KR20220085531A - Composition comprising Cudrania tricuspidata fruits polysaccharides extracts as an active ingredient for attenuating toxicity of anticancer agent, and anti-cancer adjuvant - Google Patents
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Abstract
Translated fromKoreanDescription
Translated fromKorean본 발명은 꾸지뽕 열매 추출물을 유효성분으로 포함하는 항암제 독성 감소용 조성물 및 항암보조제에 관한 것이다.The present invention relates to a composition for reducing the toxicity of anticancer drugs and an anticancer adjuvant, comprising an extract of cucurbita fruit as an active ingredient.
암(cancer)은 전 세계적으로 연간 약 760 만 명의 사망 원인이 되는 질병이며, 이는 모든 사망원인의 13 %에 해당하는 수치이다. 통계청의 『2009년 사망원인 통계연보』에 의하면, 우리나라의 암으로 인한 사망은 28.3 %로 전체 사망원인 중 1위를 차지하고 있어 국가차원의 암관리 대책이 요구되고 있다. 현재 암을 치료하는 방법으로 수술, 방사선 치료, 유전자 치료 등 여러 방법들이 사용되고 있으나, 가장 많이 사용되고암(Cancer)은 전 세계적으로 연간 약 760 만 명의 사망 원인이 되는 질병이며, 이는 모든 사망원인의 13 %에 해당하는 수치이다. 통계청의 『2009년 사망원인 통계연보』에 의하면, 우리나라의 암으로 인한 사망은 28.3 %로 전체 사망원인 중 1위를 차지하고 있어 국가차원의 암관리 대책이 요구되고 있다. 현재 암을 치료하는 방법으로 수술, 방사선 치료, 유전자 치료 등 여러 방법들이 사용되고 있으나, 가장 많이 사용되고 있는 치료방법 중의 하나가 항암제를 투여하는 화학요법(chemotherapy)이다.Cancer is a disease that causes about 7.6 million deaths per year worldwide, accounting for 13% of all deaths. According to the 2009 Statistical Yearbook of Causes of Death of the National Statistical Office, cancer-related deaths in Korea accounted for 28.3% of the total deaths, taking the first place among all causes of death. Currently, several methods such as surgery, radiation therapy, and gene therapy are used to treat cancer. It is a number corresponding to %. According to the 2009 Statistical Yearbook of Causes of Death of the National Statistical Office, cancer-related deaths in Korea accounted for 28.3% of the total deaths, taking the first place among all causes of death. Currently, various methods such as surgery, radiation therapy, and gene therapy are used as a method of treating cancer, but one of the most used treatment methods is chemotherapy in which an anticancer agent is administered.
항암 화학요법은 전신 치료로, 대부분 주사나 경구로 항암제를 투여하면 혈류를 따라 전신에 퍼진다. 그러므로 국소적인 효과보다는 전신에 퍼져있는 미세전이(Micometastasis)에 작용하는 치료이다. 따라서 전신적인 부작용이 많으며 수술이나 방사선치료에 비해서 그 정도가 매우 심한 편이다. 정상세포와 암세포 간의 약물에 대한 감수성 차를 이용하여 항암제가 암세포에 대해 선택적으로 작용하도록 하는 것이 화학요법이나 대부분의 항암제가 정상세포와 암세포를 구별하지 못하여 용량 제한적 특성(Dose-limiting toxicity)을 나타내는데 그 문제점이 있다.Chemotherapy is a systemic treatment. In most cases, when chemotherapy is administered by injection or orally, it spreads throughout the body along the bloodstream. Therefore, it is a treatment that acts on micrometastasis spread throughout the body rather than a local effect. Therefore, there are many systemic side effects and the degree is very severe compared to surgery or radiation therapy. Chemotherapy, but most anticancer drugs do not differentiate between normal cells and cancer cells, to selectively act on cancer cells by using the difference in drug sensitivity between normal cells and cancer cells, thus exhibiting dose-limiting toxicity. There is that problem.
대표적인 항암제인 시스플라틴(Cisplatin)은 난소암, 방광암, 폐암, 두경부암, 고환암 등의 치료를 위한 화학요법제로 임상에서 널리 사용되고 있다. 시스플라틴은 활성산소종을 생성하여 암세포를 공격하고, 암세포에서 DNA의 인터-인트라스트랜드 교차결합(Inter-intrastrand cross-linking), DNA 부가체 형성을 유도하여 항암효과를 나타내는 것으로 알려져 있다.Cisplatin, a representative anticancer drug, is widely used in clinical practice as a chemotherapeutic agent for the treatment of ovarian cancer, bladder cancer, lung cancer, head and neck cancer, and testicular cancer. Cisplatin is known to show anticancer effects by generating reactive oxygen species to attack cancer cells, inducing inter-intrastrand cross-linking of DNA in cancer cells, and formation of DNA adducts.
그러나 치료과정 중 약물의 제한된 함량 이상에서는 청각의 상실, 신경 독성, 신장 독성과 같은 부작용이 나타나며, 고농도의 시스플라틴의 투여 시에는 간 독성 또한 빈번하게 관찰되는 것으로 알려져 있다.However, it is known that side effects such as hearing loss, neurotoxicity, and renal toxicity occur at more than a limited amount of the drug during the course of treatment, and liver toxicity is also frequently observed when high concentrations of cisplatin are administered.
시스플라틴에 의한 이러한 부작용은 시스플라틴에 의해 생성된 활성산소종으로 인한 지질 과산화의 증가, 조직에 존재하는 항산화 효소 활성의 억제, 글루타시온(Glutathione)의 고갈 및 세포내 칼슘 항상성의 붕괴와 밀접한 관련이 있다.These side effects by cisplatin are closely related to increase in lipid peroxidation due to reactive oxygen species produced by cisplatin, inhibition of antioxidant enzyme activity in tissues, depletion of glutathione and disruption of intracellular calcium homeostasis. have.
따라서 항암제 치료로 인한 부작용을 감소시키고 치료 효율을 높이기 위해서는 항암제 투여에 따른 독성을 완화시킬 수 있는 억제제의 개발이 필요하다.Therefore, in order to reduce the side effects caused by the anticancer drug treatment and increase the treatment efficiency, it is necessary to develop an inhibitor capable of alleviating the toxicity of the anticancer drug administration.
이에, 본 발명자들은 항암제 독성을 완화할수 있는 물질에 대하여 연구한 결과, 꾸지뽕 열매 추출물이 항암제의 독성을 완화하는 것을 확인하여 본 발명을 완성하였다.Accordingly, the present inventors have completed the present invention by confirming that as a result of research on substances capable of alleviating the toxicity of anticancer drugs, Cujipon fruit extract alleviates the toxicity of anticancer drugs.
본 발명이 해결하고자 하는 과제는 꾸지뽕 열매 추출물을 유효성분으로 포함하는 항암제 독성 감소용 조성물을 제공하는 것이다.The problem to be solved by the present invention is to provide a composition for reducing the toxicity of anticancer drugs comprising an extract of cujibbong fruit as an active ingredient.
또 다른 목적은, 꾸지뽕 열매 추출물을 유효성분으로 포함하는 항암보조제를 제공하는 것이다.Another object is to provide an anticancer adjuvant comprising cujippong fruit extract as an active ingredient.
본 발명의 일 실시예에 따른 항암제 독성 감소용 조성물은 꾸지뽕 열매 추출물을 유효성분으로 포함한다.The composition for reducing the toxicity of anticancer drugs according to an embodiment of the present invention includes cujippong fruit extract as an active ingredient.
상기 항암제는 시스플라틴(Cisplatin)일 수 있다.The anticancer agent may be cisplatin.
상기 꾸지뽕 열매 추출물은 조다당을 포함할 수 있다.The kkujippong fruit extract may contain crude polysaccharide.
상기 꾸지뽕 열매 추출물의 추출방법은, 꾸지뽕 열매를 열풍건조하는 단계, 건조된 꾸지뽕 열매를 분쇄하여 분말을 수득하는 단계, 수득된 분말에 증류수를 혼합하고 열수추출하여 추출물을 제조하는 단계, 상기 추출물을 여과하여 여과액을 제조하는 단계, 상기 여과액에 에탄올을 투입하고 원심분리하여 침전물을 생성하는 단계 및 상기 침전물을 분리하고 건조하여 조다당류를 수득하는 단계를 포함할 수 있다.The extraction method of the cujippong fruit extract is a step of hot air drying the cujippong fruit, a step of pulverizing the dried cujibbong fruit to obtain a powder, mixing distilled water with the obtained powder and hot water extraction to prepare an extract, the extract It may include the steps of preparing a filtrate by filtration, adding ethanol to the filtrate and centrifuging to produce a precipitate, and separating and drying the precipitate to obtain crude polysaccharide.
본 발명의 다른 실시예에 따른 건강기능성 식품 조성물은 꾸지뽕 열매 추출물을 유효성분으로 포함한다.A health functional food composition according to another embodiment of the present invention includes cujippong fruit extract as an active ingredient.
상기 항암제는, 시스플라틴(Cisplatin)일 수 있다.The anticancer agent may be cisplatin.
상기 꾸지뽕 열매 추출물은 조다당을 포함할 수 있다.The kkujippong fruit extract may contain crude polysaccharide.
본 발명의 또 다른 실시예에 따른 항암보조제는 꾸지뽕 열매 추출물을 유효성분으로 포함한다.The anticancer adjuvant according to another embodiment of the present invention includes Cujipon fruit extract as an active ingredient.
본 발명의 꾸지뽕 열매 추출물을 유효성분으로 포함하는 항암제 독성 감소용 조성물 및 항암보조제를 이용하면, 항암제의 독성을 감소시켜 암의 화학적 치료에 있어 항암제의 독성에 의해 발생하는 여러 가지 부작용을 방지 또는 최소화할 수 있는 효과가 있다.By using the anticancer drug toxicity reduction composition and anticancer adjuvant comprising the cucurbita fruit extract of the present invention as an active ingredient, it reduces the toxicity of anticancer drugs and prevents or minimizes various side effects caused by the toxicity of anticancer drugs in the chemical treatment of cancer. There is an effect that can be done.
도 1은 Raw264.7 세포에서 꾸지뽕 추출물의 조다당(Cudrania tricuspidatafruits polysaccharides extracts, CTPS)에 대한 세포 독성 효과를 나타낸 것이다.
도 2는 폐암세포 A549, H460 및 대식세포 Raw264.7 세포에 시스플라틴과 CTPS를 농도별로 병용처리한 후 세포 생존을 측정한 것이다.
도 3은 Raw264.7 세포에서 Cisplatin 처리 세포사멸에 대한 CTPS의 효과를 타낸 것이다(Raw264.7 세포는 24 시간 동안 Cisplatin 15 μM의 존재 또는 부재하에 CTPS 31.25 및 62.5 μg / mL로 처리되었으며 Annexin V/PI 염색을 사용하여 유세포 분석으로 측정하였다. 재현탁된 세포를 세척하고 즉시 FACS VerseTM를 사용하여 유세포 분석으로 분석했습니다. 유세포 분석 히스토그램은 3 개의 독립적인 실험의 평균 ± SD로 표시됩니다).
도 4는 대식세포 Raw264.7 cell에 CTPS를 31.25, 62.5 ㎍/㎖의 농도로 처리한 후 Cisplatin 15 μM을 병용 처리 따른 Pro-apoptotic 단백질 Bax, Anti-apoptotic 단백질 Bcl-2와 세포사멸 신호전달 관련 단백질인 cytochromec, cleaved caspase-3, -8, -9 및 PARP의 발현량을 분석한 것이다.1 shows the cytotoxic effect on crude polysaccharides (Cudrania tricuspidata fruits polysaccharides extracts, CTPS) of Cudrania tricuspidata fruits polysaccharides extracts in Raw264.7 cells.
Figure 2 shows the measurement of cell survival after co-treatment of lung cancer cells A549, H460 and macrophage Raw264.7 cells with cisplatin and CTPS by concentration.
Figure 3 shows the effect of CTPS on Cisplatin-treated apoptosis in Raw264.7 cells (Raw264.7 cells were treated with CTPS 31.25 and 62.5 µg/mL in the presence or absence of 15 µM Cisplatin for 24 hours, Annexin V/ Measured by flow cytometry using PI staining.Resuspended cells were washed and immediately analyzed by flow cytometry using FACS VerseTM . Flow cytometry histograms are presented as mean ± SD of 3 independent experiments).
FIG. 4 shows that macrophage Raw264.7 cells were treated with CTPS at a concentration of 31.25 and 62.5 μg/ml, and then the pro-apoptotic protein Bax, Anti-apoptotic protein Bcl-2 and apoptosis signaling related to 15 μM of Cisplatin. The expression levels of the proteins cytochromec , cleaved caspase-3, -8, -9 and PARP were analyzed.
이하, 본 발명을 보다 자세히 설명한다.Hereinafter, the present invention will be described in more detail.
본 발명의 꾸지뽕(Cudrania tricuspidata) 은 뽕나무과에 속하는 낙엽교목으로서 한국을 비롯한 일본, 중국, 러시아 동부지역 등 동아시아에 주로 분포하고 10여 종으로 알려져 있으며, 우리나라에서는 1종만이 전국 각지에서 자생하고 있다. 일부 아시아지역에서는 전통약초로 사용되고 있고, 꾸지뽕 잎과 뿌리는 폐결핵, 습진, 타박상, 급성관절염 등의 한방치료에 사용되고 있다. 줄기 부분에서는 폴리페놀(polyphenol) 성분인 잔톤(xanthones)과 플라보노이드(flavonoids) 등이 다량 함유되어 있어 항산화, 세포독성 및 항염증 활성을 나타내며, 열매의 경우 해열 및 근육 이완 등에 효과가 있다.Cudrania tricuspidata of the present invention is a deciduous tree belonging to the Morus family, and is mainly distributed in East Asia such as Japan, China, and Eastern Russia, including Korea, and is known as about 10 species. In Korea, only one species is native to the whole country. In some Asian regions, it is used as a traditional herbal medicine, and the leaves and roots of Cudrania are used in oriental medicine for tuberculosis, eczema, bruises, and acute arthritis. The stems contain a large amount of polyphenols such as xanthones and flavonoids, which show antioxidant, cytotoxic and anti-inflammatory activities.
또한, 꾸지뽕 열매에서 추출한 조다당(Cudrania tricuspidatafruits polysaccharides extracts, CTPS)은 산화방지를 활성화시키고 신경세포를 보호하는 효과가 있다.In addition,Cudrania tricuspidata fruits polysaccharides extracts (CTPS) extracted from Cudrania fruit has the effect of activating antioxidant and protecting nerve cells.
본 발명의 일 실시예에 따른 항암제 독성 감소용 조성물은 꾸지뽕 열매 추출물을 유효성분으로 포함한다.The composition for reducing the toxicity of anticancer drugs according to an embodiment of the present invention includes cujippong fruit extract as an active ingredient.
본 발명의 일 실시예에 따른 꾸지뽕 열매 추출물은 조다당을 포함한다.Cujippong fruit extract according to an embodiment of the present invention contains crude polysaccharide.
상기 꾸지뽕 열매 추출물의 추출방법은, 꾸지뽕 열매를 열풍건조하는 단계, 건조된 꾸지뽕 열매를 분쇄하여 분말을 수득하는 단계, 수득된 분말에 증류수를 혼합하고 열수추출하여 추출물을 제조하는 단계, 상기 추출물을 여과하여 여과액을 제조하는 단계, 상기 여과액에 에탄올을 투입하고 원심분리하여 침전물을 생성하는 단계 및 상기 침전물을 분리하고 건조하여 조다당류를 수득하는 단계를 포함하여 제공된다.The extraction method of the cujippong fruit extract is a step of hot air drying the cujippong fruit, a step of pulverizing the dried cujibbong fruit to obtain a powder, mixing distilled water with the obtained powder and hot water extraction to prepare an extract, the extract It is provided comprising the steps of preparing a filtrate by filtration, adding ethanol to the filtrate and centrifuging to produce a precipitate, and separating and drying the precipitate to obtain crude polysaccharide.
본 발명의 항암제란 암세포의 각종 대사경로에 작용하여 암세포에 대하여 세포독성(Cytotoxicity)이나 성장억제효과(Cytostatic effect)를 나타내는 약재를 총칭하며, 지금까지 개발된 항암제는 그 작용기전과 화학구조에 따라 대사길항제, 식물성 알칼로이드, Topoisomerase inhibitor, 알킬화제, 항암성 항생물질, 호르몬제, 기타 약제로 분류할 수 있다.The anticancer agent of the present invention is a generic term for drugs that act on various metabolic pathways of cancer cells to exhibit cytotoxicity or cytostatic effect on cancer cells. It can be classified into metabolic antagonists, plant alkaloids, topoisomerase inhibitors, alkylating agents, anticancer antibiotics, hormones, and other drugs.
상기 항암제는 옥살리플라틴, 이마티니브, 도세탁셀, 페메트렉시드, 게피티니브, 테가푸르, 카페시타빈, 엘로티디브, 독시플루리딘, 파클리탁셀, 인터페론 알파, 겜시타빈, 플루다라빈, 이리노테칸, 카르보플라틴, 시스플라틴, 택소티어, 독소루비신, 에피루비신, 5-플루오로우라실, UFT, 타목시펜, 고세렐린, 헤르셉틴, 항-CD20 항체, 루프로리드(루프론) 및 플루타미드일 수 있으며, 바람직하게는 시스플라틴일 수 있다.The anticancer agent is oxaliplatin, imatinib, docetaxel, pemetrexed, gefitinib, tegafur, capecitabine, erlotidib, doxyfluridine, paclitaxel, interferon alpha, gemcitabine, fludarabine, irinotecan, carboplatin, cisplatin, taxotier, doxorubicin, epirubicin, 5-fluorouracil, UFT, tamoxifen, goserelin, herceptin, anti-CD20 antibody, leuprolide (Lupron) and flutamide; , preferably cisplatin.
상기 시스플라틴(Cisplatin, Cis-dichlorodiammineplatinum)은 대표적인 항암제로 난소암, 방광암, 폐암, 두경부암, 고환암 등의 치료를 위한 화학요법제로 임상에서 널리 사용되고 있다. 상기 시스플라틴은 활성산소종을 생성하여 암세포를 공격하고, 암세포에서 DNA의 인터-인트라스트랜드 교차결합(Inter-intrastrand cross-linking), DNA 부가체 형성을 유도하여 항암효과를 나타내는 것으로 알려져 있으며, 치료과정 중 약물의 제한된 함량 이상에서는 청각의 상실, 신경 독성, 신장 독성과 같은 부작용이 나타나며, 고농도의 시스플라틴의 투여 시에는 간 독성 또한 빈번하게 관찰되는 것으로 알려져 있다.The cisplatin (Cisplatin, Cis-dichlorodiammineplatinum) is a representative anticancer agent and is widely used in clinical practice as a chemotherapeutic agent for the treatment of ovarian cancer, bladder cancer, lung cancer, head and neck cancer, testicular cancer, and the like. The cisplatin is known to exhibit anticancer effects by generating reactive oxygen species to attack cancer cells, inducing inter-intrastrand cross-linking of DNA in cancer cells, and formation of DNA adducts. It is known that side effects such as hearing loss, neurotoxicity, and renal toxicity occur at more than a limited amount of the drug, and liver toxicity is also frequently observed when high concentrations of cisplatin are administered.
상기 항암제들은 약제에 따라 세포 내 표적이 다양한데, 세포의 DNA복제, 전사, 번역과정을 차단하거나 세포생존에 중요한 단백질의 작용을 방해하며, 이러한 세포 내 표적에의 영향은 이후 Necrosis나 Apoptosis의 과정을 통해 세포를 사멸하게 한다. 이러한 항암제가 작용하는 대사경로는 암세포에만 특이한 것이 아니고 정상세포에도 동일하기 때문에 항암제 투여 시 정상조직의 손상, 즉 독성은 불가피하다.The anticancer drugs have various intracellular targets depending on the drug. They block the DNA replication, transcription, and translation processes of cells or interfere with the action of proteins important for cell survival. through cell death. Since the metabolic pathway of these anticancer drugs is not specific to cancer cells and is the same for normal cells, damage to normal tissues, that is, toxicity, is inevitable when anticancer drugs are administered.
본 발명에 있어 항암제의 독성은 신장독성, 간독성, 신경독성, 혈액독성, 위장독성 및 폐독성일 수 있다.The toxicity of the anticancer agent in the present invention may be renal toxicity, hepatotoxicity, neurotoxicity, hematological toxicity, gastrointestinal toxicity, and lung toxicity.
본 발명에 있어 항암제는 암 억제 및 치료 효능이 있는 항암제는 어떤 것이든 해당하며, 상기 암은 그 종류에 특별한 제한이 없으나, 바람직하게는 고환암, 방광암, 전립선암, 난소암, 유방암, 대장암, 두경부암, 폐암, 식도암, 위암 및 자궁경부암으로 이루어진 군에서 선택된 어느 하나일 수 있다.In the present invention, the anticancer agent corresponds to any anticancer agent that has cancer suppression and therapeutic efficacy, and the cancer is not particularly limited in its type, but preferably testicular cancer, bladder cancer, prostate cancer, ovarian cancer, breast cancer, colorectal cancer, It may be any one selected from the group consisting of head and neck cancer, lung cancer, esophageal cancer, stomach cancer and cervical cancer.
본 발명의 조성물은 정상세포에서 항암제의 독성을 감소시키는 효능이 뛰어나다.The composition of the present invention has excellent efficacy in reducing the toxicity of anticancer agents in normal cells.
따라서, 본 발명은 꾸지뽕 열매 추출물을 유효성분으로 포함하는 항암보조제를 제공한다.Therefore, the present invention provides an anti-cancer adjuvant comprising cujippong fruit extract as an active ingredient.
상기 항암보조제는 항암제의 부작용을 감소시키거나 항암제의 치료효과를 증대시키는 제제를 말한다. 본 발명의 항암보조제는 꾸지뽕 열매 추출물을 유효성분으로 포함하는 것을 특징으로 하며, 항암제의 독성을 감소시키는 효능이 뛰어나다.The anticancer adjuvant refers to an agent that reduces the side effects of an anticancer agent or enhances the therapeutic effect of an anticancer agent. The anticancer adjuvant of the present invention is characterized in that it contains cujibbong fruit extract as an active ingredient, and has excellent efficacy in reducing the toxicity of anticancer drugs.
본 발명의 조성물은 항암제의 독성에 대한 억제 활성을 가지는 꾸지뽕 열매 추출물을 유효성분으로 포함하는 약학 조성물일 수 있으며, 통상적으로 사용하는 약학적으로 허용가능한 담체, 희석제 또는 부형제를 추가로 포함할 수 있다.The composition of the present invention may be a pharmaceutical composition comprising kkujippong fruit extract having inhibitory activity against the toxicity of anticancer drugs as an active ingredient, and may further include a commonly used pharmaceutically acceptable carrier, diluent or excipient. .
또한 상기 조성물의 투여 형태는 이들의 허용 가능한 염의 형태로 사용될 수 있으며, 단독 또는 다른 약학적 활성 화합물과 결합 또는 적절한 집합으로 사용될 수 있다.In addition, the dosage form of the composition may be used in the form of an acceptable salt thereof, and may be used alone or in combination with other pharmaceutically active compounds or in an appropriate group.
본 발명의 조성물은 각각 통상의 방법에 따라 산제, 과립제, 정제, 캡슐제, 현탁액, 에멀젼, 시럽, 에어로졸 등의 경구형 제형, 외용제 및 멸균 주사용액의 형태로 제형화하여 사용될 수 있다. 유효성분으로 꾸지뽕 열매 추출물을 포함하는 조성물에 포함될 수 있는 담체, 부형제 및 희석제로는 락토즈, 덱스트로즈, 수크로스, 솔비톨, 만니톨, 자일리톨, 에리스리톨, 말티톨, 전분, 아카시아 고무, 알지네이트, 젤라틴, 칼슘 포스페이트, 칼슘 실리케이트, 셀룰로즈, 메틸 셀룰로즈, 미정질 셀룰로스, 폴리비닐 피롤리돈, 물, 메틸히드록시벤조에이트, 프로필히드록시벤조에이트, 탈크, 마그네슘 스테아레이트 및 광물유를 들 수 있다.The composition of the present invention may be formulated and used in the form of oral dosage forms such as powders, granules, tablets, capsules, suspensions, emulsions, syrups, aerosols, etc., external preparations and sterile injection solutions, respectively, according to conventional methods. As an active ingredient, carriers, excipients and diluents that may be included in the composition comprising the cucurbita fruit extract include lactose, dextrose, sucrose, sorbitol, mannitol, xylitol, erythritol, maltitol, starch, gum acacia, alginate, gelatin, calcium phosphate, calcium silicate, cellulose, methyl cellulose, microcrystalline cellulose, polyvinyl pyrrolidone, water, methylhydroxybenzoate, propylhydroxybenzoate, talc, magnesium stearate and mineral oil.
제제화할 경우에는 보통 사용하는 충진제, 증량제, 결합제, 습윤제, 붕해제, 계면활성제 등의 희석제 또는 부형제를 사용하여 조제된다. 경구투여를 위한 고형 제제에는 정제, 환제, 산제, 과립제, 캡슐제 등이 포함되며, 이러한 고형제제는 꾸지뽕 추출물에 적어도 하나 이상의 부형제 예를 들면, 전분, 칼슘카보네이트(calcium carbonate), 수크로스(sucrose) 또는 락토오스(lactose), 젤라틴 등을 섞어 조제된다. 또한 단순한 부형제 이외에 마그네슘 스테아레이트, 탈크 같은 윤활제 들도 사용된다. 경구를 위한 액상 제제로는 현탁제, 내용액제, 유제, 시럽제 등이 해당되는데 흔히 사용되는 단순 희석제인 물, 리퀴드 파라핀 이외에 여러 가지 부형제, 예를들면 습윤제, 감미제, 방향제, 보존제 등이 포함될 수 있다.In the case of formulation, it is prepared using commonly used diluents or excipients such as fillers, extenders, binders, wetting agents, disintegrants, and surfactants. Solid preparations for oral administration include tablets, pills, powders, granules, capsules, and the like, and these solid preparations include at least one excipient in the kkujippong extract, for example, starch, calcium carbonate, sucrose ) or lactose, gelatin, etc. In addition to simple excipients, lubricants such as magnesium stearate and talc are also used. Liquid formulations for oral use include suspensions, solutions, emulsions, syrups, etc. In addition to water and liquid paraffin, which are commonly used simple diluents, various excipients such as wetting agents, sweeteners, fragrances, and preservatives may be included. .
또한, 본 발명의 조성물은 비경구로 투여할 수 있으며, 비경구 투여는 피하주사, 정맥주사, 근육내 주사 또는 흉부내 주사 주입방식에 의한다. 비경구 투여용 제형으로 제제화하기 위해서는 본 발명의 꾸지뽕 열매 추출물을 안정제 또는 완충제와 함께 물에서 혼합하여 용액 또는 현탁액으로 제조하고 이를 앰플 또는 바이알의 단위 투여형으로 제제화한다. 본 발명 조성물의 유효성분인 꾸지뽕 열매 추출물의 투여량은 특별히 제한되지 아니하나 항암제의 종류 및 투여량, 투여기간 등에 따라 달라지며 항암제 총 투여 중량 대비 약 1배 내지 500배 중량이 투여되는 것이 바람직하며, 더 바람직하게는 약 1배 내지 200배 중량이다. 본 발명의 조성물은 항암제 투여 전 또는 후에 단독으로 투여할 수 있으며, 항암제와 혼합하여 항암제 조성물로서 함께 투여할 수도 있다.In addition, the composition of the present invention can be administered parenterally, and parenteral administration is by subcutaneous injection, intravenous injection, intramuscular injection or intrathoracic injection injection method. In order to formulate a formulation for parenteral administration, the kkujippong fruit extract of the present invention is mixed with a stabilizer or buffer in water to prepare a solution or suspension, and it is formulated as a unit dosage form of an ampoule or vial. The dosage of the cujipon fruit extract, which is the active ingredient of the composition of the present invention, is not particularly limited, but it varies depending on the type, dosage, and period of administration of the anticancer agent, and is preferably administered in an amount of about 1 to 500 times the total weight of the anticancer agent. , more preferably about 1 to 200 times the weight. The composition of the present invention may be administered alone before or after administration of an anticancer agent, or may be mixed with an anticancer agent and administered together as an anticancer agent composition.
본 발명의 조성물의 바람직한 투여량은 환자의 상태 및 체중, 질병의 정도, 약물형태, 투여경로 및 기간에 따라 다르지만, 당업자에 의해 적절하게 선택될 수 있다.The preferred dosage of the composition of the present invention varies depending on the condition and weight of the patient, the degree of disease, the drug form, the route and duration of administration, but may be appropriately selected by those skilled in the art.
또한, 본 발명의 조성물은 항암제의 독성에 대한 억제 활성을 가지는 꾸지뽕 열매 추출물을 유효성분으로 포함하는 식품 조성물일 수 있으며, 구체적으로는 건강기능성 식품 조성물일 수 있다.In addition, the composition of the present invention may be a food composition comprising as an active ingredient kkujippong fruit extract having inhibitory activity against the toxicity of anticancer drugs, specifically, it may be a health functional food composition.
상기 기능성은 항암제의 독성을 감소시키는 효과를 나타내는 것이다.The function is to exhibit the effect of reducing the toxicity of the anticancer agent.
본 발명의 식품 조성물은 환제, 분말, 과립, 침제, 정제, 캡슐 또는 액제 등의 형태를 포함할 수 있으며, 본 발명의 꾸지뽕 추출물을 첨가할 수 있는 식품의 종류에는 별다른 제한이 없으며, 예를 들어 각종 음료, 껌, 차, 비타민 복합제, 건강보조 식품류 등이 있다.The food composition of the present invention may include the form of pills, powders, granules, needles, tablets, capsules or liquids, and there is no particular limitation on the type of food to which the kkujippong extract of the present invention can be added, for example, Various beverages, chewing gum, tea, vitamin complexes, and health supplements are available.
상기 식품 조성물에는 꾸지뽕 열매 추출물 이외에도 다른 성분을 추가할 수 있으며, 그 종류는 특별히 제한되지 않는다. 예를 들어, 통상의 식품과 같이 여러 가지 생약 추출물, 식품학적으로 허용되는 식품보조첨가제 또는 천연 탄수화물 등을 추가 성분으로서 함유할 수 있으며, 이에 제한되지 않는다.Other ingredients may be added to the food composition in addition to the cujibbong fruit extract, and the type is not particularly limited. For example, it may contain, as an additional ingredient, various herbal extracts, food-logically acceptable food supplements or natural carbohydrates, such as conventional food, but is not limited thereto.
본 발명의 식품 조성물에는 건강기능성 식품이 포함될 수 있다. 본 발명에서 사용된 용어 "건강기능성 식품"이란 인체에 유용한 기능성을 가진 원료나 성분을 사용하여 정제, 캅셀, 분말, 과립, 액상 및 환 등의 형태로 제조 및 가공한 식품을 말한다. 여기서 기능성이라 함은 인체의 구조 및 기능에 대하여 영양소를 조절하거나 생리학적 작용 등과 같은 보건 용도에 유용한 효과를 얻는 것을 의미한다. 본 발명의 건강기능성 식품은 당업계에서 통상적으로 사용되는 방법에 의하여 제조가능하며, 상기 제조시에는 당업계에서 통상적으로 첨가하는 원료 및 성분을 첨가하여 제조할 수 있다. 또한 일반 약품과는 달리 식품을 원료로 하여 약품의 장기 복용 시 발생할 수 있는 부작용 등이 없는 장점이 있고, 휴대성이 뛰어날 수 있다.The food composition of the present invention may include a health functional food. The term "health functional food" used in the present invention refers to food manufactured and processed in the form of tablets, capsules, powders, granules, liquids, pills, etc. using raw materials or ingredients useful in the human body. Here, the term "functionality" refers to obtaining a useful effect for health purposes such as regulating nutrients or physiological action with respect to the structure and function of the human body. The health functional food of the present invention can be prepared by a method commonly used in the art, and at the time of manufacture, it can be prepared by adding raw materials and components commonly added in the art. In addition, unlike general drugs, there are no side effects that may occur when taking the drug for a long time by using food as a raw material, and it can be excellent in portability.
유효성분의 혼합양은 사용 목적(예방, 건강 또는 치료적 처치)에 따라 적합하게 결정될 수 있다. 일반적으로, 식품의 제조 시에 본 발명의 추출물 또는 이의 분획물은 원료 조성물 중 1 내지 50 중량%, 바람직하게는 5 내지 10 중량%의 양으로 첨가될 수 있으나, 이에 제한되는 것은 아니다. 그러나 건강 및 위생을 목적으로 하거나 또는 건강 조절을 목적으로 하는 장기간의 섭취의 경우에는 상기 양은 상기 범위 이하로도 사용될 수 있다.The mixed amount of the active ingredient may be appropriately determined according to the purpose of use (prevention, health or therapeutic treatment). In general, the extract of the present invention or a fraction thereof in the preparation of food may be added in an amount of 1 to 50% by weight, preferably 5 to 10% by weight of the raw material composition, but is not limited thereto. However, in the case of long-term intake for health and hygiene purposes or for health control, the above amount may be used below the above range.
이하, 실시예를 통하여 본 발명을 더욱 상세히 설명하고자 한다. 이들 실시예는 오로지 본 발명을 예시하기 위한 것으로서, 본 발명의 범위가 이들 실시예에 의해 제한되는 것으로 해석되지는 않는 것은 당업계에서 통상의 지식을 가진 자에게 있어서 자명할 것이다.Hereinafter, the present invention will be described in more detail through examples. These examples are only for illustrating the present invention, and it will be apparent to those of ordinary skill in the art that the scope of the present invention is not to be construed as being limited by these examples.
<재료 및 방법><Materials and Methods>
1-1. 꾸지뽕 열매 조다당류 추출1-1. Crude Polysaccharide Extraction from Cudrania Fruit
꾸지뽕 열매는 충청남도 예산군에서 구매하여 사용하였다. 꾸지뽕 열매를 60 ℃에서 24 시간 동안 열풍 건조한 후 실험용 분쇄기(NSG-1002SS, Hanil, Seoul, Korea)로 분쇄하여 꾸지뽕 열매 분말 20 g에 400 ㎖의 증류수를 가해 100 ℃에서 2 시간 동안 열수 추출하였다. 추출물을 Filter paper(No 4, Whatman, Kent, UK)로 여과 후 여과액에 70% 에탄올을 가하여 4 ℃에서 12 시간 동안 방치한 후, 원심분리(3,200 rpm, 20 min) 하여 침지된 조다당류(Cudrania tricuspidata fruits polysaccharides extracts; CTPS)를 분리하고, 이를 냉동 건조하여 실험에 사용하였다.Cujipon fruit was purchased from Yesan-gun, Chungcheongnam-do and used. After hot air drying at 60 ° C. for 24 hours, pulverizing with an experimental grinder (NSG-1002SS, Hanil, Seoul, Korea), 400 ml of distilled water was added to 20 g of Cuji mulberry powder, followed by hot water extraction at 100 ° C. for 2 hours. The extract was filtered with filter paper (No 4, Whatman, Kent, UK), 70% ethanol was added to the filtrate, left at 4 ° C. for 12 hours, and then centrifuged (3,200 rpm, 20 min) to immerse the crude polysaccharide ( Cudrania tricuspidata fruits polysaccharides extracts (CTPS) was isolated and freeze-dried to use in the experiment.
1-2. 대식세포 생존율 평가1-2. Macrophage viability assessment
Raw264.7 대식세포를 96-well plate에 1×104 cells/well의 농도로 분주한 후 37°C, 5% CO2 incubator에서 15 시간 동안 배양하면서 세포를 완전히 부착시키고 CTPS를 Phosphate buffered saline(PBS; WelGene, Daegu, Korea)에 용해하여 15.125, 31.25, 62.5, 125, 250, 500, 1,000 ㎍/㎕의 농도로 병용 처리해 24시간 동안 방치하여 세포 독성을 확인하였으며, 동일한 농도의 CTPS를 폐암세포 A549, H460 및 대식세포 Raw264.7 세포에 시스플라틴과 CTPS를 24시간 동안 방치하였다.After dispensing Raw264.7 macrophages in a 96-well plate at a concentration of 1×104 cells/well, incubate them in an incubator at 37°C and 5% CO2 for 15 hours to completely attach the cells and incubate the CTPS with Phosphate buffered saline (PBS). ; WelGene, Daegu, Korea) and combined treatment at concentrations of 15.125, 31.25, 62.5, 125, 250, 500, and 1,000 μg/μl and left for 24 hours to confirm cytotoxicity , H460 and macrophage Raw264.7 cells were left in cisplatin and CTPS for 24 hours.
세포 생존율 평가를 위하여 well 당 30 ㎕의 3-(4, 5-Dimethyl-2-thiazolyl)-2,5-diphenyl-2H-tetrazolium bromide(MTT; Sigma-Aldrich Co.) 용액을 5 mg/㎖ 첨가하여 4 시간 동안 반응시켰다. MTT 시약의 첨가로 생성된 Formazan을 녹이기 위해서 Dimethyl sulfoxide(Sigma-Aldrich Co.)를 100 ㎕씩 첨가하고 1 시간 후 Microplate reader를 이용하여 570 nm에서 흡광도를 측정하였고, 대조군(Medium only)의 흡광도 값을 기준으로 세포 생존율을 확인하였다.For cell viability evaluation, 30 μl of 3-(4,5-Dimethyl-2-thiazolyl)-2,5-diphenyl-2H-tetrazolium bromide (MTT; Sigma-Aldrich Co.) solution was added to 5 mg/ml per well. and reacted for 4 hours. In order to dissolve Formazan produced by the addition of MTT reagent, 100 μl of dimethyl sulfoxide (Sigma-Aldrich Co.) was added and the absorbance was measured at 570 nm using a Microplate reader after 1 hour, and the absorbance value of the control (Medium only) Cell viability was confirmed based on
1-3. 세포독성 평가1-3. Cytotoxicity assessment
세포사멸을 분석하기 위해 FITC Annexin V Apoptosis Detection Kit I(BD Biosciences, San Diego, CA, USA)을 이용해 측정하였다. 세포를 PBS로 세척한 후 Annexin Vbinding buffer를 이용하여 1×106 cells/㎕ 농도로 현탁시켰다. 이 용액으로부터 100 ㎕(1×105 cells)의 세포를 채취하여 5 ㎕ Culture tube에 분주하고, Annexin V-FITC(5 ㎕)와 PI-PE(5 ㎕)를 첨가하여 20 분 동안 상온에서 염색을 실시하였다. 염색된 혼합액에 Annexin V binding buffer(400 ㎕)를 첨가한 후 Flow cytometer(BD FACS VerseTM; BD Biosciences) 분석을 실시하였다. 분석 후에 나온 데이터는 FlowJo software(V10, Tree Star, Ashland, OR, USA)를 사용해 평가하였다.To analyze apoptosis, FITC Annexin V Apoptosis Detection Kit I (BD Biosciences, San Diego, CA, USA) was used. After washing the cells with PBS, using Annexin Vbinding buffer, the cells were suspended at a concentration of 1×106 cells/μl. 100 μl (1×105 cells) of cells were collected from this solution, aliquoted into a 5 μl culture tube, and stained at room temperature for 20 minutes by adding Annexin V-FITC (5 μl) and PI-PE (5 μl). was carried out. After adding Annexin V binding buffer (400 μl) to the stained mixture, flow cytometer (BD FACS VerseTM; BD Biosciences) analysis was performed. Data obtained after analysis were evaluated using FlowJo software (V10, Tree Star, Ashland, OR, USA).
1-4. 웨스턴 블랏 분석1-4. Western blot analysis
Raw264.7 대식세포를 6-well plate에 1×106 cells/well의 농도로 분주한 후 15 시간 동안 완전히 부착시키고 15 μM 농도의 Cisplatin과 31.25 및 62.5 μg/㎗의 농도의 CTPS를 24 시간 병용 처리하였다. 배양이 끝난 세포를 수집하여 PBS로 세척한 후 NP40 cell lysis buffer(Biosource, Seoul, Korea)를 첨가한 다음 13,000 rpm에서 15 분간 원심분리하여 Cell lysate를 분리하였다. 분리된 Cell lysate는 BCA protein detection kit(Thermo Scientific, Rockford, IL, USA)을 사용하여 단백질 정량을 실시하였고, Well당 10 ㎍의 Cell lysate를 10 % Polyacrylamide gel에 각각 Loading하여 SDS-PAGE로 변성분리하였다. 이를 Polyvinylidene difluoride membrane(Millipore Merck KGaA, Darmstadt, Germany)으로 Transfer하였고, Membrane은 Anti-body의 비특이적 결합을 방지하기 위해 Blocking solution(5 % skim milk) 12 ㎕에서 1 시간 상온 방치하였다. 이후 TBST(20 nM tris-HCl, 150 mM NaCl, 0.05% Tween-20, pH 7.5)로 10 분씩 3 회 세척하였으며, Pro-apoptotic 단백질 Bax, anti-apoptotic 단백질 Bcl-2, Cytochromec, Cleaved-caspase 3, 8, 9, PARP 및 β-actin의 발현량을 측정하기 위해 1 차 항체(Cell Signaling, Danvers, MN, USA)를 1:2,000으로 희석하여 4 ℃에서 15 시간 동안 반응시키고, TBST로 10 분간 3 회 세척하였다. 이후 2 차 항체(Goat-anti rabbit lgG, Calbiochem, La Jolla, CA, USA)를 1:5,000으로 희석하여 1 시간 동안 반응시키고, 현상을 위하여 Electrochemiluminescence(ECL; Millipore Merck KGaA) 시약을 사용해 인화하였다.Raw264.7 macrophages were aliquoted in a 6-well plate at a concentration of 1×106 cells/well, and then completely adhered for 15 hours. Cisplatin at a concentration of 15 μM and CTPS at a concentration of 31.25 and 62.5 μg/dL were used in combination for 24 hours. processed. After culturing cells were collected, washed with PBS, NP40 cell lysis buffer (Biosource, Seoul, Korea) was added, and then the cell lysate was separated by centrifugation at 13,000 rpm for 15 minutes. The separated cell lysate was subjected to protein quantification using a BCA protein detection kit (Thermo Scientific, Rockford, IL, USA), and 10 μg of cell lysate per well was loaded on a 10% polyacrylamide gel, respectively, and denatured separation was performed by SDS-PAGE. did This was transferred to a polyvinylidene difluoride membrane (Millipore Merck KGaA, Darmstadt, Germany), and the membrane was left at room temperature for 1 hour in 12 μl of a blocking solution (5% skim milk) to prevent non-specific binding of the antibody. Then, it was washed three times with TBST (20 nM tris-HCl, 150 mM NaCl, 0.05% Tween-20, pH 7.5) for 10 minutes each, Pro-apoptotic protein Bax, anti-apoptotic protein Bcl-2, Cytochromec , Cleaved-caspase To measure the expression levels of 3, 8, 9, PARP and β-actin, the primary antibody (Cell Signaling, Danvers, MN, USA) was diluted 1:2,000 and reacted at 4 °C for 15 hours, followed by 10 TBST Washed 3 times per minute. Thereafter, the secondary antibody (Goat-anti rabbit lgG, Calbiochem, La Jolla, CA, USA) was diluted 1:5,000 and reacted for 1 hour, followed by printing using Electrochemiluminescence (ECL; Millipore Merck KGaA) reagent for development.
1-5. 통계 처리1-5. statistical processing
이상의 꾸지뽕 열매 조다당 추출물의 시스플라틴에 대한 독성 완화 효과 실험에서 얻어진 결과는 통계학적 소프트웨어(Prism, version 4.03; GraphPad Software, San Diego, CA, USA)를 이용하여 One-way ANOVA로 확인 후 Tukey's Multiple comparison test로 분석하였다. 시료 간의 유의성은 Student's t-test로 P<0.05, P<0.01, P<0.001 수준에서 비교하였다.The results obtained from the above experiment on the toxicity alleviation effect of the crude polysaccharide extract of cucurbita fruit on cisplatin were confirmed by one-way ANOVA using statistical software (Prism, version 4.03; GraphPad Software, San Diego, CA, USA), and then Tukey's Multiple comparison Analyzed by test. Significance between samples was compared at P<0.05, P<0.01, and P<0.001 levels using Student's t-test.
<결과><Result>
<실험예 1> CTPS의 대식세포 및 폐암세포에서 세포독성 완화 평가<Experimental Example 1> Evaluation of cytotoxicity relief in macrophages and lung cancer cells of CTPS
꾸지뽕 열매 CTPS가 대식세포의 세포독성 완화에 미치는 영향을 평가하기 위해 대식세포 Raw264.7에 CTPS를 15.125, 31.25, 62.5, 125, 250, 500 및 1,000 ㎍/㎕의 농도별로 처리한 후 MTT 방법을 통해 대식세포 생존율을 평가하였다(도 1).In order to evaluate the effect of Kujippong fruit CTPS on the alleviation of macrophage cytotoxicity, CTPS was treated with macrophage Raw264.7 at concentrations of 15.125, 31.25, 62.5, 125, 250, 500 and 1,000 μg/μl, and then the MTT method was used. The macrophage viability was evaluated through (FIG. 1).
도 1에서 확인할 수 있듯이, CTPS의 세포독성이 없는 것을 확인하였다.As can be seen in Figure 1, it was confirmed that there is no cytotoxicity of CTPS.
또한, 폐암세포 A549, H460 및 대식세포 Raw264.7 세포에 시스플라틴과 CTPS를 농도별로 병용처리한 후 세포 생존율을 확인하였다(도 2).In addition, cell viability was confirmed after co-treatment of lung cancer cells A549, H460 and macrophage Raw264.7 cells with cisplatin and CTPS by concentration ( FIG. 2 ).
도 2에서 확인할 수 있듯이, 페암세포에서는 세포 생존율이 저하됐지만, 대식세포에서는 시스플라틴에 의해 저하된 세포 생존율이 CTPS에 의해 증가되는 것을 확인할 수 있다.As can be seen in FIG. 2 , it can be confirmed that the cell viability decreased in lung cancer cells, but the cell viability decreased by cisplatin was increased by CTPS in macrophages.
더불어, CTPS가 Cisplatin에 의한 대식세포의 세포사멸을 완화하는지 Annexin V/PI staining analysis를 통해 평가하였다(도 3).In addition, whether CTPS alleviates apoptosis of macrophages caused by Cisplatin was evaluated through Annexin V/PI staining analysis (FIG. 3).
도 3에서 확인할 수 있듯이, Cisplatin에 의한 대식세포의 증가된 세포사멸이 31.25 및 62.5 ㎍/㎖ 농도로 처리한 CTPS에 의해 저하되는 것을 확인할 수 있다.As can be seen in Figure 3, it can be confirmed that the increased apoptosis of macrophages by Cisplatin is reduced by CTPS treated with 31.25 and 62.5 ㎍ / ㎖ concentration.
결과적으로, 대식세포에서도 CTPS가 시스플라틴의 독성을 완화시켜 세포 생존율을 높여주는 것을 확인할 수 있었고, 이는 CTPS가 대식세포에서 시스플라틴의 독성을 저해시켜주고 세포사멸을 억제시켜주는 것을 확인할 수 있다.As a result, it was confirmed that CTPS alleviates the toxicity of cisplatin in macrophages and increases the cell viability, which confirms that CTPS inhibits the toxicity of cisplatin in macrophages and suppresses apoptosis.
<실험예 2> CTPS의 세포사멸 억제 평가<Experimental Example 2> Evaluation of CTPS apoptosis inhibition
본 발명에서는 CTPS가 Cisplatin의 세포사멸에 미치는 영향을 확인하기 위하여 Western blot analysis를 통하여 평가하였다.In the present invention, in order to confirm the effect of CTPS on apoptosis of Cisplatin, Western blot analysis was performed.
대식세포 Raw264.7 cell에 CTPS를 31.25 및 62.5 ㎍/㎖의 농도로 처리한 후 Cisplatin 15 μM을 병용 처리하여 24 시간 뒤에 Pro-apoptotic 단백질 Bax 및 Anti-apoptotic 단백질 Bcl-2의 발현량을 확인하였다(도 4A).The expression levels of Pro-apoptotic protein Bax and Anti-apoptotic protein Bcl-2 were confirmed 24 hours later by treating macrophage Raw264.7 cells with CTPS at concentrations of 31.25 and 62.5 μg/ml, and then co-treating with 15 μM of Cisplatin. (Fig. 4A).
도 4A에서 확인할 수 있듯이, 세포사멸을 일으키는 Pro-apoptotic 단백질 Bax의 발현량은 감소하였으며, 세포사멸을 억제하는 anti-apoptotic 단백질 Bcl-2의 발현량은 증가한 것을 확인할 수 있다.As can be seen in FIG. 4A , it can be seen that the expression level of the pro-apoptotic protein Bax causing apoptosis was decreased, and the expression level of the anti-apoptotic protein Bcl-2 that inhibits apoptosis was increased.
또한, 세포사멸이 일어날 때 Mitochondria에서 발생하는 Cytochromec release 현상을 확인하였다(도 4B).In addition, it was confirmed that the Cytochromec release phenomenon that occurs in the mitochondria when apoptosis occurs (Fig. 4B).
도 4B에서 확인할 수 있듯이, Cisplatin에 의해 증가된 cytochromec의 발현량이 CTPS에 의해 감소한 것을 확인할 수 있다.As can be seen in FIG. 4B , it can be confirmed that the expression level of cytochromec increased by Cisplatin was decreased by CTPS.
더불어, 대식세포 Raw264.7 cell에 CTPS를 31.25 및 62.5 ㎍/㎖의 농도로 처리한 후 Cisplatin 15 μM을 병용 처리하여 24 시간 뒤에 Cleaved-caspase 3, 8, 9 및 PARP의 발현량을 측정하였다(도 4C).In addition, macrophage Raw264.7 cells were treated with CTPS at a concentration of 31.25 and 62.5 μg/ml and then cisplatin 15 μM was co-treated to measure the expression levels of Cleaved-
도 4C에서 확인할 수 있듯이, Cleaved caspase 3, 8, 9 및 PARP의 발현량이 Cisplatin 단독 처리군에서 가장 높게 증가하였지만, CTPS와 Cisplatin 병용 처리군에서는 Cleaved-caspase 3, 8, 9 및 PARP의 발현량이 현저히 감소하는 것을 확인할 수 있으며, 농도가 증가할수록 더욱 감소하는 것을 확인할 수 있다.As can be seen in Figure 4C, the expression levels of
결과적으로, 본 발명에 따른 꾸지뽕 열매 추출물을 유효성분으로 포함하는 항암제 독성 감소용 조성물 및 항암보조제를 이용하면, 항암제의 독성을 감소시켜 암의 화학적 치료에 있어 항암제의 독성에 의해 발생하는 여러 가지 부작용을 방지 또는 최소화할 수 있는 효과가 있다.As a result, when the composition for reducing the toxicity of anticancer drugs and anticancer adjuvants comprising the cucurbita fruit extract according to the present invention as an active ingredient is used, the toxicity of anticancer drugs is reduced and various side effects caused by the toxicity of anticancer drugs in the chemical treatment of cancer can be prevented or minimized.
Claims (8)
Translated fromKorean상기 항암제는,
시스플라틴(Cisplatin)인 것을 특징으로 하는, 항암제 독성 감소용 약학 조성물.According to claim 1,
The anticancer agent,
A pharmaceutical composition for reducing anticancer drug toxicity, characterized in that it is cisplatin.
상기 꾸지뽕 열매 추출물은 조다당을 포함하는 것을 특징으로 하는, 항암제 독성 감소용 약학 조성물.According to claim 1,
The kkujippong fruit extract is characterized in that it contains crude polysaccharide, a pharmaceutical composition for reducing the toxicity of anticancer drugs.
상기 꾸지뽕 열매 추출물의 추출방법은,
꾸지뽕 열매를 열풍건조하는 단계,
건조된 꾸지뽕 열매를 분쇄하여 분말을 수득하는 단계,
수득된 분말에 증류수를 혼합하고 열수추출하여 추출물을 제조하는 단계,
상기 추출물을 여과하여 여과액을 제조하는 단계,
상기 여과액에 에탄올을 투입하고 원심분리하여 침전물을 생성하는 단계 및
상기 침전물을 분리하고 건조하여 조다당류를 수득하는 단계를 포함하는 것을 특징으로 하는, 항암제 독성 감소용 약학 조성물.According to claim 1,
The extraction method of the Cujippong fruit extract is,
Step of hot air drying Cujippong fruit,
Pulverizing dried kkujippong fruit to obtain a powder,
Mixing distilled water with the obtained powder and extracting with hot water to prepare an extract;
Filtering the extract to prepare a filtrate;
adding ethanol to the filtrate and centrifuging to produce a precipitate; and
A pharmaceutical composition for reducing toxicity of anticancer drugs, characterized in that it comprises the step of isolating and drying the precipitate to obtain crude polysaccharides.
상기 항암제는,
시스플라틴(Cisplatin)인 것을 특징으로 하는, 항암제 독성 감소용 건강기능성 식품 조성물.6. The method of claim 5,
The anticancer agent,
A health functional food composition for reducing anticancer drug toxicity, characterized in that it is cisplatin.
상기 꾸지뽕 열매 추출물은 조다당을 포함하는 것을 특징으로 하는, 항암제 독성 감소용 건강기능성 식품 조성물.6. The method of claim 5,
The kkujippong fruit extract is a health functional food composition for reducing anticancer drug toxicity, characterized in that it contains crude polysaccharide.
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