RU2741838C1 - Method for determining the presence of a genetic predisposition to human longevity - Google Patents

Abstract

FIELD: biotechnology.SUBSTANCE: invention is method for determining presence of genetic predisposition to human longevity based on data on genetic variant of rs2802288 locus. A real-time polymerase chain reaction is carried out with DNA isolated from human biological material in presence of oligonucleotide probes and primers, and rs2802288 polymorphism of FOXO3A gene is analyzed by allelic discrimination. This is done to predict presence of genetic predisposition to human longevity, which increases by ~ 1.5 times probability of living to 100 years in case of detection of genotype AA (rs2802288) or AG (rs2802288), and absence of genetic predisposition to human longevity, which increases ~ 1.5 times the probability of living to 100 years in case of detection of GG genotype (rs2802288).EFFECT: invention provides accurate, simple, fast and inexpensive method for predicting a person's genetic disposition to longevity.1 cl, 1 dwg

Description

Translated fromRussian

Изобретение относится к молекулярной биологии и медицине, а именно к медицинской генетике, диагностике, геронтологии. Изобретение представляет собой способ определения наличия генетической предрасположенности к долголетию человека. С выделенной из биологического материала человека ДНК проводят полимеразно-цепную реакцию в реальном времени в присутствии олигонуклеотидных зондов и праймеров и анализируют полиморфизм rs2802288 гена FOXO3A методом аллельной дискриминации.The invention relates to molecular biology and medicine, namely to medical genetics, diagnostics, gerontology. The invention is a method for determining the presence of a genetic predisposition to human longevity. A real-time polymerase chain reaction is carried out with DNA isolated from human biological material in the presence of oligonucleotide probes and primers, and the rs2802288 polymorphism of the FOXO3A gene is analyzed by allelic discrimination.

Изобретение обеспечивает получение новых критериев оценки предполагаемой продолжительности жизни на основе генетических факторов, на основе данных о генетическом варианте локуса rs2802288.The invention provides for obtaining new criteria for assessing the expected life expectancy based on genetic factors, based on data on the genetic variant of the rs2802288 locus.

Долголетие человека является многофакторным фенотипом, на который влияют как генетические, так и экологические факторы. Помимо статуса АРОЕ, изменение в гене FOXO3A является единственным подтвержденным генетическим фактором, способствующим увеличенной продолжительности жизни человека.

С, Flachsbart F, Caliebe А, Schreiber S, Nebel A, Krawczak M. Adjustment for smoking does not alter the FOXO3A association with longevity. [1]Human longevity is a multifactorial phenotype that is influenced by both genetic and environmental factors. Apart from APOE status, a change in the FOXO3A gene is the only confirmed genetic factor contributing to an increased human lifespan.

C, Flachsbart F, Caliebe A, Schreiber S, Nebel A, Krawczak M. Adjustment for smoking does not alter the FOXO3A association with longevity. [one]

rs2802288 - это однонуклеотидный полиморфизм (SNP) в гене FOXO3A, кодирующем белок, который является эволюционно консервативным ключевым регулятором сигнального пути инсулин-IGF1. Он играет важную роль в репарации ДНК и апоптозе в ответ на повреждение ДНК и окислительный стресс. Кроме того, FOXO3A может выступать в качестве супрессора образования злокачественных опухолей, и было установлено, что активность FOXO3A подавляется при различных раковых заболеваниях. [1]rs2802288 is a single nucleotide polymorphism (SNP) in the FOXO3A gene, which encodes a protein that is an evolutionarily conserved key regulator of the insulin-IGF1 signaling pathway. It plays an important role in DNA repair and apoptosis in response to DNA damage and oxidative stress. In addition, FOXO3A can act as a tumor suppressor, and FOXO3A activity has been found to be suppressed in various cancers. [one]

Различные исследования показали высокий уровень корреляции между присутствием в геноме человека редкого аллеля rs2802288 и долголетием как для мужчин, так и для женщин. Присутствие хотя бы одной копии аллеля rs2802288(A) увеличивает вероятность дожить до 100 лет в ~1.5 раза. [1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9]Various studies have shown a high level of correlation between the presence of the rare allele rs2802288 in the human genome and longevity for both men and women. The presence of at least one copy of the rs2802288 (A) allele increases the probability of living to 100 years of age by ~ 1.5 times. [1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9]

В изученной доступной патентной литературе авторами не было обнаружено способа определения наличия генетической предрасположенности к долголетию человека на основе полиморфизма rs2802288.In the studied available patent literature, the authors did not find a method for determining the presence of a genetic predisposition to human longevity based on the rs2802288 polymorphism.

В патенте JP 5233666 B2 Life expectancy calculation device, portable terminal device, life expectancy calculation method, and life expectancy calculation program (дата публикации 2013-07-10) предложен прибор, оценивающий продолжительность жизни человека при помощи вычислений, основанных на информации о пульсе. [10] Недостатком данного метода является необходимость приобретения и ношения прибора для регистрации данных, недостаточная репрезентативность такого физиологического фактора, как пульс, в силу влияния множества внешних и внутренних факторов на него и недостаточная информативность, так как метод не включает генетические маркеры и не позволяет оценить передачу данного признака потомкам.JP 5233666 B2 Life expectancy calculation device, portable terminal device, life expectancy calculation method, and life expectancy calculation program (publication date 2013-07-10) proposes a device for estimating human life expectancy using calculations based on heart rate information. [10] The disadvantage of this method is the need to purchase and carry a device for data recording, insufficient representativeness of such a physiological factor as pulse, due to the influence of many external and internal factors on it, and insufficient information content, since the method does not include genetic markers and does not allow assessing transfer of this attribute to descendants.

В заявке WO 2007061941 A2 System and method for estimating life expectancy and providing customized advice for improving life expectancy, 18.11.2005 предложена система, которая рассчитывает и предоставляет человеку оценку ожидаемой продолжительности жизни человека на основе ответов человека на вопросник. [11] Недостатком данного метода является субъективность оценки и недостаточная информативность, так как метод не включает генетические маркеры и не позволяет оценить передачу данного признака потомкам.WO 2007061941 A2 System and method for estimating life expectancy and providing customized advice for improving life expectancy, 18.11.2005, proposes a system that calculates and provides a person with an estimate of a person's life expectancy based on a person's responses to a questionnaire. [11] The disadvantage of this method is the subjectivity of the assessment and insufficient information content, since the method does not include genetic markers and does not allow assessing the transmission of this trait to descendants.

В заявке US 2007241912 A1 «Apparatus and method for calculating life expectancy in mobile communication terminal)), 22.01.2007 предложен прибор, оценивающий продолжительность жизни человека при помощи вычислений, основанных на введенной пользователем информации, такой как текущее состояние пользователя, привычки питания, физические упражнения и окружающая среда. Данные о текущем состоянии пользователя могут быть такими, как пол пользователя, дата рождения, рост и вес. [12] Недостатком данного метода является необходимость приобретения и использования прибора для регистрации данных, субъективность оценки и недостаточная информативность, так как метод не включает генетические маркеры и не позволяет оценить передачу данного признака потомкам.In the application US 2007241912 A1 "Apparatus and method for calculating life expectancy in mobile communication terminal)), January 22, 2007, a device is proposed that estimates the life expectancy of a person using calculations based on information entered by the user, such as the user's current state, eating habits, physical exercise and environment. The user's current state data can be such as the user's gender, date of birth, height and weight. [12] The disadvantage of this method is the need to purchase and use a device for recording data, the subjectivity of the assessment and insufficient information content, since the method does not include genetic markers and does not allow assessing the transmission of this trait to offspring.

Методом, позволяющим проанализировать состояние полиморфизмов rs2251746 и rs2427837 является секвенирование по Сэнгеру - метод, применяемый для детекции любых изменений нуклеотидной последовательности, разработанный Ф. Сэнгером в 1977 году и широко использующийся для изучения нуклеотидной последовательности ДНК человека. Sanger F. "Determination of nucleotide sequences in DNA". Biosci Rep. - 2004. [13] Недостатками данного метода являются его трудоемкость, необходимость в приобретении дорогостоящего оборудования и реактивов, значительно более долгое получение результатов и повышенные риски контаминации лаборатории продуктами полимеразно-цепной реакции (ПЦР) и реакций секвенирования.The method for analyzing the state of the rs2251746 and rs2427837 polymorphisms is Sanger sequencing, a method used to detect any changes in the nucleotide sequence, developed by F. Sanger in 1977 and widely used to study the nucleotide sequence of human DNA. Sanger F. "Determination of nucleotide sequences in DNA". Biosci Rep. - 2004. [13] The disadvantages of this method are its laboriousness, the need to purchase expensive equipment and reagents, significantly longer obtaining results and increased risks of contamination of the laboratory with polymerase chain reaction (PCR) and sequencing reactions.

За прототип нами был выбран патент США №5538848 (US 5538848 A, Kenneth J. Livak, Susan J., A. Flood, Jeffrey Marmaro, Method for detecting nucleic acid amplification using self-quenching fluorescence probe, 23.07.1996), представляющий собой метод анализа ДНК путем проведения полимеразно-цепной реакции в реальном времени в присутствии меченых флуорофорами, аллель-специфичных (TaqMan) зондов и праймеров. [14] Недостатком прототипа является то, что для использования описанного в прототипе метода на практике, с целью исследования различных полиморфизмов, требуется разработка TaqMan зондов и праймеров для каждого отдельного исследуемого полиморфизма.For the prototype, we chose US patent No. 5538848 (US 5538848 A, Kenneth J. Livak, Susan J., A. Flood, Jeffrey Marmaro, Method for detecting nucleic acid amplification using self-quenching fluorescence probe, 07.23.1996), which is DNA analysis method by carrying out polymerase chain reaction in real time in the presence of fluorophore-labeled allele-specific (TaqMan) probes and primers. [14] The disadvantage of the prototype is that the use of the method described in the prototype in practice, in order to study various polymorphisms, requires the development of TaqMan probes and primers for each individual investigated polymorphism.

Технической задачей изобретения является определение возможности наличия генетической предрасположенности к долголетию человека по данным о состоянии полиморфизма rs2802288 точным, простым и быстрым способом.The technical objective of the invention is to determine the possibility of having a genetic predisposition to human longevity according to the data on the state of the rs2802288 polymorphism in an accurate, simple and fast way.

Техническим результатом изобретения является разработка TaqMan зондов и праймеров для анализа полиморфизма rs2802288 методом аллельной дискриминации при помощи следующих TaqMan зондов и праймеров:The technical result of the invention is the development of TaqMan probes and primers for the analysis of rs2802288 polymorphism by allelic discrimination using the following TaqMan probes and primers:

Probe 1: FAM-CTGCAGTAGAAGTTGGCAGTGCTACTGTG-BHQ1Probe 1: FAM-CTGCAGTAGAAGTTGGCAGTGCTACTGTG-BHQ1

Probe 2: ROX-CTGCGGTAGAAGTTGGCAGTGCTACTGTG-BHQ2Probe 2: ROX-CTGCGGTAGAAGTTGGCAGTGCTACTGTG-BHQ2

Pr Fw: CAGCATGCAGGGGAGGACTGTGPr Fw: CAGCATGCAGGGGAGGACTGTG

Pr rev: TCAGGCTTGTACCCAGAGTTGTC,Pr rev: TCAGGCTTGTACCCAGAGTTGTC,

а затем прогнозирование наличия генетической предрасположенности к долголетию человека. Прогнозируют наличие генетической предрасположенности к долголетию человека, которая увеличивает в ~1.5 раза вероятность дожить до 100 лет в случае выявления генотипа AA(rs2802288) или AG(rs2802288) и отсутствие генетической предрасположенности к долголетию человека, которая увеличивает в ~1.5 раза вероятность дожить до 100 лет в случае выявления генотипа GG(rs2802288).and then predicting the presence of a genetic predisposition to human longevity. The presence of a genetic predisposition to human longevity is predicted, which increases by ~ 1.5 times the probability of living to 100 years in case of detection of the AA (rs2802288) or AG (rs2802288) genotype and the absence of a genetic predisposition to human longevity, which increases ~ 1.5 times the probability of living to 100 years in case of detection of the GG genotype (rs2802288).

Описание фигур.Description of figures.

Фиг. 1. Аллельная дискриминация методом детекции TaqMan зондов по данным величин RFU каждого зонда на амплификаторе CFX96 с детектирующей системой в режиме реального времени полиморфизма rs2251746, где:FIG. 1. Allelic discrimination by the TaqMan probe detection method according to the RFU values of each probe on the CFX96 amplifier with a real-time detection system of rs2251746 polymorphism, where:

- отрицательный контроль,

- negative control,

- гомозиготы GG,

- homozygotes GG,

- гетерозиготы AG,

- heterozygotes AG,

- гомозиготы АА.

- AA homozygotes.

Осуществление изобретенияImplementation of the invention

Для достижения указанного технического результата был разработан способ определения наличия генетической предрасположенности к долголетию человека, который осуществляется следующим образом:To achieve this technical result, a method was developed for determining the presence of a genetic predisposition to human longevity, which is carried out as follows:

1. Выделение ДНК из биологического материала пациента1. Isolation of DNA from the patient's biological material

Выделение ДНК из биологического материала пациента осуществляется при помощи коммерческого набора Gene Jet Whole Blood Genomic DNA Purification Mini Kit фирмы ThermoFisher Scientific или любым альтернативным методом выделения ДНК, например, методом фенол-хлороформной экстракции по Мэтью.Isolation of DNA from a patient's biological material is carried out using the commercial Gene Jet Whole Blood Genomic DNA Purification Mini Kit from ThermoFisher Scientific or any alternative DNA extraction method, for example, Matthew's phenol-chloroform extraction method.

2. Анализ полиморфизма rs28022882. Analysis of polymorphism rs2802288

Анализ полиморфизма rs2802288 проводят методом ГТЦР в реальном времени на амплификаторе Bio-Rad CFX96 Real-Time System или аналогичном амплификаторе, с последующим анализом методом аллельной дискриминации.Analysis of rs2802288 polymorphism is carried out by real-time GTCR on a Bio-Rad CFX96 Real-Time System amplifier or a similar amplifier, followed by analysis by allelic discrimination.

Для исследования полиморфизма rs2802288 авторами были разработаны следующие TaqMan зонды и праймеры:To study the rs2802288 polymorphism, the authors developed the following TaqMan probes and primers:

Зонды:Probes:

Probe 1: FAM-CTGCAGTAGAAGTTGGCAGTGCTACTGTG-BHQ1Probe 1: FAM-CTGCAGTAGAAGTTGGCAGTGCTACTGTG-BHQ1

Probe 2: ROX-CTGCGGTAGAAGTTGGCAGTGCTACTGTG-BHQ2Probe 2: ROX-CTGCGGTAGAAGTTGGCAGTGCTACTGTG-BHQ2

Праймеры:Primers:

Pr Fw: CAGCATGCAGGGGAGGACTGTGPr Fw: CAGCATGCAGGGGAGGACTGTG

Pr rev: TCAGGCTTGTACCCAGAGTTGTCPr rev: TCAGGCTTGTACCCAGAGTTGTC

Реакционная смесь объемом 10 мкл включает в себя:The reaction mixture with a volume of 10 μL includes:

1. ДНК = 2.8 мкл,1.DNA = 2.8 μl,

2. Pr Fw = 1 мкл,2. Pr Fw = 1 μl,

3. Pr rev = 1 мкл,3. Pr rev = 1 μl,

4. Probe 1 = 0.1 мкл,4.Probe 1 = 0.1 μl,

5. Probe 2 = 0.1 мкл,5.Probe 2 = 0.1 μl,

6. iTaq Universal Probes supermix фирмы Biorad = 5 мкл,6. iTaq Universal Probes supermix from Biorad = 5 μl,

После денатурации (3 минуты при t=95°C) выполняют 35 циклов амплификации по схеме: 10 секунд при t=95°C, 30 секунд при t=64°C, регистрация флуоресценцииAfter denaturation (3 minutes at t = 95 ° C), 35 amplification cycles are performed according to the scheme: 10 seconds at t = 95 ° C, 30 seconds at t = 64 ° C, registration of fluorescence

При проведении ПЦР в амплификаторе Bio-Rad CFX96 Real-Time System с флюоресцентной детекцией генотипирование осуществляют методом TaqMan зондов по величине RFU (относительных единиц флуоресценции). Для rs2802288 зонд с флуоресцентным красителем FAM соответствует аллелю А, зонд с красителем ROX - аллелю G.When PCR is carried out in a Bio-Rad CFX96 Real-Time System amplifier with fluorescence detection, genotyping is performed by the TaqMan probe method according to the RFU value (relative fluorescence units). For rs2802288, the probe with the fluorescent dye FAM corresponds to allele A, the probe with the ROX dye corresponds to the allele G.

Изобретение охарактеризовано на фигуре 1. На фигуре видно четкое разделение образцов на кластеры, где кластер

соответствует отрицательному контролю, кластер

- гомозиготам GG, не имеющим генетической предрасположенности к долголетию человека, которая увеличивает в ~1.5 раза вероятность дожить до 100 лет, кластер

- гетерозиготам AG, имеющим генетическую предрасположенность к долголетию человека, которая увеличивает в ~1.5 раза вероятность дожить до 100 лет, а кластер

- гомозиготам АА, имеющим генетическую предрасположенность к долголетию человека, которая увеличивает в ~1.5 раза вероятность дожить до 100 лет.The invention is described in figure 1. The figure shows a clear division of the samples into clusters, where the cluster

corresponds to negative control, cluster

- GG homozygotes that do not have a genetic predisposition to human longevity, which increases the probability of living to 100 years by ~ 1.5 times, cluster

- AG heterozygotes with a genetic predisposition to human longevity, which increases the probability of surviving to 100 years by ~ 1.5 times, and the cluster

- AA homozygotes with a genetic predisposition to human longevity, which increases the probability of living to 100 years by ~ 1.5 times.

3. Прогнозирование риска развития заболеваний, связанных с уровнем сывороточного IgE3. Predicting the risk of developing diseases associated with serum IgE levels

rs2251746rs2251746

В случае выявления генотипа АА прогнозируется наличие генетической предрасположенности к долголетию человека, которая увеличивает в ~1.5 раза вероятность дожить до 100 лет.If the AA genotype is detected, a genetic predisposition to human longevity is predicted, which increases the probability of living to 100 years by ~ 1.5 times.

В случае выявления генотипа AG прогнозируется наличие генетической предрасположенности к долголетию, которая увеличивает в ~1.5 раза вероятность дожить до 100 лет.If the AG genotype is detected, the presence of a genetic predisposition to longevity is predicted, which increases the probability of living to 100 years by ~ 1.5 times.

В случае выявления генотипа GG прогнозируется отсутствие генетической предрасположенности к долголетию человека, которая увеличивает в ~1.5 раза вероятность дожить до 100 лет.If the GG genotype is detected, the absence of a genetic predisposition to human longevity is predicted, which increases the probability of living to 100 years by ~ 1.5 times.

В качестве примеров применения разработанного способа приведено исследование ДНК добровольцев, не являющихся родственниками, для которых был проведен анализ полиморфизма генов rs2251746 и rs2427837.As examples of the application of the developed method, the study of the DNA of volunteers who are not relatives, for whom the analysis of the polymorphism of the rs2251746 and rs2427837 genes was carried out, is given.

Пример 1.Example 1.

У пациента N13 была взята венозная кровь, при генотипировании ДНК-маркеров было выявлено, что генотип пациента по локусу rs2802288 - АА.Venous blood was taken from patient N13; during genotyping of DNA markers, it was revealed that the patient's genotype at the rs2802288 locus is AA.

Выявленный генотип позволяет предположить наличие генетической предрасположенности к долголетию человека, которая увеличивает в ~1.5 раза вероятность дожить до 100 лет. Полученные результаты были подтверждены секвенированием.The revealed genotype suggests the presence of a genetic predisposition to human longevity, which increases the probability of living to 100 years by ~ 1.5 times. The results were confirmed by sequencing.

Пример 2.Example 2.

У пациента N4 была взята венозная кровь, при генотипировании ДНК-маркеров было выявлено, что генотип пациента по локусу rs2802288 - AG. Выявленный генотип позволяет предположить наличие генетической предрасположенности к долголетию человека, которая увеличивает в ~1.5 раза вероятность дожить до 100 лет. Полученные результаты были подтверждены секвенированием.Venous blood was taken from patient N4, and genotyping of DNA markers revealed that the patient's genotype at the rs2802288 locus is AG. The revealed genotype suggests the presence of a genetic predisposition to human longevity, which increases the probability of living to 100 years by ~ 1.5 times. The results were confirmed by sequencing.

Пример 3.Example 3.

У пациента N3 была взята венозная кровь, при генотипировании ДНК-маркеров было выявлено, что генотип пациента по локусу rs2802288 - GG. Выявленный генотип позволяет предположить отсутствие генетической предрасположенности к долголетию человека, которая увеличивает в ~1.5 раза вероятность дожить до 100 лет. Полученные результаты были подтверждены секвенированием.Venous blood was taken from patient N3; during genotyping of DNA markers, it was revealed that the patient's genotype at the rs2802288 locus is GG. The revealed genotype suggests the absence of a genetic predisposition to human longevity, which increases the probability of living to 100 years by ~ 1.5 times. The results were confirmed by sequencing.

Разработанный нами метод обладает следующими преимуществами:The method we have developed has the following advantages:

1. Позволяет оценить генетическую предрасположенность к долголетию,1. Allows you to assess the genetic predisposition to longevity,

2. Является точным, простым, быстрым и недорогим в исполнении,2. Is accurate, simple, fast and inexpensive to perform,

3. Не требует медицинских знаний, сбора анамнеза или присутствия пациента,3. Does not require medical knowledge, anamnesis or the presence of the patient,

4. Может быть проведен с использованием различных видов биологического материала, содержащих ДНК пациента (венозная кровь, буккальный эпителий, волосяные фолликулы и др.),4. Can be performed using various types of biological material containing the patient's DNA (venous blood, buccal epithelium, hair follicles, etc.),

5. Может использоваться для любой группы населения,5. Can be used for any population group,

6. Позволяет оценить вероятность передачи данного признака потомкам,6. Allows to estimate the probability of transmission of a given trait to descendants,

7. Результат исследования не зависит от текущего состояния здоровья пациента.7. The research result does not depend on the patient's current state of health.

Список литературы:List of references:

1.

С, Flachsbart F, Caliebe A, Schreiber S, Nebel A, Krawczak M. Adjustment for smoking does not alter the FOXO3A association with longevity. Age (Dordr). 2014; 36(2):911-921. doi:10.1007/s11357-013-9578-zone.

C, Flachsbart F, Caliebe A, Schreiber S, Nebel A, Krawczak M. Adjustment for smoking does not alter the FOXO3A association with longevity. Age (Dordr). 2014; 36 (2): 911-921. doi: 10.1007 / s11357-013-9578-z

2. Sun L, Hu C, Qian Y, et al. Age-Based Differences in the Genetic Determinants of Glycemic Control: A Case of FOXO3 Variations. PLoS One. 2015; 10(5):e0126696. Published 2015 May 20. doi: 10.1371/journal.pone.01266962. Sun L, Hu C, Qian Y, et al. Age-Based Differences in the Genetic Determinants of Glycemic Control: A Case of FOXO3 Variations. PLoS One. 2015; 10 (5): e0126696. Published 2015 May 20. doi: 10.1371 / journal.pone.0126696

3. Bao JM, Song XL, Hong YQ, et al. Association between FOXO3A gene polymorphisms and human longevity: a meta-analysis. Asian J Androl. 2014; 16(3):446-452. doi:10.4103/1008-682X.1236733. Bao JM, Song XL, Hong YQ, et al. Association between FOXO3A gene polymorphisms and human longevity: a meta-analysis. Asian J Androl. 2014; 16 (3): 446-452. doi: 10.4103 / 1008-682X.123673

4. Sanese P, Forte G, Disciglio V, Grossi V, Simone C. FOXO3 on the Road to Longevity: Lessons From SNPs and Chromatin Hubs. Comput Struct Biotechnol J. 2019; 17:737-745. Published 2019 Jun 13. doi:10.1016/j.csbj.2019.06.0114. Sanese P, Forte G, Disciglio V, Grossi V, Simone C. FOXO3 on the Road to Longevity: Lessons From SNPs and Chromatin Hubs. Comput Struct Biotechnol J. 2019; 17: 737-745. Published 2019 Jun 13. doi: 10.1016 / j.csbj.2019.06.011

5. Flachsbart F, Caliebe A, Kleindorp R, et al. Association of FOXO3A variation with human longevity confirmed in German centenarians. Proc Natl Acad Sci USA. 2009; 106(8):2700-2705. doi: 10.1073/pnas.08095941065. Flachsbart F, Caliebe A, Kleindorp R, et al. Association of FOXO3A variation with human longevity confirmed in German centenarians. Proc Natl Acad Sci USA. 2009; 106 (8): 2700-2705. doi: 10.1073 / pnas.0809594106

6. Zhao S, Bao J, Song X. AB126. Association between FOXO3A gene polymorphisms and human longevity: a meta-analysis. Transl Androl Urol. 2016; 5(Suppl 1):AB126. doi:10.21037/tau.2016.s1266. Zhao S, Bao J, Song X. AB126. Association between FOXO3A gene polymorphisms and human longevity: a meta-analysis. Transl Androl Urol. 2016; 5 (Suppl 1): AB126. doi: 10.21037 / tau.2016.s126

7. Lin R, Zhang Y, Yan D, et al. Genetic Association Analysis of Common Variants in FOX03 Related to Longevity in a Chinese Population. PLoS One. 2016; 11(12):e0167918. Published 2016 Dec 9. doi: 10.1371/journal.pone.01679187. Lin R, Zhang Y, Yan D, et al. Genetic Association Analysis of Common Variants in FOX03 Related to Longevity in a Chinese Population. PLoS One. 2016; 11 (12): e0167918. Published 2016 Dec 9.doi: 10.1371 / journal.pone.0167918

8. Chung WH, Dao RL, Chen LK, Hung SI. The role of genetic variants in human longevity. Ageing Res Rev. 2010; 9 Suppl LS67-S78. doi: 10.1016/j.arr.2010.08.0018. Chung WH, Dao RL, Chen LK, Hung SI. The role of genetic variants in human longevity. Aging Res Rev. 2010; 9 Suppl LS67-S78. doi: 10.1016 / j.arr.2010.08.001

9. Martins R, Lithgow GJ, Link W. Long live FOXO: unraveling the role of FOXO proteins in aging and longevity. Aging Cell. 2016; 15(2): 196-207. doi: 10.1111/acel.124279. Martins R, Lithgow GJ, Link W. Long live FOXO: unraveling the role of FOXO proteins in aging and longevity. Aging Cell. 2016; 15 (2): 196-207. doi: 10.1111 / acel.12427

10. JP5233666B2 (дата публикации 2013-07-10) LIFE EXPECTANCY CALCULATION DEVICE, PORTABLE TERMINAL DEVICE, LIFE EXPECTANCY CALCULATION METHOD, AND LIFE EXPECTANCY CALCULATION PROGRAM10. JP5233666B2 (publication date 2013-07-10) LIFE EXPECTANCY CALCULATION DEVICE, PORTABLE TERMINAL DEVICE, LIFE EXPECTANCY CALCULATION METHOD, AND LIFE EXPECTANCY CALCULATION PROGRAM

11. WO 2007061941 A2 System and method for estimating life expectancy and providing customized advice for improving life expectancy, 18.11.200511. WO 2007061941 A2 System and method for estimating life expectancy and providing customized advice for improving life expectancy, 18.11.2005

12. US 2007241912 A1 Apparatus and method for calculating life expectancy in mobile communication terminal, 22.01.200712. US 2007241912 A1 Apparatus and method for calculating life expectancy in mobile communication terminal, 22.01.2007

13. Sanger F. "Determination of nucleotide sequences in DNA". Biosci Rep. - 2004. - V. 24(4-5). - P.237-25313. Sanger F. "Determination of nucleotide sequences in DNA". Biosci Rep. - 2004. - V. 24 (4-5). - P.237-253

14. Патент США №5538848, Kenneth J. Livak, Susan J., A. Flood, Jeffrey Marmaro, METHOD FOR DETECTING NUCLEIC ACID AMPLIFICATION USING SELF-QUENCHING FLUORESCENCE PROBE, 23.07.199614. US patent No. 5538848, Kenneth J. Livak, Susan J., A. Flood, Jeffrey Marmaro, METHOD FOR DETECTING NUCLEIC ACID AMPLIFICATION USING SELF-QUENCHING FLUORESCENCE PROBE, 07.23.1996

Claims (6)

Translated fromRussian

Способ определения наличия генетической предрасположенности к долголетию человека, включающий анализ ДНК из биологического материала человека путем проведения полимеразно-цепной реакции в реальном времени в присутствии меченных флуорофорами аллель-специфичных (TaqMan) зондов и праймеров, отличающийся тем, что исследуют полиморфизм rs2802288 методом аллельной дискриминации при помощи следующих TaqMan зондов и праймеров:A method for determining the presence of a genetic predisposition to human longevity, including analysis of DNA from human biological material by carrying out a polymerase chain reaction in real time in the presence of fluorophore-labeled allele-specific (TaqMan) probes and primers, characterized in that rs2802288 polymorphism is studied by the method of allelic discrimination in using the following TaqMan probes and primers:Probe 1: FAM-CTGCAGTAGAAGTTGGCAGTGCTACTGTG-BHQ1Probe 1: FAM-CTGCAGTAGAAGTTGGCAGTGCTACTGTG-BHQ1Probe 2: ROX-CTGCGGTAGAAGTTGGCAGTGCTACTGTG-BHQ2Probe 2: ROX-CTGCGGTAGAAGTTGGCAGTGCTACTGTG-BHQ2Pr Fw: CAGCATGCAGGGGAGGACTGTGPr Fw: CAGCATGCAGGGGAGGACTGTGPr rev: TCAGGCTTGTACCCAGAGTTGTC,Pr rev: TCAGGCTTGTACCCAGAGTTGTC,а затем осуществляют прогнозирование наличия генетической предрасположенности к долголетию человека, при этом прогнозируют наличие генетической предрасположенности к долголетию человека, которая увеличивает в ~1.5 раза вероятность дожить до 100 лет в случае выявления генотипа AA(rs2802288) или AG(rs2802288), и отсутствие генетической предрасположенности к долголетию человека, которая увеличивает в ~1.5 раза вероятность дожить до 100 лет в случае выявления генотипа GG(rs2802288).and then predict the presence of a genetic predisposition to human longevity, while predicting the presence of a genetic predisposition to human longevity, which increases by ~ 1.5 times the probability of living up to 100 years in case of detection of genotype AA (rs2802288) or AG (rs2802288), and the absence of genetic predisposition to human longevity, which increases the probability of living to 100 years by ~ 1.5 times in case of detection of the GG genotype (rs2802288).

Images