer Glu Glu Leu Gln Ala Asn Lys Ala Thr Leu Val Cys Leu Ile Ser
180 185 190180 185 190
Asp Phe Tyr Pro Gly Ala Val Thr Val Ala Trp Lys Ala Asp Ser SerAsp Phe Tyr Pro Gly Ala Val Thr Val Ala Trp Lys Ala Asp Ser Ser
195 200 205195 200 205
Pro Val Lys Ala Gly Val Glu Thr Thr Thr Pro Ser Lys Gln Ser AsnPro Val Lys Ala Gly Val Glu Thr Thr Thr Pro Ser Lys Gln Ser Asn
210 215 220210 215 220
Asn Lys Tyr Ala Ala Ser Ser Tyr Leu Ser Leu Thr Pro Glu Gln TrpAsn Lys Tyr Ala Ala Ser Ser Tyr Leu Ser Leu Thr Pro Glu Gln Trp
225 230 235 240225 230 235 240
Lys Ser His Arg Ser Tyr Ser Cys Gln Val Thr His Glu Gly Ser ThrLys Ser His Arg Ser Tyr Ser Cys Gln Val Thr His Glu Gly Ser Thr
245 250 255245 250 255
Val Glu Lys Thr Val Ala Pro Thr Glu Cys SerVal Glu Lys Thr Val Ala Pro Thr Glu Cys Ser
260 265260 265
<210> 81<210> 81
<211> 274<211> 274
<212> PRT<212>PRT
<213> искусственная<213> artificial
<220><220>
<223> NP привитая LC<223> NP grafted LC
<400> 81<400> 81
Gln Ser Val Leu Thr Gln Pro Pro Ser Val Ser Gly Ala Pro Gly GlnGln Ser Val Leu Thr Gln Pro Pro Ser Val Ser Gly Ala Pro Gly Gln
1 5 10 151 5 10 15
Arg Val Thr Ile Ser Cys Thr Gly Ser Ser Ser Asn Ile Gly Ala GlyArg Val Thr Ile Ser Cys Thr Gly Ser Ser Ser Asn Ile Gly Ala Gly
20 25 3020 25 30
Tyr Asp Val His Trp Tyr Gln Gln Leu Pro Gly Thr Ala Pro Lys LeuTyr Asp Val His Trp Tyr Gln Gln Leu Pro Gly Thr Ala Pro Lys Leu
35 40 4535 40 45
Leu Ile Tyr Gly Ser Gly Ser Gly Ser Gly Ser Gly Ser Gly Ser ProLeu Ile Tyr Gly Ser Gly Ser Gly Ser Gly Ser Gly Ser Gly Ser Pro
50 55 6050 55 60
Asp Gly Gly Ser Gly Gly Ser Leu Arg Arg Ser Ser Cys Phe Gly GlyAsp Gly Gly Ser Gly Gly Ser Leu Arg Arg Ser Ser Cys Phe Gly Gly
65 70 75 8065 70 75 80
Arg Met Asp Arg Ile Gly Ala Gln Ser Gly Leu Gly Cys Asn Ser PheArg Met Asp Arg Ile Gly Ala Gln Ser Gly Leu Gly Cys Asn Ser Phe
85 90 9585 90 95
Arg Tyr Gly Ser Tyr Gly Ser Gly Gly Ser Gly Ser Gly Ser Gly AsnArg Tyr Gly Ser Tyr Gly Ser Gly Gly Ser Gly Ser Gly Ser Gly Asn
100 105 110100 105 110
Arg Pro Ser Gly Val Pro Asp Arg Phe Ser Gly Ser Lys Ser Gly ThrArg Pro Ser Gly Val Pro Asp Arg Phe Ser Gly Ser Lys Ser Gly Thr
115 120 125115 120 125
Ser Ala Ser Leu Ala Ile Thr Gly Leu Gln Ala Glu Asp Glu Ala AspSer Ala Ser Leu Ala Ile Thr Gly Leu Gln Ala Glu Asp Glu Ala Asp
130 135 140130 135 140
Tyr Tyr Cys Gln Ser Tyr Asp Ser Ser Leu Ser Gly Val Val Phe GlyTyr Tyr Cys Gln Ser Tyr Asp Ser Ser Leu Ser Gly Val Val Phe Gly
145 150 155 160145 150 155 160
Gly Gly Thr Lys Leu Thr Val Leu Gly Gln Pro Lys Ala Ala Pro SerGly Gly Thr Lys Leu Thr Val Leu Gly Gln Pro Lys Ala Ala Pro Ser
165 170 175165 170 175
Val Thr Leu Phe Pro Pro Ser Ser Glu Glu Leu Gln Ala Asn Lys AlaVal Thr Leu Phe Pro Pro Ser Ser Glu Glu Leu Gln Ala Asn Lys Ala
180 185 190180 185 190
Thr Leu Val Cys Leu Ile Ser Asp Phe Tyr Pro Gly Ala Val Thr ValThr Leu Val Cys Leu Ile Ser Asp Phe Tyr Pro Gly Ala Val Thr Val
195 200 205195 200 205
Ala Trp Lys Ala Asp Ser Ser Pro Val Lys Ala Gly Val Glu Thr ThrAla Trp Lys Ala Asp Ser Ser Pro Val Lys Ala Gly Val Glu Thr Thr
210 215 220210 215 220
Thr Pro Ser Lys Gln Ser Asn Asn Lys Tyr Ala Ala Ser Ser Tyr LeuThr Pro Ser Lys Gln Ser Asn Asn Lys Tyr Ala Ala Ser Ser Tyr Leu
225 230 235 240225 230 235 240
Ser Leu Thr Pro Glu Gln Trp Lys Ser His Arg Ser Tyr Ser Cys GlnSer Leu Thr Pro Glu Gln Trp Lys Ser His Arg Ser Tyr Ser Cys Gln
245 250 255245 250 255
Val Thr His Glu Gly Ser Thr Val Glu Lys Thr Val Ala Pro Thr GluVal Thr His Glu Gly Ser Thr Val Glu Lys Thr Val Ala Pro Thr Glu
260 265 270260 265 270
Cys SerCys Ser
<210> 82<210> 82
<211> 366<211> 366
<212> ДНК<212> DNA
<213> искусственная<213> artificial
<220><220>
<223> NP привитая HC кодирующая конструкция<223> NP grafted HC coding construct
<400> 82<400> 82
gaagtgcagc tgctggaaag cggcggaggc ctggtgcagc ctggcggatc tctgagactg 60gaagtgcagc tgctggaaag cggcggaggc ctggtgcagc ctggcggatc tctgagactg 60
agctgtgccg ccagcggctt caccttcagc agctacgcca tgagctgggt gcgccaggcc 120agctgtgccg ccagcggctt caccttcagc agctacgcca tgagctgggt gcgccaggcc 120
cctggaaaag gcctggaatg ggtgtccgcc atctctggca gcggcggcag cacctactac 180cctggaaaag gcctggaatg ggtgtccgcc atctctggca gcggcggcag cacctactac 180
gccgattctg tgaagggccg gttcaccatc agccgggaca acagcaagaa caccctgtac 240gccgattctg tgaagggccg gttcaccatc agccgggaca acagcaagaa caccctgtac 240
ctgcagatga acagcctgcg ggccgaggac accgccgtgt actactgtac aagcgtgcac 300ctgcagatga acagcctgcg ggccgaggac accgccgtgt actactgtac aagcgtgcac 300
caggaaacaa agaagtacca gagcagcccc gacggcggca gtggcggaag tctgagaaga 360caggaaacaa agaagtacca gagcagcccc gacggcggca gtggcggaag tctgagaaga 360
agctcc 366agctcc 366
<210> 83<210> 83
<211> 525<211> 525
<212> ДНК<212> DNA
<213> искусственная<213> artificial
<220><220>
<223> NP привитая HC кодирующая конструкция<223> NP grafted HC coding construct
<400> 83<400> 83
gaagttcagc tgctggaatc tggcggcgga ctggttcaac ctggcggatc tctgagactg 60gaagttcagc tgctggaatc tggcggcgga ctggttcaac ctggcggatc tctgagactg 60
agctgtgccg ccagcggctt tacatttggc agcggctctg gatctggctc cggaagcgga 120agctgtgccg ccagcggctt tacatttggc agcggctctg gatctggctc cggaagcgga 120
tctcctgatg gtggaagcgg aggcagcctg agaagaagca gctgtttcgg cggcagaatg 180tctcctgatg gtggaagcgg aggcagcctg agaagaagca gctgtttcgg cggcagaatg 180
gacagaatcg gcgcccaatc tggcctgggc tgcaacagct ttagatacgg cagctacggc 240gacagaatcg gcgcccaatc tggcctgggc tgcaacagct ttagatacgg cagctacggc 240
tccggcagtg gttccggtag tggctctgga atgagctggg ttcgacaggc ccctggcaaa 300tccggcagtg gttccggtag tggctctgga atgagctggg ttcgacaggc ccctggcaaa 300
ggccttgaat gggtgtccgc catttctggc agcggaggct ctacctacta cgccgatagc 360ggccttgaat gggtgtccgc catttctggc agcggaggct ctacctacta cgccgatagc 360
gtgaagggca gattcaccat cagccgggac aacagcaaga acaccctgta cctgcagatg 420gtgaagggca gattcaccat cagccgggac aacagcaaga acaccctgta cctgcagatg 420
aactccctga gagccgagga caccgccgtg tactattgcg ccaaactgac aggcgccgag 480aactccctga gagccgagga caccgccgtg tactattgcg ccaaactgac aggcgccgag 480
tacttccagc attggggaca gggaaccctg gtcacagtct cttca 525tacttccagc attggggaca gggaaccctg gtcacagtct cttca 525
<210> 84<210> 84
<211> 333<211> 333
<212> ДНК<212> DNA
<213> человека<213> person
<400> 84<400> 84
cagtctgtgc tgacacagcc tcctagtgtg tctggcgccc ctggccagag agtgaccatc 60cagtctgtgc tgacacagcc tcctagtgtg tctggcgccc ctggccagag agtgaccatc 60
agctgtaccg gcagcagctc caacatcgga gccggctatg acgtgcactg gtatcagcag 120agctgtaccg gcagcagctc caacatcgga gccggctatg acgtgcactg gtatcagcag 120
ctgcctggca ccgcccccaa actgctgatc tacggcaaca gcaaccggcc cagcggcgtg 180ctgcctggca ccgcccccaa actgctgatc tacggcaaca gcaaccggcc cagcggcgtg 180
cccgatagat tttccggcag caagagcggc accagcgcca gcctggctat tactggactg 240cccgatagat tttccggcag caagagcggc accagcgcca gcctggctat tactggactg 240
caggccgagg acgaggccga ctactactgc cagagctacg acagcagcct gagcggcgtg 300caggccgagg acgaggccga ctactactgc cagagctacg acagcagcct gagcggcgtg 300
gtgtttggcg gcggaacaaa gctgaccgtg cta 333gtgtttggcg gcggaacaaa gctgaccgtg cta 333
<210> 85<210> 85
<211> 98<211> 98
<212> PRT<212>PRT
<213> человека<213> person
<400> 85<400> 85
Glu Val Gln Leu Leu Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly GlyGlu Val Gln Leu Leu Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1 5 10 151 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser TyrSer Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr
20 25 3020 25 30
Ala Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp ValAla Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 4535 40 45
Ser Ala Ile Ser Gly Ser Gly Gly Ser Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser ValSer Ala Ile Ser Gly Ser Gly Gly Ser Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val
50 55 6050 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu TyrLys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr
65 70 75 8065 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr CysLeu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 9585 90 95
Ala LysAla Lys
<210> 86<210> 86
<211> 17<211> 17
<212> PRT<212>PRT
<213> человека<213> person
<400> 86<400> 86
Ala Glu Tyr Phe Gln His Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val SerAla Glu Tyr Phe Gln His Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser
1 5 10 151 5 10 15
SerSer
<210> 87<210> 87
<211> 329<211> 329
<212> PRT<212>PRT
<213> человека<213> person
<400> 87<400> 87
Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser LysAla Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys
1 5 10 151 5 10 15
Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp TyrSer Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr
20 25 3020 25 30
Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr SerPhe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser
35 40 4535 40 45
Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr SerGly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser
50 55 6050 55 60
Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln ThrLeu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr
65 70 75 8065 70 75 80
Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp LysTyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys
85 90 9585 90 95
Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro CysLys Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys
100 105 110100 105 110
Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro ProPro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro
115 120 125115 120 125
Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr CysLys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys
130 135 140130 135 140
Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn TrpVal Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp
145 150 155 160145 150 155 160
Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg GluTyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu
165 170 175165 170 175
Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val LeuGlu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu
180 185 190180 185 190
His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser AsnHis Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn
195 200 205195 200 205
Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys GlyLys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly
210 215 220210 215 220
Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Asp GluGln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Asp Glu
225 230 235 240225 230 235 240
Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe TyrLeu Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr
245 250 255245 250 255
Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu AsnPro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn
260 265 270260 265 270
Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe PheAsn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe
275 280 285275 280 285
Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly AsnLeu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn
290 295 300290 295 300
Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr ThrVal Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr
305 310 315 320305 310 315 320
Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro GlyGln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly
325325
<210> 88<210> 88
<211> 99<211> 99
<212> PRT<212>PRT
<213> человека<213> person
<400> 88<400> 88
Gln Ser Val Leu Thr Gln Pro Pro Ser Val Ser Gly Ala Pro Gly GlnGln Ser Val Leu Thr Gln Pro Pro Ser Val Ser Gly Ala Pro Gly Gln
1 5 10 151 5 10 15
Arg Val Thr Ile Ser Cys Thr Gly Ser Ser Ser Asn Ile Gly Ala GlyArg Val Thr Ile Ser Cys Thr Gly Ser Ser Ser Asn Ile Gly Ala Gly
20 25 3020 25 30
Tyr Asp Val His Trp Tyr Gln Gln Leu Pro Gly Thr Ala Pro Lys LeuTyr Asp Val His Trp Tyr Gln Gln Leu Pro Gly Thr Ala Pro Lys Leu
35 40 4535 40 45
Leu Ile Tyr Gly Asn Ser Asn Arg Pro Ser Gly Val Pro Asp Arg PheLeu Ile Tyr Gly Asn Ser Asn Arg Pro Ser Gly Val Pro Asp Arg Phe
50 55 6050 55 60
Ser Gly Ser Lys Ser Gly Thr Ser Ala Ser Leu Ala Ile Thr Gly LeuSer Gly Ser Lys Ser Gly Thr Ser Ala Ser Leu Ala Ile Thr Gly Leu
65 70 75 8065 70 75 80
Gln Ala Glu Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Gln Ser Tyr Asp Ser SerGln Ala Glu Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Gln Ser Tyr Asp Ser Ser
85 90 9585 90 95
Leu Ser GlyLeu Ser Gly
<210> 89<210> 89
<211> 12<211> 12
<212> PRT<212>PRT
<213> человека<213> person
<400> 89<400> 89
Val Val Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Thr Val LeuVal Val Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Thr Val Leu
1 5 101 5 10
<210> 90<210> 90
<211> 106<211> 106
<212> PRT<212>PRT
<213> человека<213> person
<400> 90<400> 90
Gly Gln Pro Lys Ala Ala Pro Ser Val Thr Leu Phe Pro Pro Ser SerGly Gln Pro Lys Ala Ala Pro Ser Val Thr Leu Phe Pro Pro Ser Ser
1 5 10 151 5 10 15
Glu Glu Leu Gln Ala Asn Lys Ala Thr Leu Val Cys Leu Ile Ser AspGlu Glu Leu Gln Ala Asn Lys Ala Thr Leu Val Cys Leu Ile Ser Asp
20 25 3020 25 30
Phe Tyr Pro Gly Ala Val Thr Val Ala Trp Lys Ala Asp Ser Ser ProPhe Tyr Pro Gly Ala Val Thr Val Ala Trp Lys Ala Asp Ser Ser Pro
35 40 4535 40 45
Val Lys Ala Gly Val Glu Thr Thr Thr Pro Ser Lys Gln Ser Asn AsnVal Lys Ala Gly Val Glu Thr Thr Thr Pro Ser Lys Gln Ser Asn Asn
50 55 6050 55 60
Lys Tyr Ala Ala Ser Ser Tyr Leu Ser Leu Thr Pro Glu Gln Trp LysLys Tyr Ala Ala Ser Ser Tyr Leu Ser Leu Thr Pro Glu Gln Trp Lys
65 70 75 8065 70 75 80
Ser His Arg Ser Tyr Ser Cys Gln Val Thr His Glu Gly Ser Thr ValSer His Arg Ser Tyr Ser Cys Gln Val Thr His Glu Gly Ser Thr Val
85 90 9585 90 95
Glu Lys Thr Val Ala Pro Thr Glu Cys SerGlu Lys Thr Val Ala Pro Thr Glu Cys Ser
100 105100 105
<210> 91<210> 91
<211> 18<211> 18
<212> PRT<212>PRT
<213> искусственная<213> artificial
<220><220>
<223> NP вариант<223> NP option
<220><220>
<221> misc_признак<221> misc_sign
<222> (1)..(1)<222> (1)..(1)
<223> Xaa может быть любой природной аминокислотой<223> Xaa can be any naturally occurring amino acid
<220><220>
<221> misc_признак<221> misc_sign
<222> (5)..(7)<222> (5)..(7)
<223> Xaa может быть любой природной аминокислотой<223> Xaa can be any naturally occurring amino acid
<220><220>
<221> misc_признак<221> misc_sign
<222> (11)..(13)<222> (11)..(13)
<223> Xaa может быть любой природной аминокислотой<223> Xaa can be any naturally occurring amino acid
<220><220>
<221> misc_признак<221> misc_sign
<222> (15)..(15)<222> (15)..(15)
<223> Xaa может быть любой природной аминокислотой<223> Xaa can be any naturally occurring amino acid
<400> 91<400> 91
Xaa Cys Phe Gly Xaa Xaa Xaa Asp Arg Ile Xaa Xaa Xaa Ser Xaa LeuXaa Cys Phe Gly Xaa Xaa Xaa Asp Arg Ile Xaa Xaa Xaa Ser Xaa Leu
1 5 10 151 5 10 15
Gly CysGly Cys
<210> 92<210> 92
<211> 7<211> 7
<212> PRT<212>PRT
<213> искусственная<213> artificial
<220><220>
<223> N-концевая последовательность (с эталонной aa)<223> N-terminal sequence (with reference aa)
<400> 92<400> 92
Ser Gly Phe Thr Phe Ser SerSer Gly Phe Thr Phe Ser Ser
1 515
<210> 93<210> 93
<211> 10<211> 10
<212> PRT<212>PRT
<213> искусственная<213> artificial
<220><220>
<223> N-концевая последовательность (с эталонной aa)<223> N-terminal sequence (with reference aa)
<400> 93<400> 93
Ser Gly Phe Thr Phe Gly Ser Gly Ser GlySer Gly Phe Thr Phe Gly Ser Gly Ser Gly
1 5 101 5 10
<210> 94<210> 94
<211> 6<211> 6
<212> PRT<212>PRT
<213> искусственная<213> artificial
<220><220>
<223> C-концевая последовательность (с эталонной aa)<223> C-terminal sequence (with reference aa)
<400> 94<400> 94
Gly Ser Gly Ser Gly MetGly Ser Gly Ser Gly Met
1 515
<210> 95<210> 95
<211> 13<211> 13
<212> PRT<212>PRT
<213> искусственная<213> artificial
<220><220>
<223> N-концевая последовательность (с эталонной aa)<223> N-terminal sequence (with reference aa)
<400> 95<400> 95
Ser Gly Phe Thr Phe Gly Ser Gly Ser Gly Ser Gly SerSer Gly Phe Thr Phe Gly Ser Gly Ser Gly Ser Gly Ser
1 5 101 5 10
<210> 96<210> 96
<211> 9<211> 9
<212> PRT<212>PRT
<213> искусственная<213> artificial
<220><220>
<223> C-концевая последовательность (с эталонной aa)<223> C-terminal sequence (with reference aa)
<400> 96<400> 96
Ser Gly Ser Gly Ser Gly Ser Gly MetSer Gly Ser Gly Ser Gly Ser Gly Met
1 515
<210> 97<210> 97
<211> 16<211> 16
<212> PRT<212>PRT
<213> искусственная<213> artificial
<220><220>
<223> N-концевая последовательность (с эталонной aa)<223> N-terminal sequence (with reference aa)
<400> 97<400> 97
Ser Gly Phe Thr Phe Gly Ser Gly Ser Gly Ser Gly Gly Ser Gly GlySer Gly Phe Thr Phe Gly Ser Gly Ser Gly Ser Gly Gly Ser Gly Gly
1 5 10 151 5 10 15
<210> 98<210> 98
<211> 12<211> 12
<212> PRT<212>PRT
<213> искусственная<213> artificial
<220><220>
<223> C-концевая последовательность (с эталонной aa)<223> C-terminal sequence (with reference aa)
<400> 98<400> 98
Gly Gly Ser Gly Gly Ser Gly Ser Gly Ser Gly MetGly Gly Ser Gly Gly Ser Gly Ser Gly Ser Gly Met
1 5 101 5 10
<210> 99<210> 99
<211> 19<211> 19
<212> PRT<212>PRT
<213> искусственная<213> artificial
<220><220>
<223> N-концевая последовательность (с эталонной aa)<223> N-terminal sequence (with reference aa)
<400> 99<400> 99
Ser Gly Phe Thr Phe Gly Ser Gly Ser Gly Ser Gly Ser Gly Gly GlySer Gly Phe Thr Phe Gly Ser Gly Ser Gly Ser Gly Ser Gly Gly Gly
1 5 10 151 5 10 15
Ser Gly GlySer Gly Gly
<210> 100<210> 100
<211> 11<211> 11
<212> PRT<212>PRT
<213> искусственная<213> artificial
<220><220>
<223> C-концевая последовательность (с эталонной aa)<223> C-terminal sequence (with reference aa)
<400> 100<400> 100
Gly Ser Gly Ser Gly Gly Ser Gly Ser Gly MetGly Ser Gly Ser Gly Gly Ser Gly Ser Gly Met
1 5 101 5 10
<210> 101<210> 101
<211> 20<211> 20
<212> PRT<212>PRT
<213> искусственная<213> artificial
<220><220>
<223> N-концевая последовательность (с эталонной aa)<223> N-terminal sequence (with reference aa)
<400> 101<400> 101
Ser Pro Ala Val Val Tyr Ile Glu Ile Leu Asp Arg His Pro Asp GlySer Pro Ala Val Val Tyr Ile Glu Ile Leu Asp Arg His Pro Asp Gly
1 5 10 151 5 10 15
Gly Ser Gly GlyGly Ser Gly Gly
2020
<210> 102<210> 102
<211> 18<211> 18
<212> PRT<212>PRT
<213> искусственная<213> artificial
<220><220>
<223> C-концевая последовательность (с эталонной aa)<223> C-terminal sequence (with reference aa)
<400> 102<400> 102
Gly Ser Gly Arg Glu Val Pro Ile Ser Asn Gly Ser Gly Phe Val ValGly Ser Gly Arg Glu Val Pro Ile Ser Asn Gly Ser Gly Phe Val Val
1 5 10 151 5 10 15
Ala MetAla Met
<210> 103<210> 103
<211> 20<211> 20
<212> PRT<212>PRT
<213> искусственная<213> artificial
<220><220>
<223> N-концевая последовательность (с эталонной aa)<223> N-terminal sequence (with reference aa)
<400> 103<400> 103
Ser Gly Ala Val Val Tyr Ile Glu Ile Leu Asp Arg His Pro Asp GlySer Gly Ala Val Val Tyr Ile Glu Ile Leu Asp Arg His Pro Asp Gly
1 5 10 151 5 10 15
Gly Ser Gly GlyGly Ser Gly Gly
2020
<210> 104<210> 104
<211> 21<211> 21
<212> PRT<212>PRT
<213> искусственная<213> artificial
<220><220>
<223> N-концевая последовательность (с эталонной aa)<223> N-terminal sequence (with reference aa)
<400> 104<400> 104
Ser Ser Ser Asp Arg Ser Ala Leu Leu Lys Ser Lys Leu Arg Ala LeuSer Ser Ser Asp Arg Ser Ala Leu Leu Lys Ser Lys Leu Arg Ala Leu
1 5 10 151 5 10 15
Leu Thr Ala Pro ArgLeu Thr Ala Pro Arg
2020
<210> 105<210> 105
<211> 24<211> 24
<212> PRT<212>PRT
<213> искусственная<213> artificial
<220><220>
<223> N-концевая последовательность (с эталонной aa)<223> N-terminal sequence (with reference aa)
<400> 105<400> 105
Ser Gly Phe Thr Phe Gly Ser Gly Ser Gly Ser Gly Ser Gly Ser GlySer Gly Phe Thr Phe Gly Ser Gly Ser Gly Ser Gly Ser Gly Ser Gly
1 5 10 151 5 10 15
Ser Pro Asp Gly Gly Ser Gly GlySer Pro Asp Gly Gly Ser Gly Gly
2020
<210> 106<210> 106
<211> 15<211> 15
<212> PRT<212>PRT
<213> искусственная<213> artificial
<220><220>
<223> C-концевая последовательность (с эталонной aa)<223> C-terminal sequence (with reference aa)
<400> 106<400> 106
Gly Ser Tyr Gly Ser Gly Ser Gly Ser Gly Ser Gly Ser Gly MetGly Ser Tyr Gly Ser Gly Ser Gly Ser Gly Ser Gly Ser Gly Met
1 5 10 151 5 10 15
<210> 107<210> 107
<211> 25<211> 25
<212> PRT<212>PRT
<213> искусственная<213> artificial
<220><220>
<223> N-концевая последовательность (с эталонной aa)<223> N-terminal sequence (with reference aa)
<400> 107<400> 107
Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Asp Arg Ser Ala Leu Leu Lys Ser LysSer Gly Phe Thr Phe Ser Ser Asp Arg Ser Ala Leu Leu Lys Ser Lys
1 5 10 151 5 10 15
Leu Arg Ala Leu Leu Thr Ala Pro ArgLeu Arg Ala Leu Leu Thr Ala Pro Arg
20 2520 25
<210> 108<210> 108
<211> 14<211> 14
<212> PRT<212>PRT
<213> искусственная<213> artificial
<220><220>
<223> C-концевая последовательность (с эталонной aa)<223> C-terminal sequence (with reference aa)
<400> 108<400> 108
Gly Ser Gly Ser Gly Ser Gly Ser Gly Ser Gly Ser Gly MetGly Ser Gly Ser Gly Ser Gly Ser Gly Ser Gly Ser Gly Met
1 5 101 5 10
<210> 109<210> 109
<211> 4<211> 4
<212> PRT<212>PRT
<213> искусственная<213> artificial
<220><220>
<223> N-концевая последовательность (с эталонной aa)<223> N-terminal sequence (with reference aa)
<400> 109<400> 109
Ile Ser Gly SerIle Ser Gly Ser
11
<210> 110<210> 110
<211> 4<211> 4
<212> PRT<212>PRT
<213> искусственная<213> artificial
<220><220>
<223> C-концевая последовательность (с эталонной aa)<223> C-terminal sequence (with reference aa)
<400> 110<400> 110
Gly Gly Ser ThrGly Gly Ser Thr
11
<210> 111<210> 111
<211> 8<211> 8
<212> PRT<212>PRT
<213> искусственная<213> artificial
<220><220>
<223> N-концевая последовательность (с эталонной aa)<223> N-terminal sequence (with reference aa)
<400> 111<400> 111
Ile Ser Gly Ser Gly Ser Gly SerIle Ser Gly Ser Gly Ser Gly Ser
1 515
<210> 112<210> 112
<211> 8<211> 8
<212> PRT<212>PRT
<213> искусственная<213> artificial
<220><220>
<223> C-концевая последовательность (с эталонной aa)<223> C-terminal sequence (with reference aa)
<400> 112<400> 112
Gly Ser Gly Ser Gly Gly Ser ThrGly Ser Gly Ser Gly Gly Ser Thr
1 515
<210> 113<210> 113
<211> 9<211> 9
<212> PRT<212>PRT
<213> искусственная<213> artificial
<220><220>
<223> N-концевая последовательность (с эталонной aa)<223> N-terminal sequence (with reference aa)
<400> 113<400> 113
Ile Ser Gly Ser Gly Ser Gly Ser GlyIle Ser Gly Ser Gly Ser Gly Ser Gly
1 515
<210> 114<210> 114
<211> 10<211> 10
<212> PRT<212>PRT
<213> искусственная<213> artificial
<220><220>
<223> C-концевая последовательность (с эталонной aa)<223> C-terminal sequence (with reference aa)
<400> 114<400> 114
Gly Ser Ser Gly Ser Gly Ser Gly Ser ThrGly Ser Ser Gly Ser Gly Ser Gly Ser Thr
1 5 101 5 10
<210> 115<210> 115
<211> 11<211> 11
<212> PRT<212>PRT
<213> искусственная<213> artificial
<220><220>
<223> N-концевая последовательность (с эталонной aa)<223> N-terminal sequence (with reference aa)
<400> 115<400> 115
Ile Ser Gly Ser Gly Ser Gly Ser Gly Ser GlyIle Ser Gly Ser Gly Ser Gly Ser Gly Ser Gly
1 5 101 5 10
<210> 116<210> 116
<211> 12<211> 12
<212> PRT<212>PRT
<213> искусственная<213> artificial
<220><220>
<223> C-концевая последовательность (с эталонной aa)<223> C-terminal sequence (with reference aa)
<400> 116<400> 116
Gly Ser Ser Gly Ser Gly Ser Gly Ser Gly Ser ThrGly Ser Ser Gly Ser Gly Ser Gly Ser Gly Ser Thr
1 5 101 5 10
<210> 117<210> 117
<211> 12<211> 12
<212> PRT<212>PRT
<213> искусственная<213> artificial
<220><220>
<223> N-концевая последовательность (с эталонной aa)<223> N-terminal sequence (with reference aa)
<400> 117<400> 117
Ile Ser Gly Ser Gly Ser Gly Ser Gly Ser Gly GlyIle Ser Gly Ser Gly Ser Gly Ser Gly Ser Gly Gly
1 5 101 5 10
<210> 118<210> 118
<211> 15<211> 15
<212> PRT<212>PRT
<213> искусственная<213> artificial
<220><220>
<223> C-концевая последовательность (с эталонной aa)<223> C-terminal sequence (with reference aa)
<400> 118<400> 118
Gly Glu Lys Glu Lys Glu Lys Val Ser Thr Ala Val Gly Ser ThrGly Glu Lys Glu Lys Glu Lys Val Ser Thr Ala Val Gly Ser Thr
1 5 10 151 5 10 15
<210> 119<210> 119
<211> 13<211> 13
<212> PRT<212>PRT
<213> искусственная<213> artificial
<220><220>
<223> N-концевая последовательность (с эталонной aa)<223> N-terminal sequence (with reference aa)
<400> 119<400> 119
Ile Ser Gly Ser Ala Val Val Asn Gly Gly Ser Gly GlyIle Ser Gly Ser Ala Val Val Asn Gly Gly Ser Gly Gly
1 5 101 5 10
<210> 120<210> 120
<211> 9<211> 9
<212> PRT<212>PRT
<213> искусственная<213> artificial
<220><220>
<223> C-концевая последовательность (с эталонной aa)<223> C-terminal sequence (with reference aa)
<400> 120<400> 120
Gly Lys Ile Ala Ile Gly Gly Ser ThrGly Lys Ile Ala Ile Gly Gly Ser Thr
1 515
<210> 121<210> 121
<211> 14<211> 14
<212> PRT<212>PRT
<213> искусственная<213> artificial
<220><220>
<223> N-концевая последовательность (с эталонной aa)<223> N-terminal sequence (with reference aa)
<400> 121<400> 121
Ile Ser Gly Pro Asn Pro Asn Lys Asn Pro Asn Pro Gly GlyIle Ser Gly Pro Asn Pro Asn Lys Asn Pro Asn Pro Gly Gly
1 5 101 5 10
<210> 122<210> 122
<211> 13<211> 13
<212> PRT<212>PRT
<213> искусственная<213> artificial
<220><220>
<223> C-концевая последовательность (с эталонной aa)<223> C-terminal sequence (with reference aa)
<400> 122<400> 122
Gly Ser Asn Glu Asn Pro Asn Pro Asn Pro Gly Ser ThrGly Ser Asn Glu Asn Pro Asn Pro Asn Pro Gly Ser Thr
1 5 101 5 10
<210> 123<210> 123
<211> 15<211> 15
<212> PRT<212>PRT
<213> искусственная<213> artificial
<220><220>
<223> N-концевая последовательность (с эталонной aa)<223> N-terminal sequence (with reference aa)
<400> 123<400> 123
Ile Ser Gly Ser Val Val Val Thr Ser His Gly Gly Ser Gly GlyIle Ser Gly Ser Val Val Val Thr Ser His Gly Gly Ser Gly Gly
1 5 10 151 5 10 15
<210> 124<210> 124
<211> 10<211> 10
<212> PRT<212>PRT
<213> искусственная<213> artificial
<220><220>
<223> C-концевая последовательность (с эталонной aa)<223> C-terminal sequence (with reference aa)
<400> 124<400> 124
Gly Gly Ser Gly Ser Gly Ser Gly Ser ThrGly Gly Ser Gly Ser Gly Ser Gly Ser Thr
1 5 101 5 10
<210> 125<210> 125
<211> 15<211> 15
<212> PRT<212>PRT
<213> искусственная<213> artificial
<220><220>
<223> N-концевая последовательность (с эталонной aa)<223> N-terminal sequence (with reference aa)
<400> 125<400> 125
Ile Ser Gly Ser Ala Val Val Asn Val Arg Gly Gly Ser Gly GlyIle Ser Gly Ser Ala Val Val Asn Val Arg Gly Gly Ser Gly Gly
1 5 10 151 5 10 15
<210> 126<210> 126
<211> 11<211> 11
<212> PRT<212>PRT
<213> искусственная<213> artificial
<220><220>
<223> C-концевая последовательность (с эталонной aa)<223> C-terminal sequence (with reference aa)
<400> 126<400> 126
Gly Gly Asp Lys Ile Ala Ile Gly Gly Ser ThrGly Gly Asp Lys Ile Ala Ile Gly Gly Ser Thr
1 5 101 5 10
<210> 127<210> 127
<211> 15<211> 15
<212> PRT<212>PRT
<213> искусственная<213> artificial
<220><220>
<223> N-концевая последовательность (с эталонной aa)<223> N-terminal sequence (with reference aa)
<400> 127<400> 127
Ile Ser Gly Ser Gly Ser Gly Ser Gly Ser Gly Ser Ser Gly GlyIle Ser Gly Ser Gly Ser Gly Ser Gly Ser Gly Ser Ser Gly Gly
1 5 10 151 5 10 15
<210> 128<210> 128
<211> 15<211> 15
<212> PRT<212>PRT
<213> искусственная<213> artificial
<220><220>
<223> N-концевая последовательность (с эталонной aa)<223> N-terminal sequence (with reference aa)
<400> 128<400> 128
Ile Ser Gly Leu Ala Val Gln Ile Arg Arg Gly Gly Ser Gly GlyIle Ser Gly Leu Ala Val Gln Ile Arg Arg Gly Gly Ser Gly Gly
1 5 10 151 5 10 15
<210> 129<210> 129
<211> 15<211> 15
<212> PRT<212>PRT
<213> искусственная<213> artificial
<220><220>
<223> C-концевая последовательность (с эталонной aa)<223> C-terminal sequence (with reference aa)
<400> 129<400> 129
Gly Gly Ser Gly Arg Glu Thr Leu Thr Leu Tyr Val Gly Ser ThrGly Gly Ser Gly Arg Glu Thr Leu Thr Leu Tyr Val Gly Ser Thr
1 5 10 151 5 10 15
<210> 130<210> 130
<211> 16<211> 16
<212> PRT<212>PRT
<213> искусственная<213> artificial
<220><220>
<223> N-концевая последовательность (с эталонной aa)<223> N-terminal sequence (with reference aa)
<400> 130<400> 130
Ile Ser Gly Ser Ala Val Val Asn Val Arg Ala Gly Gly Ser Gly GlyIle Ser Gly Ser Ala Val Val Asn Val Arg Ala Gly Gly Ser Gly Gly
1 5 10 151 5 10 15
<210> 131<210> 131
<211> 16<211> 16
<212> PRT<212>PRT
<213> искусственная<213> artificial
<220><220>
<223> N-концевая последовательность (с эталонной aa)<223> N-terminal sequence (with reference aa)
<400> 131<400> 131
Ile Ser Gly Ser Tyr Ala Met Ser Trp Val Arg Gly Gly Ser Gly GlyIle Ser Gly Ser Tyr Ala Met Ser Trp Val Arg Gly Gly Ser Gly Gly
1 5 10 151 5 10 15
<210> 132<210> 132
<211> 13<211> 13
<212> PRT<212>PRT
<213> искусственная<213> artificial
<220><220>
<223> C-концевая последовательность (с эталонной aa)<223> C-terminal sequence (with reference aa)
<400> 132<400> 132
Gly Ser Tyr Ala Met Ser Trp Val Arg Gln Gly Ser ThrGly Ser Tyr Ala Met Ser Trp Val Arg Gln Gly Ser Thr
1 5 101 5 10
<210> 133<210> 133
<211> 16<211> 16
<212> PRT<212>PRT
<213> искусственная<213> artificial
<220><220>
<223> N-концевая последовательность (с эталонной aa)<223> N-terminal sequence (with reference aa)
<400> 133<400> 133
Ile Ser Gly Pro Asn Pro Asn Lys Asn Pro Asn Pro Asn Pro Gly GlyIle Ser Gly Pro Asn Pro Asn Lys Asn Pro Asn Pro Asn Pro Gly Gly
1 5 10 151 5 10 15
<210> 134<210> 134
<211> 15<211> 15
<212> PRT<212>PRT
<213> искусственная<213> artificial
<220><220>
<223> C-концевая последовательность (с эталонной aa)<223> C-terminal sequence (with reference aa)
<400> 134<400> 134
Gly Ser Asn Pro Asn Glu Asn Pro Asn Pro Asn Pro Gly Ser ThrGly Ser Asn Pro Asn Glu Asn Pro Asn Pro Asn Pro Gly Ser Thr
1 5 10 151 5 10 15
<210> 135<210> 135
<211> 17<211> 17
<212> PRT<212>PRT
<213> искусственная<213> artificial
<220><220>
<223> N-концевая последовательность (с эталонной aa)<223> N-terminal sequence (with reference aa)
<400> 135<400> 135
Ile Ser Gly Ser Ala Val Val Asn Val Arg Ala Asp Gly Gly Ser GlyIle Ser Gly Ser Ala Val Val Asn Val Arg Ala Asp Gly Gly Ser Gly
1 5 10 151 5 10 15
GlyGly
<210> 136<210> 136
<211> 12<211> 12
<212> PRT<212>PRT
<213> искусственная<213> artificial
<220><220>
<223> C-концевая последовательность (с эталонной aa)<223> C-terminal sequence (with reference aa)
<400> 136<400> 136
Gly Ser Gly Asp Lys Ile Ala Ile Gly Gly Ser ThrGly Ser Gly Asp Lys Ile Ala Ile Gly Gly Ser Thr
1 5 101 5 10
<210> 137<210> 137
<211> 17<211> 17
<212> PRT<212>PRT
<213> искусственная<213> artificial
<220><220>
<223> N-концевая последовательность (с эталонной aa)<223> N-terminal sequence (with reference aa)
<400> 137<400> 137
Ile Ser Gly Ser Gly Ser Gly Ser Gly Ser Pro Asp Gly Gly Ser GlyIle Ser Gly Ser Gly Ser Gly Ser Gly Ser Pro Asp Gly Gly Ser Gly
1 5 10 151 5 10 15
GlyGly
<210> 138<210> 138
<211> 17<211> 17
<212> PRT<212>PRT
<213> искусственная<213> artificial
<220><220>
<223> N-концевая последовательность (с эталонной aa)<223> N-terminal sequence (with reference aa)
<400> 138<400> 138
Ile Ser Gly Ser Gly Ser Gly Ser Gly Ser Gly Ser Gly Gly Ser GlyIle Ser Gly Ser Gly Ser Gly Ser Gly Ser Gly Ser Gly Gly Ser Gly
1 5 10 151 5 10 15
GlyGly
<210> 139<210> 139
<211> 17<211> 17
<212> PRT<212>PRT
<213> искусственная<213> artificial
<220><220>
<223> N-концевая последовательность (с эталонной aa)<223> N-terminal sequence (with reference aa)
<400> 139<400> 139
Ile Ser Gly Ser Val Val Val Thr Ser His Gln Ala Pro Gly Ser GlyIle Ser Gly Ser Val Val Val Thr Ser His Gln Ala Pro Gly Ser Gly
1 5 10 151 5 10 15
GlyGly
<210> 140<210> 140
<211> 16<211> 16
<212> PRT<212>PRT
<213> искусственная<213> artificial
<220><220>
<223> C-концевая последовательность (с эталонной aa)<223> C-terminal sequence (with reference aa)
<400> 140<400> 140
Gly Ser Gly Glu Lys Lys Lys Leu Lys Ser Leu Ala Tyr Gly Ser ThrGly Ser Gly Glu Lys Lys Lys Leu Lys Ser Leu Ala Tyr Gly Ser Thr
1 5 10 151 5 10 15
<210> 141<210> 141
<211> 17<211> 17
<212> PRT<212>PRT
<213> искусственная<213> artificial
<220><220>
<223> N-концевая последовательность (с эталонной aa)<223> N-terminal sequence (with reference aa)
<400> 141<400> 141
Ile Ser Gly Arg Tyr Asn Ile Leu Lys Ile Gln Lys Val Gly Ser GlyIle Ser Gly Arg Tyr Asn Ile Leu Lys Ile Gln Lys Val Gly Ser Gly
1 5 10 151 5 10 15
GlyGly
<210> 142<210> 142
<211> 16<211> 16
<212> PRT<212>PRT
<213> искусственная<213> artificial
<220><220>
<223> C-концевая последовательность (с эталонной aa)<223> C-terminal sequence (with reference aa)
<400> 142<400> 142
Gly Gly Ser Gly Glu Tyr Leu Ile Thr Tyr Gln Ile Met Gly Ser ThrGly Gly Ser Gly Glu Tyr Leu Ile Thr Tyr Gln Ile Met Gly Ser Thr
1 5 10 151 5 10 15
<210> 143<210> 143
<211> 17<211> 17
<212> PRT<212>PRT
<213> искусственная<213> artificial
<220><220>
<223> N-концевая последовательность (с эталонной aa)<223> N-terminal sequence (with reference aa)
<400> 143<400> 143
Ile Ser Gly Arg Gln Leu Leu Phe Cys Arg Val Thr Leu Gly Ser GlyIle Ser Gly Arg Gln Leu Leu Phe Cys Arg Val Thr Leu Gly Ser Gly
1 5 10 151 5 10 15
GlyGly
<210> 144<210> 144
<211> 18<211> 18
<212> PRT<212>PRT
<213> искусственная<213> artificial
<220><220>
<223> C-концевая последовательность (с эталонной aa)<223> C-terminal sequence (with reference aa)
<400> 144<400> 144
Gly Gly Ser Gly Glu Gln Ala Tyr Pro Glu Tyr Leu Ile Thr Tyr GlyGly Gly Ser Gly Glu Gln Ala Tyr Pro Glu Tyr Leu Ile Thr Tyr Gly
1 5 10 151 5 10 15
Ser ThrSer Thr
<210> 145<210> 145
<211> 18<211> 18
<212> PRT<212>PRT
<213> искусственная<213> artificial
<220><220>
<223> N-концевая последовательность (с эталонной aa)<223> N-terminal sequence (with reference aa)
<400> 145<400> 145
Ile Ser Val Val Val Thr Ser His Gln Ala Pro Gly Glu Gly Gly SerIle Ser Val Val Val Thr Ser His Gln Ala Pro Gly Glu Gly Gly Ser
1 5 10 151 5 10 15
Gly GlyGly Gly
<210> 146<210> 146
<211> 12<211> 12
<212> PRT<212>PRT
<213> искусственная<213> artificial
<220><220>
<223> C-концевая последовательность (с эталонной aa)<223> C-terminal sequence (with reference aa)
<400> 146<400> 146
Gly Glu Lys Lys Lys Leu Lys Ser Leu Ala Ser ThrGly Glu Lys Lys Lys Leu Lys Ser Leu Ala Ser Thr
1 5 101 5 10
<210> 147<210> 147
<211> 18<211> 18
<212> PRT<212>PRT
<213> искусственная<213> artificial
<220><220>
<223> N-концевая последовательность (с эталонной aa)<223> N-terminal sequence (with reference aa)
<400> 147<400> 147
Ile Ser Gly Val Val Thr Ser His Gln Ala Pro Gly Glu Gly Gly SerIle Ser Gly Val Val Thr Ser His Gln Ala Pro Gly Glu Gly Gly Ser
1 5 10 151 5 10 15
Gly GlyGly Gly
<210> 148<210> 148
<211> 12<211> 12
<212> PRT<212>PRT
<213> искусственная<213> artificial
<220><220>
<223> C-концевая последовательность (с эталонной aa)<223> C-terminal sequence (with reference aa)
<400> 148<400> 148
Gly Glu Lys Lys Lys Leu Lys Ser Leu Gly Ser ThrGly Glu Lys Lys Lys Leu Lys Ser Leu Gly Ser Thr
1 5 101 5 10
<210> 149<210> 149
<211> 12<211> 12
<212> PRT<212>PRT
<213> искусственная<213> artificial
<220><220>
<223> C-концевая последовательность (с эталонной aa)<223> C-terminal sequence (with reference aa)
<400> 149<400> 149
Gly Glu Lys Lys Lys Leu Lys Ser Gly Gly Ser ThrGly Glu Lys Lys Lys Leu Lys Ser Gly Gly Ser Thr
1 5 101 5 10
<210> 150<210> 150
<211> 18<211> 18
<212> PRT<212>PRT
<213> искусственная<213> artificial
<220><220>
<223> N-концевая последовательность (с эталонной aa)<223> N-terminal sequence (with reference aa)
<400> 150<400> 150
Ile Ser Gly Ser Val Thr Ser His Gln Ala Pro Gly Glu Gly Gly SerIle Ser Gly Ser Val Thr Ser His Gln Ala Pro Gly Glu Gly Gly Ser
1 5 10 151 5 10 15
Gly GlyGly Gly
<210> 151<210> 151
<211> 12<211> 12
<212> PRT<212>PRT
<213> искусственная<213> artificial
<220><220>
<223> C-концевая последовательность (с эталонной aa)<223> C-terminal sequence (with reference aa)
<400> 151<400> 151
Gly Glu Lys Lys Lys Gly Lys Ser Gly Gly Ser ThrGly Glu Lys Lys Lys Gly Lys Ser Gly Gly Ser Thr
1 5 101 5 10
<210> 152<210> 152
<211> 18<211> 18
<212> PRT<212>PRT
<213> искусственная<213> artificial
<220><220>
<223> N-концевая последовательность (с эталонной aa)<223> N-terminal sequence (with reference aa)
<400> 152<400> 152
Ile Ser Val Val Val Thr Ser His Gln Ala Pro Gly Ser Gly Gly SerIle Ser Val Val Val Thr Ser His Gln Ala Pro Gly Ser Gly Gly Ser
1 5 10 151 5 10 15
Gly GlyGly Gly
<210> 153<210> 153
<211> 18<211> 18
<212> PRT<212>PRT
<213> искусственная<213> artificial
<220><220>
<223> N-концевая последовательность (с эталонной aa)<223> N-terminal sequence (with reference aa)
<400> 153<400> 153
Ile Ser Val Val Val Thr Ser His Gln Ala Pro Thr Ser Gly Gly SerIle Ser Val Val Val Thr Ser His Gln Ala Pro Thr Ser Gly Gly Ser
1 5 10 151 5 10 15
Gly GlyGly Gly
<210> 154<210> 154
<211> 18<211> 18
<212> PRT<212>PRT
<213> искусственная<213> artificial
<220><220>
<223> N-концевая последовательность (с эталонной aa)<223> N-terminal sequence (with reference aa)
<400> 154<400> 154
Ile Ser Val Val Val Thr Ser His Gln Ser Pro Thr Pro Gly Gly SerIle Ser Val Val Val Thr Ser His Gln Ser Pro Thr Pro Gly Gly Ser
1 5 10 151 5 10 15
Gly GlyGly Gly
<210> 155<210> 155
<211> 12<211> 12
<212> PRT<212>PRT
<213> искусственная<213> artificial
<220><220>
<223> C-концевая последовательность (с эталонной aa)<223> C-terminal sequence (with reference aa)
<400> 155<400> 155
Gly Gly Ser Thr Pro Leu Lys Ser Leu Ala Ser ThrGly Gly Ser Thr Pro Leu Lys Ser Leu Ala Ser Thr
1 5 101 5 10
<210> 156<210> 156
<211> 12<211> 12
<212> PRT<212>PRT
<213> искусственная<213> artificial
<220><220>
<223> C-концевая последовательность (с эталонной aa)<223> C-terminal sequence (with reference aa)
<400> 156<400> 156
Gly Ser Thr Pro Lys Leu Lys Ser Leu Ala Ser ThrGly Ser Thr Pro Lys Leu Lys Ser Leu Ala Ser Thr
1 5 101 5 10
<210> 157<210> 157
<211> 18<211> 18
<212> PRT<212>PRT
<213> искусственная<213> artificial
<220><220>
<223> N-концевая последовательность (с эталонной aa)<223> N-terminal sequence (with reference aa)
<400> 157<400> 157
Ile Ser Val Val Val Thr Ser His Pro Thr Pro Gly Glu Gly Gly SerIle Ser Val Val Val Thr Ser His Pro Thr Pro Gly Glu Gly Gly Ser
1 5 10 151 5 10 15
Gly GlyGly Gly
<210> 158<210> 158
<211> 18<211> 18
<212> PRT<212>PRT
<213> искусственная<213> artificial
<220><220>
<223> N-концевая последовательность (с эталонной aa)<223> N-terminal sequence (with reference aa)
<400> 158<400> 158
Ile Ser Val Val Val Thr Ser His Gln Ala Pro Ser Pro Gly Ser ThrIle Ser Val Val Val Thr Ser His Gln Ala Pro Ser Pro Gly Ser Thr
1 5 10 151 5 10 15
Gly GlyGly Gly
<210> 159<210> 159
<211> 18<211> 18
<212> PRT<212>PRT
<213> искусственная<213> artificial
<220><220>
<223> N-концевая последовательность (с эталонной aa)<223> N-terminal sequence (with reference aa)
<400> 159<400> 159
Ile Ser Val Val Val Thr Ser His Gln Ala Asn Gly Ser Gly Gly SerIle Ser Val Val Val Thr Ser His Gln Ala Asn Gly Ser Gly Gly Ser
1 5 10 151 5 10 15
Gly GlyGly Gly
<210> 160<210> 160
<211> 18<211> 18
<212> PRT<212>PRT
<213> искусственная<213> artificial
<220><220>
<223> N-концевая последовательность (с эталонной aa)<223> N-terminal sequence (with reference aa)
<400> 160<400> 160
Ile Ser Gly Ser Ala Val Val Asn Val Arg Ala Pro Asp Gly Gly SerIle Ser Gly Ser Ala Val Val Asn Val Arg Ala Pro Asp Gly Gly Ser
1 5 10 151 5 10 15
Gly GlyGly Gly
<210> 161<210> 161
<211> 13<211> 13
<212> PRT<212>PRT
<213> искусственная<213> artificial
<220><220>
<223> C-концевая последовательность (с эталонной aa)<223> C-terminal sequence (with reference aa)
<400> 161<400> 161
Gly Ser Lys Gly Asp Lys Ile Ala Ile Gly Gly Ser ThrGly Ser Lys Gly Asp Lys Ile Ala Ile Gly Gly Ser Thr
1 5 101 5 10
<210> 162<210> 162
<211> 18<211> 18
<212> PRT<212>PRT
<213> искусственная<213> artificial
<220><220>
<223> N-концевая последовательность (с эталонной aa)<223> N-terminal sequence (with reference aa)
<400> 162<400> 162
Ile Ser Thr Ser Ala Ser Leu Ala Ile Thr Gly Pro Asp Gly Gly SerIle Ser Thr Ser Ala Ser Leu Ala Ile Thr Gly Pro Asp Gly Gly Ser
1 5 10 151 5 10 15
Gly GlyGly Gly
<210> 163<210> 163
<211> 13<211> 13
<212> PRT<212>PRT
<213> искусственная<213> artificial
<220><220>
<223> C-концевая последовательность (с эталонной aa)<223> C-terminal sequence (with reference aa)
<400> 163<400> 163
Gly Ser Asp Arg Phe Ser Gly Ser Lys Ser Gly Ser ThrGly Ser Asp Arg Phe Ser Gly Ser Lys Ser Gly Ser Thr
1 5 101 5 10
<210> 164<210> 164
<211> 18<211> 18
<212> PRT<212>PRT
<213> искусственная<213> artificial
<220><220>
<223> N-концевая последовательность (с эталонной aa)<223> N-terminal sequence (with reference aa)
<400> 164<400> 164
Ile Ser Gly Phe Ile Leu Pro Ile Glu Val Tyr Pro Asp Gly Gly SerIle Ser Gly Phe Ile Leu Pro Ile Glu Val Tyr Pro Asp Gly Gly Ser
1 5 10 151 5 10 15
Gly GlyGly Gly
<210> 165<210> 165
<211> 13<211> 13
<212> PRT<212>PRT
<213> искусственная<213> artificial
<220><220>
<223> C-концевая последовательность (с эталонной aa)<223> C-terminal sequence (with reference aa)
<400> 165<400> 165
Gly Ser Lys Val Arg Phe Asp Tyr Asp Leu Phe Ser ThrGly Ser Lys Val Arg Phe Asp Tyr Asp Leu Phe Ser Thr
1 5 101 5 10
<210> 166<210> 166
<211> 18<211> 18
<212> PRT<212>PRT
<213> искусственная<213> artificial
<220><220>
<223> N-концевая последовательность (с эталонной aa)<223> N-terminal sequence (with reference aa)
<400> 166<400> 166
Ile Ser Ser Ala Leu Leu Lys Ser Lys Leu Arg Ala Leu Leu Thr AlaIle Ser Ser Ala Leu Leu Lys Ser Lys Leu Arg Ala Leu Leu Thr Ala
1 5 10 151 5 10 15
Pro GlyPro Gly
<210> 167<210> 167
<211> 14<211> 14
<212> PRT<212>PRT
<213> искусственная<213> artificial
<220><220>
<223> C-концевая последовательность (с эталонной aa)<223> C-terminal sequence (with reference aa)
<400> 167<400> 167
Gly Gly Ser Gly Ser Gly Ser Gly Ser Gly Ser Gly Ser ThrGly Gly Ser Gly Ser Gly Ser Gly Ser Gly Ser Gly Ser Thr
1 5 101 5 10
<210> 168<210> 168
<211> 18<211> 18
<212> PRT<212>PRT
<213> искусственная<213> artificial
<220><220>
<223> N-концевая последовательность (с эталонной aa)<223> N-terminal sequence (with reference aa)
<400> 168<400> 168
Ile Ser Gly Ser Tyr Ala Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Gly Gly SerIle Ser Gly Ser Tyr Ala Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Gly Gly Ser
1 5 10 151 5 10 15
Gly GlyGly Gly
<210> 169<210> 169
<211> 15<211> 15
<212> PRT<212>PRT
<213> искусственная<213> artificial
<220><220>
<223> C-концевая последовательность (с эталонной aa)<223> C-terminal sequence (with reference aa)
<400> 169<400> 169
Gly Ser Ser Ser Tyr Ala Met Ser Trp Val Arg Gln Gly Ser ThrGly Ser Ser Ser Tyr Ala Met Ser Trp Val Arg Gln Gly Ser Thr
1 5 10 151 5 10 15
<210> 170<210> 170
<211> 18<211> 18
<212> PRT<212>PRT
<213> искусственная<213> artificial
<220><220>
<223> N-концевая последовательность (с эталонной aa)<223> N-terminal sequence (with reference aa)
<400> 170<400> 170
Ile Ser Gly Pro Asn Pro Asn Lys Asn Pro Asn Pro Asn Pro Gly SerIle Ser Gly Pro Asn Pro Asn Lys Asn Pro Asn Pro Asn Pro Gly Ser
1 5 10 151 5 10 15
Gly GlyGly Gly
<210> 171<210> 171
<211> 18<211> 18
<212> PRT<212>PRT
<213> искусственная<213> artificial
<220><220>
<223> N-концевая последовательность (с эталонной aa)<223> N-terminal sequence (with reference aa)
<400> 171<400> 171
Ile His Pro Leu Gln Asn Arg Trp Ala Leu Trp Phe Phe Lys Gly SerIle His Pro Leu Gln Asn Arg Trp Ala Leu Trp Phe Phe Lys Gly Ser
1 5 10 151 5 10 15
Gly GlyGly Gly
<210> 172<210> 172
<211> 16<211> 16
<212> PRT<212>PRT
<213> искусственная<213> artificial
<220><220>
<223> C-концевая последовательность (с эталонной aa)<223> C-terminal sequence (with reference aa)
<400> 172<400> 172
Gly Gly Ser Gly Asn Leu Arg Leu Ile Ser Lys Phe Asp Thr Val ThrGly Gly Ser Gly Asn Leu Arg Leu Ile Ser Lys Phe Asp Thr Val Thr
1 5 10 151 5 10 15
<210> 173<210> 173
<211> 18<211> 18
<212> PRT<212>PRT
<213> искусственная<213> artificial
<220><220>
<223> N-концевая последовательность (с эталонной aa)<223> N-terminal sequence (with reference aa)
<400> 173<400> 173
Ile Ser Gly Ser Val Thr Ile Phe Ser Leu Ala Thr Asn Glu Gly SerIle Ser Gly Ser Val Thr Ile Phe Ser Leu Ala Thr Asn Glu Gly Ser
1 5 10 151 5 10 15
Gly GlyGly Gly
<210> 174<210> 174
<211> 18<211> 18
<212> PRT<212>PRT
<213> искусственная<213> artificial
<220><220>
<223> C-концевая последовательность (с эталонной aa)<223> C-terminal sequence (with reference aa)
<400> 174<400> 174
Gly Gly Ser Gly Lys Thr Thr Trp His Arg Ile Ser Val Phe Gly GlyGly Gly Ser Gly Lys Thr Thr Trp His Arg Ile Ser Val Phe Gly Gly
1 5 10 151 5 10 15
Ser ThrSer Thr
<210> 175<210> 175
<211> 18<211> 18
<212> PRT<212>PRT
<213> искусственная<213> artificial
<220><220>
<223> N-концевая последовательность (с эталонной aa)<223> N-terminal sequence (with reference aa)
<400> 175<400> 175
Ile Tyr Leu Glu Gly Lys Ile Asp Tyr Gly Glu Tyr Met Asp Gly SerIle Tyr Leu Glu Gly Lys Ile Asp Tyr Gly Glu Tyr Met Asp Gly Ser
1 5 10 151 5 10 15
Gly GlyGly Gly
<210> 176<210> 176
<211> 18<211> 18
<212> PRT<212>PRT
<213> искусственная<213> artificial
<220><220>
<223> C-концевая последовательность (с эталонной aa)<223> C-terminal sequence (with reference aa)
<400> 176<400> 176
Gly Gly Ser Asn Val Arg Arg Gln Ala Thr Thr Ile Ile Ala Asp AsnGly Gly Ser Asn Val Arg Arg Gln Ala Thr Thr Ile Ile Ala Asp Asn
1 5 10 151 5 10 15
Ile ThrIle Thr
<210> 177<210> 177
<211> 18<211> 18
<212> PRT<212>PRT
<213> искусственная<213> artificial
<220><220>
<223> N-концевая последовательность (с эталонной aa)<223> N-terminal sequence (with reference aa)
<400> 177<400> 177
Ile Ser Gly Ser Val Gln Gly Ile Ile Asn Phe Glu Gln Lys Gly SerIle Ser Gly Ser Val Gln Gly Ile Ile Asn Phe Glu Gln Lys Gly Ser
1 5 10 151 5 10 15
Gly GlyGly Gly
<210> 178<210> 178
<211> 18<211> 18
<212> PRT<212>PRT
<213> искусственная<213> artificial
<220><220>
<223> C-концевая последовательность (с эталонной aa)<223> C-terminal sequence (with reference aa)
<400> 178<400> 178
Gly Gly Ser Gly Pro Val Lys Val Trp Gly Ser Ile Lys Gly Gly GlyGly Gly Ser Gly Pro Val Lys Val Trp Gly Ser Ile Lys Gly Gly Gly
1 5 10 151 5 10 15
Ser ThrSer Thr
<210> 179<210> 179
<211> 19<211> 19
<212> PRT<212>PRT
<213> искусственная<213> artificial
<220><220>
<223> N-концевая последовательность (с эталонной aa)<223> N-terminal sequence (with reference aa)
<400> 179<400> 179
Ile Ser Gly Val Val Val Thr Ser His Gln Ala Pro Gly Glu Gly GlyIle Ser Gly Val Val Val Thr Ser His Gln Ala Pro Gly Glu Gly Gly
1 5 10 151 5 10 15
Ser Gly GlySer Gly Gly
<210> 180<210> 180
<211> 13<211> 13
<212> PRT<212>PRT
<213> искусственная<213> artificial
<220><220>
<223> C-концевая последовательность (с эталонной aa)<223> C-terminal sequence (with reference aa)
<400> 180<400> 180
Gly Glu Lys Lys Lys Leu Lys Ser Leu Ala Gly Ser ThrGly Glu Lys Lys Lys Leu Lys Ser Leu Ala Gly Ser Thr
1 5 101 5 10
<210> 181<210> 181
<211> 19<211> 19
<212> PRT<212>PRT
<213> искусственная<213> artificial
<220><220>
<223> N-концевая последовательность (с эталонной aa)<223> N-terminal sequence (with reference aa)
<400> 181<400> 181
Ile Ser Gly Thr Ser Ala Ser Leu Ala Ile Thr Gly Pro Asp Gly GlyIle Ser Gly Thr Ser Ala Ser Leu Ala Ile Thr Gly Pro Asp Gly Gly
1 5 10 151 5 10 15
Ser Gly GlySer Gly Gly
<210> 182<210> 182
<211> 14<211> 14
<212> PRT<212>PRT
<213> искусственная<213> artificial
<220><220>
<223> C-концевая последовательность (с эталонной aa)<223> C-terminal sequence (with reference aa)
<400> 182<400> 182
Gly Ser Asp Arg Phe Ser Gly Ser Lys Ser Gly Gly Ser ThrGly Ser Asp Arg Phe Ser Gly Ser Lys Ser Gly Gly Ser Thr
1 5 101 5 10
<210> 183<210> 183
<211> 19<211> 19
<212> PRT<212>PRT
<213> искусственная<213> artificial
<220><220>
<223> N-концевая последовательность (с эталонной aa)<223> N-terminal sequence (with reference aa)
<400> 183<400> 183
Ile Ser Gly Ser Gly Ser Gly Ser Gly Ser Gly Ser Pro Asp Gly GlyIle Ser Gly Ser Gly Ser Gly Ser Gly Ser Gly Ser Pro Asp Gly Gly
1 5 10 151 5 10 15
Ser Gly GlySer Gly Gly
<210> 184<210> 184
<211> 14<211> 14
<212> PRT<212>PRT
<213> искусственная<213> artificial
<220><220>
<223> C-концевая последовательность (с эталонной aa)<223> C-terminal sequence (with reference aa)
<400> 184<400> 184
Gly Ser Ser Gly Ser Gly Ser Gly Ser Gly Ser Gly Ser ThrGly Ser Ser Gly Ser Gly Ser Gly Ser Gly Ser Gly Ser Thr
1 5 101 5 10
<210> 185<210> 185
<211> 19<211> 19
<212> PRT<212>PRT
<213> искусственная<213> artificial
<220><220>
<223> N-концевая последовательность (с эталонной aa)<223> N-terminal sequence (with reference aa)
<400> 185<400> 185
Ile Ser Gly Thr Tyr Ile Ser Asn Val Asn His Lys Pro Asp Gly GlyIle Ser Gly Thr Tyr Ile Ser Asn Val Asn His Lys Pro Asp Gly Gly
1 5 10 151 5 10 15
Ser Gly GlySer Gly Gly
<210> 186<210> 186
<211> 14<211> 14
<212> PRT<212>PRT
<213> искусственная<213> artificial
<220><220>
<223> C-концевая последовательность (с эталонной aa)<223> C-terminal sequence (with reference aa)
<400> 186<400> 186
Gly Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Lys Val Glu Gly Ser ThrGly Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Lys Val Glu Gly Ser Thr
1 5 101 5 10
<210> 187<210> 187
<211> 19<211> 19
<212> PRT<212>PRT
<213> искусственная<213> artificial
<220><220>
<223> N-концевая последовательность (с эталонной aa)<223> N-terminal sequence (with reference aa)
<400> 187<400> 187
Ile Ser Gly Gly Phe Ile Leu Pro Ile Glu Val Tyr Pro Asp Gly GlyIle Ser Gly Gly Phe Ile Leu Pro Ile Glu Val Tyr Pro Asp Gly Gly
1 5 10 151 5 10 15
Ser Gly GlySer Gly Gly
<210> 188<210> 188
<211> 14<211> 14
<212> PRT<212>PRT
<213> искусственная<213> artificial
<220><220>
<223> C-концевая последовательность (с эталонной aa)<223> C-terminal sequence (with reference aa)
<400> 188<400> 188
Gly Ser Lys Val Arg Phe Asp Tyr Asp Leu Phe Gly Ser ThrGly Ser Lys Val Arg Phe Asp Tyr Asp Leu Phe Gly Ser Thr
1 5 101 5 10
<210> 189<210> 189
<211> 19<211> 19
<212> PRT<212>PRT
<213> искусственная<213> artificial
<220><220>
<223> N-концевая последовательность (с эталонной aa)<223> N-terminal sequence (with reference aa)
<400> 189<400> 189
Ile Ser Gly Ser Val Val Val Thr Ser His Gln Ala Pro Gly Gly GlyIle Ser Gly Ser Val Val Val Thr Ser His Gln Ala Pro Gly Gly Gly
1 5 10 151 5 10 15
Ser Gly GlySer Gly Gly
<210> 190<210> 190
<211> 14<211> 14
<212> PRT<212>PRT
<213> искусственная<213> artificial
<220><220>
<223> C-концевая последовательность (с эталонной aa)<223> C-terminal sequence (with reference aa)
<400> 190<400> 190
Gly Glu Lys Lys Lys Leu Lys Ser Leu Ala Tyr Gly Ser ThrGly Glu Lys Lys Lys Leu Lys Ser Leu Ala Tyr Gly Ser Thr
1 5 101 5 10
<210> 191<210> 191
<211> 14<211> 14
<212> PRT<212>PRT
<213> искусственная<213> artificial
<220><220>
<223> C-концевая последовательность (с эталонной aa)<223> C-terminal sequence (with reference aa)
<400> 191<400> 191
Gly Glu Lys Pro Lys Pro Lys Pro Leu Ala Tyr Gly Ser ThrGly Glu Lys Pro Lys Pro Lys Pro Leu Ala Tyr Gly Ser Thr
1 5 101 5 10
<210> 192<210> 192
<211> 14<211> 14
<212> PRT<212>PRT
<213> искусственная<213> artificial
<220><220>
<223> C-концевая последовательность (с эталонной aa)<223> C-terminal sequence (with reference aa)
<400> 192<400> 192
Gly Ser Gly Ser Gly Ser Gly Ser Gly Ser Gly Gly Ser ThrGly Ser Gly Ser Gly Ser Gly Ser Gly Ser Gly Gly Ser Thr
1 5 101 5 10
<210> 193<210> 193
<211> 19<211> 19
<212> PRT<212>PRT
<213> искусственная<213> artificial
<220><220>
<223> N-концевая последовательность (с эталонной aa)<223> N-terminal sequence (with reference aa)
<400> 193<400> 193
Ile Ser Gly Pro Asn Pro Asn Lys Asn Pro Asn Pro Asn Pro Gly GlyIle Ser Gly Pro Asn Pro Asn Lys Asn Pro Asn Pro Asn Pro Gly Gly
1 5 10 151 5 10 15
Ser Gly GlySer Gly Gly
<210> 194<210> 194
<211> 19<211> 19
<212> PRT<212>PRT
<213> искусственная<213> artificial
<220><220>
<223> N-концевая последовательность (с эталонной aa)<223> N-terminal sequence (with reference aa)
<400> 194<400> 194
Ile Ser Gly Asp Ile Tyr Leu Ala Ile Asn Ile Thr Asn Gly Glu GlyIle Ser Gly Asp Ile Tyr Leu Ala Ile Asn Ile Thr Asn Gly Glu Gly
1 5 10 151 5 10 15
Ser Gly GlySer Gly Gly
<210> 195<210> 195
<211> 18<211> 18
<212> PRT<212>PRT
<213> искусственная<213> artificial
<220><220>
<223> C-концевая последовательность (с эталонной aa)<223> C-terminal sequence (with reference aa)
<400> 195<400> 195
Gly Gly Ser Gly Asp Ile Tyr Leu Ala Ile Asn Ile Thr Asn Gly GluGly Gly Ser Gly Asp Ile Tyr Leu Ala Ile Asn Ile Thr Asn Gly Glu
1 5 10 151 5 10 15
Ser ThrSer Thr
<210> 196<210> 196
<211> 19<211> 19
<212> PRT<212>PRT
<213> искусственная<213> artificial
<220><220>
<223> N-концевая последовательность (с эталонной aa)<223> N-terminal sequence (with reference aa)
<400> 196<400> 196
Ile Ser Gly Ser Ala Thr Lys Ala Val Ser Val Leu Lys Gly Asp GlyIle Ser Gly Ser Ala Thr Lys Ala Val Ser Val Leu Lys Gly Asp Gly
1 5 10 151 5 10 15
Ser Gly GlySer Gly Gly
<210> 197<210> 197
<211> 18<211> 18
<212> PRT<212>PRT
<213> искусственная<213> artificial
<220><220>
<223> C-концевая последовательность (с эталонной aa)<223> C-terminal sequence (with reference aa)
<400> 197<400> 197
Gly Gly Ser Gly Val Gln Gly Ile Ile Asn Phe Glu Gln Lys Gly GlyGly Gly Ser Gly Val Gln Gly Ile Ile Asn Phe Glu Gln Lys Gly Gly
1 5 10 151 5 10 15
Ser ThrSer Thr
<210> 198<210> 198
<211> 20<211> 20
<212> PRT<212>PRT
<213> искусственная<213> artificial
<220><220>
<223> N-концевая последовательность (с эталонной aa)<223> N-terminal sequence (with reference aa)
<400> 198<400> 198
Ile Ser Gly Ser Val Pro Lys Glu Lys Glu Lys Glu Lys Val Ser ThrIle Ser Gly Ser Val Pro Lys Glu Lys Glu Lys Glu Lys Val Ser Thr
1 5 10 151 5 10 15
Ala Val Gly GlyAla Val Gly Gly
2020
<210> 199<210> 199
<211> 13<211> 13
<212> PRT<212>PRT
<213> искусственная<213> artificial
<220><220>
<223> C-концевая последовательность (с эталонной aa)<223> C-terminal sequence (with reference aa)
<400> 199<400> 199
Gly Ser Gly Ser Gly Ser Gly Ser Gly Ser Gly Ser ThrGly Ser Gly Ser Gly Ser Gly Ser Gly Ser Gly Ser Thr
1 5 101 5 10
<210> 200<210> 200
<211> 15<211> 15
<212> PRT<212>PRT
<213> искусственная<213> artificial
<220><220>
<223> C-концевая последовательность (с эталонной aa)<223> C-terminal sequence (with reference aa)
<400> 200<400> 200
Gly Ser Gly Ser Gly Ser Gly Ser Gly Ser Gly Ser Gly Ser ThrGly Ser Gly Ser Gly Ser Gly Ser Gly Ser Gly Ser Gly Ser Thr
1 5 10 151 5 10 15
<210> 201<210> 201
<211> 20<211> 20
<212> PRT<212>PRT
<213> искусственная<213> artificial
<220><220>
<223> N-концевая последовательность (с эталонной aa)<223> N-terminal sequence (with reference aa)
<400> 201<400> 201
Ile Ser Gly Ser Ser Gly Ala Val Val Asn Val Arg Ala Pro Asp GlyIle Ser Gly Ser Ser Gly Ala Val Val Asn Val Arg Ala Pro Asp Gly
1 5 10 151 5 10 15
Gly Ser Gly GlyGly Ser Gly Gly
2020
<210> 202<210> 202
<211> 15<211> 15
<212> PRT<212>PRT
<213> искусственная<213> artificial
<220><220>
<223> C-концевая последовательность (с эталонной aa)<223> C-terminal sequence (with reference aa)
<400> 202<400> 202
Gly Ser Lys Gly Asp Lys Ile Ala Ile Trp Thr Thr Gly Ser ThrGly Ser Lys Gly Asp Lys Ile Ala Ile Trp Thr Thr Gly Ser Thr
1 5 10 151 5 10 15
<210> 203<210> 203
<211> 20<211> 20
<212> PRT<212>PRT
<213> искусственная<213> artificial
<220><220>
<223> N-концевая последовательность (с эталонной aa)<223> N-terminal sequence (with reference aa)
<400> 203<400> 203
Ile Ser Gly Ser Tyr Ala Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Asp GlyIle Ser Gly Ser Tyr Ala Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Asp Gly
1 5 10 151 5 10 15
Gly Ser Gly GlyGly Ser Gly Gly
2020
<210> 204<210> 204
<211> 20<211> 20
<212> PRT<212>PRT
<213> искусственная<213> artificial
<220><220>
<223> N-концевая последовательность (с эталонной aa)<223> N-terminal sequence (with reference aa)
<400> 204<400> 204
Ile Ser Gly Ser Thr Ser Ala Ser Leu Ala Ile Thr Gly Pro Asp GlyIle Ser Gly Ser Thr Ser Ala Ser Leu Ala Ile Thr Gly Pro Asp Gly
1 5 10 151 5 10 15
Gly Ser Gly GlyGly Ser Gly Gly
2020
<210> 205<210> 205
<211> 15<211> 15
<212> PRT<212>PRT
<213> искусственная<213> artificial
<220><220>
<223> C-концевая последовательность (с эталонной aa)<223> C-terminal sequence (with reference aa)
<400> 205<400> 205
Gly Ser Asp Arg Phe Ser Gly Ser Lys Ser Gly Gly Gly Ser ThrGly Ser Asp Arg Phe Ser Gly Ser Lys Ser Gly Gly Gly Ser Thr
1 5 10 151 5 10 15
<210> 206<210> 206
<211> 20<211> 20
<212> PRT<212>PRT
<213> искусственная<213> artificial
<220><220>
<223> N-концевая последовательность (с эталонной aa)<223> N-terminal sequence (with reference aa)
<400> 206<400> 206
Ile Ser Gly Ser Gly Ser Gly Ser Gly Ser Gly Ser Gly Pro Asp GlyIle Ser Gly Ser Gly Ser Gly Ser Gly Ser Gly Ser Gly Pro Asp Gly
1 5 10 151 5 10 15
Gly Ser Gly GlyGly Ser Gly Gly
2020
<210> 207<210> 207
<211> 19<211> 19
<212> PRT<212>PRT
<213> искусственная<213> artificial
<220><220>
<223> N-концевая последовательность (с эталонной aa)<223> N-terminal sequence (with reference aa)
<400> 207<400> 207
Ser Gly Ser Gly Ser Gly Ser Gly Ser Gly Ser Ser Pro Asp Gly GlySer Gly Ser Gly Ser Gly Ser Gly Ser Gly Ser Ser Pro Asp Gly Gly
1 5 10 151 5 10 15
Ser Gly GlySer Gly Gly
<210> 208<210> 208
<211> 15<211> 15
<212> PRT<212>PRT
<213> искусственная<213> artificial
<220><220>
<223> C-концевая последовательность (с эталонной aa)<223> C-terminal sequence (with reference aa)
<400> 208<400> 208
Gly Ser Tyr Ser Gly Ser Gly Ser Gly Ser Gly Ser Gly Ser ThrGly Ser Tyr Ser Gly Ser Gly Ser Gly Ser Gly Ser Gly Ser Thr
1 5 10 151 5 10 15
<210> 209<210> 209
<211> 20<211> 20
<212> PRT<212>PRT
<213> искусственная<213> artificial
<220><220>
<223> N-концевая последовательность (с эталонной aa)<223> N-terminal sequence (with reference aa)
<400> 209<400> 209
Ile Ser Thr Gln Thr Tyr Ile Ser Asn Val Asn His Lys Pro Asp GlyIle Ser Thr Gln Thr Tyr Ile Ser Asn Val Asn His Lys Pro Asp Gly
1 5 10 151 5 10 15
Gly Ser Gly GlyGly Ser Gly Gly
2020
<210> 210<210> 210
<211> 15<211> 15
<212> PRT<212>PRT
<213> искусственная<213> artificial
<220><220>
<223> C-концевая последовательность (с эталонной aa)<223> C-terminal sequence (with reference aa)
<400> 210<400> 210
Gly Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys Ser ThrGly Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys Ser Thr
1 5 10 151 5 10 15
<210> 211<210> 211
<211> 20<211> 20
<212> PRT<212>PRT
<213> искусственная<213> artificial
<220><220>
<223> N-концевая последовательность (с эталонной aa)<223> N-terminal sequence (with reference aa)
<400> 211<400> 211
Ile Ser Gly Ser Thr Tyr Ile Ser Asn Val Asn His Lys Pro Asp GlyIle Ser Gly Ser Thr Tyr Ile Ser Asn Val Asn His Lys Pro Asp Gly
1 5 10 151 5 10 15
Gly Ser Gly GlyGly Ser Gly Gly
2020
<210> 212<210> 212
<211> 15<211> 15
<212> PRT<212>PRT
<213> искусственная<213> artificial
<220><220>
<223> C-концевая последовательность (с эталонной aa)<223> C-terminal sequence (with reference aa)
<400> 212<400> 212
Gly Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Lys Val Glu Gly Gly Ser ThrGly Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Lys Val Glu Gly Gly Ser Thr
1 5 10 151 5 10 15
<210> 213<210> 213
<211> 20<211> 20
<212> PRT<212>PRT
<213> искусственная<213> artificial
<220><220>
<223> N-концевая последовательность (с эталонной aa)<223> N-terminal sequence (with reference aa)
<400> 213<400> 213
Ile Ser Gly Pro Asn Pro Asn Pro Asn Pro Asn Pro Asn Pro Asp GlyIle Ser Gly Pro Asn Pro Asn Pro Asn Pro Asn Pro Asn Pro Asp Gly
1 5 10 151 5 10 15
Gly Ser Gly GlyGly Ser Gly Gly
2020
<210> 214<210> 214
<211> 15<211> 15
<212> PRT<212>PRT
<213> искусственная<213> artificial
<220><220>
<223> C-концевая последовательность (с эталонной aa)<223> C-terminal sequence (with reference aa)
<400> 214<400> 214
Gly Ser Asn Pro Asn Pro Asn Pro Asn Pro Asn Pro Gly Ser ThrGly Ser Asn Pro Asn Pro Asn Pro Asn Pro Asn Pro Gly Ser Thr
1 5 10 151 5 10 15
<210> 215<210> 215
<211> 20<211> 20
<212> PRT<212>PRT
<213> искусственная<213> artificial
<220><220>
<223> N-концевая последовательность (с эталонной aa)<223> N-terminal sequence (with reference aa)
<400> 215<400> 215
Ile Ser Ala Val Gln Val Lys Leu Glu Leu Gly His Arg Pro Asp GlyIle Ser Ala Val Gln Val Lys Leu Glu Leu Gly His Arg Pro Asp Gly
1 5 10 151 5 10 15
Gly Ser Gly GlyGly Ser Gly Gly
2020
<210> 216<210> 216
<211> 15<211> 15
<212> PRT<212>PRT
<213> искусственная<213> artificial
<220><220>
<223> C-концевая последовательность (с эталонной aa)<223> C-terminal sequence (with reference aa)
<400> 216<400> 216
Gly Ser Asn His Leu Arg Ser Glu Lys Leu Thr Phe Asn Ser ThrGly Ser Asn His Leu Arg Ser Glu Lys Leu Thr Phe Asn Ser Thr
1 5 10 151 5 10 15
<210> 217<210> 217
<211> 20<211> 20
<212> PRT<212>PRT
<213> искусственная<213> artificial
<220><220>
<223> N-концевая последовательность (с эталонной aa)<223> N-terminal sequence (with reference aa)
<400> 217<400> 217
Ile Ser Gly Phe Ile Leu Pro Ile Glu Val Tyr Phe Lys Pro Asp GlyIle Ser Gly Phe Ile Leu Pro Ile Glu Val Tyr Phe Lys Pro Asp Gly
1 5 10 151 5 10 15
Gly Ser Gly GlyGly Ser Gly Gly
2020
<210> 218<210> 218
<211> 15<211> 15
<212> PRT<212>PRT
<213> искусственная<213> artificial
<220><220>
<223> C-концевая последовательность (с эталонной aa)<223> C-terminal sequence (with reference aa)
<400> 218<400> 218
Gly Ser Pro Arg Lys Val Arg Phe Asp Tyr Asp Leu Phe Ser ThrGly Ser Pro Arg Lys Val Arg Phe Asp Tyr Asp Leu Phe Ser Thr
1 5 10 151 5 10 15
<210> 219<210> 219
<211> 20<211> 20
<212> PRT<212>PRT
<213> искусственная<213> artificial
<220><220>
<223> N-концевая последовательность (с эталонной aa)<223> N-terminal sequence (with reference aa)
<400> 219<400> 219
Ile Ser Gly Ser Gly Phe Ile Leu Pro Ile Glu Val Tyr Pro Asp GlyIle Ser Gly Ser Gly Phe Ile Leu Pro Ile Glu Val Tyr Pro Asp Gly
1 5 10 151 5 10 15
Gly Ser Gly GlyGly Ser Gly Gly
2020
<210> 220<210> 220
<211> 15<211> 15
<212> PRT<212>PRT
<213> искусственная<213> artificial
<220><220>
<223> C-концевая последовательность (с эталонной aa)<223> C-terminal sequence (with reference aa)
<400> 220<400> 220
Gly Ser Lys Val Arg Phe Asp Tyr Asp Leu Phe Gly Gly Ser ThrGly Ser Lys Val Arg Phe Asp Tyr Asp Leu Phe Gly Gly Ser Thr
1 5 10 151 5 10 15
<210> 221<210> 221
<211> 16<211> 16
<212> PRT<212>PRT
<213> искусственная<213> artificial
<220><220>
<223> C-концевая последовательность (с эталонной aa)<223> C-terminal sequence (with reference aa)
<400> 221<400> 221
Gly Ser Tyr Gly Ser Gly Ser Gly Ser Gly Ser Gly Ser Gly Ser ThrGly Ser Tyr Gly Ser Gly Ser Gly Ser Gly Ser Gly Ser Gly Ser Thr
1 5 10 151 5 10 15
<210> 222<210> 222
<211> 20<211> 20
<212> PRT<212>PRT
<213> искусственная<213> artificial
<220><220>
<223> N-концевая последовательность (с эталонной aa)<223> N-terminal sequence (with reference aa)
<400> 222<400> 222
Ile Ser Asp Arg Ser Ala Leu Leu Lys Ser Lys Leu Arg Ala Leu LeuIle Ser Asp Arg Ser Ala Leu Leu Lys Ser Lys Leu Arg Ala Leu Leu
1 5 10 151 5 10 15
Thr Ala Pro ArgThr Ala Pro Arg
2020
<210> 223<210> 223
<211> 16<211> 16
<212> PRT<212>PRT
<213> искусственная<213> artificial
<220><220>
<223> C-концевая последовательность (с эталонной aa)<223> C-terminal sequence (with reference aa)
<400> 223<400> 223
Gly Ser Asp Arg Ser Ala Leu Leu Lys Ser Lys Leu Arg Ala Ser ThrGly Ser Asp Arg Ser Ala Leu Leu Lys Ser Lys Leu Arg Ala Ser Thr
1 5 10 151 5 10 15
<210> 224<210> 224
<211> 20<211> 20
<212> PRT<212>PRT
<213> искусственная<213> artificial
<220><220>
<223> N-концевая последовательность (с эталонной aa)<223> N-terminal sequence (with reference aa)
<400> 224<400> 224
Ile Ser Asp Arg Ser Ala Leu Leu Lys Ser Lys Leu Arg Ala Leu LeuIle Ser Asp Arg Ser Ala Leu Leu Lys Ser Lys Leu Arg Ala Leu Leu
1 5 10 151 5 10 15
Thr Ala Pro GlyThr Ala Pro Gly
2020
<210> 225<210> 225
<211> 16<211> 16
<212> PRT<212>PRT
<213> искусственная<213> artificial
<220><220>
<223> C-концевая последовательность (с эталонной aa)<223> C-terminal sequence (with reference aa)
<400> 225<400> 225
Gly Gly Ser Gly Ser Gly Ser Gly Ser Gly Ser Gly Ser Gly Ser ThrGly Gly Ser Gly Ser Gly Ser Gly Ser Gly Ser Gly Ser Gly Ser Thr
1 5 10 151 5 10 15
<210> 226<210> 226
<211> 21<211> 21
<212> PRT<212>PRT
<213> искусственная<213> artificial
<220><220>
<223> N-концевая последовательность (с эталонной aa)<223> N-terminal sequence (with reference aa)
<400> 226<400> 226
Ile Ser Gly Ser Ser Asp Lys Thr His Thr Ser Pro Pro Ser Pro AspIle Ser Gly Ser Ser Asp Lys Thr His Thr Ser Pro Pro Ser Pro Asp
1 5 10 151 5 10 15
Gly Gly Ser Gly GlyGly Gly Ser Gly Gly
2020
<210> 227<210> 227
<211> 15<211> 15
<212> PRT<212>PRT
<213> искусственная<213> artificial
<220><220>
<223> C-концевая последовательность (с эталонной aa)<223> C-terminal sequence (with reference aa)
<400> 227<400> 227
Gly Ser Lys Thr His Thr Ser Pro Pro Ser Pro Gly Gly Ser ThrGly Ser Lys Thr His Thr Ser Pro Pro Ser Pro Gly Gly Ser Thr
1 5 10 151 5 10 15
<210> 228<210> 228
<211> 21<211> 21
<212> PRT<212>PRT
<213> искусственная<213> artificial
<220><220>
<223> N-концевая последовательность (с эталонной aa)<223> N-terminal sequence (with reference aa)
<400> 228<400> 228
Ile Ser Gly Ser Tyr Ala Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Ser Pro AspIle Ser Gly Ser Tyr Ala Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Ser Pro Asp
1 5 10 151 5 10 15
Gly Gly Ser Gly GlyGly Gly Ser Gly Gly
2020
<210> 229<210> 229
<211> 16<211> 16
<212> PRT<212>PRT
<213> искусственная<213> artificial
<220><220>
<223> C-концевая последовательность (с эталонной aa)<223> C-terminal sequence (with reference aa)
<400> 229<400> 229
Gly Ser Tyr Ser Ser Tyr Ala Met Ser Trp Val Arg Gly Gly Ser ThrGly Ser Tyr Ser Ser Tyr Ala Met Ser Trp Val Arg Gly Gly Ser Thr
1 5 10 151 5 10 15
<210> 230<210> 230
<211> 16<211> 16
<212> PRT<212>PRT
<213> искусственная<213> artificial
<220><220>
<223> C-концевая последовательность (с эталонной aa)<223> C-terminal sequence (with reference aa)
<400> 230<400> 230
Gly Ser Tyr Ser Ser Tyr Ala Met Ser Trp Val Arg Gln Gly Ser ThrGly Ser Tyr Ser Ser Tyr Ala Met Ser Trp Val Arg Gln Gly Ser Thr
1 5 10 151 5 10 15
<210> 231<210> 231
<211> 21<211> 21
<212> PRT<212>PRT
<213> искусственная<213> artificial
<220><220>
<223> N-концевая последовательность (с эталонной aa)<223> N-terminal sequence (with reference aa)
<400> 231<400> 231
Ile Ser Gly Ser Gly Ser Gly Ser Gly Ser Gly Ser Gly Ser Pro AspIle Ser Gly Ser Gly Ser Gly Ser Gly Ser Gly Ser Gly Ser Pro Asp
1 5 10 151 5 10 15
Gly Gly Ser Gly GlyGly Gly Ser Gly Gly
2020
<210> 232<210> 232
<211> 21<211> 21
<212> PRT<212>PRT
<213> искусственная<213> artificial
<220><220>
<223> N-концевая последовательность (с эталонной aa)<223> N-terminal sequence (with reference aa)
<400> 232<400> 232
Ile Ser Gly Ser Pro Asn Pro Asn Pro Asn Pro Asn Pro Ser Pro AspIle Ser Gly Ser Pro Asn Pro Asn Pro Asn Pro Asn Pro Ser Pro Asp
1 5 10 151 5 10 15
Gly Gly Ser Gly GlyGly Gly Ser Gly Gly
2020
<210> 233<210> 233
<211> 16<211> 16
<212> PRT<212>PRT
<213> искусственная<213> artificial
<220><220>
<223> C-концевая последовательность (с эталонной aa)<223> C-terminal sequence (with reference aa)
<400> 233<400> 233
Gly Ser Tyr Pro Asn Pro Asn Pro Asn Pro Asn Pro Ser Gly Ser ThrGly Ser Tyr Pro Asn Pro Asn Pro Asn Pro Asn Pro Ser Gly Ser Thr
1 5 10 151 5 10 15
<210> 234<210> 234
<211> 21<211> 21
<212> PRT<212>PRT
<213> искусственная<213> artificial
<220><220>
<223> N-концевая последовательность (с эталонной aa)<223> N-terminal sequence (with reference aa)
<400> 234<400> 234
Ile Ser Gly Pro Asn Pro Asn Lys Asn Pro Asn Pro Asn Ser Pro AspIle Ser Gly Pro Asn Pro Asn Lys Asn Pro Asn Pro Asn Ser Pro Asp
1 5 10 151 5 10 15
Gly Gly Ser Gly GlyGly Gly Ser Gly Gly
2020
<210> 235<210> 235
<211> 16<211> 16
<212> PRT<212>PRT
<213> искусственная<213> artificial
<220><220>
<223> C-концевая последовательность (с эталонной aa)<223> C-terminal sequence (with reference aa)
<400> 235<400> 235
Gly Ser Tyr Asn Pro Asn Glu Asn Pro Asn Pro Asn Pro Gly Ser ThrGly Ser Tyr Asn Pro Asn Glu Asn Pro Asn Pro Asn Pro Gly Ser Thr
1 5 10 151 5 10 15
<210> 236<210> 236
<211> 21<211> 21
<212> PRT<212>PRT
<213> искусственная<213> artificial
<220><220>
<223> N-концевая последовательность (с эталонной aa)<223> N-terminal sequence (with reference aa)
<400> 236<400> 236
Ile Ser Gly Pro Asn Pro Asn Pro Asn Pro Asn Pro Asn Ser Pro AspIle Ser Gly Pro Asn Pro Asn Pro Asn Pro Asn Pro Asn Ser Pro Asp
1 5 10 151 5 10 15
Gly Gly Ser Gly GlyGly Gly Ser Gly Gly
2020
<210> 237<210> 237
<211> 16<211> 16
<212> PRT<212>PRT
<213> искусственная<213> artificial
<220><220>
<223> C-концевая последовательность (с эталонной aa)<223> C-terminal sequence (with reference aa)
<400> 237<400> 237
Gly Ser Tyr Asn Pro Asn Pro Asn Pro Asn Pro Asn Pro Gly Ser ThrGly Ser Tyr Asn Pro Asn Pro Asn Pro Asn Pro Asn Pro Gly Ser Thr
1 5 10 151 5 10 15
<210> 238<210> 238
<211> 21<211> 21
<212> PRT<212>PRT
<213> искусственная<213> artificial
<220><220>
<223> N-концевая последовательность (с эталонной aa)<223> N-terminal sequence (with reference aa)
<400> 238<400> 238
Ile Ser Gly Ser Val Val Val Thr Ser His Gln Ala Pro Gly Gly SerIle Ser Gly Ser Val Val Val Thr Ser His Gln Ala Pro Gly Gly Ser
1 5 10 151 5 10 15
Gly Gly Ser Gly GlyGly Gly Ser Gly Gly
2020
<210> 239<210> 239
<211> 21<211> 21
<212> PRT<212>PRT
<213> искусственная<213> artificial
<220><220>
<223> N-концевая последовательность (с эталонной aa)<223> N-terminal sequence (with reference aa)
<400> 239<400> 239
Ile Ser Gly Ser Val Val Tyr Ile Glu Ile Leu Asp Arg His Pro AspIle Ser Gly Ser Val Val Tyr Ile Glu Ile Leu Asp Arg His Pro Asp
1 5 10 151 5 10 15
Gly Gly Ser Gly GlyGly Gly Ser Gly Gly
2020
<210> 240<210> 240
<211> 16<211> 16
<212> PRT<212>PRT
<213> искусственная<213> artificial
<220><220>
<223> C-концевая последовательность (с эталонной aa)<223> C-terminal sequence (with reference aa)
<400> 240<400> 240
Gly Ser Gly Arg Glu Val Pro Ile Ser Asn Gly Ser Gly Gly Ser ThrGly Ser Gly Arg Glu Val Pro Ile Ser Asn Gly Ser Gly Gly Ser Thr
1 5 10 151 5 10 15
<210> 241<210> 241
<211> 21<211> 21
<212> PRT<212>PRT
<213> искусственная<213> artificial
<220><220>
<223> N-концевая последовательность (с эталонной aa)<223> N-terminal sequence (with reference aa)
<400> 241<400> 241
Ile Ser Gly Ala Val Val Tyr Ile Glu Ile Leu Asp Arg His Pro AspIle Ser Gly Ala Val Val Tyr Ile Glu Ile Leu Asp Arg His Pro Asp
1 5 10 151 5 10 15
Gly Gly Ser Gly GlyGly Gly Ser Gly Gly
2020
<210> 242<210> 242
<211> 21<211> 21
<212> PRT<212>PRT
<213> искусственная<213> artificial
<220><220>
<223> N-концевая последовательность (с эталонной aa)<223> N-terminal sequence (with reference aa)
<400> 242<400> 242
Ile Ser Pro Ala Val Val Tyr Ile Glu Ile Leu Asp Arg His Pro AspIle Ser Pro Ala Val Val Tyr Ile Glu Ile Leu Asp Arg His Pro Asp
1 5 10 151 5 10 15
Gly Gly Ser Gly GlyGly Gly Ser Gly Gly
2020
<210> 243<210> 243
<211> 16<211> 16
<212> PRT<212>PRT
<213> искусственная<213> artificial
<220><220>
<223> C-концевая последовательность (с эталонной aa)<223> C-terminal sequence (with reference aa)
<400> 243<400> 243
Gly Ser Gly Arg Glu Val Pro Ile Ser Asn Gly Ser Gly Phe Ser ThrGly Ser Gly Arg Glu Val Pro Ile Ser Asn Gly Ser Gly Phe Ser Thr
1 5 10 151 5 10 15
<210> 244<210> 244
<211> 11<211> 11
<212> PRT<212>PRT
<213> искусственная<213> artificial
<220><220>
<223> N-концевая последовательность (с эталонной aa)<223> N-terminal sequence (with reference aa)
<400> 244<400> 244
Cys Ala Lys Ser Pro Asp Gly Gly Ser Gly GlyCys Ala Lys Ser Pro Asp Gly Gly Ser Gly Gly
1 5 101 5 10
<210> 245<210> 245
<211> 4<211> 4
<212> PRT<212>PRT
<213> искусственная<213> artificial
<220><220>
<223> C-концевая последовательность (с эталонной aa)<223> C-terminal sequence (with reference aa)
<400> 245<400> 245
Gly Ser Tyr GlyGly Ser Tyr Gly
11
<210> 246<210> 246
<211> 9<211> 9
<212> PRT<212>PRT
<213> искусственная<213> artificial
<220><220>
<223> C-концевая последовательность (с эталонной aa)<223> C-terminal sequence (with reference aa)
<400> 246<400> 246
Gly Ser Tyr Gln His Trp Gly Gln GlyGly Ser Tyr Gln His Trp Gly Gln Gly
1 515
<210> 247<210> 247
<211> 13<211> 13
<212> PRT<212>PRT
<213> искусственная<213> artificial
<220><220>
<223> N-концевая последовательность (с эталонной aa)<223> N-terminal sequence (with reference aa)
<400> 247<400> 247
Cys Ala Lys Val His Gln Glu Thr Gly Gly Ser Gly GlyCys Ala Lys Val His Gln Glu Thr Gly Gly Ser Gly Gly
1 5 101 5 10
<210> 248<210> 248
<211> 11<211> 11
<212> PRT<212>PRT
<213> искусственная<213> artificial
<220><220>
<223> C-концевая последовательность (с эталонной aa)<223> C-terminal sequence (with reference aa)
<400> 248<400> 248
Gly Ser Trp His Val Gln His Trp Gly Gln GlyGly Ser Trp His Val Gln His Trp Gly Gln Gly
1 5 101 5 10
<210> 249<210> 249
<211> 15<211> 15
<212> PRT<212>PRT
<213> искусственная<213> artificial
<220><220>
<223> N-концевая последовательность (с эталонной aa)<223> N-terminal sequence (with reference aa)
<400> 249<400> 249
Cys Ala Lys Val His Gln Glu Thr Pro Asp Gly Gly Ser Gly GlyCys Ala Lys Val His Gln Glu Thr Pro Asp Gly Gly Ser Gly Gly
1 5 10 151 5 10 15
<210> 250<210> 250
<211> 13<211> 13
<212> PRT<212>PRT
<213> искусственная<213> artificial
<220><220>
<223> C-концевая последовательность (с эталонной aa)<223> C-terminal sequence (with reference aa)
<400> 250<400> 250
Gly Ser Tyr Glu Trp His Val Gln His Trp Gly Gln GlyGly Ser Tyr Glu Trp His Val Gln His Trp Gly Gln Gly
1 5 101 5 10
<210> 251<210> 251
<211> 16<211> 16
<212> PRT<212>PRT
<213> искусственная<213> artificial
<220><220>
<223> N-концевая последовательность (с эталонной aa)<223> N-terminal sequence (with reference aa)
<400> 251<400> 251
Cys Thr Ser Val His Gln Glu Thr Lys Lys Tyr Gln Ser Ser Gly GlyCys Thr Ser Val His Gln Glu Thr Lys Lys Tyr Gln Ser Ser Gly Gly
1 5 10 151 5 10 15
<210> 252<210> 252
<211> 19<211> 19
<212> PRT<212>PRT
<213> искусственная<213> artificial
<220><220>
<223> C-концевая последовательность (с эталонной aa)<223> C-terminal sequence (with reference aa)
<400> 252<400> 252
Gly Ser Tyr Ser Tyr Thr Tyr Asn Tyr Glu Trp His Val Asp Val TrpGly Ser Tyr Ser Tyr Thr Tyr Asn Tyr Glu Trp His Val Asp Val Trp
1 5 10 151 5 10 15
Gly Gln GlyGly Gln Gly
<210> 253<210> 253
<211> 17<211> 17
<212> PRT<212>PRT
<213> искусственная<213> artificial
<220><220>
<223> N-концевая последовательность (с эталонной aa)<223> N-terminal sequence (with reference aa)
<400> 253<400> 253
Cys Thr Ser Val His Gln Glu Thr Ser Ser Pro Asp Gly Gly Ser GlyCys Thr Ser Val His Gln Glu Thr Ser Ser Pro Asp Gly Gly Ser Gly
1 5 10 151 5 10 15
GlyGly
<210> 254<210> 254
<211> 15<211> 15
<212> PRT<212>PRT
<213> искусственная<213> artificial
<220><220>
<223> C-концевая последовательность (с эталонной aa)<223> C-terminal sequence (with reference aa)
<400> 254<400> 254
Gly Ser Tyr Ser Tyr Glu Trp His Val Asp Val Trp Gly Gln GlyGly Ser Tyr Ser Tyr Glu Trp His Val Asp Val Trp Gly Gln Gly
1 5 10 151 5 10 15
<210> 255<210> 255
<211> 17<211> 17
<212> PRT<212>PRT
<213> искусственная<213> artificial
<220><220>
<223> N-концевая последовательность (с эталонной aa)<223> N-terminal sequence (with reference aa)
<400> 255<400> 255
Cys Ala Lys Thr His Thr Ser Pro Pro Ser Pro Asp Gly Gly Ser GlyCys Ala Lys Thr His Thr Ser Pro Pro Ser Pro Asp Gly Gly Ser Gly
1 5 10 151 5 10 15
GlyGly
<210> 256<210> 256
<211> 15<211> 15
<212> PRT<212>PRT
<213> искусственная<213> artificial
<220><220>
<223> C-концевая последовательность (с эталонной aa)<223> C-terminal sequence (with reference aa)
<400> 256<400> 256
Gly Ser Ser Pro Pro Ser Pro Tyr Phe Gln His Trp Gly Gln GlyGly Ser Ser Pro Pro Ser Pro Tyr Phe Gln His Trp Gly Gln Gly
1 5 10 151 5 10 15
<210> 257<210> 257
<211> 18<211> 18
<212> PRT<212>PRT
<213> искусственная<213> artificial
<220><220>
<223> N-концевая последовательность (с эталонной aa)<223> N-terminal sequence (with reference aa)
<400> 257<400> 257
Cys Thr Ser Val His Gln Glu Thr Lys Ser Ser Pro Asp Gly Gly SerCys Thr Ser Val His Gln Glu Thr Lys Ser Ser Pro Asp Gly Gly Ser
1 5 10 151 5 10 15
Gly GlyGly Gly
<210> 258<210> 258
<211> 16<211> 16
<212> PRT<212>PRT
<213> искусственная<213> artificial
<220><220>
<223> C-концевая последовательность (с эталонной aa)<223> C-terminal sequence (with reference aa)
<400> 258<400> 258
Gly Ser Tyr Ser Asn Tyr Glu Trp His Val Asp Val Trp Gly Gln GlyGly Ser Tyr Ser Asn Tyr Glu Trp His Val Asp Val Trp Gly Gln Gly
1 5 10 151 5 10 15
<210> 259<210> 259
<211> 18<211> 18
<212> PRT<212>PRT
<213> искусственная<213> artificial
<220><220>
<223> N-концевая последовательность (с эталонной aa)<223> N-terminal sequence (with reference aa)
<400> 259<400> 259
Cys Thr Ser Val His Gln Glu Thr Lys Lys Tyr Gln Ser Ser Pro AspCys Thr Ser Val His Gln Glu Thr Lys Lys Tyr Gln Ser Ser Pro Asp
1 5 10 151 5 10 15
Gly GlyGly Gly
<210> 260<210> 260
<211> 19<211> 19
<212> PRT<212>PRT
<213> искусственная<213> artificial
<220><220>
<223> N-концевая последовательность (с эталонной aa)<223> N-terminal sequence (with reference aa)
<400> 260<400> 260
Cys Thr Ser Val His Gln Glu Thr Lys Lys Ser Ser Pro Asp Gly GlyCys Thr Ser Val His Gln Glu Thr Lys Lys Ser Ser Pro Asp Gly Gly
1 5 10 151 5 10 15
Ser Gly GlySer Gly Gly
<210> 261<210> 261
<211> 17<211> 17
<212> PRT<212>PRT
<213> искусственная<213> artificial
<220><220>
<223> C-концевая последовательность (с эталонной aa)<223> C-terminal sequence (with reference aa)
<400> 261<400> 261
Gly Ser Tyr Ser Tyr Asn Tyr Glu Trp His Val Asp Val Trp Gly GlnGly Ser Tyr Ser Tyr Asn Tyr Glu Trp His Val Asp Val Trp Gly Gln
1 5 10 151 5 10 15
GlyGly
<210> 262<210> 262
<211> 19<211> 19
<212> PRT<212>PRT
<213> искусственная<213> artificial
<220><220>
<223> N-концевая последовательность (с эталонной aa)<223> N-terminal sequence (with reference aa)
<400> 262<400> 262
Cys Thr Ser Val His Gln Glu Thr Lys Lys Tyr Gln Ser Ser Gly GlyCys Thr Ser Val His Gln Glu Thr Lys Lys Tyr Gln Ser Ser Gly Gly
1 5 10 151 5 10 15
Ser Gly GlySer Gly Gly
<210> 263<210> 263
<211> 20<211> 20
<212> PRT<212>PRT
<213> искусственная<213> artificial
<220><220>
<223> N-концевая последовательность (с эталонной aa)<223> N-terminal sequence (with reference aa)
<400> 263<400> 263
Cys Thr Ser Val His Gln Glu Thr Lys Lys Gln Ser Ser Pro Asp GlyCys Thr Ser Val His Gln Glu Thr Lys Lys Gln Ser Ser Pro Asp Gly
1 5 10 151 5 10 15
Gly Ser Gly GlyGly Ser Gly Gly
2020
<210> 264<210> 264
<211> 18<211> 18
<212> PRT<212>PRT
<213> искусственная<213> artificial
<220><220>
<223> C-концевая последовательность (с эталонной aa)<223> C-terminal sequence (with reference aa)
<400> 264<400> 264
Gly Ser Tyr Ser Tyr Tyr Asn Tyr Glu Trp His Val Asp Val Trp GlyGly Ser Tyr Ser Tyr Tyr Asn Tyr Glu Trp His Val Asp Val Trp Gly
1 5 10 151 5 10 15
Gln GlyGln Gly
<210> 265<210> 265
<211> 20<211> 20
<212> PRT<212>PRT
<213> искусственная<213> artificial
<220><220>
<223> N-концевая последовательность (с эталонной aa)<223> N-terminal sequence (with reference aa)
<400> 265<400> 265
Cys Ala Lys Val His Pro Asn Pro Asn Pro Asn Pro Asn Pro Asp GlyCys Ala Lys Val His Pro Asn Pro Asn Pro Asn Pro Asn Pro Asp Gly
1 5 10 151 5 10 15
Gly Ser Gly GlyGly Ser Gly Gly
2020
<210> 266<210> 266
<211> 18<211> 18
<212> PRT<212>PRT
<213> искусственная<213> artificial
<220><220>
<223> C-концевая последовательность (с эталонной aa)<223> C-terminal sequence (with reference aa)
<400> 266<400> 266
Gly Ser Asn Pro Asn Pro Asn Pro Asn Pro His Val Asp Val Trp GlyGly Ser Asn Pro Asn Pro Asn Pro Asn Pro His Val Asp Val Trp Gly
1 5 10 151 5 10 15
Gln GlyGln Gly
<210> 267<210> 267
<211> 20<211> 20
<212> PRT<212>PRT
<213> искусственная<213> artificial
<220><220>
<223> N-концевая последовательность (с эталонной aa)<223> N-terminal sequence (with reference aa)
<400> 267<400> 267
Cys Thr Ser Val His Gln Glu Thr Lys Lys Tyr Gln Ser Ser Pro AspCys Thr Ser Val His Gln Glu Thr Lys Lys Tyr Gln Ser Ser Pro Asp
1 5 10 151 5 10 15
Gly Gly Ser GlyGly Gly Ser Gly
2020
<210> 268<210> 268
<211> 21<211> 21
<212> PRT<212>PRT
<213> искусственная<213> artificial
<220><220>
<223> N-концевая последовательность (с эталонной aa)<223> N-terminal sequence (with reference aa)
<400> 268<400> 268
Cys Thr Ser Val His Gln Glu Thr Lys Lys Tyr Gln Ser Ser Pro AspCys Thr Ser Val His Gln Glu Thr Lys Lys Tyr Gln Ser Ser Pro Asp
1 5 10 151 5 10 15
Gly Gly Ser Gly GlyGly Gly Ser Gly Gly
2020
<210> 269<210> 269
<211> 21<211> 21
<212> PRT<212>PRT
<213> искусственная<213> artificial
<220><220>
<223> N-концевая последовательность (с эталонной aa)<223> N-terminal sequence (with reference aa)
<400> 269<400> 269
Cys Ala Lys Leu Thr Val Val Val Thr Ser His Gln Ala Pro Gly GluCys Ala Lys Leu Thr Val Val Val Thr Ser His Gln Ala Pro Gly Glu
1 5 10 151 5 10 15
Gly Gly Ser Gly GlyGly Gly Ser Gly Gly
2020
<210> 270<210> 270
<211> 18<211> 18
<212> PRT<212>PRT
<213> искусственная<213> artificial
<220><220>
<223> C-концевая последовательность (с эталонной aa)<223> C-terminal sequence (with reference aa)
<400> 270<400> 270
Gly Glu Lys Lys Lys Leu Lys Ser Leu Ala Tyr Phe Gln His Trp GlyGly Glu Lys Lys Lys Leu Lys Ser Leu Ala Tyr Phe Gln His Trp Gly
1 5 10 151 5 10 15
Gln GlyGln Gly
<210> 271<210> 271
<211> 21<211> 21
<212> PRT<212>PRT
<213> искусственная<213> artificial
<220><220>
<223> N-концевая последовательность (с эталонной aa)<223> N-terminal sequence (with reference aa)
<400> 271<400> 271
Cys Ala Lys Ser Ser Asp Lys Thr His Thr Ser Pro Pro Ser Pro AspCys Ala Lys Ser Ser Asp Lys Thr His Thr Ser Pro Pro Ser Pro Asp
1 5 10 151 5 10 15
Gly Gly Ser Gly GlyGly Gly Ser Gly Gly
2020
<210> 272<210> 272
<211> 19<211> 19
<212> PRT<212>PRT
<213> искусственная<213> artificial
<220><220>
<223> C-концевая последовательность (с эталонной aa)<223> C-terminal sequence (with reference aa)
<400> 272<400> 272
Gly Ser Lys Thr His Thr Ser Pro Pro Ser Pro Tyr Phe Gln His TrpGly Ser Lys Thr His Thr Ser Pro Pro Ser Pro Tyr Phe Gln His Trp
1 5 10 151 5 10 15
Gly Gln GlyGly Gln Gly
<210> 273<210> 273
<211> 19<211> 19
<212> PRT<212>PRT
<213> искусственная<213> artificial
<220><220>
<223> N-концевая последовательность (с эталонной aa)<223> N-terminal sequence (with reference aa)
<400> 273<400> 273
Cys Ala Lys Val Glu Thr Lys Lys Tyr Gln Ser Ser Pro Asp Gly GlyCys Ala Lys Val Glu Thr Lys Lys Tyr Gln Ser Ser Pro Asp Gly Gly
1 5 10 151 5 10 15
Ser Gly GlySer Gly Gly
<210> 274<210> 274
<211> 17<211> 17
<212> PRT<212>PRT
<213> искусственная<213> artificial
<220><220>
<223> C-концевая последовательность (с эталонной aa)<223> C-terminal sequence (with reference aa)
<400> 274<400> 274
Gly Ser Tyr Ser Tyr Thr Tyr Asn Tyr Glu Val Gln His Trp Gly GlnGly Ser Tyr Ser Tyr Thr Tyr Asn Tyr Glu Val Gln His Trp Gly Gln
1 5 10 151 5 10 15
GlyGly
<210> 275<210> 275
<211> 19<211> 19
<212> PRT<212>PRT
<213> искусственная<213> artificial
<220><220>
<223> N-концевая последовательность (с эталонной aa)<223> N-terminal sequence (with reference aa)
<400> 275<400> 275
Cys Ala Lys Val His Thr Lys Lys Tyr Gln Ser Ser Pro Asp Gly GlyCys Ala Lys Val His Thr Lys Lys Tyr Gln Ser Ser Pro Asp Gly Gly
1 5 10 151 5 10 15
Ser Gly GlySer Gly Gly
<210> 276<210> 276
<211> 17<211> 17
<212> PRT<212>PRT
<213> искусственная<213> artificial
<220><220>
<223> C-концевая последовательность (с эталонной aa)<223> C-terminal sequence (with reference aa)
<400> 276<400> 276
Gly Ser Tyr Ser Tyr Thr Tyr Asn Tyr His Val Gln His Trp Gly GlnGly Ser Tyr Ser Tyr Thr Tyr Asn Tyr His Val Gln His Trp Gly Gln
1 5 10 151 5 10 15
GlyGly
<210> 277<210> 277
<211> 21<211> 21
<212> PRT<212>PRT
<213> искусственная<213> artificial
<220><220>
<223> N-концевая последовательность (с эталонной aa)<223> N-terminal sequence (with reference aa)
<400> 277<400> 277
Cys Ala Lys Leu Thr Val Glu Thr Lys Lys Tyr Gln Ser Ser Pro AspCys Ala Lys Leu Thr Val Glu Thr Lys Lys Tyr Gln Ser Ser Pro Asp
1 5 10 151 5 10 15
Gly Gly Ser Gly GlyGly Gly Ser Gly Gly
2020
<210> 278<210> 278
<211> 19<211> 19
<212> PRT<212>PRT
<213> искусственная<213> artificial
<220><220>
<223> C-концевая последовательность (с эталонной aa)<223> C-terminal sequence (with reference aa)
<400> 278<400> 278
Gly Ser Tyr Ser Tyr Thr Tyr Asn Tyr Glu Trp His Val Gln His TrpGly Ser Tyr Ser Tyr Thr Tyr Asn Tyr Glu Trp His Val Gln His Trp
1 5 10 151 5 10 15
Gly Gln GlyGly Gln Gly
<210> 279<210> 279
<211> 21<211> 21
<212> PRT<212>PRT
<213> искусственная<213> artificial
<220><220>
<223> N-концевая последовательность (с эталонной aa)<223> N-terminal sequence (with reference aa)
<400> 279<400> 279
Cys Ala Lys Leu Thr Ala Glu Thr Lys Lys Tyr Gln Ser Ser Pro AspCys Ala Lys Leu Thr Ala Glu Thr Lys Lys Tyr Gln Ser Ser Pro Asp
1 5 10 151 5 10 15
Gly Gly Ser Gly GlyGly Gly Ser Gly Gly
2020
<210> 280<210> 280
<211> 19<211> 19
<212> PRT<212>PRT
<213> искусственная<213> artificial
<220><220>
<223> C-концевая последовательность (с эталонной aa)<223> C-terminal sequence (with reference aa)
<400> 280<400> 280
Gly Ser Tyr Ser Tyr Thr Tyr Asn Tyr Glu Asn Tyr Phe Gln His TrpGly Ser Tyr Ser Tyr Thr Tyr Asn Tyr Glu Asn Tyr Phe Gln His Trp
1 5 10 151 5 10 15
Gly Gln GlyGly Gln Gly
<210> 281<210> 281
<211> 21<211> 21
<212> PRT<212>PRT
<213> искусственная<213> artificial
<220><220>
<223> N-концевая последовательность (с эталонной aa)<223> N-terminal sequence (with reference aa)
<400> 281<400> 281
Cys Ala Lys Gly Ile Thr Gly Thr Lys Lys Tyr Gln Ser Ser Pro AspCys Ala Lys Gly Ile Thr Gly Thr Lys Lys Tyr Gln Ser Ser Pro Asp
1 5 10 151 5 10 15
Gly Gly Ser Gly GlyGly Gly Ser Gly Gly
2020
<210> 282<210> 282
<211> 19<211> 19
<212> PRT<212>PRT
<213> искусственная<213> artificial
<220><220>
<223> C-концевая последовательность (с эталонной aa)<223> C-terminal sequence (with reference aa)
<400> 282<400> 282
Gly Ser Tyr Ser Tyr Thr Tyr Asn Tyr Ala Glu Tyr Phe Gln His TrpGly Ser Tyr Ser Tyr Thr Tyr Asn Tyr Ala Glu Tyr Phe Gln His Trp
1 5 10 151 5 10 15
Gly Gln GlyGly Gln Gly
<210> 283<210> 283
<211> 19<211> 19
<212> PRT<212>PRT
<213> искусственная<213> artificial
<220><220>
<223> C-концевая последовательность (с эталонной aa)<223> C-terminal sequence (with reference aa)
<400> 283<400> 283
Gly Ser Tyr Asp Tyr Val Trp Gly Ser Tyr Ala Tyr Phe Gln His TrpGly Ser Tyr Asp Tyr Val Trp Gly Ser Tyr Ala Tyr Phe Gln His Trp
1 5 10 151 5 10 15
Gly Gln GlyGly Gln Gly
<210> 284<210> 284
<211> 21<211> 21
<212> PRT<212>PRT
<213> искусственная<213> artificial
<220><220>
<223> N-концевая последовательность (с эталонной aa)<223> N-terminal sequence (with reference aa)
<400> 284<400> 284
Cys Ala Lys Leu Thr Ser Val Val Val Thr Ser His Gln Ala Pro GlyCys Ala Lys Leu Thr Ser Val Val Val Thr Ser His Gln Ala Pro Gly
1 5 10 151 5 10 15
Gly Gly Ser Gly GlyGly Gly Ser Gly Gly
2020
<210> 285<210> 285
<211> 19<211> 19
<212> PRT<212>PRT
<213> искусственная<213> artificial
<220><220>
<223> C-концевая последовательность (с эталонной aa)<223> C-terminal sequence (with reference aa)
<400> 285<400> 285
Gly Glu Lys Lys Lys Leu Lys Ser Leu Ala Tyr Tyr Phe Gln His TrpGly Glu Lys Lys Lys Leu Lys Ser Leu Ala Tyr Tyr Phe Gln His Trp
1 5 10 151 5 10 15
Gly Gln GlyGly Gln Gly
<210> 286<210> 286
<211> 21<211> 21
<212> PRT<212>PRT
<213> искусственная<213> artificial
<220><220>
<223> N-концевая последовательность (с эталонной aa)<223> N-terminal sequence (with reference aa)
<400> 286<400> 286
Cys Ala Lys Val His Pro Asn Pro Asn Pro Asn Pro Asn Ser Pro AspCys Ala Lys Val His Pro Asn Pro Asn Pro Asn Pro Asn Ser Pro Asp
1 5 10 151 5 10 15
Gly Gly Ser Gly GlyGly Gly Ser Gly Gly
2020
<210> 287<210> 287
<211> 19<211> 19
<212> PRT<212>PRT
<213> искусственная<213> artificial
<220><220>
<223> C-концевая последовательность (с эталонной aa)<223> C-terminal sequence (with reference aa)
<400> 287<400> 287
Gly Ser Tyr Asn Pro Asn Pro Asn Pro Asn Pro His Val Asp Val TrpGly Ser Tyr Asn Pro Asn Pro Asn Pro Asn Pro His Val Asp Val Trp
1 5 10 151 5 10 15
Gly Gln GlyGly Gln Gly
<210> 288<210> 288
<211> 21<211> 21
<212> PRT<212>PRT
<213> искусственная<213> artificial
<220><220>
<223> N-концевая последовательность (с эталонной aa)<223> N-terminal sequence (with reference aa)
<400> 288<400> 288
Cys Ala Lys Leu Thr Gln Val Lys Leu Glu Leu Gly His Arg Pro AspCys Ala Lys Leu Thr Gln Val Lys Leu Glu Leu Gly His Arg Pro Asp
1 5 10 151 5 10 15
Gly Gly Ser Gly GlyGly Gly Ser Gly Gly
2020
<210> 289<210> 289
<211> 19<211> 19
<212> PRT<212>PRT
<213> искусственная<213> artificial
<220><220>
<223> C-концевая последовательность (с эталонной aa)<223> C-terminal sequence (with reference aa)
<400> 289<400> 289
Gly Ser Asn His Leu Arg Ser Glu Lys Leu Thr Tyr Phe Gln His TrpGly Ser Asn His Leu Arg Ser Glu Lys Leu Thr Tyr Phe Gln His Trp
1 5 10 151 5 10 15
Gly Gln GlyGly Gln Gly
<210> 290<210> 290
<211> 21<211> 21
<212> PRT<212>PRT
<213> искусственная<213> artificial
<220><220>
<223> N-концевая последовательность (с эталонной aa)<223> N-terminal sequence (with reference aa)
<400> 290<400> 290
Cys Ala Lys Val His Gln Glu Thr Lys Lys Tyr Gln Ser Ser Pro AspCys Ala Lys Val His Gln Glu Thr Lys Lys Tyr Gln Ser Ser Pro Asp
1 5 10 151 5 10 15
Gly Gly Ser Gly GlyGly Gly Ser Gly Gly
2020
<210> 291<210> 291
<211> 21<211> 21
<212> PRT<212>PRT
<213> искусственная<213> artificial
<220><220>
<223> N-концевая последовательность (с эталонной aa)<223> N-terminal sequence (with reference aa)
<400> 291<400> 291
Cys Ala Lys Thr Gln Thr Tyr Ile Ser Asn Val Asn His Lys Pro AspCys Ala Lys Thr Gln Thr Tyr Ile Ser Asn Val Asn His Lys Pro Asp
1 5 10 151 5 10 15
Gly Gly Ser Gly GlyGly Gly Ser Gly Gly
2020
<210> 292<210> 292
<211> 19<211> 19
<212> PRT<212>PRT
<213> искусственная<213> artificial
<220><220>
<223> C-концевая последовательность (с эталонной aa)<223> C-terminal sequence (with reference aa)
<400> 292<400> 292
Gly Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Lys Ala Glu Tyr Phe Gln His TrpGly Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Lys Ala Glu Tyr Phe Gln His Trp
1 5 10 151 5 10 15
Gly Gln GlyGly Gln Gly
<210> 293<210> 293
<211> 20<211> 20
<212> PRT<212>PRT
<213> искусственная<213> artificial
<220><220>
<223> C-концевая последовательность (с эталонной aa)<223> C-terminal sequence (with reference aa)
<400> 293<400> 293
Gly Ser Tyr Ser Tyr Thr Thr Tyr Asn Tyr Glu Trp His Val Asp ValGly Ser Tyr Ser Tyr Thr Thr Tyr Asn Tyr Glu Trp His Val Asp Val
1 5 10 151 5 10 15
Trp Gly Gln GlyTrp Gly Gln Gly
2020
<210> 294<210> 294
<211> 22<211> 22
<212> PRT<212>PRT
<213> искусственная<213> artificial
<220><220>
<223> N-концевая последовательность (с эталонной aa)<223> N-terminal sequence (with reference aa)
<400> 294<400> 294
Cys Ala Thr Ser Val His Gln Glu Thr Lys Lys Tyr Gln Ser Ser ProCys Ala Thr Ser Val His Gln Glu Thr Lys Lys Tyr Gln Ser Ser Pro
1 5 10 151 5 10 15
Asp Gly Gly Ser Gly GlyAsp Gly Gly Ser Gly Gly
2020
<210> 295<210> 295
<211> 20<211> 20
<212> PRT<212>PRT
<213> искусственная<213> artificial
<220><220>
<223> C-концевая последовательность (с эталонной aa)<223> C-terminal sequence (with reference aa)
<400> 295<400> 295
Gly Ser Tyr Ser Tyr Thr Tyr Asn Tyr Glu Trp His Val Asp Val HisGly Ser Tyr Ser Tyr Thr Tyr Asn Tyr Glu Trp His Val Asp Val His
1 5 10 151 5 10 15
Trp Gly Gln GlyTrp Gly Gln Gly
2020
<210> 296<210> 296
<211> 23<211> 23
<212> PRT<212>PRT
<213> искусственная<213> artificial
<220><220>
<223> N-концевая последовательность (с эталонной aa)<223> N-terminal sequence (with reference aa)
<400> 296<400> 296
Cys Ala Lys Leu Thr Ala Glu Glu Trp Lys Lys Lys Tyr Glu Lys GluCys Ala Lys Leu Thr Ala Glu Glu Trp Lys Lys Lys Tyr Glu Lys Glu
1 5 10 151 5 10 15
Lys Glu Lys Asn Lys Gly SerLys Glu Lys Asn Lys Gly Ser
2020
<210> 297<210> 297
<211> 21<211> 21
<212> PRT<212>PRT
<213> искусственная<213> artificial
<220><220>
<223> C-концевая последовательность (с эталонной aa)<223> C-terminal sequence (with reference aa)
<400> 297<400> 297
Gly Gly Ser Gly Gly Ser Gly Gly Ser Gly Gly Ala Glu Tyr Phe GlnGly Gly Ser Gly Gly Ser Gly Gly Ser Gly Gly Ala Glu Tyr Phe Gln
1 5 10 151 5 10 15
His Trp Gly Gln GlyHis Trp Gly Gln Gly
2020
<210> 298<210> 298
<211> 23<211> 23
<212> PRT<212>PRT
<213> искусственная<213> artificial
<220><220>
<223> N-концевая последовательность (с эталонной aa)<223> N-terminal sequence (with reference aa)
<400> 298<400> 298
Cys Ala Asp Ser Ser Asp Arg Ser Ala Leu Leu Lys Ser Lys Leu ArgCys Ala Asp Ser Ser Asp Arg Ser Ala Leu Leu Lys Ser Lys Leu Arg
1 5 10 151 5 10 15
Ala Leu Leu Thr Ala Pro ArgAla Leu Leu Thr Ala Pro Arg
2020
<210> 299<210> 299
<211> 21<211> 21
<212> PRT<212>PRT
<213> искусственная<213> artificial
<220><220>
<223> C-концевая последовательность (с эталонной aa)<223> C-terminal sequence (with reference aa)
<400> 299<400> 299
Gly Ser Asn His Leu Arg Ser Glu Lys Leu Thr Phe Asn Tyr Phe GlnGly Ser Asn His Leu Arg Ser Glu Lys Leu Thr Phe Asn Tyr Phe Gln
1 5 10 151 5 10 15
His Trp Gly Gln GlyHis Trp Gly Gln Gly
2020
<210> 300<210> 300
<211> 23<211> 23
<212> PRT<212>PRT
<213> искусственная<213> artificial
<220><220>
<223> N-концевая последовательность (с эталонной aa)<223> N-terminal sequence (with reference aa)
<400> 300<400> 300
Cys Thr Ser Val His Gln Glu Thr Lys Lys Tyr Gln Tyr Gln Ser SerCys Thr Ser Val His Gln Glu Thr Lys Lys Tyr Gln Tyr Gln Ser Ser
1 5 10 151 5 10 15
Pro Asp Gly Gly Ser Gly GlyPro Asp Gly Gly Ser Gly Gly
2020
<210> 301<210> 301
<211> 21<211> 21
<212> PRT<212>PRT
<213> искусственная<213> artificial
<220><220>
<223> C-концевая последовательность (с эталонной aa)<223> C-terminal sequence (with reference aa)
<400> 301<400> 301
Gly Ser Tyr Ser Tyr Thr Tyr Thr Tyr Asn Tyr Glu Trp His Val AspGly Ser Tyr Ser Tyr Thr Tyr Thr Tyr Asn Tyr Glu Trp His Val Asp
1 5 10 151 5 10 15
Val Trp Gly Gln GlyVal Trp Gly Gln Gly
2020
<210> 302<210> 302
<211> 23<211> 23
<212> PRT<212>PRT
<213> искусственная<213> artificial
<220><220>
<223> N-концевая последовательность (с эталонной aa)<223> N-terminal sequence (with reference aa)
<400> 302<400> 302
Cys Ala Lys Leu Thr Asp Arg Ser Ala Leu Leu Lys Ser Lys Leu ArgCys Ala Lys Leu Thr Asp Arg Ser Ala Leu Leu Lys Ser Lys Leu Arg
1 5 10 151 5 10 15
Ala Leu Leu Thr Ala Pro ArgAla Leu Leu Thr Ala Pro Arg
2020
<210> 303<210> 303
<211> 23<211> 23
<212> PRT<212>PRT
<213> искусственная<213> artificial
<220><220>
<223> N-концевая последовательность (с эталонной aa)<223> N-terminal sequence (with reference aa)
<400> 303<400> 303
Cys Ala Lys Leu Thr Ala Val Gln Val Lys Leu Glu Leu Gly His ArgCys Ala Lys Leu Thr Ala Val Gln Val Lys Leu Glu Leu Gly His Arg
1 5 10 151 5 10 15
Pro Asp Gly Gly Ser Gly GlyPro Asp Gly Gly Ser Gly Gly
2020
<210> 304<210> 304
<211> 25<211> 25
<212> PRT<212>PRT
<213> искусственная<213> artificial
<220><220>
<223> N-концевая последовательность (с эталонной aa)<223> N-terminal sequence (with reference aa)
<400> 304<400> 304
Cys Thr Ser Val His Gln Glu Thr Lys Lys Tyr Gln Ser Ser Tyr GlnCys Thr Ser Val His Gln Glu Thr Lys Lys Tyr Gln Ser Ser Tyr Gln
1 5 10 151 5 10 15
Ser Ser Pro Asp Gly Gly Ser Gly GlySer Ser Pro Asp Gly Gly Ser Gly Gly
20 2520 25
<210> 305<210> 305
<211> 23<211> 23
<212> PRT<212>PRT
<213> искусственная<213> artificial
<220><220>
<223> C-концевая последовательность (с эталонной aa)<223> C-terminal sequence (with reference aa)
<400> 305<400> 305
Gly Ser Tyr Ser Tyr Thr Tyr Ser Tyr Thr Tyr Asn Tyr Glu Trp HisGly Ser Tyr Ser Tyr Thr Tyr Ser Tyr Thr Tyr Asn Tyr Glu Trp His
1 5 10 151 5 10 15
Val Asp Val Trp Gly Gln GlyVal Asp Val Trp Gly Gln Gly
2020
<210> 306<210> 306
<211> 25<211> 25
<212> PRT<212>PRT
<213> искусственная<213> artificial
<220><220>
<223> N-концевая последовательность (с эталонной aa)<223> N-terminal sequence (with reference aa)
<400> 306<400> 306
Cys Ala Lys Leu Thr Ala Val Gln Val Lys Leu Glu Leu Gly His ArgCys Ala Lys Leu Thr Ala Val Gln Val Lys Leu Glu Leu Gly His Arg
1 5 10 151 5 10 15
Ala Gln Pro Asp Gly Gly Ser Gly GlyAla Gln Pro Asp Gly Gly Ser Gly Gly
20 2520 25
<210> 307<210> 307
<211> 23<211> 23
<212> PRT<212>PRT
<213> искусственная<213> artificial
<220><220>
<223> C-концевая последовательность (с эталонной aa)<223> C-terminal sequence (with reference aa)
<400> 307<400> 307
Gly Ser Pro Val Asn His Leu Arg Ser Glu Lys Leu Thr Phe Asn TyrGly Ser Pro Val Asn His Leu Arg Ser Glu Lys Leu Thr Phe Asn Tyr
1 5 10 151 5 10 15
Phe Gln His Trp Gly Gln GlyPhe Gln His Trp Gly Gln Gly
2020
<210> 308<210> 308
<211> 17<211> 17
<212> PRT<212>PRT
<213> искусственная<213> artificial
<220><220>
<223> N-концевая последовательность (с эталонной aa)<223> N-terminal sequence (with reference aa)
<400> 308<400> 308
Ser Ser Ser Asn Ile Gly Ser Lys Leu Arg Ala Leu Leu Thr Ala ProSer Ser Ser Asn Ile Gly Ser Lys Leu Arg Ala Leu Leu Thr Ala Pro
1 5 10 151 5 10 15
ArgArg
<210> 309<210> 309
<211> 15<211> 15
<212> PRT<212>PRT
<213> искусственная<213> artificial
<220><220>
<223> C-концевая последовательность (с эталонной aa)<223> C-terminal sequence (with reference aa)
<400> 309<400> 309
Gly Ser Gly Ser Gly Gly Ser Gly Gly Ser Gly Ser Gly Tyr AspGly Ser Gly Ser Gly Gly Ser Gly Gly Ser Gly Ser Gly Tyr Asp
1 5 10 151 5 10 15
<210> 310<210> 310
<211> 14<211> 14
<212> PRT<212>PRT
<213> искусственная<213> artificial
<220><220>
<223> C-концевая последовательность (с эталонной aa)<223> C-terminal sequence (with reference aa)
<400> 310<400> 310
Gly Ser Tyr Gly Ser Gly Gly Ser Gly Ser Gly Ser Gly AspGly Ser Tyr Gly Ser Gly Gly Ser Gly Ser Gly Ser Gly Asp
1 5 101 5 10
<210> 311<210> 311
<211> 21<211> 21
<212> PRT<212>PRT
<213> искусственная<213> artificial
<220><220>
<223> N-концевая последовательность (с эталонной aa)<223> N-terminal sequence (with reference aa)
<400> 311<400> 311
Ser Ser Leu Gly Gln Ile Gln Leu Thr Ile Arg His Ser Ser Pro AspSer Ser Leu Gly Gln Ile Gln Leu Thr Ile Arg His Ser Ser Pro Asp
1 5 10 151 5 10 15
Gly Gly Ser Gly GlyGly Gly Ser Gly Gly
2020
<210> 312<210> 312
<211> 19<211> 19
<212> PRT<212>PRT
<213> искусственная<213> artificial
<220><220>
<223> C-концевая последовательность (с эталонной aa)<223> C-terminal sequence (with reference aa)
<400> 312<400> 312
Gly Ser Asn Lys Leu Ile Val Val Val His Ala Ser Arg Asn Leu IleGly Ser Asn Lys Leu Ile Val Val Val His Ala Ser Arg Asn Leu Ile
1 5 10 151 5 10 15
Gly Tyr AspGly Tyr Asp
<210> 313<210> 313
<211> 22<211> 22
<212> PRT<212>PRT
<213> искусственная<213> artificial
<220><220>
<223> N-концевая последовательность (с эталонной aa)<223> N-terminal sequence (with reference aa)
<400> 313<400> 313
Ser Pro Leu Gly Gln Ile Gln Leu Thr Ile Arg His Ser Ser Gln ProSer Pro Leu Gly Gln Ile Gln Leu Thr Ile Arg His Ser Ser Gln Pro
1 5 10 151 5 10 15
Asp Gly Gly Ser Gly GlyAsp Gly Gly Ser Gly Gly
2020
<210> 314<210> 314
<211> 20<211> 20
<212> PRT<212>PRT
<213> искусственная<213> artificial
<220><220>
<223> C-концевая последовательность (с эталонной aa)<223> C-terminal sequence (with reference aa)
<400> 314<400> 314
Gly Ser Arg Asn Lys Leu Ile Val Val Val His Ala Ser Arg Asn LeuGly Ser Arg Asn Lys Leu Ile Val Val Val His Ala Ser Arg Asn Leu
1 5 10 151 5 10 15
Ile Ala Tyr AspIle Ala Tyr Asp
2020
<210> 315<210> 315
<211> 22<211> 22
<212> PRT<212>PRT
<213> искусственная<213> artificial
<220><220>
<223> N-концевая последовательность (с эталонной aa)<223> N-terminal sequence (with reference aa)
<400> 315<400> 315
Ser Ser Leu Gly Gln Ile Gln Leu Thr Ile Arg His Ser Ser Gln ProSer Ser Leu Gly Gln Ile Gln Leu Thr Ile Arg His Ser Ser Gln Pro
1 5 10 151 5 10 15
Asp Gly Gly Ser Gly GlyAsp Gly Gly Ser Gly Gly
2020
<210> 316<210> 316
<211> 20<211> 20
<212> PRT<212>PRT
<213> искусственная<213> artificial
<220><220>
<223> C-концевая последовательность (с эталонной aa)<223> C-terminal sequence (with reference aa)
<400> 316<400> 316
Gly Ser Arg Asn Lys Leu Ile Val Val Val His Ala Ser Arg Asn LeuGly Ser Arg Asn Lys Leu Ile Val Val Val His Ala Ser Arg Asn Leu
1 5 10 151 5 10 15
Ile Gly Tyr AspIle Gly Tyr Asp
2020
<210> 317<210> 317
<211> 22<211> 22
<212> PRT<212>PRT
<213> искусственная<213> artificial
<220><220>
<223> N-концевая последовательность (с эталонной aa)<223> N-terminal sequence (with reference aa)
<400> 317<400> 317
Ser Ser Ser Asn Ile Gly Ser Ala Leu Leu Lys Ser Lys Leu Arg AlaSer Ser Ser Asn Ile Gly Ser Ala Leu Leu Lys Ser Lys Leu Arg Ala
1 5 10 151 5 10 15
Leu Leu Thr Ala Pro ArgLeu Leu Thr Ala Pro Arg
2020
<210> 318<210> 318
<211> 20<211> 20
<212> PRT<212>PRT
<213> искусственная<213> artificial
<220><220>
<223> C-концевая последовательность (с эталонной aa)<223> C-terminal sequence (with reference aa)
<400> 318<400> 318
Gly Ser Ser Asp Arg Ser Ala Leu Leu Lys Ser Lys Leu Arg Ala LeuGly Ser Ser Asp Arg Ser Ala Leu Leu Lys Ser Lys Leu Arg Ala Leu
1 5 10 151 5 10 15
Leu Thr Ala AspLeu Thr Ala Asp
2020
<210> 319<210> 319
<211> 20<211> 20
<212> PRT<212>PRT
<213> искусственная<213> artificial
<220><220>
<223> C-концевая последовательность (с эталонной aa)<223> C-terminal sequence (with reference aa)
<400> 319<400> 319
Gly Ser Gly Ser Gly Gly Ser Gly Gly Ser Gly Gly Ser Gly Ser GlyGly Ser Gly Ser Gly Gly Ser Gly Gly Ser Gly Gly Ser Gly Ser Gly
1 5 10 151 5 10 15
Ser Gly Tyr AspSer Gly Tyr Asp
2020
<210> 320<210> 320
<211> 24<211> 24
<212> PRT<212>PRT
<213> искусственная<213> artificial
<220><220>
<223> N-концевая последовательность (с эталонной aa)<223> N-terminal sequence (with reference aa)
<400> 320<400> 320
Ser Ser Ser Asn Ile Gly Ser Gly Ser Gly Ser Gly Ser Gly Ser GlySer Ser Ser Asn Ile Gly Ser Gly Ser Gly Ser Gly Ser Gly Ser Gly
1 5 10 151 5 10 15
Ser Pro Asp Gly Gly Ser Gly GlySer Pro Asp Gly Gly Ser Gly Gly
2020
<210> 321<210> 321
<211> 15<211> 15
<212> PRT<212>PRT
<213> искусственная<213> artificial
<220><220>
<223> C-концевая последовательность (с эталонной aa)<223> C-terminal sequence (with reference aa)
<400> 321<400> 321
Gly Ser Tyr Gly Ser Gly Gly Ser Gly Ser Gly Ser Gly Tyr AspGly Ser Tyr Gly Ser Gly Gly Ser Gly Ser Gly Ser Gly Tyr Asp
1 5 10 151 5 10 15
<210> 322<210> 322
<211> 7<211> 7
<212> PRT<212>PRT
<213> искусственная<213> artificial
<220><220>
<223> C-концевая последовательность (с эталонной aa)<223> C-terminal sequence (with reference aa)
<400> 322<400> 322
Asn Ser Asn Arg Pro Ser GlyAsn Ser Asn Arg Pro Ser Gly
1 515
<210> 323<210> 323
<211> 6<211> 6
<212> PRT<212>PRT
<213> искусственная<213> artificial
<220><220>
<223> N-концевая последовательность (с эталонной aa)<223> N-terminal sequence (with reference aa)
<400> 323<400> 323
Tyr Gly Gly Ser Gly SerTyr Gly Gly Ser Gly Ser
1 515
<210> 324<210> 324
<211> 11<211> 11
<212> PRT<212>PRT
<213> искусственная<213> artificial
<220><220>
<223> C-концевая последовательность (с эталонной aa)<223> C-terminal sequence (with reference aa)
<400> 324<400> 324
Gly Ser Gly Ser Asn Ser Asn Arg Pro Ser GlyGly Ser Gly Ser Asn Ser Asn Arg Pro Ser Gly
1 5 101 5 10
<210> 325<210> 325
<211> 13<211> 13
<212> PRT<212>PRT
<213> искусственная<213> artificial
<220><220>
<223> N-концевая последовательность (с эталонной aa)<223> N-terminal sequence (with reference aa)
<400> 325<400> 325
Tyr Gly Lys Thr His Thr Ser Pro Pro Ser Pro Gly GlyTyr Gly Lys Thr His Thr Ser Pro Pro Ser Pro Gly Gly
1 5 101 5 10
<210> 326<210> 326
<211> 17<211> 17
<212> PRT<212>PRT
<213> искусственная<213> artificial
<220><220>
<223> C-концевая последовательность (с эталонной aa)<223> C-terminal sequence (with reference aa)
<400> 326<400> 326
Gly Gly Lys Thr His Thr Ser Pro Pro Ser Pro Gly Asn Arg Pro SerGly Gly Lys Thr His Thr Ser Pro Pro Ser Pro Gly Asn Arg Pro Ser
1 5 10 151 5 10 15
GlyGly
<210> 327<210> 327
<211> 14<211> 14
<212> PRT<212>PRT
<213> искусственная<213> artificial
<220><220>
<223> N-концевая последовательность (с эталонной aa)<223> N-terminal sequence (with reference aa)
<400> 327<400> 327
Tyr Gly Ser Gly Ser Gly Ser Gly Ser Gly Ser Gly Gly GlyTyr Gly Ser Gly Ser Gly Ser Gly Ser Gly Ser Gly Gly Gly
1 5 101 5 10
<210> 328<210> 328
<211> 18<211> 18
<212> PRT<212>PRT
<213> искусственная<213> artificial
<220><220>
<223> C-концевая последовательность (с эталонной aa)<223> C-terminal sequence (with reference aa)
<400> 328<400> 328
Gly Gly Lys Thr His Thr Ser Pro Pro Ser Pro Ser Gly Asn Arg ProGly Gly Lys Thr His Thr Ser Pro Pro Ser Pro Ser Gly Asn Arg Pro
1 5 10 151 5 10 15
Ser GlySer Gly
<210> 329<210> 329
<211> 14<211> 14
<212> PRT<212>PRT
<213> искусственная<213> artificial
<220><220>
<223> N-концевая последовательность (с эталонной aa)<223> N-terminal sequence (with reference aa)
<400> 329<400> 329
Tyr Gly Ser Lys Thr His Thr Ser Pro Pro Ser Pro Gly GlyTyr Gly Ser Lys Thr His Thr Ser Pro Pro Ser Pro Gly Gly
1 5 101 5 10
<210> 330<210> 330
<211> 15<211> 15
<212> PRT<212>PRT
<213> искусственная<213> artificial
<220><220>
<223> N-концевая последовательность (с эталонной aa)<223> N-terminal sequence (with reference aa)
<400> 330<400> 330
Tyr Gly Ser Gly Ser Gly Ser Gly Ser Gly Gly Gly Ser Gly GlyTyr Gly Ser Gly Ser Gly Ser Gly Ser Gly Gly Gly Ser Gly Gly
1 5 10 151 5 10 15
<210> 331<210> 331
<211> 15<211> 15
<212> PRT<212>PRT
<213> искусственная<213> artificial
<220><220>
<223> C-концевая последовательность (с эталонной aa)<223> C-terminal sequence (with reference aa)
<400> 331<400> 331
Gly Ser Gly Gly Ser Gly Ser Gly Ser Gly Asn Arg Pro Ser GlyGly Ser Gly Gly Ser Gly Ser Gly Ser Gly Asn Arg Pro Ser Gly
1 5 10 151 5 10 15
<210> 332<210> 332
<211> 16<211> 16
<212> PRT<212>PRT
<213> искусственная<213> artificial
<220><220>
<223> N-концевая последовательность (с эталонной aa)<223> N-terminal sequence (with reference aa)
<400> 332<400> 332
Tyr Gly Ser Ser Asp Lys Thr His Thr Ser Pro Pro Ser Pro Gly GlyTyr Gly Ser Ser Asp Lys Thr His Thr Ser Pro Pro Ser Pro Gly Gly
1 5 10 151 5 10 15
<210> 333<210> 333
<211> 20<211> 20
<212> PRT<212>PRT
<213> искусственная<213> artificial
<220><220>
<223> C-концевая последовательность (с эталонной aa)<223> C-terminal sequence (with reference aa)
<400> 333<400> 333
Gly Gly Ser Gly Ser Gly Ser Gly Gly Ser Gly Ser Gly Ser Gly AsnGly Gly Ser Gly Ser Gly Ser Gly Gly Ser Gly Ser Gly Ser Gly Asn
1 5 10 151 5 10 15
Arg Pro Ser GlyArg Pro Ser Gly
2020
<210> 334<210> 334
<211> 17<211> 17
<212> PRT<212>PRT
<213> искусственная<213> artificial
<220><220>
<223> N-концевая последовательность (с эталонной aa)<223> N-terminal sequence (with reference aa)
<400> 334<400> 334
Tyr Thr Ser Ala Ser Leu Ala Ile Thr Gly Pro Asp Gly Gly Ser GlyTyr Thr Ser Ala Ser Leu Ala Ile Thr Gly Pro Asp Gly Gly Ser Gly
1 5 10 151 5 10 15
GlyGly
<210> 335<210> 335
<211> 16<211> 16
<212> PRT<212>PRT
<213> искусственная<213> artificial
<220><220>
<223> C-концевая последовательность (с эталонной aa)<223> C-terminal sequence (with reference aa)
<400> 335<400> 335
Gly Ser Asp Arg Phe Ser Gly Ser Lys Ser Gly Asn Arg Pro Ser GlyGly Ser Asp Arg Phe Ser Gly Ser Lys Ser Gly Asn Arg Pro Ser Gly
1 5 10 151 5 10 15
<210> 336<210> 336
<211> 17<211> 17
<212> PRT<212>PRT
<213> искусственная<213> artificial
<220><220>
<223> N-концевая последовательность (с эталонной aa)<223> N-terminal sequence (with reference aa)
<400> 336<400> 336
Tyr Gly Phe Ile Leu Pro Ile Glu Val Tyr Pro Asp Gly Gly Ser GlyTyr Gly Phe Ile Leu Pro Ile Glu Val Tyr Pro Asp Gly Gly Ser Gly
1 5 10 151 5 10 15
GlyGly
<210> 337<210> 337
<211> 16<211> 16
<212> PRT<212>PRT
<213> искусственная<213> artificial
<220><220>
<223> C-концевая последовательность (с эталонной aa)<223> C-terminal sequence (with reference aa)
<400> 337<400> 337
Gly Ser Lys Val Arg Phe Asp Tyr Asp Leu Phe Asn Arg Pro Ser GlyGly Ser Lys Val Arg Phe Asp Tyr Asp Leu Phe Asn Arg Pro Ser Gly
1 5 10 151 5 10 15
<210> 338<210> 338
<211> 17<211> 17
<212> PRT<212>PRT
<213> искусственная<213> artificial
<220><220>
<223> N-концевая последовательность (с эталонной aa)<223> N-terminal sequence (with reference aa)
<400> 338<400> 338
Tyr Gly Ser Gly Ser Gly Ser Gly Ser Gly Ser Gly Gly Gly Ser GlyTyr Gly Ser Gly Ser Gly Ser Gly Ser Gly Ser Gly Gly Gly Ser Gly
1 5 10 151 5 10 15
GlyGly
<210> 339<210> 339
<211> 17<211> 17
<212> PRT<212>PRT
<213> искусственная<213> artificial
<220><220>
<223> C-концевая последовательность (с эталонной aa)<223> C-terminal sequence (with reference aa)
<400> 339<400> 339
Gly Ser Gly Ser Gly Gly Ser Gly Ser Gly Ser Gly Asn Arg Pro SerGly Ser Gly Ser Gly Gly Ser Gly Ser Gly Ser Gly Asn Arg Pro Ser
1 5 10 151 5 10 15
GlyGly
<210> 340<210> 340
<211> 18<211> 18
<212> PRT<212>PRT
<213> искусственная<213> artificial
<220><220>
<223> N-концевая последовательность (с эталонной aa)<223> N-terminal sequence (with reference aa)
<400> 340<400> 340
Tyr Gly Val Pro Lys Glu Lys Glu Lys Glu Lys Val Ser Thr Ala ValTyr Gly Val Pro Lys Glu Lys Glu Lys Glu Lys Val Ser Thr Ala Val
1 5 10 151 5 10 15
Gly GlyGly Gly
<210> 341<210> 341
<211> 17<211> 17
<212> PRT<212>PRT
<213> искусственная<213> artificial
<220><220>
<223> C-концевая последовательность (с эталонной aa)<223> C-terminal sequence (with reference aa)
<400> 341<400> 341
Gly Ser Ala Pro Leu Glu Val Pro Lys Glu Lys Glu Lys Glu Lys ValGly Ser Ala Pro Leu Glu Val Pro Lys Glu Lys Glu Lys Glu Lys Val
1 5 10 151 5 10 15
GlyGly
<210> 342<210> 342
<211> 18<211> 18
<212> PRT<212>PRT
<213> искусственная<213> artificial
<220><220>
<223> N-концевая последовательность (с эталонной aa)<223> N-terminal sequence (with reference aa)
<400> 342<400> 342
Tyr Gly Thr Ser Ala Ser Leu Ala Ile Thr Gly Pro Asp Gly Gly SerTyr Gly Thr Ser Ala Ser Leu Ala Ile Thr Gly Pro Asp Gly Gly Ser
1 5 10 151 5 10 15
Gly GlyGly Gly
<210> 343<210> 343
<211> 17<211> 17
<212> PRT<212>PRT
<213> искусственная<213> artificial
<220><220>
<223> C-концевая последовательность (с эталонной aa)<223> C-terminal sequence (with reference aa)
<400> 343<400> 343
Gly Ser Asp Arg Phe Ser Gly Ser Lys Ser Gly Gly Asn Arg Pro SerGly Ser Asp Arg Phe Ser Gly Ser Lys Ser Gly Gly Asn Arg Pro Ser
1 5 10 151 5 10 15
GlyGly
<210> 344<210> 344
<211> 18<211> 18
<212> PRT<212>PRT
<213> искусственная<213> artificial
<220><220>
<223> N-концевая последовательность (с эталонной aa)<223> N-terminal sequence (with reference aa)
<400> 344<400> 344
Tyr Gly Gly Ser Gly Ser Gly Ser Gly Ser Gly Pro Asp Gly Gly SerTyr Gly Gly Ser Gly Ser Gly Ser Gly Ser Gly Pro Asp Gly Gly Ser
1 5 10 151 5 10 15
Gly GlyGly Gly
<210> 345<210> 345
<211> 18<211> 18
<212> PRT<212>PRT
<213> искусственная<213> artificial
<220><220>
<223> N-концевая последовательность (с эталонной aa)<223> N-terminal sequence (with reference aa)
<400> 345<400> 345
Tyr Gly Ser Gly Ser Gly Ser Gly Ser Gly Ser Gly Ser Gly Ser GlyTyr Gly Ser Gly Ser Gly Ser Gly Ser Gly Ser Gly Ser Gly Ser Gly
1 5 10 151 5 10 15
Gly GlyGly Gly
<210> 346<210> 346
<211> 17<211> 17
<212> PRT<212>PRT
<213> искусственная<213> artificial
<220><220>
<223> C-концевая последовательность (с эталонной aa)<223> C-terminal sequence (with reference aa)
<400> 346<400> 346
Gly Ser Tyr Glu Lys Glu Lys Glu Lys Asn Lys Thr Leu Lys Asn ValGly Ser Tyr Glu Lys Glu Lys Glu Lys Asn Lys Thr Leu Lys Asn Val
1 5 10 151 5 10 15
GlyGly
<210> 347<210> 347
<211> 18<211> 18
<212> PRT<212>PRT
<213> искусственная<213> artificial
<220><220>
<223> N-концевая последовательность (с эталонной aa)<223> N-terminal sequence (with reference aa)
<400> 347<400> 347
Tyr Gly Thr Tyr Ile Ser Asn Val Asn His Lys Pro Asp Gly Gly SerTyr Gly Thr Tyr Ile Ser Asn Val Asn His Lys Pro Asp Gly Gly Ser
1 5 10 151 5 10 15
Gly GlyGly Gly
<210> 348<210> 348
<211> 17<211> 17
<212> PRT<212>PRT
<213> искусственная<213> artificial
<220><220>
<223> C-концевая последовательность (с эталонной aa)<223> C-terminal sequence (with reference aa)
<400> 348<400> 348
Gly Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Lys Val Glu Gly Asn Arg Pro SerGly Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Lys Val Glu Gly Asn Arg Pro Ser
1 5 10 151 5 10 15
GlyGly
<210> 349<210> 349
<211> 18<211> 18
<212> PRT<212>PRT
<213> искусственная<213> artificial
<220><220>
<223> N-концевая последовательность (с эталонной aa)<223> N-terminal sequence (with reference aa)
<400> 349<400> 349
Tyr Gly Ala Glu Glu Trp Lys Lys Lys Tyr Glu Lys Glu Lys Glu LysTyr Gly Ala Glu Glu Trp Lys Lys Lys Tyr Glu Lys Glu Lys Glu Lys
1 5 10 151 5 10 15
Gly GlyGly Gly
<210> 350<210> 350
<211> 17<211> 17
<212> PRT<212>PRT
<213> искусственная<213> artificial
<220><220>
<223> C-концевая последовательность (с эталонной aa)<223> C-terminal sequence (with reference aa)
<400> 350<400> 350
Gly Ser Gly Ser Gly Ser Gly Ser Gly Ser Gly Ser Gly Ser Gly SerGly Ser Gly Ser Gly Ser Gly Ser Gly Ser Gly Ser Gly Ser Gly Ser
1 5 10 151 5 10 15
GlyGly
<210> 351<210> 351
<211> 18<211> 18
<212> PRT<212>PRT
<213> искусственная<213> artificial
<220><220>
<223> N-концевая последовательность (с эталонной aa)<223> N-terminal sequence (with reference aa)
<400> 351<400> 351
Tyr Gly Gly Phe Ile Leu Pro Ile Glu Val Tyr Pro Asp Gly Gly SerTyr Gly Gly Phe Ile Leu Pro Ile Glu Val Tyr Pro Asp Gly Gly Ser
1 5 10 151 5 10 15
Gly GlyGly Gly
<210> 352<210> 352
<211> 17<211> 17
<212> PRT<212>PRT
<213> искусственная<213> artificial
<220><220>
<223> C-концевая последовательность (с эталонной aa)<223> C-terminal sequence (with reference aa)
<400> 352<400> 352
Gly Ser Lys Val Arg Phe Asp Tyr Asp Leu Phe Gly Asn Arg Pro SerGly Ser Lys Val Arg Phe Asp Tyr Asp Leu Phe Gly Asn Arg Pro Ser
1 5 10 151 5 10 15
GlyGly
<210> 353<210> 353
<211> 18<211> 18
<212> PRT<212>PRT
<213> искусственная<213> artificial
<220><220>
<223> N-концевая последовательность (с эталонной aa)<223> N-terminal sequence (with reference aa)
<400> 353<400> 353
Tyr Gly Ser Ala Leu Leu Lys Ser Lys Leu Arg Ala Leu Leu Thr AlaTyr Gly Ser Ala Leu Leu Lys Ser Lys Leu Arg Ala Leu Leu Thr Ala
1 5 10 151 5 10 15
Pro GlyPro Gly
<210> 354<210> 354
<211> 18<211> 18
<212> PRT<212>PRT
<213> искусственная<213> artificial
<220><220>
<223> C-концевая последовательность (с эталонной aa)<223> C-terminal sequence (with reference aa)
<400> 354<400> 354
Gly Ser Asp Gly Ser Gly Gly Ser Gly Ser Gly Ser Gly Asn Arg ProGly Ser Asp Gly Ser Gly Gly Ser Gly Ser Gly Ser Gly Asn Arg Pro
1 5 10 151 5 10 15
Ser GlySer Gly
<210> 355<210> 355
<211> 19<211> 19
<212> PRT<212>PRT
<213> искусственная<213> artificial
<220><220>
<223> N-концевая последовательность (с эталонной aa)<223> N-terminal sequence (with reference aa)
<400> 355<400> 355
Tyr Gly Ser Gly Ser Gly Ser Gly Ser Gly Ser Gly Pro Asp Gly GlyTyr Gly Ser Gly Ser Gly Ser Gly Ser Gly Ser Gly Pro Asp Gly Gly
1 5 10 151 5 10 15
Ser Gly GlySer Gly Gly
<210> 356<210> 356
<211> 19<211> 19
<212> PRT<212>PRT
<213> искусственная<213> artificial
<220><220>
<223> N-концевая последовательность (с эталонной aa)<223> N-terminal sequence (with reference aa)
<400> 356<400> 356
Tyr Gly Gly Thr Ser Ala Ser Leu Ala Ile Thr Gly Pro Asp Gly GlyTyr Gly Gly Thr Ser Ala Ser Leu Ala Ile Thr Gly Pro Asp Gly Gly
1 5 10 151 5 10 15
Ser Gly GlySer Gly Gly
<210> 357<210> 357
<211> 18<211> 18
<212> PRT<212>PRT
<213> искусственная<213> artificial
<220><220>
<223> C-концевая последовательность (с эталонной aa)<223> C-terminal sequence (with reference aa)
<400> 357<400> 357
Gly Ser Asp Arg Phe Ser Gly Ser Lys Ser Gly Gly Gly Asn Arg ProGly Ser Asp Arg Phe Ser Gly Ser Lys Ser Gly Gly Gly Asn Arg Pro
1 5 10 151 5 10 15
Ser GlySer Gly
<210> 358<210> 358
<211> 19<211> 19
<212> PRT<212>PRT
<213> искусственная<213> artificial
<220><220>
<223> N-концевая последовательность (с эталонной aa)<223> N-terminal sequence (with reference aa)
<400> 358<400> 358
Tyr Gly Gly Thr Tyr Ile Ser Asn Val Asn His Lys Pro Asp Gly GlyTyr Gly Gly Thr Tyr Ile Ser Asn Val Asn His Lys Pro Asp Gly Gly
1 5 10 151 5 10 15
Ser Gly GlySer Gly Gly
<210> 359<210> 359
<211> 18<211> 18
<212> PRT<212>PRT
<213> искусственная<213> artificial
<220><220>
<223> C-концевая последовательность (с эталонной aa)<223> C-terminal sequence (with reference aa)
<400> 359<400> 359
Gly Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Lys Val Glu Gly Gly Asn Arg ProGly Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Lys Val Glu Gly Gly Asn Arg Pro
1 5 10 151 5 10 15
Ser GlySer Gly
<210> 360<210> 360
<211> 19<211> 19
<212> PRT<212>PRT
<213> искусственная<213> artificial
<220><220>
<223> N-концевая последовательность (с эталонной aa)<223> N-terminal sequence (with reference aa)
<400> 360<400> 360
Tyr Thr Gln Thr Tyr Ile Ser Asn Val Asn His Lys Pro Asp Gly GlyTyr Thr Gln Thr Tyr Ile Ser Asn Val Asn His Lys Pro Asp Gly Gly
1 5 10 151 5 10 15
Ser Gly GlySer Gly Gly
<210> 361<210> 361
<211> 18<211> 18
<212> PRT<212>PRT
<213> искусственная<213> artificial
<220><220>
<223> C-концевая последовательность (с эталонной aa)<223> C-terminal sequence (with reference aa)
<400> 361<400> 361
Gly Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys Asn Arg ProGly Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys Asn Arg Pro
1 5 10 151 5 10 15
Ser GlySer Gly
<210> 362<210> 362
<211> 19<211> 19
<212> PRT<212>PRT
<213> искусственная<213> artificial
<220><220>
<223> N-концевая последовательность (с эталонной aa)<223> N-terminal sequence (with reference aa)
<400> 362<400> 362
Tyr Gly Gly Gly Phe Ile Leu Pro Ile Glu Val Tyr Pro Asp Gly GlyTyr Gly Gly Gly Phe Ile Leu Pro Ile Glu Val Tyr Pro Asp Gly Gly
1 5 10 151 5 10 15
Ser Gly GlySer Gly Gly
<210> 363<210> 363
<211> 18<211> 18
<212> PRT<212>PRT
<213> искусственная<213> artificial
<220><220>
<223> C-концевая последовательность (с эталонной aa)<223> C-terminal sequence (with reference aa)
<400> 363<400> 363
Gly Ser Lys Val Arg Phe Asp Tyr Asp Leu Phe Gly Gly Asn Arg ProGly Ser Lys Val Arg Phe Asp Tyr Asp Leu Phe Gly Gly Asn Arg Pro
1 5 10 151 5 10 15
Ser GlySer Gly
<210> 364<210> 364
<211> 20<211> 20
<212> PRT<212>PRT
<213> искусственная<213> artificial
<220><220>
<223> N-концевая последовательность (с эталонной aa)<223> N-terminal sequence (with reference aa)
<400> 364<400> 364
Tyr Gly Ser Gly Ser Gly Ser Gly Ser Gly Ser Gly Ser Pro Asp GlyTyr Gly Ser Gly Ser Gly Ser Gly Ser Gly Ser Gly Ser Pro Asp Gly
1 5 10 151 5 10 15
Gly Ser Gly GlyGly Ser Gly Gly
2020
<210> 365<210> 365
<211> 18<211> 18
<212> PRT<212>PRT
<213> искусственная<213> artificial
<220><220>
<223> C-концевая последовательность (с эталонной aa)<223> C-terminal sequence (with reference aa)
<400> 365<400> 365
Gly Ser Tyr Gly Ser Gly Gly Ser Gly Ser Gly Ser Gly Asn Arg ProGly Ser Tyr Gly Ser Gly Gly Ser Gly Ser Gly Ser Gly Asn Arg Pro
1 5 10 151 5 10 15
Ser GlySer Gly
<210> 366<210> 366
<211> 20<211> 20
<212> PRT<212>PRT
<213> искусственная<213> artificial
<220><220>
<223> N-концевая последовательность (с эталонной aa)<223> N-terminal sequence (with reference aa)
<400> 366<400> 366
Tyr Gly Ser Gln Val Lys Leu Glu Leu Gly His Arg Ala Pro Asp GlyTyr Gly Ser Gln Val Lys Leu Glu Leu Gly His Arg Ala Pro Asp Gly
1 5 10 151 5 10 15
Gly Ser Gly GlyGly Ser Gly Gly
2020
<210> 367<210> 367
<211> 19<211> 19
<212> PRT<212>PRT
<213> искусственная<213> artificial
<220><220>
<223> C-концевая последовательность (с эталонной aa)<223> C-terminal sequence (with reference aa)
<400> 367<400> 367
Gly Ser Val Asn His Leu Arg Ser Glu Lys Leu Thr Ser Gly Asn ArgGly Ser Val Asn His Leu Arg Ser Glu Lys Leu Thr Ser Gly Asn Arg
1 5 10 151 5 10 15
Pro Ser GlyPro Ser Gly
<210> 368<210> 368
<211> 20<211> 20
<212> PRT<212>PRT
<213> искусственная<213> artificial
<220><220>
<223> N-концевая последовательность (с эталонной aa)<223> N-terminal sequence (with reference aa)
<400> 368<400> 368
Tyr Pro Ala Val Val Tyr Ile Glu Ile Leu Asp Arg His Pro Asp GlyTyr Pro Ala Val Val Tyr Ile Glu Ile Leu Asp Arg His Pro Asp Gly
1 5 10 151 5 10 15
Gly Ser Gly GlyGly Ser Gly Gly
2020
<210> 369<210> 369
<211> 19<211> 19
<212> PRT<212>PRT
<213> искусственная<213> artificial
<220><220>
<223> C-концевая последовательность (с эталонной aa)<223> C-terminal sequence (with reference aa)
<400> 369<400> 369
Gly Ser Gly Arg Glu Val Pro Ile Ser Asn Gly Ser Gly Phe Asn ArgGly Ser Gly Arg Glu Val Pro Ile Ser Asn Gly Ser Gly Phe Asn Arg
1 5 10 151 5 10 15
Pro Ser GlyPro Ser Gly
<210> 370<210> 370
<211> 20<211> 20
<212> PRT<212>PRT
<213> искусственная<213> artificial
<220><220>
<223> N-концевая последовательность (с эталонной aa)<223> N-terminal sequence (with reference aa)
<400> 370<400> 370
Tyr Gly Gly Val Val Tyr Ile Glu Ile Leu Asp Arg His Pro Asp GlyTyr Gly Gly Val Val Tyr Ile Glu Ile Leu Asp Arg His Pro Asp Gly
1 5 10 151 5 10 15
Gly Ser Gly GlyGly Ser Gly Gly
2020
<210> 371<210> 371
<211> 19<211> 19
<212> PRT<212>PRT
<213> искусственная<213> artificial
<220><220>
<223> C-концевая последовательность (с эталонной aa)<223> C-terminal sequence (with reference aa)
<400> 371<400> 371
Gly Ser Gly Arg Glu Val Pro Ile Ser Asn Gly Ser Gly Gly Asn ArgGly Ser Gly Arg Glu Val Pro Ile Ser Asn Gly Ser Gly Gly Asn Arg
1 5 10 151 5 10 15
Pro Ser GlyPro Ser Gly
<210> 372<210> 372
<211> 20<211> 20
<212> PRT<212>PRT
<213> искусственная<213> artificial
<220><220>
<223> N-концевая последовательность (с эталонной aa)<223> N-terminal sequence (with reference aa)
<400> 372<400> 372
Tyr Gly Ala Val Val Tyr Ile Glu Ile Leu Asp Arg His Pro Asp GlyTyr Gly Ala Val Val Tyr Ile Glu Ile Leu Asp Arg His Pro Asp Gly
1 5 10 151 5 10 15
Gly Ser Gly GlyGly Ser Gly Gly
2020
<210> 373<210> 373
<211> 20<211> 20
<212> PRT<212>PRT
<213> искусственная<213> artificial
<220><220>
<223> N-концевая последовательность (с эталонной aa)<223> N-terminal sequence (with reference aa)
<400> 373<400> 373
Tyr Gly Ser Arg Ser Ala Leu Leu Lys Ser Lys Leu Arg Ala Leu LeuTyr Gly Ser Arg Ser Ala Leu Leu Lys Ser Lys Leu Arg Ala Leu Leu
1 5 10 151 5 10 15
Thr Ala Pro ArgThr Ala Pro Arg
2020
<210> 374<210> 374
<211> 20<211> 20
<212> PRT<212>PRT
<213> искусственная<213> artificial
<220><220>
<223> C-концевая последовательность (с эталонной aa)<223> C-terminal sequence (with reference aa)
<400> 374<400> 374
Gly Ser Asp Gly Ser Gly Ser Gly Gly Ser Gly Ser Gly Ser Gly AsnGly Ser Asp Gly Ser Gly Ser Gly Gly Ser Gly Ser Gly Ser Gly Asn
1 5 10 151 5 10 15
Arg Pro Ser GlyArg Pro Ser Gly
2020
<210> 375<210> 375
<211> 20<211> 20
<212> PRT<212>PRT
<213> искусственная<213> artificial
<220><220>
<223> N-концевая последовательность (с эталонной aa)<223> N-terminal sequence (with reference aa)
<400> 375<400> 375
Tyr Gly Ser Arg Ser Ala Leu Leu Lys Ser Lys Leu Arg Ala Leu LeuTyr Gly Ser Arg Ser Ala Leu Leu Lys Ser Lys Leu Arg Ala Leu Leu
1 5 10 151 5 10 15
Thr Ala Pro GlyThr Ala Pro Gly
2020
<210> 376<210> 376
<211> 21<211> 21
<212> PRT<212>PRT
<213> искусственная<213> artificial
<220><220>
<223> N-концевая последовательность (с эталонной aa)<223> N-terminal sequence (with reference aa)
<400> 376<400> 376
Tyr Gly Ser Ala Val Gln Val Lys Leu Glu Leu Gly His Arg Pro AspTyr Gly Ser Ala Val Gln Val Lys Leu Glu Leu Gly His Arg Pro Asp
1 5 10 151 5 10 15
Gly Gly Ser Gly GlyGly Gly Ser Gly Gly
2020
<210> 377<210> 377
<211> 20<211> 20
<212> PRT<212>PRT
<213> искусственная<213> artificial
<220><220>
<223> C-концевая последовательность (с эталонной aa)<223> C-terminal sequence (with reference aa)
<400> 377<400> 377
Gly Ser Asn His Leu Arg Ser Glu Lys Leu Thr Phe Asn Ser Gly AsnGly Ser Asn His Leu Arg Ser Glu Lys Leu Thr Phe Asn Ser Gly Asn
1 5 10 151 5 10 15
Arg Pro Ser GlyArg Pro Ser Gly
2020
<210> 378<210> 378
<211> 15<211> 15
<212> PRT<212>PRT
<213> искусственная<213> artificial
<220><220>
<223> N-концевая последовательность (с эталонной aa)<223> N-terminal sequence (with reference aa)
<400> 378<400> 378
Cys Gly Ser Gly Ser Gly Ser Gly Pro Asp Gly Gly Ser Gly GlyCys Gly Ser Gly Ser Gly Ser Gly Pro Asp Gly Gly Ser Gly Gly
1 5 10 151 5 10 15
<210> 379<210> 379
<211> 10<211> 10
<212> PRT<212>PRT
<213> искусственная<213> artificial
<220><220>
<223> C-концевая последовательность (с эталонной aa)<223> C-terminal sequence (with reference aa)
<400> 379<400> 379
Gly Ser Gly Ser Gly Ser Gly Ser Gly PheGly Ser Gly Ser Gly Ser Gly Ser Gly Phe
1 5 101 5 10
<210> 380<210> 380
<211> 17<211> 17
<212> PRT<212>PRT
<213> искусственная<213> artificial
<220><220>
<223> N-концевая последовательность (с эталонной aa)<223> N-terminal sequence (with reference aa)
<400> 380<400> 380
Cys Gln Ser Tyr Asp Ile Leu Pro Ile Glu Pro Asp Gly Gly Ser GlyCys Gln Ser Tyr Asp Ile Leu Pro Ile Glu Pro Asp Gly Gly Ser Gly
1 5 10 151 5 10 15
GlyGly
<210> 381<210> 381
<211> 11<211> 11
<212> PRT<212>PRT
<213> искусственная<213> artificial
<220><220>
<223> C-концевая последовательность (с эталонной aa)<223> C-terminal sequence (with reference aa)
<400> 381<400> 381
Gly Ser Arg Phe Asp Tyr Asp Gly Val Val PheGly Ser Arg Phe Asp Tyr Asp Gly Val Val Phe
1 5 101 5 10
<210> 382<210> 382
<211> 17<211> 17
<212> PRT<212>PRT
<213> искусственная<213> artificial
<220><220>
<223> N-концевая последовательность (с эталонной aa)<223> N-terminal sequence (with reference aa)
<400> 382<400> 382
Cys Gly Ser Gly Ser Gly Ser Gly Ser Gly Pro Asp Gly Gly Ser GlyCys Gly Ser Gly Ser Gly Ser Gly Ser Gly Pro Asp Gly Gly Ser Gly
1 5 10 151 5 10 15
GlyGly
<210> 383<210> 383
<211> 12<211> 12
<212> PRT<212>PRT
<213> искусственная<213> artificial
<220><220>
<223> C-концевая последовательность (с эталонной aa)<223> C-terminal sequence (with reference aa)
<400> 383<400> 383
Gly Ser Gly Ser Gly Ser Gly Ser Gly Ser Gly PheGly Ser Gly Ser Gly Ser Gly Ser Gly Ser Gly Phe
1 5 101 5 10
<210> 384<210> 384
<211> 17<211> 17
<212> PRT<212>PRT
<213> искусственная<213> artificial
<220><220>
<223> N-концевая последовательность (с эталонной aa)<223> N-terminal sequence (with reference aa)
<400> 384<400> 384
Cys Gly Ser Gly Ser Gly Ser Gly Ser Gly Ser Gly Gly Gly Ser GlyCys Gly Ser Gly Ser Gly Ser Gly Ser Gly Ser Gly Gly Gly Ser Gly
1 5 10 151 5 10 15
GlyGly
<210> 385<210> 385
<211> 14<211> 14
<212> PRT<212>PRT
<213> искусственная<213> artificial
<220><220>
<223> C-концевая последовательность (с эталонной aa)<223> C-terminal sequence (with reference aa)
<400> 385<400> 385
Gly Ser Gly Ser Gly Ser Gly Ser Gly Ser Gly Ser Gly PheGly Ser Gly Ser Gly Ser Gly Ser Gly Ser Gly Ser Gly Phe
1 5 101 5 10
<210> 386<210> 386
<211> 18<211> 18
<212> PRT<212>PRT
<213> искусственная<213> artificial
<220><220>
<223> N-концевая последовательность (с эталонной aa)<223> N-terminal sequence (with reference aa)
<400> 386<400> 386
Cys Gln Ser Tyr Asp Lys Leu Glu Leu Gly His Pro Asp Gly Gly SerCys Gln Ser Tyr Asp Lys Leu Glu Leu Gly His Pro Asp Gly Gly Ser
1 5 10 151 5 10 15
Gly GlyGly Gly
<210> 387<210> 387
<211> 12<211> 12
<212> PRT<212>PRT
<213> искусственная<213> artificial
<220><220>
<223> C-концевая последовательность (с эталонной aa)<223> C-terminal sequence (with reference aa)
<400> 387<400> 387
Gly Ser His Leu Arg Ser Glu Lys Gly Val Val PheGly Ser His Leu Arg Ser Glu Lys Gly Val Val Phe
1 5 101 5 10
<210> 388<210> 388
<211> 19<211> 19
<212> PRT<212>PRT
<213> искусственная<213> artificial
<220><220>
<223> N-концевая последовательность (с эталонной aa)<223> N-terminal sequence (with reference aa)
<400> 388<400> 388
Cys Gln Ser Tyr Asp Ile Leu Pro Ile Glu Val Tyr Pro Asp Gly GlyCys Gln Ser Tyr Asp Ile Leu Pro Ile Glu Val Tyr Pro Asp Gly Gly
1 5 10 151 5 10 15
Ser Gly GlySer Gly Gly
<210> 389<210> 389
<211> 13<211> 13
<212> PRT<212>PRT
<213> искусственная<213> artificial
<220><220>
<223> C-концевая последовательность (с эталонной aa)<223> C-terminal sequence (with reference aa)
<400> 389<400> 389
Gly Ser Lys Val Arg Phe Asp Tyr Asp Gly Val Val PheGly Ser Lys Val Arg Phe Asp Tyr Asp Gly Val Val Phe
1 5 101 5 10
<210> 390<210> 390
<211> 19<211> 19
<212> PRT<212>PRT
<213> искусственная<213> artificial
<220><220>
<223> N-концевая последовательность (с эталонной aa)<223> N-terminal sequence (with reference aa)
<400> 390<400> 390
Cys Gly Ser Gly Ser Gly Ser Gly Ser Gly Ser Gly Pro Asp Gly GlyCys Gly Ser Gly Ser Gly Ser Gly Ser Gly Ser Gly Pro Asp Gly Gly
1 5 10 151 5 10 15
Ser Gly GlySer Gly Gly
<210> 391<210> 391
<211> 19<211> 19
<212> PRT<212>PRT
<213> искусственная<213> artificial
<220><220>
<223> N-концевая последовательность (с эталонной aa)<223> N-terminal sequence (with reference aa)
<400> 391<400> 391
Cys Gly Ser Gly Ser Gly Ser Gly Ser Gly Ser Gly Ser Asp Gly GlyCys Gly Ser Gly Ser Gly Ser Gly Ser Gly Ser Gly Ser Asp Gly Gly
1 5 10 151 5 10 15
Ser Gly GlySer Gly Gly
<210> 392<210> 392
<211> 19<211> 19
<212> PRT<212>PRT
<213> искусственная<213> artificial
<220><220>
<223> N-концевая последовательность (с эталонной aa)<223> N-terminal sequence (with reference aa)
<400> 392<400> 392
Cys Gln Ser Tyr Asp Gly Phe Ile Leu Pro Ile Glu Val Tyr Gly GlyCys Gln Ser Tyr Asp Gly Phe Ile Leu Pro Ile Glu Val Tyr Gly Gly
1 5 10 151 5 10 15
Ser Gly GlySer Gly Gly
<210> 393<210> 393
<211> 15<211> 15
<212> PRT<212>PRT
<213> искусственная<213> artificial
<220><220>
<223> C-концевая последовательность (с эталонной aa)<223> C-terminal sequence (with reference aa)
<400> 393<400> 393
Gly Ser Lys Val Arg Phe Asp Tyr Asp Leu Phe Gly Val Val PheGly Ser Lys Val Arg Phe Asp Tyr Asp Leu Phe Gly Val Val Phe
1 5 10 151 5 10 15
<210> 394<210> 394
<211> 20<211> 20
<212> PRT<212>PRT
<213> искусственная<213> artificial
<220><220>
<223> N-концевая последовательность (с эталонной aa)<223> N-terminal sequence (with reference aa)
<400> 394<400> 394
Cys Gln Ser Tyr Asp Lys Leu Glu Leu Gly His Arg Ala Pro Asp GlyCys Gln Ser Tyr Asp Lys Leu Glu Leu Gly His Arg Ala Pro Asp Gly
1 5 10 151 5 10 15
Gly Ser Gly GlyGly Ser Gly Gly
2020
<210> 395<210> 395
<211> 14<211> 14
<212> PRT<212>PRT
<213> искусственная<213> artificial
<220><220>
<223> C-концевая последовательность (с эталонной aa)<223> C-terminal sequence (with reference aa)
<400> 395<400> 395
Gly Ser Val Asn His Leu Arg Ser Glu Lys Gly Val Val PheGly Ser Val Asn His Leu Arg Ser Glu Lys Gly Val Val Phe
1 5 101 5 10
<210> 396<210> 396
<211> 20<211> 20
<212> PRT<212>PRT
<213> искусственная<213> artificial
<220><220>
<223> N-концевая последовательность (с эталонной aa)<223> N-terminal sequence (with reference aa)
<400> 396<400> 396
Cys Gln Val His Gln Glu Thr Lys Lys Tyr Gln Ser Ser Pro Asp GlyCys Gln Val His Gln Glu Thr Lys Lys Tyr Gln Ser Ser Pro Asp Gly
1 5 10 151 5 10 15
Gly Ser Gly GlyGly Ser Gly Gly
2020
<210> 397<210> 397
<211> 15<211> 15
<212> PRT<212>PRT
<213> искусственная<213> artificial
<220><220>
<223> C-концевая последовательность (с эталонной aa)<223> C-terminal sequence (with reference aa)
<400> 397<400> 397
Gly Ser Tyr Ser Tyr Thr Tyr Asn Tyr Glu Trp His Val Val PheGly Ser Tyr Ser Tyr Thr Tyr Asn Tyr Glu Trp His Val Val Phe
1 5 10 151 5 10 15
<210> 398<210> 398
<211> 20<211> 20
<212> PRT<212>PRT
<213> искусственная<213> artificial
<220><220>
<223> N-концевая последовательность (с эталонной aa)<223> N-terminal sequence (with reference aa)
<400> 398<400> 398
Cys Gly Ser Gly Ser Gly Ser Gly Ser Gly Ser Gly Ser Pro Asp GlyCys Gly Ser Gly Ser Gly Ser Gly Ser Gly Ser Gly Ser Pro Asp Gly
1 5 10 151 5 10 15
Gly Ser Gly GlyGly Ser Gly Gly
2020
<210> 399<210> 399
<211> 15<211> 15
<212> PRT<212>PRT
<213> искусственная<213> artificial
<220><220>
<223> C-концевая последовательность (с эталонной aa)<223> C-terminal sequence (with reference aa)
<400> 399<400> 399
Gly Ser Tyr Gly Ser Gly Ser Gly Ser Gly Ser Gly Ser Gly PheGly Ser Tyr Gly Ser Gly Ser Gly Ser Gly Ser Gly Ser Gly Phe
1 5 10 151 5 10 15
<210> 400<210> 400
<211> 20<211> 20
<212> PRT<212>PRT
<213> искусственная<213> artificial
<220><220>
<223> N-концевая последовательность (с эталонной aa)<223> N-terminal sequence (with reference aa)
<400> 400<400> 400
Cys Gln Ser Tyr Asp Pro Asn Pro Asn Pro Asn Pro Asn Pro Asp GlyCys Gln Ser Tyr Asp Pro Asn Pro Asn Pro Asn Pro Asn Pro Asp Gly
1 5 10 151 5 10 15
Gly Ser Gly GlyGly Ser Gly Gly
2020
<210> 401<210> 401
<211> 15<211> 15
<212> PRT<212>PRT
<213> искусственная<213> artificial
<220><220>
<223> C-концевая последовательность (с эталонной aa)<223> C-terminal sequence (with reference aa)
<400> 401<400> 401
Gly Ser Asn Pro Asn Pro Asn Pro Asn Pro Ser Gly Val Val PheGly Ser Asn Pro Asn Pro Asn Pro Asn Pro Ser Gly Val Val Phe
1 5 10 151 5 10 15
<210> 402<210> 402
<211> 20<211> 20
<212> PRT<212>PRT
<213> искусственная<213> artificial
<220><220>
<223> N-концевая последовательность (с эталонной aa)<223> N-terminal sequence (with reference aa)
<400> 402<400> 402
Cys Ala Ala Trp Asn Pro Asn Pro Asn Pro Asn Pro Asn Pro Asn GlyCys Ala Ala Trp Asn Pro Asn Pro Asn Pro Asn Pro Asn Pro Asn Gly
1 5 10 151 5 10 15
Gly Ser Gly GlyGly Ser Gly Gly
2020
<210> 403<210> 403
<211> 15<211> 15
<212> PRT<212>PRT
<213> искусственная<213> artificial
<220><220>
<223> C-концевая последовательность (с эталонной aa)<223> C-terminal sequence (with reference aa)
<400> 403<400> 403
Gly Ser Asn Pro Asn Pro Asn Pro Asn Pro Asn Pro Asn Val PheGly Ser Asn Pro Asn Pro Asn Pro Asn Pro Asn Pro Asn Val Phe
1 5 10 151 5 10 15
<210> 404<210> 404
<211> 20<211> 20
<212> PRT<212>PRT
<213> искусственная<213> artificial
<220><220>
<223> N-концевая последовательность (с эталонной aa)<223> N-terminal sequence (with reference aa)
<400> 404<400> 404
Cys Gln Ser Tyr Asp Gln Val Lys Leu Glu Leu Gly His Arg Ala GlyCys Gln Ser Tyr Asp Gln Val Lys Leu Glu Leu Gly His Arg Ala Gly
1 5 10 151 5 10 15
Gly Ser Gly GlyGly Ser Gly Gly
2020
<210> 405<210> 405
<211> 16<211> 16
<212> PRT<212>PRT
<213> искусственная<213> artificial
<220><220>
<223> C-концевая последовательность (с эталонной aa)<223> C-terminal sequence (with reference aa)
<400> 405<400> 405
Gly Ser Val Asn His Leu Arg Ser Glu Lys Leu Thr Gly Val Val PheGly Ser Val Asn His Leu Arg Ser Glu Lys Leu Thr Gly Val Val Phe
1 5 10 151 5 10 15
<210> 406<210> 406
<211> 21<211> 21
<212> PRT<212>PRT
<213> искусственная<213> artificial
<220><220>
<223> N-концевая последовательность (с эталонной aa)<223> N-terminal sequence (with reference aa)
<400> 406<400> 406
Cys Gln Ser Val His Gln Glu Thr Lys Lys Tyr Gln Ser Ser Pro AspCys Gln Ser Val His Gln Glu Thr Lys Lys Tyr Gln Ser Ser Pro Asp
1 5 10 151 5 10 15
Gly Gly Ser Gly GlyGly Gly Ser Gly Gly
2020
<210> 407<210> 407
<211> 21<211> 21
<212> PRT<212>PRT
<213> искусственная<213> artificial
<220><220>
<223> N-концевая последовательность (с эталонной aa)<223> N-terminal sequence (with reference aa)
<400> 407<400> 407
Cys Gln Ser Tyr Asp Gln Val Lys Leu Glu Leu Gly His Arg Pro AspCys Gln Ser Tyr Asp Gln Val Lys Leu Glu Leu Gly His Arg Pro Asp
1 5 10 151 5 10 15
Gly Gly Ser Gly GlyGly Gly Ser Gly Gly
2020
<210> 408<210> 408
<211> 15<211> 15
<212> PRT<212>PRT
<213> искусственная<213> artificial
<220><220>
<223> C-концевая последовательность (с эталонной aa)<223> C-terminal sequence (with reference aa)
<400> 408<400> 408
Gly Ser Asn His Leu Arg Ser Glu Lys Leu Thr Gly Val Val PheGly Ser Asn His Leu Arg Ser Glu Lys Leu Thr Gly Val Val Phe
1 5 10 151 5 10 15
<210> 409<210> 409
<211> 21<211> 21
<212> PRT<212>PRT
<213> искусственная<213> artificial
<220><220>
<223> N-концевая последовательность (с эталонной aa)<223> N-terminal sequence (with reference aa)
<400> 409<400> 409
Cys Gln Ser Tyr Asp Gly Phe Ile Leu Pro Ile Glu Val Tyr Pro AspCys Gln Ser Tyr Asp Gly Phe Ile Leu Pro Ile Glu Val Tyr Pro Asp
1 5 10 151 5 10 15
Gly Gly Ser Gly GlyGly Gly Ser Gly Gly
2020
<210> 410<210> 410
<211> 16<211> 16
<212> PRT<212>PRT
<213> искусственная<213> artificial
<220><220>
<223> C-концевая последовательность (с эталонной aa)<223> C-terminal sequence (with reference aa)
<400> 410<400> 410
Gly Ser Tyr Ser Tyr Thr Tyr Asn Tyr Glu Trp His Val Asp Val PheGly Ser Tyr Ser Tyr Thr Tyr Asn Tyr Glu Trp His Val Asp Val Phe
1 5 10 151 5 10 15
<210> 411<210> 411
<211> 16<211> 16
<212> PRT<212>PRT
<213> искусственная<213> artificial
<220><220>
<223> C-концевая последовательность (с эталонной aa)<223> C-terminal sequence (with reference aa)
<400> 411<400> 411
Gly Ser Tyr Ser Tyr Thr Tyr Asn Tyr Glu Trp His Val Val Val PheGly Ser Tyr Ser Tyr Thr Tyr Asn Tyr Glu Trp His Val Val Val Phe
1 5 10 151 5 10 15
<210> 412<210> 412
<211> 21<211> 21
<212> PRT<212>PRT
<213> искусственная<213> artificial
<220><220>
<223> N-концевая последовательность (с эталонной aa)<223> N-terminal sequence (with reference aa)
<400> 412<400> 412
Cys Gly Gly Ser Gly Ser Gly Ser Gly Ser Gly Ser Gly Ser Pro AspCys Gly Gly Ser Gly Ser Gly Ser Gly Ser Gly Ser Gly Ser Pro Asp
1 5 10 151 5 10 15
Gly Gly Ser Gly GlyGly Gly Ser Gly Gly
2020
<210> 413<210> 413
<211> 16<211> 16
<212> PRT<212>PRT
<213> искусственная<213> artificial
<220><220>
<223> C-концевая последовательность (с эталонной aa)<223> C-terminal sequence (with reference aa)
<400> 413<400> 413
Gly Ser Tyr Gly Ser Gly Ser Gly Ser Gly Ser Gly Ser Gly Gly PheGly Ser Tyr Gly Ser Gly Ser Gly Ser Gly Ser Gly Ser Gly Gly Phe
1 5 10 151 5 10 15
<210> 414<210> 414
<211> 22<211> 22
<212> PRT<212>PRT
<213> искусственная<213> artificial
<220><220>
<223> N-концевая последовательность (с эталонной aa)<223> N-terminal sequence (with reference aa)
<400> 414<400> 414
Cys Gln Ser Tyr Asp Ser Ser Ala Leu Leu Lys Ser Lys Leu Arg AlaCys Gln Ser Tyr Asp Ser Ser Ala Leu Leu Lys Ser Lys Leu Arg Ala
1 5 10 151 5 10 15
Leu Leu Thr Ala Pro ArgLeu Leu Thr Ala Pro Arg
2020
<210> 415<210> 415
<211> 22<211> 22
<212> PRT<212>PRT
<213> искусственная<213> artificial
<220><220>
<223> N-концевая последовательность (с эталонной aa)<223> N-terminal sequence (with reference aa)
<400> 415<400> 415
Cys Gln Ser Ala Val Gln Val Lys Leu Glu Leu Gly His Arg Ala ProCys Gln Ser Ala Val Gln Val Lys Leu Glu Leu Gly His Arg Ala Pro
1 5 10 151 5 10 15
Asp Gly Gly Ser Gly GlyAsp Gly Gly Ser Gly Gly
2020
<210> 416<210> 416
<211> 16<211> 16
<212> PRT<212>PRT
<213> искусственная<213> artificial
<220><220>
<223> C-концевая последовательность (с эталонной aa)<223> C-terminal sequence (with reference aa)
<400> 416<400> 416
Gly Ser Val Asn His Leu Arg Ser Glu Lys Leu Thr Phe Asn Val PheGly Ser Val Asn His Leu Arg Ser Glu Lys Leu Thr Phe Asn Val Phe
1 5 10 151 5 10 15
<210> 417<210> 417
<211> 22<211> 22
<212> PRT<212>PRT
<213> искусственная<213> artificial
<220><220>
<223> N-концевая последовательность (с эталонной aa)<223> N-terminal sequence (with reference aa)
<400> 417<400> 417
Cys Gln Ser Tyr Asp Gln Val Lys Leu Glu Leu Gly His Arg Ala ProCys Gln Ser Tyr Asp Gln Val Lys Leu Glu Leu Gly His Arg Ala Pro
1 5 10 151 5 10 15
Asp Gly Gly Ser Gly GlyAsp Gly Gly Ser Gly Gly
2020
<210> 418<210> 418
<211> 22<211> 22
<212> PRT<212>PRT
<213> искусственная<213> artificial
<220><220>
<223> N-концевая последовательность (с эталонной aa)<223> N-terminal sequence (with reference aa)
<400> 418<400> 418
Cys Gln Ser Tyr Asp Gly Phe Ile Leu Pro Ile Glu Val Tyr Phe ProCys Gln Ser Tyr Asp Gly Phe Ile Leu Pro Ile Glu Val Tyr Phe Pro
1 5 10 151 5 10 15
Asp Gly Gly Ser Gly GlyAsp Gly Gly Ser Gly Gly
2020
<210> 419<210> 419
<211> 16<211> 16
<212> PRT<212>PRT
<213> искусственная<213> artificial
<220><220>
<223> C-концевая последовательность (с эталонной aa)<223> C-terminal sequence (with reference aa)
<400> 419<400> 419
Gly Ser Arg Lys Val Arg Phe Asp Tyr Asp Leu Phe Gly Val Val PheGly Ser Arg Lys Val Arg Phe Asp Tyr Asp Leu Phe Gly Val Val Phe
1 5 10 151 5 10 15
<210> 420<210> 420
<211> 22<211> 22
<212> PRT<212>PRT
<213> искусственная<213> artificial
<220><220>
<223> N-концевая последовательность (с эталонной aa)<223> N-terminal sequence (with reference aa)
<400> 420<400> 420
Cys Gln Ser Tyr Val His Gln Glu Thr Lys Lys Tyr Gln Ser Ser ProCys Gln Ser Tyr Val His Gln Glu Thr Lys Lys Tyr Gln Ser Ser Pro
1 5 10 151 5 10 15
Asp Gly Gly Ser Gly GlyAsp Gly Gly Ser Gly Gly
2020
<210> 421<210> 421
<211> 17<211> 17
<212> PRT<212>PRT
<213> искусственная<213> artificial
<220><220>
<223> C-концевая последовательность (с эталонной aa)<223> C-terminal sequence (with reference aa)
<400> 421<400> 421
Gly Ser Tyr Ser Tyr Thr Tyr Asn Tyr Glu Trp His Val Gly Val ValGly Ser Tyr Ser Tyr Thr Tyr Asn Tyr Glu Trp His Val Gly Val Val
1 5 10 151 5 10 15
PhePhe
<210> 422<210> 422
<211> 23<211> 23
<212> PRT<212>PRT
<213> искусственная<213> artificial
<220><220>
<223> N-концевая последовательность (с эталонной aa)<223> N-terminal sequence (with reference aa)
<400> 422<400> 422
Cys Gln Ser Tyr Asp Val His Gln Glu Thr Lys Lys Tyr Gln Ser SerCys Gln Ser Tyr Asp Val His Gln Glu Thr Lys Lys Tyr Gln Ser Ser
1 5 10 151 5 10 15
Pro Asp Gly Gly Ser Gly GlyPro Asp Gly Gly Ser Gly Gly
2020
<210> 423<210> 423
<211> 18<211> 18
<212> PRT<212>PRT
<213> искусственная<213> artificial
<220><220>
<223> C-концевая последовательность (с эталонной aa)<223> C-terminal sequence (with reference aa)
<400> 423<400> 423
Gly Ser Tyr Ser Tyr Thr Tyr Asn Tyr Glu Trp His Val Ser Gly ValGly Ser Tyr Ser Tyr Thr Tyr Asn Tyr Glu Trp His Val Ser Gly Val
1 5 10 151 5 10 15
Val PheVal Phe
<210> 424<210> 424
<211> 24<211> 24
<212> PRT<212>PRT
<213> искусственная<213> artificial
<220><220>
<223> N-концевая последовательность (с эталонной aa)<223> N-terminal sequence (with reference aa)
<400> 424<400> 424
Cys Gln Ser Tyr Asp Ala Val Gln Val Lys Leu Glu Leu Gly His ArgCys Gln Ser Tyr Asp Ala Val Gln Val Lys Leu Glu Leu Gly His Arg
1 5 10 151 5 10 15
Ala Pro Asp Gly Gly Ser Gly GlyAla Pro Asp Gly Gly Ser Gly Gly
2020
<210> 425<210> 425
<211> 18<211> 18
<212> PRT<212>PRT
<213> искусственная<213> artificial
<220><220>
<223> C-концевая последовательность (с эталонной aa)<223> C-terminal sequence (with reference aa)
<400> 425<400> 425
Gly Ser Val Asn His Leu Arg Ser Glu Lys Leu Thr Phe Asn Gly ValGly Ser Val Asn His Leu Arg Ser Glu Lys Leu Thr Phe Asn Gly Val
1 5 10 151 5 10 15
Val PheVal Phe
<210> 426<210> 426
<211> 25<211> 25
<212> PRT<212>PRT
<213> искусственная<213> artificial
<220><220>
<223> N-концевая последовательность (с эталонной aa)<223> N-terminal sequence (with reference aa)
<400> 426<400> 426
Cys Gln Ser Tyr Asp Ser Ser Asp Arg Ser Ala Leu Leu Lys Ser LysCys Gln Ser Tyr Asp Ser Ser Asp Arg Ser Ala Leu Leu Lys Ser Lys
1 5 10 151 5 10 15
Leu Arg Ala Leu Leu Thr Ala Pro ArgLeu Arg Ala Leu Leu Thr Ala Pro Arg
20 2520 25
<210> 427<210> 427
<211> 19<211> 19
<212> PRT<212>PRT
<213> искусственная<213> artificial
<220><220>
<223> C-концевая последовательность (с эталонной aa)<223> C-terminal sequence (with reference aa)
<400> 427<400> 427
Gly Ser Gly Gly Ser Val Asn His Leu Arg Ser Glu Lys Leu Thr GlyGly Ser Gly Gly Ser Val Asn His Leu Arg Ser Glu Lys Leu Thr Gly
1 5 10 151 5 10 15
Val Val PheVal Val Phe
<210> 428<210> 428
<211> 21<211> 21
<212> PRT<212>PRT
<213> искусственная<213> artificial
<220><220>
<223> C-концевая последовательность (с эталонной aa)<223> C-terminal sequence (with reference aa)
<400> 428<400> 428
Gly Ser Asp Arg Ser Ala Leu Leu Lys Ser Lys Leu Arg Ala Leu LeuGly Ser Asp Arg Ser Ala Leu Leu Lys Ser Lys Leu Arg Ala Leu Leu
1 5 10 151 5 10 15
Thr Ala Val Val PheThr Ala Val Val Phe
2020
<210> 429<210> 429
<211> 25<211> 25
<212> PRT<212>PRT
<213> искусственная<213> artificial
<220><220>
<223> N-концевая последовательность (с эталонной aa)<223> N-terminal sequence (with reference aa)
<400> 429<400> 429
Cys Gln Ser Tyr Asp Ser Ser Asp Arg Ser Ala Leu Leu Lys Ser LysCys Gln Ser Tyr Asp Ser Ser Asp Arg Ser Ala Leu Leu Lys Ser Lys
1 5 10 151 5 10 15
Leu Arg Ala Leu Leu Thr Ala Pro GluLeu Arg Ala Leu Leu Thr Ala Pro Glu
20 2520 25
<210> 430<210> 430
<211> 23<211> 23
<212> PRT<212>PRT
<213> искусственная<213> artificial
<220><220>
<223> N-концевая последовательность (с эталонной aa)<223> N-terminal sequence (with reference aa)
<400> 430<400> 430
Cys Thr Ser Val His Gln Glu Thr Lys Lys Tyr Gln Ser Ser Pro AspCys Thr Ser Val His Gln Glu Thr Lys Lys Tyr Gln Ser Ser Pro Asp
1 5 10 151 5 10 15
Gly Gly Ser Gly Gly Ser GlyGly Gly Ser Gly Gly Ser Gly
2020
<210> 431<210> 431
<211> 20<211> 20
<212> PRT<212>PRT
<213> искусственная<213> artificial
<220><220>
<223> C-концевая последовательность (с эталонной aa)<223> C-terminal sequence (with reference aa)
<400> 431<400> 431
Gly Gly Ser Tyr Ser Tyr Thr Tyr Asn Tyr Glu Trp His Val Asp ValGly Gly Ser Tyr Ser Tyr Thr Tyr Asn Tyr Glu Trp His Val Asp Val
1 5 10 151 5 10 15
Trp Gly Gln GlyTrp Gly Gln Gly
2020
<210> 432<210> 432
<211> 18<211> 18
<212> PRT<212>PRT
<213> искусственная<213> artificial
<220><220>
<223> C-концевая последовательность (с эталонной aa)<223> C-terminal sequence (with reference aa)
<400> 432<400> 432
Ser Tyr Ser Tyr Thr Tyr Asn Tyr Glu Trp His Val Asp Val Trp GlySer Tyr Ser Tyr Thr Tyr Asn Tyr Glu Trp His Val Asp Val Trp Gly
1 5 10 151 5 10 15
Gln GlyGln Gly
<210> 433<210> 433
<211> 22<211> 22
<212> PRT<212>PRT
<213> искусственная<213> artificial
<220><220>
<223> N-концевая последовательность (с эталонной aa)<223> N-terminal sequence (with reference aa)
<400> 433<400> 433
Cys Thr Ser Val His Gln Glu Thr Lys Lys Tyr Gln Ser Ser Pro AspCys Thr Ser Val His Gln Glu Thr Lys Lys Tyr Gln Ser Ser Pro Asp
1 5 10 151 5 10 15
Gly Gly Ser Gly Gly SerGly Gly Ser Gly Gly Ser
2020
<210> 434<210> 434
<211> 24<211> 24
<212> PRT<212>PRT
<213> искусственная<213> artificial
<220><220>
<223> C-концевая последовательность (с эталонной aa)<223> C-terminal sequence (with reference aa)
<400> 434<400> 434
Gly Ser Gly Gly Tyr Gly Ser Tyr Ser Tyr Thr Tyr Asn Tyr Glu TrpGly Ser Gly Gly Tyr Gly Ser Tyr Ser Tyr Thr Tyr Asn Tyr Glu Trp
1 5 10 151 5 10 15
His Val Asp Val Trp Gly Gln GlyHis Val Asp Val Trp Gly Gln Gly
2020
<210> 435<210> 435
<211> 21<211> 21
<212> PRT<212>PRT
<213> искусственная<213> artificial
<220><220>
<223> N-концевая последовательность (с эталонной aa)<223> N-terminal sequence (with reference aa)
<400> 435<400> 435
Cys Gln Ser Tyr Asp Gln Val Lys Leu Glu Leu Gly His Arg Ala GlyCys Gln Ser Tyr Asp Gln Val Lys Leu Glu Leu Gly His Arg Ala Gly
1 5 10 151 5 10 15
Gly Ser Gly Gly SerGly Ser Gly Gly Ser
2020
<210> 436<210> 436
<211> 21<211> 21
<212> PRT<212>PRT
<213> искусственная<213> artificial
<220><220>
<223> C-концевая последовательность (с эталонной aa)<223> C-terminal sequence (with reference aa)
<400> 436<400> 436
Gly Ser Gly Gly Ser Gly Ser Val Asn His Leu Arg Ser Glu Lys LeuGly Ser Gly Gly Ser Gly Ser Val Asn His Leu Arg Ser Glu Lys Leu
1 5 10 151 5 10 15
Thr Gly Val Val PheThr Gly Val Val Phe
2020
<210> 437<210> 437
<211> 24<211> 24
<212> PRT<212>PRT
<213> искусственная<213> artificial
<220><220>
<223> C-концевая последовательность (с эталонной aa)<223> C-terminal sequence (with reference aa)
<400> 437<400> 437
Gly Ser Gly Gly Ser Gly Ser Tyr Ser Tyr Thr Tyr Asn Tyr Glu TrpGly Ser Gly Gly Ser Gly Ser Tyr Ser Tyr Thr Tyr Asn Tyr Glu Trp
1 5 10 151 5 10 15
His Val Asp Val Trp Gly Gln GlyHis Val Asp Val Trp Gly Gln Gly
2020
<210> 438<210> 438
<211> 23<211> 23
<212> PRT<212>PRT
<213> искусственная<213> artificial
<220><220>
<223> C-концевая последовательность (с эталонной aa)<223> C-terminal sequence (with reference aa)
<400> 438<400> 438
Gly Gly Gly Ser Gly Ser Tyr Ser Tyr Thr Tyr Asn Tyr Glu Trp HisGly Gly Gly Ser Gly Ser Tyr Ser Tyr Thr Tyr Asn Tyr Glu Trp His
1 5 10 151 5 10 15
Val Asp Val Trp Gly Gln GlyVal Asp Val Trp Gly Gln Gly
2020
<210> 439<210> 439
<211> 22<211> 22
<212> PRT<212>PRT
<213> искусственная<213> artificial
<220><220>
<223> N-концевая последовательность (с эталонной aa)<223> N-terminal sequence (with reference aa)
<400> 439<400> 439
Cys Thr Ser Val His Gln Glu Thr Lys Lys Tyr Gln Ser Ser Pro TyrCys Thr Ser Val His Gln Glu Thr Lys Lys Tyr Gln Ser Ser Pro Tyr
1 5 10 151 5 10 15
Lys Gly Ala Asn Lys LysLys Gly Ala Asn Lys Lys
2020
<210> 440<210> 440
<211> 20<211> 20
<212> PRT<212>PRT
<213> искусственная<213> artificial
<220><220>
<223> N-концевая последовательность (с эталонной aa)<223> N-terminal sequence (with reference aa)
<400> 440<400> 440
Ile Ser Gly Ser Val Val Val Thr Ser His Gln Ala Pro Gly Gly GlyIle Ser Gly Ser Val Val Val Thr Ser His Gln Ala Pro Gly Gly Gly
1 5 10 151 5 10 15
Ser Gly Gly SerSer Gly Gly Ser
2020
<210> 441<210> 441
<211> 19<211> 19
<212> PRT<212>PRT
<213> искусственная<213> artificial
<220><220>
<223> C-концевая последовательность (с эталонной aa)<223> C-terminal sequence (with reference aa)
<400> 441<400> 441
Gly Ser Gly Gly Ser Gly Glu Lys Lys Lys Leu Lys Ser Leu Ala TyrGly Ser Gly Gly Ser Gly Glu Lys Lys Lys Leu Lys Ser Leu Ala Tyr
1 5 10 151 5 10 15
Gly Ser ThrGly Ser Thr
<210> 442<210> 442
<211> 499<211> 499
<212> PRT<212>PRT
<213> искусственная<213> artificial
<220><220>
<223> NP привитая HC<223> NP grafted HC
<400> 442<400> 442
Glu Val Gln Leu Leu Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly GlyGlu Val Gln Leu Leu Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1 5 10 151 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser TyrSer Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr
20 25 3020 25 30
Ala Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp ValAla Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 4535 40 45
Ser Ala Ile Ser Gly Ser Gly Gly Ser Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser ValSer Ala Ile Ser Gly Ser Gly Gly Ser Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val
50 55 6050 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu TyrLys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr
65 70 75 8065 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr CysLeu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 9585 90 95
Thr Ser Val His Gln Glu Thr Lys Lys Tyr Gln Ser Ser Pro Asp GlyThr Ser Val His Gln Glu Thr Lys Lys Tyr Gln Ser Ser Pro Asp Gly
100 105 110100 105 110
Gly Ser Gly Gly Met Val Gln Gly Ser Gly Cys Phe Gly Arg Lys MetGly Ser Gly Gly Met Val Gln Gly Ser Gly Cys Phe Gly Arg Lys Met
115 120 125115 120 125
Asp Arg Ile Ser Ser Ser Ser Gly Leu Gly Cys Lys Val Leu Arg ArgAsp Arg Ile Ser Ser Ser Ser Gly Leu Gly Cys Lys Val Leu Arg Arg
130 135 140130 135 140
Gly Ser Tyr Ser Tyr Thr Tyr Asn Tyr Glu Trp His Val Asp Val TrpGly Ser Tyr Ser Tyr Thr Tyr Asn Tyr Glu Trp His Val Asp Val Trp
145 150 155 160145 150 155 160
Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly ProGly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro
165 170 175165 170 175
Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly ThrSer Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr
180 185 190180 185 190
Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val ThrAla Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr
195 200 205195 200 205
Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe ProVal Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro
210 215 220210 215 220
Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val ThrAla Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr
225 230 235 240225 230 235 240
Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val AsnVal Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn
245 250 255245 250 255
His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys SerHis Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys Ser
260 265 270260 265 270
Cys Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu LeuCys Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu
275 280 285275 280 285
Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr LeuGly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu
290 295 300290 295 300
Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val SerMet Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser
305 310 315 320305 310 315 320
His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val GluHis Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu
325 330 335325 330 335
Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser ThrVal His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr
340 345 350340 345 350
Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu AsnTyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn
355 360 365355 360 365
Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala ProGly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro
370 375 380370 375 380
Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro GlnIle Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln
385 390 395 400385 390 395 400
Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln ValVal Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val
405 410 415405 410 415
Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala ValSer Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val
420 425 430420 425 430
Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr ProGlu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro
435 440 445435 440 445
Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu ThrPro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr
450 455 460450 455 460
Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser ValVal Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val
465 470 475 480465 470 475 480
Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser LeuMet His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu
485 490 495485 490 495
Ser Pro GlySer Pro Gly
<210> 443<210> 443
<211> 500<211> 500
<212> PRT<212>PRT
<213> искусственная<213> artificial
<220><220>
<223> NP привитая HC<223> NP grafted HC
<400> 443<400> 443
Glu Val Gln Leu Leu Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly GlyGlu Val Gln Leu Leu Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1 5 10 151 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser TyrSer Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr
20 25 3020 25 30
Ala Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp ValAla Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 4535 40 45
Ser Ala Ile Ser Gly Ser Val Val Val Thr Ser His Gln Ala Pro GlySer Ala Ile Ser Gly Ser Val Val Val Thr Ser His Gln Ala Pro Gly
50 55 6050 55 60
Gly Gly Ser Gly Gly Met Val Gln Gly Ser Gly Cys Phe Gly Arg LysGly Gly Ser Gly Gly Met Val Gln Gly Ser Gly Cys Phe Gly Arg Lys
65 70 75 8065 70 75 80
Met Asp Arg Ile Ser Ser Ser Ser Gly Leu Gly Cys Lys Val Leu ArgMet Asp Arg Ile Ser Ser Ser Ser Gly Leu Gly Cys Lys Val Leu Arg
85 90 9585 90 95
Arg Gly Glu Lys Lys Lys Leu Lys Ser Leu Ala Tyr Gly Ser Thr TyrArg Gly Glu Lys Lys Lys Leu Lys Ser Leu Ala Tyr Gly Ser Thr Tyr
100 105 110100 105 110
Tyr Ala Asp Ser Val Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn SerTyr Ala Asp Ser Val Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser
115 120 125115 120 125
Lys Asn Thr Leu Tyr Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp ThrLys Asn Thr Leu Tyr Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr
130 135 140130 135 140
Ala Val Tyr Tyr Cys Ala Lys Leu Thr Gly Ala Glu Tyr Phe Gln HisAla Val Tyr Tyr Cys Ala Lys Leu Thr Gly Ala Glu Tyr Phe Gln His
145 150 155 160145 150 155 160
Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys GlyTrp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly
165 170 175165 170 175
Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly GlyPro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly
180 185 190180 185 190
Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro ValThr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val
195 200 205195 200 205
Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr PheThr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe
210 215 220210 215 220
Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val ValPro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val
225 230 235 240225 230 235 240
Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn ValThr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val
245 250 255245 250 255
Asn His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Lys Val Glu Pro LysAsn His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys
260 265 270260 265 270
Ser Cys Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu LeuSer Cys Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu
275 280 285275 280 285
Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp ThrLeu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr
290 295 300290 295 300
Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp ValLeu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val
305 310 315 320305 310 315 320
Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly ValSer His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val
325 330 335325 330 335
Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn SerGlu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser
340 345 350340 345 350
Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp LeuThr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu
355 360 365355 360 365
Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro AlaAsn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala
370 375 380370 375 380
Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu ProPro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro
385 390 395 400385 390 395 400
Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn GlnGln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln
405 410 415405 410 415
Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile AlaVal Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala
420 425 430420 425 430
Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr ThrVal Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr
435 440 445435 440 445
Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys LeuPro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu
450 455 460450 455 460
Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys SerThr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser
465 470 475 480465 470 475 480
Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu SerVal Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser
485 490 495485 490 495
Leu Ser Pro GlyLeu Ser Pro Gly
500500
<210> 444<210> 444
<211> 499<211> 499
<212> PRT<212>PRT
<213> искусственная<213> artificial
<220><220>
<223> NP привитая HC<223> NP grafted HC
<400> 444<400> 444
Glu Val Gln Leu Leu Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly GlyGlu Val Gln Leu Leu Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1 5 10 151 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser TyrSer Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr
20 25 3020 25 30
Ala Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp ValAla Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 4535 40 45
Ser Ala Ile Ser Gly Ser Gly Gly Ser Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser ValSer Ala Ile Ser Gly Ser Gly Gly Ser Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val
50 55 6050 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu TyrLys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr
65 70 75 8065 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr CysLeu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 9585 90 95
Ala Lys Gly Ile Thr Gly Thr Lys Lys Tyr Gln Ser Ser Pro Asp GlyAla Lys Gly Ile Thr Gly Thr Lys Lys Tyr Gln Ser Ser Pro Asp Gly
100 105 110100 105 110
Gly Ser Gly Gly Met Val Gln Gly Ser Gly Cys Phe Gly Arg Lys MetGly Ser Gly Gly Met Val Gln Gly Ser Gly Cys Phe Gly Arg Lys Met
115 120 125115 120 125
Asp Arg Ile Ser Ser Ser Ser Gly Leu Gly Cys Lys Val Leu Arg ArgAsp Arg Ile Ser Ser Ser Ser Gly Leu Gly Cys Lys Val Leu Arg Arg
130 135 140130 135 140
Gly Ser Tyr Ser Tyr Thr Tyr Asn Tyr Ala Glu Tyr Phe Gln His TrpGly Ser Tyr Ser Tyr Thr Tyr Asn Tyr Ala Glu Tyr Phe Gln His Trp
145 150 155 160145 150 155 160
Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly ProGly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro
165 170 175165 170 175
Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly ThrSer Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr
180 185 190180 185 190
Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val ThrAla Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr
195 200 205195 200 205
Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe ProVal Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro
210 215 220210 215 220
Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val ThrAla Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr
225 230 235 240225 230 235 240
Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val AsnVal Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn
245 250 255245 250 255
His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys SerHis Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys Ser
260 265 270260 265 270
Cys Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu LeuCys Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu
275 280 285275 280 285
Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr LeuGly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu
290 295 300290 295 300
Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val SerMet Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser
305 310 315 320305 310 315 320
His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val GluHis Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu
325 330 335325 330 335
Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser ThrVal His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr
340 345 350340 345 350
Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu AsnTyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn
355 360 365355 360 365
Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala ProGly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro
370 375 380370 375 380
Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro GlnIle Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln
385 390 395 400385 390 395 400
Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln ValVal Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val
405 410 415405 410 415
Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala ValSer Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val
420 425 430420 425 430
Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr ProGlu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro
435 440 445435 440 445
Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu ThrPro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr
450 455 460450 455 460
Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser ValVal Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val
465 470 475 480465 470 475 480
Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser LeuMet His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu
485 490 495485 490 495
Ser Pro GlySer Pro Gly
<210> 445<210> 445
<211> 499<211> 499
<212> PRT<212>PRT
<213> искусственная<213> artificial
<220><220>
<223> NP привитая HC<223> NP grafted HC
<400> 445<400> 445
Glu Val Gln Leu Leu Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly GlyGlu Val Gln Leu Leu Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1 5 10 151 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser TyrSer Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr
20 25 3020 25 30
Ala Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp ValAla Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 4535 40 45
Ser Ala Ile Ser Gly Ser Gly Gly Ser Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser ValSer Ala Ile Ser Gly Ser Gly Gly Ser Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val
50 55 6050 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu TyrLys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr
65 70 75 8065 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr CysLeu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 9585 90 95
Thr Ser Val His Gln Glu Thr Lys Lys Tyr Gln Ser Ser Pro Tyr LysThr Ser Val His Gln Glu Thr Lys Lys Tyr Gln Ser Ser Pro Tyr Lys
100 105 110100 105 110
Gly Ala Asn Lys Lys Gly Leu Ser Lys Gly Cys Phe Gly Leu Lys LeuGly Ala Asn Lys Lys Gly Leu Ser Lys Gly Cys Phe Gly Leu Lys Leu
115 120 125115 120 125
Asp Arg Ile Gly Ser Met Ser Gly Leu Gly Cys Gly Ser Gly Gly SerAsp Arg Ile Gly Ser Met Ser Gly Leu Gly Cys Gly Ser Gly Gly Ser
130 135 140130 135 140
Gly Ser Tyr Ser Tyr Thr Tyr Asn Tyr Glu Trp His Val Asp Val TrpGly Ser Tyr Ser Tyr Thr Tyr Asn Tyr Glu Trp His Val Asp Val Trp
145 150 155 160145 150 155 160
Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly ProGly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro
165 170 175165 170 175
Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly ThrSer Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr
180 185 190180 185 190
Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val ThrAla Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr
195 200 205195 200 205
Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe ProVal Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro
210 215 220210 215 220
Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val ThrAla Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr
225 230 235 240225 230 235 240
Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val AsnVal Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn
245 250 255245 250 255
His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys SerHis Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys Ser
260 265 270260 265 270
Cys Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu LeuCys Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu
275 280 285275 280 285
Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr LeuGly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu
290 295 300290 295 300
Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val SerMet Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser
305 310 315 320305 310 315 320
His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val GluHis Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu
325 330 335325 330 335
Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser ThrVal His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr
340 345 350340 345 350
Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu AsnTyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn
355 360 365355 360 365
Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala ProGly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro
370 375 380370 375 380
Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro GlnIle Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln
385 390 395 400385 390 395 400
Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln ValVal Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val
405 410 415405 410 415
Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala ValSer Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val
420 425 430420 425 430
Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr ProGlu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro
435 440 445435 440 445
Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu ThrPro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr
450 455 460450 455 460
Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser ValVal Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val
465 470 475 480465 470 475 480
Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser LeuMet His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu
485 490 495485 490 495
Ser Pro GlySer Pro Gly
<210> 446<210> 446
<211> 499<211> 499
<212> PRT<212>PRT
<213> искусственная<213> artificial
<220><220>
<223> NP привитая HC<223> NP grafted HC
<400> 446<400> 446
Glu Val Gln Leu Leu Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly GlyGlu Val Gln Leu Leu Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1 5 10 151 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser TyrSer Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr
20 25 3020 25 30
Ala Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp ValAla Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 4535 40 45
Ser Ala Ile Ser Gly Ser Gly Gly Ser Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser ValSer Ala Ile Ser Gly Ser Gly Gly Ser Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val
50 55 6050 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu TyrLys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr
65 70 75 8065 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr CysLeu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 9585 90 95
Thr Ser Val His Gln Glu Thr Lys Lys Tyr Gln Ser Ser Pro Asp GlyThr Ser Val His Gln Glu Thr Lys Lys Tyr Gln Ser Ser Pro Asp Gly
100 105 110100 105 110
Gly Ser Gly Gly Ser Gly Leu Ser Lys Gly Cys Phe Gly Leu Lys LeuGly Ser Gly Gly Ser Gly Leu Ser Lys Gly Cys Phe Gly Leu Lys Leu
115 120 125115 120 125
Asp Arg Ile Gly Ser Met Ser Gly Leu Gly Cys Gly Ser Gly Gly TyrAsp Arg Ile Gly Ser Met Ser Gly Leu Gly Cys Gly Ser Gly Gly Tyr
130 135 140130 135 140
Gly Ser Tyr Ser Tyr Thr Tyr Asn Tyr Glu Trp His Val Asp Val TrpGly Ser Tyr Ser Tyr Thr Tyr Asn Tyr Glu Trp His Val Asp Val Trp
145 150 155 160145 150 155 160
Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly ProGly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro
165 170 175165 170 175
Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly ThrSer Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr
180 185 190180 185 190
Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val ThrAla Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr
195 200 205195 200 205
Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe ProVal Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro
210 215 220210 215 220
Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val ThrAla Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr
225 230 235 240225 230 235 240
Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val AsnVal Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn
245 250 255245 250 255
His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys SerHis Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys Ser
260 265 270260 265 270
Cys Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu LeuCys Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu
275 280 285275 280 285
Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr LeuGly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu
290 295 300290 295 300
Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val SerMet Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser
305 310 315 320305 310 315 320
His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val GluHis Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu
325 330 335325 330 335
Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser ThrVal His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr
340 345 350340 345 350
Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu AsnTyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn
355 360 365355 360 365
Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala ProGly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro
370 375 380370 375 380
Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro GlnIle Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln
385 390 395 400385 390 395 400
Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln ValVal Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val
405 410 415405 410 415
Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala ValSer Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val
420 425 430420 425 430
Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr ProGlu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro
435 440 445435 440 445
Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu ThrPro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr
450 455 460450 455 460
Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser ValVal Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val
465 470 475 480465 470 475 480
Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser LeuMet His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu
485 490 495485 490 495
Ser Pro GlySer Pro Gly
<210> 447<210> 447
<211> 217<211> 217
<212> PRT<212>PRT
<213> человека<213> person
<400> 447<400> 447
Gln Ser Val Leu Thr Gln Pro Pro Ser Val Ser Gly Ala Pro Gly GlnGln Ser Val Leu Thr Gln Pro Pro Ser Val Ser Gly Ala Pro Gly Gln
1 5 10 151 5 10 15
Arg Val Thr Ile Ser Cys Thr Gly Ser Ser Ser Asn Ile Gly Ala GlyArg Val Thr Ile Ser Cys Thr Gly Ser Ser Ser Asn Ile Gly Ala Gly
20 25 3020 25 30
Tyr Asp Val His Trp Tyr Gln Gln Leu Pro Gly Thr Ala Pro Lys LeuTyr Asp Val His Trp Tyr Gln Gln Leu Pro Gly Thr Ala Pro Lys Leu
35 40 4535 40 45
Leu Ile Tyr Gly Asn Ser Asn Arg Pro Ser Gly Val Pro Asp Arg PheLeu Ile Tyr Gly Asn Ser Asn Arg Pro Ser Gly Val Pro Asp Arg Phe
50 55 6050 55 60
Ser Gly Ser Lys Ser Gly Thr Ser Ala Ser Leu Ala Ile Thr Gly LeuSer Gly Ser Lys Ser Gly Thr Ser Ala Ser Leu Ala Ile Thr Gly Leu
65 70 75 8065 70 75 80
Gln Ala Glu Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Gln Ser Tyr Asp Ser SerGln Ala Glu Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Gln Ser Tyr Asp Ser Ser
85 90 9585 90 95
Leu Asp Gly Val Val Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Thr Val Leu GlyLeu Asp Gly Val Val Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Thr Val Leu Gly
100 105 110100 105 110
Gln Pro Lys Ala Ala Pro Ser Val Thr Leu Phe Pro Pro Ser Ser GluGln Pro Lys Ala Ala Pro Ser Val Thr Leu Phe Pro Pro Ser Ser Glu
115 120 125115 120 125
Glu Leu Gln Ala Asn Lys Ala Thr Leu Val Cys Leu Ile Ser Asp PheGlu Leu Gln Ala Asn Lys Ala Thr Leu Val Cys Leu Ile Ser Asp Phe
130 135 140130 135 140
Tyr Pro Gly Ala Val Thr Val Ala Trp Lys Ala Asp Ser Ser Pro ValTyr Pro Gly Ala Val Thr Val Ala Trp Lys Ala Asp Ser Ser Pro Val
145 150 155 160145 150 155 160
Lys Ala Gly Val Glu Thr Thr Thr Pro Ser Lys Gln Ser Asn Asn LysLys Ala Gly Val Glu Thr Thr Thr Pro Ser Lys Gln Ser Asn Asn Lys
165 170 175165 170 175
Tyr Ala Ala Ser Ser Tyr Leu Ser Leu Thr Pro Glu Gln Trp Lys SerTyr Ala Ala Ser Ser Tyr Leu Ser Leu Thr Pro Glu Gln Trp Lys Ser
180 185 190180 185 190
His Arg Ser Tyr Ser Cys Gln Val Thr His Glu Gly Ser Thr Val GluHis Arg Ser Tyr Ser Cys Gln Val Thr His Glu Gly Ser Thr Val Glu
195 200 205195 200 205
Lys Thr Val Ala Pro Thr Glu Cys SerLys Thr Val Ala Pro Thr Glu Cys Ser
210 215210 215
<---<---
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| EP18167102.5 | 2018-04-12 |
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| RU2024108232ADivisionRU2024108232A (en) | 2018-04-12 | 2019-04-10 | ANTIBODIES GRAFTED WITH ATRIAL NATRIOURETIC PEPTIDE |
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| RU2020136997A RU2020136997A (en) | 2022-05-12 |
| RU2822433C2true RU2822433C2 (en) | 2024-07-05 |
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO2005082004A2 (en)* | 2004-02-24 | 2005-09-09 | Alexion Pharmaceuticals, Inc. | Rationally designed antibodies having a domain-exchanged scaffold |
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO2005082004A2 (en)* | 2004-02-24 | 2005-09-09 | Alexion Pharmaceuticals, Inc. | Rationally designed antibodies having a domain-exchanged scaffold |
| Title |
|---|
| ШАРОШИНА И.А. и др., Роль натрийуретических пептидов в диагностике сердечной недостаточности, РОССИЙСКИЙ КАРДИОЛОГИЧЕСКИЙ ЖУРНАЛ, 2003, N 2(40), стр.81-86.* |
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| US20250236654A1 (en) | C-type natriuretic peptide engrafted antibodies | |
| US12331094B2 (en) | Atrial natriuretic peptide engrafted antibodies | |
| US12390508B2 (en) | Brain natriuretic peptide engrafted antibodies | |
| RU2822433C2 (en) | Atrial natriuretic peptide grafted antibodies | |
| RU2839970C2 (en) | Antibodies with grafted brain natriuretic peptide | |
| RU2828786C2 (en) | C-type natriuretic peptide grafted antibodies | |
| HK40038074A (en) | Brain natriuretic peptide engrafted antibodies | |
| HK40039326A (en) | C-type natriuretic peptide engrafted antibodies | |
| HK40038897A (en) | Atrial natriuretic peptide engrafted antibodies | |
| BR122024006485A2 (en) | ANTIBODIES OR FRAGMENTS THEREOF GRAFTED WITH BRAIN NATRIURETIC PEPTIDE, THEIR USE AND PRODUCTION PROCESS, COMPOSITION, NUCLEIC ACID OR A MIXTURE OF NUCLEIC ACIDS, HOST CELL, PHARMACEUTICAL PACKAGING OR KIT, AND PHARMACEUTICAL COMBINATION | |
| BR122024010018A2 (en) | ANTIBODIES OR FRAGMENTS THEREOF GRAFTED WITH ATRIAL NATRIURETIC PEPTIDE, THEIR USE AND PRODUCTION PROCESS, COMPOSITION, NUCLEIC ACID OR A MIXTURE OF NUCLEIC ACIDS, AND HOST CELL | |
| BR122024007979A2 (en) | ANTIBODIES OR FRAGMENTS THEREOF GRAFTED WITH C-TYPE NATRIURETIC PEPTIDE, THEIR USE AND PRODUCTION PROCESS, COMPOSITION, NUCLEIC ACID OR A MIXTURE OF NUCLEIC ACIDS, HOST CELL, PHARMACEUTICAL PACKAGING OR KIT, AND PHARMACEUTICAL COMBINATION |