KR102051467B1

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Info

Publication number: KR102051467B1
Application number: KR1020190069340A
Authority: KR
Inventors: 박상준
Original assignee: 박상준
Priority date: 2019-06-12
Filing date: 2019-06-12
Publication date: 2019-12-03
Anticipated expiration: 2039-06-12

Abstract

Translated fromKorean

본 발명은 가교된 히알루론산 및 비가교된 히알루론산 중 어느 하나 이상; 가교된 덱스트란(cross-linked dextran); 하이드록시프로필 메틸셀룰로오스 (HPMC); 수산화나트륨(NAOH); 및 생리식염수;를 포함하는 피부 충전제 조성물 및 이의 제조방법에 관한 것이다.The present invention is at least one of crosslinked hyaluronic acid and non-crosslinked hyaluronic acid; Cross-linked dextran; Hydroxypropyl methylcellulose (HPMC); Sodium hydroxide (NAOH); And physiological saline; relates to a skin filler composition comprising a and a method for producing the same.

Description

Translated fromKorean

피부 충전제 조성물 및 이의 제조방법 {Skin filler composition and method for manufacturing the same}Dermal filler composition and method for preparing the same {Skin filler composition and method for manufacturing the same}

본 발명은 피부 충전제 조성물 및 이의 제조방법에 관한 것으로, 보다 상세하게는 히알루론산과 함께 가교된 덱스트란을 포함하는 피부충전제 조성물 및 이에 제조방법에 관한 것이다.The present invention relates to a dermal filler composition and a method for preparing the same, and more particularly, to a dermal filler composition comprising dextran crosslinked with hyaluronic acid and a method for preparing the same.

최근 들어 미용치료에 대한 사회적 관심이 늘어나면서 주름 제거와 흉터 치료, 얼굴 윤곽 보정을 위해 많은 치료 방법과 물질들이 개발되고 있으며 이 중 필러 주입은 시술의 용이성, 짧은 시술 시간, 비교적 적은 부작용 등의 장점으로 널리 시행되고 있다. 그 중에는 수술을 이용하여 주름을 없애는 방법, 보톡스, 그리고 필러(fiiler) 등이 있다. 수술의 경우에는 흉터가 남고, 시간이 오래 걸린다는 단점이 있으며, 보톡스는 신경 독소를 사용하기 때문에 부작용이 많이 발생한다. 반면 생체 내 존재하는 고분자를 이용한 필러(fiiler)의 경우에는 부작용이 적고 간편한 시술로 시간 절약이 가능하기 때문에 많이 이용되고 있다.Recently, with increasing social interest in cosmetic treatment, many treatment methods and materials have been developed for wrinkle removal, scar treatment, and facial contour correction. Among these, filler injection has advantages such as ease of treatment, short procedure time, and relatively low side effects. It is widely used. Among them are surgery to remove wrinkles, botox, and fillers. In the case of surgery, scars remain and take a long time, and Botox uses neurotoxins, which cause a lot of side effects. On the other hand, the filler (fiiler) using the polymer present in the living body has been used a lot because it is possible to save time with less side effects and simple procedures.

필러(fiiler)는 1890년대에 자가 지방이식으로 시술한 것이 최초이며, 이 후 콜라겐을 사용한 필러(fiiler)가 발명되었으며, Zyderm 과 Zyplast 가 대표적 콜라겐 필러(fiiler)이다. 그러나 이러한 콜라겐 필러는, 동물 유래 콜라겐이 사용되므로 시술 한 달 전에 알러지 테스트를 해야 하며, 수명도 3~6개월 정도로 비교적 짧은 단점이 있다(Baumann, L., J. Kaufman, and S. Saghari, Collagen fillers. Dermatologic therapy, 2006. 19(3): p. 134-140.).The filler was first performed by autologous lithography in the 1890s, after which a filler using collagen was invented, and Zyderm and Zyplast are representative collagen fillers. However, these collagen fillers require allergic testing one month before the procedure because animal-derived collagen is used, and has a relatively short lifespan of 3 to 6 months (Baumann, L., J. Kaufman, and S. Saghari, Collagen). fillers.Dermatologic therapy, 2006. 19 (3): p. 134-140.).

이를 보완하고자 히알루론산 계열의 필러(fiiler)가 개발되었다. 대표적으로는 Hylaform 과 Restylane/Perlane 등이 있으며, 수명이 콜라겐에 비해 6~12개월로 두 배 정도 길어졌으며 알러지 테스트가 없다는 장점이 있어 현재 많이 이용되고 있다.To supplement this, a hyaluronic acid-based filler was developed. Representatives include Hylaform and Restylane / Perlane, and their lifespan is twice as long as 6 to 12 months compared to collagen.

히알루론산(Restylane; Q-Med AB, Uppsala, Sweden)은 투명하고 점성이 있는 젤 타입의 제품으로 생체분화성이 있고 친수성이 높은 물질로 체내 주입 후 일정기간이 지나면 분해되지만, 주변의 물분자를 끌어당겨 부피를 유지하므로 피부 미용에 많이 사용되고 있다.Hyaluronic acid (Restylane; Q-Med AB, Uppsala, Sweden) is a transparent, viscous gel-type product that is biodegradable and hydrophilic.It decomposes after a certain period of time after injection into the body. It is used for beauty of skin because it attracts and maintains volume.

또한, 히알루론산은 의료용으로 가장 널리 사용되는 생체적합성 폴리머중 하나로, 글리코스아미노글리칸(GAGs: glycosaminoglycans) 그룹에 속하는 자연적으로 존재하는 다당류이다. 히알루론산 및 히알루론산으로부터 유래되는 생성물들은 생체의학 분야 및 미용 분야에서, 예를 들어 점조 수술(viscosurgery)시 그리고 피부 충진물로서, 널리 사용된다.In addition, hyaluronic acid is one of the most widely used biocompatible polymers for medical use and is a naturally occurring polysaccharide belonging to a group of glycosaminoglycans (GAGs). Hyaluronic acid and products derived from hyaluronic acid are widely used in the biomedical and cosmetic fields, for example during viscosurgery and as dermal filler.

그러나 히알루론산 그 자체만으로는 생체 내(in vivo) 또는 산, 알칼리와 같은 조건에서 쉽게 분해되기 때문에 사용이 제한적이다(생체 내에서 반감기가 1~2일 정도). 따라서 구조적으로 안정한 히알루론산 유도체를 개발하기 위한 노력이 널리 진행되고 있다. 히알루론산 유도체의 하나로서, 가교제를 사용하여 히알루론산들을 상호 공유결합시킨 히알루론산 가교물은 우수한 생체적합성, 물리적 안정성 및 생분해성을 가지고 있으며, 미국특허 제4,716,224호, 제4,963,666호, 제5,017,229호, 제 5,356,883호 등에는 그것의 제조방법들이 개시되어 있다.However, hyaluronic acid itself is limited in its use because it is easily degraded in vivo or under conditions such as acids and alkalis (half life in vivo is about 1 to 2 days). Therefore, efforts to develop structurally stable hyaluronic acid derivatives have been widely progressed. As one of the hyaluronic acid derivatives, hyaluronic acid crosslinked products which covalently bond hyaluronic acids with a crosslinking agent have excellent biocompatibility, physical stability and biodegradation, and are described in US Pat. Nos. 4,716,224, 4,963,666, 5,017,229, 5,356, 883 and the like disclose methods for their preparation.

반면, 히알루론산 가교물 또한 히알루론산 분해효소 및 열에 대한 안정성이 상대적으로 낮으며, 미반응 화학물질의 제거가 어려워 고분도의 생체적합성 물질로 활용하기에는 한계가 있어 이를 보완하기 위한 다양한 연구가 수행되고 있다.On the other hand, hyaluronic acid cross-linked products also have relatively low stability against hyaluronic acid degrading enzymes and heat, and it is difficult to remove unreacted chemicals, so it is limited to be used as a high-molecular biocompatible material. have.

본 발명의 목적은 세포독성이 없고 피부친화적인 진피 충전제로 적합한 피부 충전제 조성물 및 이의 제조방법을 제공하기 위한 것이다.It is an object of the present invention to provide a skin filler composition suitable for use as a non-cytotoxic and skin friendly dermal filler and a method for preparing the same.

또한, 본 발명의 다른 목적은 종래 히알루론산을 이용한 필러의 유지기간의 단점을 보완하고, 피부에 트러블이 발생하지 않는 높은 생체적합성을 가지면서 동시에 생분해성도 뛰어난 피부 충전제 조성물 및 이의 제조방법을 제공하기 위함이다.In addition, another object of the present invention to supplement the disadvantages of the maintenance period of the filler using the conventional hyaluronic acid, to provide a skin filler composition having a high biocompatibility and at the same time excellent biodegradability without troubles on the skin and a method for producing the same For sake.

또한, 본 발명의 또 다른 목적은 우수한 장기 지속성을 갖고 제어된 물성에 의하여 전체적으로 균일한 생분해성 특성을 갖는 피부 충전제 조성물 및 이의 제조방법을 제공하기 위함이다.Still another object of the present invention is to provide a skin filler composition and a method for preparing the same, which have excellent long-term durability and overall biodegradable properties by controlled physical properties.

본 발명의 일측면에 따르면, 본 발명의 실시예들은 가교된 히알루론산 및 비가교된 히알루론산 중 어느 하나 이상; 가교된 덱스트란(cross-linked dextran); 하이드록시프로필 메틸셀룰로오스 (HPMC); 수산화나트륨(NAOH); 및 생리식염수;를 포함하는 피부 충전제 조성물을 포함한다.According to one aspect of the invention, embodiments of the present invention are any one or more of cross-linked hyaluronic acid and non-crosslinked hyaluronic acid; Cross-linked dextran; Hydroxypropyl methylcellulose (HPMC); Sodium hydroxide (NAOH); And physiological saline; and a skin filler composition comprising a.

상기 가교된 덱스트란은 제1 가교된 덱스트란과 제2 가교된 덱스트란으로 이루어지고, 상기 제1 가교된 덱스트란은 상기 제2 가교된 덱스트란보다 작은 팽윤도로 구비될 수 있다.The crosslinked dextran may be composed of a first crosslinked dextran and a second crosslinked dextran, and the first crosslinked dextran may be provided with less swelling than the second crosslinked dextran.

상기 제1 가교된 덱스트란은, 중량평균 분자량이 30000 내지 50000인 비가교 덱스트란을 가교시켜 중량평균 분자량이 500000 이상으로 제조되어 구비되고, 상기 제1 가교된 덱스트란이 수분을 함유한 입자의 평균직경은 63㎛ 내지 235㎛이고, 증류수에서 팽윤도는 4g/g 내지 6g/g일 수 있다.The first cross-linked dextran is cross-linked non-crosslinked dextran having a weight average molecular weight of 30000 to 50000 to prepare a weight average molecular weight of 500000 or more, wherein the first cross-linked dextran of the water-containing particles The average diameter is 63 μm to 235 μm, and the degree of swelling in distilled water may be 4 g / g to 6 g / g.

상기 제2 가교된 덱스트란은, 중량평균 분자량이 60000 내지 80000인 비가교 덱스트란을 가교시켜 중량평균 분자량이 500000 이상으로 제조되어 구비되고, 상기 제2 가교된 덱스트란이 수분을 함유한 입자의 평균직경은 100㎛ 내지 300㎛이고, 증류수에서 팽윤도는 9g/g 내지 11/g일 수 있다.The second crosslinked dextran is prepared by crosslinking a non-crosslinked dextran having a weight average molecular weight of 60000 to 80000 and having a weight average molecular weight of 500000 or more, and wherein the second crosslinked dextran is composed of water-containing particles. The average diameter is 100㎛ to 300㎛, the degree of swelling in distilled water may be 9g / g to 11 / g.

상기 제1 가교된 덱스트란과 상기 제2 가교된 덱스트란의 중량평균 분자량은 하기 식 1을 만족할 수 있다.The weight average molecular weight of the first crosslinked dextran and the second crosslinked dextran may satisfy Equation 1 below.

(식 1) 0.8 ≤ Mw₁/Mw₂ ≤ 1.5(Expression 1) 0.8 ≤ Mw₁ / Mw₂ ≤ 1.5

Mw₁ : 제1 가교된 덱스트란의 중량평균 분자량Mw₁ : weight average molecular weight of the first crosslinked dextran

Mw₂ : 제2 가교된 덱스트란의 중량평균 분자량Mw₂ : weight average molecular weight of the second crosslinked dextran

상기 가교된 히알루론산은 분자량이 1000000Da 내지 1550000Da인 고분자 히알루론산을 이용하여 가교제로 가교 반응시켜 제조되고, 상기 가교제는 디비닐술폰 (DVS, DiVinyl Sulfone), 비스에틸카르보디이미드 (BCDI, Bis ethyl CarboDiimIde), 부탄디올디그리시딜에테르 (BDDE, ButaneDiol Diglycidyl Ether) 및 폴리에틸렌글리콜(PEG, PolyEthylene Glycol) 중 어느 하나 이상일 수 있다.The crosslinked hyaluronic acid is prepared by crosslinking reaction with a crosslinking agent using a polymer hyaluronic acid having a molecular weight of 1000000 Da to 1550000 Da, and the crosslinking agent is divinyl sulfone (DVS, DiVinyl Sulfone), bisethylcarbodiimide (BCDI, Bis ethyl CarboDiimIde) ), Butanediol diglycidyl ether (BDDE, ButaneDiol Diglycidyl Ether) and polyethylene glycol (PEG, PolyEthylene Glycol) may be one or more.

상기 히알루론산은 비가교된 히알루론산과 가교된 히알루론산이 중량비로 4:6으로 혼합하여 구비될 수 있다.The hyaluronic acid may be provided by mixing non-crosslinked hyaluronic acid and crosslinked hyaluronic acid in a weight ratio of 4: 6.

상기 히알루론산은, 비가교된 히알루론산을 제조하는 단계; 가교된 히알루론산을 제조하는 단계; 및 상기 가교된 히알루론산을 생리식염수에 혼합한 후, 상기 가교된 히알루론산이 구비된 생리식염수 중에 상기 비가교된 히알루론산을 첨가하여 상온에서 150rpm 내지 180rpm으로 24시간 동안 교반하여 혼합하는 단계;를 포함할 수 있다.The hyaluronic acid, preparing a non-crosslinked hyaluronic acid; Preparing a crosslinked hyaluronic acid; And mixing the crosslinked hyaluronic acid with physiological saline, and then adding the non-crosslinked hyaluronic acid to the physiological saline equipped with the crosslinked hyaluronic acid and stirring the mixture at 150 rpm to 180 rpm for 24 hours at room temperature. It may include.

상기 비가교된 히알루론산을 제조하는 단계는, 상온에서 중량평균 분자량(Mn)이 1100000Da인 히알루론산 나트륨 10g을 정제수 1000g에 용해시키고, 상기 히알루론산이 용해된 정제수로 강산성 양이온교환수지 80g를 첨가하고 25℃ 내지 30℃에서 48시간 동안 교반하면서 반응시키고, 반응이 완료된 후 강산성 양이온교환수지를 여과하여 제거하고 1N의 NaHCO₃를 첨가하여 중화시킨 후 동결건조시켜 중량평균 분자량이 4500Da 내지 5500Da로 제조될 수 있다.In the preparing of the non-crosslinked hyaluronic acid, 10 g of sodium hyaluronate having a weight average molecular weight (Mn) of 1100000 Da is dissolved in 1000 g of purified water, and 80 g of a strong acid cation exchange resin is added to the purified water in which the hyaluronic acid is dissolved. The reaction was stirred at 25 ° C. to 30 ° C. for 48 hours, and after completion of the reaction, the strong acid cation exchange resin was removed by filtration, neutralized by addition of 1N NaHCO₃ , and lyophilized to prepare a weight average molecular weight of 4500Da to 5500Da. Can be.

상기 가교된 히알루론산을 제조하는 단계는, 상온에서 중량평균 분자량(Mn)이 1000000Da인 히알루론산 나트륨 32g을 0.05mol/l 농도의 수산화 나트륨용액 80ml에 녹여 4.0중량% 농도의 히알루론산 수용액을 제조하고, 상기 히알루론산 수용액 중에 히알루론산 나트륨이 완전히 용해되면 알칼리도를 증가시키기 위하여 10mol/l 농도의 수산화 나트륨용액 4ml를 첨가하고, 상기 히알루론산 수용액을 주사기 장치에 투입하여 0.2ml/min의 속도로 흘려보내 상기 주사기 장치의 입구에서 낙하시켜 미세방울 형태의 히알루론산 수용액을 제조하고, 상기 주사기 장치의 입구에서 낙하되는 미세방울 형태의 히알루론산 수용액은 0.4ml의 디비닐술폰과 40ml의 이소부틸알콘 혼합용액 중으로 적하시켜 상온에서 24시간 동안 140rpm 내지 160rpm으로 교반하여 반응시켜 미세구슬 형태의 가교된 히알루론산을 제조하고, 상기 주사기 장치는 상기 미세방울 형태의 히알루론산이 배출되는 입구에 쿨링튜브에 의하여 감싸져서 구비되고, 상기 쿨링튜브와 상기 입구 사이에 압력이 5psi인 압축공기가 공급되며, 상기 주사기 장치 내로 흐르는 상기 히알루론산 수용액의 속도는 시린지펌프를 이용하여 제어될 수 있다.In preparing the cross-linked hyaluronic acid, 32 g of sodium hyaluronate having a weight average molecular weight (Mn) of 1000000 Da is dissolved in 80 ml of sodium hydroxide solution at a concentration of 0.05 mol / l to prepare an aqueous solution of 4.0 wt% hyaluronic acid. When sodium hyaluronate is completely dissolved in the aqueous hyaluronic acid solution, 4 ml of sodium hydroxide solution having a concentration of 10 mol / l is added to increase alkalinity, and the aqueous hyaluronic acid solution is poured into a syringe apparatus and flowed at a rate of 0.2 ml / min. The hyaluronic acid aqueous solution in the form of microdrops is dropped from the inlet of the syringe device, and the aqueous droplet of hyaluronic acid in the form of microdrops falling from the inlet of the syringe device is mixed with 0.4 ml of divinyl sulfone and 40 ml of isobutyl alcohol. Dropping and reacting by stirring at 140rpm to 160rpm for 24 hours at room temperature in the form of fine beads The hyaluronic acid was prepared, and the syringe device is provided by a cooling tube at an inlet through which the hyaluronic acid in the form of microdrops is discharged, and compressed air having a pressure of 5 psi is supplied between the cooling tube and the inlet. The speed of the aqueous hyaluronic acid solution flowing into the syringe device can be controlled using a syringe pump.

상기 히알루론산은 비가교된 히알루론산을 이용하되, 상기 히알루론산의 점도가 감소하도록 상기 히알루론산으로 전자선을 조사하는 것을 더 포함할 수 있다.The hyaluronic acid may further include irradiating an electron beam with the hyaluronic acid so as to reduce the viscosity of the hyaluronic acid by using non-crosslinked hyaluronic acid.

상기 히알루론산은, 분말상태의 히알루론산 60g에 대해서 4㎖의 초순수를 첨가하여 상온에서 원심믹서 (Planetary Centrifugal Mixer)를 이용하여 1800rpm 내지 2500rpm으로 30초 내지 1분 동안 혼합하여 히알루론산 페이스트를 제조하고, 상기 히알루론산 페이스트 측으로 전류량이 0.05mA이고 조사량이 1kGy 내지 2kGy가 되도록 전자선을 조사하여 제조될 수 있다.The hyaluronic acid is prepared by adding 4 ml of ultrapure water to 60 g of powdered hyaluronic acid and mixing the mixture at a temperature of 1800 rpm to 2500 rpm for 30 seconds to 1 minute using a Centrifugal Mixer at room temperature. The hyaluronic acid paste may be prepared by irradiating an electron beam such that the current amount is 0.05 mA and the irradiation amount is 1 kGy to 2 kGy.

중량%로, 0.01 내지 0.5중량% 히알루론산, 0.01 내지 3중량% 제1 가교된 덱스트란(cross-linked dextran), 3 내지 5중량% 제2 가교된 덱스트란, 0.01 내지 0.2중량% 하이드록시프로필 메틸셀룰로오스 (HPMC), 0.01 내지 0.1중량% 수산화나트륨(NaOH) 및 잔량의 생리식염수로 이루어지고, pH는 5.5 내지 8이고, 점도는 1000mPa-s 내지 5000mPa-s일 수 있다.In weight percent 0.01 to 0.5 weight percent hyaluronic acid, 0.01 to 3 weight percent first cross-linked dextran, 3 to 5 weight percent second crosslinked dextran, 0.01 to 0.2 weight percent hydroxypropyl It consists of methyl cellulose (HPMC), 0.01 to 0.1% by weight sodium hydroxide (NaOH) and the balance of physiological saline, the pH is 5.5 to 8, the viscosity may be 1000mPa-s to 5000mPa-s.

상기 제1 및 제2 가교된 덱스트란이 평형팽윤 상태에서, 상기 제2 가교된 덱스트란의 부피는 상기 제1 가교된 덱스트란의 부피에 대해서 65 내지 75부피%이고, 상기 제1 및 제2 가교된 덱스트란의 총함량은 상기 가교된 히알루론산 및 비가교된 히알루론산 중 어느 하나 이상에 대해서 0.1중량% 내지 0.3중량%로 포함될 수 있다.In the state where the first and second crosslinked dextran are in equilibrium and swelling, the volume of the second crosslinked dextran is 65 to 75% by volume relative to the volume of the first crosslinked dextran, and the first and second The total content of crosslinked dextran may be included in an amount of 0.1% to 0.3% by weight relative to any one or more of the crosslinked hyaluronic acid and the uncrosslinked hyaluronic acid.

본 발명의 다른 실시예에 따르면, 상기 피부 충전제 조성물은 피부 연조직에 주입할 수 있는 필러(filler)일 수 있다.According to another embodiment of the present invention, the dermal filler composition may be a filler that can be injected into the skin soft tissue.

본 발명의 다른 측면에 따르면, 본 발명은 제1 가교된 덱스트란과 제2 가교된 덱스트란 각각을 생리식염수와 혼합하여 제1 혼합물과 제2 혼합물을 준비하는 제1 단계; 히알루론산과 생리식염수를 혼합하여 제3 혼합물을 준비하는 제2 단계; 하이드록시프로필 메틸셀룰로오스 (HPMC)를 생리식염수와 혼합하여 제4 혼합물 준비하는 제3 단계; 및 상기 제1 혼합물, 제2 혼합물, 제3 혼합물 및 제4 혼합물을 혼합하는 제4 단계;를 포함하고, 상기 제1 가교된 덱스트란은 상기 제2 가교된 덱스트란보다 작은 팽윤도로 구비되는 것을 특징으로 하는 피부 충전제 조성물의 제조방법을 포함한다.According to another aspect of the present invention, the present invention comprises a first step of preparing a first mixture and a second mixture by mixing each of the first crosslinked dextran and the second crosslinked dextran with physiological saline; A second step of preparing a third mixture by mixing hyaluronic acid and physiological saline; A third step of preparing a fourth mixture by mixing hydroxypropyl methylcellulose (HPMC) with physiological saline; And a fourth step of mixing the first mixture, the second mixture, the third mixture, and the fourth mixture; wherein the first crosslinked dextran is provided with a degree of swelling less than the second crosslinked dextran. Characterized in that the method for producing a skin filler composition.

상기 제1 단계에서 상기 제1 및 제2 혼합물은, 분말상태의 제1 및 제2 가교된 덱스트란을 각각 별도로 구비된 증류수 중에 넣어 1시간 내지 5시간 동안 95℃ 내지 100℃의 온도범위로 가열하여 팽윤시켜 제1 및 제2 가교된 덱스트란 수화물을 각각 제조하고, 상등액을 제거한 후 체를 이용하여 상온에서 1시간 내지 12시간 동안 유지시켜 상기 제1 및 제2 가교된 덱스트란 수화물 내부로 흡수되지 않은 잔류 증류수를 제거하며, 상기 제1 및 제2 가교된 덱스트란 수화물 각각에 생리식염수을 넣어 세척하고, 상기 제1 및 제2 가교된 덱스트란 수화물과 생리식염수를 넣고 수산화나트륨을 첨가하여 제1 및 제2 혼합물을 제조하는 것을 포함할 수 있다.In the first step, the first and second mixtures are put into powdered first and second crosslinked dextran in distilled water, each separately provided, and heated to a temperature range of 95 ° C. to 100 ° C. for 1 hour to 5 hours. And swelling to prepare the first and second crosslinked dextran hydrates respectively, and after removing the supernatant, the mixture was maintained at room temperature for 1 to 12 hours using a sieve to be absorbed into the first and second crosslinked dextran hydrates. The remaining distilled water is removed, and the physiological saline is added to each of the first and second crosslinked dextran hydrates, and the first and second crosslinked dextran hydrates and physiological saline are added thereto, and then sodium hydroxide is added. And preparing a second mixture.

상기 제2 단계에서, 상기 히알루론산을 0.2N 내지 0.3N NaOH의 생리식염수 중에 첨가하여 농도가 8%(w/v) 내지 12%(w/v) 되도록 혼합하여 제3 혼합물을 제조할 수 있다.In the second step, the third mixture may be prepared by adding the hyaluronic acid in physiological saline of 0.2N to 0.3N NaOH so as to have a concentration of 8% (w / v) to 12% (w / v). .

상기 제2 단계에서, 상기 히알루론산을 생리식염수와 혼합하기 전 분자량이 1000000Da 내지 1550000Da인 고분자 히알루론산을 이용하여 가교제로 가교 반응시켜 가교된 히알루론산을 제조하고, 상기 가교된 히알루론산을 0.2N 내지 0.3N NaOH의 생리식염수 중에 첨가하여 농도가 8%(w/v) 내지 12%(w/v) 되도록 혼합하여 제3 혼합물을 제조할 수 있다.In the second step, before the hyaluronic acid is mixed with physiological saline, using a polymer hyaluronic acid having a molecular weight of 1000000 Da to 1550000 Da crosslinking reaction with a crosslinking agent to prepare a crosslinked hyaluronic acid, the crosslinked hyaluronic acid from 0.2N to A third mixture may be prepared by adding 0.3N NaOH in physiological saline to a concentration of 8% (w / v) to 12% (w / v).

상기 가교된 히알루론산은, 분자량이 1000000Da 내지 1550000Da인 고분자량 히알루론산을 준비하고, 상기 히알루론산의 반복단위에 대해서 8몰% 내지 12몰%의 가교제를 첨가하여 25℃ 내지 30℃의 온도범위에서 22시간 내지 26시간 동안 상기 히알루론산의 하이드록시기와 가교반응을 시켜 pH가 11 내지 13가 되는 가교된 히알루론산을 제조하고, 상기 가교된 히알루론산을 정제수 또는 생리식염수를 이용하여 세척하는 것을 포함할 수 있다.The crosslinked hyaluronic acid is prepared by preparing a high molecular weight hyaluronic acid having a molecular weight of 1000000 Da to 1550000 Da, and adding a crosslinking agent of 8 mol% to 12 mol% based on the repeating unit of the hyaluronic acid in a temperature range of 25 ℃ to 30 ℃ Crosslinking reaction with the hydroxyl group of the hyaluronic acid for 22 to 26 hours to prepare a cross-linked hyaluronic acid having a pH of 11 to 13, and washing the cross-linked hyaluronic acid with purified water or saline solution Can be.

이상 살펴본 바와 같은 본 발명에 따르면, 기존 히알루론산의 필러보다 분해되는 속도가 지연되어 생체 내에서 장기간 유지할 수 있는 피부 충전제 조성물 및 이의 제조방법을 제공할 수 있다.According to the present invention as described above, it is possible to provide a dermal filler composition and a method for preparing the same, which can be maintained for a long time in the body by delaying the decomposition rate of the filler of the conventional hyaluronic acid.

또한, 본 발명에 따르면 피부에 절개선을 가한 뒤 피부 내부를 조작할 필요 없이 주사를 통하여 진피 아래에 피부 충전제를 주입하기 때문에 흉터가 남지 않을 뿐만 아니라 적용부위에 신속히 임의의 형태를 부여할 수 있는 피부 충전제 조성물 및 이의 제조방법을 제공할 수 있다.In addition, according to the present invention, since the filler is injected under the dermis through injection without the need to manipulate the inside of the skin after applying an incision to the skin, scars are not left, and the application site can be given any form quickly. Dermal filler compositions and methods for making the same can be provided.

또한, 본 발명에 따르면 알러지 반응을 일으킬 가능성이 있는 이종 콜라겐(bovine collagen)을 포함하고 있지 않아 시술 전에 알러지 반응 검사 등의 선처치가 필요없어 임상적용에 매우 유리하며, 일반 히알루론산만을 이용한 필러와는 달리 체내에서 쉽게 분해되거나 흡수되지 않아 시술에 대한 부피확대효과를 더욱 장기간 안정적으로 유지할 수 있는 피부 충전제 조성물 및 이의 제조방법을 제공할 수 있다.In addition, according to the present invention does not contain a heterologous collagen (bovine collagen) that may cause an allergic reaction, there is no need for pre-treatment such as allergic reaction test before the procedure is very advantageous for clinical application, and fillers using only general hyaluronic acid and The present invention may provide a dermal filler composition and a method for preparing the same, which are not easily decomposed or absorbed in the body and thus can maintain the volumetric effect on the procedure for a longer period of time.

도 1은 본 발명의 일 실시예에 따른 가교된 히알루론산을 제조하는 주사기 장치를 개략적으로 나타낸 도면이다.
도 2는 본 발명의 일 실시예에 따른 피부 충전제 조성물의 제조방법을 나타낸 흐름도이다.
도 3은 실시예 1의 제품의 사진이고, 도 4는 실시예 1의 제품을 니들 24G를 이용하여 1㎖를 슬라이드 글라스에 사출한 사진이다.
도 5는 실시예 2의 제품의 사진이고, 도 6은 실시예 2의 제품을 니들 24G를 이용하여 1㎖를 슬라이드 글라스에 사출한 사진이다.
도 7은 도 6을 현미경으로 관찰한 사진이다.
도 8은 도 6을 커버글라스를 덮고 현미경으로 관찰한 사진이다.1 is a view schematically showing a syringe device for producing a cross-linked hyaluronic acid according to an embodiment of the present invention.
2 is a flowchart illustrating a method of preparing a skin filler composition according to an embodiment of the present invention.
3 is a photograph of the product of Example 1, Figure 4 is a photograph of the injection of the product of Example 1 to the slide glass using a needle 24G.
5 is a photograph of the product of Example 2, Figure 6 is a photograph of the injection of the product of Example 2 in the slide glass using a needle 24G.
FIG. 7 is a photograph of FIG. 6 observed under a microscope. FIG.
FIG. 8 is a photograph of FIG. 6 covering a cover glass and observed with a microscope.

기타 실시예들의 구체적인 사항들은 상세한 설명 및 도면들에 포함되어 있다.Specific details of other embodiments are included in the detailed description and the drawings.

본 발명의 이점 및 특징, 그리고 그것들을 달성하는 방법은 첨부되는 도면과 함께 상세하게 후술되어 있는 실시예들을 참조하면 명확해질 것이다. 그러나 본 발명은 이하에서 개시되는 실시예들에 한정되는 것이 아니라 서로 다른 다양한 형태로 구현될 수 있으며, 이하의 설명에서 달리 명시되지 않는 한, 본 발명에 성분, 반응 조건, 성분의 함량을 표현하는 모든 숫자, 값 및/또는 표현은, 이러한 숫자들이 본질적으로 다른 것들 중에서 이러한 값을 얻는 데 발생하는 측정의 다양한 불확실성이 반영된 근사치들이므로, 모든 경우 "약"이라는 용어에 의해 수식되는 것으로 이해되어야 한다. 또한, 본 기재에서 수치범위가 개시되는 경우, 이러한 범위는 연속적이며, 달리 지적되지 않는 한 이러한 범위의 최소값으로부터 최대값이 포함된 상기 최대값까지의 모든 값을 포함한다. 더 나아가, 이러한 범위가 정수를 지칭하는 경우, 달리 지적되지 않는 한 최소값으로부터 최대값이 포함된 상기 최대값까지를 포함하는 모든 정수가 포함된다Advantages and features of the present invention and methods for achieving them will be apparent with reference to the embodiments described below in detail with the accompanying drawings. However, the present invention is not limited to the embodiments disclosed below, but may be embodied in various different forms, and unless stated otherwise in the following description, the present invention expresses components, reaction conditions, and contents of components. All numbers, values, and / or expressions are to be understood as being modified in all cases by the term "about" as these numbers are essentially approximations reflecting the various uncertainties in the measurement that occur among others. . Also, where numerical ranges are disclosed herein, these ranges are continuous and include all values from the minimum to the maximum including the maximum, unless otherwise indicated. Furthermore, where such ranges refer to integers, all integers are included, including the minimum to the maximum including the maximum unless otherwise indicated.

또한, 본 발명에서 범위가 변수에 대해 기재되는 경우, 상기 변수는 상기 범위의 기재된 종료점들을 포함하는 기재된 범위 내의 모든 값들을 포함하는 것으로 이해될 것이다. 예를 들면, "5 내지 10"의 범위는 5, 6, 7, 8, 9, 및 10의 값들뿐만 아니라 6 내지 10, 7 내지 10, 6 내지 9, 7 내지 9 등의 임의의 하위 범위를 포함하고, 5.5, 6.5, 7.5, 5.5 내지 8.5 및 6.5 내지 9 등과 같은 기재된 범위의 범주에 타당한 정수들 사이의 임의의 값도 포함하는 것으로 이해될 것이다. 예를 들면, "10% 내지 30%"의 범위는 10%, 11%, 12%, 13% 등의 값들과 30%까지를 포함하는 모든 정수들 뿐만 아니라 10% 내지 15%, 12% 내지 18%, 20% 내지 30% 등의 임의의 하위 범위를 포함하고, 10.5%, 15.5%, 25.5% 등과 같이 기재된 범위의 범주 내의 타당한 정수들 사이의 임의의 값도 포함하는 것으로 이해될 것이다.In addition, where a range is described for a variable in the present invention, it will be understood that the variable includes all values within the described range including the listed endpoints of the range. For example, the range "5 to 10" includes any subrange such as 6 to 10, 7 to 10, 6 to 9, 7 to 9, as well as values of 5, 6, 7, 8, 9, and 10. And any value between integers that are within the scope of the described range, such as 5.5, 6.5, 7.5, 5.5-8.5, 6.5-9, and the like. For example, the range of "10% to 30%" ranges from 10% to 11%, 12%, 13% and the like and all integers including up to 30% as well as 10% to 15%, 12% to 18%. It will be understood to include any subranges such as%, 20% to 30%, etc., and to include any value between reasonable integers within the range of the stated range, such as 10.5%, 15.5%, 25.5% and the like.

본 발명의 일 실시예에 따른 피부 충전제 조성물은 가교된 히알루론산 및 비가교된 히알루론산 중 어느 하나 이상; 가교된 덱스트란(cross-linked dextran); 하이드록시프로필 메틸셀룰로오스 (HPMC); 수산화나트륨(NAOH); 및 생리식염수;를 포함할 수 있다.Dermal filler composition according to an embodiment of the present invention is any one or more of cross-linked hyaluronic acid and non-crosslinked hyaluronic acid; Cross-linked dextran; Hydroxypropyl methylcellulose (HPMC); Sodium hydroxide (NAOH); And physiological saline.

히알루론산(hyaluronic acid, HA)은 히알루로난(Hyaluronan)을 의미하는 것으로, 인체 전체에 걸쳐 결합, 상피, 및 신경 조직에 널리 분포되어 있는 비-황산화된 글리코스아미노글리칸이다. 히알루로난은 피부의 여러상이한 층에 풍부하며, 예를 들면, 양호한 수분공급을 보장하는 것, 세포외 매트릭스의 조직을 받쳐주고, 충전 물질로서 기능하고, 조직 재생 메커니즘에 관여하는 것과 같은 복합적인 기능을 갖는다. 그렇지만, 노화와 더불어, 피부에 존재하는 히알루론산, 콜라겐, 엘라스틴, 및 다른 매트릭스 중합체의 양은 감소한다. 예를 들면, 예컨대, 태양으로부터의 자외선에의 반복적 노출은 진피 세포로 하여금 이들의 히알루론산 의 생산을 줄이는 것은 물론이고 이의 분해 속도를 증가시키게 한다. 이러한 히알루론산 손실은 예컨대, 불완전, 결손, 질환 및/또는 장애, 등과같은 다양한 피부 병증을 유발한다. 예를 들면, 피부내 수분 함량과 진피 조직 내 히알루론산 의 수준 사이에는 강한 상관관계가 존재한다. 피부가 노화되면서, 피부 내 히알루론산의 양 및 질은 감소된다. 이러한 변화는 피부의 건조 및 깊은주름을 야기한다.Hyaluronic acid (HA) means hyaluronan, which is a non-sulphated glycosaminoglycan that is widely distributed throughout the body in bonds, epithelium, and nervous tissues. Hyaluronan is abundant in many different layers of the skin and is complex, for example, to ensure good hydration, to support tissue in the extracellular matrix, to function as a filler material, and to participate in tissue regeneration mechanisms. Has the function. However, with aging, the amount of hyaluronic acid, collagen, elastin, and other matrix polymers present in the skin decreases. For example, repeated exposure to ultraviolet light from the sun, for example, allows dermal cells to reduce their production of hyaluronic acid as well as to increase their rate of degradation. Such hyaluronic acid loss leads to various dermatological conditions such as, for example, incompleteness, defects, diseases and / or disorders, and the like. For example, there is a strong correlation between the moisture content in the skin and the level of hyaluronic acid in the dermal tissue. As the skin ages, the amount and quality of hyaluronic acid in the skin decreases. This change causes dryness and deep wrinkles of the skin.

히알루론산은 β-D-glucuronic acid와 β-D-N-acetylglucosamine이 상호베타 결합으로 이루어진 직쇄상의 긴 고분자 물질로서, 그 분자량은 기원, 제조 미 정제방법에 따라 0.1 x 10⁶ ~ 10 x 10⁶ Dalton으로 매우 다양하다. 히알루론산은 수용액 상에서 점성, 탄성 및 보습성을 가지며, 이러한 성질은 히알루론산의 분자량과 농도에 의하여 좌우된다.Hyaluronic acid is a linear long polymer substance composed of β-D-glucuronic acid and β-DN-acetylglucosamine, which have a mutual beta bond. The molecular weight is 0.1 x 10⁶ to 10 x 10⁶ Dalton depending on the origin and unpurified method. As very diverse. Hyaluronic acid is viscous, elastic and moisturizing in aqueous solution, and this property depends on the molecular weight and concentration of hyaluronic acid.

덱스트란 (Dextran)은 α-1,6 linked D-glucopyranose로 구성된 다당류 형태의 수용성 고분자로써, glucopyranose ring 내부에 많은 OH 그룹이 존재하여 극성이며 친수성인 화학물질과의 구조적 친화성을 가지고 있다. 텍스트란은 주로 미생물에 의한 합성을 통해 얻어지며 친수성, 무독성, 생화학적 친화성을 이유로 의약품이나 식품산업 등에 널리 활용되며, 특히 분자량이 작은 분획은 혈장 대용품의 대명사라 할 정도로 인체와 잘 조화를 이루는 고분자이다. 또한, 덱스르란을 주원료로 한 제품인 Dextran 40, Dextran 70의 수용액은 대용 혈청으로 이용될 수 있을 정도로 인체에 매우 안전한 물질이다.Dextran (Dextran) is a polysaccharide water-soluble polymer composed of α-1,6 linked D-glucopyranose. It has a lot of OH groups inside the glucopyranose ring and has structural affinity with a polar and hydrophilic chemical. Textran is mainly obtained through the synthesis by microorganisms and is widely used in medicine and food industry because of its hydrophilicity, nontoxicity and biochemical affinity. Particularly, small molecular weight fraction is well synonymous with human body, which is synonymous with plasma substitute. It is a polymer. In addition, the aqueous solutions of Dextran 40 and Dextran 70, which are mainly made of dextran, are very safe for the human body to be used as a substitute serum.

이러한 덱스트란을 가교시킨, 가교된 덱스트란(Sephadex)는 단백질 분리(겔 크로마토그래피)에 잘 사용되는 하이드로겔(hydrogel)의 형태로, 다당류이고 큰 고분자 사슬에 있는 수산기(-OH) 때문에, 매우 극성을 가지며, 이에 다량의 물을 흡수할 수 있다. 하이드로겔은 그들이 물을 재흡수하여 팽윤하는 능력에 따라서 특성을 나타낸다. 이러한 하이드로겔은 물에 녹지 않으며 약한 산화제, 환원제, 약한 염기에 대해서 안정하다. 이와 같이, 가교된 덱스트란은 친수성이고 매우 낮은 비특이적 흡착을 나타내기 때문에 이온 교환 매트릭스의 기초로서 특히 적합하다.Crosslinked dextran (Sephadex), which has been crosslinked with such dextran, is a hydrogel that is well used for protein separation (gel chromatography), because of the polysaccharides and hydroxyl groups (-OH) in the large polymer chains. It is polar and can absorb large amounts of water. Hydrogels are characterized by their ability to reabsorb water and swell. These hydrogels are insoluble in water and stable to weak oxidizing agents, reducing agents, and weak bases. As such, crosslinked dextran is particularly suitable as a basis for ion exchange matrices because it is hydrophilic and exhibits very low nonspecific adsorption.

본 실시예에 따른 피부 충전제 조성물은 피부 등에 주사되어 사용되는 필러의 조성물일 수 있는데, 중량%로, 0.01 내지 0.5중량% 히알루론산, 0.01 내지 3중량% 제1 가교된 덱스트란(cross-linked dextran), 3 내지 5중량% 제2 가교된 덱스트란, 0.01 내지 0.2중량% 하이드록시프로필 메틸셀룰로오스 (HPMC), 0.01 내지 0.1중량% 수산화나트륨(NaOH) 및 잔량의 생리식염수로 이루어지고, pH는 5.5 내지 8이고, 점도는 1000mPa-s 내지 5000mPa-s일 수 있다.The dermal filler composition according to the present embodiment may be a composition of a filler to be used by injection into the skin, etc., by weight%, 0.01 to 0.5% by weight hyaluronic acid, 0.01 to 3% by weight first cross-linked dextran ), 3 to 5 wt% second crosslinked dextran, 0.01 to 0.2 wt% hydroxypropyl methylcellulose (HPMC), 0.01 to 0.1 wt% sodium hydroxide (NaOH) and residual physiological saline, pH of 5.5 To 8, and the viscosity may be 1000 mPa-s to 5000 mPa-s.

본 실시예에 따른 피부 충전제 조성물은 팽윤도가 서로 다른 제1 및 제2 가교되 덱스트란과 함께, 가교된 히알루론산 및 비가교된 히알루론산 어느 하나 이상과, 하이드록시프로필 메틸셀룰로어스, 수산화나트륨 및 생리식염수를 포함할 수 있다. 상기 피부 충전제 조성물은 상기 제1 가교된 덱스트란과 제2 가교된 덱스트란에 의하여 인체에서 피부의 꺼진부분, 주름 등을 충진하되 상기 제1 및 제2 가교된 덱스트란의 서로 다른 팽윤도, 가교도와 이들의 함량을 조절함으로써, 인체에 무해하면서 부작용없이 장기간 유지되고, 주사를 이용하여 주입시에도 제어가 용이하여 균일한 형상으로 용이하게 구현이 가능하다.The dermal filler composition according to the present embodiment, together with the first and second crosslinked dextran having different swelling degrees, at least one of crosslinked hyaluronic acid and uncrosslinked hyaluronic acid, hydroxypropyl methylcellulose and sodium hydroxide. And physiological saline. The dermal filler composition fills off portions of the skin, wrinkles, and the like in the human body by the first crosslinked dextran and the second crosslinked dextran, and the swelling degree and crosslinking degree of the first and second crosslinked dextran are different. By adjusting their content, it is harmless to the human body and is maintained for a long time without side effects, and can be easily implemented in a uniform shape by easy control even during injection by injection.

상기 제1 가교된 덱스트란은, 중량평균 분자량이 30000 내지 50000인 비가교 덱스트란을 가교시켜 중량평균 분자량이 500000 이상으로 제조되어 구비되고, 상기 제1 가교된 덱스트란이 수분을 함유한 입자의 평균직경은 63㎛ 내지 235㎛이고, 증류수에서 팽윤도는 4g/g 내지 6g/g일 수 있다. 바람직하게는, 상기 제1 가교된 덱스트란은 중량평균 분자량이 500000 내지 50000000일 수 있으며, 더욱 바람직하게는 중량평균 분자량이 700000 내지 1500000일 수 있다.The first cross-linked dextran is cross-linked non-crosslinked dextran having a weight average molecular weight of 30000 to 50000 to prepare a weight average molecular weight of 500000 or more, wherein the first cross-linked dextran of the water-containing particles The average diameter is 63 μm to 235 μm, and the degree of swelling in distilled water may be 4 g / g to 6 g / g. Preferably, the first crosslinked dextran may have a weight average molecular weight of 500000 to 50000000, more preferably a weight average molecular weight of 700000 to 1500000.

상기 제2 가교된 덱스트란은, 중량평균 분자량이 60000 내지 80000인 비가교 덱스트란을 가교시켜 중량평균 분자량이 500000 이상으로 제조되어 구비되고, 상기 제2 가교된 덱스트란이 수분을 함유한 입자의 평균직경은 100㎛ 내지 300㎛이고, 증류수에서 팽윤도는 9g/g 내지 11/g일 수 있다. 바람직하게는, 상기 제2 가교된 덱스트란은 중량평균 분자량이 500000 내지 50000000일 수 있으며, 더욱 바람직하게는 중량평균 분자량이 700000 내지 1500000일 수 있다.The second crosslinked dextran is prepared by crosslinking a non-crosslinked dextran having a weight average molecular weight of 60000 to 80000 and having a weight average molecular weight of 500000 or more, and wherein the second crosslinked dextran is composed of water-containing particles. The average diameter is 100㎛ to 300㎛, the degree of swelling in distilled water may be 9g / g to 11 / g. Preferably, the second crosslinked dextran may have a weight average molecular weight of 500000 to 50000000, more preferably a weight average molecular weight of 700000 to 1500000.

상기 제1 및 제2 가교된 덱스트란은 분자량은 동일 또는 유사하되, 가교도가 상이하도록 구비되어 팽윤도가 다르게 구비될 수 있다.The first and second cross-linked dextran may have the same or similar molecular weight, but different crosslinking degrees to provide different swelling degrees.

상기 제1 및 제2 가교된 덱스트란이 평형팽윤 상태에서, 상기 제2 가교된 덱스트란의 부피는 상기 제1 가교된 덱스트란의 부피에 대해서 65 내지 75부피%일 수 있다.In the state where the first and second crosslinked dextran are in equilibrium and swelling, the volume of the second crosslinked dextran may be 65 to 75% by volume relative to the volume of the first crosslinked dextran.

상기 제1 가교된 덱스트란은 중량평균 분자량이 30000 내지 50000인 비가교 덱스트란을 가교시켜 구비되고, 상기 제2 가교된 덱스트란은, 중량평균 분자량이 60000 내지 80000인 비가교 덱스트란을 가교시켜 구비될 수 있는데, 상기 제1 가교된 덱스트란은 상기 제2 가교된 덱스트란보다 상대적으로 높은 가교도를 갖도록 구비될 수 있다.The first crosslinked dextran is provided by crosslinking a non-crosslinked dextran having a weight average molecular weight of 30000 to 50000, and the second crosslinked dextran is crosslinked with a non-crosslinked dextran having a weight average molecular weight of 60000 to 80000. It may be provided, the first crosslinked dextran may be provided to have a relatively high degree of crosslinking than the second crosslinked dextran.

(식 1) 0.8 ≤ Mw₁/Mw₂ ≤ 1.5(Expression 1) 0.8 ≤ Mw₁ / Mw₂ ≤ 1.5

본 발명의 실시예에서는 제1 가교된 덱스트란의 중량평균 분자량과, 제2 가교된 덱스트란의 중량평균 분자량이 식 1인 0.8 〈 Mw₁/Mw₂ 〈 1.5의 범위를 만족하도록 구비될 수 있다. 상기 제1 가교된 덱스트란과 상기 제1 가교된 덱스트란은 서로 상이한 중량평균 분자량을 갖는 비가교 덱스트란을 가교하여 제조되는데, 이때 상이한 가교도로 가교되어 전술한 범위 내의 식을 만족하도록 구비될 수 있다. 상기 제1 가교된 덱스트란은 서로 다른 가교도를 구비하고, 이에 의하여 서로 다른 수분함유율과 팽윤도를 갖도록 구비되어 피부 충전제 조성물로 피부 내에서 장기간 유지되며, 또한 일정 시간 후에 균일하게 분해되어 피부 내에 잔여물이 잔존하지 않도록 할 수 있다. 상기 Mw₁/Mw₂이 0.8 미만이면 제2가교된 덱스트란의 함량이 증가하여 유지시간이 감소하고 추후 상기 제1 가교된 덱스트란과 제2 가교된 덱스트란 사이의 분해시간 차이에 의하여 잔여물이 형성될 수 있으며, 1.5 미만인 경우에는 가교도가 상대적으로 높은 제1 가교된 덱스트란의 함량이 증가하여 히알루론산과의 혼합력이 저하되고 피부에 주입후 상대적으로 단단한 부분이 형성될 수 있으며, 또한, 상기 제1 가교된 덱스트란과 제2 가교된 덱스트란 사이의 분해시간 차이가 발생할 수 있다.In an embodiment of the present invention, the weight average molecular weight of the first crosslinked dextran and the weight average molecular weight of the second crosslinked dextran may be provided so as to satisfy a range of 0.8 <Mw₁ / Mw₂ <1.5 in Formula 1. . The first crosslinked dextran and the first crosslinked dextran are prepared by crosslinking a non-crosslinked dextran having a different weight average molecular weight from each other, wherein the crosslinked dextran may be crosslinked with a different crosslinking degree to satisfy the formula within the aforementioned range. have. The first crosslinked dextran has a different degree of crosslinking, thereby having different water content and swelling degree, so that the first crosslinked dextran is maintained in the skin as a skin filler composition for a long time, and after a predetermined time, it is uniformly decomposed to remain in the skin. This can be prevented from remaining. If the Mw₁ / Mw₂ is less than 0.8, a second The content of crosslinked dextran is increased so that the retention time is reduced, and residues may be formed later due to the difference in decomposition time between the first crosslinked dextran and the second crosslinked dextran. The relatively high content of the first crosslinked dextran may be increased to decrease the mixing power with hyaluronic acid and to form a relatively hard portion after injection into the skin. Also, the first crosslinked dextran and the second crosslinking may be formed. Degradation time differences between the dextrans may occur.

본 실시예에 따른 피부 충전제 조성물에서, 상기 가교된 히알루론산은 분자량이 1000000Da 내지 1550000Da인 고분자 히알루론산을 이용하여 가교제로 가교 반응시켜 제조되고, 상기 가교제는 디비닐술폰 (DVS, DiVinyl Sulfone), 비스에틸카르보디이미드 (BCDI, Bis ethyl CarboDiimIde), 부탄디올디그리시딜에테르 (BDDE, ButaneDiol Diglycidyl Ether) 및 폴리에틸렌글리콜(PEG, PolyEthylene Glycol) 중 어느 하나 이상일 수 있다. 바람직하게는, 상기 가교제는 부탄디올디그리시딜에테르 (BDDE, ButaneDiol Diglycidyl Ether)일 수 있다.In the dermal filler composition according to the present embodiment, the crosslinked hyaluronic acid is prepared by crosslinking reaction with a crosslinking agent using a polymer hyaluronic acid having a molecular weight of 1000000 Da to 1550000 Da, and the crosslinking agent is divinyl sulfone (DVS, DiVinyl Sulfone), bis At least one of ethyl carbodiimide (BCDI, Bis ethyl CarboDiimIde), butanediol diglycidyl ether (BDDE, ButaneDiol Diglycidyl Ether) and polyethylene glycol (PEG, PolyEthylene Glycol) may be used. Preferably, the crosslinking agent may be ButaneDiol Diglycidyl Ether (BDDE).

별법으로, 상기 히알루론산은 비가교된 히알루론산과 가교된 히알루론산이 중량비로 4:6으로 혼합하여 구비될 수 있다. 본 실시예에 따른 비가교된 히알루론사과 가교된 히알루론산 이 혼합된 히알루론산은, 비가교된 히알루론산을 제조하는 단계; 가교된 히알루론산을 제조하는 단계; 및 상기 가교된 히알루론산을 생리식염수에 혼합한 후, 상기 가교된 히알루론산이 구비된 생리식염수 중에 상기 비가교된 히알루론산을 첨가하여 상온에서 150rpm 내지 180rpm으로 24시간 동안 교반하여 혼합하는 단계;를 포함할 수 있다.Alternatively, the hyaluronic acid may be provided by mixing uncrosslinked hyaluronic acid and crosslinked hyaluronic acid in a weight ratio of 4: 6. Hyaluronic acid is a mixture of the non-crosslinked hyaluronic acid and crosslinked hyaluronic acid according to the present embodiment, preparing a non-crosslinked hyaluronic acid; Preparing a crosslinked hyaluronic acid; And mixing the crosslinked hyaluronic acid with physiological saline, and then adding the non-crosslinked hyaluronic acid to the physiological saline equipped with the crosslinked hyaluronic acid and stirring the mixture at 150 rpm to 180 rpm for 24 hours at room temperature. It may include.

상기 비가교된 히알루론산을 제조하는 단계는, 상온에서 중량평균 분자량(Mn)이 1100000Da인 히알루론산 나트륨 10g을 정제수 1000g에 용해시키고, 상기 히알루론산이 용해된 정제수로 강산성 양이온교환수지 80g를 첨가하고 25℃ 내지 30℃에서 48시간 동안 교반하면서 반응시킨다. 반응이 완료된 후 강산성 양이온교환수지를 여과하여 제거하고 1N의 NaHCO₃를 첨가하여 중화시킨 후 동결건조시켜 중량평균 분자량이 4500Da 내지 5500Da로 제조될 수 있다.In the preparing of the non-crosslinked hyaluronic acid, 10 g of sodium hyaluronate having a weight average molecular weight (Mn) of 1100000 Da is dissolved in 1000 g of purified water, and 80 g of a strong acid cation exchange resin is added to the purified water in which the hyaluronic acid is dissolved. The reaction is stirred at 25 ° C. to 30 ° C. for 48 hours. After completion of the reaction, the strong acid cation exchange resin was removed by filtration, neutralized by addition of 1N NaHCO₃ , and lyophilized to obtain a weight average molecular weight of 4500 Da to 5500 Da.

상기 비가교된 히알루론산은 중량평균 분자량(Mn)이 1100000Da인 히알루론산을 이용하여 제조될 수 있는데, 제조된 비가교된 히알루론산은 중량평균 분자량이 4500Da 내지 5500Da인 올리고(oligo) 히알루론산일 수 있다. 상기 히알루론산은 강산성 양이온교환수지의 첨가량과, 반응시간에 따라서 상기 비가교된 히알루론산의 분자량을 제어할 수 있는데, 전술한 범위로 상기 비가교된 히알루론산의 분자량을 제어함으로써 가교된 히알루론산과 균일하게 혼합되도록 할 수 있다.The non-crosslinked hyaluronic acid may be prepared using hyaluronic acid having a weight average molecular weight (Mn) of 1100000 Da, and the prepared non-crosslinked hyaluronic acid may be oligo hyaluronic acid having a weight average molecular weight of 4500 Da to 5500 Da. have. The hyaluronic acid may control the molecular weight of the non-crosslinked hyaluronic acid according to the addition amount of the strongly acidic cation exchange resin and the reaction time, and by controlling the molecular weight of the non-crosslinked hyaluronic acid within the aforementioned range, It can be mixed evenly.

상기 강산성 양이온교환수지를 이용하여 제조된 저분자량의 비가교된 히알루론산은 유리 및 무기 산에 의한 가수분해의 경우 흔히 발생할 수 있는 고리열린반응이 발생하지 않고, 효소 분해법에 의한 경우 흔히 발생할 수 있는 말단기의 이중 결합도 발생하지 않아 히알루론산의 구조를 변화시키지 않으면서 히알루론산의 분자량을 효과적으로 감소시킬 수 있다.The low molecular weight non-crosslinked hyaluronic acid prepared using the strongly acidic cation exchange resin does not occur a ring-opening reaction that may occur frequently in the case of hydrolysis by free and inorganic acids, and may occur frequently by enzymatic decomposition. The double bond of the end group does not occur, and the molecular weight of hyaluronic acid can be effectively reduced without changing the structure of hyaluronic acid.

또한, 전술한 방법에 의하여 제조된 비가교된 히알루론산은 세포독성이 없고, 상기 가교된 히알루론산보다 피부투과도도 향상되어 피부 충전제 조성물 내에서의 히알루론산의 기능을 효과적으로 제어할 수 있다.In addition, the non-crosslinked hyaluronic acid prepared by the above-described method is not cytotoxic, and the skin permeability is also improved than the crosslinked hyaluronic acid to effectively control the function of hyaluronic acid in the skin filler composition.

도 1은 본 발명의 일 실시예에 따른 가교된 히알루론산을 제조하는 주사기 장치를 개략적으로 나타낸 도면이다.1 is a view schematically showing a syringe device for producing a cross-linked hyaluronic acid according to an embodiment of the present invention.

도 1을 참조하면, 상기 가교된 히알루론산을 제조하는 단계는, 상온에서 중량평균 분자량(Mn)이 1000000Da인 히알루론산 나트륨 32g을 0.05mol/l 농도의 수산화 나트륨용액 80ml에 녹여 4.0중량% 농도의 히알루론산 수용액을 제조하고, 상기 히알루론산 수용액 중에 히알루론산 나트륨이 완전히 용해되면 알칼리도를 증가시키기 위하여 10mol/l 농도의 수산화 나트륨용액 4ml를 첨가한다. 이어서, 상기 히알루론산 수용액을 주사기(110)를 포함한 주사기 장치(100)에 투입하여 0.2ml/min의 속도로 흘려보내 상기 주사기의 입구(120)에서 낙하시켜 미세방울 형태(10)의 히알루론산 수용액을 제조하고, 상기 주사기의 입구(120)에서 낙하되는 미세방울 형태(10)의 히알루론산 수용액은 0.4ml의 디비닐술폰과 40ml의 이소부틸알콘 혼합용액 중으로 적하시켜 상온에서 24시간 동안 140rpm 내지 160rpm으로 교반하여 반응시켜 미세구슬 형태의 가교된 히알루론산을 제조할 수 있다.Referring to Figure 1, the step of preparing the cross-linked hyaluronic acid, 32 g of sodium hyaluronate having a weight average molecular weight (Mn) of 1000000 Da at room temperature dissolved in 80 ml of 0.05 mol / l sodium hydroxide solution of 4.0% by weight A hyaluronic acid aqueous solution is prepared, and when sodium hyaluronate is completely dissolved in the aqueous hyaluronic acid solution, 4 ml of sodium hydroxide solution having a concentration of 10 mol / l is added to increase alkalinity. Subsequently, the hyaluronic acid aqueous solution is injected into thesyringe device 100 including thesyringe 110 and flows at a rate of 0.2 ml / min, and drops from theinlet 120 of the syringe to drop the hyaluronic acid aqueous solution in the form of a micro drop (10). The hyaluronic acid aqueous solution in the form ofmicrodrops 10 falling from theinlet 120 of the syringe was dropped into 0.4 ml of divinyl sulfone and 40 ml of isobutyl alcohol mixture solution at 140 rpm to 160 rpm for 24 hours at room temperature. The reaction may be carried out by stirring to prepare cross-linked hyaluronic acid in the form of microbeads.

상기 주사기 장치(100)는 상기 미세방울 형태(10)의 히알루론산이 배출되는 상기 주사기 입구(120)를 감싸는 쿨링튜브(130)를 더 포함하고, 상기 쿨링튜브(130)와 상기 주사기 입구(120) 사이에 압력이 5psi인 압축공기가 공급되며, 상기 주사기(110) 내로 흐르는 상기 히알루론산 수용액의 속도는 시린지펌프를 이용하여 제어될 수 있다.Thesyringe device 100 further includes acooling tube 130 surrounding thesyringe inlet 120 through which the hyaluronic acid of themicrodrop shape 10 is discharged, and thecooling tube 130 and thesyringe inlet 120 Compressed air having a pressure of 5 psi is supplied between the s) and the rate of the aqueous hyaluronic acid solution flowing into thesyringe 110 may be controlled using a syringe pump.

상기 가교된 히알루론산은 히알루론산을 가교시켜 겔화하기 위하여 물과 혼합되지 않은 저분자 알코올에 가교제서 디비닐술폰을 혼합한 후 가교제/알코올 혼합액에 히알루론산 수용액을 분산시키는 W/O 방법으로 미세구슬 형태의 히알루론산을 제조할 수 있다. 전술한 방법에 의하여 제조된 가교된 히알루론산은 히알루론산의 가교도를 효과적으로 제어할 수 있고, 세포독성이 없으며 피부 충전제 조성물로 혼합되어 피부 내에서 손실된 피부조직을 수복하는 피내보형물로 사용되는 경우, 소정기간 동안 필러에 의한 효과가 균일하게 유지되도록 할 수 있다.The crosslinked hyaluronic acid is mixed with divinyl sulfone in low molecular weight alcohol not mixed with water in order to crosslink and gel the hyaluronic acid, and then fine bead form in a W / O method in which a hyaluronic acid aqueous solution is dispersed in a crosslinking agent / alcohol mixture. Hyaluronic acid can be prepared. The crosslinked hyaluronic acid prepared by the above-described method can effectively control the degree of crosslinking of hyaluronic acid, and when used as an intradermal implant which is not cytotoxic and mixed with the skin filler composition to repair the lost skin tissue in the skin, The effect by the filler can be kept uniform for a predetermined period of time.

상기 가교된 히알루론산과 비가교된 히알루론산의 혼합은, 상기 가교된 히알루론산을 생리식염수에 혼합하고, 여기에 비가교된 히알루론산을 첨가하여 혼합하여 히알루론산이 구비될 수 있다. 이에 가교된 히알루론산이 상기 생리식염수와 혼합되어 겔상태가 된 후 여기에 저분자량으로 구비되는 비가교된 히알루론산을 혼합함으로써 상기 가교된 히알루론산 사이 공극으로 상기 비가교된 히알루론산이 용이하게 침투하여 균질화되고 전체적인 히알루론산의 부피를 감소시키되 효과는 향상시킬 수 있다. 또한, 상기 비가교된 히알루론산은 저분자량으로 상기 가교된 히알루론산에 의하여 높아지는 점도를 감소시키되 물리적 특성은 향상시켜 피부 충전제로 이용시 피부로 주입성과 히알루론산의 효과를 보다 향상시킬 수 있다.The cross-linked hyaluronic acid and the non-crosslinked hyaluronic acid may be mixed with hyaluronic acid by mixing the cross-linked hyaluronic acid, and adding non-crosslinked hyaluronic acid to the hyaluronic acid. The non-crosslinked hyaluronic acid easily penetrates into the pores between the crosslinked hyaluronic acid by mixing crosslinked hyaluronic acid with the physiological saline to form a gel and then mixing the non-crosslinked hyaluronic acid provided with low molecular weight thereto. To homogenize and reduce the overall volume of hyaluronic acid while improving the effect. In addition, the non-crosslinked hyaluronic acid at a low molecular weight reduces the viscosity that is increased by the cross-linked hyaluronic acid, but improves the physical properties can be used to improve the effects of injectability and hyaluronic acid into the skin when used as a skin filler.

또한, 상기 가교된 히알루론산은 입자의 형태로 제조되기 때문에 주사기 바늘을 통해서 주입될 때 주입력이 높으므로, 상기 비가교된 히알루론산을 저분자로 혼합함으로써 상기 비가교된 히알루론산이 윤활제로서 기능할 수 있다.In addition, since the crosslinked hyaluronic acid is manufactured in the form of particles, the injection power is high when injected through a syringe needle, so that the non-crosslinked hyaluronic acid may function as a lubricant by mixing the non-crosslinked hyaluronic acid with a low molecule. Can be.

본 발명의 그 외의 실시예에 따르면, 상기 히알루론산은 비가교된 히알루론산을 이용하되, 상기 히알루론산의 점도가 감소하도록 상기 히알루론산으로 전자선을 조사하는 것을 더 포함할 수 있다.According to another embodiment of the present invention, the hyaluronic acid may further include irradiating an electron beam with the hyaluronic acid so as to reduce the viscosity of the hyaluronic acid by using a non-crosslinked hyaluronic acid.

본 실시예에 따른 히알루론산은, 분말상태의 히알루론산 나트륨 60g에 대해서 4㎖의 초순수를 첨가하여 상온에서 원심믹서 (Planetary Centrifugal Mixer)를 이용하여 1800rpm 내지 2500rpm으로 30초 내지 1분 동안 혼합하여 히알루론산 페이스트를 제조하고, 상기 히알루론산 페이스트 측으로 전류량이 0.05mA이고 조사량이 1kGy 내지 2kGy가 되도록 전자선을 조사하여 구비될 수 있다.The hyaluronic acid according to this embodiment is added to 60 g of powdered sodium hyaluronate, and mixed with hyaluronic acid at 1800 rpm to 2500 rpm for 30 seconds to 1 minute using a planetary centrifugal mixer at room temperature. The lactic acid paste may be prepared, and the hyaluronic acid paste may be provided by irradiating an electron beam such that the current amount is 0.05 mA and the irradiation amount is 1 kGy to 2 kGy.

상기 히알루론산은 전자선 조사를 통하여 점도를 감소시킬 수 있는데, 전자선 조사 전의 히알루론산 수용액 (1 wt%인 경우)의 점도가 대략 1000cp 내지 1200cP인 반면, 전술한 바와 같이 상기 히알루론산에 전자선을 조사한 후 히알루론산 수용액 (1wt%인 경우)의 점도는 대략 100cP 내지 300cP로 감소되고, 바람직하게는 116cP 내지 293cP로 감소될 수 있다. 또한, 상기 히알루론산은 전자선 조사에 의하여 공극의 크기는 증가하나 전자선 조사 전후 동일하게 높은 다공도와 벌집 모양의 공극을 유지하므로 전자선 조사 자체에 의하여 히알루론산의 점도만이 변경될 뿐 구조자체는 영향을 주지 않는다.The hyaluronic acid can reduce the viscosity through electron beam irradiation, while the viscosity of the aqueous hyaluronic acid solution (when 1 wt%) before the electron beam irradiation is approximately 1000 cps to 1200 cP, whereas after the electron beam is irradiated to the hyaluronic acid as described above The viscosity of the aqueous hyaluronic acid solution (when 1 wt%) is reduced to approximately 100 cP to 300 cP, preferably to 116 cP to 293 cP. In addition, the hyaluronic acid increases the pore size by electron beam irradiation, but maintains the same porosity and honeycomb-like pores before and after the electron beam irradiation, only the viscosity of the hyaluronic acid is changed by the electron beam irradiation itself, the structure itself is affected. Do not give.

일반적으로 히알루론산은 높은 점도로 구비되는데, 본 실시예 따른 히알루론산은 저점도로 구비된다. 이에 의하여, 상기 제1 및 제2 가교된 덱스트란 중에 용이하게 혼합될 수 있어 상기 제1 및 제2 가교된 덱스트란 사이의 공극을 효율적으로 채울 수 있다. 따라서, 전자선 조사에 의하여 점도가 감소된 히알루론산을 이용하여 피부 충전제 조성물로 이용하는 경우, 상기 피부 충전제 조성물의 이동이 보다 효율적으로 진행되도록 할 수 있고 피부 내에서도 소정 시간 동안 균일하게 필러의 효과가 발휘되도록 할 수 있다.In general, hyaluronic acid is provided with a high viscosity, hyaluronic acid according to this embodiment is provided with a low viscosity. Thereby, it can be easily mixed in the first and second crosslinked dextran to efficiently fill the voids between the first and second crosslinked dextran. Therefore, when using the hyaluronic acid viscosity reduced by electron beam irradiation as a skin filler composition, the movement of the skin filler composition can be carried out more efficiently and the effect of the filler uniformly for a predetermined time even in the skin can do.

상기 전자선 조사시 상기 전자선 조사 장치는 EL V4-electron accelerator(energy 10MeV, beam power 570kW)를 이용하고, 전자선 소스와 히알루론산 페이스트의 간격은 50㎝로 이격시키되 상기 히알루론산 페이스트의 이동속도는 10m/min으로 수행된다.In the electron beam irradiation, the electron beam irradiation apparatus uses an EL V4-electron accelerator (energy 10MeV, beam power 570kW), and the distance between the electron beam source and the hyaluronic acid paste is spaced at 50 cm, but the moving speed of the hyaluronic acid paste is 10 m /. performed by min.

본 발명의 다른 측면에 따르면, 본 발명은 전술한 피부 충전제 조성물은 피부 연조직에 주입할 수 있는 필러(filler)로 이용할 수 있다.According to another aspect of the invention, the present invention can be used as a filler (filler) that can be injected into the skin filler composition described above.

본 실시예에 따른 피부 충전제 조성물은 겔 형태의 주사용(injectable)으로 사용할 수 있으며, 마취제, 폴리올, 비타민, 아미노산, 금속, 산화방지제, 및 미네랄염으로 이루어진 군으로부터 선택되는 하나 이상의 화합물을 추가로 포함할 수 있다.The dermal filler composition according to the present embodiment can be used as an injectable in the form of a gel, and further comprises at least one compound selected from the group consisting of anesthetics, polyols, vitamins, amino acids, metals, antioxidants, and mineral salts. It may include.

또한, 상기 피부 충전제 조성물은 미용상의 응용을 위한 키트의 용도로서, 피부의 주름살(wrinkle) 및 주름(line), 미간 주름(glabellar line), 비구순 주름(nasolabial fold), 턱 주름(chin fold), 마리오네트 주름(marionette line), 아래턱선(jawline), 구강 교련(buccal commissure), 입주위 주름살(perioral wrinkle), 눈가 잔주름(crow's feet), 피부 함몰부, 흉터, 관자, 눈썹의 진피하 지지부, 광대 및 볼 지방 패드, 눈물 도랑(tear trough), 코, 입술, 뺨, 턱, 입주위 영역, 안와하 영역, 및 안면 비대칭의 미용상 치료를 포함할 수 있다.In addition, the dermal filler composition is used as a kit for cosmetic applications, such as wrinkles (wrinkles) and wrinkles (line) of the skin (glabellar line), nasolabial folds (chin fold) Marionette lines, jawlines, buccal commissures, peripheral wrinkles, crow's feet, skin depressions, scars, temples, subdermal support of eyebrows, Cosmetic treatments of the cheek and cheek fat pads, tear troughs, nose, lips, cheeks, chin, peri-mouth area, sub-orbital area, and facial asymmetry.

도 2는 본 발명의 일 실시예에 따른 피부 충전제 조성물의 제조방법을 나타낸 흐름도이다.2 is a flowchart illustrating a method of preparing a skin filler composition according to an embodiment of the present invention.

도 2를 참조하면, 본 실시예는 제1 가교된 덱스트란과 제2 가교된 덱스트란 각각을 생리식염수와 혼합하여 제1 혼합물과 제2 혼합물을 준비하는 제1 단계; 히알루론산과 생리식염수를 혼합하여 제3 혼합물을 준비하는 제2 단계; 하이드록시프로필 메틸셀룰로오스 (HPMC)를 생리식염수와 혼합하여 제4 혼합물 준비하는 제3 단계; 및 상기 제1 혼합물, 제2 혼합물, 제3 혼합물 및 제4 혼합물을 혼합하는 제4 단계;를 포함하고, 상기 제1 가교된 덱스트란은 상기 제2 가교된 덱스트란보다 작은 팽윤도로 구비되는 피부 충전제 조성물의 제조방법을 포함한다.Referring to FIG. 2, this embodiment includes a first step of preparing a first mixture and a second mixture by mixing each of the first crosslinked dextran and the second crosslinked dextran with physiological saline; A second step of preparing a third mixture by mixing hyaluronic acid and physiological saline; A third step of preparing a fourth mixture by mixing hydroxypropyl methylcellulose (HPMC) with physiological saline; And a fourth step of mixing the first mixture, the second mixture, the third mixture, and the fourth mixture; wherein the first crosslinked dextran is provided with less swelling than the second crosslinked dextran A method of preparing the filler composition.

상기 제1 단계에서, 상기 제1 가교된 덱스트란은 중량평균 분자량이 30000 내지 50000인 비가교 덱스트란을 가교시켜 중량평균 분자량이 500000 이상으로 제조되어 구비되고, 상기 제2 가교된 덱스트란은 중량평균 분자량이 60000 내지 80000인 비가교 덱스트란을 가교시켜 중량평균 분자량이 500000 이상으로 제조되어 구비될 수 있다.In the first step, the first crosslinked dextran is cross-linked non-crosslinked dextran having a weight average molecular weight of 30000 to 50000 to prepare a weight average molecular weight of 500000 or more, the second crosslinked dextran is weight The non-crosslinked dextran having an average molecular weight of 60000 to 80000 may be crosslinked to prepare a weight average molecular weight of 500000 or more.

(식 1) 0.8 ≤ Mw₁/Mw₂ ≤ 1.5(Expression 1) 0.8 ≤ Mw₁ / Mw₂ ≤ 1.5

상기 제1 가교된 덱스트란이 수분을 함유한 입자의 평균직경은 63㎛ 내지 235㎛이고, 증류수에서 팽윤도는 4g/g 내지 6g/g이고, 상기 제2 가교된 덱스트란이 수분을 함유한 입자의 평균직경은 100㎛ 내지 300㎛이고, 증류수에서 팽윤도는 9g/g 내지 11/g일 수 있다.The average diameter of the water-containing particles of the first crosslinked dextran is 63 μm to 235 μm, the degree of swelling in distilled water is 4 g / g to 6 g / g, and the second crosslinked dextran contains water. The average diameter of is 100㎛ to 300㎛, the degree of swelling in distilled water may be 9g / g to 11 / g.

상기 제2 단계에서, 상기 히알루론산은 0.2N 내지 0.3N NaOH의 생리식염수 중에 첨가하여 농도가 8%(w/v) 내지 12%(w/v) 되도록 혼합하여 제3 혼합물을 제조할 수 있다.In the second step, the hyaluronic acid may be added to the physiological saline of 0.2N to 0.3N NaOH and mixed so that the concentration is 8% (w / v) to 12% (w / v) to prepare a third mixture. .

별법으로, 상기 제2 단계에서, 상기 히알루론산을 생리식염수와 혼합하기 전 분자량이 1000000Da 내지 1550000Da인 고분자 히알루론산을 이용하여 가교제로 가교 반응시켜 가교된 히알루론산을 제조하고, 상기 가교된 히알루론산을 0.2N 내지 0.3N NaOH의 생리식염수 중에 첨가하여 농도가 8%(w/v) 내지 12%(w/v) 되도록 혼합하여 제3 혼합물을 제조할 수 있다.Alternatively, in the second step, before the hyaluronic acid is mixed with physiological saline, using a polymer hyaluronic acid having a molecular weight of 1000000 Da to 1550000 Da crosslinking reaction with a crosslinking agent to prepare a crosslinked hyaluronic acid, the crosslinked hyaluronic acid A third mixture may be prepared by adding 0.2N to 0.3N NaOH in saline to mix at a concentration of 8% (w / v) to 12% (w / v).

상기 가교제는 디비닐술폰 (DVS, DiVinyl Sulfone), 비스에틸카르보디이미드 (BCDI, Bis ethyl CarboDiimIde), 부탄디올디그리시딜에테르 (BDDE, ButaneDiol Diglycidyl Ether) 및 폴리에틸렌글리콜(PEG, PolyEthylene Glycol) 중 어느 하나 이상일 수 있다.The crosslinking agent is any one of divinyl sulfone (DVS, DiVinyl Sulfone), bisethyl carbodiimide (BCDI, Bis ethyl CarboDiimIde), butanediol diglycidyl ether (BDDE, ButaneDiol Diglycidyl Ether) and polyethylene glycol (PEG, PolyEthylene Glycol) It may be abnormal.

이하 본 발명의 실시예 및 비교예를 기재한다. 그러나, 하기 실시예들은 본 발명의 바람직한 일 실시예일뿐 본 발명의 권리 범위가 하기 실시예들에 의하여 제한되는 것은 아니다.Hereinafter, examples and comparative examples of the present invention are described. However, the following examples are only preferred embodiments of the present invention and the scope of the present invention is not limited by the following examples.

실시예 및 비교예의 제조 및 평가Preparation and Evaluation of Examples and Comparative Examples

1. 가교된 덱스트란 함량에 따른 영향1. Effect of crosslinked dextran content

실시예 1Example 1

Dextran 40 6.24g을 20ml의 NaOH(1M 수용액)와 혼합하여, dual centrifugal mixer (Speed Mixer DAC 150, Hauschild Engineering, Germany)로 5분 동안 3000rpm으로 용해시켰다. 25% W/V의 덱스트란 용액을 제조하였다. 계면활성제인 2% W/V의 소르비탄 모노올레이트(sorbitan monooleate, Span 80, hydrophilic-lipophilic balance = 4.7)(Merck Chemicals, Darmstadt, Germany)이 용해된 245ml의 n-옥탄(Merck Chemicals, Darmstadt, Germany)이 구비된 반응기 내에 40℃의 온도를 유지하면서, 여기에 제조된 덱스트란 용액을 첨가하고 1300rpm으로 15분 동안 교반하여 W/O 에멀젼을 제조하였다. 온도를 동일하게 유지하고, 교반속도를 400rpm으로 낮춘 후, 실린지 펌프를 이용하여 4ml/h의 속도로 가교제인 에피클로로히드린(Epichlorohydrin, ECH) 2.1ml를 방울형태로 적가하고 18시간 동안 반응을 시켜 제1 가교된 덱스트란을 제조하였다. 제1 가교된 덱스트란은 마이크로 구형으로 Whatman filter paper (No. 42, Whatman, Brentford, UK)를 이용하여 필터링 한 후, n-옥탄과 정제수를 이용하여 세척한 후 진공에서 건조시켜 중량평균 분자량이 대략 600000인 분말상태의 제1 가교된 덱스트란을 제조하였다. 제1 가교된 덱스트란을 제1 가교된 덱스트란의 중량에 대해서 10배의 증류수 중에 투입한 후 100℃로 3시간 동안 가열하여 스웰링 시키고 상등액을 제거하였다. 스웰링된 제1 가교된 덱스트란을 스웰링된 제1 가교된 덱스트란보다 직경이 작은 체망을 이용하여 흡수되지 않은 잔류 증류수를 제거하였다. 수분을 함유한 입자의 평균직경이 113㎛이고, 팽윤도는 4.5g/g였다. 여기에, 생리식염수(0.9% 염화나트륨 수용액)를 이용하여 여러 번 세척한 후, 생리식염수를 첨가하고 수산화소듐(NaOH)(Sigma-Aldrich)를 추가하여 pH가 6.5인 제1 혼합물을 제조하였다. Dextran 60(Sigma-Aldrich) 8.5g을 20ml의 NaOH(1M 수용액)와 혼합하여, dual centrifugal mixer (Speed Mixer DAC 150, Hauschild Engineering, Germany)로 5분 동안 3000rpm으로 용해시켰다. 25% W/V의 덱스트란 용액을 제조하였다. 계면활성제인 2% W/V의 소르비탄 모노올레이트(sorbitan monooleate, Span 80, hydrophilic-lipophilic balance = 4.7)(Merck Chemicals, Darmstadt, Germany)이 용해된 245ml의 n-옥탄(Merck Chemicals, Darmstadt, Germany)이 구비된 반응기 내에 40℃의 온도를 유지하면서, 여기에 제조된 덱스트란 용액을 첨가하고 1300rpm으로 15분 동안 교반하여 W/O 에멀젼을 제조하였다. 온도를 동일하게 유지하고, 교반속도를 400rpm으로 낮춘 후, 실린지 펌프를 이용하여 4ml/h의 속도로 가교제인 에피클로로히드린(Epichlorohydrin, ECH) 1.3ml를 방울형태로 적가하고 18시간 동안 반응을 시켜 제2 가교된 덱스트란을 제조하였다. 제2 가교된 덱스트란은 마이크로 구형으로 Whatman filter paper (No. 42, Whatman, Brentford, UK)를 이용하여 필터링 한 후, n-옥탄과 정제수를 이용하여 세척한 후 진공에서 건조시켜 중량평균 분자량이 대략 600000인 분말상태의 제2 가교된 덱스트란을 제조하였다. 중량평균 분자량이 대략 600000인 분말상태의 제2 가교된 덱스트란을 제조하였다. 제2 가교된 덱스트란을 제2 가교된 덱스트란의 중량에 대해서 10배의 증류수 중에 투입한 후 100℃로 3시간 동안 가열하여 스웰링 시키고 상등액을 제거하였다. 스웰링된 제2 가교된 덱스트란을 스웰링된 제2 가교된 덱스트란보다 직경이 작은 체망를 이용하여 흡수되지 않은 잔류 증류수를 제거하였다. 수분을 함유한 입자의 평균직경이 218㎛이고, 팽윤도는 10.5g/g였다. 여기에, 생리식염수(0.9% 염화나트륨 수용액)를 이용하여 여러 번 세척한 후, 생리식염수를 첨가하고 수산화소듐(NaOH)(Sigma-Aldrich)를 추가하여 pH가 6.5인 제2 혼합물을 제조하였다. 평균분자량 1,500kDa의 비가교 히알루론산(Shiseido, 일본) 0.32g을 생리식염수(0.9% 염화나트륨 수용액) 5g 중에서 25℃에서 22시간 동안 용해시켜 제3 혼합물을 제조하였다. 겉보기 점도가 3,000 내지 5,600 CPS인 하이드록시프로필 메틸셀룰로오즈(HydroxyPropyl Methyl Cellulose, HPMC) (Sigma-Aldrich) 0.1g를 생리식염수(0.9% 염화나트륨 수용액) 5g 중에서 25℃에서 150시간 동안 용해시켜 제4 혼합물을 제조하였다. 전술한 방법으로 제조된 제1 혼합물, 제2 혼합물, 제3 혼합물 및 제4 혼합물을 혼합하고, 생리식염수(0.9% 염화나트륨 수용액)를 더 첨가하여 하기 표 2와 같은 피부 충전제 조성물을 제조하였다. 도 3은 실시예 1의 제품의 사진이고, 도 4는 실시예 1의 제품을 니들 24G를 이용하여 1㎖를 슬라이드 글라스에 사출한 사진이다.6.24 g of Dextran 40 was mixed with 20 ml of NaOH (1M aqueous solution) and dissolved at 3000 rpm for 5 minutes with a dual centrifugal mixer (Speed Mixer DAC 150, Hauschild Engineering, Germany). A 25% W / V dextran solution was prepared. 245 ml of n-octane (Merck Chemicals, Darmstadt, Germany) dissolved in a surfactant of 2% W / V sorbitan monooleate (Span 80, hydrophilic-lipophilic balance = 4.7) (Merck Chemicals, Darmstadt, Germany) While maintaining a temperature of 40 ℃ in a reactor equipped with Germany), the prepared dextran solution was added and stirred at 1300 rpm for 15 minutes to prepare a W / O emulsion. The temperature was kept the same, and the stirring speed was lowered to 400 rpm, and then 2.1 ml of the crosslinking agent, Epichlorohydrin (ECH), was added dropwise at a rate of 4 ml / h using a syringe pump and reacted for 18 hours. To prepare a first crosslinked dextran. The first crosslinked dextran was microspheroidally filtered using Whatman filter paper (No. 42, Whatman, Brentford, UK), washed with n-octane and purified water and dried in vacuo to obtain a weight average molecular weight. A powdered first crosslinked dextran was prepared which was approximately 600000. The first crosslinked dextran was added to 10 times the weight of the first crosslinked dextran in distilled water, and then heated to 100 ° C. for 3 hours to swell and the supernatant was removed. The swelled first crosslinked dextran was removed using a sieve smaller in diameter than the swelled first crosslinked dextran to remove unabsorbed distilled water. The average diameter of the particles containing water was 113 µm, and the degree of swelling was 4.5 g / g. After washing several times with physiological saline (0.9% aqueous sodium chloride solution), physiological saline was added and sodium hydroxide (NaOH) (Sigma-Aldrich) was added to prepare a first mixture having a pH of 6.5. 8.5 g of Dextran 60 (Sigma-Aldrich) was mixed with 20 ml of NaOH (1M aqueous solution) and dissolved at 3000 rpm for 5 minutes with a dual centrifugal mixer (Speed Mixer DAC 150, Hauschild Engineering, Germany). A 25% W / V dextran solution was prepared. 245 ml of n-octane (Merck Chemicals, Darmstadt, Germany) dissolved in a surfactant of 2% W / V sorbitan monooleate (Span 80, hydrophilic-lipophilic balance = 4.7) (Merck Chemicals, Darmstadt, Germany) While maintaining a temperature of 40 ℃ in a reactor equipped with Germany), the prepared dextran solution was added and stirred at 1300 rpm for 15 minutes to prepare a W / O emulsion. The temperature was kept the same, the stirring speed was lowered to 400 rpm, and then 1.3 ml of epichlorohydrin (ECH), a crosslinking agent, was added dropwise at a rate of 4 ml / h using a syringe pump and reacted for 18 hours. To prepare a second crosslinked dextran. The second crosslinked dextran was microspheroidally filtered using Whatman filter paper (No. 42, Whatman, Brentford, UK), washed with n-octane and purified water and dried in vacuo to obtain a weight average molecular weight. A powdered second crosslinked dextran was prepared which was approximately 600000. A powdered second crosslinked dextran was prepared having a weight average molecular weight of approximately 600000. The second crosslinked dextran was added to 10 times the weight of the second crosslinked dextran in distilled water, and then heated to 100 ° C. for 3 hours to swell and the supernatant was removed. The swelled second crosslinked dextran was removed using a sieve of smaller diameter than the swelled second crosslinked dextran to remove unabsorbed distilled water. The average diameter of the particles containing water was 218 µm, and the degree of swelling was 10.5 g / g. After washing several times with physiological saline (0.9% aqueous sodium chloride solution), physiological saline was added and sodium hydroxide (NaOH) (Sigma-Aldrich) was added to prepare a second mixture having a pH of 6.5. A third mixture was prepared by dissolving 0.32 g of non-crosslinked hyaluronic acid (Shiseido, Japan) having an average molecular weight of 1500 kDa in 5 g of physiological saline (0.9% aqueous sodium chloride solution) at 25 ° C. for 22 hours. 0.1 g of hydroxypropyl methyl cellulose (HPMC) (Sigma-Aldrich) having an apparent viscosity of 3,000 to 5,600 CPS was dissolved in 5 g of physiological saline (0.9% aqueous sodium chloride solution) at 25 ° C. for 150 hours. Prepared. The first mixture, the second mixture, the third mixture, and the fourth mixture prepared by the above-described method were mixed, and physiological saline (0.9% aqueous sodium chloride solution) was further added to prepare a skin filler composition as shown in Table 2 below. 3 is a photograph of the product of Example 1, Figure 4 is a photograph of the injection of the product of Example 1 to the slide glass using a needle 24G.

실시예 2Example 2

하기 표 1과 같이 제1 혼합물의 함량과, 제2 혼합물의 함량만을 다르게 하고 나머지는 실시예 1과 동일하게 피부 충전제 조성물을 제조하였다. 도 5는 실시예 2의 제품의 사진이고, 도 6은 실시예 2의 제품을 니들 24G를 이용하여 1㎖를 슬라이드 글라스에 사출한 사진이다. 도 7은 도 6을 현미경으로 관찰한 사진이다. 도 8은 도 6을 커버글라스를 덮고 현미경으로 관찰한 사진이다.As shown in Table 1, only the content of the first mixture and the content of the second mixture were different, and the remainder was prepared in the same manner as in Example 1. 5 is a photograph of the product of Example 2, Figure 6 is a photograph of the injection of the product of Example 2 in the slide glass using a needle 24G. FIG. 7 is a photograph of FIG. 6 observed under a microscope. FIG. FIG. 8 is a photograph of FIG. 6 covering a cover glass and observed with a microscope.

비교예 1Comparative Example 1

하기 표 1과 같이, 제1 혼합물과 제2 혼합물에서 덱스트란을 가교하지 않고 원재료 그대로인 Dextran 40과 Dextran 70을 각각 이용하되 나머지는 실시예 1과 동일하게 피부 충전제 조성물을 제조하였다.As shown in Table 1 below, the dermal filler composition was prepared in the same manner as in Example 1, using Dextran 40 and Dextran 70 as raw materials without crosslinking dextran in the first mixture and the second mixture.

비교예 1에서, 제1 혼합물은 Dextran 40(Sigma-Aldrich)을 생리식염수에 첨가하고, 여기에 수산화소듐(NaOH)(Sigma-Aldrich)를 추가하여 pH가 6.5으로 제조하고, 제2 혼합물은 Dextran 70(Sigma-Aldrich)을 생리식염수에 첨가하고, 여기에 수산화소듐(NaOH)(Sigma-Aldrich)를 추가하여 pH가 6.5으로 제조하여 이용하였다.In Comparative Example 1, the first mixture was prepared by adding Dextran 40 (Sigma-Aldrich) to physiological saline, and adding sodium hydroxide (NaOH) (Sigma-Aldrich) to pH 6.5, and the second mixture was Dextran. 70 (Sigma-Aldrich) was added to physiological saline, and sodium hydroxide (NaOH) (Sigma-Aldrich) was added thereto to prepare a pH of 6.5.

　실시예 1Example 1실시예 2Example 2비교예 1Comparative Example 1구분division함량 gContent g구분division함량 gContent g구분division함량 gContent g제1 혼합물First mixture제1 가교된 덱스트란First crosslinked dextran2.8562.856제1 가교된 덱스트란First crosslinked dextran0.5420.542Dextran 40Dextran 402.8562.856생리식염수Saline solution3030생리식염수Saline solution2020생리식염수Saline solution3030NaOHNaOH0.0250.025NaOHNaOH0.0120.012NaOHNaOH0.0250.025제2 혼합물Second mixture제2 가교된 덱스트란Second crosslinked dextran3.0513.051제2 가교된 덱스트란Second crosslinked dextran4.54.5Dextran 70Dextran 703.0513.051생리식염수Saline solution3030생리식염수Saline solution4040생리식염수Saline solution3030NaOHNaOH0.0280.028NaOHNaOH0.0310.031NaOHNaOH0.0280.028제3 혼합물Tertiary mixture비가교 히알루론산Non-crosslinked hyaluronic acid0.320.32비가교 히알루론산Non-crosslinked hyaluronic acid0.320.32비가교 히알루론산Non-crosslinked hyaluronic acid0.320.32가교 히알루론산Cross-linked hyaluronic acid00가교 히알루론산Cross-linked hyaluronic acid00가교 히알루론산Cross-linked hyaluronic acid00생리식염수Saline solution55생리식염수Saline solution55생리식염수Saline solution55제4 혼합물Fourth mixtureHPMCHPMC0.10.1HPMCHPMC0.10.1HPMCHPMC0.10.1생리식염수Saline solution55생리식염수Saline solution55생리식염수Saline solution55생리식염수Saline solution생리식염수Saline solution23.6223.62생리식염수Saline solution24.49524.495생리식염수Saline solution83.983.9

실험예 1 : ECH의 검출Experimental Example 1 Detection of ECH

실시예 1, 2 및 비교예 1, 덱스트란 가교시 사용된 가교제인 에피클로로히드린(ECH)가 잔류하는 지를 확인하기 위하여 하기 조건으로 GCMS로 확인하였다.Example 1, 2 and Comparative Example 1, to determine whether the epichlorohydrin (ECH), which is a crosslinking agent used in the crosslinking of dextran remains in GCMS under the following conditions.

GCMS : QP-2010 Ultra(Shimadzu co., Japan)GCMS: QP-2010 Ultra (Shimadzu co., Japan)

Head space : HS-20(Shimadzu co., Japan)Head space: HS-20 (Shimadzu co., Japan)

Column : Rtx-5ms(30 mХ0.25 mm I.D, 0.25 μm film thickness)Column: Rtx-5ms (30 mХ0.25 mm I.D, 0.25 μm film thickness)

Carrier gas : He 1.0 mL/minCarrier gas: He 1.0 mL / min

Injection mode : Split ratio(100:1)Injection mode: Split ratio (100: 1)

GC Column temp. : 60℃GC Column temp. : 60 ℃

MS Ion source temp. : 200℃MS Ion source temp. : 200 ℃

HS Oven temp. : 60℃HS Oven temp. : 60 ℃

HS instrument mode : LoopHS instrument mode: Loop

Ionization method : EIIonization method: EI

Ionization voltage : 70 eVIonization voltage: 70 eV

Injection volume : 1.0 mLInjection volume: 1.0 mL

StandardStandard실시예 1Example 1실시예 2Example 2비교예 1Comparative Example 1EpichlorohydrinEpichlorohydrinDetectedDetectedNot DetectedNot DetectedNot DetectedNot DetectedNot DetectedNot Detected

크로마토그램의 정성은 NIST 11 Library를 이용하고, 단위는 ug/L이다.Qualitative chromatogram of the NIST 11 Library is used, the unit is ug / L.

표 2를 참조하면, 실시예 1, 2에서 가교제로 사용된 에피클로로히드린이 검출되지 않음을 확인할 수 있었다. 즉, 실시예 1, 2을 피부 충전제 조성물로 이용하는 경우, 가교제에 의한 독성의 영향이 없을 것으로 예측할 수 있다. 또한, 비교예 3에서는 에피클로로히드린를 사용하지 않았기 때문에, 에피클로로히드린이 검출되지 않았다.Referring to Table 2, it was confirmed that epichlorohydrin used as a crosslinking agent in Examples 1 and 2 was not detected. That is, when Examples 1 and 2 are used as the skin filler composition, it can be expected that there will be no effect of toxicity by the crosslinking agent. In addition, since epichlorohydrin was not used in the comparative example 3, epichlorohydrin was not detected.

실험예 2 : 분해능 시험Experimental Example 2 Resolution Test

가교된 덱스트란을 포함하는 실시예 1, 2이 체내에 주입되면, 덱스트라나아제(Dextranase)에 의하여 분해가 이루어지게 된다. 실시예 1 내지 실시예 3에 덱스트라나아제를 직접 투입하여 그 분해 경향을 확인하고 효소에 대한 저항성을 예측할 수 있다.When Examples 1 and 2 including the cross-linked dextran are injected into the body, degradation is performed by dextranase. Dextranase can be directly added to Examples 1 to 3 to confirm the degradation tendency and to predict the resistance to enzymes.

실시예 1, 2와 비교예 2에서 제조된 샘플을 검체로 하여 아래와 같은 재료 및 방법으로 분해능 시험을 수행하였다Using the samples prepared in Examples 1 and 2 and Comparative Example 2, the resolution test was performed with the following materials and methods.

(1) 시액조성(1) Composition of reagent

완충액(Buffer): 염화나트륨 4.05g, 인산일수소 0.72g, 인산이수소 0.31g을 각각 칭량하고 증류수에 용해시켰다.Buffer: 4.05 g of sodium chloride, 0.72 g of dihydrogen phosphate, and 0.31 g of dihydrogen phosphate were weighed and dissolved in distilled water.

덱스트라나아제 원액(Stock Solution): 덱스트라나아제(Sigma Aldrich) 125mg을 부피플라스크 (Volume Flask) 10mL에 넣고 완충액으로 매스 업(Mass up)하였다.Dextranase Stock Solution: 125 mg of dextranase (Sigma Aldrich) was added to 10 mL of Volume Flask and massed up with buffer.

덱스트라나아제 2000 Units/mL: 덱스트라나아제 원액 1mL를 취해 완충액 4mL로 희석한 후 필터하여 사용하였다.Dextranase 2000 Units / mL: 1 mL of dextranase stock solution was taken, diluted with 4 mL of buffer, and used by filtration.

(2)분해능 실험방법(2) Resolution test method

유리 시린지(syringe)에 샘플 약 0.5g을 취해 넣고 3000rpm에서 5분간 원심분리하여 액을 아래로 모으고 기포를 제거하였다. 원심분리 후 고무전을 끼우고, 시린지의 앞부분을 분리하였다. HADase 200Units/mL 200㎕를 공기와 함께 서서히 투입한 다음, 앞부분을 다시 결합하고 37℃ 인큐베이터에서 반응시키면서 일정 시간마다 3개씩 샘플링하여, 하기 계산식에 의해 분해율을 계산하고, 그 결과(3회의 평균값)를 하기 표 3에 나타내었다.About 0.5 g of the sample was taken in a glass syringe, and centrifuged at 3000 rpm for 5 minutes to collect the liquid down, and bubbles were removed. After centrifugation, the rubber field was inserted, and the front part of the syringe was separated. 200 µl of HADase 200Units / mL was slowly added with air, and then the front portions were combined again and sampled three times at regular intervals while reacting in a 37 ° C incubator. It is shown in Table 3 below.

(3)계산식(3) Formula

분해율 =(A-B)/C*100Resolution = (A-B) / C * 100

A : 분해된 액(효소와 분해된 덱스트린)의 양A: amount of digested solution (enzyme and digested dextrin)

B : 투입한 효소의 양B: amount of enzyme introduced

C : 최초 투입한 실시예 1 내지 실시예 3C: Example 1 to Example 3 First Input

분해율(%)% Decomposition비교예 1Comparative Example 1실시예 1Example 1실시예 2Example 26시간6 hours3.25%3.25%2.58%2.58%2.32%2.32%12시간12 hours22.6%22.6%5.45%5.45%6.12%6.12%24시간24 hours82.36%82.36%25.7%25.7%32.5%32.5%36시간36 hours100.00%100.00%45.9%45.9%62.6%62.6%

표 3을 참조하면 실시예 1, 2와 비교예 1에서 초반 6시간 내의 분해율은 비슷하나, 실시예 1, 실시예 2, 비교예 1의 순서로 분해율이 낮음을 확인할 수 있었다. 이는 실시예 1의 경우 제1 가교된 덱스트란의 함량이 가장 많고, 실시예 2는 제2 가교된 덱스트란의 함량이 가장 많은 것으로, 상대적으로 가교도가 높은 제1 가교된 덱스트란의 함량이 높은 실시예 1이 분해속도가 낮게 진행됨을 확인할 수 있었다. 또한, 비교예 1의 경우에는 36시간 내에 전부가 다 분해된 것을 확인할 수 있었다. 이는 덱스트란을 가교되지 않은 상태로 이용하기 때문으로 판단된다.Referring to Table 3, in Example 1, 2 and Comparative Example 1, the decomposition rate within the first six hours was similar, but in the order of Example 1, Example 2, and Comparative Example 1, it was confirmed that the decomposition rate was low. This is the highest content of the first cross-linked dextran in Example 1, Example 2 is the highest content of the second cross-linked dextran, high content of the first cross-linked dextran having a relatively high degree of crosslinking In Example 1, it was confirmed that the decomposition rate was low. Moreover, in the case of the comparative example 1, it was confirmed that everything was decomposed within 36 hours. This is considered to be because dextran is used in an uncrosslinked state.

실시예 1, 2와 비교예 1을 참조하면, 이들이 체내에 주입되면 실시예 1이 가장 오랜 시간 분해되지 않고 유지될 수 있음을 예측할 수 있다.Referring to Examples 1 and 2 and Comparative Example 1, it can be expected that Example 1 can be maintained without degradation for the longest time when they are injected into the body.

2. 제1 및 제2 가교된 덱스트란 함량에 따른 영향2. Effect of First and Second Crosslinked Dextran Content

비교예 2 및 비교예 3Comparative Example 2 and Comparative Example 3

하기 표 4와 같이 제1 혼합물의 함량 또는 제2 혼합물의 함량만을 다르게 하고 나머지는 실시예 1과 동일하게 피부 충전제 조성물을 제조하였다.As shown in Table 4 below, only the content of the first mixture or the content of the second mixture was changed, and the remainder was prepared in the same manner as in Example 1.

　실시예 1Example 1비교예 2Comparative Example 2비교예 3Comparative Example 3구분division함량 gContent g구분division함량 gContent g구분division함량 gContent g제1 혼합물First mixture제1 가교된 덱스트란First crosslinked dextran2.8562.856제1 가교된 덱스트란First crosslinked dextran5.9075.907제1 가교된 덱스트란First crosslinked dextran00생리식염수Saline solution3030생리식염수Saline solution5050생리식염수Saline solution00NaOHNaOH0.0250.025NaOHNaOH0.040.04NaOHNaOH00제2 혼합물Second mixture제2 가교된 덱스트란Second crosslinked dextran3.0513.051제2 가교된 덱스트란Second crosslinked dextran00제2 가교된 덱스트란Second crosslinked dextran5.9075.907생리식염수Saline solution3030생리식염수Saline solution00생리식염수Saline solution5050NaOHNaOH0.0280.028NaOHNaOH00NaOHNaOH0.040.04제3 혼합물Tertiary mixture비가교 히알루론산Non-crosslinked hyaluronic acid0.320.32비가교 히알루론산Non-crosslinked hyaluronic acid0.320.32비가교 히알루론산Non-crosslinked hyaluronic acid0.320.32가교 히알루론산Cross-linked hyaluronic acid00가교 히알루론산Cross-linked hyaluronic acid00가교 히알루론산Cross-linked hyaluronic acid00생리식염수Saline solution55생리식염수Saline solution55생리식염수Saline solution55제4 혼합물Fourth mixtureHPMCHPMC0.10.1HPMCHPMC0.10.1HPMCHPMC0.10.1생리식염수Saline solution55생리식염수Saline solution55생리식염수Saline solution55생리식염수Saline solution생리식염수Saline solution23.6223.62생리식염수Saline solution33.63333.633생리식염수Saline solution33.63333.633

실험예 3 : 분해능 시험Experimental Example 3: Resolution Test

실시예 1과 비교하기 위하여, 전술한 실험예 1과 동일한 방법으로 비교예 2와 비교예 3에 대한 분해능을 확인하고, 이를 표 5에 나타내었다.In order to compare with Example 1, the resolution for Comparative Example 2 and Comparative Example 3 was confirmed by the same method as Experimental Example 1 described above, and it is shown in Table 5.

분해율(%)% Decomposition비교예 1Comparative Example 1비교예 2Comparative Example 2비교예 3Comparative Example 3실시예 1Example 16시간6 hours3.25%3.25%2.14%2.14%2.9%2.9%2.58%2.58%12시간12 hours22.6%22.6%4.95%4.95%7.52%7.52%5.45%5.45%24시간24 hours82.36%82.36%18.15%18.15%38.9%38.9%25.7%25.7%36시간36 hours100.00%100.00%38.8%38.8%72.2%72.2%45.9%45.9%

표 5를 참조하면, 가교되지 않은 덱스트란을 이용한 비교예 1이 가장 빨리 분해됨을 확인할 수 있다. 반면, 실시예 1과 비교예 2를 비교하면, 12시간 까지는 유사하나 점점 비교예 2가 실시예 1보다 덜 분해됨을 확인할 수 있었는데, 실시예 1은 가교도가 높은 제1 가교된 덱스트란만을 이용하기 때문으로 판단된다. 반면, 상대적으로 가교도가 낮은 제2 가교된 덱스트란 만을 이용한 비교예 3과 실시예 1을 비교하면, 비교예 3이 더 빨리 분해됨을 확인할 수 있었다.Referring to Table 5, it can be seen that Comparative Example 1 using the uncrosslinked dextran is the fastest decomposition. On the other hand, when comparing Example 1 and Comparative Example 2, it was confirmed that similar but gradually less decomposed than Example 1 until 12 hours, Example 1 using only the first crosslinked dextran having a high degree of crosslinking It is because of this. On the other hand, comparing Comparative Example 3 and Example 1 using only the second crosslinked dextran having a relatively low degree of crosslinking, it was confirmed that Comparative Example 3 decomposed more quickly.

실험예 4 : 주사압 측정Experimental Example 4 Scanning Pressure Measurement

표 4에 기재된 각 샘플을 실린지에 충진하고, 실린지에 주사바늘을 끼운 다음, 5㎜/min 속도로 압출한 뒤 인장강도계(JSV-1000, Jisco)를 이용하여 얻은 데이터에서 샘플에 하중(Load)이 가해진 이후, 5㎜ 지점을 1지점으로 설정하고, 샘플이 모두 빠져나와 하중이 급격히 상승하는 지점에서 5㎜ 전 지점을 2지점으로 설정하여 두 지점의 평균값을 계산하였다.Each sample described in Table 4 was filled in a syringe, a needle was inserted into the syringe, extruded at a rate of 5 mm / min, and then loaded onto the sample from data obtained using a tensile strength meter (JSV-1000, Jisco). After 5) was applied, the 5 mm point was set to one point, and the average value of the two points was calculated by setting the 5 mm point to 2 points at the point where all the samples came out and the load rapidly increased.

실린지는 보로실리케이트 유리, 브로모부틸 고무, 카본블랙 및 폴리디메틸실론산(실리콘 오일)로 이루어진 몸체와, 브모로부틸 고무 및 카본블랙으로 이루어진 마개, 폴리카보네이트로 이루어진 밀대와, 폴리프로필렌으로 이루어진 손잡이로 구성된 것일 이용하였다.The syringe is a body made of borosilicate glass, bromobutyl rubber, carbon black and polydimethylsilonic acid (silicone oil), a stopper made of bromobutyl rubber and carbon black, a straw made of polycarbonate, and a handle made of polypropylene. It used to consist of.

그 결과, 실시예 1의 주사압은 평균 12N이고, 비교예 1의 주사압은 평균 10N으로 서로 유사함을 확인할 수 있었다. 이는 비교예 1의 경우는 가교되지 않은 덱스트란 만을 이용하여 실시예 1보다 점도가 낮기 때문으로 판단된다. 비교예 2의 주사압은 35N으로 높음을 확인할 수 있었는데, 이는 가교도가 높은 제1 가교된 덱스트란만을 이용하기 때문으로 판단된다. 또한, 비교예 3은 상대적으로 가교도가 낮은 제2 가교된 덱스트란만을 이용했음에도 실시예 1보다 높음을 확인할 수 있었는데, 이는 실시예 1은 서로 다른 가교도를 갖는 덱스트란이 혼합되어 보다 균일한 유동성을 확보할 수 있기 때문으로 판단된다.As a result, the scanning pressure of Example 1 was 12N on average, and the scanning pressure of Comparative Example 1 was confirmed to be similar to each other with an average of 10N. This is considered to be because, in the case of Comparative Example 1, the viscosity is lower than that of Example 1 using only uncrosslinked dextran. The scanning pressure of Comparative Example 2 was confirmed to be high as 35N, it is determined because only the first crosslinked dextran using a high degree of crosslinking. In addition, Comparative Example 3 was found to be higher than Example 1 even though only using a second crosslinked dextran having a relatively low degree of crosslinking, which is a more homogeneous fluidity of Example 1 by mixing dextran having different crosslinking degrees. This is because it can be secured.

실험예 5 : 복소점도 및 안정성 시험Experimental Example 5: Complex viscosity and stability test

표 1 및 표 4에 기재된 각 샘플을 가속 조건(45℃±2℃, 75% RH±5% RH)에서 6개월 동안 보관하면서 Rheometer(Kinexus Pro, Malvern)를 사용하여 1Hz에서의 복소점도를 측정하여, 그 결과를 하기 표 4에 나타내었다(단위: Pa.s). 여기에서, 복소점도 (Complex viscosity)는 점도를 실수부와 허수부의 합으로 나타낸 수학적 표현으로, 실수부는 보통 동력학 점도로 불리고 허수부는 복소 면찰 탄성률의 실수부와 관련이 있는 수치이다.Complex samples at 1 Hz were measured using a Rheometer (Kinexus Pro, Malvern) with each sample listed in Tables 1 and 4 stored under accelerated conditions (45 ° C ± 2 ° C, 75% RH ± 5% RH) for 6 months. The results are shown in Table 4 below (unit: Pa.s). Here, the complex viscosity is a mathematical expression of the viscosity as the sum of the real part and the imaginary part. The real part is usually called the kinematic viscosity, and the imaginary part is a number that is related to the real part of the complex face modulus.

　0개월0 months3개월3 months6개월6 months실시예 1Example 1　525248484444실시예 2Example 2　474745454141비교예 1Comparative Example 1　303021211414비교예 2Comparative Example 2　424238382727비교예 3Comparative Example 3　373731312222

표 6을 참조하면, 실시예 1 및 실시예 2가 비교예 1 내지 비교예 3에 비해서 복소점도가 높고, 가속조건에서 실시된 안정성 시험에서 우수한 안정성을 나타냄을 확인할 수 있었다. 비교예 1은 가교되지 않은 덱스트란만을 이용해서 가장 낮음을 확인할 수 있었다. 실시예 1 및 실시예 2와 비교예 2 및 비교예 3을 비교하면, 실시예 1 및 실시예 2는 서로 다른 가교도를 갖는 제1 가교된 덱스트란과 제2 가교된 덱스트란을 혼합하여 사용하므로, 제1 가교된 덱스트란 단독으로 사용하는 비교예 2나, 제2 가교된 덱스트란 단독으로 사용하는 비교예 3보다 더 우수한 값을 나타내는 것으로 예측된다.Referring to Table 6, it was confirmed that Example 1 and Example 2 are higher in complex viscosity than Comparative Examples 1 to 3, and showed excellent stability in the stability test conducted under accelerated conditions. Comparative Example 1 was confirmed to be the lowest using only uncrosslinked dextran. Comparing Example 1 and Example 2 with Comparative Example 2 and Comparative Example 3, Example 1 and Example 2 is used by mixing the first crosslinked dextran and the second crosslinked dextran having a different degree of crosslinking It is expected to show better values than Comparative Example 2, which uses the first crosslinked dextran alone, or Comparative Example 3, which uses the second crosslinked dextran alone.

본 발명이 속하는 기술분야의 통상의 지식을 가진 자는 본 발명이 그 기술적 사상이나 필수적인 특징을 변경하지 않고서 다른 구체적인 형태로 실시될 수 있다는 것을 이해할 수 있을 것이다. 그러므로 이상에서 기술한 실시예들은 모든 면에서 예시적인 것이며 한정적이 아닌 것으로 이해해야만 한다. 본 발명의 범위는 상기 상세한 설명보다는 후술하는 특허청구의 범위에 의하여 나타내어지며, 특허청구의 범위의 의미 및 범위 그리고 그 균등 개념으로부터 도출되는 모든 변경 또는 변형된 형태가 본 발명의 범위에 포함되는 것으로 해석되어야 한다.Those skilled in the art will appreciate that the present invention can be embodied in other specific forms without changing the technical spirit or essential features of the present invention. Therefore, it should be understood that the embodiments described above are exemplary in all respects and not restrictive. The scope of the present invention is indicated by the scope of the following claims rather than the detailed description, and all changes or modifications derived from the meaning and scope of the claims and the equivalent concept are included in the scope of the present invention. Should be interpreted.

100 : 주사기 장치
110 : 주사기
120 : 쿨링튜브100: syringe device
110: syringe
120: cooling tube