RU2521392C2 - Combined drug for treating viral infections and method of treating viral infections - Google Patents

Abstract

FIELD: medicine, pharmaceutics.

SUBSTANCE: group of inventions refers to medicine, namely to therapy, and concerns treating viral infections. That is ensured by administering a drug containing active ingredients presented by an activated-potentiated form of human gamma-interferon antibodies and an activated-potentiated form of CD4 receptor antibodies.

EFFECT: administering this combined drug provides effective treatment of viral diseases ensured by the synergetic antiviral effect of the active ingredients of the drug.

10 cl, 6 tbl, 5 ex

Description

Translated fromRussian

Изобретение относится к области медицины и может быть использовано для эффективного лечения вирусных заболеваний, включая острые и хронические вирусные инфекции, острый вирусный гепатит А, В, С и другие вирусные гепатиты, герпесвирусные инфекции.The invention relates to medicine and can be used for the effective treatment of viral diseases, including acute and chronic viral infections, acute viral hepatitis A, B, C and other viral hepatitis, herpesvirus infections.

Из уровня техники известно лекарственное средство для лечения инфекционных заболеваний, в том числе вирусной этиологии, на основе активированной формы сверхмалых доз антител к интерферону (RU 2192888 C1, A61K 39/395, 20.11.2002). Однако данное лекарственное средство имеет ограниченные терапевтические возможности и малопригодно для лечения острых и хронических вирусных инфекций, включая вирусные гепатиты различных типов и герпесвирусные инфекции.The prior art knows a medicine for the treatment of infectious diseases, including viral etiology, based on the activated form of ultra-low doses of antibodies to interferon (RU 2192888 C1, A61K 39/395, 11/20/2002). However, this drug has limited therapeutic capabilities and is unsuitable for the treatment of acute and chronic viral infections, including viral hepatitis of various types and herpes virus infections.

Изобретение направлено на создание комплексного лекарственного средства для эффективного лечения широкого спектра вирусных заболеваний, включая острые и хронические вирусные инфекции, острый вирусный гепатит А, В, С и другие вирусные гепатиты, герпесвирусные инфекции.The invention is aimed at creating a comprehensive drug for the effective treatment of a wide range of viral diseases, including acute and chronic viral infections, acute viral hepatitis A, B, C and other viral hepatitis, herpes virus infections.

Решение поставленной задачи обеспечивается тем, что комплексное лекарственное средство для лечения вирусных заболеваний, согласно изобретению, содержит в качестве компонентов активированную-потенцированную форму антител к гамма-интерферону человека (ИФН-γ) и активированную-потенцированную форму антител к CD4 рецептору (к антигену - CD4).The solution to this problem is ensured by the fact that the complex drug for the treatment of viral diseases, according to the invention, contains as components an activated-potentiated form of antibodies to human gamma-interferon (IFN-γ) and an activated-potentiated form of antibodies to the CD4 receptor (to antigen - CD4).

При этом активированную-потенцированную форму антител к гамма-интерферону человека и активированную-потенцированную форму антител к CD4 рецептору используют в виде активированного-потенцированного водного или водно-спиртового раствора, активность которого обусловлена процессом последовательного многократного разведения матричного-исходного-раствора антител в водном или водно-спиртовом растворителе в сочетании с внешним механическим воздействием - вертикальным встряхиванием каждого разведения, при этом конечные разведения содержат сверхмалые дозы (СМД) антител.In this case, the activated-potentiated form of antibodies to human gamma-interferon and the activated-potentiated form of antibodies to CD4 receptor are used in the form of an activated-potentiated aqueous or aqueous-alcoholic solution, the activity of which is due to the process of sequential multiple dilution of the matrix-source-antibody solution in aqueous or water-alcohol solvent in combination with an external mechanical action - vertical shaking of each dilution, with the final dilution containing at the smallest dose (SMD) of antibodies.

Причем лекарственное средство может быть выполнено в твердой лекарственной форме в виде фармацевтической композиции и содержать технологически необходимое количество нейтрального носителя, насыщенного смесью водных или водно-спиртовых растворов активированной-потенцированной формы антител к гамма-интерферону человека и активированной-потенцированной формы антител к CD4 рецептору, и фармацевтически приемлемые добавки, которые включают, например, лактозу, целлюлозу микрокристаллическую и магния стеарат.Moreover, the drug can be made in solid dosage form in the form of a pharmaceutical composition and contain the technologically necessary amount of a neutral carrier saturated with a mixture of aqueous or aqueous-alcoholic solutions of the activated-potentiated form of antibodies to human gamma-interferon and the activated-potentiated form of antibodies to the CD4 receptor, and pharmaceutically acceptable additives, which include, for example, lactose, microcrystalline cellulose and magnesium stearate.

При этом водные или водно-спиртовые растворы активированных-потенцированных форм антител к гамма-интерферону человека и к CD4 рецептору получены путем многократного последовательного разведения матричных-исходных-растворов антител в сочетании с внешним воздействием - вертикальным встряхиванием каждого разведения, при этом концентрация матричных растворов составляет 0,5÷5,0 мг/мл.In this case, aqueous or aqueous-alcoholic solutions of activated-potentiated forms of antibodies to human gamma-interferon and to the CD4 receptor are obtained by multiple serial dilutions of matrix-source-antibody solutions in combination with an external action - vertical shaking of each dilution, while the concentration of matrix solutions is 0.5 ÷ 5.0 mg / ml.

Кроме того, каждый из компонентов на основе сверхмалых доз антител используют в виде смеси различных, преимущественно сотенных, разведении, приготовленных по гомеопатической технологии.In addition, each of the components based on ultra-low doses of antibodies is used as a mixture of various, mainly hundred, dilutions prepared according to homeopathic technology.

Решение поставленной задачи обеспечивается также тем, что в способе лечения вирусных заболеваний, путем введения в организм комплексного лекарственного средства, согласно изобретению, в качестве действующих компонентов комплексное лекарственное средство содержит активированную-потенцированную форму антител к гамма-интерферону человека и активированную-потенцированную форму антител к антигену CD4.The solution of this problem is also ensured by the fact that in the method of treating viral diseases, by introducing into the body a complex drug according to the invention, as active ingredients, the complex drug contains an activated-potentiated form of antibodies to human gamma-interferon and an activated-potentiated form of antibodies to CD4 antigen.

При этом активированную-потенцированную форму антител к гамма-интерферону человека и активированную-потенцированную форму антител к CD4 используют в виде активированного-потенцированного водного или водно-спиртового раствора каждого компонента, активность которого обусловлена процессом многократного разведения матричного-исходного-раствора антител в водном или водно-спиртовом растворителе в сочетании с внешним механическим воздействием - вертикальным встряхиванием каждого разведения.In this case, the activated-potentiated form of antibodies to human gamma-interferon and the activated-potentiated form of antibodies to CD4 are used in the form of an activated-potentiated aqueous or aqueous-alcoholic solution of each component, the activity of which is due to the process of multiple dilution of the matrix-source-antibody solution in aqueous or water-alcohol solvent in combination with external mechanical stress - vertical shaking of each dilution.

Кроме того, используют приготовленные в виде единого комплексного лекарственного препарата - одной лекарственной формы смесь различных разведении антител к гамма-интерферону человека в сочетании (в комплексе) со смесью различных разведении антител к CD4, приготовленных по гомеопатической технологии.In addition, they use a mixture of different dilutions of antibodies to human gamma-interferon prepared in the form of a single comprehensive drug - one dosage form in combination (in combination) with a mixture of different dilutions of antibodies to CD4 prepared by homeopathic technology.

Кроме того, комплексное лекарственное средство содержит действующие компоненты в объемном соотношении 1:1, при этом каждый компонент используют в виде смеси трех соответствующих матричных растворов, разведенных в 100¹², 100³⁰, и 100⁵⁰ раз, что эквивалентно сотенным разведениям С 12, С 30, С 50, приготовленным по гомеопатической технологии.In addition, the complex drug contains active ingredients in a volume ratio of 1: 1, with each component being used as a mixture of three appropriate matrix solutions diluted 100¹² , 100³⁰ , and 100⁵⁰ times, which is equivalent to hundreds of dilutions of C 12, C 30, C 50 prepared according to homeopathic technology.

Заявленное комплексное лекарственное средство рекомендуется принимать, предпочтительно, по 1-2 таблетке 2-4 раза в день.The claimed complex drug is recommended to be taken, preferably, 1-2 tablets 2-4 times a day.

При лечении вирусных инфекций возможно раздельное применение в виде двух отдельно приготовленных препаратов как в виде растворов, так и в твердых лекарственных формах (таблетках), каждая из которых содержит активированную-потенцированную форму антител к гамма-интерферону человека и, соответственно, активированную-потенцированную форму антител к CD4 рецептору.In the treatment of viral infections, separate use is possible in the form of two separately prepared preparations, both in the form of solutions, and in solid dosage forms (tablets), each of which contains an activated-potentiated form of antibodies to human gamma-interferon and, accordingly, an activated-potentiated form antibodies to the CD4 receptor.

Согласно изобретению, активированная-потенцированная форма антител представляет собой форму антител к гамма-интерферону человека или к CD4 рецептору, приготовленную по гомеопатической технологии потенцирования путем многократного последовательного разведения матричного-исходного-раствора антител в сочетании с внешним воздействием - вертикальным встряхиванием каждого разведения, которая обладает активностью в фармакологических моделях и/или клинических методах лечения вирусных инфекций.According to the invention, the activated-potentiated form of antibodies is a form of antibodies to human gamma-interferon or to the CD4 receptor, prepared according to the homeopathic technology of potentiation by multiple sequential dilutions of the matrix-source antibody solution in combination with an external action - vertical shaking of each dilution, which has activity in pharmacological models and / or clinical methods of treating viral infections.

Предложенное сочетание активированных-потенцированных форм антител к гамма-интерферону человека и к CD4 рецептору в фармацевтической композиции обеспечивает получение неожиданного синергетического терапевтического эффекта, экспериментально подтвержденного на адекватной модели, который заключается в повышении эффективности лечения острых и хронических вирусных заболеваний, включая герпес, острый вирусный гепатит А, В, С и другие вирусные гепатиты, герпесвирусные инфекции, что обусловлено иммунотропным действием компонентов, в том числе усилением интерферон-зависимой активации CD4 лимфоцитов, увеличением числа рецепторов на поверхности CD4 клеток, рецепторов ИФН-γ, усилением экспрессии гамма-интерферона и др.The proposed combination of activated-potentiated forms of antibodies to human gamma-interferon and to CD4 receptor in a pharmaceutical composition provides an unexpected synergistic therapeutic effect, experimentally confirmed in an adequate model, which consists in increasing the effectiveness of treatment of acute and chronic viral diseases, including herpes, acute viral hepatitis A, B, C and other viral hepatitis, herpes virus infections, due to the immunotropic effect of the components, including if increased interferon-dependent activation of CD4 lymphocytes, an increase in the number of receptors on the surface of CD4 cells, IFN-γ receptors, increased expression of gamma-interferon, etc.

При этом происходит снижением вирусной нагрузки, активирование процессов транскрипции мРНК противовирусных белков.In this case, there is a decrease in viral load, activation of transcription processes of antiviral protein mRNA.

При этом возможно применение заявленного комплексного лекарственного средства в сочетании с другими противовирусными препаратами и симптоматическими средствами.In this case, it is possible to use the claimed complex drug in combination with other antiviral drugs and symptomatic agents.

Заявленное комплексное лекарственное средство готовят, преимущественно, следующим образом.The claimed complex drug is prepared mainly as follows.

Для приготовления активированной-потенцированной формы действующих компонентов используют моноклональные или, преимущественно, поликлональные антитела, которые могут быть получены по известным технологиям - методикам, описанным, например, в книге: Иммунологические методы, под ред. Г. Фримеля, М., «Медицина», 1987, с.9-33; или, например, в статье Laffly E., Sodoyer R. Hum. Antibodies. Monoclonal and recombinant antibodies, 30 years after. - 2005 - Vol.14. - N 1-2. P.33-55.For the preparation of the activated-potentiated form of the active components, monoclonal or, mainly, polyclonal antibodies are used, which can be obtained by known technologies - the techniques described, for example, in the book: Immunological methods, ed. G. Frimel, M., "Medicine", 1987, S. 9-33; or, for example, in an article by Laffly E., Sodoyer R. Hum. Antibodies. Monoclonal and recombinant antibodies, 30 years after. - 2005 - Vol.14. - N 1-2. P.33-55.

Моноклональные антитела получают, например, с помощью гибридомной технологии. Причем начальная стадия процесса включает иммунизацию, основанную на принципах, уже разработанных при приготовлении поликлональных антисывороток. Дальнейшие этапы работы предусматривают получение гибридомных клеток, продуцирующих клоны одинаковых по специфичности антител. Их выделение проводится теми же методами, что и в случае поликлональных антисывороток.Monoclonal antibodies are obtained, for example, using hybridoma technology. Moreover, the initial stage of the process includes immunization, based on the principles already developed in the preparation of polyclonal antisera. Further stages of the work include obtaining hybridoma cells producing clones of antibodies of the same specificity. Their isolation is carried out by the same methods as in the case of polyclonal antisera.

Поликлональные антитела могут быть получены активной иммунизацией животных. Для этого по специально разработанной схеме животным делают серию инъекций требуемым в соответствии с изобретением веществом - антигеном или конъюгированным антигеном: гамма-интерфероном человека и CD4. В результате проведения такой процедуры получают моноспецифическую антисыворотку с высоким содержанием антител, которую и используют для получения активированной - потенцированной формы. При необходимости проводят очистку антител, присутствующих в антисыворотке, например, методом аффинной хроматографии, путем применения фракционирования солевым осаждением или ионообменной хроматографии.Polyclonal antibodies can be obtained by active immunization of animals. For this, according to a specially developed scheme, the animals are given a series of injections of the substance required in accordance with the invention — an antigen or conjugated antigen: human gamma-interferon and CD4. As a result of such a procedure, a monospecific antiserum with a high content of antibodies is obtained, which is used to obtain an activated - potentiated form. If necessary, the antibodies present in the antiserum are purified, for example, by affinity chromatography, using fractionation by salt precipitation or ion exchange chromatography.

Предпочтительным для приготовления заявленного комплексного лекарственного средства является использование поликлональных антител к гамма-интерферону человека и CD4, которые в качестве матричного (исходного) раствора с концентрацией 0,5÷5,0 мг/мл, используют для последующего приготовления активированной-потенцированной формы.Preferred for the preparation of the claimed complex drug is the use of polyclonal antibodies to human gamma interferon and CD4, which are used as a matrix (initial) solution with a concentration of 0.5 ÷ 5.0 mg / ml for the subsequent preparation of the activated-potentiated form.

Предпочтительной для приготовления каждого компонента является использование смеси трех водно-спиртовых разведении первичного матричного раствора антител, разведенных, соответственно, в 100¹², 100³⁰, и 100⁵⁰ раз, что эквивалентно сотенным разведениям С 12, С 30 и С 50, приготовленным по гомеопатической технологии. При выполнении заявленного лекарственного средства в твердой лекарственной форме на нейтральный носитель наносится смесь указанных компонентов.Preferred for the preparation of each component is the use of a mixture of three water-alcohol dilutions of the primary matrix solution of antibodies diluted, respectively, 100¹² , 100³⁰ , and 100⁵⁰ times, which is equivalent to hundreds of dilutions of C 12, C 30 and C 50 prepared according to homeopathic technologies. When performing the claimed drug in solid dosage form, a mixture of these components is applied to a neutral carrier.

Предпочтительным для приготовления заявленного лекарственного препарата является использование поликлональных антител к гамма-интерферону человека и CD4 рецептору, которые могут быть получены иммунизацией кроликов следующим образом.Preferred for the preparation of the claimed drug is the use of polyclonal antibodies to human gamma interferon and the CD4 receptor, which can be obtained by immunization of rabbits as follows.

Пример 1.Example 1

Для проведения экспериментальных исследований были использованы антитела, приготовленные по заказу специализированной биотехнологической фирмой.For experimental studies, antibodies were used, prepared by order of a specialized biotechnological company.

Для получения поликлональных антител к гамма-интерферону человека в качестве иммуногена (антигена) для иммунизации кроликов используют адъювант и, например, цельную молекулу гамма-интерферона человека следующей последовательности:To obtain polyclonal antibodies to human gamma-interferon, an adjuvant and, for example, a whole human gamma-interferon molecule of the following sequence are used as immunogen (antigen) for immunization of rabbits:

Возможно для получения поликлональных антител к гамма-интерферону человека в качестве иммуногена (антигена) для иммунизации кроликов использование адъюванта и, например, одного полипептидного фрагмента гамма-интерферона человека, выбранного из следующих последовательностей:It is possible to obtain a polyclonal antibody to human gamma interferon as an immunogen (antigen) for immunization of rabbits using an adjuvant and, for example, one polypeptide fragment of human gamma interferon selected from the following sequences:

7-55:7-55:

24-166:24-166:

24-166:24-166:

69-123:69-123:

100-145:100-145:

92-130:92-130:

123-147:123-147:

24-166:24-166:

5-45:5-45:

94-114:94-114:

24-166:24-166:

Перед отбором крови за 7-9 дней проводят 1-3 внутривенных инъекций для повышения уровня антител. В процессе иммунизации у кроликов отбирают небольшие пробы крови для оценки количества антител. Максимальный уровень иммунного ответа на введение большинства антигенов достигается через 40-60 дней после первой инъекции. После окончания первого цикла иммунизации кроликов в течение 30 дней дают восстановить здоровье и проводят реиммунизацию, включающую 1-3 внутривенные инъекции. Для получения антисыворотки из иммунизированных кроликов собирают кровь в центрифужную пробирку объемом 50 мл. С помощью деревянного шпателя удаляют со стенок пробирки образовавшиеся сгустки и помещают палочку в сгусток, образовавшийся в центре пробирки. Кровь помещают в холодильник (температура 4°С) на ночь. На следующий день удаляют сгусток, прикрепившийся к шпателю, и центрифугируют оставшуюся жидкость при 13000 g в течение 10 мин. Супернатант (надосадочная жидкость) является антисывороткой. Полученная антисыворотка должна быть желтого цвета. Можно добавлять к антисыворотке 20% NaN₃ до конечной концентрации 0,02% и хранить до использования в замороженном состоянии при температуре -20°С (или без добавления NaN₃ - при температуре -70°). Ввыделение из антисыворотки антител к гамма-интерферону возможно следующим образом:Before blood sampling for 1-3 days, 1-3 intravenous injections are performed to increase the level of antibodies. During immunization, small blood samples are taken from rabbits to evaluate the amount of antibody. The maximum level of the immune response to the administration of most antigens is achieved 40-60 days after the first injection. After the end of the first cycle of immunization of rabbits for 30 days, they restore health and re-immunization, including 1-3 intravenous injections. To obtain antisera from immunized rabbits, blood is collected in a 50 ml centrifuge tube. Using a wooden spatula, the formed clots are removed from the walls of the tube and the wand is placed in the clot formed in the center of the tube. Blood is placed in a refrigerator (temperature 4 ° C) at night. The next day, the clot attached to the spatula is removed and the remaining liquid is centrifuged at 13000 g for 10 minutes. The supernatant (supernatant) is an antiserum. The resulting antiserum should be yellow. You can add 20% NaN₃ to the antiserum to a final concentration of 0.02% and store until use in a frozen state at a temperature of -20 ° C (or without adding NaN₃ at a temperature of -70 °). The selection of anti-gamma interferon antibodies from the antiserum is possible as follows:

1. 10 мл антисыворотки кролика разбавляют в 2 раза 0,15 М NaCl добавляют 6,26 г Na₂SO₄, перемешивают и инкубируют 12-16 ч при 4°С;1. 10 ml of rabbit antiserum is diluted 2 times with 0.15 M NaCl, 6.26 g of Na₂ SO₄ are added, stirred and incubated for 12-16 hours at 4 ° C;

2. выпавший осадок удаляют центрифугированием, растворяют в 10 мл фосфатного буфера и затем диализуют против того же буфера в течение ночи при комнатной температуре;2. The precipitate formed is removed by centrifugation, dissolved in 10 ml of phosphate buffer and then dialyzed against the same buffer overnight at room temperature;

3. после удаления осадка центрифугированием раствор наносят на колонку с ДЭАЭ-целлюлозой, уравновешенную фосфатным буфером;3. after removal of the precipitate by centrifugation, the solution is applied to a column with DEAE-cellulose, balanced with phosphate buffer;

4. фракцию антител определяют, измеряя оптическую плотность элюата при 280 нм.4. The antibody fraction is determined by measuring the optical density of the eluate at 280 nm.

Очистку антител производят методом аффинной хроматографии на колонке с антигеном, путем связывания антител к гамма-интерферону с антигеном (гамма-интерферон), прикрепленным к нерастворимому матриксу колонки, с последующим элюированием антител концентрированными растворами соли.Antibodies are purified by affinity chromatography on a column with antigen by binding of antibodies to gamma interferon with an antigen (gamma interferon) attached to an insoluble matrix of the column, followed by elution of the antibodies with concentrated salt solutions.

Полученный, таким образом, буферный раствор поликлональных кроличьих антитела к гамма-интерферону человека, очищенных на антигене, с концентрацией 0,5÷5,0 мг/мл, предпочтительно 2,0÷3,0 мг/мл, используют в качестве матричного (исходного) раствора для последующего приготовления активированной-потенцированной формы.Thus obtained buffer solution of polyclonal rabbit antibodies to human gamma-interferon purified on an antigen with a concentration of 0.5 ÷ 5.0 mg / ml, preferably 2.0 ÷ 3.0 mg / ml, is used as a matrix ( initial) solution for the subsequent preparation of the activated-potentiated form.

Поликлональные антитела к CD4 рецептору получают по вышеуказанному способу, используя в качестве иммуногена (антигена) для иммунизации кроликов адъювант и цельную молекулу или один полипептидный фрагмент CD4 рецептора, выбранный, например, из следующих аминокислотных последовательностей:Polyclonal antibodies to the CD4 receptor are obtained according to the above method, using an immunogen (antigen) for immunization of rabbits with an adjuvant and a whole molecule or one polypeptide fragment of the CD4 receptor, selected, for example, from the following amino acid sequences:

412-458:412-458:

26-60:26-60:

105-119:105-119:

115-139:115-139:

26-458:26-458:

Полученные таким образом буферные растворы каждого компонента поликлональных антител к гамма-интерферону человека и CD4 рецептору с концентрацией 0,5÷5,0 мг/мл, предпочтительно 2,0÷3,0 мг/мл используют в качестве матричных (исходных) растворов для последующего приготовления активированных-потенцированных форм антител.Thus obtained buffer solutions of each component of polyclonal antibodies to human gamma-interferon and CD4 receptor with a concentration of 0.5 ÷ 5.0 mg / ml, preferably 2.0 ÷ 3.0 mg / ml, are used as matrix (initial) solutions for subsequent preparation of activated-potentiated forms of antibodies.

Активированную-потенцированную форму каждого компонента готовят путем равномерного уменьшения концентрации в результате последовательного разведения 1 части каждого подвергаемого разведению раствора, начиная с упомянутого матричного раствора, в 9 частях (для десятичного разведения D) или в 99 частях (для сотенного разведения С) или в 999 частях (для тысячного разведения М) нейтрального растворителя в сочетании с многократным вертикальным встряхиванием (потенцированием, или "динамизацией") каждого полученного разведения и использованием отдельных емкостей для каждого последующего разведения до получения требуемой потенции - кратности разведения по гомеопатическому методу (см., например, В. Швабе "Гомеопатические лекарственные средства", М., 1967 г., с.14-29).The activated-potentiated form of each component is prepared by uniformly decreasing the concentration as a result of successive dilution of 1 part of each solution to be diluted, starting from the above matrix solution, in 9 parts (for decimal dilution D) or in 99 parts (for hundredth dilution C) or in 999 parts (for a thousandth dilution M) of a neutral solvent in combination with multiple vertical shaking (potentiation, or "dynamization") of each dilution obtained and using tdelnyh containers for each subsequent dilution to the required potency - the multiplicity of homeopathic dilution method (see, eg, V. Schwabe "Homeopathic medicines", M., 1967, s.14-29.).

Внешнюю обработку в процессе уменьшения концентрации также можно осуществлять ультразвуком, электромагнитным или иным физическим воздействием.External processing in the process of reducing the concentration can also be performed by ultrasound, electromagnetic or other physical effects.

Например, для приготовления 12-го сотенного разведения С 12 одну часть матричного (исходного) раствора антител, например, к гамма-интерферону человека, с концентрацией 2,5 мг/мл разводят в 99 частях нейтрального водного или водно-спиртового растворителя и многократно (10 и более раз) вертикально встряхивают - потенцируют, получая 1-е сотенное С 1 разведение. Из 1-го сотенного С 1 разведения приготовляют 2-ое сотенное разведение С 2. Данную операцию повторяют 11 раз, получая 12-е сотенное разведение С 12. Таким образом, 12-е сотенное разведение С 12 представляет собой раствор, полученный разбавлением последовательно 12 раз в разных емкостях 1-ой части исходного матричного раствора антител к гамма-интерферону человека с концентрацией 2,5 мг/мл в 99-ти частях нейтрального растворителя, т.е. раствор, полученный разведением матричного раствора в 100¹² раз. Аналогичные операции с соответствующей кратностью разведения проводят для получения разведении С 30 и С 50.For example, to prepare the 12th hundredth C12 dilution, one part of a matrix (initial) antibody solution, for example, to human gamma-interferon, with a concentration of 2.5 mg / ml is diluted in 99 parts of a neutral aqueous or aqueous-alcoholic solvent and repeatedly ( 10 or more times) vertically shake - potentiate, getting the 1st hundredth With 1 dilution. From the 1st hundredth C 1 dilution, the 2nd hundredth dilution C 2 is prepared. This operation is repeated 11 times to obtain the 12th hundredth dilution C 12. Thus, the 12th hundredth dilution C 12 is a solution obtained by diluting successively 12 times in different containers of the first part of the initial matrix solution of antibodies to human gamma-interferon with a concentration of 2.5 mg / ml in 99 parts of a neutral solvent, i.e. the solution obtained by diluting the matrix solution in 100¹² times. Similar operations with an appropriate dilution ratio are carried out to obtain a dilution of C 30 and C 50.

При использовании, например, активированной-потенцированной формы антител к гамма-интерферону человека в виде смеси различных, преимущественно сотенных, разведении каждое разведение (например, С 12, С 30, С 50) приготовляют раздельно по описанной выше технологии до разведения на 3 разведения меньше, чем конечное (соответственно, до получения С 9, С 27, С 47), и затем вносят в соответствии с составом смеси в одну емкость по одной части каждого компонента и смешивают с требуемым количеством растворителя (соответственно, с 97 частями для сотенного разведения). Далее полученную смесь последовательно дважды разводят в соотношении 1 к 100, потенцируя полученный раствор после каждого разведения. При этом получают активированную-потенцированную форму антител, например, к гамма-интерферону человека в сверхмалой дозе, полученной разведением матричного раствора в 100¹², 100³⁰, 100⁵⁰ раз, эквивалентной смеси сотенных разведении С 12, С 30, С 50.When using, for example, an activated-potentiated form of antibodies to human gamma-interferon in the form of a mixture of different, mainly hundred, dilutions, each dilution (for example, C 12, C 30, C 50) is prepared separately according to the above technology before dilution by 3 dilutions less than the final one (respectively, to obtain C 9, C 27, C 47), and then, in accordance with the composition of the mixture, make one part of each component in one container and mix with the required amount of solvent (respectively, with 97 parts for hundred percent eating). Next, the resulting mixture was successively diluted twice in a ratio of 1 to 100, potentiating the resulting solution after each dilution. In this case, an activated-potentiated form of antibodies is obtained, for example, to human gamma-interferon in an ultra-low dose obtained by diluting the matrix solution 100¹² , 100³⁰ , 100⁵⁰ times, equivalent to a mixture of hundred-percent dilutions of C 12, C 30, C 50.

Возможно использование каждого компонента в виде смеси других различных, разведении, например, десятичных и или сотенных, (D 20, С 30, С 100 или С 12, С 30, С 200 и т.д.), приготовленных по гомеопатической технологии, эффективность которых определяют экспериментально.It is possible to use each component in the form of a mixture of other different, dilutions, for example, decimal and or hundredths (D 20, C 30, C 100 or C 12, C 30, C 200, etc.) prepared according to homeopathic technology, efficiency which are determined experimentally.

Для получения лекарственного средства водные или водно-спиртовые растворы смешивают, преимущественно, в объемном соотношении 1:1 и используют в жидкой лекарственной форме.To obtain a medicinal product, aqueous or aqueous-alcoholic solutions are mixed, mainly in a volume ratio of 1: 1 and used in liquid dosage form.

Заявленное лекарственное средство может быть использовано и в твердой лекарственной форме в виде фармацевтической композиции, которая содержит технологически необходимое (эффективное) количество нейтрального носителя - например, лактозы - насыщенного путем пропитывания до насыщения смесью, приготовленных по вышеуказанной технологии, водных или водно-спиртовых растворов активированных-потенцированных форм антител к гамма-интерферону человека и к CD4 рецептору, и фармацевтически приемлемые добавки, включающие, преимущественно, лактозу, целлюлозу микрокристаллическую и магния стеарат.The claimed drug can also be used in solid dosage form in the form of a pharmaceutical composition, which contains the technologically necessary (effective) amount of a neutral carrier - for example, lactose - saturated, by impregnation to saturation with a mixture prepared by the above technology, of aqueous or aqueous-alcoholic solutions activated -potentiated forms of antibodies to human gamma-interferon and to CD4 receptor, and pharmaceutically acceptable additives, including mainly lactose , Microcrystalline cellulose and magnesium stearate.

Для получения твердой оральной формы заявленного лекарственного средства производят в установке кипящего слоя (например, типа «Hüttlin Pilotlab» производства компании Hüttlin GmbH) орошение до насыщения вводимых в псевдоожиженный - кипящий слой гранул нейтрального вещества - лактозы (молочного сахара) с размером частиц 50÷500 мкм, предварительно полученным водным или водно-спиртовым раствором активированной-потенцированной формы антител к CD4 рецептору, преимущественно, в соотношении 1 кг раствора антител на 5 или 10 кг лактозы (1:5-1:10) с одновременной сушкой в потоке подаваемого под решетку нагретого воздуха при температуре не выше 40°С. Расчетное количество лактозы (10÷91% от таблеточной массы), насыщенной активированной-потенцированной формой антител по вышеуказанной методике, загружают в смеситель и смешивают с лактозой, увлажненной активированной - потенцированной формой антител, в количестве 3÷10% таблеточной массы и с чистой лактозой в количестве не более 84% от таблеточной массы (для снижения стоимости и некоторого упрощения и ускорения технологического процесса без снижения эффективности лечебного воздействия). Затем в эту смесь добавляют микрокристаллическую целлюлозу в количестве 5÷10% от таблеточной массы и стеарат магния в количестве 1% от таблеточной массы. Полученную таблеточную массу равномерно перемешивают и таблетируют прямым сухим прессованием (например, в таблет-прессе Korsch - XL 400). После таблетирования получают таблетки массой 300 мг, пропитанные водно-спиртовым раствором активированной-потенцированной формой антител к гамма-интерферону человека и к CD4 рецептору Т-лимфоцитов в сверхмалой дозе, каждого компонента, приготовленной из матричного раствора, разведенного в 100¹², в 100³⁰в 100⁵⁰, что эквивалентно смеси сотенных разведении С 12, С 30 и С 50, приготовленных по гомеопатической технологии.To obtain a solid oral form of the claimed drug, a fluidized bed is installed (for example, type “Hüttlin Pilotlab” manufactured by Hüttlin GmbH) irrigation until saturation of the granules of a neutral substance - lactose (milk sugar) with a particle size of 50 ÷ 500 is introduced into the fluidized - boiling layer microns, pre-prepared aqueous or aqueous-alcoholic solution of the activated-potentiated form of antibodies to the CD4 receptor, mainly in the ratio of 1 kg of antibody solution to 5 or 10 kg of lactose (1: 5-1: 10) with simultaneous drying in the flow of heated air supplied under the grate at a temperature not exceeding 40 ° C. The calculated amount of lactose (10 ÷ 91% of the tablet mass) saturated with the activated-potentiated form of antibodies according to the above procedure is loaded into the mixer and mixed with lactose, moistened with the activated-potentiated form of antibodies, in an amount of 3 ÷ 10% of the tablet mass and with pure lactose in an amount of not more than 84% of the tablet mass (to reduce the cost and some simplification and acceleration of the process without reducing the effectiveness of the therapeutic effect). Then, microcrystalline cellulose is added to this mixture in an amount of 5-10% of the tablet mass and magnesium stearate in an amount of 1% of the tablet mass. The resulting tablet mass is uniformly mixed and tabletted by direct dry pressing (for example, in a Korsch tablet press - XL 400). After tabletting, 300 mg tablets are obtained, impregnated with an aqueous-alcoholic solution with an activated-potentiated form of antibodies to human gamma interferon and to the CD4 T-lymphocyte receptor in an ultra-low dose, each component prepared from a matrix solution diluted in 100¹² , in 100³⁰ 100⁵⁰ , which is equivalent to a mixture of hundred-percent dilutions of C 12, C 30 and C 50 prepared according to homeopathic technology.

Предпочтительно заявленное лекарственное средство рекомендуется принимать по 1-2 таблетке 2-4 раза в день.Preferably, the claimed drug is recommended to take 1-2 tablets 2-4 times a day.

Пример 1.Example 1

Оценка антиретровирусной активности заявленного комплексного лекарственного средства, содержащего активированные - потенцированные формы водных разведении поликлональных аффинно очищенных кроличьих антител к CD4 рецептору в сверхмалых дозах (СМД), полученных сверхразведением исходного матричного раствора (концентрацией 2,5 мг/мл) в 100¹², 100³⁰, 100⁵⁰ раз, эквивалентных смеси сотенных гомеопатических разведении С 12, С 30, С 50 и активированные - потенцированные формы водных разведении поликлональных аффинно очищенных кроличьих антител интерферону гамма в сверхмалых дозах (СМД), полученных сверхразведением исходного матричного раствора (концентрацией 2,5 мг/мл) в 100¹², 100³⁰, 100⁵⁰ раз, эквивалентных смеси сотенных гомеопатических разведении С 12, С 30, С 50 в соотношении 1:1 (СМД AT к CD4+ИФН-γ), а также лекарственного средства, содержащего активированные -потенцированные формы водных разведении поликлональных аффинно очищенных кроличьих антител к CD4 рецептору в сверхмалых дозах (СМД), полученных сверхразведением исходного матричного раствора (концентрацией 2,5 мг/мл) в 100¹², 100³⁰, 100⁵⁰ раз, эквивалентных смеси сотенных гомеопатических разведении С 12, С 30, С 50 (СМД AT к CD4) и лекарственного средства, содержащего активированные - потенцированные формы водных разведении поликлональных аффинно очищенных кроличьих антител к интерферону гамма в сверхмалых дозах (СМД), полученных сверхразведением исходного матричного раствора (концентрацией 2,5 мг/мл) в 100¹², 100³⁰, 100³⁰ раз, эквивалентных смеси сотенных гомеопатических разведении С 12, С 30, С 50 (СМД AT к ИФН-γ), проводилась с использованием мононуклеарных клеток периферической крови человека, зараженных in vitro штаммом ВИЧ-1-LAL В качестве препарата сравнения использовали азидотимидин (Sigma-AZ169-100 mg, лот 107 K1578).Evaluation of the antiretroviral activity of the claimed complex drug containing activated - potentiated forms of aqueous dilution of polyclonal affinity purified rabbit antibodies to CD4 receptor in ultra-low doses (SMD) obtained by super-dilution of the initial matrix solution (concentration 2.5 mg / ml) in 100¹² , 100³⁰ , 100⁵⁰ times, equivalent to a mixture of hundred homeopathic dilutions of C 12, C 30, C 50 and activated - potentiated forms of aqueous dilution of polyclonal affinity-purified rabbit antibodies Ron gamma in ultra-low doses (SMD) obtained by super-dilution of the initial matrix solution (concentration of 2.5 mg / ml) 100¹² , 100³⁰ , 100⁵⁰ times, equivalent to a mixture of hundred-percent homeopathic dilutions of C 12, C 30, C 50 in a ratio of 1 : 1 (SMD AT to CD4 + IFN-γ), as well as a drug containing activated -potentized forms of aqueous dilution of polyclonal affinity purified rabbit antibodies to CD4 receptor in ultra-low doses (SMD) obtained by super-dilution of the initial matrix solution (concentration 2.5 mg / ml) 100¹² , 100³⁰ , 100⁵⁰ times, equivalent Alent mixtures of hundreds of homeopathic dilutions of C 12, C 30, C 50 (SMD AT to CD4) and a drug containing activated - potentized forms of aqueous dilutions of polyclonal affinity purified rabbit antibodies to gamma interferon in ultra-low doses (SMD) obtained by super-dilution of the original matrix solution (concentration of 2.5 mg / ml) in 100¹² , 100³⁰ , 100³⁰ times, equivalent to a mixture of hundreds of homeopathic dilutions of C 12, C 30, C 50 (SMD AT to IFN-γ), was carried out using human peripheral blood mononuclear cells zar conjugated in vitro strain of HIV-1-LAL as the comparison drug used azidothymidine (Sigma-AZ169-100 mg, Lot 107 K1578).

Мононуклеары периферической крови человека были выделены из крови здорового серонегативного донора при помощи центрифугирования в градиенте плотности фиколла-гипака. Клетки активировали в течение 3 дней с использованием 1 мкг/мл фитогемагглютина P и 5 МЕ/мл рекомбинантного интерлейкина-2 человека в среде RPMI1640 (DIFCO) с 10% фетальной телячьей сывороткой (комплемент был удален нагреванием в течение 45 минут при температуре 56°С), 1% раствором антибиотиков (PSN Gibco, содержащего 50 мкг/мл пенициллина, 50 мкг/мл стрептомицина и 100 мкг/мл неомицина).Human peripheral blood mononuclear cells were isolated from the blood of a healthy seronegative donor by centrifugation in a density gradient of ficoll-hypak. Cells were activated for 3 days using 1 μg / ml phytohemagglutin P and 5 IU / ml recombinant human interleukin-2 in RPMI1640 medium (DIFCO) with 10% fetal calf serum (complement was removed by heating for 45 minutes at 56 ° C ), 1% antibiotic solution (Gibco PSN containing 50 μg / ml penicillin, 50 μg / ml streptomycin and 100 μg / ml neomycin).

Клетки заражали штаммом ВИЧ-1-LAI, внося 50 мкл инокулята штамма ВИЧ-1-LAI, что соответствует дозе 100 TCID50 (доза, инфицирующая 50% клеток культуры ткани).Cells were infected with the HIV-1-LAI strain, delivering 50 μl of the inoculum of the HIV-1-LAI strain, corresponding to a dose of 100 TCID50 (dose infecting 50% of tissue culture cells).

Для оценки антиретровирусной активности препараты вносили в лунки через 15-30 минут после заражения клеток штаммом ВИЧ-1-LAI. На 7 сутки после инфицирования клеток был собран супернатант, использованный для оценки влияния препаратов на ингибирование репликации ВИЧ.To evaluate antiretroviral activity, the preparations were added to the wells 15-30 minutes after infection of the cells with the HIV-1-LAI strain. On the 7th day after infection of the cells, the supernatant was collected, used to evaluate the effect of the drugs on inhibition of HIV replication.

Перед внесением в лунки, содержащие 150 мкл клеточной культуры, препараты разводили средой RPMI1640 (DIFCO) до достижения конечного объема в 50 мкл. Препарат СМД AT к CD4 и препарат СМД AT к ИФН-γ разводили в среде RPMI1640 (DIFCO) в 8 раз (степень разведения 1/8), а препарат СМД AT к CD4+ИФН-γ разводили в среде RPMI1640 (DIFCO) в 4 раза (степень разведения 1/4). Таким образом, количество компонентов препарата СМД AT к CD4+ИФН-γ, вносимых в экспериментальную лунку при тестировании, идентично количеству компонентов препарата СМД AT к CD4 и компонентов препарата СМД AT к ИФН-γ а тестируемых в качестве монопрепаратов, что позволяет провести сравнение эффективности препарата СМД AT к CD4+ИФН-γ с его отдельными компонентами, входящими в его состав. Препарат сравнения азидотимидин развели средой RPMI1640 (DIFCO) до достижения концентрации 8 нМ.Before entering into wells containing 150 μl of cell culture, the preparations were diluted with RPMI1640 medium (DIFCO) until a final volume of 50 μl was reached. The preparation of SMD AT to CD4 and the preparation of SMD AT to IFN-γ were diluted 8 times in RPMI1640 medium (DIFCO) (1/8 dilution), and the preparation of SMD AT to CD4 + IFN-γ was diluted in RPMI1640 (DIFCO) medium in 4 times (dilution 1/4). Thus, the number of components of the preparation of SMD AT to CD4 + IFN-γ introduced into the experimental well during testing is identical to the number of components of the preparation of SMD AT to CD4 and components of the preparation SMD AT to IFN-γ as tested as single drugs, which allows a comparison of the effectiveness the preparation of SMD AT to CD4 + IFN-γ with its individual components that make up its composition. The reference drug azidothymidine was diluted with RPMI1640 medium (DIFCO) until a concentration of 8 nM was reached.

Эффективность препаратов определяли по ингибированию репликации ВИЧ, которую оценивали по ферментативной активности обратной транскриптазы ВИЧ в супернатантах мононуклеаров периферической крови человека с использованием HIV RT RetroSys набора производства INNOVAGEN (лот 10-059С). Для вычисления % ингибирования репликации ВИЧ в качестве контроля использовали супернатант клеток, к которым не вносили тестируемые препараты или азидотимидин (Таблица 1).Drug efficacy was determined by inhibition of HIV replication, which was assessed by the enzymatic activity of HIV reverse transcriptase in supernatants of human peripheral blood mononuclear cells using the HIV RT RetroSys kit manufactured by INNOVAGEN (lot 10-059C). To calculate% inhibition of HIV replication, the supernatant of cells to which the test drugs or azidothymidine were not added was used as control (Table 1).

Таким образом, в условиях данной экспериментальной модели показано, что антиретровирусная активность препарата СМД AT к CD4+ИФН-γ превосходит антиретровирусную активность препарата СМД AT к CD4 и препарата ИФН-γ.Thus, under the conditions of this experimental model, it was shown that the antiretroviral activity of the drug DMD AT to CD4 + IFN-γ is superior to the antiretroviral activity of the drug DMD AT to CD4 and IFN-γ.

Пример 2.Example 2

Оценка антиретровирусной активности заявленного комплексного лекарственного средства, содержащего активированные - потенцированные формы водных разведении поликлональных аффинно очищенных кроличьих антител к CD4 рецептору в сверхмалых дозах (СМД), полученных сверхразведением исходного матричного раствора (концентрацией 2,5 мг/мл) в 100¹², 100³⁰, 100⁵⁰ раз, эквивалентных смеси сотенных гомеопатических разведении С 12, С20, С 50 и активированные - потенцированные формы водных разведении поликлональных аффинно очищенных кроличьих антител интерферону гамма в сверхмалых дозах (СМД), полученных сверхразведением исходного матричного раствора (концентрацией 2,5 мг/мл) в 100¹², 100³⁰, 100⁵⁰ раз, эквивалентных смеси сотенных гомеопатических разведении С 12, С 30, С 50 в соотношении 1:1 (СМД AT к CD4+ИФН-γ), а также лекарственного средства, содержащего активированные - потенцированные формы водных разведении поликлональных аффинно очищенных кроличьих антител к CD4 рецептору в сверхмалых дозах (СМД), полученных сверхразведением исходного матричного раствора (концентрацией 2,5 мг/мл) в 100¹², 100³⁰, 100⁵⁰ раз, эквивалентных смеси сотенных гомеопатических разведении С 12, С 30, С 50 (СМД AT к CD4) и лекарственного средства, содержащего активированные - потенцированные формы водных разведении поликлональных аффинно очищенных кроличьих антител к интерферону гамма в сверхмалых дозах (СМД), полученных сверхразведением исходного матричного раствора (концентрацией 2,5 мг/мл) в 100¹², 100³⁰, 100⁵⁰ раз, эквивалентных смеси сотенных гомеопатических разведении С 12, С 30, С 50 (СМД AT к ИФН-γ), проводилась с использованием макрофагов, полученных из мононуклеаров периферической крови человека, и зараженных in vitro штаммом ВИЧ-1-Ba-L. В качестве препарата сравнения использовали азидотимидин (Sigma - AZ169-100 mg, лот 107 K1578).Evaluation of the antiretroviral activity of the claimed complex drug containing activated - potentiated forms of aqueous dilution of polyclonal affinity purified rabbit antibodies to CD4 receptor in ultra-low doses (SMD) obtained by super-dilution of the initial matrix solution (concentration 2.5 mg / ml) in 100¹² , 100³⁰ 100⁵⁰ times equivalent mixture of centesimal homeopathic dilutions C12, C20, C 50 and activated - potentiated form aqueous dilution of affinity-purified rabbit polyclonal antibodies interferon ONU gamma in ultralow doses (RMA) obtained sverhrazvedeniem initial matrix solution (2.5 mg / ml) 100^12, 100^30, 100⁵⁰ times equivalent mixture of centesimal homeopathic dilutions C12, C 30, C 50 in a ratio of 1 : 1 (SMD AT to CD4 + IFN-γ), as well as a drug containing activated - potentiated forms of aqueous dilutions of polyclonal affinity purified rabbit antibodies to CD4 receptor in ultra-low doses (SMD) obtained by super-dilution of the initial matrix solution (concentration 2.5 mg / ml) 100¹² , 100³⁰ , 100⁵⁰ times, equivalent Alent mixtures of hundreds of homeopathic dilutions of C 12, C 30, C 50 (SMD AT to CD4) and a drug containing activated - potentized forms of aqueous dilutions of polyclonal affinity purified rabbit antibodies to gamma interferon in ultra-low doses (SMD) obtained by super-dilution of the original matrix solution (concentration of 2.5 mg / ml) in 100¹² , 100³⁰ , 100⁵⁰ times, equivalent to a mixture of hundred homeopathic dilutions of C 12, C 30, C 50 (SMD AT to IFN-γ), was carried out using macrophages obtained from mononuclear cells peripheral to JVI human and infected in vitro strain HIV-1-Ba-L. Azidothymidine (Sigma - AZ169-100 mg, lot 107 K1578) was used as a comparison drug.

Макрофаги периферической крови человека были получены из мононуклеарных клеток периферической крови человека, которые были выделены из крови двух здоровых серонегативных доноров при помощи центрифугирования в градиенте плотности фиколла-гипака. Мононуклеарные клетки периферической крови человека выращивали 3 суток в среде RPMI1640 (DIFCO), дополненной 10% фетальной телячьей сывороткой (комплемент был удален нагреванием в течение 45 минут при температуре 56°С), 1% раствором антибиотиков (PSN Gibco, содержащего 50 мкг/мл пенициллина, 50 мкг/мл стрептомицина и 100 мкг/мл неомицина), 15 нг/мл ГМ-КСФ (гранулоцитарно-макрофагальный колониестимулирующий фактор). Затем клетки помещали культуральные планшеты (150000 клеток/лунка в 48-луночном планшете), выращивали в течение 7 суток совместно с 1 нг/мл ГМ-КСФ и 10 нг/мл М-КСФ (макрофагальный колониестимулирующий фактор) для того, чтобы клетки смоги полностью дифференцироваться в макрофаги.Human peripheral blood macrophages were obtained from mononuclear cells of human peripheral blood, which were isolated from the blood of two healthy seronegative donors by centrifugation in a density gradient of ficoll-hypak. Human peripheral blood mononuclear cells were grown for 3 days in RPMI1640 medium (DIFCO) supplemented with 10% fetal calf serum (complement was removed by heating for 45 minutes at 56 ° C), 1% antibiotic solution (Gibco PSN containing 50 μg / ml penicillin, 50 μg / ml streptomycin and 100 μg / ml neomycin), 15 ng / ml GM-CSF (granulocyte-macrophage colony stimulating factor). The cells were then placed on culture plates (150,000 cells / well in a 48-well plate), grown for 7 days together with 1 ng / ml GM-CSF and 10 ng / ml M-CSF (macrophage colony stimulating factor) so that the cells could differentiate completely into macrophages.

Клетки заражали штаммом ВИЧ-1-Ba-L, внося 100 мкл инокулята штамма ВИЧ-1-Ba-L, что соответствует дозе 1000 TCID50 (доза, инфицирующая 50% клеток культуры ткани).Cells were infected with HIV-1-Ba-L strain, delivering 100 μl of the inoculum of HIV-1-Ba-L strain, which corresponds to a dose of 1000 TCID50 (dose infecting 50% of tissue culture cells).

Для оценки антиретровирусной активности препараты вносили в лунки за 24 ч до заражения клеток штаммом ВИЧ-1-Ba-L, а также на 3, 7, 10, 14, 17 день после заражения. На 3, 7, 10, 14, 17 сутки после инфицирования клеток был собран супернатант, использованный для оценки влияния препаратов на ингибирование репликации ВИЧ.To assess antiretroviral activity, the preparations were added to the wells 24 hours before the cells were infected with the HIV-1-Ba-L strain, as well as on days 3, 7, 10, 14, 17 after infection. On the 3rd, 7th, 10th, 14th, 17th day after infection of the cells, the supernatant was collected, which was used to assess the effect of drugs on inhibition of HIV replication.

Перед внесением в лунки, содержащие 750 мкл клеточной культуры, препараты разводили средой RPMI1640 (DIFCO) до достижения конечного объема в 250 мкл. Препарат СМД AT к CD4 и препарат СМД AT к ИФН-γ разводили в среде RPMI1640 (DIFCO) в 8 раз (степень разведения 1/8), а препарат СМД AT к CD4+СМД AT к ИФН-γ разводили в среде RPMI1640 (DIFCO) в 4 раза (степень разведения 1/4). Таким образом, количество компонентов каждого компонента в составе препарата СМД AT к CD4+СМД AT к ИФН-γ, вносимого в экспериментальную лунку при тестировании, идентично количеству компонентов в составе препарата СМД AT к CD4 и компонентов в составе препарата СМД AT к ИФН-γ, тестируемых в качестве монопрепаратов, что позволяет провести сравнение эффективности препарата СМД AT к CD4+СМД AT к ИФН-γ с его отдельными компонентами, входящими в его состав. Препарат сравнения азидотимидин разводили средой RPMI1640 (DIFCO) до достижения концентрации 8 нМ.Before entering into wells containing 750 μl of cell culture, the preparations were diluted with RPMI1640 medium (DIFCO) until a final volume of 250 μl was reached. The preparation of SMD AT to CD4 and the preparation of SMD AT to IFN-γ were diluted in RPMI1640 medium (DIFCO) 8 times (1/8 dilution), and the preparation of SMD AT to CD4 + SMD AT to IFN-γ was diluted in RPMI1640 medium (DIFCO ) 4 times (1/4 dilution rate). Thus, the number of components of each component in the composition of SMD AT to CD4 + SMD AT to IFN-γ, introduced into the experimental well during testing, is identical to the number of components in the composition of SMD AT to CD4 and the components in the composition of SMD AT to IFN-γ tested as monopreparations, which allows a comparison of the effectiveness of the drug SMD AT to CD4 + SMD AT to IFN-γ with its individual components that make up its composition. The reference preparation azidothymidine was diluted with RPMI1640 medium (DIFCO) to a concentration of 8 nM.

Эффективность препаратов определяли по ингибированию репликации ВИЧ, которую оценивали по ферментативной активности обратной транскриптазы ВИЧ в супернатантах макрофагов периферической крови человека с использованием HIV RT RetroSys набора производства INNOVAGEN (лот 10-059С). Для вычисления % ингибирования репликации ВИЧ в качестве контроля использовали супернатант клеток, к которым не вносили тестируемые препарат СМД AT к CD4+СМД AT к ИФН-γ, препарат СМД AT к CD4, препарат СМД AT к ИФН-γ и препарат сравнения азидотимидин (Таблицы 2 и 3).Drug efficacy was determined by inhibition of HIV replication, which was evaluated by the enzymatic activity of HIV reverse transcriptase in supernatants of human peripheral blood macrophages using HIV RT RetroSys kit manufactured by INNOVAGEN (lot 10-059C). To calculate% inhibition of HIV replication, a cell supernatant was used as a control for which the test preparation SMD AT to CD4 + SMD AT to IFN-γ, the preparation SMD AT to CD4, the preparation SMD AT to IFN-γ and the azidothymidine comparison drug were used (Tables 2 and 3).

Таким образом, в условиях данной экспериментальной модели показано, что антиретровирусная активность препарата СМД AT к CD4+СМД AT к ИФН-γ превосходит антиретровирусную активность препарата СМД AT к ИФН-γ и препарата СМД AT к CD4; антиретровирусная активность препарата СМД AT к CD4+СМД AT к ИФН-γ сохраняется на протяжении всего эксперимента, в отличие от антиретровирусной активности препарата СМД AT к ИФН-γ и препарата СМД AT к CD4; препарат СМД AT к CD4+СМД AT к ИФН-γ оказывает антиретровирусную активность на модели in vitro зараженных макрофагов периферической крови человека, полученных от разных серонегативных доноров, что свидетельствует о более выраженном антиретровирусном эффекте препарата СМД AT к CD4+СМД AT к ИФН-γ, в отличие от препарата СМД AT к ИФН-γ и препарата СМД AT к CD4, антиретровирусная активность которых была выявлена на модели in vitro зараженных макрофагов периферической крови человека, полученных только от одного серонегативного донора.Thus, under the conditions of this experimental model, it was shown that the antiretroviral activity of the drug SMD AT to CD4 + SMD AT to IFN-γ is superior to the antiretroviral activity of the drug SMD AT to IFN-γ and the drug SMD AT to CD4; the antiretroviral activity of the drug SMD AT to CD4 + SMD AT to IFN-γ is maintained throughout the experiment, in contrast to the antiretroviral activity of the drug SMD AT to IFN-γ and the drug SMD AT to CD4; the preparation of SMD AT to CD4 + SMD AT to IFN-γ exerts antiretroviral activity in an in vitro model of infected macrophages of human peripheral blood obtained from different seronegative donors, which indicates a more pronounced antiretroviral effect of the preparation SMD AT to CD4 + SMD AT to IFN-γ , in contrast to the preparation of SMD AT for IFN-γ and the preparation of SMD AT for CD4, the antiretroviral activity of which was detected in an in vitro model of infected macrophages of human peripheral blood obtained from only one seronegative donor.

Пример 3.Example 3

Исследование влияния комплексного лекарственного средства, в состав которого входят активированные - потенцированные формы поликлональных аффинно очищенных кроличьих антител антител к CD4 (смесь сверхмалых доз водных гомеопатических разведении С 12 + С 30 + С 50) и активированные - потенцированные формы поликлональных аффинно очищенных кроличьих антител антител к интерферону гамма (смесь сверхмалых доз водных гомеопатических разведении С 12 + С 30 + С 50) в соотношении 1:1 (далее комплексный препарат), а также компонентов, входящий в его состав (активированные - потенцированные формы поликлональных аффинно очищенных кроличьих антител антител к CD4 (смесь сверхмалых доз водных гомеопатических разведении С 12 + С 30 + С 50) (далее СМД AT к CD4) и активированные - потенцированные формы поликлональных аффинно очищенных кроличьих антител антител к интерферону гамма (смесь сверхмалых дозводных гомеопатических разведении С 12 + С 30 + С 50) (далее СМД AT к ИФН гамма)) in vitro на связывание стандартного лиганда [³H]пентазоцина с рекомбинантным сигма 1 рецептором человека оценивали радиолигандным методом. В качестве контроля тестируемых препаратов была протестирована потенцированная - активированная форма дистиллированной воды (смесь гомеопатических разведении С 12 + С 30 + С 50) (далее потенцированная вода).Study of the effect of a complex drug, which includes activated - potentiated forms of polyclonal affinity-purified rabbit antibodies to CD4 antibodies (a mixture of ultra-low doses of aqueous homeopathic dilutions of C 12 + C 30 + C 50) and activated - potentiated forms of polyclonal affinity-purified rabbit antibodies to interferon gamma (a mixture of ultra-low doses of aqueous homeopathic dilution C 12 + C 30 + C 50) in a ratio of 1: 1 (hereinafter referred to as a complex preparation), as well as its constituent components (act the induced ones are the potentiated forms of polyclonal affinity-purified rabbit antibodies of anti-CD4 antibodies (a mixture of ultra-low doses of aqueous homeopathic dilutions of C 12 + C 30 + C 50) (hereinafter referred to as SMD AT to CD4) and the activated ones are the potentiated forms of polyclonal affinity-purified rabbit antibodies of anti-gamma interferon ( a mixture of ultralow homeopathic dilutions of C 12 + C 30 + C 50) (hereinafter referred to as SMD AT to IFN gamma)) in vitro for binding of the standard [³ H] pentazocine ligand to the recombinant human sigma 1 receptor was evaluated by the radioligand method. As a control of the tested drugs, the potentiated - activated form of distilled water (a mixture of homeopathic dilutions C 12 + C 30 + C 50) was tested (hereinafter potentized water).

Сигма-1 рецептор - внутриклеточный рецептор, локализованный в клетках центральной нервной системе, клетках большинства периферических тканей и иммунокомпетентных клетках. Этот рецептор посредством контроля гомеостаза внутриклеточного кальция, регулирует внутриклеточные сигнальные каскады, приводящие к активации соответствующих транскрипционных факторов и транскрипции целого семейства генов, кодирующих, в частности, факторы резистентности к инфекционным агентам и цитокины. В связи с этим способность лекарственных средств оказывать влияние на эффективность взаимодействия лигандов с сигма-1 рецептором указывает на наличие противовирусного и иммуномодулирующего компонентов в спектре их фармакологической активности, что позволяет рассматривать данные препараты в качестве эффективных лекарственных средств для лечения и профилактики различных инфекционных заболеваний.Sigma-1 receptor is an intracellular receptor localized in the cells of the central nervous system, the cells of most peripheral tissues and immunocompetent cells. This receptor, by controlling intracellular calcium homeostasis, regulates intracellular signaling cascades leading to activation of the corresponding transcription factors and transcription of a whole family of genes encoding, in particular, resistance factors to infectious agents and cytokines. In this regard, the ability of drugs to influence the effectiveness of the interaction of ligands with the sigma-1 receptor indicates the presence of antiviral and immunomodulating components in the spectrum of their pharmacological activity, which allows us to consider these drugs as effective drugs for the treatment and prevention of various infectious diseases.

В опыте (для измерения общего связывания) в инкубационную среду вносили 20 мкл комплексного препарата или по 10 мкл СМД AT к CD4 или СМД AT к ИФН гамма. Таким образом, количество СМД AT к CD4 и СМД AT к ИФН гамма, вносимых в экспериментальную лунку при тестировании комплексного препарата, было идентично количеству СМД AT к CD4 и СМД AT к ИФН гамма тестируемых в качестве монопрепаратов, что позволяет провести сравнение эффективности комплексного препарата с его отдельными компонентами, входящими в его состав. Потенцированную воду вносили в инкубационную среду в объеме 20 мкл и 10 мкл.In the experiment (for measuring total binding), 20 μl of the complex preparation or 10 μl of SMD AT to CD4 or SMD AT to IFN gamma were added to the incubation medium. Thus, the number of SMD AT to CD4 and SMD AT to IFN gamma introduced into the experimental well when testing the complex preparation was identical to the number of SMD AT to CD4 and SMD AT to IFN gamma tested as single drugs, which allows a comparison of the effectiveness of the complex preparation with its individual components that make up its composition. Potentiated water was introduced into the incubation medium in a volume of 20 μl and 10 μl.

Затем вносили 160 мкл (~200µg белка) гомогената мембран клеток линии Jurkat (линия лейкемических Т-лимфоцитов человека), и в последнюю очередь 20 мкл радиолиганда меченого тритием [³H]пентазоцин (15 нМ).Then 160 μl (~ 200 μg protein) of the homogenate of the cell membranes of the Jurkat line (human leukemic T-lymphocyte line), and lastly 20 μl of the tritium-labeled [³ H] pentazocine radioligand (15 nM), were added.

Для измерения неспецифического связывания вместо препаратов или потенцированной воды в инкубационную среду вносили 20 мкл немеченого лиганда - галоперидол (10 мкМ).To measure nonspecific binding, instead of preparations or potentized water, 20 μl of unlabeled ligand, haloperidol (10 μM), was added to the incubation medium.

Радиоактивность измеряли на сцинтилляционном счетчике (Topcount, Packard) с использованием сцинтилляционной смеси (Microscint 0, Packard) после инкубации в течение 120 минут при температуре 22°С в 50 мМ Tris-HCl буфере (рН=7,4) и фильтрации на стекловолоконных фильтрах (GF/B, Packard). Специфическое связывание (в опыте или контроле) рассчитывали как разницу между общим (в опыте или контроле) и неспецифическим связыванием.Radioactivity was measured on a scintillation counter (Topcount, Packard) using a scintillation mixture (Microscint 0, Packard) after incubation for 120 minutes at 22 ° C in 50 mM Tris-HCl buffer (pH = 7.4) and filtration on glass fiber filters (GF / B, Packard). Specific binding (in experiment or control) was calculated as the difference between total (in experiment or control) and non-specific binding.

Результаты представлены в виде процента ингибирования специфического связывания в контроле (в качестве контроля использовали дистиллированную воду) (см. Таблицу 4).The results are presented as percent inhibition of specific binding in the control (distilled water was used as the control) (see Table 4).

- Результаты, отражающие ингибирование выше 50%, представляют собой значительные эффекты исследуемых соединений.- Results reflecting inhibitions above 50% represent significant effects of the test compounds.

- Результаты, отражающие ингибирование от 25% до 50%, свидетельствуют об эффектах от слабого до умеренного.- Results reflecting inhibitions of 25% to 50% indicate mild to moderate effects.

- Результаты, отражающие ингибирование менее 25% считаются незначительными эффектами исследуемого соединения и находятся в пределах уровня фона.- Results reflecting an inhibition of less than 25% are considered minor effects of the test compound and are within the background level.

Таким образом, в условиях данной экспериментальной модели показано, что:Thus, in the conditions of this experimental model it is shown that:

1. Комплексный препарат более эффективно, чем отдельные его компоненты (СМД AT к CD4 и СМД AT к ИФН гамма) ингибирует связывание стандартного радиолиганда [³Н]пентазоцина с рекомбинантным сигма 1 рецептором человека.1. The complex preparation is more effective than its individual components (SMD AT to CD4 and SMD AT to IFN gamma) inhibits the binding of the standard radioligand [³ H] pentazocine to the recombinant human sigma 1 receptor.

2. СМД AT к CD4, внесенные в экспериментальную лунку в объеме 10 мкл, ингибируют связывание стандартного радиолиганда [³H]пентазоцина с рекомбинантным сигма 1 рецептором человека, но выраженность эффекта уступает выраженности эффекта комплексного препарата.2. SMD AT to CD4, introduced into the experimental well in a volume of 10 μl, inhibits the binding of the standard radioligand [³ H] pentazocine to the recombinant human sigma 1 receptor, but the severity of the effect is less than the severity of the effect of the complex drug.

3. СМД AT к ИФН гамма, внесенные в экспериментальную лунку в объеме 10 мкл, не оказывали влияния на связывание стандартного радиолиганда [³H]пентазоцина с рекомбинантным сигма 1 рецептором человека.3. SMD AT for IFN gamma, introduced into the experimental well in a volume of 10 μl, did not affect the binding of the standard radioligand [³ H] pentazocine to the recombinant human sigma 1 receptor.

4. Потенцированная вода, внесенная в экспериментальную лунку в объеме 10 мкл или 20 мкл, не оказывала влияния на связывание стандартного радиолиганда [³H]пентазоцина с рекомбинантным сигма 1 рецептором человека.4. Potentiated water introduced into the experimental well in a volume of 10 μl or 20 μl did not affect the binding of the standard radioligand [³ H] pentazocine to the recombinant human sigma 1 receptor.

Пример 4.Example 4

Для исследования свойств заявленных лекарственных средств для лечения пациентов группы активного препарата №1 были использованы таблетки массой 300 мг, пропитанные фармацевтической композицией, содержащей водно-спиртовые растворы (6 мг/табл.) активированных - потенцированных форм поликлональных аффинно очищенных кроличьих антител к гамма интерферону человека (AT к ИФН-γ) и CD4 рецептору (AT к CD4) в сверхмалых дозах (СМД), полученных сверхразведением исходного матричного раствора в 100¹², 100³⁰, 100²⁰⁰ раз, эквивалентных смеси сотенных гомеопатических разведении С 12, С 30, С 200 (СМД AT к ИФН-γ+AT к CD4); для лечения пациентов группы активного препарата №2 были использованы таблетки массой 300 мг, пропитанные водно-спиртовым раствором (3 мг/табл.) активированной - потенцированной формы поликлональных кроличьих антител к гамма интерферону человека, очищенных на антигене, в сверхмалой дозе, полученной сверхразведением исходного матричного раствора в 100¹², 100³⁰, 100⁵⁰ раз, эквивалентной смеси сотенных гомеопатических разведении С 12, С 30, С 50 (СМД AT к ИФН-γ).To study the properties of the claimed drugs for the treatment of patients of the active drug group No. 1, 300 mg tablets were used, impregnated with a pharmaceutical composition containing aqueous-alcoholic solutions (6 mg / tablet) of activated - potentiated forms of polyclonal affinity-purified rabbit antibodies to human gamma interferon (AT to IFN-γ) and CD4 receptor (AT to CD4) in ultra-low doses (SMD) obtained by super-dilution of the initial matrix solution in 100¹² , 100³⁰ , 100²⁰⁰ times, equivalent to a mixture of hundreds of homeopathic their dilution C 12, C 30, C 200 (SMD AT to IFN-γ + AT to CD4); for the treatment of patients of the active drug group No. 2, 300 mg tablets were used, impregnated with an aqueous-alcoholic solution (3 mg / tablet) of an activated, potentiated form of polyclonal rabbit antibodies to human gamma interferon, purified on antigen, in an ultra-low dose obtained by super-dilution of the original matrix solution in 100¹² , 100³⁰ , 100⁵⁰ times, equivalent to a mixture of hundreds of homeopathic dilutions of C 12, C 30, C 50 (SMD AT to IFN-γ).

Оценку эффективности препаратов, содержащих СМД AT к ИФН-γ+АТ к CD4 и СМД AT к ИФН-γ, в лечении хронического вирусного гепатита С (ХГС) проводили в ходе сравнительного исследования в параллельных группах с участием 14 больных (10 мужчин и 4 женщины) в возрасте от 27 до 52 лет. Диагноз ХГС подтверждали на основании профиля сывороточных маркеров - AT к HCV и HCV RNA. Все пациенты, включенные в исследование, имели 2 или 3 генотип HCV, малосимптомное медленно прогрессирующее течение ХГС с низкой активностью (менее 3-кратного повышения уровня сывороточных аминотрансфераз, или <100 ЕД/л), ни один из пациентов ранее не получал противовирусной терапии. В исследование не включались пациенты с положительным результатом серологического анализа на HIV, RW, анти-НСА, HBsAg или HBcor Ab, с циррозом печени, тяжелыми сопутствующими заболеваниями в стадии обострения, талассемией или другой гемоглобинопатией, алкогольной и/или лекарственной/наркотической зависимостью, после трансплантации органов, постоянно принимающие иммуносупрессивные препараты, беременные и кормящие ребенка грудью женщины. Пациентам первых двух групп была назначена терапия каким-либо исследуемым препаратом в дозе 1 таблетка 3 раза в день в течение 24 недель: пациентам 1 группы (n=5) - композиция СМД AT к ИФН-γ+АТ к CD4; 2 группы (n=4) - СМД AT к ИФН-γ Контрольную группу (№3) составили 5 пациентов с персистирующей виремией и стойко нормальными уровнями аминотрансфераз (<20 ЕД/л), которым не назначалась какая-либо терапия. В ходе исследования проводились врачебные осмотры, контроль вирусной нагрузки и лабораторных показателей, регистрировалась сопутствующая терапия, возможные нежелательные явления. В качестве критериев эффективности лечения на 24-й неделе оценивались вирусная нагрузка HCV RNA и активность аланинаминотрансферазы (АЛТ).The evaluation of the effectiveness of drugs containing SMD AT to IFN-γ + AT to CD4 and SMD AT to IFN-γ in the treatment of chronic viral hepatitis C (CHC) was carried out during a comparative study in parallel groups involving 14 patients (10 men and 4 women ) at the age of 27 to 52 years. The diagnosis of HCV was confirmed based on the profile of serum markers - AT to HCV and HCV RNA. All patients included in the study had 2 or 3 HCV genotypes, a low-symptom slowly progressive chronic hepatitis C course with low activity (less than a 3-fold increase in serum aminotransferase levels, or <100 U / L), none of the patients had previously received antiviral therapy. The study did not include patients with a positive serological test for HIV, RW, anti-HCA, HBsAg or HBcor Ab, with cirrhosis of the liver, severe concomitant diseases in the acute stage, thalassemia or other hemoglobinopathy, alcohol and / or drug / drug dependence, after organ transplants, constantly taking immunosuppressive drugs, pregnant and lactating women. Patients of the first two groups were prescribed therapy with any studied drug at a dose of 1 tablet 3 times a day for 24 weeks: for patients of group 1 (n = 5) - composition of SMD AT to IFN-γ + AT to CD4; 2 groups (n = 4) - SMD AT to IFN-γ The control group (No. 3) consisted of 5 patients with persistent viremia and persistently normal levels of aminotransferases (<20 U / L) who were not prescribed any therapy. During the study, medical examinations, monitoring of viral load and laboratory parameters were carried out, concomitant therapy was recorded, possible undesirable effects. At the 24th week, the HCV RNA viral load and the activity of alanine aminotransferase (ALT) were evaluated as criteria for the effectiveness of treatment.

Данные по вирусной нагрузке (числу копий HCV RNA), представленные таблице 5 в виде значений медианы (Me), первого и третьего квартилей (Q1, Q3), свидетельствуют о положительной ее динамике, полученной у пациентов 1 и 2 групп к концу 24-недельной терапии. Прием препарата СМД AT к ИФН-γ+AT к CD4 приводил к уменьшению числа копий HCV RNA у 4 из 5 человек 1 группы, при этом среднее снижение вирусной нагрузки составило 75%. Противовирусная активность монокомпонентного препарата СМД AT к ИФН-γ была несколько ниже, поскольку снижение числа копий HCV RNA отмечено у 3 из 4 пациентов 2 группы, среднее снижение вирусной нагрузки составило 55%. Среди участников исследования контрольной 3 группы положительной динамики вирусной нагрузки не выявлено.The data on the viral load (the number of copies of HCV RNA) presented in table 5 in the form of the values of the median (Me), the first and third quartiles (Q1, Q3) indicate its positive dynamics obtained in patients of groups 1 and 2 by the end of the 24-week therapy. Admission of the drug SMD AT to IFN-γ + AT to CD4 led to a decrease in the number of copies of HCV RNA in 4 out of 5 people of the 1st group, while the average decrease in viral load was 75%. The antiviral activity of the monocomponent drug SMD AT to IFN-γ was slightly lower, since a decrease in the number of copies of HCV RNA was noted in 3 of 4 patients of group 2, the average decrease in viral load was 55%. Among the participants in the study control 3 groups of positive dynamics of viral load was not detected.

Противовирусная активность исследуемых препаратов сочеталась с положительной динамикой уровня АЛТ, которую зарегистрировали у пациентов 1 и 2 групп к концу 24 недель лечения. Нормализация уровня АЛТ была отмечена у 2 пациентов группы СМД AT к ИФН-γ+АТ к CD4 и также у 1 пациента группы СМД AT к ИФН-γ. У 1 пациента контрольной группы на фоне увеличения вирусной нагрузки через 24 недели наблюдения показатель АЛТ превысил верхнюю границу нормы (>20 ЕД/л).The antiviral activity of the studied drugs was combined with the positive dynamics of the ALT level, which was recorded in patients of groups 1 and 2 by the end of 24 weeks of treatment. Normalization of ALT level was observed in 2 patients of the SMD AT group to IFN-γ + AT to CD4 and also in 1 patient of the SMD AT group to IFN-γ. In 1 patient of the control group, against the background of an increase in viral load, after 24 weeks of observation, the ALT indicator exceeded the upper limit of the norm (> 20 U / L).

В ходе наблюдения не было выявлено каких-либо нежелательных явлений, связанных с приемом исследуемых препаратов, что свидетельствовало о хорошей их переносимости. Отсутствие патологических отклонений со стороны анализов крови и мочи, а также биохимических показателей, включая почечные и печеночные маркеры, подтверждало безопасность лечения.During the observation, no adverse events associated with the administration of the studied drugs were detected, which indicated their good tolerability. The absence of pathological abnormalities from blood and urine tests, as well as biochemical parameters, including renal and hepatic markers, confirmed the safety of treatment.

Таким образом, в результате исследования были получены данные об эффективности и безопасности препаратов СМД AT к ИФН-γ+АТ к CD4 и СМД AT к ИФН-γ, в лечении больных с ХГС. Наиболее отчетливый противовирусный эффект отмечен у препарата СМД AT к ИФН-γ+АТ к CD4, что подтверждалось положительной динамикой вирусной нагрузки, а также зарегистрированным у 2 пациентов полным вирусологическим ответом к концу 24 недель терапии. Противовирусная эффективность препаратов, содержащих СМД AT к ИФН-γ+АТ к CD4 и СМД AT к ИФН-γ, сочеталась со снижением активности ХГС, что выражалось в снижении и даже нормализации уровня АЛТ у части пациентов к окончанию 24-недельного курса терапии.Thus, as a result of the study, data were obtained on the efficacy and safety of SMD AT preparations for IFN-γ + AT for CD4 and SMD AT for IFN-γ in the treatment of patients with chronic hepatitis C. The most distinct antiviral effect was observed in the preparation of SMD AT to IFN-γ + AT to CD4, which was confirmed by the positive dynamics of the viral load, as well as the complete virologic response recorded in 2 patients by the end of 24 weeks of therapy. The antiviral efficacy of drugs containing SMD AT to IFN-γ + AT to CD4 and SMD AT to IFN-γ was combined with a decrease in chronic hepatitis C activity, which was expressed in a decrease and even normalization of ALT level in some patients by the end of a 24-week course of therapy.

Пример 5.Example 5

Для исследования свойств заявленных лекарственных средств для лечения пациентов группы активного препарата №1 были использованы таблетки массой 300 мг, пропитанные фармацевтической композицией, содержащей водно-спиртовые растворы (6 мг/табл.) активированных - потенцированных форм поликлональных аффинно очищенных кроличьих антител к гамма интерферону человека (анти-IFN-γ) и CD4 рецептора (анти-CD4) в сверхмалых дозах (СМД), полученных сверхразведением исходного матричного раствора в 100¹², 100³⁰, 100²⁰⁰ раз, эквивалентных смеси сотенных гомеопатических разведении С 12, С 30, С 200 (СМД анти-IFN-γ+анти-CD4); для лечения пациентов группы 2 сравнения были использованы таблетки массой 300 мг, пропитанные водно-спиртовым раствором (3 мг/табл.) активированной - потенцированной формы поликлональных кроличьих антител к гамма интерферону человека, очищенных на антигене, в сверхмалой дозе, полученной сверхразведением исходного матричного раствора в 100¹², 100³⁰, 100⁵⁰ раз, эквивалентной смеси сотенных гомеопатических разведении С 12, С 30, С 50 (СМД анти-IFN-γ).To study the properties of the claimed drugs for the treatment of patients of the active drug group No. 1, 300 mg tablets were used, impregnated with a pharmaceutical composition containing aqueous-alcoholic solutions (6 mg / tablet) of activated - potentiated forms of polyclonal affinity-purified rabbit antibodies to human gamma interferon (anti-IFN-γ) and CD4 receptor (anti-CD4) at ultra low doses (RMA) obtained sverhrazvedeniem initial matrix solution 100^12, 100^30, 100^{to 200} times equivalent mixture of centesimal gomeopatiche FIR dilution C 12, C 30, C 200 (SMD anti-IFN-γ + anti-CD4); for the treatment of patients of comparison group 2, 300 mg tablets were used, impregnated with an aqueous-alcoholic solution (3 mg / tablet) of an activated, potentiated form of polyclonal rabbit antibodies to human gamma interferon, purified on antigen, in an ultra-low dose obtained by super-dilution of the initial matrix solution 100¹² , 100³⁰ , 100⁵⁰ times, the equivalent mixture of hundreds of homeopathic dilutions of C 12, C 30, C 50 (SMD anti-IFN-γ).

Антиретровирусную активность композиции СМД анти-IFN-γ+анти-CD4 оценивали в ходе открытого сравнительного клинического исследования с участием пациентов, инфицированных вирусом иммунодефицита человека (ВИЧ), которые наблюдались в Территориальном центре по профилактике и борьбе со СПИД′ом и инфекционными заболеваниями. В исследование были включены 53 мужчин и 21 женщины (всего 74 пациентов) в возрасте от 18 до 48 лет с вирусной нагрузкой ≥150 копий РНК ВИЧ-1 в 1 мл плазмы и уровнем CD4-лимфоцитов не ниже 250 клеток/мкл (или ≥0,25×10⁹/л). 23 из 97 участников исследования наблюдались по поводу бессимптомного инфекционного статуса и ранее не получали лечения по поводу ВИЧ-инфекции (наивные пациенты). 63 из 97 пациентов находились на антиретровирусной терапии (APT) в течение 1-2 лет. В исследование не включались пациенты с циррозом печени, вирусным гепатитом С, тяжелыми сопутствующими заболеваниями в стадии обострения, беременные женщины, а также лица, принимающие внутривенно наркотические средства. Исследование проводили в осеннее-зимний период, когда отмечался сезонный подъем заболеваемости гриппом и острыми респираторными инфекциями (ОРВИ).The antiretroviral activity of the SMD anti-IFN-γ + anti-CD4 composition was evaluated during an open comparative clinical study in patients infected with human immunodeficiency virus (HIV), which were observed in the Territorial Center for the Prevention and Control of AIDS and Infectious Diseases. The study included 53 men and 21 women (a total of 74 patients) aged 18 to 48 years with a viral load of ≥150 copies of HIV-1 RNA in 1 ml of plasma and a CD4-lymphocyte level of at least 250 cells / μl (or ≥0 , 25 × 10⁹ / L). 23 of 97 study participants were observed for asymptomatic infectious status and had not previously received treatment for HIV infection (naive patients). 63 of 97 patients were on antiretroviral therapy (APT) for 1-2 years. The study did not include patients with liver cirrhosis, viral hepatitis C, severe concomitant diseases in the acute stage, pregnant women, as well as persons taking intravenous drugs. The study was conducted in the autumn-winter period, when there was a seasonal increase in the incidence of influenza and acute respiratory infections (ARVI).

75 пациента были рандомизированы в две группы, им была назначена терапия препаратом группы 1 или препаратом сравнения группы 2 сравнения в профилактической (в отношении гриппа/ОРВИ) дозировке - по 1 таблетке 1 раз в день в течение 6 недель, в том числе: пациентам группы 1 (n=25) была назначена композиция СМД анти-IFN-γ+анти-CD4 в виде монотерапии (подгруппа 1А: наивные пациенты, n=12) или в сочетании с APT (подгруппа 1Б, n=13); пациентам группы 2 сравнения (n=27) был назначен препарат СМД анти-IFN-γ, в том числе, в виде монотерапии (подгруппа 3А: наивные пациенты, n=11) или в сочетании с APT (подгруппа 3Б, n=16). Контрольную (четвертую) группу (n=22) составили пациенты, которые продолжали получать APT по прежней схеме без добавления какого-либо изучаемого препарата (группа APT).75 patients were randomized into two groups, they were prescribed therapy with a group 1 drug or a comparison group 2 comparison drug in a prophylactic (against influenza / SARS) dosage - 1 tablet 1 time per day for 6 weeks, including: patients of the group 1 (n = 25) was assigned the composition of SMD anti-IFN-γ + anti-CD4 as monotherapy (subgroup 1A: naive patients, n = 12) or in combination with APT (subgroup 1B, n = 13); comparison group 2 patients (n = 27) were prescribed SMD anti-IFN-γ, including monotherapy (subgroup 3A: naive patients, n = 11) or in combination with APT (subgroup 3B, n = 16) . The control (fourth) group (n = 22) consisted of patients who continued to receive APT according to the previous scheme without adding any study drug (APT group).

Исходно и через 6 недель у всех пациентов оценивали вирусную нагрузку, уровень CD4 и CD8 лимфоцитов, иммунорегуляторный индекс CD4/CD8. Для определения копий РНК ВИЧ-1 в плазме крови использовали наборы COBAS AMPLICOR HIV-1 MONITOR Kit, version 1,5 для автоматического ПЦР-анализатора COBAS AMPLICOR (Roche, Швейцария). Фенотипирование циркулирующих лимфоцитов периферической крови выполняли на проточном цитофлюориметре FACSCount (Becton Dickmson, США) с использованием стандартных тест-систем FACSCount Reagent Kit, содержащих антитела к CD3, CD4, CD8, меченные флюорохромами FITC, РЕ.At baseline and after 6 weeks, all patients were assessed for viral load, CD4 and CD8 lymphocyte counts, and CD4 / CD8 immunoregulatory index. To determine the copies of HIV-1 RNA in blood plasma, we used the COBAS AMPLICOR HIV-1 MONITOR Kit, version 1.5 for the automatic PCR analyzer COBAS AMPLICOR (Roche, Switzerland). Phenotyping of circulating peripheral blood lymphocytes was performed on a FACSCount flow cytometer (Becton Dickmson, United States) using standard FACSCount Reagent Kit test systems containing antibodies to CD3, CD4, CD8 labeled with FITC, PE fluorochromes.

В таблице 6 представлены данные по вирусной нагрузке (числу копий РНК ВИЧ) в виде значений медианы (Me), первого и третьего квартилей (Q1, Q3) у пациентов исследуемых групп в динамике наблюдения. В результате исследования установлено, что 6-недельный прием композиции СМД анти-IFN-γ+анти-CD4 приводил к снижению количества копий РНК ВИЧ-1 у 58% наивных пациентов (у 7 из 12 человек подгруппы 1А), при этом среднее снижение вирусной нагрузки составило 16,9%. Сочетанное применение композиции СМД анти-IFN-γ+анти-CD4 и APT было не менее эффективным, поскольку уменьшение количества копий РНК ВИЧ-1 отмечено у 62% участников исследования (у 8 из 13 человек подгруппы 1Б), а снижение вирусной нагрузки в среднем было 18,2% от исходного уровня. Антиретровирусная активность, отмеченная в группе 1, была несколько выше результатов лечения, полученных у пациентов группы 2 сравнения. Монотерапия СМД анти-IFN-γ через 6 недель снижала количество копий РНК ВИЧ-1 у 36% наивных пациентов (у 4 из 11 человек подгруппы 3А), при этом уменьшение вирусной нагрузки в среднем составило 9,5%. Сочетанное применение монокомпонентного препарата СМД анти-IFN-γ и APT повышало эффективность терапии, способствуя снижению вирусной нагрузки у 50% участников исследования (у 8 из 16 человек подгруппы 3Б) в среднем на 14,2%. Аналогичные показатели лечения у лиц, получавших только APT (контрольная группа 4), составили 32% (у 7 из 22 человек группы 4) и 13,3% соответственно.Table 6 presents the data on the viral load (the number of copies of HIV RNA) in the form of the median (Me), first and third quartiles (Q1, Q3) in patients of the studied groups in the dynamics of observation. As a result of the study, it was found that a 6-week intake of the SMD anti-IFN-γ + anti-CD4 composition reduced the number of copies of HIV-1 RNA in 58% of naive patients (in 7 of 12 people of subgroup 1A), while the average decrease in viral the load was 16.9%. The combined use of the composition of SMD anti-IFN-γ + anti-CD4 and APT was no less effective, since a decrease in the number of copies of HIV-1 RNA was observed in 62% of the study participants (in 8 out of 13 people of subgroup 1B), and the average viral load reduction was 18.2% of the baseline. The antiretroviral activity noted in group 1 was slightly higher than the treatment results obtained in patients of comparison group 2. After 6 weeks, monotherapy with SMD anti-IFN-γ reduced the number of copies of HIV-1 RNA in 36% of naive patients (in 4 of 11 people of subgroup 3A), while the decrease in viral load averaged 9.5%. The combined use of the monocomponent drug SMD anti-IFN-γ and APT increased the effectiveness of therapy, helping to reduce the viral load in 50% of the study participants (in 8 of 16 people of subgroup 3B) by an average of 14.2%. Similar treatment indices in individuals receiving only APT (control group 4) were 32% (in 7 of 22 people in group 4) and 13.3%, respectively.

Анализ показателей субпопуляций циркулирующих лимфоцитов в динамике наблюдения (Таблица 7) показал более выраженное, чем в контрольной группе, увеличение числа CD4 лимфоцитов через 6 недель терапии при использовании СМД анти-IFN-γ+анти-CD4 и СМД анти-IFN-γ в виде монотерапии у наивных пациентов (подгруппы 1А, 2А) или при сочетании с APT (подгруппы 1Б, 2Б). При этом число CD8 через 6 недель приема препаратов (моно- либо сочетанная терапия) не менялось ни в одной из изучаемых групп. Позитивная динамика со стороны CD4-лимфоцитов в ходе лечения приводила к повышению иммунорегуляторного индекса CD4/CD8, наиболее значимому в подгруппах пациентов, принимавших композиции СМД анти-IFN-γ+анти-CD4 (моно- или сочетанная терапия - группы 1) и СМД анти-IFN-γ в сочетании с APT (подгруппа 2Б).The analysis of the indicators of the subpopulations of circulating lymphocytes in the follow-up dynamics (Table 7) showed a more pronounced than in the control group increase in the number of CD4 lymphocytes after 6 weeks of treatment when using SMD anti-IFN-γ + anti-CD4 and SMD anti-IFN-γ monotherapy in naive patients (subgroups 1A, 2A) or in combination with APT (subgroups 1B, 2B). Moreover, the number of CD8 after 6 weeks of drug administration (mono-or combination therapy) did not change in any of the studied groups. The positive dynamics of CD4 lymphocytes during treatment led to an increase in the immunoregulatory index of CD4 / CD8, the most significant in the subgroups of patients taking anti-IFN-γ + anti-CD4 SMD compositions (mono- or combined therapy - groups 1) and anti-SMD -IFN-γ in combination with APT (subgroup 2B).

Отсутствие у пациентов в ходе лечения нежелательных явлений, связанных с приемом исследуемых лекарственных средств, свидетельствовало о хорошей переносимости препаратов. Повторный контроль лабораторных показателей, в том числе, анализов крови и мочи, биохимических маркеров, подтверждало безопасность лечения.The absence in patients during treatment of adverse events associated with the administration of the studied drugs indicated a good tolerance to the drugs. Repeated monitoring of laboratory parameters, including blood and urine tests, biochemical markers, confirmed the safety of treatment.

Таким образом, проведенное исследование продемонстрировало антиретровирусную эффективность препарата СМД анти-IFN-γ+анти-CD4, обусловленную, очевидно, изменением функциональной активности CD4 рецепторов, что препятствует проникновению ВИЧ в клетки, а также подавлением репликации ВИЧ внутри клетки за счет активации процессов транскрипции мРНК противовирусных белков. Установлено, что снижение вирусной нагрузки, отмеченное в результате 6-недельного приема препарата СМД анти-IFN-γ+анти-CD4 в дозе 1 таблетка в день, превышает противовирусный эффект, который регистрируется через 6 недель приема монокомпонентного препарата СМД анти-IFN-γ в той же дозе либо продолжающейся по прежней схеме APT. Сочетание какого-либо препарата СМД анти-IFN-γ+анти-CD4 или СМД анти-IFN с APT несколько усиливает противовирусную активность последней, что проявляется в уменьшении среднего значения вирусной нагрузки через 6 недель у большего процента участников исследования.Thus, the study demonstrated the antiretroviral efficacy of the SMD preparation anti-IFN-γ + anti-CD4, apparently due to a change in the functional activity of CD4 receptors, which prevents the penetration of HIV into cells, as well as suppression of HIV replication inside the cell due to activation of mRNA transcription processes antiviral proteins. It was found that the decrease in viral load observed as a result of a 6-week intake of the drug SMD anti-IFN-γ + anti-CD4 at a dose of 1 tablet per day exceeds the antiviral effect, which is recorded after 6 weeks of taking the monocomponent drug SMD anti-IFN-γ in the same dose or continuing according to the previous APT regimen. The combination of any SMD anti-IFN-γ + anti-CD4 or SMD anti-IFN with APT slightly enhances the antiviral activity of the latter, which is manifested in a decrease in the average value of the viral load after 6 weeks in a larger percentage of study participants.

Показано влияние препаратов СМД анти-IFM-γ+анти-CD4 на соотношение CD4/CD8 лимфоцитов у ВИЧ-инфицированных пациентов (за счет некоторого увеличения абсолютного количества CD4-клеток), наиболее выраженное при совместном использовании с APT. Учитывая одновременное снижение вирусной нагрузки у пациентов, принимающих препараты СМД анти-IFN-γ+анти-CD4, можно полагать, что увеличение количества CD4-клеток связано с пополнением популяции этих клеток за счет здоровых (неинфицированных) клеток. Сочетание APT с препаратами СМД анти-IFN-γ+анти-CD4 или СМД анти-IFN более эффективно в отношении восстановления иммунорегуляторного индекса CD4/CD8, чем продолжающаяся APT по прежней схеме.The effect of SMD preparations anti-IFM-γ + anti-CD4 on the ratio of CD4 / CD8 lymphocytes in HIV-infected patients (due to a slight increase in the absolute number of CD4 cells), which is most pronounced when used together with APT, is shown. Given the simultaneous decrease in viral load in patients taking SMD anti-IFN-γ + anti-CD4 drugs, it can be assumed that the increase in the number of CD4 cells is associated with the replenishment of the population of these cells due to healthy (uninfected) cells. The combination of APT with SMD anti-IFN-γ + anti-CD4 or SMD anti-IFN drugs is more effective in restoring the immunoregulatory index of CD4 / CD8 than continuing APT according to the previous scheme.

Антиретровирусная активность препаратов СМД анти-IFN-γ+анти-CD4 позволяет использовать его с профилактической и лечебной целью как у наивных ВИЧ-инфицированных пациентов, так и у лиц, получающих APT.The antiretroviral activity of SMD preparations anti-IFN-γ + anti-CD4 allows its use for prophylactic and therapeutic purposes both in naive HIV-infected patients and in individuals receiving APT.

Claims (10)

Translated fromRussian

1. Комплексное лекарственное средство для лечения вирусных заболеваний, характеризующееся тем, что содержит в качестве действующих компонентов активированную-потенцированную форму антител к гамма-интерферону человека и активированную-потенцированную форму антител к CD4 рецептору.1. A comprehensive drug for the treatment of viral diseases, characterized in that it contains as active components an activated-potentiated form of antibodies to human gamma-interferon and an activated-potentiated form of antibodies to CD4 receptor.2. Комплексное лекарственное средство по п.1, характеризующееся тем, что активированную-потенцированную форму антител к гамма-интерферону человека и активированную-потенцированную форму антител к CD4 рецептору используют в виде активированного-потенцированного водного или водно-спиртового раствора, активность которого обусловлена процессом последовательного многократного разведения матричного - исходного - раствора антител в водном или водно-спиртовом растворителе в сочетании с внешним механическим воздействием - вертикальным встряхиванием каждого разведения.2. The complex drug according to claim 1, characterized in that the activated-potentiated form of antibodies to human gamma interferon and the activated-potentiated form of antibodies to CD4 receptor are used in the form of an activated-potentiated aqueous or aqueous-alcoholic solution, the activity of which is due to the process sequential multiple dilution of the matrix - initial - solution of antibodies in an aqueous or aqueous-alcohol solvent in combination with external mechanical stress - vertical shake stallation of each dilution.3. Комплексное лекарственное средство по п.1 или 2, характеризующееся тем, что выполнено в твердой лекарственной форме в виде фармацевтической композиции, которая содержит технологически необходимое количество нейтрального носителя, насыщенного смесью водных или водно-спиртовых растворов активированной-потенцированной формы антител к гамма-интерферону человека и активированной-потенцированной формы антител к CD4 рецептору, и фармацевтически приемлемые добавки.3. The complex drug according to claim 1 or 2, characterized in that it is made in solid dosage form in the form of a pharmaceutical composition that contains the technologically necessary amount of a neutral carrier saturated with a mixture of aqueous or aqueous-alcoholic solutions of an activated-potentiated form of antibodies to gamma human interferon and an activated-potentiated form of antibodies to the CD4 receptor, and pharmaceutically acceptable additives.4. Комплексное лекарственное средство по п.1 или 2, характеризующееся тем, что водные или водно-спиртовые растворы активированных-потенцированных форм антител к гамма-интерферону человека и CD4 рецептору получены путем многократного последовательного разведения матричного - исходного - раствора антител в сочетании с внешним воздействием - вертикальным встряхиванием каждого разведения, при этом концентрация матричного раствора составляет 0,5÷5,0 мг/мл.4. The complex drug according to claim 1 or 2, characterized in that the aqueous or aqueous-alcoholic solutions of the activated-potentiated forms of antibodies to human gamma-interferon and the CD4 receptor are obtained by repeated serial dilution of the matrix - initial - antibody solution in combination with an external exposure - vertical shaking of each dilution, while the concentration of the matrix solution is 0.5 ÷ 5.0 mg / ml5. Комплексное лекарственное средство по п.1 или 2, характеризующееся тем, что каждый из компонентов используют в виде смеси различных, преимущественно сотенных, разведении, приготовленных по гомеопатической технологии.5. The complex drug according to claim 1 or 2, characterized in that each of the components is used in the form of a mixture of various, mainly hundred, dilutions prepared according to homeopathic technology.6. Комплексное лекарственное средство по п.3, характеризующееся тем, что фармацевтически приемлемые добавки включают лактозу, целлюлозу микрокристаллическую и магния стеарат.6. The complex drug according to claim 3, characterized in that the pharmaceutically acceptable additives include lactose, microcrystalline cellulose and magnesium stearate.7. Способ лечения вирусных заболеваний путем введения в организм комплексного лекарственного средства, характеризующийся тем, что в качестве действующих компонентов комплексное лекарственное средство содержит активированную-потенцированную форму антител к гамма-интерферону человека и активированную-потенцированную форму антител к CD4 рецептору.7. A method of treating viral diseases by introducing a complex drug into the body, characterized in that, as active ingredients, the complex drug contains an activated-potentiated form of antibodies to human gamma-interferon and an activated-potentiated form of antibodies to the CD4 receptor.8. Способ по п.7, характеризующийся тем, что активированную-потенцированную форму антител к гамма-интерферону человека и активированную-потенцированную форму антител к CD4 рецептору используют в виде активированного-потенцированного водного или водно-спиртового раствора каждого компонента, активность которого обусловлена процессом последовательного многократного разведения матричного - исходного - раствора антител в водном или водно-спиртовом растворителе в сочетании с внешним механическим воздействием - вертикальным встряхиванием каждого разведения.8. The method according to claim 7, characterized in that the activated-potentiated form of antibodies to human gamma-interferon and the activated-potentiated form of antibodies to CD4 receptor are used in the form of an activated-potentiated aqueous or aqueous-alcoholic solution of each component, the activity of which is caused by the process sequential multiple dilution of the matrix - initial - solution of antibodies in an aqueous or aqueous-alcohol solvent in combination with an external mechanical action - vertical shaking to every breeding.9. Способ лечения по п.7, характеризующийся тем, что используют приготовленные в виде единого лекарственного препарата - одной лекарственной формы смесь различных разведении антител к гамма-интерферону человека в сочетании со смесью различных разведении антител к CD4 рецептору, приготовленных по гомеопатической технологии.9. The treatment method according to claim 7, characterized in that a mixture of different dilutions of antibodies to human gamma-interferon in combination with a mixture of different dilutions of antibodies to the CD4 receptor prepared using homeopathic technology is prepared in the form of a single drug.10. Способ по п.8, характеризующийся тем, что водные или водно-спиртовые растворы активированных-потенцированных форм антител к гамма-интерферону человека и CD4 рецептору получены путем многократного последовательного разведения матричного - исходного - раствора антител в сочетании с внешним воздействием - вертикальным встряхиванием каждого разведения, при этом концентрация матричного раствора составляет 0,5÷5,0 мг/мл.10. The method according to claim 8, characterized in that aqueous or aqueous-alcoholic solutions of activated-potentiated forms of antibodies to human gamma-interferon and the CD4 receptor are obtained by repeated serial dilution of the matrix - initial - antibody solution in combination with an external action - vertical shaking each dilution, while the concentration of the matrix solution is 0.5 ÷ 5.0 mg / ml.