KR20210136058A

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Info

Publication number: KR20210136058A
Application number: KR1020217031758A
Authority: KR
Inventors: 데이비드 그레인저 보스트윅; 브라이언 래퍼티 보스트윅
Original assignee: 램파트 헬스, 엘.엘.씨.
Priority date: 2019-03-01
Filing date: 2020-02-28
Publication date: 2021-11-16
Also published as: AU2020232595A1; JP2022524979A; BR112021017375A2; CA3131132A1; IL285917A; WO2020180686A1; US20200277379A1; EP3931221A1; ZA202106204B

Abstract

본 발명은 적어도 2종의 면역 관문 억제제, 적어도 1종의 세포독성 또는 세포증식억제 화학요법 약물을 포함하는 약제학적 조성물에 관한 것이다. 본 발명은 또한 치료가 필요한 환자에게 종양 또는 암을 치료하는데 유효한 양의 약제학적 조성물을 투여하는 단계, 및 임의로 종양 또는 암의 적어도 일부를 절제하는 단계를 포함하는, 환자에서 종양 또는 암을 치료하는 방법에 관한 것이다.

Description

암의 치료를 위하여 면역학적 및 화학요법 방법을 조합하는 약제학적 조성물

본 출원은 2019년 3월 1일에 출원된 미국 가출원 제62/812,703호에 대한 우선권을 주장하고, 이는 그 전문이 본원에 참조로서 포함된다.

발명의 분야

본 발명은 암의 치료를 위하여 면역학적 및 화학요법 방법을 조합하는 약제학적 조성물에 관한 것이다.

암은 미국에서 두번째로 가장 흔한 사망 원인이고, 매일 1,500명이 넘는 연간 580,000명의 미국인의 목숨을 앗아 가고 있다. 국립보건원(NIH)은 암 치료의 전체 연간 비용을 직접적인 의료 비용 890억 달러를 포함하여 2270억 달러가 넘는 것으로 추정하였다. 암 치료의 전체 건강관리 비용의 대부분은 방사선 및 통상적인 화학요법의 유해 부작용의 관리로부터 유래된다. 면역학적 암 치료는 종양학적 치료제의 풍경을 완전하게 바꿀 태세를 갖추고 있다. 관문 억제제, 예를 들면, CTLA-4 및 PD-1은 이미 전이성 흑색종 및 비소세포 폐암의 치료에 중요한 영향을 미치고 있다. 이들 약물은 현재 이들의 효능을 개선시키기 위한 시도로 조합으로 사용되는 중이다. 이들 약물의 전달은 가장 흔하게 정맥내로 수행되는데, 이는 신체에서 이들 세포파괴성 제제의 비특이적 분포의 결과로서 심각하고 때때로 치명적인 전신 독성을 가질 수 있고, 이는 암 세포와 정상 세포를 둘 다 사멸시키고 치료 양생법 및 환자 결과에 부정적인 영향을 미칠 수 있다.

절제는 세포, 기관, 또는 이상 성장(예를 들면, 암)을 파괴하는데 사용되는 수술 기술이다. 냉동절제는 환자의 항원 제시 세포 및 수지상 세포에 대한 종양 연관 항원의 고유한 배열의 제시를 통해 환자에서 면역 반응을 이끌어내는 것으로 알려져 있다. 그러나, 이러한 "냉동면역학적 효과(cryoimmunologic effect)"는 가변적이고 일부 경우에 심지어 해로운 것으로 알려져 있다.

제WO 2017/123981호는 적어도 2종의 면역 관문 억제제 및 적어도 1종의 사이토킨을 포함하는 약제학적 조성물, 및 절제 단계와 이의 조합에 관한 것이다. 사이토킨은 다수의 자극에 반응하여 면역계의 세포 또는 비면역 세포(예를 들면, 상피 세포)에 의해 분비되는 자연 발생 단백질이고, 면역 이펙터 세포의 발달을 조절하는 것을 보조한다. 사이토킨은 표적 세포에서 궁극적으로 유전자 발현을 변경하는 메커니즘을 통해 작용하는 면역조절제이다. 2종의 면역 관문 억제제와 사이토킨의 조합은 배타적인 면역학적 제제를 사용하므로 면역요법의 양생법에 속한다.

따라서 전통적인 전신적 암 치료와 연관된 독성을 감소시킬 뿐만 아니라 암의 개선된 치료에 대한 최적의 암 면역 반응을 제공하는 개선된 방법을 개발할 필요가 당해 분야에 남아 있다.

본 발명의 하나의 측면은 적어도 2종의 면역 관문 억제제, 적어도 1종의 세포독성 또는 세포증식억제 화학요법 약물을 포함하는 약제학적 조성물에 관한 것이다. 임의로, 약제학적 조성물은 약제학적으로 허용되는 담체를 포함할 수 있다.

본 발명의 또 다른 측면은 치료가 필요한 환자에게 적어도 2종의 면역 관문 억제제 및 적어도 1종의 세포독성 또는 세포증식억제 화학요법 약물을 종양 또는 암을 치료하는데 유효한 양으로 포함하는 조성물을 투여하는 단계를 포함하는, 환자에서 종양 또는 암을 치료하는 방법에 관한 것이다. 방법은 종양 또는 암의 적어도 일부를 절제하는 단계를 추가로 포함할 수 있다.

본 발명의 추가의 측면, 이점 및 특징은 본 명세서에 기재되고, 부분적으로 하기 시험을 거쳐 당해 분야의 숙련가에게 명백해질 것이거나, 본 발명의 실시에 의해 학습될 수 있다. 본 출원에 개시된 발명은 측면, 이점 및 특징의 임의의 특정한 세트 또는 조합으로 제한되지 않는다. 기재된 측면, 이점 및 특징의 다양한 조합은 본 출원에 개시된 발명을 구성하는 것으로 생각된다.

도 1a 및 1b는 CTLA-4 억제제, PD-1 억제제, 및 저용량 화학요법제와 온도 제한 냉동절제 수술의 조합에 의한 치료 전(도 1a)과 약 3개월 후(도 1b)의 환자 A의 전신 뼈의 FDG-PET(¹⁸F-플루오로데옥시글루코스 양전자 방사 단층 촬영) 스캔의 이미지이다. 치료 전(도 1a)과 약 3개월 후(도 1b)의 스캔의 비교는 뼈 전이에서 상당한 개선을 드러내고; 화살표는 개선이 가장 현저한 영역(골반 영역)을 가리킨다.
도 2는 CTLA-4 억제제, PD-1 억제제, 및 저용량 화학요법제와 온도 제한 냉동절제 수술의 조합에 의한 치료의 2 라운드 후 환자 B의 혈청 전립선 특이 항원(PSA) 농도의 결과를 나타내는 그래프이다. 별표는 치료 일자를 나타낸다. 그래프는 2회 치료 후, 107.6에서 31.9 ng/mL로의 PSA 감소(70% 감소)를 보여준다.

본 개시내용은, 적어도 부분적으로, 종양 유도 면역학적 암 치료와 절제 기술의 조합을 통해 암 면역 반응을 이끌어내는 신규한 조성물 및 방법의 개발을 기반으로 한다. 이들 치료 및 절차의 종양내 투여는 항암 약물의 전통적인 전신 전달에 비해 유의미한 이점을 가질 수 있다. 본원에 개시된 조성물 및 방법은 대상체에게 투여되는 전통적인 용량보다 작은 용량(예를 들면, 조성물이 종양 내로 직접적으로 투여되는 경우), 조양 항원에 대한 면역계의 자극, 및 약물을 종양 항원 및 면역 염증 과정에 직접적으로 근접하여 놓음으로써 개선된 결과를 허용할 수 있다.

본 발명자들은 놀랍게도 면역 관문 억제제와 세포독성 또는 세포증식억제 화학요법 약물의 조합을 사용함으로써 치료 방법이 적어도 하기를 포함하는 이익을 제공한다는 것을 발견하였다: (1) 최소 침습 절제에 의한 면역 자극 괴사를 유도하고; (2) 최소 열적 절제를 사용하여 암 신생항원을 보존하고; (3) 절제의 크기를 제한함으로써 인접 단백질 구조를 보호하고; (4) 절제와 조합된 조합 면역요법의 종양내 주사는 저용량(전통적인 용량보다 낮은) 면역요법을 허용한다.

하나의 측면에서, 본 개시내용은 적어도 2종의 면역 관문 억제제와 적어도 1종의 세포독성 또는 세포증식억제 화학요법 약물의 조합을 포함하거나, 이로 본질적으로 구성되거나, 이로 구성된 약제학적 조성물을 제공한다. 임의로, 약제학적 조성물은 약제학적으로 허용되는 담체를 포함할 수 있다.

면역 관문 억제제는 면역계 세포의 일부 유형, 예를 들면, T 세포, 및 일부 암 세포에 의해 만들어진 특정한 단백질을 차단하는 약물의 유형이다. 이들 단백질은 면역 반응을 억제하는 것을 돕고, T 세포가 암 세포를 사멸시키는 것을 막을 수 있다. 이러한 단백질이 차단되는 경우, 면역계에 대한 "브레이크"가 방출되고, T 세포는 암 세포를 더 사멸시킬 수 있다. 따라서 관문 억제제는 면역계를 활성화시켜 종양을 공격하도록 작용하고, 이는 면역계의 하향조절의 원인이 되는 면역 반응 단백질을 억제한다. 이러한 관문 억제제는 소분자 억제제를 포함할 수 있거나, 면역 관문 수용체에 결합하여 이를 차단하고 억제하는 항체 또는 이의 항원 결합 단면, 또는 면역 관문 수용체 리간드에 결합하여 이를 차단하거나 억제하는 항체를 포함할 수 있다.

예를 들면, PD-1 및 CTLA-4는 독립적인 분자 메커니즘을 통해 T 세포 활성을 약화시킨다. 문헌[Das et al., "Early B cell changes predict autoimmunity following combination immune checkpoint blockade."J Clin Invest. 128(2):715-720(2018); Das et al., "Combination therapy with anti-CTLA-4 and anti-PD-1 leads to distinct immunologic changes in vivo."J Immunol.194(3):950-959(2015)]을 참조하고, 이는 그 전문이 본원에 참조로서 포함된다. 조합 관문 억제제 차단의 향상된 이익은 각각의 단일 요법의 세포 및 분자 메커니즘의 추가의 체결에 의한 것보다는 성분 단일요법과 구별되는 다중 메커니즘에 의해 매개되는 것 같다. 문헌[Wei et al., "Fundamental Mechanisms of Immune Checkpoint Blockade Therapy.Cancer Discov." 8(9):1069-1086(2018)을 참조하고, 이는 그 전문이 본원에 참조로서 포함된다. 생리학적 수준을 넘는 차단에 의해 양성적인 공동자극은 향상된 세포용해 능력 또는 정규 T 세포 집단에 의해 나타나지 않는 신규한 성질의 획득을 촉진하는 것이 가능하고, 이는 향상된 효능을 야기한다. PD-1 및 CTLA-4 차단의 몇몇 알려진 각각의 분자 메커니즘의 치료적 효능에 대한 상대적인 기여는 거의 알려지지 않았다. 조합 관문 억제제 차단 요법은 전임상 및 임상 연구 둘 다에서 단일 요법과 비교하여 치료적 효능을 개선시킬 수 있다. 문헌[Curran et al., "PD-1 and CTLA-4 combination blockade expands infiltrating T cells and reduces regulatory T and myeloid cells within B16 melanoma tumors."Proc Natl Acad Sci U S A.107(9):4275-4280(2010); Postow et al., "Imunologic correlates of the abscopal effect in a patient with melanoma."New England Journal of Medicine.366(10):925-931(2012); Wolchok et al., "Ipilimumab monotherapy in patients with pretreated advanced melanoma: a randomised, double-blind, multicentre, phase 2, dose-ranging study."Lancet Oncol.11(2):155-164(2010)]을 참조하고, 이는 그 전문이 본원에 참조로서 포함된다. PD-1 및 CTLA-4 차단과의 조합 요법에 의해 치료된 전이성 흑색종 환자는 36%가 반응을 달성할 수 있었고, 일부 경우에 50%가 넘었으며, 57%의 3년 전체 생존율을 달성할 수 있었다. 문헌[Larkin et al., "Combined Nivolumab and Ipilimumab or Monotherapy in Untreated Melanoma."N Engl J Med.373(1):23-34(2015)]을 참조하고, 이는 그 전문이 본원에 참조로서 포함된다. 조합 요법은 또한 표준 관리와 비교하는 경우, 전이성 신세포 암종에서 전체 생존율 이익을 생성할 수 있다. 문헌[Motzer et al., "Nivolumab plus Ipilimumab versus Sunitinib in Advanced Renal-Cell Carcinoma."N Engl J Med.378(14):1277-1290(2018)]을 참조하고, 이는 그 전문이 본원에 참조로서 포함된다.

관문 억제제는 CD137(4-1BB); CD134; PD-1; KIR; LAG-3; PD-L1; PDL2; CTLA-4; B7 패밀리 리간드, 예를 들면, B7.1(또는 CD80) 또는 B7.2(또는 CD86), B7-DC, B7-H1, B7-H2, B7-H3(또는 CD276), B7-H4, B7-H5, B7-H6 및 B7-H7; BTLA(또는 CD272); LIGHT; HVEM; GAL9; TIM-3; TIGHT; VISTA; 2B4; CGEN-15049; CHK1; CHK2; A2aR; TGF-β; PI3Kγ; GITR; ICOS; IDO; TLR; IL-2R; IL-10; PVRIG(B7/CD28); CCRY; OX-40; CD160; CD20; CD52; CD47; CD73; CD27-CD70; 및/또는 CD40의 억제제와 같은 억제제를 포함한다.

본원에서 사용하는데 적합한 추가의 관문 억제제는 또한 문헌[Marin-Acevedo et al., "Next generation of immune checkpoint therapy in cancer: new developments and challenges,"Journal of Hematology & Oncology 11:39(2018)]에 기재된 것들을 포함하고, 이는 그 전문이 본원에 참조로서 포함된다.

약제학적 조성물은 2종 이상의 관문 억제제의 임의의 조합을 포함할 수 있다. 이들은 동일한 유형의 관문 억제제일 수 있거나, 이들은 상이한 관문 억제제일 수 있다. 일부 실시양태에서, 적어도 2종의 관문 억제제는 CTLA-4 억제제 및 PD-1 억제제를 포함한다. 일부 실시양태에서, 적어도 2종의 관문 억제제는 CTLA-4 억제제 및 PD-L1 억제제를 포함한다. 일부 실시양태에서, CTLA-4 억제제는 이필리무맙이고, PD-1 억제제는 펨브롤리주맙 또는 니볼루맙이다.

숙련된 의사는 관문 억제제의 많은 다른 조합이 또한 약제학적 조성물에 적합하다는 것을 인식할 것이다. 조합의 비제한적인 목록은 CD137 억제제 및 CD134 억제제; PD-1 억제제 및 KIR 억제제; LAD-3 억제제 및 PD-L1 억제제; CTLA-4 억제제 및 CD40 억제제; CD 134 억제제 및 PD-1 억제제; KIR 억제제 및 LAG-3 억제제; PD-L1 억제제 및 CTLA-4 억제제; CD40 억제제 및 CD 137 억제제; CTLA-4 억제제 및 PD-L1 억제제; PD-1 억제제 및 CD40 억제제; 또는 당해 분야에 공지된 2종 이상의 관문 억제제의 임의의 다른 조합을 포함한다.

약제학적 조성물은 또한 적어도 1종의 세포독성 또는 세포증식억제 화학요법 약물을 포함할 수 있다. 용어 "세포독성" 또는 "세포증식억제"는 세포의 성장 및 암 세포의 증식의 억제를 유발하거나 암 세포가 사멸하도록 유발하는 세포성 성분 또는 약물을 지칭한다.

적합한 세포독성 또는 세포증식억제 화학요법 약물은 악티노마이신, 알데스류킨, 알렘투주맙, 알리트레티노인, 알트레타민, 암사카린, 아나스트로졸, 삼산화비소, 아스파라기나제, 아자시티딘, 아자티오프린, 바실루스 칼메트 게랭균 백신(BCG), 베바시주맙, 벡사로텐, 비칼루타미드, 블레오마이신, 보르테조밉, 보툴리눔 독소(Botox), 부설판, 카페시타빈, 카보플라틴, 카르무스틴, 세트로렐릭스 아세테이트, 세툭시맙, 클로람부실, 클로람페니콜, 클로르메틴 하이드로클로라이드, 융모생식샘자극호르몬 알파, 시클로스포린, 시도포비어, 시스플라틴, 클라드리빈, 클로파라빈, 클로람부실, 콜치신, 크리산타스파제, 사이클로포스파미드, 사이타라빈, 다카바진, 닥티노마이신, 다나졸, 다사티닙, 다우노루비신 HCl, 데시타빈, 데닐류킨, 디에노스트롤, 디에틸스틸베스트롤, 디노프로스톤, 디트라놀 함유 생성물, 도세탁셀, 독소루비신, 두타스테리드, 에피루비신, 에르고메트린/메틸에르고메트린, 에스트라디올, 에스트라무스틴 포스페이트 나트륨, 에스트로겐-프로게스틴 조합, 컨쥬게이트된 에스트로겐, 에스테르화된 에스트로겐, 에스트론, 에스트로피에이트, 에토포시드, 엑세메스탄, 피나스테리드, 플록수리딘, 플루다라빈, 플루오로우라실, 플루옥시메스테론, 플루타미드, 풀베스트란트, 간시클로비어, 가니렐릭스 아세테이트, 젬시타빈, 젬투주맙 오조가미신, 곤다오트로핀, 코리오닉 고세렐린(졸라덱스), 하이드록시카바마이드, 이브리투모맙 티욱세탄, 이다루비신, 이포스파미드, 이마티닙 메실레이트, 인터페론 알파-2b, 인터페론 함유 생성물, 이리노테칸 HCl, 레플루모미드, 레트로졸, 레우프로렐린 아세테이트, 로무스틴, 림포글로불린, 메드록시프로게스테론, 메게스트롤, 멜팔란, 메노트로핀스, 머캅토퓨린, 메세나, 메토트렉세이트, 메틸테스토스테론, 미페프리스톤, 미토마이신, 미토탄, 미톡산트론 HCl, 마이코페놀레이트, 모페틸, 나파렐린, 나타리주맙, 닐루타미드, 에스트로겐 함유 생성물, 옥살리플라틴, 옥시토신(신토시논 및 신토메트린 포함), 파클리탁셀, 파르알데히드, 페가스파르가제, 페메트렉세드 디나트륨, 펜타미딘 이세티오네이트, 펜토스타틴, 페르포스파미드, 피포브로만, 피리트렉심, 이세티오네이트, 플리카마이신, 포도플릴록스, 포도필린, 포도필룸 수지, 프레드니무스틴, 프로카바진, 프로게스테론 함유 생성물, 프로게스틴, 랄록시펜, 랄티트렉세드, 리바비린, 리툭시맙, 시롤리무스, 스트렙토조신, 타크롤리무스, 타목시펜, 테모졸로미드, 페니포시드, 테스톨락톤, 테스토스테론, 탈리도미드, 티오구아닌, 티오테파, 티모글로불린, 티오구아닌, 토포테칸, 토레미펜 시트레이트, 토시투모맙, 트라스투주맙, 트레오설판, 트레티노인, 트리플루리딘, 트리메트렉세이트 글루코로네이트, 트리프토렐린, 우라무스틴, 백신(생), 발간시클로비어, 발루비신, 비다라빈, 빈블라스틴 설페이트, 빈크리스틴, 빈데신, 비노렐빈 타르트레이트, 지도부딘, 또는 이의 조합을 포함하지만 이에 한정되지 않는다. 예시적인 세포독성 또는 세포증식억제 화학요법 약물은 아스파라기나제, 블레오마이신, 부설판, 카보플라틴, 세툭시맙, 시스플라틴, 사이클로포스파미드, BCG, 클로람페니콜, 콜치신, 사이클로스포린, 다카바진, 독소루비신, 에토포시드, 플루다라빈, 젬시타빈, 이포스파미드, 이리노테칸, 로무스틴, 멜팔란, 메토트렉세이트, 미토마이신, 미톡산트론, 파클리탁셀, 프로카바진, 리툭시맙, 테모졸로미드, 티테파, 빈블라스틴, 빈크리스틴, 지도부딘, 및 이의 조합이다. 2종 이상의 관문 억제제와 화학요법제(세포증식억제 또는 세포독성)의 조합은 2종 이상의 관문 억제제과 또 다른 면역치료제, 예를 들면, 사이토킨의 조합과 상이하다. 근본적으로, 전자 조합의 다중약물 조합에서 작용의 약물 부류 및 메거니즘은 후자 조합의 것들과 상이하다. 특히, 화학요법제는 일반적으로 항대사물이며, 단백질 약물이 아닌 합성 약물인 반면, 사이토킨은 천연 발생 단백질이고 생물제제로 간주된다. 이들 제제의 두 가지 부류가 면역계에 다면발현성 효과를 가짐에도 불구하고, 효과의 레퍼토리 및 이들 효과를 유도하는 작용의 메커니즘은 두 가지 상이한 부류의 이들 제제에 있어서 매우 상이하다. 추가로, 사이토킨사이토킨 신호전달 단백질의 억제제)의 억제 메커니즘은 화학요법 약물의 것과 상이하다.

사이토킨은 일반적으로 다수의 자극에 반응하여 면역계 세포 또는 비면역 세포(예를 들면, 상피 세포)에 의해 분비되고 면역 이펙터 세포의 발달의 조절을 보조하는 저분자량 조절 단백질 또는 당단백질이다. 사이토킨은 표적 세포의 막 상의 특이적인 수용체에 결합하여, 표적 세포에서 궁극적으로 유전자 발현을 변경하는 신호 전달 경로를 촉발시킨다. 사이토킨의 작용은 광범위한 생물학적 과정에 관련되어 있다. 다른 한편으로는, 화학요법제는 면역원성 세포 사멸을 직접적으로 또는 간접적으로 유도함으로써 암 면역력을 촉진시킬 수 있다. 화학요법의 직접적인 작용은 세포괴사 또는 자가포식의 유도를 포함한다. 간접적인 작용은 면역 조절을 피하로기 위하여 암에 의해 사용되는 노력을 좌절시키는 세포 신호전달 경로의 변경(문헌[Emens et al., " Chemotherapy: friend or foe to cancer vaccines?"Curr Opin Mol Ther.3(1):77-84(2001)]을 참조하고, 이는 그 전문이 본원에 참조로서 포함됨); 예를 들면, CXCL8에 의한 케모킨 신호전달이 세포 표면 상에 칼레티쿨린을 노출함으로써 수지상 세포의 동정 및 손상된 암 세포의 소비를 자극하는 경우와 같이, 암 신생항원의 제시의 방출 및 향상 및 위험과 관련된 분자 패턴(DAMP)(문헌[Sukkurwala et al., "Immunogenic calreticulin exposure occurs through a phylogenetically conserved stress pathway involving the chemokine CXCL8."Cell Death Differ. 21(1):59-68 (2014)]을 참조하고, 이는 그 전문이 본원에 참조로서 포함됨); MHC 클래스 1 발현, 동시자극 분자, 예를 들면, B7-1, 또는 암 신생항원 그 자체의 상향조절, 또는 공동억제성 분자, 예를 들면, PD-L1/B7-H1 또는 B7-H4의 하향조절에 의한 이펙터 T 세포 활성의 향상(문헌[Chen et al., "Chemoimmunotherapy: reengineering tumor immunity."Cancer Immunol Immunother.62(2):203-216(2013)]을 참조하고, 이는 그 전문이 본원에 참조로서 포함됨)을 포함한다. 암의 화학요법 유도된 T 세포 매개된 사멸은 fas-, 퍼포린-, 및 그랜자임 B 의존성 메커니즘을 포함할 수 있다. 문헌[Chen et al., "Chemoimmunotherapy: reengineering tumor immunity."Cancer Immunol Immunother.62(2):203-216(2013)]을 참조하고, 이는 그 전문이 본원에 참조로서 포함된다.

세포증식억제 및 세포독성 화학요법제는 단독으로 면역계에 용량 의존적 효과를 나타냈다. 문헌[Emens, "Chemoimmunotherapy."Cancer J. 16(4):295-303(2010); Chen et al., "Chemoimmunotherapy: reengineering tumor immunity."Cancer Immunol Immunother.62(2):203-216(2013)]을 참조하고, 이는 그 전문이 본원에 참조로서 포함된다.

화학요법제는 직접적인 세포 사멸에 필요한 고용량과 관련된 독성을 피하로면서 암 면역력을 조절하는데 사용되어 왔다. 이러한 조절은 몇몇 화학요법제, 예를 들면, 사이클로포스파미드, 파클리탁셀, 시스플라틴, 및 테모졸로미드에 의해 증명되었다. 예를 들면, 사이클로포스파미드는, 예를 들면, Treg의 고갈을 포함하는 다면발현성 면역 조절 성질을 나타냈다. 문헌[Machiels et al., "Cyclophosphamide, doxorubicin, and paclitaxel enhance the antitumor immune response of granulocyte/macrophage-colony stimulating factor-secreting whole-cell vaccines in HER-2/neu tolerized mice."Cancer Res.61(9):3689-3697(2001)]을 참조하고, 이는 그 전문이 본원에 참조로서 포함된다. 탁센, 예를 들면, 파클리탁셀은 또한 Treg를 고갈시키고, 수지상 세포 성숙을 촉진하고, CD4+ T 헬퍼 표현형을 2형에서 1형으로 이동시켜, 향상된 전염증성 사이토킨 분비 및 CD8+ T 세포의 프라이밍 및 용해 활성을 야기할 수 있다. 독소루비신은 이러한 면역조절의 메커니즘이 불분명함에도 불구하고 종양 파생물을 지연시킬 수 있고 백신 활성을 향상시킬 수 있다. 사이클로포스파미드와 독소루비신의 조합은 또한 Treg의 선택적 고갈에 의한 암을 가진 일부 마우스를 치료하는 바람직한 효과를 나타냈고, 이는 고결합성 암 특이적 T 세포의 동원을 허용한다. HER2þ, GM-CSF-분비 유방암 백신과 면역조절 용량의 사이클로포스파미드 및 독소루비신의 조합은 이펙터 T 세포에 상대적인 CD4+ Treg를 선택적으로 고갈시켜 이펙터 T 세포를 활성화시킬 수 있다. 문헌["Immediate versus deferred treatment for advanced prostatic cancer: initial results of the Medical Research Council Trial. The Medical Research Council Prostate Cancer Working Party Investigators Group."Br J Urol.79(2):235-246(1997)]을 참조하고, 이는 그 전문이 본원에 참조로서 포함된다. 다른 화학요법제, 예를 들면, 젬시타빈은 또한 아폽토시스의 유도, 수지상 세포 암 항원 제시의 촉진, 및 CD8+ T 세포의 교차 프라이밍의 촉진을 포함하여 면역계에 대한 효과를 나타냈다. 문헌[Nowak et al., "Induction of tumor cell apoptosis in vivo increases tumor antigen cross-presentation, cross-priming rather than cross-tolerizing host tumor-specific CD8 T cells."J Immunol.170(10):4905-4913(2003)]을 참조하고, 이는 그 전문이 본원에 참조로서 포함된다.

2종 이상의 관문 억제제와 화학요법제(세포증식억제 또는 세포독성)의 조합은 암 면역력 생명 주기의 다른 비중복적 측면, 예를 들면, 신규한 분자, 조직의 작용 부위, 면역 세포 집단, 및 생물학적 과정을 표적화하여 이익을 얻을 수 있다. 예를 들면, 면역글로불린 수퍼패밀리(IgSF)로부터의 분자인 VISTA는 전이성 전립선암 환자에서 이필리무맙(항-CTLA-4) 치료 후 M2 대식세포 상에서 먼저 발현된다. 문헌[Gao et al., "VISTA is an inhibitory immune checkpoint that is increased after ipilimumab therapy in patients with prostate cancer."Nat Med.2017;23(5):551-555]을 참조하고, 이는 그 전문이 본원에 참조로서 포함된다. VISTA 및 PD-1은 T 세포에 대한 비중복적 억제 효과를 갖는다. 문헌[Liu et al., "Immune-checkpoint proteins VISTA and PD-1 non-redundantly regulate murine T-cell responses."Proc Natl Acad Sci U S A.112(21):6682-6687(2015)]을 참조하고, 이는 그 전문이 본원에 참조로서 포함된다. 또 다른 예로서, 젬시타빈은 뮤린 췌장 암 모델에서 T 세포 이동을 증가시키고 T 세포 매개된 용해에 대하여 종양 세포를 민감화함으로써 수지상 세포 기반의 백신의 효능을 향상시킬 수 있다. 문헌[Bauer et al., "Concomitant gemcitabine therapy negatively affects DC vaccine-induced CD8(+) T-cell and B-cell responses but improves clinical efficacy in a murine pancreatic carcinoma model."Cancer Immunol Immunother.63(4):321-333(2014)]을 참조하고, 이는 그 전문이 본원에 참조로서 포함된다. 전이성 신세포 암종 환자의 II상 임상 시험에서, 추가의 예는 사이클로포스파미드 및 멀티펩타이드 백신 IMA901의 사용이고, 이는 멀티펩타이드 면역 반응이 발달한 사람들에서 생존율을 개선시킬 수 있고, 이는 다중 항원에 의해 생성된 다양한 종양 특이적 면역 반응을 제안한다. 문헌[Walter et al., "Multipeptide immune response to cancer vaccine IMA901 after single-dose cyclophosphamide associates with longer patient survival."Nat Med.18(8):1254-1261(2012)]을 참조하고, 이는 그 전문이 본원에 참조로서 포함된다.

그러나, 데이터는 면역 관문 차단과 저용량 화학요법의 조합의 효능으로 매우 한정된다. 2종 이상의 관문 억제제와 화학요법제(세포증식억제 또는 세포독성)의 조합은 길항적 상호작용 및 부작용을 최소화하면서 전시적 암 사멸의 추가적 또는 상승작용적 메커니즘을 이용하기 위하여 본원에서 개발되었다.

일부 실시양태에서, 약제학적 조성물은 제2 세포독성 또는 세포증식억제 화학요법 약물을 추가로 포함할 수 있다. 제2 세포독성 또는 세포증식억제 화학요법 약물은 제1 세포독성 또는 세포증식억제 화학요법 약물과 동일하거나 상이할 수 있다.

면역 관문 억제제는 약제학적 조성물 중에 치료적 유효량으로 존재한다. 예를 들면, 각각의 면역 관문 억제제의 농도는 약 0.1 내지 약 500 mg/ml, 예를 들면, 약 0.1 내지 약 300 mg/ml, 약 0.1 내지 약 200 mg/ml, 약 0.1 내지 약 100 mg/ml, 약 0.5 내지 약 100 mg/ml, 약 0.5 내지 약 50 mg/ml, 약 0.5 내지 약 30 mg/ml, 약 0.5 내지 약 20 mg/ml, 약 0.5 내지 약 10 mg/ml, 약 1 내지 약 10 mg/ml, 약 1 내지 약 5 mg/ml, 또는 약 1 내지 약 2 mg/ml 범위일 수 있다.

세포독성 또는 세포증식억제 화학요법 약물은 또한 약제학적 조성물 중에 치료적 유효량으로 존재한다. 예를 들면, 각각의 세포독성 또는 세포증식억제 화학요법 약물의 농도는 약 1 ㎍/ml 내지 약 100 mg/ml, 약 1 ㎍/ml 내지 약 50 mg/ml, 약 1 ㎍/ml 내지 약 30 mg/ml, 약 1 ㎍/ml 내지 약 20 mg/ml, 약 1 ㎍/ml 내지 약 10 mg/ml, 약 1 ㎍/ml 내지 약 5 mg/ml, 약 1 ㎍/ml 내지 약 1 mg/ml, 약 1 내지 약 500 ㎍/ml, 약 1 내지 약 500 ㎍/ml, 약 1 내지 약 300 ㎍/ml, 약 1 내지 약 200 ㎍/ml, 약 1 내지 약 100 ㎍/ml, 약 1 내지 약 50 ㎍/ml, 약 1 내지 약 30 ㎍/ml, 약 1 내지 약 20 ㎍/ml, 약 5 내지 약 50 ㎍/ml, 약 5 내지 약 30 ㎍/ml, 약 5 내지 약 20 ㎍/ml, 또는 약 5 내지 약 10 ㎍/ml 범위일 수 있다.

일부 경우에, 약제학적 조성물은 약 0.5 내지 약 10 mg/ml의 농도의 CTLA-4 억제제, 및 약 0.5 내지 약 20 mg/ml의 농도의 PD-1 억제제를 포함하거나, 이로 본질적으로 구성되거나, 이로 구성된다. 일부 경우에, 약제학적 조성물은 약 1 내지 약 10 mg/ml, 예를 들면, 약 2 내지 약 8 mg/ml, 또는 약 5 mg/ml의 농도의 CTLA-4 억제제; 및 약 1 내지 약 20 mg/ml, 예를 들면, 약 5 내지 약 15 mg/ml, 또는 약 10 mg/ml의 농도의 PD-1 억제제를 포함한다. 세포독성 또는 세포증식억제 화학요법 약물은 약 10 내지 500 ㎍/ml 또는 약 10 내지 100 mg/ml의 농도로 존재할 수 있다. 일부 경우에, 약제학적 조성물(또는 각각의 성분)은 약 1 ml, 약 5 ml, 또는 약 10 ml의 부피로 투여된다. 하나의 실시양태에서, 약제학적 조성물(또는 각각의 성분)은 약 1 ml의 부피로 투여된다.

일부 경우에, 조성물은 약 1 내지 2 mg/ml의 농도의 CTLA-4 억제제, 약 1 내지 10 mg/ml의 농도의 PD-1 억제제 및 약 250 ㎍/ml의 농도의 세포독성 또는 세포증식억제 화학요법 약물을 포함한다. 예를 들면, 조성물은 약 3.3 mg/ml의 농도의 CTLA-4 억제제, 약 6.6 mg/ml의 농도의 PD-1 억제제, 및 약 16.6 ㎍/ml의 농도의 세포독성 또는 세포증식억제 화학요법 약물을 포함할 수 있다. 일부 경우에, 조성물은 적어도 또는 약 15 ml의 부피이다. 일부 경우에, 조성물은 약 15 ml 미만의 부피이다.

약제학적 조성물은 암을 치료하는데 효과적인 것으로 당해 분야에 공지된 치료제 및/또는 생물학적 제제, 예를 들면, 항암제, 또는 면역계를 자극하는데 효과적인 것으로 당해 분야에 공지된 제제, 즉, 면역자극제 또는 면역조절제 중 하나 이상의 치료적 유효량을 추가로 포함할 수 있다. 이러한 약제학적 조성물은 본원에 기재된 암을 치료하는데 사용될 수 있다.

약제학적 조성물은 또한 핵산 약물의 하나 이상의 치료적 유효량을 포함할 수 있다. 핵산 약물은, 예를 들면, DNA, DNA 플라스미드, nDNA, mtDNA, gDNA, RNA, siRNA, miRNA, mRNA, piRNA, 안티센스 RNA, snRNA, snoRNA, vRNA 등일 수 있다. 예를 들면, 핵산 약물은 DNA 플라스미드일 수 있다. 일부 경우에, DNA 플라스미드는 GM-CSF, IL-12, IL-6, IL-4, IL-12, TNF, IFNy, IFNa, 및/또는 이의 조합으로 이루어진 군으로부터 선택된 유전자를 인코딩하는 뉴클레오타이드 서열을 포함하거나, 이로 본질적으로 구성되거나, 이로 구성될 수 있다. 핵산 약물은 임상적 유용성, 예를 들면, 세포의 치료적 효과의 향상 또는 환자에게 치료제 제공을 가질 수 있다. 또 다른 경우에, 핵산 약물은 마커 또는 내성 유전자로서 기능할 수 있다. 뉴클레오타이드 서열은 세포로부터 분비될 수 있거나 세포로부터 분비될 수 없는 유전자를 인코딩할 수 있다. 핵산 약물은 유전자 및 프로모터 서열을 인코딩하여 유전자의 발현을 증가시킬 수 있다.

당해 분야의 숙련가는 약제학적 조성물이 암 및/또는 대상체의 개별적인 양상, 예를 들면, 종양의 크기, 종양의 위치, 대상체, 약물 반응의 임상적 증거 등에 따라 개조될 수 있다는 것을 인식할 것이다.

약제학적 조성물은 전달제 또는 약제학적으로 허용되는 담체 또는 부형제를 포함할 수 있다. 본원에서 사용되는 바와 같이 용어 "약제학적으로 허용되는 담체 또는 부형제"는 약제학적 투여와 양립할 수 있는 용매, 분산매, 코팅, 항박테리아제 및 항진균제, 등장제 및 흡수지연제 등을 포함한다. 보충적인 활성 화합물이 또한 본원에 기재된 바와 같은 항체 또는 이의 항원 결합 단편을 함유하는 약제학적 조성물을 위한 제제로 도입될 수 있다.

면역 관문 억제제 및 세포독성 또는 세포증식억제 화학요법 약물을 함유하는 약제학적 조성물은 경구 또는 비경구, 예를 들면, 정맥내, 근육내, 피하, 종양내, 안와내, 피막내, 복강내, 직장내, 낭내, 맥관내, 피부내; 예를 들면, 각각 피부 패치 또는 경피 전리요법을 사용하는 피부를 통한 수동적 또는 촉진적 흡수; 예를 들면, 종양에 공급되는 혈관으로 정맥내로 또는 동맥내로 병리적 상태의 부위로의 투여; 또는 이의 조합을 포함하지만 이에 한정되지 않는 다양한 투여 경로를 위하여 제제화될 수 있다.

적합한 약제학적 조성물의 제제화 방법은 당해 분야에 공지되어 있고(예를 들면, 문헌[Troy, "Remington: The Science and Practice of Pharmacy"(21^st Ed., Lippincott Williams & Wilkins, 2006); Willig, "Drugs and the Pharmaceutical Sciences: a Series of Textbooks and Monographs"(M. Dekker, 1975)] 참조); 상기 둘 다는 그 전문이 본원에 참조로서 포함된다. 예를 들면, 비경구, 피부내, 또는 피하 적용에 사용되는 용액 또는 현탁액은 하기 성분을 포함할 수 있다: 살균 희석제, 예를 들면, 주사용수, 식염수, 고정유, 폴리에틸렌 글리콜, 글리세린, 프로필렌 글리콜 또는 다른 합성 용매; 항박테리아제, 예를 들면, 벤질 알코올 또는 메틸 파라벤; 항산화제, 예를 들면, 아스코르브산 또는 아황산수소나트륨; 킬레이트제, 예를 들면, 에틸렌디아민테트라아세트산(EDTA); 완충제, 예를 들면, 아세테이트, 시트레이트 또는 포스페이트 및 긴장성의 조절을 위한 제제, 예를 들면, 염화나트륨 또는 덱스트로스. pH 값은 산 또는 염기, 예를 들면, 염산 또는 수산화나트륨으로 조절할 수 있다. 비경구 제제는 유리 또는 플라스틱으로 만들어진 앰플, 일회용 주사기 또는 다중 용량 바이알에 밀봉될 수 있다.

약제학적 조성물 또는 약제학적 조성물의 다양한 성분(예를 들면, 관문 억제제, 세포독성 또는 세포증식억제 화학요법 약물, 핵산 약물, 및/또는 이의 조합)은 종양내 전달을 위하여 제제화될 수 있다. 예를 들면, 약제학적 조성물 또는 약제학적 조성물의 다양한 성분은 주사 장치를 통해 종양내로 전달될 수 있고, 여기서 주사 장치는 프로브의 부분일 수 있다. 본원에 기재된 바와 같은 프로브는 다양한 절제 방법을 위하여 구성될 수 있다. 추가로, 프로브는 또한 본원에 기재된 방법을 조합하도록 구성될 수 있고, 예를 들면, 냉동프로브는 전기 펄스, 한제, 화학적 또는 생물학적 절제 제제, 및/또는 약물의 조성물을 투여하도록 구성될 수 있다.

종양내로 투여된 적어도 2종의 관문 억제제와 세포독성 또는 세포증식억제 화학요법 약물의 조합은 정맥내로 투여된 2종의 관문 억제제의 조합(세포독성 또는 세포증식억제 화학요법 약물 없이)보다 더 적은 유해 부작용 및/또는 면역 관련 부작용을 생성한다. 종양내로 전달된 이러한 3종 이상의 면역 자극 약물의 조합은 마우스에서 중추신경계를 포함하여 원거리의 전이성 종양 부위를 근절할 수 있는 전신적 CD4+ 및 CD8+ T 세포 매개된 항종양 면역 반응을 촉발하는데 충분할 수 있다. 이러한 국소적인 조합 전략은 또한 더 우수한 CD8+ 메모리 항종양 면역 반응을 생성할 수 있고, 이는 항체의 전신적 전달과 반대로 말기 종양 재발을 방지하기 때문이다.

적어도 2종의 관문 억제제와 세포독성 또는 세포증식억제 화학요법 약물의 조합은 종양내 조절 T 세포(Treg)를 고갈시키는 이러한 면역 자극 약물의 능력에 대한 추가의 효과로 인하여 적어도 2종의 관문 억제제의 조합(하지만 세포독성 또는 세포증식억제 화학요법 약물 없이)보다 뛰어나다. 추가로, 효과적인 전신적 적응성 항암 면역 반응의 생성은 Treg 고갈과 면역원성 종양 세포 사멸 및 수지상 세포의 활성화를 조합하는 종양내 면역화 전략에 의해 최적화될 수 있다.

전통적으로, 관문 억제제는 정맥내로 투여되고, 이는 신체에서 이러한 세포파괴제의 비특이적 분포의 결과로서 심각하고 때때로 치명적인 전신 독성을 야기할 수 있다. 이러한 제제의 비특이적 분포는 암 세포 및 정상 세포 둘 다를 사멸시키고, 치료 양생법 및 환자 결과에 부정적인 영향을 미칠 수 있다. 종양내 방법은 약물을 종양 미세환경에 격리하고 정상 세포 및 조직이 약물의 독성을 피하게 함으로써 전신적 독성을 감소시키고 더 적은 부작용을 생성할 수 있다(문헌[Marabelle et al., "Intratumoral Immunization: A New Paradigm for Cancer Therapy"Clin. Cancer Res.20(7): 1747-56(2014)]을 참조하고, 이는 그 전문이 본원에 참조로서 포함됨). 면역 자극 약물의 종양내 주사는 혈액 중에 높은 농도의 이들의 순환을 방지함으로써 전신적 독성을 감소시키고 더 적은 부작용을 생성할 수 있다. 이러한 전달 경로는 또한 전신적 주입보다 암 미세환경에 면역자극 생성물의 훨씬 더 높은 농도를 생성하고, 따라서 더 우수한 효능을 증가시킨다. 다른 한편으로는, 이러한 전달 경로는 또한 치료적으로 효과적인데 필요한 투여된 조성물의 양을 낮추는 것을 가능하게 한다.

다중 공동자극 및 공동억제 수용체는 제어 T 세포 활성화, 증식, 및 CTLA-4를 포함하는 이펙터 기능의 증가 또는 손실에 영향을 미친다. CTLA4는 B7-1 및 B7-2 리간드에 결합하여, CD8+ 세포독성 T 세포를 활성화시키고 부수적으로 CD4+ Treg를 고갈시킴으로써 항암 활성을 촉진한다(문헌[Selby et al., "Anti-CTLA-4 antibodies of IgG2a isotype enhance antitumor activity through reduction of intratumoral regulatory T cells"Cancer Immunol. Res. 1:32-42(2013)]을 참조하고, 이는 그 전문이 본원에 참조로서 포함됨). 이러한 결과는 항-CTLA-4의 국소적 저용량 전달에 의해 마우스 모델에서 생성된 전신적 항암 면역 반응을 설명할 수 있다. 확립된 마우스 결장 암종 주변에 주사된 항-CTLA-4 항체의 저용량은 암 특이적 CD8+ T 세포 반응의 직접적인 향상에 의해 원거리의 비주사된 부위(압스코팔 효과)에서 국소적 종양을 근절하고 암의 발달을 방지할 수 있었다(문헌[Fransen et al., "Controlled local deliver of CTLA-4 blocking antibody induces CD8+ T-cell-dependent tumor eradication and decreases risk of toxic side effects"Clin. Cancer Res. 19:5381-9(2013)]을 참조하고, 이는 그 전문이 본원에 참조로서 포함됨).

게다가, 암 세포 및 면역계 둘 다를 표적화하는 기술을 조합함으로써, 약제학적 조성물은 암을 억제하는 것 뿐만 아니라 효과적인 항종양 면역 반응을 촉발하는데 더 효과적일 수 있다. 그 다음, 이러한 항종양 면역 반응은 전이성 부위를 표적화하고, 대상체 전체에서 암을 제거할 수 있다.

주사에 적합한 약제학적 조성물은 살균 수성 용액(수용해성), 분산액, 및 살균 주사 가능한 용액 또는 분산액의 즉석 제조를 위한 살균 분말을 포함할 수 있다. 정맥내 투여를 위하여, 적합한 담체는 정균적 생리식염수, 크레모포르(Cremophor) EL™(BASF, 미국 뉴저지주 파시패니 소재), 또는 인산염 완충 식염수(PBS)를 포함한다. 조성물은 무균이고 용이한 주사 가능성이 존재할 정도로 유체인 것이 바람직하다. 약제학적 조성물은 제조 및 저장 조건하에 안정하여야 하고, 박테리아 및 진균류와 같은 미생물의 오염 작용에 대항하여 보존되어야 한다. 담체는 예를 들면, 물, 에탄올, 폴리올(예를 들면, 글리세롤, 프로필렌 글리콜, 및 액체 폴리에틸렌 글리콜 등), 및 이의 적합한 혼합물을 함유하는 용매 또는 분산매일 수 있다. 적절한 유동성은, 예를 들면, 레시틴과 같은 코팅의 사용, 분산액의 경우, 필요한 입자의 유지, 및 계면활성제의 사용에 의해 유지될 수 있다.

미생물 작용의 방지는 다양한 항박테리아제 및 항진균제, 예를 들면, 파라벤, 클로로부탄올, 페놀, 아스코르브산, 티메로살 등에 의해 달성될 수 있다. 많은 경우에, 등장제, 예를 들면, 당, 폴리알코올, 예를 들면, 만니톨, 소르비톨, 및 염화나트륨을 약제학적 조성물 중에 포함하는 것이 바람직하다. 주사 가능한 조성물의 연장된 흡수는 약제학적 조성물 중에 흡수를 지연시키는 제제, 예를 들면, 알루미늄 모노스테아레이트 및 겔라틴을 포함함으로써 야기될 수 있다.

살균 주사 가능한 용액은 필요한 양의 활성 화합물을 적절한 용매 중에 상기 열거된 하나의 성분 또는 성분의 조합과 함께 혼입하고, 필요한 경우, 그 다음, 여과 살균으로 제조될 수 있다. 일반적으로, 분산액은 염기성 분산매 및 상기 열거된 것들 중에서 필요한 다른 성분을 함유하는 살균 비히클에 활성 화합물을 혼입함으로써 제조된다. 살균 주사 가능한 용액의 제조를 위한 살균 분말의 경우, 바람직한 제조 방법은 진공 건조 및 동결 건조이고, 이는 활성 성분과 임의의 추가의 원하는 성분의 합의 분말을 이의 미리 살균 여과된 용액으로부터 수득한다. 일부 실시양태에서, 약제학적 조성물은 임플란트 및 미세캡슐화 전달 시스템을 포함하는 제어 방출 제제와 같이, 활성 화합물을 신체로부터 빠른 제거로부터 보호할 담체와 함께 제조될 수 있다.

약제학적 조성물은 투여를 위한 설명서와 함께 컨테이너, 팩, 카트리지, 또는 디스펜서에 포함될 수 있다.

본 발명의 또 다른 측면은 환자에서 종양 또는 암을 치료하는 방법을 제공한다. 방법은 치료가 필요한 환자에게 적어도 2종의 면역 관문 억제제 및 적어도 1종의 세포독성 또는 세포증식억제 화학요법 약물을 포함하는 조성물을 투여하는 단계를 포함하거나, 이로 본질적으로 구성되거나, 이로 구성될 수 있고, 각각은 종양 또는 암을 치료하기 위한 치료적 유효량으로 조성물 중에 존재한다. 조성물은 임의로 약제학적으로 허용되는 담체를 함유할 수 있다. 예를 들면, 투여된 조성물은 본원에 기재된 약제학적 조성물일 수 있다.

적합한 면역 관문 억제제, 적합한 세포독성 또는 세포증식억제 화학요법 약물, 적합한 임의의 약제학적으로 허용되는 담체, 종양 또는 암을 치료하기 위한 이의 유효량, 및 다양한 투여 경로를 위한 약제학적 조성물의 제제를 포함하는 약제학적 조성물의 측면에 관한 모든 상기 실시양태는 환자에서 종양 또는 암을 치료하는 방법의 이러한 측면에서 적용 가능하다.

일부 경우에, 방법은 조성물을 환자에게 종양내로 투여하는 단계를 포함하거나, 이로 본질적으로 구성되거나, 이로 구성된다.

일부 실시양태에서, 방법은 환자에게 각각이 CD137, CD134, PD-1, KIR, LAG-3, PD-L1, PDL2, CTLA-4, B7.1, B7.2, B7-DC, B7-H1, B7-H2, B7-H3, B7-H4, B7-H5, B7-H6, B7-H7, BTLA, LIGHT, HVEM, GAL9, TIM-3, TIGHT, VISTA, 2B4, CGEN-15049, CHK1, CHK2, A2aR, TGF-β, PI3Kγ, GITR, ICOS, IDO, TLR, IL-2R, IL-10, PVRIG, CCRY, OX-40, CD160, CD20, CD52, CD47, CD73, CD27-CD70, 및/또는 CD40으로 이루어진 군으로부터 선택된 면역 관문 분자의 억제제인 적어도 2종의 상이한 면역 관문 억제제; 및 적어도 1종의 세포독성 또는 세포증식억제 화학요법 약물을 종양 또는 암을 치료하기 위한 유효량으로 포함하는 조성물을 투여하는 단계를 포함하거나, 이로 본질적으로 구성되거나, 이로 구성된다. 일부 실시양태에서, 적어도 2종의 관문 억제제는 CTLA-4 억제제, PD-1 억제제를 포함한다. 일부 실시양태에서, 적어도 2종의 관문 억제제는 CTLA-4 억제제 및 PD-L1 억제제를 포함한다.

일부 실시양태에서, 방법은 환자에게 적어도 2종의 면역 관문 억제제, 및 아스파라기나제, 블레오마이신, 부설판, 카보플라틴, 세툭시맙, 시스플라틴, 사이클로포스파미드, BCG, 클로람페니콜, 콜치신, 사이클로스포린, 다카바진, 독소루비신, 에토포시드, 플루다라빈, 젬시타빈, 이포스파미드, 이리노테칸, 로무스틴, 멜팔란, 메토트렉세이트, 미토마이신, 미톡산트론, 파클리탁셀, 프로카바진, 리툭시맙, 테모졸로미드, 티테파, 빈블라스틴, 빈크리스틴, 지도부딘, 및 이의 조합으로 이루어진 군으부터 선택된 적어도 1종의 세포독성 또는 세포증식억제 화학요법 약물을 종양 또는 암을 치료하는데 충분한 양으로 포함하는 조성물을 투여하는 단계를 포함하거나, 이로 본질적으로 구성되거나, 이로 구성된다.

일부 경우에, 방법은 핵산 약물의 치료적 유효량을 종양 또는 암에 투여하는 단계를 추가로 포함한다. 적어도 2종의 관문 억제제 및 적어도 1종의 세포독성 또는 세포증식억제 화학요법 약물의 조합의 투여는 관문 억제제의 조합(예를 들면, 세포독성 또는 세포증식억제 화학요법 약물 없이)의 투여보다 더 적은 부작용 및/또는 면역 관련 부작용을 생성한다.

상기 논의된 바와 같이, 조성물 또는 이의 성분의 투여는 경구적으로 또는 비경구적으로, 예를 들면, 정맥내로, 근육내로, 피하로, 종양내로, 안와내로, 피막내로, 복강내로, 직장내로, 낭내로, 맥관내, 피부내로 투여; 예를 들면, 각각 피부 패치 또는 경피 전리요법을 사용하는 피부를 통한 수동적 또는 촉진적 흡수에 의한 투여; 예를 들면, 종양에 공급되는 혈관으로 정맥내로 또는 동맥내로 병리적 상태의 부위로의 투여; 또는 이의 조합을 포함하지만 이에 한정되지 않는 다양한 투여 경로를 통해 수행될 수 있다.

약제학적 조성물 또는 이의 성분은 원하는 결과를 달성하는데 필요한 유효량, 투여량, 및 시간의 기간 동안 투여될 수 있다. 유효량은 하나 이상의 투여, 적용 또는 투여량으로 투여될 수 있다. 약제학적 조성물의 치료적 유효량(즉, 유효 투여량)은 선택된 약제학적 조성물에 따라 좌우된다. 조성물은 격일 1회를 포함하여 1일당 1회 이상 내지 1주당 1회 이상으로 투여될 수 있다. 숙련가는 질환 또는 질병의 중증도, 이전 치료, 대상체의 일반적인 건강 및/또는 연령, 존재하는 다른 질환을 포함하지만 이에 한정되지 않는 특정한 인자가 대상체를 효과적으로 치료하는데 필요한 투여량 및 시기에 영향을 미칠 수 있다는 것을 인식할 것이다. 게다가, 본원에 기재된 약제학적 조성물의 치료적 유효량에 의한 대상체의 치료는 단일 치료 또는 일련의 치료를 포함할 수 있다.

일부 경우에, 조성물은 주사 장치를 사용하여 환자의 종양 또는 암에 투여된다. 주사 장치는 다중 타인(tine) 또는 단일 타인을 포함할 수 있다. 조성물은 본원에 기재된 바와 같이 (상이한 목적을 제공하는) 프로브를 사용하여 투여될 수 있다.

일부 실시양태에서, 본원에 조성물은 하나 이상의 투여로 투여될 수 있다. 이러한 하나 이상의 투여는 본원에 기재된 바와 같은 동일하거나 상이한 투여 방법, 예를 들면, 피하, 정맥내, 근육내, 종양내 또는 이의 임의의 조합일 수 있다.

일부 실시양태에서, 제1 조성물은 종양내로 투여되고, 제2 조성물은 피하로 투여된다. 일부 실시양태에서, 제1 및 제2 조성물은 동시에, 순차적으로, 또는 일련의 치료로 투여된다. 일부 실시양태에서, 제1 및 제2 조성물은 동일하거나, 상이하거나, 부분적으로 동일하다. 일부 실시양태에서, 치료 방법은 2개 이상의 투여를 포함한다.

일부 실시양태에서, 제1 투여는 적어도 2종의 관문 억제제(예를 들면, PD-1 억제제 및 CTLA-4 억제제) 및 적어도 1종의 세포독성 또는 세포증식억제 화학요법 약물의 종양내 투여이다.

투여 양생법은 최적의 치료적 반응을 제공하도록 조절될 수 있다. 예를 들면, 몇몇 분리된 용량은 매일 투여될 수 있거나, 용량은 치료적 상황의 긴급함에 의해 나타나는 바에 따라 비례하여 감소할 수 있다. 당해 분야의 숙련가는 본원에 개시된 신규한 단일클론 항체 또는 이의 항원 결합 단편을 대상체에게 투여하는데 적합한 투여량 및 투여 양생법을 알 것이다. 예를 들면, 문헌[Physicians' Desk Reference 2008(62^nd Ed., Thomson Reuters, 2008)]을 참조하고, 이는 그 전문이 본원에 참조로서 포함된다. 예를 들면, 치료적 화합물의 투여량, 독성, 및 치료적 효능은, 예를 들면, LD50(집단의 50%에 대한 치사 용량) 및 ED50(집단의 50%에서 치료적으로 유효한 용량)을 결정하기 위하여, 세포 배양 또는 실험 동물에서 표준 약제학적 절차에 의해 결정될 수 있다. 독성과 치료적 효과 사이의 용량 비는 치료 지수이고, 이는 LD50/ED50 비로 표현될 수 있다. 높은 치료 지수를 나타내는 화합물이 바람직하다. 독성 부작용을 나타내는 화합물이 사용될 수 있는 경우, 감염되지 않은 세포에 대한 잠재적인 손상을 최소화하고, 이로써 부작용을 감소시키기 위하여, 이러한 화합물을 환부 조직 부위에 표적화하는 전달 시스템을 설계하도록 주의하여야 한다.

세포 배양 검정 및 동물 연구로부터 수득된 데이터는 인간에서 사용하기 위하여 광범위한 투여량을 제제화하는데 사용될 수 있다. 이러한 화합물의 투여량은 독성이 약간 있거나 독성이 없는 ED50를 포함하는 광범위한 순환 농도 내에 속한다. 투여량은 사용되는 제형 및 이용되는 투여 경로에 따라 이러한 범위 내에서 다양할 수 있다. 치료 방법에 사용되는 임의의 화합물에 있어서, 치료적 유효 용량은 초기에 세포 배양 검정으로부터 확립될 수 있다. 용량은 세포 배양에서 결정되는 바와 같은 IC50(즉, 증상의 절반 최대 억제를 달성하는 시험 화합물의 농도)를 포함하는 순환성 혈장 농도 범위를 달성하는 동물 모델에서 제제화될 수 있다. 이러한 정보는 인간에서 유용한 용량을 더 정확하게 결정하는데 사용될 수 있다. 혈장 수치는, 예를 들면, 고성능 액체 크로마토그래피로 측정될 수 있다.

일부 실시양태에서, 조성물은 약 15 ml 미만의 부피로 투여된다. 일부 실시양태에서, 조성물은 약 15 ml의 부피로 투여된다.

일부 실시양태에서, 조성물은 약 15 ml 이하, 약 10 ml 이하, 약 5 ml 이하, 또는 약 1 ml 이하의 부피로 투여된다. 일부 실시양태에서, 조성물(또는 각각의 성분)은 약 1 ml, 약 5 ml, 또는 약 10 ml의 부피로 투여된다.

일부 실시양태에서, 면역 관문 억제제의 투여량은, 대상체의 체중을 기준으로 측정되는 경우, 약 0.01 내지 약 10 mg/kg, 예를 들면, 약 0.05 내지 약 10 mg/kg, 약 0.1 내지 약 10 mg/kg, 약 0.1 내지 약 5 mg/kg, 약 0.1 내지 약 3 mg/kg, 약 0.1 내지 약 2 mg/kg, 약 0.1 내지 약 1 mg/kg, 또는 약 0.5 내지 약 1 mg/kg 범위일 수 있다.

일부 실시양태에서, 세포독성 또는 세포증식억제 화학요법 약물의 투여량은, 대상체의 체중을 기준으로 측정되는 경우, 약 1 ㎍/kg 내지 약 10 mg/kg, 예를 들면, 약 1 ㎍/kg 내지 약 10 mg/kg, 약 2 ㎍/kg 내지 약 10 mg/kg, 약 2 ㎍/kg 내지 약 5 mg/kg, 약 2 ㎍/kg 내지 약 3 mg/kg, 약 2 ㎍/kg 내지 약 2 mg/kg, 약 2 ㎍/kg 내지 약 1 mg/kg, 약 2 내지 약 500 ㎍/kg, 약 2 내지 약 100 ㎍/kg, 약 2 내지 약 50 ㎍/kg, 또는 약 2 내지 약 10 ㎍/kg 범위일 수 있다.

일부 경우에, 세포독성 또는 세포증식억제 화학요법 약물은 약 0.1 내지 약 1000 mg/m², 예를 들면, 약 10 내지 약 600 mg/m² 범위의 투여량으로 투여될 수 있다. 하나의 실시양태에서, 세포독성 또는 세포증식억제 화학요법 약물은 저용량으로, 예를 들면, 약 500 mg/m² 미만, 약 400 mg/m² 미만, 또는 약 300 mg/m² 미만으로 투여된다.

하나의 실시양태에서, 각각의 투여에서 세포독성 또는 세포증식억제 화학요법 약물의 용량은 전통적인 투여 양생법에 따른 이의 최대 허용 용량의 약 0.25% 내지 약 75%이다. 예를 들면, 세포독성 또는 세포증식억제 화학요법 약물은 저투여량으로 투여되고, 투여당 용량은 최대 허용 용량의 약 1%, 약 5%, 약 10%, 약 15%, 약 20%, 약 25%, 약 30%, 약 35%, 약 40%, 약 45%, 약 50%, 약 55%, 약 60%, 약 65%, 약 70%, 또는 약 75%이다.

일부 실시양태에서, 본원에 기재된 약제학적 조성물의 종양내 투여는 동일한 조성물의 통상적인 IV 투여와 비교하여 더 적은 부작용 및/또는 면역 관련 부작용을 생성한다. 통상적인 IV 투여의 유해 부작용은 및 면역 관련 부작용은 위장, 호흡기, 신경, 내분비, 피부, 피로, 신장, 및 간 효과를 포함한다.

일부 실시양태에서, 본원에 기재된 약제학적 조성물(즉, 적어도 2종의 면역 관문 억제제 및 적어도 1종의 세포독성 또는 세포증식억제 화학요법 약물을 포함)의 투여는 세포독성 또는 세포증식억제 화학요법 약물 없이 적어도 2종의 면역 관문 억제제를 포함하는 동일한 약제학적 조성물의 투여와 비교하여 생체 내에서 더 적은 유해 부작용 및/또는 면역 관련 부작용을 생성한다.

일부 경우에, 종양 또는 암을 치료하는 방법은 종양 또는 암의 적어도 일부를 절제하는 단계를 포함하거나, 이로 본질적으로 구성되거나, 이로 구성된다.

적어도 2종의 관문 억제제 및 세포독성 또는 세포증식억제 화학요법 약물을 함유하는 약제학적 조성물과 절제 방법의 조합은 전신적이고 내구성이고 재생 가능한 암 면역력을 제공할 수 있다.

절제 기술, 예를 들면, 냉동요법 및 방사선 요법은, 단리에서 사용되는 경우, 조절 T 세포 억제, 이펙터 T 및 B 세포 활성화, 및 암 관련 항원 방출을 생성하고(문헌[Maia et al., "A comprehensive review of immunotherapies in prostate cancer."Crit Rev Oncol Hematol.113:292-303(2017)]을 참조하고, 이는 그 전문이 본원에 참조로서 포함됨), 세포독성 T 림프구 반응을 자극하는 보조 효과를 효과적으로 생성한다. 예를 들면, 냉동-해동으로 괴사된 세포는 이들이 공동 주사된 항원에 대한 T 세포 반응을 향상시키기 때문에, 생체 내 주사되는 경우, 면역자극 활성을 갖는다. 문헌[Shi et al., "Cell injury releases endogenous adjuvants that stimulate cytotoxic T cell responses."Proc Natl Acad Sci U S A.97(26):14590-14595(2000)]을 참조하고, 이는 그 전문이 본원에 참조로서 포함된다.

면역요법 및 절제 요법의 조합은 아마도 작용의 상이한 메커니즘의 이익을 이용함으로써 면역 반응을 향상시킬 수 있다. 3LL 뮤린 루이스 폐 암종 모델에서, 면역요법과 조합된 냉동요법은 강력한 종양 특이적 CTL 반응을 유발하고, Th1 반응을 증가시키고, 생존을 유의미하게 연장시키고, 전이의 발생을 유의미하게 감소시킬 수 있다. 문헌[Machlenkin et al., "Combined dendritic cell cryotherapy of tumor induces systemic antimetastatic immunity."Clin Cancer Res.11(13):4955-4961(2005)]을 참조하고, 이는 그 전문이 본원에 참조로서 포함된다.

유사한 치료는 1차 난백알부민 형질감염된 B16 흑색종으로부터 생존한 마우스를 부모 종양에 의한 재챌린지로부터 보호할 수 있다. CTLA-4 차단 또는 조절 T 세포 고갈과 조합된 냉동절제는 또한 마우스를 암 챌린지의 파생물로부터 보호할 수 있고, 암 특이적 T 세포 수의 생체 내 향상을 야기할 수 있다. 문헌[den Brok et al., "Synergy between in situ cryoablation and TLR9 stimulation results in a highly effective in vivo dendritic cell vaccine."Cancer Res.66(14):7285-7292(2006)]을 참조하고, 이는 그 전문이 본원에 참조로서 포함된다. 전립선암의 TRAMP C2 마우스 모델에서, 원발암의 냉동절제 및 CTLA-4 파괴는 먼 부위에서 챌린지에 의해 접종된 2차 암의 파생물을 방지할 수 있다. 문헌[Waitz et al., "Potent induction of tumor immunity by combining tumor cryoablation with anti-CTLA-4 therapy."Cancer Res. 72(2):430-439(2012)]을 참조하고, 이는 그 전문이 본원에 참조로서 포함된다. 2차 종양의 성장이 냉동절제 단독에 의해 영향을 받지 않는 것이 아닐 수 있음에도 불구하고, 조합 치료는 성장을 느리게 하거나 거부를 촉발시키는데 충분할 수 있다. 추가로, 2차 종양은 CD4+ T 세포 및 CD8+ T 세포에 의해 고도로 침투되고, 단일요법과 비교하여 종양내 T 이펙터 세포 대 CD4+FoxP3+ T 조절 세포의 비에서 유의미한 증가가 있다. 따라서, 냉동면역요법은 TRAMP C2-특이적 항원 SPAS-1에 특이적인 CD8+ T 세포의 종양내 축적 및 전신적 확장을 조절할 수 있다.

방사선 요법과 및 CTLA-4 차단의 조합은 또한 방사선장 외부의 전이를 억제할 수 있고 마우스의 생존을 연장시킬 수 있는 CD8+ T 세포 매개된 항종양 반응을 유도할 수 있고, 반응은 CTLA-4 차단 단독에 의해서는 관찰되지 않았다. 문헌[Demaria et al., "Immune-mediated inhibition of metastases after treatment with local radiation and CTLA-4 blockade in a mouse model of breast cancer."Clinical Cancer Research.11(2):728-734(2005)]을 참조하고, 이는 그 전문이 본원에 참조로서 포함된다.

방사선 요법 후, PD-1 차단 또는 CTLA-4 차단은 비중복적 메커니즘 또는 상승작용적 효과를 통해 추가의 이익을 얻을 수 있다. 문헌[Twyman-Saint Victor et al., "Radiation and dual checkpoint blockade activate non-redundant immune mechanisms in cancer."Nature.520(7547):373-377 (2015); Dovedi et al., "Acquired resistance to fractionated radiotherapy can be overcome by concurrent PD-L1 blockade."Cancer Res.74(19):5458-5468 (2014); Golden et al., "An abscopal response to radiation and ipilimumab in a patient with metastatic non-small cell lung cancer."Cancer Immunol Res.1(6):365-372 (2013)]을 참조하고, 이는 그 전문이 본원에 참조로서 포함된다.

본원에 기재된 절제 방법은 절제된 종양에 대한 면역학적 반응에 영향을 미치는 것으로 공지된 적어도 2개의 인자에 영향을 미친다. 하나는 단백질 구조 및 따라서 종양 단백질의 항원성에 대한 절제 과정의 효과이다. 제2 인자는 절제 양식에 관한 세포 사멸의 메커니즘이다.

특정한 조건하에 괴사(즉각적인 세포 사멸)는 세포막을 파열시키고, 세포막 단편 및 광범위한 세포내 함유물이 약화된 세포로부터 수지상 세포의 공동자극을 유발하는 세포외 미세화경으로 쏟아져나오게 하고, 이는 T 세포 증식 및 활성화를 야기한다. 대조적으로, 비가역적 손상의 또 다른 형태인 아폽토시스(프로그램화된 세포 사멸)는 시간이 지남에 따라, 일반적으로 수 일 내에 세포가 시들고 사멸한다. 아폽토시스는 세포를 온전한 채로 남기고, 세포 함유물을 국한시키고, 공동자극을 방지한다. 세포내 노출 및 공동자극의 이러한 부재는 T 세포 활성화 및 증식을 방지함으로써 면역학적 효과를 약화시킨다. 따라서, 괴사는 면역원성 자극을 최적화하는 반면, 아폽토시스는 일반적으로 면역 반응을 약간 이끌어내거나 이끌어내지 않는다.

절제는 외과적 적출과 달리 처리된 조직을 제거하지 않고, 대신에 변경된 세포 덩어리는 원위치에서 유지되고, 신체의 방어 및 치유 메커니즘에 의해 후속적으로 제거 또는 격리된다. 따라서, 수술적 제거에 비해, 절제의 고유한 측면 중 하나는 종양이 이를 제거하기 위한 신체의 방어 및 치유 메커니즘을 위하여 원위치에서 남아 있다는 것이다. 이는 죽은 종양을 인식하고 환자를 본질적으로 잠재적인 암 신생항원에 대하여(즉, 환자 자신의 암에 대하여) 본질적으로 자가면역화하는 신체의 면역 방어 메커니즘을 이용할 기회를 생성한다(문헌[Veenstra et al., "In situ immunization via non-surgical ablation to prevent local and distant tumor recurrence"Oncoimmunology 4(3): e989762(2015)]을 참조하고, 이는 그 전문이 본원에 참조로서 포함됨). 게다가, 면역계를 암 세포 항원에 대하여 자극함으로써, 본원에 개시된 방법은 (i) 원발성 종양을 치료하고; (ii) 암 세포 항원에 대한 면역 반응을 활성화시키고; (iii) 전이성 병변을 표적화하는 면역계를 유도할 수 있다.

절제 단계는, 예를 들면, 본원에 기재된 조성물의 투여 전에, 동시에, 및/또는 후에 수행될 수 있다.

절제 단계는 당해 분야에 공지된 다양한 절제 방법 또는 이의 조합을 사용하여 수행될 수 있다. 적합한 절제 방법은 한랭 절제, 예를 들면, 냉동절제; 열적 절제, 예를 들면, 고주파(RF) 절제, 마이크로파 절제, 레이저, 광, 또는 플라즈마 절제, 초음파 절제, 고강도 집속 초음파(HIFU) 절제, 또는 스팀 절제; 전기 절제, 예를 들면, 가역적 전기천공(RE), 비가역적 전기천공(IRE), 고주파 전기막 파괴(RF-EMB), RF-EMB형 절제, 초단 전기 펄스에 의한 절제; 광역학 요법을 사용하는 절제; 기계적 또는 물리적 절제, 예를 들면, 비열적 충격파를 사용하는 절제, 캐비테이션, 또는 세포 파괴를 생성하는 다른 기계적 물리적 수단; 화학적 절제, 예를 들면, 화학물질, 예를 들면, 알코올, 고장성 식염수, 아세트산 등이 주사에 의한 절제; 생물학에 의한 절제, 예를 들면, 암용해 바이러스에 의한 절제; 또는 이의 임의의 조합을 포함한다.

이러한 상이한 유형의 절제 방법은 세포 사멸의 단백질 구조 및 메커니즘에 대한 상이한 결과를 가질 수 있다. 예를 들면, 열 절제는 단백질의 변성으로 인하여 구조를 파괴하고, 이는 또한 조직의 기저 콜라겐 매트릭스를 파괴한다. 단백질 및 조직의 이러한 붕괴는 예상밖의 강력한 면역학적 반응을 만든다. 한랭 절제, 예를 들면, 냉동절제는 단백질을 변성시킬 수 있고, 단백질 및 조직 구조 둘 다를 붕괴시킬 수 있다. 비가역적 전기천공(IRE) 및 비열적 절제 양식, 예를 들면, RF-EMB는 구조를 보존하고, 따라서 췌장, 중심 간, 및 두경부와 같은 다른 영역에서 암을 치료하는데 사용될 수 있다. IRE는 전기장을 세포에 적용하여 세포막의 투과성을 증가시키는 기술이다. IRE의 고전압은 이웃 세포가 영향을 받지 않게 남겨두면서 표적 세포를 파괴한다. 고주파 전기막 파괴(RF-EMB)는 세포막의 전기적으로 완전한 파괴에 의해 괴사를 생성하는 또 다른 열적 양식이다(제WO 2015/085162호를 참조하고, 이는 그 전문이 본원에 참조로서 포함됨). 특정한 조건하에, RF-EMB는 또한 DNA 플라스미드를 전달하는데 사용될 수 있다. 가역적 전기천공(RE)은 또한 DNA 플라스미드를 전달하는데 사용될 수 있다. RE는 IRE와 유사하지만, 표적 세포에 적용된 전기가 표적 세포의 전기장 임계 미만이다. 따라서, 세포는 전기장이 제거되는 경우에 회복될 수 있고, 이들의 세포막은 재건될 수 있으며, 계속 세포로서 기능할 수 있다. RE는 가역적 원소가 살아있는 세포에 핵산의 진입(예를 들면, DNA 플라스미드)을 허용함에 따라 유전자 요법을 위한 도구로서 사용될 수 있다. 예시적인 절제 방법 및 이의 메커니즘의 간단한 설명은 표 1에 요약된다.

본원에 기재된 임의의 절제 방법은 단독으로 또는 하나 이상의 다른 절제 방법과 조합으로 사용될 수 있다. 2개 이상의 절제 방법은 순차적으로 또는 동시에 적용될 수 있다. 일부 경우에, 절제 방법의 조합은 조직에 대한 상승작용적 효과를 가질 수 있다. 조합의 비제한적인 목록은, 예를 들면, 열 절제 및 RF-EMB, 냉동절제 및 RF-EMB, IRE 및 RF-EMB, RE 및 RF-EMB, IRE 및 냉동절제, 열 절제 및 냉동절제, 열 절제 및 IRE, RE 및 IRE, 열 절제와 RE, 및 이들 중 2개 이상의 방법이 사용되는 임의의 조합을 포함한다.

일부 경우에, 본원에 기재된 방법은 RF-EMB 및 냉동절제 기술의 조합을 사용하여 RF-EMB 유형 병변을 생성한다. 이러한 절제 방법의 조합은 조직에 대한 상승작용적 효과를 생성할 수 있다. 상승작용적 효과는 다른 수단보다 에너지 유입이 더 적게 필요한 RF-EMB 유형 병변의 생성일 수 있다. 예를 들면, 간 조직에서, 결과는 하기를 포함한다: 무균성 비염증성 응고 괴사에 인접한 영역에서, 모세담관의 확장을 포함하는 간 구조물의 변경 뿐만 아니라 미토콘드리아 크리스타의 만곡 및 소포체의 공포화를 포함하는 세포질 기관의 고유한 확산성 변경이 존재한다.

당해 분야의 숙련가는 본원에 기재된 투여 방법은 암의 개별적인 양상, 예를 들면, 종양의 크기, 종양의 위치, 대상체 등에 따라 개조될 수 있다는 것을 인식할 것이다. 당해 분야의 숙련가는 각각의 다양한 절제 방법의 변수는 공지되어 있고 당해 분야에 기재되어 있다는 것을 인식할 것이다(예를 들면, 문헌[Percutaneous Prostate Cryoablation(Edited by Onik, Rubinsky, Watson, and Ablin. Quality Medical Publishing, St Louis, MO, 1995)]을 포함하고, 이는 그 전문이 본원에 참조로서 포함됨).

절제 파라미터의 가변성 및 다양성의 예로서, 냉동절제의 과정은 절제의 결과, 예를 들면, 병변의 크기, 주변 조직에 대한 손상, 및 병변에 대한 면역 반응에 영향을 미치는 조절 가능한 변수, 예를 들면, 냉동-해동 주기의 수, 냉동 속도, 주기의 해동 부분을 포함한다. 유사하게, RF-EMB의 과정은 조절 가능한 변수, 예를 들면, 전기장의 강도, 주파수, 극성, 형태 지속기간, 수 및 간격 등을 포함하고, 이는 절제의 결과에 유사하게 영향을 미칠 수 있다. 전기 펄스에 대한 종양 세포의 근접성은 임의의 특정한 세포에 대한 RF-EMB의 강도 및 결과를 결정할 것이다. 예를 들면, 전기장 강도가 투여(예를 들면, 프로브) 지점으로부터 감소함에 따라, 투여 지점에서 가장 먼 세포는 더 낮은 강도의 전기장으로 처리되고, 마찬가지로 절제되기 보다는 가역적으로 전기천공될 수 있다.

일부 경우에, 종양의 제1 부분 또는 전부는 제1 절제 방법을 사용하여 절제되고, 종양의 제2 부분 또는 전부는 제2 절제 방법을 사용하여 절제된다. 제1 및 제2 절제 방법은 동일하거나 상이할 수 있다. 종양 또는 암의 제1 및 제2 부분은 종양 또는 암의 동일하거나 상이한 부분일 수 있다. 일부 경우에, 절제는 조성물의 투여 전에 수행된다. 일부 경우에, 절제는 조성물의 투여와 동시에 수행되거나, 조성물의 투여 후에 수행된다. 일부 경우에, 절제는 조성물의 투여와 동시에 및 후에 수행된다.

일부 실시양태에서, 종양 또는 암의 적어도 일부의 절제는 RF-EMB 및 냉동절제 둘 다를 사용하여 수행된다.

일부 경우에, 절제 단계는 적어도 부분적으로 냉동절제를 사용하여 수행된다. 상기 논의된 바와 같이, 냉동절제는 냉기를 사용하여 조직을 파괴하고 탈수 및 얼음 형성에 의해 괴사를 생성하는 과정이다. 냉동절제 기술은 전형적으로 중공 니들(냉동프로브)을 조직 내로 삽입한 다음, 한제를 냉동프로브의 팁에 공급하는 것을 포함한다. 냉동절제는 하나 이상의 냉동프로브를 사용하여 수행될 수 있다. 냉동절제는 또한 본원에 기재된 임의의 다목적 프로브를 사용하여 수행될 수 있다.

조직 온도는 완전한 응고 괴사와 상관관계가 있는 온도로 감소한다. 일반 냉동절제 기술은 고압(예를 들면, 약 80 psi) 액체 질소 시스템 또는 고압(예를 들면, 3000-4500 psi) 아르곤 기체 시스템의 사용을 포함한다. 일반적으로, 조직의 냉동은 후속적으로 이의 해동(일반적으로 헬륨 기체 또는 저항 가열을 사용)이 뒤따르고, 이는 세포막의 붕괴를 야기하고, 세포 파괴를 유도한다. 세포 파괴는 냉동-해동 주기의 반복을 기반으로 추가로 가속화된다. 일부 경우에, 냉동절제 단계는 적어도 1개의 냉동-해동 주기를 포함하거나, 이로 본질적으로 구성되거나, 이로 구성될 수 있다. 예를 들면, 냉동절제는 1 내지 4개의 냉동-해동 주기를 포함할 수 있다. 냉동-해동 주기의 냉동 부분은, 예를 들면, 적어도 또는 약 30초 길이일 수 있다. 냉동-해동 주기의 냉동 부분은 약 30초 내지 약 15분, 약 30초 내지 약 12분, 약 30초 내지 약 10분, 또는 0 초 내지 약 5분 범위일 수 있다. 해동 시간은 적어도 또는 약 30초 길이일 수 있다. 예를 들면, 해동 시간은 약 30초 내지 약 15분, 약 30초 내지 약 12분, 약 30초 내지 약 10분, 또는 30초 내지 약 5분의 범위일 수 있다. 일부 실시양태에서, 전체 냉동절제 단계는 30분 이하, 25분 이하, 20분 이하, 15분 이하, 10분 이하, 또는 5분 이하 동안 지속된다.

상기 논의된 바와 같이, 본원에 제공된 치료 방법의 하나의 이익은 최소 침습 절제에 의한 면역 자극 괴사의 유도이다. 일부 실시양태에서, 최소 침습 절제는 단일 프로브(예를 들면, 저온수술 니들 프로브)의 삽입에 의해 수행되고; 절제 치료 단계는 원하는 온도 및 효과를 달성할 때까지 5분 이하 동안 지속된다.

본원에 제공된 치료 방법의 또 다른 이익은 절제의 크기를 제한함으로써 인접한 구조를 보호하는 것이다. 바람직하게는, 절제의 크기는 1 cm³ 이하의 직경이고, 이로써 약 10⁸개의 암 세포를 파괴한다(문헌[Del Monte, "Does the cell number 10(9) still really fit one gram of tumor tissue?"Cell Cycle 8:505-6(2009)]을 참조하고, 이는 그 전문이 본원에 참조로서 포함됨). 세포 손상의 원주 1 mm-너비의 테두리는 죽은 암 세포의 중심 코어를 주변의 온전한 영향을 받지 않은 세포로부터 분리할 수 있다. 치료된 암의 가장자리에서 혈관 및 림프 채널과 같은 인접한 구조의 보호는 면역 세포의 유입 및 배출을 촉진할 수 있다. 일부 실시양태에서, 최소 침습 절제는 2 mm 이하, 예를 들면, 1.5 mm 이하, 또는 1 mm 이하의 직경을 갖는 단일 프로브(예를 들면, 저온수술 니들 프로브)의 삽입에 의해 수행된다.

냉동-해동 주기의 냉동 부분은, 예를 들면, 약 -30℃ 내지 약 -196℃, 예를 들면, 약 -30 내지 약 -80℃, 약 -35 내지 약 -45℃, 약 -35 내지 약 -40℃, 약 -40 내지 약 -50℃, 약 -40 내지 약 -45℃, 또는 약 -40℃의 온도에서 수행될 수 있다.

상기 논의된 바와 같이, 본원에 제공된 치료 방법의 하나의 이익은 최소 열적 절제를 사용함으로써 암 신생항원을 보존하는 것이다. 암 신생항원은 세포막의 내부 및 외부 표면 상에 존재하는 고유한 외래 단백질이다. 이러한 신생항원은 면역결정인자이고, 항원 특이적 T 세포에 의해 초기 암 인식 및 파괴를 위한 면역요법 치료에서 중요할 수 있다. 문헌[Desrichard et al., "Cancer neoantigens and applications for immunotherapy"Clin. Cancer Res.]을 참조하고, 이는 그 전문이 본원에 참조로서 포함된다. 신생항원의 보존은 면역 활성화에 필요하다. 면역계는 암-신생항원-특이적 수지상 세포 및 세포독성 D8+ T세포의 생성 및 활성화에 의해 암 발달을 제어하고 퇴행을 매개할 수 있다. 이는 면역 세포가 림프절 및 뼈와 같은 전이 부위에서 암 세포 상의 신생항원을 인식하고 표적화하는 것을 가능하게 한다.

대부분의 암 절제 방법은 괴사를 유도하지만, 대부분 암 신생항원의 3차원 단백질 구조를 보존하지 못한다(문헌[Onik et al., "Electrical membrane breakdown(EMB): Preliminary findings of a new method of non-thermal tissue ablation"J. Clin. Exp. Pathol.7:5-11(2017)]을 참조하고, 이는 그 전문이 본원에 참조로서 포함됨). 이는 면역 세포에 의해 신생항원 동정을 보존하기 때문에 바람직하지 않을 수 있다.

따라서, 일부 실시양태에서, 저온수술은 신생항원의 3차원 구조를 보존하기 위하여 일반적인 -80℃가 아닌 약 -40℃의 상대적 저온에서 사용된다. 약 -40℃에서 냉동절제는 단백질 신생항원 파괴의 열적 파괴를 피하거나 최소화하면서 세포 사멸의 임계를 초과함으로써 면역 자극 괴사를 생성한다. 문헌[Larson et al., "In vivo interstital temperature mapping of the human prostate during cryosurgery with correlation to histopathologic outcomes"Urology 55:547-52(2000)]을 참조하고, 이는 그 전문이 본원에 참조로서 포함된다.

냉동-해동 주기의 해동 부분은 능동적 해동 과정, 즉, 열의 추가가 있고/거나 수동적 해동 과정, 즉, 열의 추가가 없을 수 있다.

일부 경우에, 방법은 일련의 전기 펄스를 투여하고, 이로써 절제 부위에 인접한 세포를 가역적으로 전기천공하는 단계를 추가로 포함하거나, 이로 본질적으로 구성되거나, 이로 구성된다. 일부 경우에, 전기 펄스의 투여는 절제와 동시에 수행된다. 일부 경우에, 전기 펄스의 투여는 절제 전에 수행된다. 일부 경우에, 전기 펄스의 투여는 절제 후에 수행된다. 전기 펄스는 냉동프로브를 통해 투여될 수 있다. 일부 경우에, 일련의 전기 펄스는 약 1 내지 1000 펄스를 포함하고/거나 100 내지 500 kHz의 주파수를 포함한다. 일부 경우에, 일련의 전기 펄스는 1 내지 4000 펄스를 포함하고/거나 100 내지 500 kHz의 주파수를 포함한다. 일부 경우에, 일련의 전기 펄스는 약 1 내지 4000 펄스를 포함한다. 일부 경우, 일련의 전기 펄스는 100 내지 500 kHz의 주파수를 포함한다. 전기 펄스는, 예를 들면, 양극성 및/또는 순간 전하 역전일 수 있다.

일부 경우에, 방법은 핵산 약물의 치료적 유효량을 종양 또는 암에 투여하는 단계를 추가로 포함하거나, 이로 본질적으로 구성되거나, 이로 구성된다. 일부 경우에, 방법은 핵산 약물의 치료적 유효량을 절제 부위에 투여하는 단계를 추가로 포함하거나, 이로 본질적으로 구성되거나, 이로 구성된다. 핵산 약물은 본원에 기재된 임의의 치료적 핵산일 수 있다. 핵산은 본원에 기재된 약제학적 조성물을 투여하는 임의의 방법을 통해 투여될 수 있다. 예를 들면, 핵산은 가역적 전기천공(RE)을 사용하여 전달될 수 있고, 이는 절제 부위 주변의 전기천공의 범위, 가역성 및 전달을 결정하기 위하여 변형될 수 있다. 전기천공의 변수는 당해 분야에 공지되어 있다(문헌[Kee et al., Clinical aspects of electroporation(Springer, New York, 2011)]을 참조하고, 이는 그 전문이 본원에 참조로서 포함된다). 핵산 약물은 전기천공의 과정 전에 또는 동안 투여될 수 있다.

핵산 약물의 투여는 본원에 기재된 바와 같은 면역 관문 억제제 및 세포독성 또는 세포증식억제 화학요법 약물을 함유하는 조성물의 투여 전에, 동시에, 및/또는 후에 수행될 수 있다. 핵산 약물의 투여는 절제 단계 전에, 동시에, 및/또는 후에 수행될 수 있다. 전기 펄스가 적용되는 경우, 핵산 약물의 투여는 전기 펄스의 투여 전에, 동시에, 및/또는 후에 수행될 수 있다.

일부 경우에, 핵산 약물은 DNA 플라스미드이다. 예를 들면, DNA 플라스미드는 GM-CSF, IL-12, IL-6, IL-4, IL-12, TNF, IFNy, IFNa, 및/또는 이의 조합으로 이루어진 군으로부터 선택된 유전자를 인코딩하는 뉴클레오타이드 서열을 포함할 수 있다.

적어도 일부의 절제는 RF-EMB를 사용하여, 예를 들면, 프로브를 사용하여 수행될 수 있다. 프로브는 본원에 개시된 임의의 프로브일 수 있다. 일부 경우에, 프로브는 일련의 전기 펄스를 투여하고, 이로써 프로브에 바로 인접하고 관련된 절제 부위를 생성하고, 절제 부위에 인접하거나 관련된 세포를 가역적으로 전기천공한다.

일부 경우에, 일련의 전기 펄스는 약 1 내지 1000 펄스를 포함한다. 일부 경우에, 일련의 전기 펄스는 약 1 내지 4000 펄스를 포함한다. 일부 경우에, 전기 펄스 100 내지 500 kHz의 주파수를 포함한다. 전기 펄스는 양극성일 수 있다. 전기 펄스는 또한 순간 전하 역전을 가질 수 있다.

일부 경우에, 특정한 절제 방법은 다수의 열적 절제(예를 들면, 냉동절제) 및 FR-EMB를 포함하는 세포막의 파괴를 특징으로 하는 고유한 조직 괴사를 생성할 수 있다. 세포막의 파괴하에, 세포내 성분 및 세포막의 구성원 부분은 세포외 공간으로 분산되고, 이로써 면역학적 동정 및 반응은 향상된다. 예를 들면, 간 조직에 대한 RF-EMB 절제에 의해 생성된 병변의 이미지화는 세포막 파괴 및 미토콘드리아와 같은 내부 기관의 손실과 함께 세포 손상의 고유한 형태를 보여준다. 이는 조직 아폽토시스를 생성하는 다른 유형의 절제 방법(예를 들면, IRE)과 상이하고, 여기서 세포막은 온전한 채로 남아있고 세포는 아폽토시스 사멸로 사멸하고 세포는 세포성 항원을 노출하지 않는다. 일부 경우에, 세포막 파괴의 정도는 절제 지점으로부터의 거리가 증가함에 따라 감소한다.

본원에서 사용되는 바와 같이, 용어 "RF-EMB형 절제"는 수행하는 경우, RF-EMB 절제와 본질적으로 동일한 결과를 수득하는 임의의 절제 기술 또는 기술의 조합을 지칭한다. 본원에 기재된 바와 같이, RF-EMB 절제 및 RF-EMB형 절제는 하기 특징 중 임의의 하나 이상을 갖는 병변을 형성한다: 파괴된 세포막, 변성되지 않은 세포성 단백질, 변성되지 않은 막 항원, 향상된 항원 제시, 면역계를 공동자극할 수 있는 것, 및 면역학적으로 가능한 세포 및 신호전달 분자를 수행할 수 있는 병변의 바로 주변.

일부 경우에, 절제되는 종양의 부분은 암 세포를 포함하고, 절제는 세포의 세포막을 파괴하고, 세포의 세포내 성분 및 막 항원을, 예를 들면, 신체의 면역계에 노출하는 조건하에 수행된다.

절제 단계는 냉동절제에 의해 최소 침습 방식으로 수행될 수 있다. 예를 들면, 냉동절제는, 예를 들면, 단일 프로브를 사용하여, 5분 이하의 총 절제 시간으로, 1 mm 이하의 직경을 갖는 단일 프로브를 사용하여, 및/또는 약 -35 내지 약 -45℃의 온도에서 수행될 수 있다.

이러한 최소 침습 절제는 하기 이익 중 적어도 하나를 야기한다: 세포의 세포내 성분 및 막 항원은 절제에 의해 변성되지 않거나 최소한으로 변성되고/거나; 종양의 절제된 부분의 바로 주변은 절제된 조직의 내외로 면역학적으로 가능한 세포 및 신호전달 분자를 수행할 수 있고/거나; 세포의 노출된 세포내 성분 및 막 항원의 양은 면역계를 자극하는데 충분하고/거나; 세포의 노출된 세포내 성분 및 막 항원의 양은 면역 내성을 생성하지 않거나 최소한으로 생성한다. 하나의 실시양태에서, 최소 침습 절제는 항원이 면역계를 자극하도록 암 신생항원의 구조를 보존한다.

일부 경우에, 조성물의 투여 단계 및 절제 단계는 절제 모듈 및 주사 모듈을 포함하는 동일한 장치(예를 들면, 주사 장치를 포함하는 절제 프로브)를 사용하여 수행된다. 일부 예에서, 절제 프로브는 조성물이 투여되는 속도를 조절하기 위한 펌프를 추가로 포함할 수 있다.

일부 실시양태에서, 조성물은 절제 단계에 사용되는 장치와 상이한 장치를 사용하여 투여된다.

일부 경우에, 방법은 조성물의 투여 전에 종양내 투여를 위하여 프로브의 위치를 시험하는 단계를 추가로 포함한다. 프로브의 위치의 시험은 프로브를 통해 시험 주사를 종양내로 투여하고, 시험 주사의 투여 동안 종양내 압력을 측정하는 단게를 포함할 수 있다. 일부 경우에, 방법은 주변 종양 조직의 압력과 비교하여 시험 주사 동안 증가되거나 감소된 종양내 압력이 검출되는 경우, 프로브를 재위치시키는 단계를 포함한다. 예를 들면, 증가된 압력은 프로브가 반흔 조직 내에 있다는 것을 나타낼 수 있고, 감소된 압력은 프로브가 혈관 내에 있다는 것을 나타낼 수 있다.

치료 동안, 숙련된 의사는 치료 프로토콜을 계획, 표적화, 위치, 전달, 모니터링, 조절, 이미지화, 및/또는 시험하기 위하여 시스템, 예를 들면, 컴퓨터 시스템, 컴퓨터 유닛, 소프트웨어 및/또는 알고리즘을 사용할 수 있다. 숙련된 의사는 각각의 절제 방법이 조절될 수 있는 다수의 파라미터 및 변수를 포함한다는 것을 이해할 것이고, 절제를 제어하고 설계하기 위하여 알고리즘을 사용할 수 있다. 당해 분야에 공지된 임의의 알고리즘은 본원에 기재된 방법에서 사용될 수 있다. 절제 기술에서 사용하기 위한 컴퓨터 시스템, 컴퓨터 유닛, 소프트웨어 및/또는 알고리즘의 예는 당해 분야에 공지되어 있다.

사용되는 절제 방법에 따라, 절제 단계는 당해 분야에 공지된 절제 기술 및 시스템에 의해 수행될 수 있다. 하기 논의는 다양한 절제 방법 및 장치의 비제한적인 예를 제공한다.

예를 들면, 냉동절제는 PCT 출원 공개 제WO 2004/086936호 및 제WO 2008/142686호; 미국 특허 제6,074,412호; 제6,579,287호; 제6,648,880호; 제6,875,209호; 제7,220,257호; 및 제7,001,378호에 기재된 방법 및 장치에 의해 수행될 수 있고, 이들은 모두 그 전문이 본원에 참조로서 포함된다. 장치의 예는 엔도케어(Endocare)™ 크라이오케어(CryoCare)^® 시리즈, 예를 들면, 크라이오케어™ 및 크라이오케어 CN2(HealthTronics, Inc., 미국 텍사스주 오스틴 소재); 크리오코르(CryoCor)™ 심장 냉동절제 시스템(CryoCor Inc., 미국 매사추세츠주 내틱 소재); 아틱 프론트(Arctic Front)® 심장 냉동절제 카테터 시스템(Medtronic, 미국 미네소타주 미니애폴리스 소재)을 포함한다.

고주파(RF) 절제는 미국 특허 제5,246,438호; 제5,540,681호; 제5,573,533호; 제5,693,078호; 제6,932,814호; 및 제8,152,801호에 기재된 방법 및 장치에 의해 수행될 수 있고, 이들은 모두 그 전문이 본원에 참조로서 포함된다.

마이크로파 절제는 미국 특허 제6,325,796호; 제6,471,696호; 제7,160,292호; 제7,226,446호; 및 제7,301,131호; 및 미국 출원 공개 제US 2003/0065317호에 기재된 방법 및 장치에 의해 수행될 수 있고, 이들은 모두 그 전문이 본원에 참조로서 포함된다.

레이저, 광, 또는 플라즈마 절제는 미국 특허 제4,785,806호; 제5,231,047호; 제5,487,740호; 제6,132,424호; 제8,088,126호; 제9,204,918호; 및 제10,023,858호; 및 미국 출원 공개 제US 2007/0129712호에 기재된 방법 및 장치에 의해 수행될 수 있고, 이들은 모두 그 전문이 본원에 참조로서 포함된다.

초음파 절제는 미국 특허 제5,342,292호; 제6,821,274호; 제7,670,335호; 및 제8,974,446호; 및 미국 출원 공개 제US 2006/0052706호 및 제US 2009/00184호에 기재된 방법 및 장치에 의해 수행될 수 있고, 이들은 모두 그 전문이 본원에 참조로서 포함된다.

고강도 집속 초음파(HIFU) 절제는 미국 특허 제6,488,639호; 제6,936,046호; 제7,311,701호; 및 제7,706,882호; 및 미국 출원 공개 제US 2008/0039746호에 기재된 방법 및 장치에 의해 수행될 수 있고, 이들은 모두 그 전문이 본원에 참조로서 포함된다.

스팀 절제는 미국 특허 제6,813,520호 및 제9,345,532호; 및 미국 출원 공개 제US 2013/0178910호에 기재된 방법 및 장치에 의해 수행될 수 있고, 이들은 모두 그 전문이 본원에 참조로서 포함된다.

가역적 전기천공(RE) 절제는 미국 출원 공개 제US 2010/0023004호 및 제US 2012/0109122호에 기재된 방법 및 장치에 의해 수행될 수 있고, 이는 그 전문이 본원에 참조로서 포함된다.

비가역적 전기천공(IRE) 절제는 미국 특허 제7,655,004호 및 제8,048,067호; PCT 국제 공개 제WO2012071526호; 및 미국 출원 공개 제US 2012/0109122호 및 제US 2013/0253415호에 기재된 방법 및 장치에 의해 수행될 수 있고, 이들은 모두 그 전문이 본원에 참조로서 포함된다.

고주파 전기막 파괴 절제는 미국 특허 출원 제US 2015/0150618호, PCT 출원 공개 제WO 2015/085162호, 제WO 2016/123608호, 제WO 2016/127162호, 제WO 2016/126905호, 제WO 2016/126778호, 및 제WO 2016/126811호에 기재된 방법 및 장치에 의해 수행될 수 있고, 이는 그 전문이 본원에 참조로서 포함된다.

초단 전기 펄스에 의한 절제 방법은 미국 특허 제8,926,606호; 및 미국 출원 공개 제US 2006/0056480호, 제US 2010/0261994호, 및 제US 2018/015414호에 기재된 방법 및 장치에 의해 수행될 수 있고, 이들은 모두 그 전문이 본원에 참조로서 포함된다. 예시적인 장치는 나노펄스 스티뮬레이션(Nano-Pulse Stimulation)™ 장치(Pulse Biosciences, Inc., 미국 캘리포니아주 헤이워드 소재)를 포함한다.

광역학 요법을 사용하는 절제 방법은 미국 특허 제6,811,562호; 제7,996,078호; 및 제8,057,418호에 기재된 방법 및 장치에 의해 수행될 수 있고, 이들은 모두 그 전문이 본원에 참조로서 포함된다.

비열적 충격파를 사용하는 절제 방법은 미국 특허 제5,524,620호 및 제8,556,813호; 미국 출원 공개 제US 2016/0008016호; 및 일본 출원 제JP2009061083호에 기재된 방법 및 장치에 의해 수행될 수 있고, 이들은 모두 그 전문이 본원에 참조로서 포함된다.

화학적 및/또는 생물학적 절제는 미국 특허 제6,428,968호; PCT 출원 공개 제WO 2004/035110호; 제WO 2006/095330호, 제WO 2007/093036호, 및 제WO 2014/070820호; 및 미국 출원 공개 제US 2004/0002647호, 제US 2005/0255039호, 제US 2009/0192505호, 제US 2010/0178684호, 제US 2010/0145304호, 제US 2012/0253192호; 제US 2012/0046656호, 제US 2016/0310200호, 및 제US 2016/0074626호에 기재된 방법 및 장치에 의해 수행될 수 있고, 이들은 모두 그 전문이 본원에 참조로서 포함된다.

임의의 상기 절제 기술 및 장치는 원하는 절제를 달성하기 위하여 조합될 수 있다. 예를 들면, 냉동절제와 RF-EMB 절제를 조합하는 것이 바람직한 경우, 방법 및 장치는 변형되거나 조합될 수 있다.

추가로, 약제학적 조성물의 투여는 또한 절제 장치에 의해 달성될 수 있다. 예를 들면, 약제학적 조성물이 대상체에게 주사되는 경우, 주사 장치는 냉동프로브일 수 있다. 일부 경우에, 냉동프로브는 전기 펄스를 방출할 수 있고, 또한 플라스미드를 전달할 수 있다.

냉동절제, 전기천공, 및/또는 RF-EMB를 조합할 수 있는 다양한 장치에 관한 추가적인 설명은 PCT 국제 공개 제WO 2017/123981호에 상세하게 기재되어 있고, 이는 그 전문이 본원에 참조로서 포함된다. 냉동프로브로서 다목적 프로브 및/또는 전극을 사용하는 것에 관한 더 상세한 설명은 또한 제WO 2017/123981호에 기재되어 있다.

본원에서 사용되는 바와 같이, 용어 "핵산 약물" 또는 "치료적 핵산"은 원하는 치료적 효과를 달성하는데 사용되는 뉴클레오타이드, 뉴클레오사이드, 올리고뉴클레오타이드 또는 폴리뉴클레오타이드를 지칭한다. 예시적인 핵산 약물은, 예를 들면, DNA, nDNA, mtDNA, gDNA, RNA, siRNA, miRNA, mRNA, piRNA, 안티센스 RNA, snRNA, snoRNA, vRNA 등을 포함한다. 예를 들면, 핵산 약물은 DNA 플라스미드일 수 있다.

용어 "대상체"는 명세서 전체에서 본 발명의 방법에 따른 치료를 제공받는 동물, 인간 또는 비인간을 기재하는데 사용된다. 수의학적 적용은 본 발명에 의해 명확하게 예상된다. 용어는 조류, 파충류, 양서류, 및 포유동물, 예를 들면, 인간, 다른 영장류, 돼지, 설치류, 예를 들면, 마우스 및 래트, 토끼, 기니아 피그, 햄스터, 소, 말, 고양이, 개, 양 및 염소를 포함하지만 이에 한정되지 않는다. 바람직한 대상체는 인간, 가축, 및 애완동물, 예를 들면, 고양이 및 개이다. 용어 "치료하다(치료)"는 본원에서 병태, 예를 들면, 암의 개시를 지연시키거나, 억제하거나, 이의 효과를 완화시키거나, 이를 겪고 있는 환자의 생명을 연장시키는 것을 나타는데 사용된다.

"유효량"은 유리하거나 바람직한 결과를 야기하는데 충분한 양이다. 예를 들면, 치료적 유효량은 원하는 치료적 효과를 달성하거나 원하는 생리학적 반응을 촉진하는 것이다. 본 발명에서 사용하기 위하여 본원에 기재된 조성물의 유효량은, 예를 들면, 종양 및/또는 종양 세포에 대항하는 면역 반응을 향상시키고, 암을 겪고 있거나 암에 대한 위험성이 있는 환자에 대한 결과를 개선시키고, 다른 암 치료의 결과를 개선시키는 양을 포함한다. 유효량은 하나 이상의 투여, 적용 또는 투여량으로 투여될 수 있다. 약제학적 조성물의 치료적 유효량(즉, 유효 투여량)은 선택된 약제학적 조성물에 따라 좌우된다. 약제학적 조성물의 치료적 유효량은 선택된 투여 방법에 따라 좌우된다. 일부 경우에, 조성물의 종양내 투여는 정맥내 투여(예를 들면, 통상적인 IV 투여)와 비교하여 조성물의 치료적 유효량을 감소시킨다. 숙련가는 질환 또는 질병의 중증도, 이전 치료, 대상체의 일반적인 건강 및/또는 연령, 존재하는 다른 질환을 포함하지만 이에 한정되지 않는 특정한 인자가 대상체를 효과적으로 치료하는데 필요한 투여량 및 시기에 영향을 미칠 수 있다는 것을 인식할 것이다. 게다가, 본원에 기재된 약제학적 조성물의 치료적 유효량에 의한 대상체의 치료는 단일 치료 또는 일련의 치료를 포함할 수 있다.

절제 방법은 단독으로 또는 환자에서 암을 치료하는 다른 방법과 조합으로 사용될 수 있다. 따라서, 일부 경우에, 본원에 기재된 방법은 수술(예를 들면, 종양의 부분을 제거함), 화학요법, 면역요법, 유전자 요법, 및/또는 방사선 요법을 사용하여 환자를 치료하는 단계를 추가로 포함할 수 있다. 본원에 기재된 조성물 및 방법은 임의의 시점에서, 예를 들면, 수술, 화학요법, 면역요법, 유전자 요법, 및/또는 방사선 요법의 전에, 동안 및/또는 후에 환자에게 투여될 수 있다.

본원에 기재된 약제학적 조성물 및 치료 방법은 대상체에서 암을 치료하는데 특히 유용하다. 용어 "암"은 자율적 성장 능력을 가진 세포를 지칭한다. 이러한 세포의 예는 세포 성장을 빠르게 증식시키는 것을 특징으로 하는 이상 상태 또는 조건을 가진 세포를 포함한다. 용어는 조직병리학적 유형 또는 침습의 단계와 관계없이, 암성 성장, 예를 들면, 종양; 전이성 조직, 및 악성으로 형질전환된 세포, 조직, 또는 기관을 포함하는 것을 의미한다. 또한 호흡기계, 심혈관계, 신장계, 생식계, 혈액계, 신경계, 간계, 위장계, 및 내분비계와 같은 다양한 기관계의 악성종양; 뿐만 아니라 악성종양을 포함하는 선암, 예를 들면, 대부분의 결장암, 신세포 암종, 전립선암 및/또는 고환 종양, 폐의 비소세포 암종, 소장암, 및 식도암이 포함된다.

본원에 기재된 약제학적 조성물 및 치료 방법은 대상체에서 자연적으로 발생하는 암을 치료하는데 사용될 수 있다. "자연적으로 발생하는" 암은 대상체에 암 세포를 이식함으로써 실험적으로 유도되는 암이 아닌 임의의 암을 포함하고, 예를 들면, 자연 발생 암, 환자가 발암물질(들)에 노출됨으로써 유발된 암, 유전자이식 종양 유전자의 삽입 또는 종양 억제제 유전자의 녹아웃으로부터 야기된 암, 및 감염, 예를 들면, 바이러스 감염에 의해 유발된 암을 포함한다.

본원에 기재된 약제학적 조성물 및 치료 방법에 의해 치료되는 암은 또한 암종, 선암, 및 육종을 포함한다. 용어 "암종"은 당해 분야에 인식되어 있고, 상피 또는 내분비 조직의 악성종양을 지칭한다. 용어는 또한 암종 또는 육종 조직으로 구성된 악성 종양을 포함하는 암육종을 포함한다. "선암"은 선 조직으로부터 유래된 암종 또는 종양 세포가 인식 가능한 선 구조를 형성하는 암종을 지칭한다. 용어 "육종"은 당해 분야에 인식되어 있고, 중간엽 유래의 악성 종양을 지칭한다.

본원에 기재된 치료 방법 및 약제학적 조성물을 사용하여 치료될 수 있는 암 또는 종양은, 예를 들면, 그 중에서도 위, 결장, 직장, 입/인두, 식도, 후두, 간, 췌장, 폐, 유방, 자궁경부, 자궁체, 난소, 전립선, 고환, 방광, 피부, 뼈, 신장, 뇌/중추신경계, 두부, 경부, 갑상선, 및 인후의 암 또는 종양; 육종, 융모막암종, 및 림프종을 포함한다. 치료되는 예시적인 종양 또는 암은 전립선, 췌장, 결장, 폐, 및 방광의 암 또는 종양이다.

전이성 종양 또는 암(IV기)은 본원에 기재된 치료 방법 및 약제학적 조성물을 사용하여 치료될 수 있다. 예를 들면, 본원에 기재된 치료 방법을 대상체의 신체에서 한 부위에 위치한 종양 또는 암(예를 들면, 원발성 종양)에 수행하는 것은 종양 또는 암에 대한 대상체의 면역 방어를 자극할 수 있고, 대상체의 신체에서 또 다른 부위(들)의 동일하거나 상이한 유형의 종양 또는 암(예를 들면, 전이성 종양)에 대한 면역 공격을 유발할 수 있다. 전이성 종양 또는 암은 뇌, 전립선, 결장, 폐, 유방, 뼈, 복막, 부신, 근육, 및 간 기원의 것들을 포함하지만 이에 한정되지 않는 다수의 원발성 종양 또는 암 유형으로부터 발생할 수 있다. 전이는, 예를 들면, 종양 세포가 혈관 내피에 부착된 원발성 종양으로부터 떨어져나오고, 주변 조직으로 침투하고, 성장하여 원발성 종양과 분리된 부위에 독립적인 종양을 형성하는 경우에 발달한다.

숙련된 의사는 본원에 기재된 치료 방법 및 약제학적 조성물이 또한 암 또는 종양의 다른 단계, 예를 들면, 원위치 암종(0기), 국한된 초기 암(I기), 및 더 큰 종양 또는 암(II기 및 III기)를 치료하는데 사용될 수 있다는 것을 인식할 것이다.

숙련된 의사는 본원에 기재된 치료 방법 및 약제학적 조성물이 또한 비암성 성장, 예를 들면, 비암성 종양을 치료하는데 사용될 수 있다는 것을 인식할 것이다. 비암성 성장의 예는, 예를 들면, 양성 종양, 선종, 샘근상피종, 관 또는 소엽 과형성, 섬유선종, 섬유종, 섬유증 및 단순 낭종, 선증 종양, 혈종, 과오종, 관내 유두종, 유두종, 과립 세포 종양, 혈관종, 지방종, 수막종, 근종, 모반, 골연골종, 엽상 종양, 신경종(예를 들면, 청신경종, 신경섬유종, 및 화농육아종), 또는 사마귀(예를 들면, 발바닥 사마귀, 생식기 사마귀, 편평 사마귀, 손발톱주위 사마귀, 및 실사마귀)를 포함한다.

숙련된 의사는 대상체가 의사(또는 진단되는 대상에 적절한 경우, 수의사)에 의해 당해 분야에 공지된 임의의 방법, 예를 들면, 환자의 병력을 평가하고/거나 진단 시험을 수행하고/거나 이미지화 기술을 사용함으로써 본원에 기재된 병태, 예를 들면, 암을 겪고 있거나 이의 위험이 있는 것으로 진달될 수 있다는 것을 인식할 것이다.

본원에 기재된 바와 같이, 환자에서 종양을 치료하는 하나의 예시적인 방법은 (i) 임의로, 방법의 수행 전에, 환자에서 종양 또는 암의 위치를 확인하는 단계; (ii) 종양 또는 암에 본원에 기재된 약제학적 조성물(예를 들면, 적어도 2종의 면역 관문 억제제 및 적어도 1종의 세포독성 또는 세포증식억제 화학요법 약물을 포함하는 약제학적 조성물)을 종양내로 투여하는 단계; (iii) 임의로 종양의 적어도 일부를 절제하는 단계; 및 (iv) 임의로 핵산 약물의 치료적 유효량을 종양에 투여하는 단계를 포함한다.

종양의 위치를 확인하는 것은 당해 분야에 공지된 기술(예를 들면, X선 방사선촬영, 자기 공명 영상, 의료 초음파검사 또는 초음파, 내시경술, 탄성영상, 촉각 영상화, 열조영술, 의료 사진, 양전자 방사 단층 촬영 및 단일 광자 방출 컴퓨터 단층 촬영을 포함하는 핵 의학 영상 기술, 광음향 영상화, 열조영술, 컴퓨터 보조 단층 촬영을 포함하는 단층 촬영, 심장초음파검사 및 기능적 근적외선 분광법 등)에 의해 수행될 수 있다. 종양을 절제하는 임의의 단계 (iii)는 약제학적 조성물을 투여하는 단계 (ii) 전에, 동시에, 또는 후에 수행될 수 있고, 절제는 종양의 세포내 성분 및 막 항원을 노출하는 절제 부위를 생성할 수 있다. 절제는 종양의 부분 또는 전부에 대하여 본원에 기재된 기술을 사용하여 수행될 수 있다. 임의로 핵산 약물의 치료적 유효량을 종양에 투여하는 단계 (iv)는 단계 (ii) 및 (iii)의 전에, 동시에 또는 후에 수행될 수 있다.

본원에 기재된 약제학적 조성물 중 하나 이상을 포함하는 키트가 또한 제공된다. 키트는 일반적으로 하기 주요 요소를 포함한다: 포장재, 상기 기재된 바와 같은 결합 조성물을 포함하는 시약, 임의로 제어장치, 및 설명서. 포장재는 상기 결합 조성물을 함유한 바이알(또는 다수의 바이알), 제어장치를 함유한 바이알(또는 다수의 바이알), 및/또는 본원에 기재된 방법에서 사용하기 위한 설명서를 잡기 위한 박스형 구조일 수 있다. 일부 경우에, 포장재는 체계적인 설명서에 따르는 디지털 장치에 의해 제어될 수 있는 카트리지를 함유한다. 당해 분야에서 숙련된 개인은 개별적인 요구에 맞춰 포장재를 용이하게 변형시킬 수 있다.

일부 실시양태에서, 본원에 제공된 키트는 적어도 하나의(예를 들면, 1개, 2개, 3개, 4개, 5개 이상의) 본원에 기재된 조성물, 및 적어도 하나의(예를 들면, 1개, 2개, 3개, 4개, 5개 이상의) 다른 조성물을 암을 치료하는데 효과적인 것으로 당해 분야에 공지된 치료제 또는 생물학적 제제를 함유한 분리된 바이알에 함유하는 적어도 하나의(예를 들면, 1개, 2개, 3개, 4개, 5개 이상의) 조성물을 포함할 수 있다.

본원에 제공된 바와 같은 조성물 및 키트는 상기 기재된 임의의 방법(예를 들면, 치료 방법)에 따라 사용될 수 있다. 예를 들면, 조성물 및 키트는 암 또는 종양을 치료하는데 사용될 수 있다. 당해 분야의 숙련가는 본원에 제공된 조성물 및 키트에 대한 다른 적합한 용도를 인식할 것이고, 이러한 용도를 위하여 조성물 및 키트를 사용할 수 있을 것이다.

실시예

하기 실시예는 본 발명의 특정한 실시양태에 따라 제공되고, 이의 실시 및 이점을 증명하기 위한 것이다. 실시예는 설명의 방식으로 제공되고, 어떠한 방식으로도 명세서 또는 하기 청구항을 제한하는 것을 의도하지 않는다는 것이 이해된다.

웹사이트[ClinicalTrials.gov]의 데이터베이스에서 "A Phase 2 Trial for Men With Metastatic Prostatic Adenocarcinoma," NCT04090775하에 열거된 프로토콜(NCT04090775에 열거된 프로토콜의 세부사항은 그 전문이 본원에 참조로서 포함됨)과 일치하는 II상 임상 실험에서 선택된 환자의 예비 결과를 하기 실시예에 나타낸다. 하기 실시예에 기재된 바와 같이, 환자를 적어도 2개월의 후속 치료와 함께 전립선내(종양내), 온도 제한 저온수술 및 면역학적 및 화학요법 제제의 조합으로 치료하였다.

실시예 1: 냉동절제 및 면역학적 및 화학요법 약제의 조합을 사용하는 환자 A에서 전립선암의 치료

높은 단계의 전립선 암으로부터 널리 퍼진 골격 및 척추 전이를 진단받은 60세 남성은 심각한 뼈 통증을 나타냈다. 그는 수술 후보자로 간주되지 않았고, 따라서 그는 표준 암 의학을 사용하는 방사선 요법 뿐만 아니라 호르몬 요법을 받았다. 이러한 치료에도 불구하고, 그는 통증이 지속된다고 보고하였다. 1년의 과정에 걸쳐, 전이는 확대되고 진행되어 추가의 부위를 포함하였다.

환자는 그의 전립선에 8주 간격으로 2 라운드의 치료를 겪었다. 각각의 치료에 있어서 환자는 그의 전립선(전립선내, 종양내)에 온도 제한 냉동절제(저온수술 냉동)를 받았고, 이는 약 -40℃의 온도에서 약 4분의 기간 동안 수행되었다. 직후에 동일한 부위에 CTLA-4 억제제(이필리무맙, 5 mg/ml, 1.0 ml), PD-1 억제제(니볼루맙, 10 mg/ml, 1.0 ml), 및 저용량 화학요법제(사이클로포스파미드, 50 mg/ml, 1.0 ml)를 포함하는 조성물의 종양내 주사가 뒤따랐다.

환자는 치료 후 그의 뼈 통증이 "훨씬 개선됨"이라고 보고하였고, 이러한 개선은 6개월이 넘도록 지속되었다. 또한, 그의 방사선 전문의는 환자의¹⁸F PET-CT 전신 뼈 스캔이 "요추 척추, 골반, 및 왼쪽 대퇴부 전이에서 상당한 개선 [및] 두개저, 경추 및 흉추, 양쪽 늑골, 쇄골, 및 양쪽 체액골을 포함한 나머지 전이에서 약간의 개선"을 나타냈다는 것을 확인하였다.

도 1a 및 1b는 이 실시예에서 논의된 치료 전(도 1a)과 약 3개월 후(도 1b)의 환자 A의 전신 뼈의 FDG-PET(¹⁸F-플루오로데옥시글루코스 양전자 방사 단층 촬영) 스캔의 이미지이다. 치료 전(도 1a)과 약 3개월 후(도 1b)의 스캔의 비교는 뼈 전이에서 상당한 개선을 드러내고; 화살표는 개선이 가장 현저한 영역(골반 영역)을 가리킨다. FDG-PET의 결과의 분석은, 치료 전 55.6의 이전 최대 SUV와 비교하여, 치료 후 오른쪽 어깨에서의 활성이 34.6의 최대 SUV(표준화된 흡수 값)를 가졌다는 것을 보여주고, 이는 약 38%의 감소이다.

이러한 데이터는 "우수한 결과" 및 환자가 치료에 "반응"을 가졌다는 것을 나타내고, 이는 임상 실험에서 "반응"을 나타내는 의학적으로 관련된 유리한 변화는 종양 표준화된 흡수 값(SUV)에서 30% 이상의 감소를 특징으로 하고, 종양 SUV에서 30-35%를 초과하는 더 큰 하락은 우수한 결과와 연관이 있다고 설명하는 문헌[PET Response Criteria in Solid Tumors(PERCIST) 1.0]의 기준에 따른 것이다. 문헌[Wahl et al., "From RECIST to PERCIST: Evolving Considerations for PET Response Criteria in Solid Tumors,"J. Nucl. Med. 50(suppl. 1): 122S-150S(2009)]을 참조하고, 이는 그 전문이 본원에 참조로서 포함된다. FDG-PET, SUV 및 이의 결정, 및 암 치료 반응과 관련된 PET 기준과 관련된 추가의 설명은 문헌[Wahl et al.]에서 찾을 수 있다.

유의미한 부작용은 없었다.

실시예 2: 냉동절제 및 면역학적 및 화학요법 약제의 조합을 사용하는 환자 B에서 전립선암의 치료

상승된 혈청 전립선-특이 항원(PSA) 농도를 갖는 것으로 진단받은 62세 남성은 높은 단계의 전립선암을 복막 뒤 림즈절 및 골반 뼈에 대한 전이와 함께 갖는 것으로 확인되었다. 그는 기본 및 진행된 2차 암 의학을 사용하여 호르몬 요법으로 치료를 받았다. 치료는 성공적이지 않았고, 5년 후, 암은 거세 저항성으로 분류되었다.

환자는 그의 복막 뒤 림프절에 8주 간격으로 2 라운드의 치료를 겪었다. 각각의 치료에 있어서, 환자는 그의 복막 뒤 림프절에 온도 제한 냉동절제(저온수술 냉동)를 받았고, 이는 온도 약 -40℃의 온도에서 약 4분의 기간 동안 수행되었다. 직후에 동일한 부위에 CTLA-4 억제제(이필리무맙, 5 mg/ml, 1.0 ml), PD-1 억제제(니볼루맙, 10 mg/ml, 1.0 ml), 및 저용량 화학요법제(사이클로포스파미드, 50 mg/ml, 1.0 ml)를 포함하는 조성물의 종양내 주사가 뒤따랐다.

3개월 내에, 복막 뒤 암은 부피가 57% 수축하였고, 이는 빠르고 유의미한 "부분적인 반응"을 나타내고, 이는 임상 실험에서 적어도 4주 동안 종양 직경의 적어도 30% 감소가 "부분적인 반응"으로 간주될 것이라고 설명하는 문헌[World Health Organization criteria and the Response Evaluation Criteria in Solid Tumors(RECIST) 1.1] 기준에 따른 것이다. 문헌[Wahl et al., "From RECIST to PERCIST: Evolving Considerations for PET Response Criteria in Solid Tumors,"J. Nucl. Med. 50(suppl. 1): 122S-150S(2009)]을 참조한다. 다음 범주는 적어도 4 동안 모든 종양 초점의 사라짐을 필요로 하는 "완전한 반응"이다.

도 2는 이 실시예에서 논의된 2 라운드의 치료 후, 환자 B의 혈청 전립선-특이 항원(PSA) 농도의 결과를 보여주는 그래프이다. PSA는 전립선의 세포에 의해 생성된 단백질이다. PSA의 혈액 수치는 전립선암이 있는 남성에서 자주 상승하는데, 10 ng/ml보다 높은 수치는 환자가 전립선암을 가질 가능성이 적어도 50%임을 나타낸다. 도면에 도시된 바와 같이, 혈청 PSA는 2회 치료 후, 107.6 ng/mL에서 31.9 ng/mL으로 유의미한 감소(약 70% 감소)를 보여주었다.

유의미한 부작용은 없었다.

Claims

적어도 2종의 면역 관문 억제제, 적어도 1종의 세포독성 또는 세포증식억제 화학요법 약물, 및 임의로 약제학적으로 허용되는 담체를 포함하는 약제학적 조성물.
제1항에 있어서, 면역 관문 억제제가 상이하고, 각각 CD137, CD134, PD-1, KIR, LAG-3, PD-L1, PDL2, CTLA-4, B7.1, B7.2, B7-DC, B7-H1, B7-H2, B7-H3, B7-H4, B7-H5, B7-H6, B7-H7, BTLA, LIGHT, HVEM, GAL9, TIM-3, TIGHT, VISTA, 2B4, CGEN-15049, CHK1, CHK2, A2aR, TGF-β, PI3Kγ, GITR, ICOS, IDO, TLR, IL-2R, IL-10, PVRIG, CCRY, OX-40, CD160, CD20, CD52, CD47, CD73, CD27-CD70, 및/또는 CD40으로 이루어진 군으로부터 선택된 면역 관문 분자의 억제제인 약제학적 조성물.
제2항에 있어서, 적어도 2종의 면역 관문 억제제가 i) CTLA-4 억제제 및 ii) PD-1 억제제 또는 PD-L1 억제제를 포함하는 것인 약제학적 조성물.
제3항에 있어서, CTLA-4 억제제가 이필리무맙, 트레멜리무맙, 또는 이의 조합인 약제학적 조성물.
제3항에 있어서, PD-1 억제제가 펨브롤리주맙, 니볼루맙, 피딜리주맙, MK-3475, MED 14736, CT-011, 스파탈리주맙, 및 이의 조합으로 이루어진 군으로부터 선택되는 것인 약제학적 조성물.
제3항에 있어서, PD-L1 억제제가 두발루맙, 아테졸리주맙, 아벨루맙, AMP224, BMS-936559, MPLDL3280A, MSB0010718C, 및 이의 조합으로 이루어진 군으로부터 선택되는 것인 약제학적 조성물.
제3항에 있어서, 적어도 2종의 면역 관문 억제제가 CTLA-4 억제제 및 PD-1 억제제를 포함하고; CTLA-4 억제제가 이필리무맙이고, PD-1 억제제가 펨브롤리주맙 또는 니볼루맙인 약제학적 조성물.
제1항에 있어서, 세포독성 또는 세포증식억제 화학요법 약물이 아스파라기나제, 블레오마이신, 부설판, 카보플라틴, 세툭시맙, 시스플라틴, 사이클로포스파미드, BCG, 클로람페니콜, 콜치신, 사이클로스포린, 다카바진, 독소루비신, 에토포시드, 플루다라빈, 젬시타빈, 이포스파미드, 이리노테칸, 로무스틴, 멜팔란, 메토트렉세이트, 미토마이신, 미톡산트론, 파클리탁셀, 프로카바진, 리툭시맙, 테모졸로미드, 티테파, 빈블라스틴, 빈크리스틴, 지도부딘, 및 이의 조합으로 이루어진 군으로부터 선택되는 것인 약제학적 조성물.
제1항에 있어서, 제2 세포독성 또는 세포증식억제 화학요법 약물을 추가로 포함하는 약제학적 조성물.
제3항에 있어서, CTLA-4 억제제의 농도가 약 0.5 내지 약 10 mg/ml 범위이고, PD-1 또는 PD-L1 억제제의 농도가 약 0.5 내지 약 20 mg/ml 범위인 약제학적 조성물.
제1항에 있어서, 면역 관문 억제제 및 세포독성 또는 세포증식억제 화학요법 약물이 종양내 투여를 위하여 제제화되는 것인 약제학적 조성물.
제1항에 있어서, 하나 이상의 핵산 약물을 추가로 포함하는 약제학적 조성물.
제12항에 있어서, 핵산 약물이 DNA 플라스미드인 약제학적 조성물.
제12항에 있어서, DNA 플라스미드가 GM-CSF, IL-12, IL-6, IL-4, IL-12, TNF, IFNγ, IFNα, 및 이의 조합으로 이루어진 군으로부터 선택된 유전자를 인코딩하는 뉴클레오타이드 서열을 포함하는 것인 약제학적 조성물.
종양 또는 암의 치료가 필요한 환자에게 적어도 2종의 면역 관문 억제제 및 적어도 1종의 세포독성 또는 세포증식억제 화학요법 약물을 종양 또는 암을 치료하는데 유효한 양으로 포함하는 조성물을 투여하는 단계를 포함하는, 환자에서 종양 또는 암을 치료하는 방법.
제15항에 있어서, 조성물이 환자에게 종양내로 투여되는 것인 방법.
제15항에 있어서, 조성물이 주사 장치를 사용하여 환자의 종양 또는 암에 투여되는 것인 방법.
제15항에 있어서, 면역 관문 억제제가 상이하고, 각각 CD137, CD134, PD-1, KIR, LAG-3, PD-L1, PDL2, CTLA-4, B7.1, B7.2, B7-DC, B7-H1, B7-H2, B7-H3, B7-H4, B7-H5, B7-H6, B7-H7, BTLA, LIGHT, HVEM, GAL9, TIM-3, TIGHT, VISTA, 2B4, CGEN-15049, CHK1, CHK2, A2aR, TGF-β, PI3Kγ, GITR, ICOS, IDO, TLR, IL-2R, IL-10, PVRIG, CCRY, OX-40, CD160, CD20, CD52, CD47, CD73, CD27-CD70, 및/또는 CD40으로 이루어진 군으로부터 선택된 면역 관문 분자의 억제제인 방법.
제18항에 있어서, 적어도 2종의 면역 관문 억제제가 i) CTLA-4 억제제 및 ii) PD-1 억제제 또는 PD-L1 억제제를 포함하는 것인 방법.
제15항에 있어서, 세포독성 또는 세포증식억제 화학요법 약물이 아스파라기나제, 블레오마이신, 부설판, 카보플라틴, 세툭시맙, 시스플라틴, 사이클로포스파미드, BCG, 클로람페니콜, 콜치신, 사이클로스포린, 다카바진, 독소루비신, 에토포시드, 플루다라빈, 젬시타빈, 이포스파미드, 이리노테칸, 로무스틴, 멜팔란, 메토트렉세이트, 미토마이신, 미톡산트론, 파클리탁셀, 프로카바진, 리툭시맙, 테모졸로미드, 티테파, 빈블라스틴, 빈크리스틴, 지도부딘, 및 이의 조합으로 이루어진 군으로부터 선택되는 것인 방법.
제19항에 있어서, CTLA-4 억제제의 농도가 약 0.5 내지 약 10 mg/ml 범위이고, PD-1 또는 PD-L1 억제제의 농도가 약 0.5 내지 약 20 mg/ml 범위인 방법.
제15항에 있어서, 하나 이상의 치료적 유효량의 핵산 약물을 종양 또는 암에 투여하는 단계를 추가로 포함하는 방법.
제22항에 있어서, 핵산 약물이 GM-CSF, IL-12, IL-6, IL-4, IL-12, TNF, IFNγ, IFNα, 및 이의 조합으로 이루어진 군으로부터 선택된 유전자를 인코딩하는 뉴클레오타이드 서열을 포함하는 DNA 플라스미드인 방법.
제15항에 있어서, 종양 또는 암의 적어도 일부를 절제하는 단계를 추가로 포함하는 방법.
제24항에 있어서, 절제 단계가 투여 단계 전에 또는 투여 단계와 동시에 수행되는 것인 방법.
제24항에 있어서, 절제 단계가 냉동절제; 고주파(RF) 절제; 마이크로파 절제; 레이저, 광, 또는 플라즈마 절제; 초음파 절제; 고강도 집속 초음파(HIFU) 절제; 스팀 절제; 가역적 전기천공(RE); 비가역적 전기천공(IRE); 고주파 전기막 파괴(RF-EMB); RF-EMB형 절제; 초단 전기 펄스에 의한 절제; 광역학 요법을 사용하는 절제; 비열적 충격파를 사용하는 절제; 캐비테이션; 세포 파괴를 생성하는 다른 기계적 물리적 수단; 화학적 절제; 생물학에 의한 절제; 또는 이의 조합에 의해 수행되는 것인 방법.
제26항에 있어서, 절제 단계가 냉동절제, 및/또는 RF-EMB에 의해 수행되는 것인 방법.
제27항에 있어서, 절제 단계가 냉동절제에 의해 최소 침습 방식으로 수행되는 것인 방법.
제28항에 있어서, 절제 단계가 5분 이하의 총 절제 시간으로 단일 프로브를 사용하여 수행되는 것인 방법.
제29항에 있어서, 냉동절제가 1 mm 이하의 직경을 갖는 단일 프로브를 사용하여 수행되는 것인 방법.
제28항에 있어서, 냉동절제가 약 -35 내지 약 -45℃의 온도에서 수행되는 것인 방법.
제25항에 있어서, 조성물을 투여하는 단계 및 절제 단계가 절제 모듈 및 주사 모듈을 포함하는 동일한 장치를 사용하여 수행되는 것인 방법.
제15항에 있어서, 종양 또는 암 유형이 전립선, 췌장, 결장, 폐, 및 방광으로 이루어진 군으로부터 선택되는 것인 방법.
제15항에 있어서, 종양 또는 암이 전이성인 방법.
제1항에 있어서, 세포독성 또는 세포증식억제 화학요법 약물이 사이클로포스파미드인 약제학적 조성물.
제20항에 있어서, 세포독성 또는 세포증식억제 화학요법 약물이 사이클로포스파미드인 방법.