KR20140114193A - A packing bag for implantation material - Google Patents

Abstract

Translated fromKorean

본 발명은 생체 이식재 포장용 주머니에 관한 것으로, 더욱 상세하게는, 간편한 방법으로 인체에 삽입가능한 무세포 진피 조직으로 이루어진 생체 이식재 포장용 주머니에 관한 것이다.
본 발명에 따른 생체 이식재 포장용 주머니는, 생체 이식체를 포장시에 기저막층이 제거된 무세포 진피조직을 사용함으로써 기존 사용되는 진피막에 비해 살아있는 세포가 조직으로 잘 들어가 생착율이 우수한 효과를 가지고 있으며, 주머니 형태를 가지고 있어 생체 이식재들이 밖으로 새지 않아 구조를 잘 유지하는 장점이 있다.BACKGROUND OF THE INVENTION 1. Field of the Invention [0001] The present invention relates to a bag for packaging a living body implant, and more particularly, to a bag for packaging a living body implant made of an acellular dermal tissue that can be inserted into a human body by a simple method.
The bioabsorbable material pouch according to the present invention has an effect of allowing living cells to enter into tissues and having an excellent rate of engraftment by using an acellular dermis tissue in which a basement membrane layer is removed at the time of packaging the bioabsorbable material, , And a pocket shape, so that the bio-implantable material does not leak out, which is advantageous in maintaining the structure well.

Description

Translated fromKorean

생체 이식재 포장용 주머니 {A packing bag for implantation material}The present invention relates to a packaging bag for implantation material,

본 발명은 생체 이식재 포장용 주머니에 관한 것으로, 더욱 상세하게는, 간편한 방법으로 인체에 삽입가능한 무세포 진피 조직으로 이루어진 생체 이식재 포장용 주머니에 관한 것이다.BACKGROUND OF THE INVENTION 1. Field of the Invention [0001] The present invention relates to a bag for packaging a living body implant, and more particularly, to a bag for packaging a living body implant made of an acellular dermal tissue that can be inserted into a human body by a simple method.

손상된 조직의 치료 또는 미용, 성형의 목적으로, 연골 조직의 이식은 날로 급증하고 있다. 종래 이식과 관련된 특허로써 특허문헌 1의 포유류의 연골조직에서 유래한 생체 이식체가 있다.For the purpose of treating or cosmetic or damaged tissue, the implantation of cartilage tissue is increasing day by day. As a conventional patent related to transplantation, there is a bio-implantable material derived from the cartilage tissue of mammal of Patent Document 1.

종래에는 관절염 등에 의해 손상된 조직을 보수하기 위해 정형외과 분야에서 연골 이식이 고려되어 왔으나, 최근에는 미용, 성형의 목적으로의 연골 조직 이용이 급격히 늘어나고 있다. 연골 조직을 이용한 성형에 있어서, 특히 코성형이 날로 활성화됨에 따라 융비술이 증가하고 있으며, 최근에는 이러한 연골을 미세하게 파쇄한 파쇄물을 이용하고 여기에 골막 또는 진피로 포장(wrapping)을 하여 이식에 사용하고자 하는 시도들이 있으나, 생체 이식재들을 보자기 형태로 싸다보니, 생체 이식재들이 밖으로 새어, 시술시에도 불편함을 주며, 시술 후에도 생착률 면에서는 여전히 우수하지 못한 결과를 나타내며, 심지어 콧등에 삽입시에는 일정한 입체 구조를 유지하지 못하고 주저앉는 경우도 있어 시술의 효과를 얻지 못하는 경우도 있다.Conventionally, cartilage grafting has been considered in the field of orthopedic surgery to repair damaged tissue by arthritis and the like. Recently, however, the use of cartilage tissue for cosmetic and cosmetic purposes is rapidly increasing. In the case of using the cartilage tissue, especially, the nose formation is increasing as the nose formation is activated day by day. Recently, the cartilage is finely disrupted and the cartilage is wrapped with the periosteum or dermis, However, when the bio-implantable materials are wrapped in a wrapping shape, the bio-implantable material is leaked out, and it is inconvenient at the time of the procedure, and the result is not excellent in terms of the rate of viability after the procedure. In some cases, it does not maintain the structure, and sometimes it does not work.

특허문헌 1 : 대한민국 공개특허 10-2012-0116332Patent Document 1: Korean Patent Laid-Open No. 10-2012-0116332

이에 본 발명자들은 상기와 같은 문제점을 해소하기 위하여, 인체에 삽입가능한 무세포 진피 조직으로 이루어진 생체 이식재 포장용 주머니를 제조하고, 본 발명을 완성하였다. 따라서, 본 발명의 목적은 생체 이식재 포장용 주머니 및 그 제조방법을 제공하는데 있다.In order to solve the above-mentioned problems, the inventors of the present invention have made a bag for packaging a living body implant made of an acellular dermal tissue that can be inserted into a human body, and completed the present invention. SUMMARY OF THE INVENTION Accordingly, it is an object of the present invention to provide a pouch for packaging a living body implant and a method of manufacturing the same.

상기와 같은 목적을 달성하기 위해, 본 발명은 인체에 삽입가능한 무세포 진피 조직으로 이루어진 생체 이식재 포장용 주머니를 제공한다.In order to achieve the above object, the present invention provides a pouch for packaging a living body implant made of acellular dermal tissue that can be inserted into a human body.

본 발명에 있어서, 상기 무세포 진피 조직은 기저막층이 제거된 무세포 진피 조직인 것을 특징으로 할 수 있다.In the present invention, the acellular dermis tissue may be an acellular dermis tissue from which a basement membrane layer has been removed.

본 발명에 있어서, 상기 생체 이식재는 연골 또는 피부 조직, 또는 그 혼합물이거나, 또는, 미세 연골 또는 피부의 진피조직인 것을 특징으로 할 수 있다.In the present invention, the bio-implantable material may be cartilage or skin tissue, or a mixture thereof, or may be micro-cartilage or skin dermal tissue.

본 발명에 있어서, 상기 생체 이식재는 미세 연골 및 기저막층이 제거된 진피조직의 파쇄물의 혼합물로, 바람직하게는, 상기 무세포 진피 조직 파쇄물과 미세 연골은 동일한 비율로 혼합된 것을 특징으로 할 수 있다.In the present invention, the bio-implantable material may be a mixture of micro-cartilage and dermis tissue of the dermis tissue from which the basement membrane layer has been removed. Preferably, the microcellular tissue and the uncellular dermis tissue debris are mixed in the same ratio .

본 발명은 또한, (a) 무세포 진피 조직으로부터 기저막층을 제거하는 단계; 및 (b) 상기 기저막층이 제거된 무세포 진피조직의 한쪽 단면을 절개하여 주머니 형태로 제작하는 단계; 를 포함하는 상기 생체 이식재 포장용 주머니의 제조 방법을 제공한다.The present invention also relates to a method for the treatment of cancer, comprising: (a) removing a basement membrane layer from acellular dermal tissue; And (b) cutting one end surface of the acellular dermis tissue from which the basement membrane layer has been removed to form a bag shape; The present invention also provides a method for manufacturing a bag for packaging a bioimplant material.

본 발명에 있어서, 상기 기저막층을 제거하는 단계는 육절기를 이용하거나, 과산화수소수를 처리하여 기저막층을 제거하는 것을 특징으로 할 수 있다.In the present invention, the step of removing the base membrane layer may be performed by using a mortar or by treating the aqueous hydrogen peroxide solution to remove the basement membrane layer.

본 발명에 있어서, 상기 제작된 주머니를 수화시키는 단계를 더 포함하는 것을 특징으로 할 수 있다.In the present invention, the method may further include the step of hydrating the manufactured bag.

본 발명에 따른 생체 이식재 포장용 주머니는, 생체 이식체를 포장시에 기저막층이 제거된 무세포 진피조직을 사용함으로써 기존 사용되는 진피막에 비해 살아있는 세포가 조직으로 잘 들어가 생착율이 우수한 효과를 가지고 있으며, 주머니 형태를 가지고 있어 생체 이식재들이 밖으로 새지 않아 이식 후 입체구조를 잘 유지할 수 있는 장점이 있다.The bioabsorbable material pouch according to the present invention has an effect of allowing living cells to enter into tissues and having an excellent rate of engraftment by using an acellular dermis tissue in which a basement membrane layer is removed at the time of packaging the bioabsorbable material, , And a pocket shape, so that the bio-implantable material does not leak out, so that the three-dimensional structure can be maintained well after the implantation.

도 1은 기저막층이 제거된 무세포 동종 진피를 나타낸 사진이다.
도 2는 무세포 동종 진피를 이용하여 제작한 생체 이식체 포장용 주머니를 제작하는 과정을 나타낸 사진이다.
도 3은 기저막층의 유무에 따라 진피 주머니에서의 섬유세포 유입 정도를 비교한 그림이다.1 is a photograph showing a cell-free allogeneic dermis in which a basement membrane layer has been removed.
FIG. 2 is a photograph showing a process of manufacturing a bag for packaging a living body graft made using a cell-free allogeneic dermis.
FIG. 3 is a graph comparing the degree of fibrous cell infiltration in the dermis pocket according to the presence or absence of the basement membrane layer.

다른 식으로 정의되지 않는 한, 본 명세서에서 사용된 모든 기술적 및 과학적 용어들은 본 발명이 속하는 기술분야에서 숙련된 전문가에 의해서 통상적으로 이해되는 것과 동일한 의미를 갖는다. 일반적으로, 본 명세서에서 사용된 명명법 은 본 기술분야에서 잘 알려져 있고 통상적으로 사용되는 것이다.Unless otherwise defined, all technical and scientific terms used herein have the same meaning as commonly understood by one of ordinary skill in the art to which this invention belongs. In general, the nomenclature used herein is well known and commonly used in the art.

본 발명의 상세한 설명 등에서 사용되는 주요 용어의 정의는 다음과 같다.
The definitions of the main terms used in the description of the present invention and the like are as follows.

이하, 본 발명을 보다 상세히 설명한다.Hereinafter, the present invention will be described in more detail.

지금까지는 미세연골을 싸기 위한 방법으로 두부 경피에서 골막 (fascia)을 분리하여 사용하거나 인체 무세포 진피를 이용하여 보자기처럼 미세연골을 싸는 방법을 사용하였는데, 미세연골이 밖으로 새는 단점이 있다. 다른 방법으로는 수술바늘과 실을 이용하여 주머니처럼 꿰매고 그 안에 미세연골을 넣는 방법이 있으나 이는 시술자에게 불편하다. 이러한 불편함과 부작용을 줄이기 위하여, 본 발명자들은 동결건조 된 무세포 진피의 한쪽 면을 자르고 주머니를 만든 다음, 그 진피를 수화시킨다. 충분한 수화 후에 이 진피자루 안에 수화된 미세진피, 미세연골, 또는 미세진피와 미세연골 혼합물을 충진하고, 벌려진 한쪽 면을 수술용 실로 꿰매어 주머니 형태로 만든다.Until now, as a method for wrapping the micro-cartilage, the fascia has been separated from the percutaneous epithelium, or the micro-cartilage is wrapped like a wrapping cloth using a human acellular dermis. Another method is to use a surgical needle and a thread to stitch it like a pocket and to insert fine cartilage in it, which is inconvenient to the practitioner. To reduce these inconveniences and side effects, we cut one side of the lyophilized acellular dermis and make a pouch, then hydrate the dermis. After sufficient hydration, the dermis is filled with hydrated micro dermis, fine cartilage, or a mixture of fine dermis and fine cartilage in the dermis bag, and one side of the dermis is sewn to the surgical thread to form a bag.

본 발명은 인체에 삽입가능한 무세포 진피 조직으로 이루어진 생체 이식재 포장용 주머니에 관한 것이다.BACKGROUND OF THE INVENTION 1. Field of the Invention The present invention relates to a pouch for packaging a living body implant made of an acellular dermal tissue that can be inserted into a human body.

본 발명에 있어서, 이러한 생체 이식재는 연골 또는 피부 조직, 또는 그 혼합물, 더 상세하게는, 상기 생체 이식재는 미세 연골 단독, 또는 피부의 진피조직, 구체적으로, 미세 연골 및 기저막층이 제거된 진피조직의 파쇄물의 혼합물일 수 있고, 예컨대, 상기 무세포 진피 조직 파쇄물과 미세 연골은 동일한 비율로 혼합된 것일 수 있다.In the present invention, such a bio-implantable material is a cartilage or skin tissue, or a mixture thereof, more specifically, the bio-implant is a micro-cartilage alone or a dermis tissue of the skin, specifically, a dermis tissue For example, the above-mentioned acellular dermis tissue rupture and micro-cartilage may be mixed in the same ratio.

미세연골을 이용할시에는, 생리식염수와 1.5~2:1의 비율로 혼합하여 사용할 수 있다. 위와 같은 혼합 과정은 주사기에 상기 미세 연골과 진피 조직 파쇄물을 생리식염수와 함께 넣어 피스톤 운동을 통하여 혼합할 수 있으며, 이것 이외에도 혼합 가능한 용기나 장치는 제한없이 적용가능하다.When using micro-cartilage, they can be mixed with physiological saline at a ratio of 1.5 to 2: 1. In the mixing process as described above, the micro-cartilage and the dermis tissue can be mixed with physiological saline in the syringe, and the mixture can be mixed through the piston movement.

본 발명에 있어서, 미세 연골은, 생체 조직의 일부인 연골을 분리하여, 골막 제거 등의 일단의 전처리 과정을 거쳐 확보된 연골을, 수술용 칼 (scalpel) 등을 이용하여 각 변이 1mm 이하의 육면체 구조로 가공한 연골을 말한다. 이러한 미세 연골을 얻기 위해서는 수술용 칼을 이용할 수 있고, 자르는 과정 외에, 반대쪽에서 연골을 고정하기 위해서는 포셉이나 의료용 집게를 이용할 수 있다.In the present invention, the micro-cartilage is obtained by separating the cartilage, which is a part of the living tissue, and securing the cartilage secured through a pre-treatment process such as the removal of the periosteum by using a surgical scalp or the like, . In order to obtain such a micro-cartilage, a surgical knife can be used. In addition to the cutting process, a forceps or a medical forceps can be used to fix the cartilage on the opposite side.

본 발명에 있어서, 무세포 진피 조직은, 분리된 진피를 화학적 처리과정을 통해 면역거부반응 일으킬 수 있는 세포들을 제거한 진피층을 말하며 콜라겐과 엘라스틴이 주성분을 이루고 있다. 이것이 생체 이식재의 일부로써 사용될 경우에는, 이 무세포 동종진피를 파쇄하여 500 μm 정도의 미세구조로 만든 것을 사용하며, 이것이 본 발명에서의 “무세포 진피 조직 파쇄물”이다.In the present invention, the acellular dermis tissue is a dermis layer that removes cells that can cause immunodeficiency through chemical treatment of the separated dermis, and is composed of collagen and elastin as main components. When this is used as a part of a living implant, the microcellular dermis is crushed and made into a microstructure of about 500 μm, which is a "cell-free dermis tissue crush" in the present invention.

본 발명에 있어서, 생체 이식재로 사용되는 미세 연골을 제작하는 과정은 다음과 같다:In the present invention, the process of preparing micro-cartilage used as a living implant is as follows:

생체 조직의 일부인 연골을 기증된 시신 등으로부터 분리하여, 골막 제거 등의 일단의 전처리 과정을 거쳐 확보된 연골을, 수술용 칼 (scalpel) 등을 이용하여 각 변이 1mm 이하의 육면체 구조로 가공하여 미세연골을 제작한다. 구체적으로,늑연골(costal cartilage)를 미세연골로 가공하는 과정으로써, 늑연골 조직의 포장을 개봉하여 해동된 조직을 가공 및 처리에 적절한 크기로 자른다. 멸균증류수가 담긴 멸균용기에 늑연골을 넣고 롤포셉을 이용하여 흔들어 씻어낸다. 이러한 세척을 3회 실시한다. 연부조직 및 연골막을 주의해서 제거한다. 불필요한 부분을 잘라낸다. 조직의 손질 및 규격화 작업을 하는 동안 조직이 건조해지지 않도록 멸균증류수로 조직표면을 적셔준다. 멸균증류수를 사용하여 3 회 세척한다. 크기가 1 mm 이하가 되도록 수술용 칼을 이용하여 자른다. 자른 미세연골을 생리식염수에 담아 건조가 되지 않도록 하며 밀봉한다. 포장이 완료된 미세 늑연골 완제품을 방사선 멸균처리한다. 이 때, 멸균에 필요한 감마-선량은 15 ~ 25 kGy를 사용한다.The cartilage, which is a part of the living tissue, is separated from the donated body, and the cartilage obtained through a pre-treatment process such as the removal of the periosteum is processed into a hexahedral structure with a variation of 1 mm or less using a surgical scalpel Make cartilage. Specifically, As a process of processing costal cartilage into fine cartilage, open the package of costal bone tissue and cut the thawed tissue to an appropriate size for processing and processing. Place the ribs in a sterilized container containing sterile distilled water and shake it off using a roll forceps. This cleaning is carried out three times. Carefully remove soft tissue and cartilage. Cut out unnecessary parts. Wet the tissue surface with sterile distilled water to prevent tissue drying during tissue conditioning and standardization. Wash three times with sterile distilled water. Cut with a surgical knife so that the size is less than 1 mm. The micro-cartilage is cut into physiological saline so that it is not dried. Radiation-sterilized microcosts finished with packaging. At this time, the gamma-dose required for sterilization is 15 to 25 kGy.

본 발명에 있어서, 상기 무세포 진피 조직은 동종 진피 조직일 수 있으며, 이러한 무세포 진피 조직을 준비하는 과정은 다음과 같다:In the present invention, the acellular dermis tissue may be a homogeneous dermis tissue, and the process for preparing the acellular dermis tissue is as follows:

기증된 시신의 조직을 신체에서 분리하여 운반할 때, 저산소증에 의한 조직손상, 자가 분해 효소에 의한 분해, 단백질 분해 효소에 의한 세포외 간질의 손상 등의 위험이 있다. 또한, 운반용액의 삼투압에 따라 물리적인 손상을 입을 수도 있다. 그 뿐 아니라 세균이나 곰팡이와 같은 미생물에 의한 오염 위험이 항상 존재한다. 따라서 조직의 운반에 이용되는 용액에는 저산소증에 의한 분해, 자가분해효소에 의한 분해, 단백질, 분해효소에 의한 분해를 막을 수 있는 물질을 첨가하여야There is a risk of tissue damage due to hypoxia, degradation by autolytic enzymes, and damage of extracellular epilepsy by proteases when the donated body tissue is transported separately from the body. In addition, physical damage may occur due to the osmotic pressure of the carrier solution. In addition, there is always a risk of contamination by microorganisms such as bacteria and fungi. Therefore, the solution used for transporting tissues should be supplemented with substances that can prevent degradation by hypoxia, degradation by autolytic enzymes, degradation by proteins and degrading enzymes

하고, 미생물의 오염을 막을 수 있는 항생제와 항균제를 첨가하여야 한다. 삼투압에 의한 조직의 손상을 막기 위해 적절한 완충용액이 포함되어야 한다. 조직운반용액의 삼투압은 혈장의 삼투압인 260 ~ 320 mOsm/kg 정도의 삼투압을 가져야 한다. 동물세포 배양 등에 많이 이용되는 상업적인 배지의 경우 삼투압이 260 ~ 320mOsm/kg 정도로 혈장의 삼투압과 비슷한 수준을 갖는다. 따라서, 상업적인 배지를 기본 용액으로 이용하고 거기에 여러 가지 역할을 하는 성분을 첨가하여 이용한다.And antibiotics and antimicrobial agents that can prevent microbial contamination should be added. Appropriate buffer solutions should be included to prevent tissue damage by osmotic pressure. The osmotic pressure of the tissue transport solution should have an osmotic pressure of about 260 to 320 mOsm / kg, which is the plasma osmotic pressure. In the commercial medium, which is widely used for animal cell cultures, the osmotic pressure is about 260-320 mOsm / kg, which is similar to the osmotic pressure of plasma. Therefore, a commercial medium is used as a base solution and various components are added to it.

세균이나 곰팡이의 오염을 막기 위해 페니실린, 스트렙토마이신, 가나마이신, 네오마이신, 바시트라신, 젠타마이신, 반코마이신 등과 같은 항생제를 단독 또는 조합으로 첨가하여, 암포테리신-비, 니스타틴, 폴리믹신 등과 같은 항균제를 단독 또는 조합으로 첨가한다. 또 여러 가지 분해효소에 의한 조직의 손상을 막기 위해 효소억제제를 첨가하여야 한다.Antibiotics such as penicillin, streptomycin, kanamycin, neomycin, bacitracin, gentamycin, vancomycin, etc., alone or in combination, are added to prevent contamination of bacteria and fungi, and amphotericin-b, nystatin, The same antimicrobial agent is added alone or in combination. An enzyme inhibitor should be added to prevent tissue damage by various enzymes.

효소억제제로는 엔-에틸말레이미드(NEM), 불화 페닐메틸술포닐(PMSF), 에틸렌디아민테트라아세트산(EDTA), 에틸렌 글리콜-비스(2-아미노에틸르)-N,N,N',N'-테트라아세트산(EGTA) 등과 같은 킬레이트화물질, 루펩틴, 아포프로티닌 등과 같은 단백질 분해효소 억제제 등을 이용한다.Enzyme inhibitors include N-ethylmaleimide (NEM), phenylmethylsulfonyl fluoride (PMSF), ethylenediaminetetraacetic acid (EDTA), ethylene glycol-bis '-Tetraacetic acid (EGTA) and the like, protease inhibitors such as lupeptin, apoproteinin and the like.

또한, 물리적인 손상을 최소화할 수 있는 방법에 따라 조직을 운반하여야 한다.In addition, tissue must be transported in a manner that minimizes physical damage.

대부분의 효소반응은 온도에 따라 많은 영향을 받으며 인간의 체온인 37℃ 주변에서 가장 활성이 강하게 된다, 따라서 조직을 4℃ 정도의 저온상태로 운반한다.Most enzyme reactions are highly influenced by temperature and are most active around the human body temperature of 37 ° C, thus transporting tissues at a low temperature of about 4 ° C.

일반적으로 아이스박스에 얼음을 채워 운반하는 방법을 이용한다. 운반 용액이 얼 정도로 낮은 온도로 조직을 운반하면 얼음 결정이 조직을 손상시킬 수 있으므로 피해야 한다.Generally, ice cubes are used to transport ice cubes. If the transport solution carries tissue to a frost-free temperature, ice crystals can damage the tissue and should be avoided.

무세포 진피 조직을 얻는 과정은 크게 2단계로 나눌 수 있으며, 제 1 단계는 상기와 같이 준비된 조직으로부터 표피층을 제거하는 단계로서, 표피층과 진피층을 분리한다.The process of obtaining the acellular dermis tissue can be roughly divided into two steps. In the first step, the skin layer is removed from the prepared tissue, and the epidermal layer and the dermal layer are separated.

일반적으로 진피층과 표피층을 분리하는데 여러 가지 단백질 분해 효소를 사용하게 된다. 효소를 사용하는 경우 사용농도가 낮거나 처리 시간이 너무 짧으면 분리가 잘 이루어지지 않고, 농도가 높거나 처리시간이 너무 길면 세포나 조직에 손상을 일으키게 된다. 따라서 적절한 농도와 시간에 따라 처리하여야 한다. 진피층과 표피층을 분리하는데 이용되는 효소로는 중성 단백질 분해효소인 디스파아제, 터몰리신, 트립신 등이 있다. 1.0 units/㎖ 농도의 디스파아제로 37℃에서 60∼120분간 처리하면 진피층과 표피층을 분리할 수 있다. 또는 200㎍/㎖ 농도의 터몰리신을 37℃에서 30분간 처리하면 진피층과 표피층을 분리할 수 있다. 터몰리신을 이용하면 디스파아제를 이용하는 경우보다 기저막의 손상 위험이 낮아진다. 또 다른 방법으로는 용액의 이온 강도를 변화시켜 조직의 두 층을 분리하기도 하는데 이 방법도 역시 이온 강도와 처리시간, 처리온도 등의 조건에 따라 효율이 달라진다. 1몰 이상의 염화나트륨 용액으로 37℃에서 14∼32시간 동안 처리하면 진피층과 표피층을 분리할 수 있다. 1몰 이상의 염화나트룸 용액에서는 세균이나 곰팡이 등이 증식할 수 없기 때문에 미생물의 오염 위험을 낮출 수 있다. 또는 20mM의 에틸렌디아민테트라아세트산(EDTA) 용액으로 37℃에서 14∼32시간 동안 처리하여도 역시 진피층과 표피층을 분리할 수 있다. EDTA를 이용하면 EDTA가 단백질분해효소 억제제의 역할을 하기 때문에 단백질분해효소에 의한 조직의 손상을 줄일 수 있다. 따라서, 1몰의 염화나트륨 용액에 1∼5mM의 EDTA를 첨가하여 처리하면 미생물의 오염이나 효소에 의한 조직 손상을 최소화하며 진피층과 표피층을 분리할 수 있다.Generally, various proteolytic enzymes are used to separate the dermal layer and the epidermal layer. When the enzyme is used, if the concentration is too low or the treatment time is too short, the separation will not be performed well. If the concentration is too high or the treatment time is too long, the cell or tissue will be damaged. Therefore, it should be treated according to appropriate concentration and time. Enzymes used to separate the dermis and epidermis include the neutral proteases disaspase, tramolysin, and trypsin. The dermal layer and the epidermal layer can be separated by treatment with 1.0 units / ml of disiaase at 37 ° C for 60 to 120 minutes. Alternatively, treatment with tamolysin at a concentration of 200 占 퐂 / ml for 30 minutes at 37 占 폚 can separate the dermal layer and the epidermal layer. The use of tamoxifen reduces the risk of basement membrane damage compared with the use of distearate. Another method is to separate the two layers of the tissue by changing the ionic strength of the solution. This method also depends on the conditions such as ionic strength, treatment time, and treatment temperature. Treatment with 1 mol or more of sodium chloride solution at 37 ° C for 14 to 32 hours can separate the dermal layer and the epidermal layer. Bacteria and fungi can not grow in a solution of 1 moles or more chloride sodium chloride, so the risk of microbial contamination can be reduced. Or 20 mM of ethylenediaminetetraacetic acid (EDTA) at 37 DEG C for 14 to 32 hours to separate the dermal layer and the epidermal layer. EDTA can reduce tissue damage by proteolytic enzymes because EDTA acts as a protease inhibitor. Therefore, treatment with 1 to 5 mM of EDTA in 1 molar sodium chloride solution can minimize microbial contamination and tissue damage caused by enzymes, and can separate the dermal layer and the epidermal layer.

제 2 단계는 상기와 같이 표피층을 제거한 다음, 진피층의 세포를 제거한다.In the second step, the skin layer is removed as described above, and then the cells of the dermal layer are removed.

면역반응은 주로 세포막에 존재하는 막 단백질에 의해 야기된다. 따라서 세포를 제거하면 면역반응을 최소화 할 수 있다. 세포와 세포외간질과의 물리, 화학적 성질의 차이를 이용하여 조직의 손상 없이 세포만 선별적으로 제거하는 방법을 이용한다. 세포막의 주 성분은 인지질로 여러 가지 계면활성제를 이용하면 조직의 손상 없이 세포를 제거할 수 있다.The immune response is mainly caused by membrane proteins present in the cell membrane. Therefore, removal of the cells can minimize the immune response. We use a method to selectively remove cells without damage to the tissue using the difference in physical and chemical properties between cells and extracellular epilepsy. The main component of the cell membrane is phospholipid, and various surfactants can be used to remove cells without damaging the tissue.

이를 위하여 소듐도데실 설페이트(SDS)와 같은 이온성 계면활성제, 또는 트리톤 엑스-100, 트윈20, 트윈 40, 트윈60, 트윈80, 노니데트 피-10(NP-10), 노니데트 피-40(NP-40) 등과 같은 비이온성 계면활성제 등이 이용된다.For this purpose, ionic surfactants such as sodium dodecyl sulfate (SDS), or ionic surfactants such as Triton X-100, Tween 20, Tween 40, Twin 60, Twin 80, Nonidetip- (NP-40), and the like are used.

진피층을 실온에서 0.2∼1% 농도의 SDS 용액으로 실온에서 30∼120분간 처리하면 조직의 손상 없이 세포를 제거할 수 있다. 또는 0.1∼2.0% 농도의 트윈 20 용액으로 실온에서 30∼180분간 처리하거나, 0.2∼2% 농도의 트리톤 엑스-100 또는 노니데트피-40 용액으로 22-37℃에서 30∼180분간 처리하면 역시 조직의 손상 없이 세포를 제거할 수 있다. When the dermal layer is treated at room temperature for 30 to 120 minutes with an SDS solution at a concentration of 0.2 to 1% at room temperature, cells can be removed without damaging the tissue. Or treated with a solution of Tween 20 at a concentration of 0.1 to 2.0% for 30 to 180 minutes at room temperature or treated with a solution of Triton X-100 or Nonidt P-40 at a concentration of 0.2 to 2% at 22 to 37 ° C for 30 to 180 minutes Cells can be removed without tissue damage.

상기 화학적인 방법 외에 물리적인 방법으로도 세포를 제거할 수 있는데, 진피층에 5∼60분간 10∼100 ㎑의 초음파를 처리하면 세포를 제거할 수 있다. 또는 계면활성제와 초음파를 조합하여 사용하여도 역시 조직의 손상 없이 세포를 제거할 수 있다. 또한, 용매(TNBP)와 계면활성제를 사용하여 세포 제거와 바이러스 제거를 동시에 할 수 있다.In addition to the above chemical methods, the cells can be removed by a physical method. Ultrasonic waves of 10 to 100 kHz for 5 to 60 minutes can be used to remove the cells. Alternatively, the combination of a surfactant and ultrasonic waves can also remove cells without damaging the tissue. In addition, using a solvent (TNBP) and a surfactant, cell removal and virus removal can be performed at the same time.

본 발명은 또한, (a) 무세포 진피 조직으로부터 기저막층을 제거하는 단계; 및 (b) 상기 기저막층이 제거된 무세포 진피조직의 한쪽 단면을 절개하여 주머니 형태로 제작하는 단계; 를 포함하는 상기 생체 이식재 포장용 주머니의 제조 방법에 관한 것이다.The present invention also relates to a method for the treatment of cancer, comprising: (a) removing a basement membrane layer from acellular dermal tissue; And (b) cutting one end surface of the acellular dermis tissue from which the basement membrane layer has been removed to form a bag shape; The present invention relates to a method for manufacturing a bag for packaging a bioimplant material.

제조 과정에 대하여 간단히 설명하면, 도 2에 나타난 바와 같이, (A)는 동결건조된 무세포 진피조직가 눕혀진 모습이며 (B)는 세워진 모습이다. (C)는 동결건조 된 무세포 진피의 세워진 면에 수술용 칼을 이용하여 자루를 만드는 과정이며 (D)는 자루가 완성된 모습이다. (E)와 (F)는 이러한 칼집을 넣어 완성된 동결건조 진피 주머니를 충분히 수화시킨 모습이며, 여기에 생체 이식재를 삽입하는 장면 (F)과 이식재의 충진이 끝난 진피 주머니의 모습 (G)이다.As shown in FIG. 2, (A) shows a lyophilized acellular dermis tissue lying down and (B) shows a raised state. (C) is a process of making a sack using a surgical knife on the freeze-dried acellular dermis's raised side, and (D) shows a completed sack. (E) and (F) show a fully hydrated lyophilized dermis pocket filled with such a sheath, a scene (F) for inserting a bio-implantable material and a shape (G) of a dermis pocket filled with a graft material .

본 발명에 있어서,상기 기저막층을 제거하는 단계는 육절기를 이용하거나, 과산화수소수를 처리하여 기저막층을 제거하는 것일 수 있다.In the presentinvention, the step of removing the base film layer may be to use, or process the hydrogen peroxide solution to remove the base film layer a six season.

더욱 상세하게, 상기 기저막층을 제거하는 단계를 다음의 과정을 포함할 수 있다.More specifically, the step of removing the base film layer may include the following process.

기저막층을 진피조직으로부터 분리하는 방법은 물리적 방법과 인체에 무해한 화학물질을 이용한 화학적 방법 등이 있다. 물리적인 방법으로는 표피층이 제거된 진피층 윗면을 육절기를 사용하여 0.01 내지 0.5 mm(바람직하게는 0.05 내지 0.2mm) 두께로 얇게 잘라주는 방법이 있다. 이 경우 육절기 칼날은 열발생을 최소화하여 진피조직의 변성을 막을 수 있도록 탄소강 소재를 사용할 수 있다. 화학적 처리 방법은 미세침이 부착된 롤러를 이용하여 기저막층 상단 표면에 작은 구멍을 낸 후 기저막층을 진피층으로 분리하기 위해 0.3% 과산화수소수 용액을 1시간내지 3시간 가량 처리하면 기저막층의 멤브레인 단백질의 구조를 느슨하게 만들어 주어 진피조직의 파괴 없이 기저막을 제거할 수 있다.Methods for separating the basement membrane layer from dermal tissue include physical methods and chemical methods using harmless chemicals. As a physical method, there is a method of thinly cutting the upper surface of the dermal layer from which the skin layer has been removed using a mortar to a thickness of 0.01 to 0.5 mm (preferably 0.05 to 0.2 mm). In this case, the cutting blade can be made of carbon steel material to minimize the heat generation and to prevent denaturation of dermal tissue. For the chemical treatment, a small hole was made on the upper surface of the basement membrane layer using a micro-needle roller, and a 0.3% hydrogen peroxide solution was applied for 1 hour to 3 hours to separate the basement membrane layer into the dermis layer. And the basement membrane can be removed without destroying the dermis tissue.

추가적으로, 위와 같은 기저막층이 제거된 진피 조직은 동결 건조하여 보관될 수 있다.In addition, the dermal tissue from which the basement membrane layer has been removed as described above can be stored by freeze-drying.

구체적으로는, 기저막층을 제거한 후, 동결용액 처리 및 동결 건조하여 보존한다.More specifically, after the base film layer is removed, it is stored by freezing solution treatment and freeze drying.

동결용액은 용액의 이온강도나 삼투압을 유지하는 완충용액, 얼릴 때 진피층 조직의 물리, 화학적인 손상을 막는 동결보호제, 건조할 때 진피층 조직의 구조 변화를 방지하는 건조보호제 등으로 구성된다. 동결보호제는 유리전이온도를 높여 얼어 있는 조직의 안정성을 높인다. 유리전이온도가 높아지면 조직 중에 육각형얼음 보다 덜 안정한 유리질의 얼음이나 정방형의 얼음의 비중을 높여 건조 속도를 더 높일 수 있다. 또 유리질의 얼음과 정방형의 얼음은 얼음의 크기가 작아 조직을 덜The freezing solution consists of a buffer solution that maintains the ionic strength or osmotic pressure of the solution, a cryoprotectant that prevents physical and chemical damage to the dermal layer tissue when it is frozen, and a dry protective agent that prevents the structure change of the dermal layer when dried. The cryoprotectant enhances the stability of frozen tissues by increasing the glass transition temperature. Higher glass transition temperatures can increase the specific gravity of glassy or square ice that is less stable than hexagonal ice in the tissue, resulting in higher drying rates. In addition, the glassy and square ice is smaller in ice size,

손상시킨다. 따라서 동결용액에는 반드시 동결보호제가 포함되어야 한다. 현재 많이 사용되는 동결보호제로는 디메틸설폭시드(DMSO), 덱스트란, 설탕, 프로필렌글리콜, 글리세롤, 마니톨, 솔비톨, 과당, 트레할로스, 라피노스, 2.3-부탄디올, 수산화에틸전분(HES), 폴리에틸렌글리콜, 폴리비닐피롤리돈(PVP), 프롤린, 헤타스타치,혈청알부민 등이 있다. 이러한 성분들과 여러 가지 염기성분을 조합하여 동결용액을 제조하여 이용한다. 그 중 덱스트란, 글리세롤, 헤타스타치, 마니톨, 수산화에틸전분 등은 혈청대체물로도 이용되고 있으며, 또 폴리에틸렌글리콜의 경우 단백성주사제의 안정제로도 이용되고 있어 안정성이 어느 정도 검증되어 있다. 이처럼 이미 인체에 해가 거의 없다고 알려진 물질들을 주성분으로 동결용액을 제조한다. 이렇게 제조한 동결용액에 진피층을 담그고 적절한 방법을 이용하여 동결용액이 잘침투할 수 있도록 한다. 동결용액이 침투된 진피층을 -70 ℃ 이하(바람직하게는 -40 ℃ 내지 -70 ℃)의 초저온 냉동고에 보관한다. 12시간 내지 48시간 동결 실시후동결건조기에 이동하여 동결건조시간을 24시간 내지 50시간 동안 시행하는 것이 바람직하다.
Damage. Therefore, the freezing solution must contain freezing protection. Currently, commonly used cryoprotectants include dimethylsulfoxide (DMSO), dextran, sugar, propylene glycol, glycerol, mannitol, sorbitol, fructose, trehalose, raffinose, 2.3-butanediol, hydroxyethyl starch (HES), polyethylene glycol, Polyvinylpyrrolidone (PVP), proline, hetastarch, and serum albumin. By combining these components with various base components, a freeze solution is prepared and used. Among them, dextran, glycerol, hetastachil, mannitol, and ethylhydroxy starch are used as serum substitutes, and polyethylene glycol is also used as a stabilizer for monoclonal injections, and its stability has been confirmed to some extent. As such, the frozen solution is made mainly of materials known to be harmless to human body. Immerse the dermis layer in the prepared frozen solution and allow the frozen solution to penetrate well using an appropriate method. The dermal layer in which the frozen solution has been infiltrated is stored in an ultra-low temperature freezer at -70 캜 or lower (preferably -40 캜 to -70 캜). It is preferable to carry out the freeze-drying for 24 to 50 hours after the freeze-drying is performed for 12 to 48 hours.

본 발명에 있어서, 상기 제작된 주머니를 수화시키는 단계를 더 포함하는 것을 특징으로 할 수 있다. 이러한 수화과정을 거치지 않은 경우, 동종 진피는 상당히 딱딱한 편이며 마치 단단한 부직포와 비슷한 느낌을 줍니다. 이런 상태에서는 칼로 주머니를 만들어도 이식재를 넣기 어렵다 따라서, 충분히 수화를 시켜 이식재를 넣을 수 있는 공간을 확보하고, 아울러, 이식재를 넣은 후에 봉합하기에도 수월하도록 한다.In the present invention, the method may further include the step of hydrating the manufactured bag. In the absence of such a hydration process, the homologous dermis is fairly firm and gives a feeling of being similar to a hard nonwoven fabric. In this state, it is difficult to insert a graft even if you make a knife bag. Therefore, make sure enough space for hydration by hydration, and make it easy to suture after inserting the graft.

본 발명에 있어서, 앞서 설명한 과정을 거쳐 얻어진, 무세포 진피 조직이 기저막층이 제거된 상태인 주머니의 경우, 도 3에 나타난 바와 같이 기저막이 있는 경우의 진피 주머니(a)와 기저막이 없는 진피 주머니(b)의 섬유세포 유입을 비교해보면, 기저막이 제거된 경우에 섬유세포 유입이 방해를 받지 않음으로써 생착율이 증대되는 장점이 있다.
In the present invention, in the case of the pouch in which the basement membrane layer is removed from the acellular dermis tissue obtained through the above-described process, as shown in Fig. 3, the dermis pocket (a) (b), there is an advantage that the incidence of fibroblasts is not disturbed when the basement membrane is removed, thereby increasing the engraftment rate.

이하, 실시예를 통하여 본 발명을 더욱 상세히 설명하고자 한다. 이들 실시예는 오로지 본 발명을 예시하기 위한 것으로서, 본 발명의 범위가 이들 실시예에 의해 제한되는 것으로 해석되지는 않는 것은 당 업계에서 통상의 지식을 가진 자에게 있어서 자명할 것이다.
Hereinafter, the present invention will be described in more detail with reference to Examples. It is to be understood by those skilled in the art that these examples are for illustrative purposes only and that the scope of the present invention is not construed as being limited by these examples.

실시예Example 1: 본 발명에 따른 1: According to the present invention무세포Acellular cell 진피 주머니의 제조 Manufacture of dermis bags

피부조직(조직은행으로부터 비영리 목적의 환자의 치료를 위해 기증받은 시신으로부터 채취)을 중성 단백질 분해효소인 디스파아제 1.0 units/㎖ 농도로 처리하고, 교반배양기에서 37 ℃의 온도로 60분 내지 120분 동안 교반 후 멸균 증류수로 3회 세척하여 진피층과 표피층을 분리하여 표피층을 제거하였다.The skin tissue (collected from the donated tissue from a tissue bank for the purpose of treatment of a patient for non-profit purposes) was treated with a concentration of 1.0 units / ml of the neutral protease, Dispase, and incubated at 37 < 0 & After stirring for 3 minutes, the epidermis was removed by separating the dermal layer and the epidermal layer by washing three times with sterilized distilled water.

표피층을 제거한 조직을 1% 농도의 트리톤 엑스-100 용액으로 30 ℃에서 100분간 처리하여 진피층의 세포를 제거하였다.The tissue from which the epidermis layer was removed was treated with a 1% Triton X-100 solution at 30 ° C for 100 minutes to remove the cells of the dermal layer.

표피층이 제거된 진피층 윗면을 열발생을 최소화하여 진피조직의 변성을 막을 수 있도록 탄소강 소재의 칼날의 육절기를 사용하여 0.05 내지 0.2 mm 두께로 얇게 잘라 기저막층을 제거하였다.The basement membrane layer was cut to a thickness of 0.05 to 0.2 mm using a carbon steel knife blade to prevent denaturation of the dermis by minimizing heat generation on the upper surface of the dermis layer from which the epidermal layer was removed.

동결용액으로 10%의 덱스트란 용액을 사용하고, 이 동결용액에 상기 기저막층이 제거된 진피조직을 -4 ℃에서 12시간 동안 담궈 동결용액이 잘 침투되도록 한 후, -70 ℃ 이하의 초저온 냉동고에 12시간 보관하고 동결건조기에 48시간 동결건조 하였다 (도 1).A 10% dextran solution was used as a frozen solution, and the dermis tissue in which the basement membrane layer was removed was immersed in the frozen solution at -4 DEG C for 12 hours to allow the frozen solution to penetrate well. Then, For 12 hours and lyophilized in a freeze dryer for 48 hours (Fig. 1).

상기와 같이 동결건조된 무세포 진피의 한쪽면을 자르고 주머니 형태를 만든다음, 그 진피를 수화시켰다. 충분히 수화 후에 이 진피 주머니 앞에 수화된 미세 진피, 미세 연골, 또는 미세 진피와 미세연골을 혼합하여 충진하였고, 벌려진 한쪽면을 수술용실로 꿰매었다 (도 2).
One side of the lyophilized acellular dermis was cut and bag shaped as described above, and then the dermis was hydrated. After sufficient hydration, the hydrated micro dermis, micro-cartilage, or micro-dermis and micro-cartilage hydrated in front of the dermis pocket were mixed and filled, and one side opened was stitched to the surgical thread (Fig. 2).

비교예 1: 기저막층이 제거되지 않은 무세포 진피조직으로 된 주머니Comparative Example 1: Pouch made of acellular dermis tissue without basement membrane layer removed

상기 1에서 기재한 것 중 기저막층 제거단계를 제외하고는 동일한 과정으로 제작하였다.
Except that the basement membrane layer removal step of the above-mentioned 1 was performed.

이상으로 본 발명의 내용의 특정한 부분을 상세히 기술하였는바, 당업계의 통상의 지식을 가진 자에게 있어서, 이러한 구체적 기술은 단지 바람직한 실시양태일 뿐이며, 이에 의해 본 발명의 범위가 제한되는 것이 아닌 점은 명백할 것이다. 따라서, 본 발명의 실질적인 범위는 첨부된 청구항들과 그것들의 등가물에 의하여 정의된다고 할 것이다.
While the present invention has been particularly shown and described with reference to specific embodiments thereof, those skilled in the art will appreciate that such specific embodiments are merely preferred embodiments and that the scope of the invention is not limited thereby. It will be obvious. Accordingly, the actual scope of the present invention will be defined by the appended claims and their equivalents.

Claims (6)

Translated fromKorean

인체에 삽입가능한 무세포 진피 조직으로 이루어진 생체 이식재 포장용 주머니.
A pouch for packaging a bioimplant material comprising an acellular dermal tissue that can be inserted into a human body.
제1항에 있어서, 상기 무세포 진피 조직은 기저막층이 제거된 무세포 진피 조직인 것을 특징으로 하는 생체 이식재 포장용 주머니.
[2] The bag according to claim 1, wherein the acellular dermis tissue is an acellular dermis tissue from which a basement membrane layer is removed.
제1항에 있어서, 상기 생체 이식재는 연골 또는 피부 조직, 또는 그 혼합물인 것을 특징으로 하는 생체 이식재 포장용 주머니.
The pouch for packaging a bioimplant material according to claim 1, wherein the bio-implantable material is cartilage or skin tissue, or a mixture thereof.
(a) 무세포 진피 조직으로부터 기저막층을 제거하는 단계;및 (b) 상기 기저막층이 제거된 무세포 진피조직의 한쪽 단면을 절개하여 주머니 형태로 제작하는 단계; 를 포함하는 제1항에 따른 생체 이식재 포장용 주머니의 제조 방법.
(a) removing the basement membrane layer from the acellular dermis tissue, and (b) incising one side of the acellular dermis tissue from which the basement membrane layer has been removed to form a bag shape; The method of manufacturing a bag for packaging a bioimplant material according to claim 1,
제4항에 있어서, 상기 기저막층을 제거하는 단계는 육절기를 이용하거나, 과산화수소수를 처리하여 기저막층을 제거하는 것을 특징으로 하는 방법.
5. The method according to claim 4, wherein the step of removing the basement membrane layer is performed using a mortar or a treatment with hydrogen peroxide to remove the basement membrane layer.
제4항에 있어서, 상기 제작된 주머니를 수화시키는 단계를 더 포함하는 것을 특징으로 하는 방법.
5. The method of claim 4, further comprising hydrating the fabric.

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