KR0132614B1 - Functionalized polyamine chelants and rhodium complexes thereof for conjugation to antibodies - Google Patents

Abstract

Translated fromKorean

본 발명은 킬레이트제로서 화학식 1 의 화합물 및 이 화합물과 로듐이 착화된 로듐 착화합물의 제공에 관한 것으로, 로듐이 착화된 착화합물은 항체와 콘쥬게이트되어 포유동물의 암을 비롯한 질환을 진단 또는 치료하는데 사용될 수 있다.The present invention relates to the provision of a compound of formula 1 as a chelating agent and a rhodium complex complexed with a rhodium compound, wherein the complex complexed with the rhodium is conjugated with an antibody to be used for diagnosing or treating diseases including mammalian cancer. Can be.

Description

Translated fromKorean

[발명의 명칭][Name of invention]

작용화된 폴리아민 킬레이트제, 및 이의 로듐 착화합물 및 이의 제조방법Functionalized polyamine chelating agents, and rhodium complexes thereof and methods for preparing the same

[발명의상세한설명]Detailed description of the invention

[발명의목적][Objective of the invention]

[발명이속하는기술분야및그분야의종래기술][Technical Field to which the Invention belongs and Conventional Technology in the Field]

본 발명은 작용화된 폴리아민 킬레이트제, 및 이의 로듐 착화합물 및 이의 제조방법에 관한 것이다.The present invention relates to functionalized polyamine chelating agents, and rhodium complexes thereof and methods for their preparation.

작용화된 킬레이트제, 또는 이작용성 배위자는 암 또는 종양 세포 에페토프(epitope) 또는 항원에 대한 특이성을 갖는 항체에 공유결합될 수 있는 것으로 알려져 있다. 이러한 항체/킬레이트제 콘쥬게이트의 방사성핵종 착화합물은 암 또는 종양 세포에 방사성 핵종을 전달하는 수단으로서 진단 및/또는 치료용으로 유용하다[예를 들어 Meares et al., Anal. Biochem., 142, pp.68-78, (1984); and Krejcarek et al., Biochem. and Biophys. Res. Comm., 77, pp.581-583(1977)참조].It is known that functionalized chelating agents, or bifunctional ligands, can be covalently bound to antibodies having specificity for cancer or tumor cell epitopes or antigens. Radionuclide complexes of such antibody / chelating agent conjugates are useful for diagnosis and / or treatment as a means of delivering radionuclides to cancer or tumor cells. See, for example, Meares et al., Anal. Biochem., 142, pp. 68-78, (1984); and Krejcarek et al., Biochem. and Biophys. Res. Comm., 77, pp. 581-583 (1977).

그러나 착화합물들을 제조하기 위해 본 분야에 교지된 방법론은 항체/킬레이 트제 콘쥬게이트를 과잉량의 방사성 핵종으로 처리하여 착화합물을 형성한 다음, 형성된 착화합물을 정제하는 방법을 포함한다. 이러한 방법론의 주요결점은 방사성핵종(란타니드 또는 전이금속)이 항체/킬레이트제 코쥬게이트로부터 분리되도록 하기 위해서 동력학적으로 불안정해야 하는 점이다. 이 특징은 동력학적 불안정성(또는 치환 물안정성)이 착화합물의 혈청 안정도와 관련된 문제를 야기시키는 점에서 불리하다. 즉, 방사성핵종은 혈청의 존재하에서 착화합물로부터 쉽게 분리된다. 그러한 착화합물의 저조한 혈청 안정도는 치료 및/진단 (상징)효과를 감소시키며, 정상조직을 파괴하는 전신조사에 대한 잠재성을 더욱 크게 하는 것 같다However, methodologies taught in the art for preparing complexes include the treatment of antibody / chelating agent conjugates with excess radionuclides to form complexes and then purification of the complexes formed. The main drawback of this methodology is that the radionuclide (lanthanide or transition metal) must be kinetically unstable in order to be separated from the antibody / chelating agent conjugate. This feature is disadvantageous in that kinetic instability (or substitutional stability) causes problems associated with serum stability of the complex. That is, the radionuclide is easily separated from the complex in the presence of serum. Poor serum stability of such complexes reduces the therapeutic and / or diagnostic (symbolic) effects and seems to increase the potential for systemic investigations that destroy normal tissues.

[Cole et al., J. Nucl. Med., 28, pp-83-90(1987)]. 더욱 상세하게는, 혈청 안정도는⁶⁷Cu,⁹⁰Y,⁵⁷Co, 및¹¹¹In을 함유하는 착화합물과의 문제점이 있는 것으로 나타났다[Brechbei1 et al., Inorg. Chem., 25, pp.2772-2782(1986)〕Cole et al., J. Nucl. Med., 28, pp-83-90 (1987)]. More specifically, serum stability has been shown to be problematic with complexes containing⁶⁷ Cu,⁹⁰ Y,⁵⁷ Co, and¹¹¹ In [Brechbei1 et al., Inorg. Chem., 25, pp. 2772-2782 (1986)].

항체표지에 불안정한 방사성 핵종을 사용함에 따른 다른 불리한점은 치환 불 안정성 미량금속(방사활성이 아님)이 흔히 킬레이트에 혼입되는 점이다. 그러한 비-활성 미량금속의 경쟁 반응은 더 낮은 양의 방사성 핵종이 표적부위에 전달되기 때문에 항체/킬레이트 착화합물의 생물학적 효능을 감소시킨다.Another disadvantage of using an unstable radionuclide for antibody labeling is that substitutionally unstable trace metals (not radioactive) are often incorporated into chelates. Competitive reactions of such non-active trace metals reduce the biological efficacy of antibody / chelate complexes because lower amounts of radionuclides are delivered to the target site.

방사성 핵종 분리에 대해 본분야에 교지된 이작용성 배위자 또는 작용화된 킬레이트제의 대부분은 에틸렌디아민테트라아세트산(EDTA)(미함중국 특허 제4,622,420 호) 또는 디이틸렌트리아민펜타아세트산(DTPA)(미합중국 특허 제4,479,930 호 및 제 4,454,106 호)의 작용화된 형태와 같은 카복시메틸화된 아민유도체이다. 미합중국 특허 제 4,622,420 호에서 ,EDTA 유도체는 또한 로듐의 이은 종(種)을 분리할 수 있음을 일반적으로 교지하고 있다. 그러나, 로듐, 특히 로듐(III)은 치환 불활성 전이금속으로 알려져 있고 더욱 더 EDTA 착화합물을 생성하는데는 극한 온도조건과 지속조건이 필요한 것으로 알려져 있다〔Dwyer et al., J. Amer. Chem. Soc., 83, pp.4823(1960) 참조〕. 또한, 에틸렌디아민숙신산은 100'C 미만 온도의 어떠한 ph에서도 로륨(III)과 착화합물을 형성하지 않는 것으로 보고되었다[J.A.Neal and N.J.Rose, Inorg, Chem., 12, 1226-1232(1972) 참조].Most of the bifunctional ligands or functionalized chelating agents taught in the art for radionuclide separation are ethylenediaminetetraacetic acid (EDTA) (US Pat. No. 4,622,420) or diethylenetriaminepentaacetic acid (DTPA) (US) Carboxymethylated amine derivatives, such as the functionalized forms of patents 4,479,930 and 4,454,106). In US Pat. No. 4,622,420, EDTA derivatives are generally taught that they can also separate dissimilar species of rhodium. However, rhodium, in particular rhodium (III), is known as substituted inert transition metals and it is known that extreme temperature and sustaining conditions are required to produce EDTA complexes more and more [Dwyer et al., J. Amer. Chem. Soc., 83, pp. 4823 (1960). It has also been reported that ethylenediaminesuccinic acid does not complex with rhodium (III) at any pH below 100'C (see JANeal and NJRose, Inorg, Chem., 12, 1226-1232 (1972)). .

테트라아자 킬레이트제 [Troutner et al., J. Nucl. Med., 21, pp 443-448(1980) 참조]와 알킨렌아민 옥심(미합중국 특허 제 4,615,876 호)은 진단 작업에만 적당한 핵성을 갖는 99 mTc 의 동위원소를 분리하는데 사용되어 왔다.Tetraaza chelating agents [Troutner et al., J. Nucl. Med., 21, pp 443-448 (1980)] and alkynamineamine oximes (US Pat. No. 4,615,876) have been used to isolate 99 mTc isotopes with nuclearity suitable only for diagnostic work.

로듐-105 는 감마 방산체(진단 작업에 적당함) 및 짧은 반감기의 베타 방산체(치료 작업에 적당함)이다. 로듐-105는 진단 및 치료 모두에 사용할 수 있고, 또한 로듐은 치환 불활성이기 때문에, 항체에 결합될 수 있는 방사활성 로듐과 착화합물을 형성할 수 있는 작용화된 킬레이트제를 갖는 것이 대단히 바람직할 것이다. 자연적으로 생성되는 로듐(III)의 테스라하자 착화합물은 선형 아민[예를 들면 Bonich et al. , J. Chem. Soc. Sec. A, pp1331-1339(1966)]과 거대환상아민[E.J.Bounsall and S.R Koprich, Canadian Journal of Chmistry, 48(10), pp1481-1491(1970)]에 대한 문헌에 공지되어 있다. 그러나 방사활성 로듐과 착화합물을 형성한 뒤 항체에 부착하는데 적당한 작용화된 폴리아자킬레이트는 지금까지 알려져있지 않았다.Rhodium-105 is a gamma emitter (suitable for diagnostic work) and a short half-life beta emitter (suitable for therapeutic work). Since rhodium-105 can be used for both diagnosis and treatment, and because rhodium is substitutionally inactive, it would be highly desirable to have a functionalized chelating agent capable of forming complexes with radioactive rhodium that can bind to the antibody. The naturally occurring tesuraza complex of rhodium (III) is a linear amine [eg Bonich et al. , J. Chem. Soc. Sec. A, pp 1331-1339 (1966) and macrocyclic amines [E.J. Bounsall and S.R Koprich, Canadian Journal of Chmistry, 48 (10), pp1481-1491 (1970)]. However, functionalized polyazachelates suitable for forming complexes with radioactive rhodium and then attaching to antibodies are not known until now.

[발명이 이루고자 하는 기술적 과제][Technical problem to be achieved]

[발명의 구성 및 작용][Configuration and Function of Invention]

본 발명은 로듐과 착화합물을 형성하는 이작용성 킬레이트제에 관한 것이다.The present invention relates to a bifunctional chelating agent which forms a complex with rhodium.

이작요성 킬레이트제는 바람직하게는 로듐-105 (105RH)와 로듐- 101 ^m (^101m Rh )과 같은 방사활성 로듐과 착화합물을 형성하는데 사용된다. 이들 이작용성 킬레이트제는 또한 테크테튬 및 레늄과 칙화합물을 형성하는데 유용할 것이다. 그렇게 하여 형성된 착화합물은 항체 또는 항체의 단편에 결합될 수 있고(공유결합될 수 있고) 치료 또는진단목적에 사용할 수 있다.The dibasic chelating agent is preferably used to form complexes with radioactive rhodium such as rhodium-105 (105RH) and rhodium-101 ^ m (^ 101m Rh). These bifunctional chelating agents will also be useful for forming thytetium and rhenium and chic compounds. The complexes thus formed can be bound (covalently bound) to the antibody or fragment of the antibody and used for therapeutic or diagnostic purposes.

더욱 구체적으로 , 본 발명은 하기 화학식 1의 화합물에 관한 것이며,단 화학식 1의 화More specifically, the present invention relates to a compound of Formula 1, provided that

합물은 3-(4-아미노 부틸)-1,5,8,12-테트라아자사이클로테트라데칸이 아니다:The mixture is not 3- (4-amino butyl) -1,5,8,12-tetraazacyclotetradecane:

상기식에서,In the above formula,

R은 각각 독립적으로 탄소원자 2 내지 10개, 바람직하게는 2 또는 3개를 갖는 직쇄 또는 분지된 알킬랜그룹을 나타내나, 단 R그룹에 의해 연결된 2개의 인접질소에 대해, R그룹은 R그룹이 연결하는 질소들 사이에 3개 이상의 단일결합을 제공해야하며;Each R independently represents a straight or branched alkyllan group having from 2 to 10 carbon atoms, preferably 2 or 3, provided that for two adjacent nitrogens connected by an R group, the R group is At least three single bonds must be provided between these connecting nitrogens;

R¹은 각각 독립적으로 수소이거나,탄소원자 1내지 10개를 갖는 직쇄 또느 분지된 아킬레그룹(바람직하게는 수소 또는 메틸)을 나타내고;Each R¹ is independently hydrogen or represents a straight or branched achille group (preferably hydrogen or methyl) having 1 to 10 carbon atoms;

X 및 X¹은 수소를 나타내거나 , 또는 X 와 X¹은 함께 탄소원자 2 내지 10개를 갖는 직쇄 또는 분지된 알킬렌그룹 또는 가교 아르알킬렌 그룹(여기에서 알킬렌은 탄소원자 2 내지 10개를 갖는 직쇄 또는 분지된 알킬렌 그룹이다)을 이루며 바람직하게는 X 및 X¹은 수소이거나, 또는 X 와 X¹은 함께 벤질 또는 탄소원자 2 또는 3 개를 갖는 알킬렌 그룹을 나타내고 단, X 와 X¹이 함께 형성하는 경우에, X 와 X¹이 나타내는 그룹은 그것이 연결하는 인접한 질소사이에 3개 이상의 단일결합을 제공해야하고;X and X¹ represent hydrogen, or X and X¹ together represent a straight or branched alkylene group or bridged aralkylene group having from 2 to 10 carbon atoms, where alkylene is from 2 to 10 carbon atoms X or X¹ is hydrogen, or X and X¹ together represent an alkylene group having benzyl or 2 or 3 carbon atoms, provided that X and When X¹ forms together, the group represented by X and X¹ must provide at least three single bonds between adjacent nitrogens to which it is linked;

n은 0또는 1의 정수이며 , 단 L그룹이 질소원자에 결합되면 n은 0이어야 하고, 그렇지 않은 경우에 n은 1이어야 하고;n is an integer of 0 or 1, provided that n must be 0 when the L group is bonded to a nitrogen atom, otherwise n must be 1;

y는 1내지 3의 정수, 바람직하게는 정수 1이며;y is an integer of 1 to 3, preferably an integer of 1;

L은 질소 또는 탄소원자중 어느하나에 공유결합된 링커(linker)/스페이서(spacer)그룹으로, 질소 또는 탄소원자상의 수소원자와 하나와 치환되며, 언급한 링커/스페이서 그룹은 하기 화학식2로 나타낸다.L is a linker / spacer group covalently bonded to any one of nitrogen or carbon atoms, and is substituted with one of hydrogen atoms on nitrogen or carbon atoms, and the aforementioned linker / spacer group is represented by Formula 2 below. .

[상기식에서 : s 은 0 또는 1 의 정수를 나타내고; t 는 0 내지 20의 정수, 바람직하게는 0 내지 6 의 정수를[Wherein s represents an integer of 0 or 1; t is an integer from 0 to 20, preferably an integer from 0 to 6

나타내며;Represent;

R²는 항체 또는 항체 단편에 공유결합되도록 하는 친전자성 또는 친핵성 잔기, 또는 항체 또는 항체 단편에 결합될 수 있는 합성 링커를 나타내고;R² represents an electrophilic or nucleophilic moiety that allows covalent attachment to an antibody or antibody fragment, or a synthetic linker capable of binding to the antibody or antibody fragment;

는 지환족 잔기, 방향족 잔기(바람직하게는 페닐), 지방족 헤테로 사이클릭 잔기 또는 방향족 헤테로사이클릭 잔기이고, 이들 잔기는 각각 항체 또는 항체 단편과의 결합을 방해하지 않는 하나이상의 그룹에 의해 임의로 치환된다.]Are alicyclic moieties, aromatic moieties (preferably phenyl), aliphatic heterocyclic moieties or aromatic heterocyclic moieties, each of which is optionally substituted by one or more groups that do not interfere with binding to the antibody or antibody fragment, respectively. .]

또한 본 발명은 화학식 1의 킬레이드제에 의해 생성된 로듐 착화합물 및 로듐 킬레이트/항체 콘쥬게이트(conjugate)에 관한 것이나, 상기 로듐 착화합물 및 로듐 킬레이트/항체 콘쥬게이트는 3-(4-아미노부틸)-1,5,8,12-테트라아자사이클로-테트라데칸에 관하여 제한받지 않는다. 또한, 본 발명은 본 발명의 로듐 킬레이트/항체 콘쥬게이트와 약제학적으로 허용될 수 있는 담체로 구성된 로듐 킬레이트/항체 조성물을 포함하며, 전형적으로 이들 조성물에서 약제학적으로 허용될 수 있는 담체는 액체형태이다. 본 발명은 또한, 로듐 킬레이트/항체 조성물을 투여함으로써 포유동물의 질병상태를 진단 또는 치료하는 방법을 포함하고, 특히 본 발명은 암의 진단과 치료에 적합하다.The present invention also relates to a rhodium complex and a rhodium chelate / antibody conjugate produced by the chelating agent of Formula 1, but the rhodium complex and rhodium chelate / antibody conjugate are 3- (4-aminobutyl)- There is no limitation with respect to 1,5,8,12-tetraazacyclo-tetradecane. The present invention also encompasses rhodium chelate / antibody compositions consisting of the rhodium chelate / antibody conjugates of the invention and a pharmaceutically acceptable carrier, wherein typically the pharmaceutically acceptable carrier in these compositions is in liquid form. to be. The invention also includes a method for diagnosing or treating a disease state in a mammal by administering a rhodium chelate / antibody composition, and in particular the invention is suitable for the diagnosis and treatment of cancer.

는 본 명세서에서 편리하게 인용하기 위해 종종 Cyc 로 간단히 나타낸다. Cyc 잔기중 페닐 및 치환된 페닐이 바람직하고, 페닐이 가장 바람직한 Cyc 잔기이다.

Is often referred to simply as Cyc for convenient reference herein. Of the Cyc residues, phenyl and substituted phenyl are preferred, with phenyl being the most preferred Cyc residue.

본 명세서에서 사용할때,ㅡ 다음에 나타낸 용어는 다음과 같은 의미를 갖는다:As used herein, the following terms have the following meanings:

R2의 정의와 관련하여 친전자성 잔기는 이소티오시아네이트, 브로모아세트아미드, 말레이미드, 아미도에스테르, 티오프탈이미드, N-하이드록시숙신이밀 에스테르, 피리딜 디설파이드, 및 페닐아자이드를 포함하나 이들로만 제한되는 것은 아니고, 적당한 친핵성 잔기는 카복실, 아미노, 아실 하이드라자이드, 세미카바자이드 및 티오세미카바자이드를 포함하며, 이들로만 제한되는 것은 아니고, 합성링커 는 항체 또는 항체 단편에 공유결합될 수 있는 합성 유기 또는 무기 링커 어느 것이든 포함하며, 바람직한 합성 링커는 환자의 혈청에서는 안정하지만 기관내에서 방사성 동위 원소를 청정시키는 효소분해 가능성을 갖는 생체 분해성 합성 링커, 예를 들면 생체 분해성 펩타이드들 또는 펩타이드 함유 그룹들이다.In connection with the definition of R2 the electrophilic moiety isothiocyanate, bromoacetamide, maleimide, amidoester, thioptalimide, N-hydroxysuccinyl ester, pyridyl disulfide, and phenylaza Suitable nucleophilic moieties include, but are not limited to, id, carboxyl, amino, acyl hydrazide, semicarbazide and thiosemicarbazide, but are not limited to these, and the synthetic linker is an antibody or an antibody. Any synthetic organic or inorganic linker that can be covalently linked to the fragment, wherein preferred synthetic linkers are biodegradable synthetic linkers, such as those that are stable in the serum of a patient but have the enzymatic potential to clean radioisotopes in the trachea, for example Biodegradable peptides or peptide containing groups.

친전자성 잔기들중에서는 이소티오시아네이트가 바람직하고, 친핵성 잔기들중에서는 아미노, 카복실, 세미카바자이드 및 티오세미카바자이드가 바람직하다. R2 의 성질 및/또는 위치는 R2 가 킬레이트 반응을 감지할 수 있을 정도로 방해하지 않도록 하는 것이 바람직하다.Among the electrophilic residues isothiocyanate is preferred, among the nucleophilic residues amino, carboxyl, semicarbazide and thiosemicarbazide are preferred. It is desirable that the nature and / or position of R2 is such that it does not interfere with R2 to detect a chelation reaction.

알킬렌 이라는 용어는 n 이 1 내지 10 의 정수인 그룹-(CH2)n-을 나타낸다. 이 그룹은 또한 측쇄일 수 있지만, 탄소원자가 총 10개를 초과하지 않는다.The term alkylene refers to group- (CH2) n-, wherein n is an integer from 1 to 10. This group may also be branched, but not more than 10 carbon atoms in total.

아르알킬렌 이라는 용어는 그룹

을 나타내는데, 여기에서 n 은 내지 10 의 정수이고, R 은 벤질, 페닐, 또는 하나 이상의 하이드록시, C1-C3 알킬, C1-C3 알콕시 또는 할로(바람직하게는 클로로 또는 브로모)그룹으로 치환된 페닐과 같은 아릴 잔기이다.The term aralkylene is a group

Wherein n is an integer from to 10, and R is benzyl, phenyl, or phenyl substituted with one or more hydroxy, C1-C3 alkyl, C1-C3 alkoxy or halo (preferably chloro or bromo) groups Aryl residues such as

포유동물 이라는 용어는 자신의 새끼를 유선에서 분비된 젖으로 키우는 동물, 바람직하게는 온혈동물, 더욱 바람직하게는 인간을 의미한다.The term mammal refers to an animal, preferably a warm-blooded animal, more preferably a human, which raises its offspring into milk secreted from the mammary gland.

항체 는 폴리클로날, 모노클로날, 키메릭 항체 또는 이종항체, 바람직하게는 모노클로날 항체를 말하며, 항체단편 은 Fab 단편 및 F LEFT ( ab' RIGHT )₂Antibodies refer to polyclonal, monoclonal, chimeric antibodies or heterologous antibodies, preferably monoclonal antibodies, wherein the antibody fragments comprise Fab fragments and F LEFT (ab'RIGHT)₂

단편과, 목적하는 에피토프 또는 에피토프들에 대해 특이성을 갖는 항체의 어떤 부분이든지를 포함한다. 로듐 킬레이트제/항체콘쥬게이트 이라는 용어를 사용할 때 항체 는 그의 반합성 또는 유전공학적 변형체를 포함하여, 모든 항체 및/또는 항체 및/또는 항체 단편을 포함하는 것을 의미한다.Fragments and any portion of an antibody having specificity for the desired epitope or epitopes. When using the term rhodium chelating agent / antibody conjugate, an antibody is meant to include all antibodies and / or antibodies and / or antibody fragments, including semisynthetic or genetic engineering variants thereof.

로듐 착화합물 은 적어도 하나의 로듐 원자가 킬레이트되거나 또는 분리된, 화학식 1 화합물의 착화합물을 말한다. 로듐 킬레이트/항체 콘쥬게이트 는 항체 또는 항체 단편에 공유결합된 로듐 착화합물을 말한다.Rhodium complex refers to a complex of compound of formula 1 wherein at least one rhodium atom is chelated or separated. Rhodium chelate / antibody conjugate refers to a rhodium complex covalently bound to an antibody or antibody fragment.

로듐과 함께 사용된 자연적으로 생성되는이란 용어는 원소를 표준 과정을 사용하여 천연 공급원으로부터 정제할 때 수득되는 형태의 원소, 즉 각종 동위원소(이것의 대부분은 비-방사활성임)를 함유하는 형태의 원소를 말한다. 로듐과 함꼐 사용된 방사활성 은 105 Rh 와 같은, 알파, 베타 및/또는 감마 입자를 방출하는 원소의 하나이상의 동족체를 말하며, 로듐 은 방사활성 로듐 또는 자연적으로 발생하는 로듐 또는 그들의 혼합물을 말한다.The naturally occurring term used in conjunction with rhodium refers to elements in the form obtained when the elements are purified from natural sources using standard procedures, ie forms containing various isotopes, most of which are non-radioactive. Refers to the element of. Radioactive used with rhodium refers to one or more homologues of elements that emit alpha, beta and / or gamma particles, such as 105 Rh, and rhodium refers to radioactive rhodium or naturally occurring rhodium or mixtures thereof.

이작용성 배위자 및 작용화된 킬레이트제 는 상호 교환하여 사용되고, 로듐을 킬레이트시킬 수 있는 킬레이트제 성분 및 항체 또는 항체 단편에 공유결합하는 수단으로 제공될 수 있는 킬레이트제 성분에 공유결합된 링커/스페이서 성분을 함유하는 화합물을 말한다.Bifunctional ligands and functionalized chelating agents are used interchangeably and are linker / spacer components covalently bound to a chelating agent component that can chelate rhodium and a chelating agent component that can be provided as a means of covalently binding to an antibody or antibody fragment. The compound containing these is called.

본 명세서에서 사용된 용어 BA-사이클람 은 화합물 3-[4-(아미노페닐)메틸]-1,5,8,12-테트라아자사이클로테트라데칸을 말하고, BA-2,3,2-tet 는 화합물 6-[4-(아미노페닐)메틸]-1,4,8,11-테트라아자운데칸을 말하며, PA-2,3,2-tet 는 화합물 6-(3-아미노프로필)-1,4,8,11-테트라아자운데칸을 말하고 BA-N-사이클렌 은 화합물 1,4,7,10-테트라아자-1-[(4-아미노페닐)메틸]사이클로도데칸을 말한다. BA-사이클람, BA-2,3,2-tet, BA-N-사이클렌 및 PA-2,3,2-tet 는 하기 구조식으로 나타낸다 :As used herein, the term BA-cyclam refers to compound 3- [4- (aminophenyl) methyl] -1,5,8,12-tetraazacyclotetradecane, and BA-2,3,2-tet is Compound 6- [4- (aminophenyl) methyl] -1,4,8,11-tetraazadecane, PA-2,3,2-tet represents compound 6- (3-aminopropyl) -1, Refers to 4,8,11-tetraazadecane and BA-N-cyclone refers to compound 1,4,7,10-tetraaza-1-[(4-aminophenyl) methyl] cyclododecane. BA-cyclam, BA-2,3,2-tet, BA-N-cyclone and PA-2,3,2-tet are represented by the following structural formula:

PA-2, 3, 2-tetPA-2, 3, 2-tet

화학식 1의 바람직한 화합물은 BA-사이클람, BA-2, 3, 3-tet, PA-2,3,2-tet 및 BA-N-사이클렌과 이들 각각의 RH(ⅠⅠⅠ ) 착화합물이다Preferred compounds of formula (1) are BA-cyclolam, BA-2, 3, 3-tet, PA-2,3,2-tet and BA-N-cycloene and their respective RH (IⅠ) complexes

본 발명의 바람직한 로듐 착화합물은 하기 화학식 3로 나타낸 염이다:Preferred rhodium complexes of the invention are the salts represented by the formula:

[화학식 3][Formula 3]

[RhChP₁P₂]A[RhChP₁ P₂ ] A

상기식에서,In the above formula,

Ch 는 화학식 1의 화합물을 나타내고,Ch represents a compound of formula 1,

P₁과 P₂는 1 자리 리간드를 나타내거나 P₁과 P₂가 함께 2 자리 리간드( P₁P₂)를 나타내고, P₁은 P₂와 같거나 또는 다를 수 있으며 단, (a) 화학식 1에서 y 가 2 이면 P₂는 없고, (b) 화학식 1에서 y 가 3 이면P₁과 P₂는 없으며,P₁ and P₂ represent a monodentate ligand or P₁ and P₂ together represent a bidentate ligand (P₁ P₂ ), and P₁ may be the same as or different from P₂ , provided that (a) Formula 1 Where y is 2, there is no P₂ , (b) if y is 3 in formula 1, there is no P₁ and P₂ ,

A 는 전체 착화합물을 중성으로 만들기에 충분한 전하를 갖는 하나이상의 음이온을 나타낸다.A represents one or more anions with sufficient charge to neutralize the entire complex.

P₁과 P₂의 예를 들면For example, P₁ and P₂

F^-, Cl^-, Br^-, I^-, CN^-, NCO^-, SCN^-, N₃^-, OH^-, 및 H₂O 이고^{F -, Cl -, Br -} , I -, CN -, NCO -, SCN -, N 3 -, OH -, and H₂ O and

P₁P₂의 예는 C₂O₄^2-및 에틸렌디아민이다. A는Examples of P₁ P₂ are C₂ O₄^2- and ethylenediamine. A is

F^-, Cl^-, Br^-, I^-, CN^-, NCO^-, SCN^-, N₃^-, CIO₄^-, BF₄^-, BPh₄^-, NO₃^-, 및 PF₆^-을 포함한다.^{F -, Cl -, Br -} , I -, CN -, NCO -, SCN -, N 3 -, CIO 4 - comprises_{^{-, BF 4 -, BPh 4}} -, NO 3 -, and PF_6.

일반적으로, 이들 화학식 3의 로듐 착화합물은 이작용성 배위자와 함께 간단한 로듐 출발 물질인 RhQ·nH₂O [여기에서, Q 는 할로겐화물(Rh 와 평형을 이루기에 충분한 양)이고, nH₂O 는 수화물 (필요한 경우)이며, 예를 들면 할로겐화 로듐 수화물이다]를 수용액속에서 환류시켜 제조한다. pH 는 완충액을 사용하여 약 pH 7 까지 적정하거나 또는 대략 pH 7 로 조정할 수 있다. 일반적으로, 리간드 P1 고 P2 는 로듐 출발물질에 사용된 할로겐화물 또는 H₂O 일 것이다. 반대이온 A 는 로듐 출발물질에서 사용된 할로겐화물일 것이다. 그밖의 리간드 P₁과 P₂또는 반대이온 A 는 이들을 초기의 반응 혼합물에 첨가함으로써 또는 환류 단계에서 치환할 수 있다. 착화합물은 칼럼크로마토그라피에 의해 정제한다.In general, these rhodium complexes of formula 3, together with a bifunctional ligand, RhQ.nH₂ O, a simple rhodium starting material, wherein Q is a halide (a sufficient amount to equilibrate with Rh) and nH₂ O is a hydrate. (If necessary), for example, rhodium halide hydrate]. The pH may be titrated to about pH 7 using a buffer or adjusted to approximately pH 7. In general, ligands P1 and P2 will be the halide or H₂ O used in the rhodium starting material. Counterion A will be the halide used in the rhodium starting material. Other ligands P₁ and P₂ or counterion A can be substituted by adding them to the initial reaction mixture or at the reflux stage. The complex is purified by column chromatography.

본 명세서에 기술한 작용화된 폴리아민(즉, 화학식 1의 화합물)은 로듐을 킬레이트 또는 분리시키는데 사용되어 로듐 킬레이트(또는 본 명세서에는 로듐 착 화합물 이라고도 칭함)를 생성할 수 있다. 작용화 성분(화학식 1에서 L 로 나타냄)의 존재로 인해서 로듐 착화합물은 작용화된 지지체, 예컨대 작용화된 중합체 지지체상에 부착될 수 있거나, 또는 바람직하게는 항체 또는 항체 단편에 공유적으로 부착될 수 있다. 본 명세서에서 나타낸 로듐 킬레이트/항체 콘쥬게이트에 사용될 수 있는 항체 또는 항체 단편은 당 분야에서 잘 알려진 기술로 제조할 수 있다. 고도 특이성 모노클로날 항체는 당 분야에서 잘 알려진 하이브리드화 기술에 의해 제조할 수 있다(Kohler and Milstein, Nature, 256, pp.495-497(1975); and Eur.J.Immunol., 6, pp.511-519(1976) 참조]. 보통 이러한 항체는 고도의 특이성 반응도를 갖는다. 로듐 킬레이트/항체 콘쥬게이트의 대상이 되는 항체로, 원하는 항원 또는 합텐에 작용하는 항체를 사용할 수 있다. 바람직하게, 로듐 킬레이트/항체 콘쥬게이트에서 사용된 항체는 목적하는 에피토프에 대해 높은 특이성을 갖는 모노클로날 항체 또는 그의 단편이다. 본 발명에서 사용한 항체는 예를들면 종양, 세균, 진균, 바이러스, 기생충, 마이코플라즈마(mycoplasma), 분화 및 그밖의 다른 세포막 항원, 병원체 표면 항원, 독소, 효소, 알레르겐(allergens), 약제 및 생물학적 활성분자와 작용할 수 있다[항원에 대한 더욱 완전한 목록은 미합중국 특허 제 4,193,983 호를 참조할 것]. 로듐 킬레이트/항체 콘쥬게이트는 각종 암의 진단 및/또는 치료에 특히 바람직하다. 본 명세서에서 기술한 로듐 착화합물과 로듐 킬레이트/항체 콘쥬게이트는 탁월한 혈청 안정성 및/또는 탁월한 생체내에 배치를 갖는다. 본 명세서에 나타낸 로듐 킬레이트/하체 콘쥬게이트는 당분야에 잘 알려진 방법에 따라 투여될 수 있다.The functionalized polyamines described herein (ie, compounds of Formula 1) can be used to chelate or separate rhodium to produce rhodium chelates (or referred to herein as rhodium complex compounds). Due to the presence of the functionalizing component (represented by L in formula 1), the rhodium complex may be attached on a functionalized support, such as a functionalized polymer support, or preferably covalently attached to an antibody or antibody fragment. Can be. Antibodies or antibody fragments that can be used in the rhodium chelate / antibody conjugates shown herein can be prepared by techniques well known in the art. Highly specific monoclonal antibodies can be prepared by hybridization techniques well known in the art (Kohler and Milstein, Nature, 256, pp. 495-497 (1975); and Eur. J. Immunol., 6, pp .511-519 (1976).] Typically, such antibodies have a high specificity of reactivity, as antibodies targeted for rhodium chelate / antibody conjugates, antibodies that act on the desired antigen or hapten can be used. Antibodies used in rhodium chelate / antibody conjugates are monoclonal antibodies or fragments thereof that have high specificity for the desired epitope, for example, antibodies, eg, tumors, bacteria, fungi, viruses, parasites, mycoplasmas (mycoplasma), differentiation and other cell membrane antigens, pathogen surface antigens, toxins, enzymes, allergens, drugs and biologically active molecules. For a complete list, see US Pat. No. 4,193,983. Rhodium chelate / antibody conjugates are particularly preferred for the diagnosis and / or treatment of various cancers.The rhodium complexes and rhodium chelate / antibody conjugates described herein are excellent. Serum stability and / or excellent in vivo placement The rhodium chelate / lower body conjugates shown herein can be administered according to methods well known in the art.

화학식 1의 화합물은 당분야에서 공지된 방법을 적용하여 제조할 수 있다.The compound of formula 1 may be prepared by applying methods known in the art.

예를 들면, 화학식 1 범위내의 화합물은 다음과 같은 반응식 1 내지 4 와 같은 합성 방법론을 사용하여 제조할 수 있다 :For example, compounds within the formula (1) range can be prepared using synthetic methodologies such as Schemes 1-4:

이 과정중에 합성된 4 개의 이작용성 리간드계(즉, BA-2,3,2-tet, PA-2,3,2,-tet, BA-사이클람 및 BA-N-사이클렌)는 화학식 1의 총칭적 이작용성 구조의 특정예이다. 총칭구조의 대표적인 폴리아자(질소 킬레이트화 원자의 수 = 4-6) 화합물의 2 개의 주요 형태는 1) 이 잔기에 공유결합된 스페이서/링커그룹을 갖는 선형 폴리아자 화합물(예를 들면, BA-2,3,2-tet 또는 PA-2,3,2-tet), 및) 2)스페이서/링커가 공유결합된 거대환상 폴리아자 화합물(예를 들면, BA-사이클람 또는 BA-N-사이클렌)이다.Four bifunctional ligand systems synthesized during this process (ie, BA-2,3,2-tet, PA-2,3,2, -tet, BA-cyclolam and BA-N-cycloene) are represented by Formula 1 Is a specific example of a generic bifunctional structure. Two major forms of representative polyaza (number of nitrogen chelating atoms = 4-6) compounds of the generic structure are: 1) linear polyaza compounds having spacer / linker groups covalently attached to this moiety (eg BA- 2,3,2-tet or PA-2,3,2-tet), and) 2) macrocyclic polyaza compounds covalently bonded with a spacer / linker (e.g. between BA-cyclam or BA-N- Clen).

두 개의 주요 유형은 모두 스페이서/링커그룹이 킬레이트화 폴리아자 성분에 공유결합될 수 있는 방법에 관해서 더욱더 세분될 수 있다. 개념상, 결합은 탄소원자(예를 들면 BA-사이클람, BA-2,3,2-tet, PA-2,3,2,-tet) 또는 질소원자(예를 들면 BA-N-사이클렌)중 어느 하나에서 어닐링에 의해 이루어질 수 있다. 반응식 4는 어떤 질소에든지 링커/스페이서 그룹이 어닐링되는 합성에 따른 방법론을 도시한 것이다. 이러한 시도의 일반성은 최근에 기무라(Kimura et al)의 문헌[J.Chem.Soc., Chem. Comm. pp. 1158-1159 (1986)]에 기록되었고 항체를 결합시킬 수 있는 잠재적 작용성을 함유할 수 있는 적당한 친전자성 그룹(즉 링커/스페이서)으로 폴리아자거대사이클을 모노알킬화시키는 방법을 제공한다. 다양한 폴리아자거대사이클은 상업적으로 이용가능하거나 또는 하기 문헌에 기록된 토실레이트 치환/거대 폐환 기술을 사용하여 제조했다[T.J. Atkins et al., Org. Synth., Vol. 58:Ed. W.A. Sheppard, John Wiley and Sons, New York 1978 pp. 86-97]. 분명히, N-알킬화 시도는 집중 합성 경로를 통해 가장 자유자재로 응용된다. 탄소원자 결합을 통해 링커/스페이서에 연결된 선형 또는 거대환상 리간드는 주로 3 가지 기정방법을 통해 이룰 수 있다. 4 개 및 5 개의 질소원자를 갖는 거대환상 아민은 적당히 치환된 말로네이트 에스테르를 선형 테트라아민 또는 펜타아민과 축합시켜 제조되었다[Tanushi et al., Tetrahedron Letters, 12, pp. 1049-1052(1977)과 Machida et al., Inorg. Chem., 25, pp. 3461-3466 (1986)]. 타부쉬등의 전술한 논문은 화합물 3-(4-아미노부틸)-1,5,8,12-테트라아자사이클로테트라데칸을 기술한다. 탄소에 BA-사이클람과 같은 거대사이클을 어닐링하는 두 번째 시도는 말로네이트 에스테르를 거대량의 디아민으로 치환시키고(반응식 1 및 3) 아크릴레이트 또는 말로네이트로 폐환시키는(반응식 2)것을 포함한다. 이러한 다방면의 시도는 문헌에 나타나 있고 [E.kimura et al., Inorg. Chem., 23, pp.4181-4188 (1984)], 또한 다양한 리간드/금속의 맞물림(bite) 크기를 갖는 선형 폴리아자 화합물을 제조한는데 사용할 수 있다.Both major types can be further subdivided with regard to how spacers / linker groups can be covalently bonded to chelated polyaza components. Conceptually, the bond is a carbon atom (eg BA-cyclam, BA-2,3,2-tet, PA-2,3,2, -tet) or a nitrogen atom (eg BA-N-cycloene By annealing in any one of Scheme 4 illustrates a methodology according to the synthesis in which linker / spacer groups are annealed to any nitrogen. The generality of this approach has recently been described by Kimura et al., J. Chem. Soc., Chem. Comm. pp. 1158-1159 (1986), which provides a method for monoalkylating polyaza macrocycles with suitable electrophilic groups (ie linkers / spacers) that may contain potential functionality to bind antibodies. Various polyaza macrocycles have been prepared using tosylate substitution / macrocyclization techniques, commercially available or documented in [T.J. Atkins et al., Org. Synth., Vol. 58: Ed. W.A. Sheppard, John Wiley and Sons, New York 1978 pp. 86-97]. Clearly, N-alkylation attempts are most freely applied through concentrated synthetic routes. Linear or macrocyclic ligands linked to linkers / spacers via carbon atom bonds can be achieved primarily through three methods. Macrocyclic amines with four and five nitrogen atoms have been prepared by condensation of suitably substituted malonate esters with linear tetraamines or pentaamines [Tanushi et al., Tetrahedron Letters, 12, pp. 1049-1052 (1977) and Machida et al., Inorg. Chem., 25, pp. 3461-3466 (1986). The foregoing paper by Tabush et al. Describes compound 3- (4-aminobutyl) -1,5,8,12-tetraazacyclotetecane. A second attempt to anneal a macrocycle, such as BA-cyclam, on carbon involves replacing the malonate ester with a large amount of diamine (Scheme 1 and 3) and ring closing it with acrylate or malonate (Scheme 2). This multifaceted approach is shown in the literature and described in E. kimura et al., Inorg. Chem., 23, pp. 4141-4188 (1984), can also be used to prepare linear polyaza compounds having bite sizes of various ligands / metals.

이들 시도는 모두 에스테르 또는 아실 작용성 그룹에 아민 또는 아자 화합물을 친핵적으로 작용시키는 것을 포함한다. 그리하여 환원단계는 아미드를 필수적으로 폴리아민으로 전환시키는데 필요하다.All of these attempts involve nucleophilically acting amines or aza compounds on ester or acyl functional groups. Thus, a reduction step is necessary to convert the amides into polyamines essentially.

탄소에 어닐링된 링커/스페이서 그룹을 갖는 거대사이클을 합성시키는 3 번 째로 가능한 방법은 S_N²또는 간단한 지방족 치환 화학반응을 거친 거대 폐환 반응을 포함할 수 있다. 현재까지, 이러한 방법은 모노-N-치환된 테트라아자거대사이클을 합성시키는 데만 적용되었다[N.Alcock et al., J.Chem.Soc. Dalton Trans., pp. 2371-2376(1984)]. 그러나, 이 기술은 또한 탄소에 어닐링된 시스템의 합성에도 적용할 수 있다 :A third possible method of synthesizing a macrocycle having a linker / spacer group annealed to carbon may comprise a macrocycle ring reaction via S_N² or a simple aliphatic substitution chemistry. To date, this method has only been applied to the synthesis of mono-N-substituted tetraaza macrocycles [N. Alcock et al., J. Chem. Soc. Dalton Trans., Pp. 2371-2376 (1984). However, this technique is also applicable to the synthesis of carbon annealed systems:

토실레이트 그룹은 당분야에서 공지된 다양한 방법에 의해 쉽게 제거할 수 있다. 화학식 1에 의해 일반적으로 포함되는 대부분의 특이성 이작용 배위자는 어느 것이나 본 명세서에 요약된 일반적인 시도중 하나를 사용하여 제조할 수 있다. 놀랍게도, 항체 결합성 테트라아민 로듐 착화합물의 어떠한 예도 문헌에 기록되어 있지 않다.Tosylate groups can be readily removed by a variety of methods known in the art. Most specific bifunctional ligands generally encompassed by Formula 1 can be prepared using any of the general approaches outlined herein. Surprisingly, no examples of antibody binding tetraamine rhodium complexes have been recorded in the literature.

하기 실시예는 본 발명을 설명하기 위한 것이지 본 발명을 제한하는 것으로 해석해서는 아니된다.The following examples are intended to illustrate the invention and should not be construed as limiting the invention.

일반실험General experiment

핀니간(Finnigan) TSQ 질량분석기(Q 1 MS 형) 또는 VG ZAB-MS 고분할 질량분석기(크세논으로 빠른 원자충격)로 질량분석 결과를 얻었다. 배리안 VXR-300 분광계로¹H 및¹³C NMR을 얻었다. 적외선(IR) 스펙트럼은 니콜렛 S 5X FT/IR 기계상에 기록하였다.Mass spectrometry results were obtained using a Finnigan TSQ mass spectrometer (Q 1 MS type) or a VG ZAB-MS high resolution mass spectrometer (fast atomic shock with xenon).¹ H and¹³ C NMR were obtained with a Varian VXR-300 spectrometer. Infrared (IR) spectra were recorded on a Nicolet S 5X FT / IR machine.

실험에서 사용되는 용매는 피셔 HPLC 등급물질로 이를 더 이상 정제하지 않고 사용하였다. 문헌[W.C.Still, M.Kahn and A. Mitra, J. Org. Chem., 43, pp.2923-2925 (1978)]에 기술된 플래쉬 크로마토그라피 기술(멀크 그래이드 60, 230-400 메쉬 실리카겔, 60 ANGSTROM -앨드리치 케미칼 컴패니)을 이용하고, 하기 용매 시스템을 사용하여 유기화합물(반응식A-D)을 모두 예비 크로마토그라피하였다.The solvent used in the experiment was a Fischer HPLC grade material which was used without further purification. W. C. Still, M. Kahn and A. Mitra, J. Org. Chem., 43, pp.2923-2925 (1978) using the flash chromatography technique (Mulk Grad 60, 230-400 mesh silica gel, 60 ANGSTROM-Aldrich Chemical Company), using the following solvent system: The organic compound (Scheme AD) was preliminarily chromatographed.

(1) 용매 시스템 1-CHCl 3 /MeOH/NH 4 OH-2/2/1;(1) solvent system 1-CHCl 3 / MeOH / NH 4 OH-2 / 2/1;

(2) 용매 시스템 2-CHCl 3 /MeOH/NH 4 OH-12/4/1;(2) solvent system 2-CHCl 3 / MeOH / NH 4 OH-12 / 4/1;

(3) 용매 시스템 3-CHCl 3 /MeOH/NH 4 OH-16/4/1(v/v).(3) solvent system 3-CHCl 3 / MeOH / NH 4 OH-16 / 4/1 (v / v).

이들 용매 시스템과 시판중인 아날테크 실리카 프레이드(250미크론, 아날테크 인코포레이티드)를 사용하여 R_f치를 조사보고 한다.These solvent systems and commercially available Analtech Silica Freud (250 microns, Analtech Incorporated) are used to investigate and report the R_f value.

실시예 1Example 1

2-카보메톡시-3-(4-니트로페닐)프로파노산 메틸 에스테르(p-니트로벤질 말로네이트디메틸 에스테르), 1베이커 및 에클레스의 방법[참고문헌: J.W.Baker 및 A.Eccles, J.Chem. Soc. (1927), 2125-2133 페이지]에 따라 디메틸말로네이트 및 p-니트로벤즈알데히드를크노벤아글(Knovenagle) 축합시켜 2-카보메톡시-3-(4-니트로페닐)프로페노산 디메틸 에스테르를 제조하였다. 관측된 융점(mpobs)은 133-134℃ 이었고, 문헌에 기재된 융점(mplit)은 136-137℃ 이다. 2-카보메톡시-3-(4-니트로페닐)프로페노산 메틸에스테르(23.0g, 86.7밀리몰)를 질소하에서 메탄올 175㎖ 에 용해시키고 나트륨 시아노보로하이드리드[참고문헌: R.O.Hutchins, D.Ritstein, N. Natale, J. Fanelli and D. Dimmel, J. Org. Chem., 41, p3328 (1976)] 6.0g(95.5밀리몰)을 냉각시키면서 교반용액에 조심스럽게 가했다. 농염산으로 pH를 4.0 으로 맞추고 용액을 25℃ 에서 일야동안 교반하였다. 처음 8시간동안에는 pH를 6에서 4 로 수차례 재조절하였다. 황색 메탄올 용액을 물 700㎖ 에 붓고 메틸렌클로라이드 200㎖ 씩으로 3 회 추출하였다. 유기 분획물을 모아서 포화 중탄산나트륨 400㎖ 와 물 400㎖ 로 세척하고 황산 마그네슘상에서 건조시킨 다음 ㅗ히전증발기 상에서 증발시켜 연황색오일을 수득했다. 오일을 정치시켜 결정화(mp_obs= 82-83℃; mp_lit=82.5-83.5℃)하여 2-카보메톡시-3-(4-니트로페닐)프로파노산 메틸 에스테르(p-니트로벤질 말로네이트 디메틸 에스테르)를 (93% 수율 21.3g 81밀리몰)로 수득했다.Method of 2-carbomethoxy-3- (4-nitrophenyl) propanoic acid methyl ester (p-nitrobenzyl malonate dimethyl ester), 1 baker and Eccles [Ref .: JWBaker and A.Eccles, J. Chem . Soc. (1927), pages 2125-2133], 2-carbomethoxy-3- (4-nitrophenyl) propenoic acid dimethyl ester was prepared by condensation of dimethylmalonate and p-nitrobenzaldehyde with Knovenagle. . The observed mpobs were 133-134 ° C. and the mplit described in the literature was 136-137 ° C. 2-carbomethoxy-3- (4-nitrophenyl) propenoic acid methyl ester (23.0 g, 86.7 mmol) was dissolved in 175 ml of methanol under nitrogen and sodium cyanoborohydride [Ref .: ROHutchins, D.Ritstein , N. Natale, J. Fanelli and D. Dimmel, J. Org. Chem., 41, p3328 (1976)] were carefully added to the stirred solution while cooling 6.0 g (95.5 mmol). The pH was adjusted to 4.0 with concentrated hydrochloric acid and the solution was stirred at 25 ° C. over night. During the first 8 hours, the pH was readjusted from 6 to 4 several times. The yellow methanol solution was poured into 700 ml of water and extracted three times with 200 ml of methylene chloride. The organic fractions were combined, washed with 400 ml of saturated sodium bicarbonate and 400 ml of water, dried over magnesium sulfate and evaporated on an electroevaporator to yield a pale yellow oil. The oil is left to crystallize (mp_obs = 82-83 ° C; mp_lit = 82.5-83.5 ° C) to give 2-carbomethoxy-3- (4-nitrophenyl) propanoic acid methyl ester (p-nitrobenzyl malonate dimethyl Ester) was obtained in (93% yield 21.3 g 81 mmol).

실시예 2Example 2

3-(4-아미노페닐)-2-카보메톡시프로파노산 메틸에스테르(p-아미노벤질 말로네이트 디메틸 에스테르), 2 화합물 2-카보메톡시-3-(4-니트로페닐)프로파노산 메틸 에스테르(p-니트로벤질 말로네이트 디메틸 에스테르)(2.00g 7.55 밀리몰)을 5% 팔라듐/탄소 촉매 (1.0g-앨드리치 케미칼 컴패니)를 함유하는 에틸 아세테이트 70㎖ 에 용해시키고 파르(Parr)교반기에서 50 psig 의 수소를 사용하여 22℃ 에서 수소첨가시켰다. 수소흡수는 빨랐고(15분) 이 혼합물을 수소압력하에 또 3시간동안 유지하였다. 압력용기를 기체 배출시키고 질소 ( N_ 2 )로 가득 채웠다. 현탁액을 셀라이트 패드로여과하고, 진공에서 회전증발기를 사용하여 용매를 제거하여3-(4-아미노페닐)-2-카보메톡시프로파노산 메틸 에스테르(p-아미노벤질말로네이트 디메틸 에스테르) 1.76g(7.41밀리몰)을 연한 황색 오일 형태로서 98% 수율로 얻었다. 질량분석기 (MS) 스펙트럼 분석 뿐만아니라¹H 핵자기공명(PMR) 및 13C핵자기 공명(CMR)으로 구조를 확인하였다.3- (4-aminophenyl) -2-carbomethoxypropanoic acid methyl ester (p-aminobenzyl malonate dimethyl ester), 2-compound 2-carbomethoxy-3- (4-nitrophenyl) propanoic acid methyl The ester (p-nitrobenzyl malonate dimethyl ester) (2.00 g 7.55 mmol) was dissolved in 70 ml of ethyl acetate containing 5% palladium / carbon catalyst (1.0 g-Aldrich Chemical Company) and 50 in a Parr stirrer. Hydrogenated at 22 ° C. using psig hydrogen. The hydrogen uptake was fast (15 minutes) and the mixture was held under hydrogen pressure for another 3 hours. The pressure vessel was evacuated and filled with nitrogen (N_ 2). The suspension is filtered through a pad of celite and the solvent is removed using a rotary evaporator in vacuo to yield 3- (4-aminophenyl) -2-carbomethoxypropanoic acid methyl ester (p-aminobenzylmalonate dimethyl ester) 1.76 g (7.41 mmol) was obtained in 98% yield as a pale yellow oil. The structure was confirmed by mass spectrometry (MS) spectral analysis as well as¹ H nuclear magnetic resonance (PMR) and 13 C nuclear magnetic resonance (CMR).

실시예 3Example 3

6-(4-(아미노페닐)메틸)-14,8,11-테트라아자-5,7-디옥소운데칸, 36- (4- (aminophenyl) methyl) -14,8,11-tetraaza-5,7-dioxoundecane, 3

화합물 3-(4-아미노페닐)-2-카보메톡시프로파노산 메틸 에스테르(p-아미노벤질 말로네이트 디메틸 에스테르)(30.0g, 0.126 밀리몰)을 질소대기하에 심하게 교반하면서 (25℃) 메탄올 150㎖ 중의 에틸렌 디아민(75g, 1.25밀리몰)용액에 적가했다. 박층 크로마토그라피(TLC)에 의해 반응이 완결된 것으로 판단될때까지 이 용액을 4일 동안 교반하였다. 그런다음 용매 및 과잉의 아민을 진공에서 제거하고 잔사를 철야(70℃/0.1mm에서) 건조시켜 원하는 화합물 6-(4-(아미노페닐)메틸)-1,4,8,11-테트라아자-5,7-디옥소운데칸 36.3g (98% 수율)을 황갈색 고체형태로 수득했다. 클로로포름/핵산으로부터 재결정화하여 융점 = 157-159℃ 의 백색 결정성 분말로 분석용 시료를 마련했다. PMR, CMR 및 MS 로 구조를 확인했다.Methanol 150 (25 ° C) with vigorous stirring of compound 3- (4-aminophenyl) -2-carbomethoxypropanoic acid methyl ester (p-aminobenzyl malonate dimethyl ester) (30.0 g, 0.126 mmol) under nitrogen atmosphere To the solution of ethylene diamine (75 g, 1.25 mmol) in ml was added dropwise. The solution was stirred for 4 days until the reaction was judged complete by thin layer chromatography (TLC). The solvent and excess amine are then removed in vacuo and the residue is dried overnight (at 70 ° C./0.1 mm) to give the desired compound 6- (4- (aminophenyl) methyl) -1,4,8,11-tetraaza- 36.3 g (98% yield) of 5,7-dioxooundcane were obtained as a tan solid. Recrystallized from chloroform / nucleic acid to prepare a sample for analysis as a white crystalline powder having a melting point of 157-159 ° C. The structure was confirmed by PMR, CMR and MS.

분석analysis

C H NC H N

C₁₄H₂₃O₂N₅에 대한 계산치 : 57.3 7.90 23.87Calcd for C₁₄ H₂₃ O₂ N₅ : 57.3 7.90 23.87

실측치 : 57.16 7.48 23.65Found: 57.16 7.48 23.65

실시예 4Example 4

6-(4-(아미노페닐)메틸)-1,4,8,11-테트라아자운데칸, (BA-2,3,2- Tet), 46- (4- (aminophenyl) methyl) -1,4,8,11-tetraazoundecan, (BA-2,3,2-Tet), 4

교반기 및 환류 냉각기가 장치된 250㎖ 용량의 3-구 환저 플라스크에 화합물 6-(4-(아미노페닐)메틸)-1,4,8,11-테트라아자-5,7-디옥소운데칸(7.0g, 23.9밀리몰)을 질소대기하에 넣었다. 이 고체에 붕소/테트라하이드로푸란(THF) 착화합물(150㎖, 150밀리몰)(앨드리치 케미칼 컴패니)을 교반하면서 양성 질소 압력하에 캐뉼라를 통해 천천히 첨가했다. 짧은 발열반응이 관측되고 이것이 가라앉은 후 교반용액을 48시간동안 환류시켰다. 맑은 용액을 진공에서 용매제거하여 유리질 반고체 물질을 얻었다. 메탈올(100㎖)을 조심스럽게 가하고 수소방출이 관측되었다. 생성된 용액을 진공에서 건조시켰다. 이때 메탄올 100㎖를 가하고 이 용액을 무수 염화수소로 포화시켰다. 이 용액을 질소하에 1시간동안 환류시키고 회전증발기를 사용하여 용매를 제거하였다. 이 사이클을 반복하고, 생성된 목적 화합물 불순한 염산물을 물 15㎖ 에 용해시켰다. 이 분획물을 클로로폴름(CHC 3) 20㎖ 씩으로 2 회 추출하고 아르곤하에 냉각시키면서 수용성상에 50％ 수산화나트륨 수용액을 가하여 열기성(ph12)으로 만들었다. 염기성 용액을 크로로포름 75㎖ 씩으로 6 회 추출했다. 이 분획물을 모으고(건조시키지 않음), 클로로포름을 진공에서 제거하여 불순한 아민 5.8g을 황색 오일 형태로 얻었다(91％ 수율), 클로로포름 : 메탄올 : 농수산화 암모늄 16:4:1 용매와 실리카겔(앨드리치 케미칼 컴패니/멀크 그래이드 60 230-400 메쉬)을 사용한 플래쉬 크로마토그라피로 불순한 물질을 정제하였다(R1 = 0.33 용매1). 정제된 생성물의 구조를 PMR, CMR, 및 MS 로 확인하였다.In a 250 mL three-neck round bottom flask equipped with a stirrer and a reflux condenser, the compound 6- (4- (aminophenyl) methyl) -1,4,8,11-tetraaza-5,7-dioxoundecane ( 7.0 g, 23.9 mmol) was placed under nitrogen atmosphere. Boron / tetrahydrofuran (THF) complex (150 mL, 150 mmol) (Aldrich Chemical Company) was added slowly to the solid through cannula under positive nitrogen pressure with stirring. A short exothermic reaction was observed and after it had settled, the stirred solution was refluxed for 48 hours. The clear solution was desolvated in vacuo to give a glassy semisolid material. Metalol (100 mL) was added carefully and hydrogen evolution was observed. The resulting solution was dried in vacuo. At this time, 100 ml of methanol was added and the solution was saturated with anhydrous hydrogen chloride. This solution was refluxed under nitrogen for 1 hour and the solvent was removed using a rotary evaporator. This cycle was repeated and the resulting target compound impure hydrochloride was dissolved in 15 ml of water. This fraction was extracted twice with 20 ml each of chloroform (CHC 3), and made thermophilic (ph12) by adding 50% aqueous sodium hydroxide solution to the aqueous phase while cooling under argon. The basic solution was extracted six times with 75 ml each of chloroform. The fractions were combined (not dried) and the chloroform was removed in vacuo to yield 5.8 g of impure amine in the form of a yellow oil (91% yield), chloroform: methanol: ammonium hydroxide 16: 4: 1 solvent and silica gel (Aldrich) The impure material was purified by flash chromatography using Chemical Company / Mulk Grade 60 230-400 mesh) (R1 = 0.33 Solvent 1). The structure of the purified product was confirmed by PMR, CMR, and MS.

분석analysis

C H NC H N

C₁₄H₂₇N₅·5HCI 에 대한 계산치 : 37.56 7.20 15.64Calcd for C₁₄ H₂₇ N₅ .5HCI: 37.56 7.20 15.64

실측치 : 37.5 6.42 15.83Found: 37.5 6.42 15.83

실시예 5Example 5

3-(4-(아미노페닐)메틸)-1,5,8,12-테트라아자-2,4,9-트리옥소사이클로테트라데칸, (BA-사이클람트리아미드), 5a 화합물 6-(4-아미노페닐)메틸)-1,4,8,14-테트라아자-5,7-디옥소테트라데칸(15.0g, 51.1밀리몰) 및 메틸아크릴레이트(4.29g, 51.1 밀리몰)를 질소하에 교반하면서 메탄올(MeOH) 800㎖ 에 용해시켰다. 실온(25℃)에서 40시간 지난후, 용액을 13일동안 환류시켰다. 냉각시키자 백색 침전이 형성되었다. 회전증발기를 사용하여 용매를 제거하고 생성된 납같은 고체를 클로로포름 : 메탄올 : 농 수산화암모늄 350 : 35 : 5 용액 및 플래쉬 크로마토그라피 기술을 사용하여 크로마토그라파하였다. 목적하는 화합물 3-[4-(아미노페닐)메틸]-1,5,8,12-테트라아자-2,4,9-트리옥소사이클로테트라데칸을 흰색 고체로 42% 수율로 수득하였다(7.5g, 21.6밀리몰).(Rf=0.62/용매; 융점=250-252℃)3- (4- (aminophenyl) methyl) -1,5,8,12-tetraaza-2,4,9-trioxocyclotetradecane, (BA-cyclamtriamide), 5a compound 6- (4 -Aminophenyl) methyl) -1,4,8,14-tetraaza-5,7-dioxotetradecane (15.0 g, 51.1 mmol) and methylacrylate (4.29 g, 51.1 mmol) with methanol stirring under nitrogen (MeOH) was dissolved in 800 ml. After 40 hours at room temperature (25 ° C.), the solution was refluxed for 13 days. Upon cooling a white precipitate formed. The solvent was removed using a rotary evaporator and the resulting lead-like solid was chromatographed using chloroform: methanol: concentrated ammonium hydroxide 350: 35: 5 solution and flash chromatography techniques. The desired compound 3- [4- (aminophenyl) methyl] -1,5,8,12-tetraaza-2,4,9-trioxocyclotetradecane was obtained as a white solid in 42% yield (7.5 g). , 21.6 mmol). (Rf = 0.62 / solvent; Melting point = 250-252 ° C.)

분석analysis

C H NC H N

C₁₇H₂₅N₅O₃에 대한 계산치 : 58.77 7.25 20.16Calcd for C₁₇ H₂₅ N₅ O₃ : 58.77 7.25 20.16

실측치 : 58.03 7.26 19.81Found: 58.03 7.26 19.81

실시예 6Example 6

3-(4-(아미노페닐)메틸)-1,5,8,12-테트라아자 사이클로테트라데칸, (BA-사이클람), 6 화합물 3-[4-(아미노페닐)메틸]-1,5,8,12-테트라아자-2,4,9-트리옥소사이클로테트라데칸(2,5g, 7.20밀리몰)을 질소하에 50시간 동안 1M 보란/THF 착화합물 200㎖에서 환류시켰다. 실시예 4와 유사하게 처리하여 불순한 염산염을 수득했다. 이 염을 물 20㎖에 용해시키고 클로로포름 100㎖ 씩으로 2 회 추출했다. 수층을 아르곤하에 0-5℃로 냉각시키고 50% 수산화나트륨(pH = 11.5)으로 처리한 후 백색침전이 생겼다. 이 물질을 클로로포름 100㎖ 씩으로 3 회 추출하고 이를 모아서 유리솜플러그로 여과한 다음 고진공에서 증발 건조시켜 목적생성물 3-[4-(아미노페닐)-메틸]-1,5,8,12-테트라아자사이클로테트라데칸 2.1g(7.0밀리몰)을 백색고체로 얻었다(수율 97%, mp = 156-158℃). PMR 및 CMR 로 구조를 확인했다.3- (4- (aminophenyl) methyl) -1,5,8,12-tetraaza tetratedecane, (BA-cyclam), 6 compound 3- [4- (aminophenyl) methyl] -1,5 , 8,12-tetraaza-2,4,9-trioxocyclotetradecane (2,5 g, 7.20 mmol) was refluxed in 200 ml of 1M borane / THF complex for 50 hours under nitrogen. Treatment similar to Example 4 yielded impure hydrochloride. This salt was dissolved in 20 ml of water and extracted twice with 100 ml of chloroform. The aqueous layer was cooled to 0-5 ° C. under argon, treated with 50% sodium hydroxide (pH = 11.5), and a white precipitate formed. This material was extracted three times with 100 ml of chloroform, collected, filtered through a glass wool plug, and evaporated to dryness in a high vacuum to yield the desired product 3- [4- (aminophenyl) -methyl] -1,5,8,12-tetraazacyclo. 2.1 g (7.0 mmol) of tetradecane was obtained as a white solid (yield 97%, mp = 156-158 ° C.). The structure was confirmed by PMR and CMR.

분석analysis

C H NC H N

C₁₇H₂₅N₅O₃에 대한 계산치 : 63.12 10.28 21.65Calcd for C₁₇ H₂₅ N₅ O₃ : 63.12 10.28 21.65

실측치 : 63.65 9.92 21.60Found: 63.65 9.92 21.60

실시예 7Example 7

3-[4-(아미노페닐)메틸]-1,5,8,12-테트라아자-2,4,9,11-테트라옥소사이클로테트라데칸, (BA- 사이클람테트라아미드), 5b 화합물 6-[4-(아미노페닐)메틸]-1,4,8,11-테트라아자-5,7-디옥소운데칸(7.03g, 24밀리몰) 및 디메틸말로네이트(3.17g, 24밀리몰)를 메탄올 50㎖에서 질소하에 교반하면서 4 일 동안 온화하게 환류 가열시켰다. 이 물질을 실리카겔상에서 클로로포름:메탄올:농수산화암모늄의 85:10:2 V/V/V 혼합물로 플래쉬 크로마토그라피 용출시켰다. 불순한 물질을 메탄올로부터 재결정화하여 IR, PMR 및 CMR 기술에 의해 특징을 나타내는 융점 288-290℃(분해)의 3-[4-(아미노페닐)메틸]-1,5,8,12-테트라아자-2,4,9,11-테트라옥소사이클로테트라데칸을 무색결정(2.01g, 24%)으로 얻었다.3- [4- (aminophenyl) methyl] -1,5,8,12-tetraaza-2,4,9,11-tetraoxocyclotetradecane, (BA-cyclamtetraamide), 5b compound 6- [4- (aminophenyl) methyl] -1,4,8,11-tetraaza-5,7-dioxooundecan (7.03 g, 24 mmol) and dimethylmalonate (3.17 g, 24 mmol) were added to methanol 50 Warm to reflux for 4 days with stirring under nitrogen in mL. This material was eluted with flash chromatography on silica gel with an 85: 10: 2 V / V / V mixture of chloroform: methanol: ammonium hydroxide. 3- [4- (aminophenyl) methyl] -1,5,8,12-tetraaza at melting point 288-290 ° C. (decomposition) characterized by recrystallization of impure material from methanol and characterized by IR, PMR and CMR techniques -2,4,9,11-tetraoxocyclotetradecane was obtained as colorless crystals (2.01 g, 24%).

실시예 8Example 8

BA-사이클람, 6BA-cyclam, 6

실시예 7에서 제조된 화합물 3-[4-(아미노페닐)메틸]-1,5,8,12-테트라아자-2,4,9,11-테트라옥소사이클로테트라데칸을 테트라하이드로푸란(THF)중에서 디보란으로 환원(환류, 18시간)시켜 4-아미노 벤질사이클람을 55.3% 수율로 수득했다.Compound 3- [4- (aminophenyl) methyl] -1,5,8,12-tetraaza-2,4,9,11-tetraoxocyclotetradecane prepared in Example 7 was tetrahydrofuran (THF) Reduction in diborane (reflux, 18 hours) in-yielded 4-amino benzylcycliam in 55.3% yield.

이 물질은 실시예 6 에 기술된 것과 거의 같은 특성을 가졌다.This material had almost the same properties as described in Example 6.

실시예 9Example 9

1,4,8,11-테트라아자-6-(2-시아노에틸)-5,7-디옥소운데칸,81,4,8,11-tetraaza-6- (2-cyanoethyl) -5,7-dioxoundecane, 8

새로 증류되어 0℃에서 질소하에 유지시켰던 에틸렌디아민(15g, 0.25몰)의 교반부분에 디에틸 2-(2-시아노에틸)말로네이트 7(5.0g, 23.5밀리몰-앨드리치 케미칼 컴패니)을 1시간에 걸쳐서 적가했다. 이 교반용액을 실온(25℃)까지 가온되도록 방치하고 4 일 동안 교반을 계속했다. 이때 과잉의 에틸렌 디아민을 진공에서 40℃ 이상 가열이 되지 않도록 조심스럽게 제거했다. 생성된 불순한 맑은 오일에 대해 용출제로서 용매시스템 3을 사용한 플래쉬 크로마토그라피를 실시하여 맑은 점성유 형태의 1,4,8,11-테트라아자-6-(2-시아노에틸)-5,7-디옥소 운데칸 2.3g(8.81밀리몰)을 37% 수율로 얻었다. (Rf=0.39/용매시스템3):To a stirred portion of ethylenediamine (15 g, 0.25 mole), freshly distilled and kept under nitrogen at 0 ° C., diethyl 2- (2-cyanoethyl) malonate 7 (5.0 g, 23.5 mmol-Aldrich Chemical Company) was added. Dropped over time. The stirred solution was allowed to warm to room temperature (25 ° C.) and stirring continued for 4 days. At this time, excess ethylene diamine was carefully removed so as not to be heated above 40 ° C in a vacuum. The resulting impure clear oil was subjected to flash chromatography using solvent system 3 as eluent to give 1,4,8,11-tetraaza-6- (2-cyanoethyl) -5,7 in the form of clear viscous oil. -2.3 g (8.81 mmol) of dioxo undecane were obtained in 37% yield. (Rf = 0.39 / solvent system 3):

¹H NMR(CDCI₃)δ 7.59(t, 2H, J=3.1 H₃, 아미드 H),¹ H NMR (CDCI₃ ) δ 7.59 (t, 2H, J = 3.1 H₃ , amide H),

3.29(m, 5H, 메틴 H 및 α 아미도 CH₂),3.29 (m, 5H, methine H and α amido CH₂ ),

2.82(dt, 4H, J₁=4.0 H₃, J₂=0.9 H₃β 아미도 CH₂),2.82 (dt, 4H, J₁ = 4.0 H₃ , J₂ = 0.9 H₃ β amido CH₂ ),

2.48(t, 2H, J₃=7.1, α 니트릴 CH₂),2.48 (t, 2H, J₃ = 7.1, α nitrile CH₂ ),

2.21(q, 2H, J₃=7.1 H₃, β니트릴 CH₂),2.21 (q, 2H, J₃ = 7.1 H₃ , βnitrile CH₂ ),

1.39(s, 4H, 아미노 NH);1.39 (s, 4H, amino NH);

¹³C NMR(CDCI₃)δ169.6(아미드 카보닐), 118.9(니트릴), 52.9, 42.3, 41.2, 27.1, 54.4¹³ C NMR (CDCI₃ ) δ169.6 (amide carbonyl), 118.9 (nitrile), 52.9, 42.3, 41.2, 27.1, 54.4

실시예 10Example 10

6-(3-아미노프로필)-1,4,8,11-테트라아자운데칸, PA-2,3,2-Tet, 96- (3-aminopropyl) -1,4,8,11-tetraazoundecan, PA-2,3,2-Tet, 9

실시예 9에서 제조한 화합물 1,4,8,11-테트라아자-6-(2-시아노에틸)-5,7-디옥소운데칸(1.6g, 6.13밀리몰)을 질소하에 1M 보란/THF(200㎖)용액에서 40시간동안 환류시켰다. 실시예 4 에서와 같이 메탄올/염화수소 환류 및 처리를 하여 6-(3-아미노프로필)-1,4,8,11-테트라아자운데칸의 조 염산염 1.5g을 제조하였다. 이 물질을 물 1.5㎖ 에 용해시키고 50% 수산화나트륨을 가하자(pH=13) 기체 유리가 관측되었다. 이 유리염기를 믹소(이스라엘하이파, 리덱스 코포레이션, 리미티드) 추출기를 사용하여 아세토니트릴 7㎖ 씩으로 3 회 추출했다. 유기층을 모아서 회전증발기로 감량시키고 맑은 오일을 클로로포름 용액 형태로 플래쉬 실리카겔의 짧은 패드에 적용시켰다. 용매제거후 용매 시스템 1을 용출제로 사용하여 생성물 6-(3-아미노프로필)-1,4,8,11-테트라아자운데칸을 맑은 오일로 단리시켰다. (Rf= 0.04/용매시스템1). 유리염기를 메탄올 5㎖ 에 용해시키고 이어서 무수염화수소로 포화시켰다. 증발건조시켜 6-(3-아미노프로필)-1,4,8,11-테트라아자운데칸 350mg을 염산염 형태로 얻었다(15%수율):Compound 1,4,8,11-tetraaza-6- (2-cyanoethyl) -5,7-dioxooundcane (1.6 g, 6.13 mmol) prepared in Example 9 was added with 1M borane / THF under nitrogen. It was refluxed for 40 hours in a (200 mL) solution. Methanol / hydrogen chloride reflux and treatment as in Example 4 yielded 1.5 g of crude hydrochloride of 6- (3-aminopropyl) -1,4,8,11-tetraazoundecane. This material was dissolved in 1.5 ml of water and 50% sodium hydroxide was added (pH = 13) to observe a gaseous glass. This free base was extracted three times with 7 ml of acetonitrile using a Myxo (Israel Haifa, Redex Corporation, Limited) extractor. The organic layers were combined and reduced by rotary evaporator and the clear oil was applied to a short pad of flash silica gel in the form of a chloroform solution. After removal of solvent, product 6- (3-aminopropyl) -1,4,8,11-tetraazoundecan was isolated as a clear oil using solvent system 1 as eluent. (Rf = 0.04 / solvent system 1). The free base was dissolved in 5 ml of methanol and then saturated with anhydrous hydrogen chloride. Evaporation to dryness yielded 350 mg of 6- (3-aminopropyl) -1,4,8,11-tetraazoundecan in hydrochloride form (15% yield):

실시예 11Example 11

1,4,7,10-테트라아자-1-[(4-니트로페닐)메틸]사이클로도데칸, 111,4,7,10-tetraaza-1-[(4-nitrophenyl) methyl] cyclododecane, 11

리치만 및 애드킨스 방법[참고문헌 J.E. Richman and T.J. Adkins, J, Amer. Chem. Soc., 96 2268-2269 (1974)]에 의해 제조된 1,4,7,10-테트라아자사이클로도데칸, 10(270mg, 1.57밀리몰)을 클로로포름 5㎖ 에 용해시켰다. 이 용액에 p-니트로벤질 브로마이드(113mg, 0.52밀리몰-앨드리치 케미칼 컴패니)를 가하고 14시간 동안 교반하였다. 박층 크로마토그라피에 의해, 출발물질들과는 다른 강한 닌히드린 양성 반점(Rf=0.58/용매시스템3)을 나타냈음을 알았다. 이 용액을 17×1(cm)플래쉬 실리카겔 칼럼에 적용시키고 용매시스템 3 으로 용출시켰다. 출발물질이 없는 분획물들을 모으고 증발시켜 융점 128-129℃ 의 1,4,7,10-테트라아자-1-[(4-니트로페닐)메틸]사이클로도데칸의 분석적으로 순수한, 연황색 결정 109mg(수율 68%)을 얻었다. 구조는 NMR 로 확인했다.Richman and the Adkins Method [Ref. J.E. Richman and T.J. Adkins, J, Amer. Chem. Soc., 96 2268-2269 (1974)], 1,4,7,10-tetraazacyclododecane, 10 (270 mg, 1.57 mmol) was dissolved in 5 ml of chloroform. To this solution p-nitrobenzyl bromide (113 mg, 0.52 mmol-Aldrich Chemical Company) was added and stirred for 14 hours. Thin layer chromatography showed strong ninhydrin positive spots (Rf = 0.58 / solvent system 3) different from the starting materials. This solution was applied to a 17 × 1 (cm) flash silica gel column and eluted with Solvent System 3. Fractions without starting material were collected and evaporated to yield 109 mg of analytically pure, pale yellow crystals of 1,4,7,10-tetraaza-1-[(4-nitrophenyl) methyl] cyclododecane at a melting point of 128-129 ° C. Yield 68%). The structure was confirmed by NMR.

분석analysis

실시예 12Example 12

1,4,7,10-테트라아자-1-[(4-아미노페닐)메틸)]-사이클로도데칸, (BA-N-사이클렌), 12 화합물 1,4,7,10-테트라아자-1-[(4-니트로페닐)메틸]사이클로도데칸(170mg, 0.55밀리몰)을 메탄올 5㎖ 에 용해시키고 10% 탄소상 팔라듐(랑카스터 신테시스 리미티드)100mg을 이 용액에 교반하면서 가했다. 일정한 수소기체 스트림을 교반 혼합물에 기포도입시켰다. 30분내에 박층 크로마토그라피로 분석한 결과 1,4,7,10-테트라아자-1-[(4-니트로페닐)메틸]사이클로도데칸이 1,4,7,10-테트라아자-1-[(4-아미노페닐)메틸]-사이클로도데칸(Rf = 0.28/용매시스템 3)으로 모두 전환되었음을 알았다.1,4,7,10-tetraaza-1-[(4-aminophenyl) methyl)]-cyclododecane, (BA-N-cyclone), 12 compound 1,4,7,10-tetraaza- 1-[(4-nitrophenyl) methyl] cyclododecane (170 mg, 0.55 mmol) was dissolved in 5 ml of methanol and 100 mg of 10% palladium on carbon (Lancaster Synthesis Limited) was added to this solution with stirring. A constant stream of hydrogen gas was bubbled into the stirred mixture. Thin layer chromatography within 30 minutes showed 1,4,7,10-tetraaza-1-[(4-nitrophenyl) methyl] cyclododecane to 1,4,7,10-tetraaza-1- [ It was found that all were converted to (4-aminophenyl) methyl] -cyclododecane (Rf = 0.28 / solvent system 3).

이 용액을 질소로 씻어내고 짧은 셀라이트 프러그로 여과했다. 용매를 증발시키고 플래쉬 크로마토그라피(용매 시스템 3)하여 1,4,7,10-테트라아자-1-[(4-아미노페닐)메틸]사이클로도데칸 103mg(67% 수율)을 얻었다. 구조를¹H 및¹³C NMR 분석에 의해 확인했다. 유리염기를 융점 255-260℃ (분해)의 사염산염(연황색 분말)으로 전환시켰다.The solution was washed with nitrogen and filtered through a short celite plug. The solvent was evaporated and flash chromatography (solvent system 3) yielded 103 mg (67% yield) of 1,4,7,10-tetraaza-1-[(4-aminophenyl) methyl] cyclododecane. The structure was confirmed by¹ H and¹³ C NMR analysis. The free base was converted to tetrahydrochloride (pale yellow powder) with a melting point of 255-260 ° C. (decomposition).

실시예 13Example 13

하기한 바와 같이, 5 개의 플라스크를 유리접지조립기를 통해 내부로 연결시킨 시스템을 이용하여105Rh 를 제조하였다 : 제 1 플라스크(기체트랩으로 사용된 캐치 플라스크), 제 2 플라스크(반응용기), 제 3 플라스크(트랩 # 1), 제 4 플라스크(트랩 # 2) 및 제 5 플라스크(트랩 # 3)105 Rh was prepared using a system in which five flasks were connected internally through a glass grounding assembly: a first flask (catch flask used as a gas trap), a second flask (reaction vessel), a third Flask (trap # 1), fourth flask (trap # 2), and fifth flask (trap # 3)

반응용기에 2M NaOH 10㎖를 넣었다. 트랩 # 1 에 CCl 4 150㎖를 가하고, 트랩 # 2 에 2M NaOH 150㎖를 가하고, 트랩 # 3 에 2M NaOH 150㎖를 가했다. 전날 MURR (미주리대학 연구소 반응기)에서 첫 번째줄의 p-튜브에서 30분간 동안 방사선을 조사시킨 루테늄 금속 일정량(5.18mg)을 반응용기에 가했다. 스토퍼(stopper)를 첫 번째 4 개의 플라스크의 상부에 장치했다. 이 장치를 통해 약 10분 동안 CI2 를 기포도입시키자 반응용기내의 용액이 밝은 황색으로 변했다. 그런 다음 장치에 공기흐름을 20분 동안 통과시키고, 가열 맨틀을 사용하여 약 5 분 동안 반응용기를 환류 가열하였다. 이 과정도중에, 반응용기내의 용액이 맑아지고 트랩 # 1 의 CCI4가 밝은 황색으로 변했다. 이 용액을 반응용기로부터 제거하고 0.2mm 여과지로 여과했다. 반응용기용액 일정량(1.0㎖)을 취하고 이를 계수용 섬광바이알에서 10㎖ 로 희석시켰다. 트랩 #1, #2, 및 #3 에 들어있는 각 용액 10㎖ 씩의 양을 계수용으로 취했다. 반응용기의 용액은 105 Rh를 함유하였다.10 ml of 2 M NaOH was added to the reaction vessel. 150 ml of CCl 4 was added to Trap # 1, 150 ml of 2M NaOH was added to Trap # 2, and 150 ml of 2M NaOH was added to Trap # 3. The previous day, MURR (reactor reactor at the University of Missouri) was added a portion of ruthenium metal (5.18 mg) irradiated for 30 minutes in the first row of p-tubes to the reaction vessel. A stopper was placed on top of the first four flasks. CI2 was bubbled through the device for about 10 minutes and the solution in the reaction vessel turned bright yellow. The airflow was then passed through the apparatus for 20 minutes and the reaction vessel was heated to reflux for about 5 minutes using a heating mantle. During this process, the solution in the reaction vessel became clear and the CCI4 of Trap # 1 turned bright yellow. This solution was removed from the reaction vessel and filtered through 0.2 mm filter paper. A certain amount of the reaction vessel solution (1.0 mL) was taken and diluted to 10 mL in a counting flash vial. 10 ml of each solution contained in traps # 1, # 2, and # 3 were taken for counting. The solution of the reaction vessel contained 105 Rh.

실시예 14Example 14

하기 실시예는 문헌[S.A. Johnson and F. Basolo, Inorg, Chem. (1962), 1, 925-932 페이지]에 보고된 것과 유사한 방법을 사용하여 로듐 킬레이트 착화합물을 제조하는 것에 대해 설명한다.The following examples are described in S.A. Johnson and F. Basolo, Inorg, Chem. (1962), 1, pages 925-932, for the preparation of rhodium chelate complexes using methods similar to those reported.

A. 원료 및 기술A. Raw Material and Technology

로듐 트리클로라이드 수화물 및 리튬 하이드록사이드(LiOH) (99.3%, 무수, -4+14 메쉬)를 각각 죤손 매테이(Johnson Matthey) 및 알파(Alfa)로부터 구입했다. 킬레이트제인 BA-2,3,2-tet.5 HCl 및 BA-사이클람.5HCl을 실시예 4 및 6 에 기술된 바와 같이 제조하였다.Rhodium trichloride hydrate and lithium hydroxide (LiOH) (99.3%, anhydrous, -4 + 14 mesh) were purchased from Johnson Matthey and Alfa, respectively. Chelating agents BA-2,3,2-tet.5 HCl and BA-cyclam.5HCl were prepared as described in Examples 4 and 6.

파마시아 세파덱스-SP TM C-25양이온 교환수지를 앨드리치로부터 구입했다. 크로마토그라피용 유리컬럼은 약 2.5×70cm 이었고 상부에 29/42 유리접지 조인트가 끼워있고 바닥에는 코오스 유리프릿과 테프론 정지콕이 설비되어 있었다.Pharmacia Sephadex-SP ™ C-25 cation exchange resin was purchased from Aldrich. The glass column for chromatography was about 2.5 × 70 cm, with a 29/42 glass ground joint at the top and a coarse glass frit and Teflon stopcock at the bottom.

양이온 교환수지는 무수겔 40g을 온화하게 교반하면서 0.3 N HCl 수용액 300㎖ 에 가하여 슬러리를 형성하므로써 제조하였다. 그런다음, 이 슬러리를 커다란 등급 실린더에 옮기고 1.5 시간에 걸쳐서 부풀어오르게 했다. 이 기간동안 몇번의 간격으로 0.3N HCl 일부를 따라내고 (미세물질을 제거하기 위한 노력의 일환으로), 추가의 0.3N HCl를 가한 다음 슬러리를 온화하게 섞었다. 칼럼의 상부에 1 리터쿠겔로어(Kugelrohr)플라스크를 부착하여 칼럼을 부어서 슬러리 모두를 한번에 이송시켰다. 이 겔을 H+ 형태로 전환시키고 칼럼을 통해 0.3 N HCl 2-3 리터를 흐르게하여 포장하였다.The cation exchange resin was prepared by adding 40 g of anhydrous gel to 300 mL of 0.3 N HCl aqueous solution with gentle stirring to form a slurry. The slurry was then transferred to a large grade cylinder and allowed to swell over 1.5 hours. During this period some 0.3 N HCl was decanted (in an effort to remove fines) at several intervals, additional 0.3 N HCl was added, and the slurry was gently mixed. A 1 liter Kugelrohr flask was attached to the top of the column to pour the column to transfer all of the slurry at once. The gel was converted to H + form and packed by flowing 2-3 liters of 0.3 N HCl through the column.

시료 (0.1 내지 1.0g)를 5-10㎖ 의 증류수에 용해시키고 이 용액을 직접 칼럼 상부에 적용하여 크로마토그라피하였다. 이 용액을 겔중에서 소량의 0.3N HCl로 수회 세척하고 같은 용매로 칼럼을 용출시켰다. 칼럼을 통과하는 용매의 흐름속도는 길슨 미니플러스 2 연동 펌프[분당 (m^-1)3-4 ㎖]로 유지하였고 용출된 시료피크는 254 나노미터(nm)에서 모델 1132 멀티플렉서-익스펜더(multiplexer-expander) 및 타입 6 광학유니트가 장치된 이스코(Isco)모델 UV-5 흡수도 모니터로 검출하였다. 중성, 음하전 및 1 가 양하전된 종류들은 빨리(0.5-1.5시간) 컬럼으로부터 용출시키고, 2 가 양하전된 종류들은 5-8시간 후에 용출시키며 보다 높게 양하전된 종류들은 컬럼의 상부에 남겼다.Samples (0.1-1.0 g) were dissolved in 5-10 mL of distilled water and the solution was chromatographed by direct application on the column top. This solution was washed several times with a small amount of 0.3N HCl in the gel and the column was eluted with the same solvent. The flow rate of the solvent through the column was maintained with a Gilson MiniPlus 2 peristaltic pump [(m⁻¹ ) 3-4 mL per minute] and the eluted sample peak was 254 nanometers (nm) at a model 1132 multiplexer-multiplexer- The Isco model UV-5 absorbance monitor equipped with an expander and type 6 optical unit was detected. Neutral, negatively charged and monovalently charged species eluted from the column quickly (0.5-1.5 hours), bivalently charged species eluted after 5-8 hours and higher positively charged species remained at the top of the column.

B. [Rh(BA-2,3,2-tet) CI2]CI·HCIB. [Rh (BA-2,3,2-tet) CI 2] CI HCI

디클로로(β,β',β''-트리아미노트리에틸아민) 로듐(III) 클로라이드를 제조하기 위한 마틴스 및 쉐리단의 방법 [참고문헌: Martins, E.; Sheridan, P.S., Inorg, Chem. (1978), 17, 2822-2826 페이지]을 약간 수정하여 사용하였다. 0.1N LiOH 30㎖ 중의 BA-2,3,2-tet·5HCl(0.524g, 447.71g 몰^-1, 1.17밀리몰)용액에 RhCI₃·3H2sO (0.308g, 263.309g 몰-1, 1.17밀리몰)를 가했다. 적색용액을 5 분 동안 환류시키고 0.1N LiOH (총 64.1㎖를 사용하거나 5.5당량)를 사용하여 45분 간에 걸쳐서 pH 6 으로 서서히 적정하였다. 컬러패하스트(colorp HastTM) 지시스트립(마칼라스터 빅넬 컴패니로부터 구입)을 사용하여 pH를 감시하였다. 총 약 1 시간 정도 환류시킨 후 황갈색 혼합물을 냉각하고, 여과한 다음 용매를 회전 증발기상에서 제거하였다. 고체를 증류수 10㎖ 에 용해시키고, 미세기공 유리프릿화 여과기상의 셀라이트^TM패드 및 겔만 아크로디스크^TMCR 일회용 실린지 팁 여과기(피셔 사이언티픽으로부터 구입)로 여과한 다음, 세파덱스-SP^TMC -25 컬럼(상기 참조)의 상부에 적용시켰다. 2 가 양하전된 종류는 0.3N HCl을 사용하여 단일 밴드로 컬럼에서 용출시키고 분획물을 모았다. 용매를 회전증발기상에서 제거하고, 황색고체를 진공오븐에서 30℃ 로 건조시켜 생성물 0.205mg(34.3%)을 수득했다. 이 물질은¹H 및¹³C NMR 및 빠른 원자충격 질량분석기로 특징을 나타내었다. NMR 분광은 생성물이 3 가지 이성체로 존재함을 보여주었다.Martins and Sheridan's method for preparing dichloro (β, β ', β''-triaminotriethylamine) rhodium (III) chloride [Martins, E .; Sheridan, PS, Inorg, Chem. (1978), pages 17, 2822-2826, with some modifications. To a solution of BA-2,3,2-tet.5HCl (0.524 g, 447.71 g mol^-1 , 1.17 mmol) in 30 mL of 0.1 N LiOH was added RhCI₃ .3H2sO (0.308 g, 263.309 g mol-1, 1.17 mmol). Added. The red solution was refluxed for 5 minutes and titrated slowly to pH 6 over 45 minutes using 0.1N LiOH (64.1 mL total or 5.5 equivalents). PH was monitored using a colorp Hast ™ indicator strip (purchased from the Marcalar Bicknell Company). After refluxing for a total of about 1 hour, the tan mixture was cooled, filtered and the solvent removed on a rotary evaporator. The solid was dissolved in distilled water and 10㎖, micropore filtration with a glass frit filter screen Celite^TM pad and gelman arc disk^TM CR disposable syringe tip filter (obtained from Fisher Scientific) on the next, Sephadex^TM -SP C - It was applied on top of 25 columns (see above). The divalent positively charged species eluted in the column in single band using 0.3N HCl and fractions were collected. The solvent was removed on a rotary evaporator and the yellow solid was dried at 30 ° C. in a vacuum oven to yield 0.205 mg (34.3%) of product. This material was characterized by¹ H and¹³ C NMR and fast atomic shock mass spectrometry. NMR spectroscopy showed that the product is present in three isomers.

분석analysis

C. [Rh-(BA-사이클람)CI2]Cl·HClC. [Rh- (BA-cyclam) CI2] Cl-HCl

RhCl₃· 3H₂O 0.50g (1.90밀리몰), BA-사이클람·5HCl 0.93g (1.91 밀리몰) 및 0.1N LiOH 102.5㎖ (10.3밀리몰, 5.39당량)를 사용하여 생성물 0.385(36.8%)를 수득한 것을 제외하고는 상기한 방법과 같았다. 생성물은 상기한 바와 같이 특징을 나타내었다. NMR 분광 분석결과 여러 이성체가 존재함을 알았다.Product 0.385 (36.8%) was obtained using 0.50 g (1.90 mmol) of RhCl₃ · 3H₂ O, 0.93 g (1.91 mmol) of BA-cyclam-5HCl and 102.5 mL (10.3 mmol, 5.39 equiv) of 0.1N LiOH. It was the same as the above method except that. The product was characterized as described above. NMR spectroscopy revealed several isomers.

분석analysis

실시예 15Example 15

[105Rh(BA-2,3,2-tet) CI2]+ 의 제조Preparation of [105Rh (BA-2,3,2-tet) CI 2] +

미주리대학 연구소 반응기로부터¹⁰⁵로듐 클로라이드(0.1N HCl 중의 약 5mCi/㎖)를 구입했다. 이 원료용액 3㎖를 1.0M NaHCO₃0.4㎖ 로 중화하였다. BA-2,3,2-tet(10mg/㎖ 용액 0.2㎖)를 교반하면서 가했다. 이 용액을 수욕조에서 1시간동안 90℃ 로 가열했다. 이 용액을 해밀톤 PRT-1 크롬팩 유니트에 통과시켜 미반응금속 및 킬레이트제로 부터¹⁰⁵Rh 착화합물을 정제시켰다.¹⁰⁵Rh 착화합물을 30% 아세토니트릴/물 세척으로 용출시켰다. 이 물질을 분석한 결과 [¹⁰⁵Rh(BA-2,3,2-tet) CI₂]+⁺및 [¹⁰⁵Rh(BA-2,3,2-tet)(CI)(H₂O)]²⁺착화합물이 동량으로 존재함을 알았다. 이 용액을 HCl 중에서 0.5N 로 만들고 수욕조에서 30분간 90℃ 로 가열하여 이 아쿠오클로로 착화합물을 디클로로 착화합물로 전환시켰다¹⁰⁵ rhodium chloride (about 5 mCi / ml in 0.1 N HCl) was purchased from the University of Missouri laboratory reactor.₃ ml of this stock solution was neutralized with 0.4 ml of 1.0 M NaHCO₃ . BA-2,3,2-tet (0.2 mL of 10 mg / mL solution) was added with stirring. This solution was heated to 90 ° C. for 1 hour in a water bath. This solution was passed through a Hamilton PRT-1 chromium pack unit to purify the¹⁰⁵ Rh complex from unreacted metals and chelating agents.^{The 105} Rh complex was eluted with 30% acetonitrile / water wash. Analysis of this material showed [¹⁰⁵ Rh (BA-2,3,2-tet) CI₂ ] +⁺ and [¹⁰⁵ Rh (BA-2,3,2-tet) (CI) (H₂ O)]^{2 It} was found that the⁺ complex was present in the same amount. The solution was made 0.5N in HCl and heated at 90 ° C. for 30 minutes in a water bath to convert this aquachloro complex into a dichloro complex.

[¹⁰⁵Rh(BA-2,3,2-tet) CI2]+ 착화합물을 단리시키고 해밀톤 PRP-1 크롬팩으로 농축시켰다. 이 착화합물은 양이온 교환 크로마토그라피 및 박층 크로마토그라피를 사용하여 공지의 표준물질과 비교하여 특징을 나타내었다.¹⁰⁵RH 에 대하여 85% 이상의 수율로 얻었다.[¹⁰⁵ Rh (BA-2,3,2-tet) CI 2] + complex was isolated and concentrated to Hamilton PRP-1 chromium pack. This complex was characterized using cation exchange chromatography and thin layer chromatography as compared to known standards. Obtained in yield of 85% or more with respect to¹⁰⁵ RH.

실시예 16Example 16

항체에 [¹⁰⁵Rh(BA-2,3,2-tet) CI₂]⁺의 콘쥬게이트화[¹⁰⁵Rh(BA-2,3,2-tet) CI₂]⁺의 착화합물을 무라야마 등에 의해 요약된 기본공정[참고문헌 : A.Murayama, K. himada and Tt. Yamamoto, Immunochemistry, 15, 523-528 페이지 (1978)]에 따라 탄수화물 측쇄를 통해 항체에 결합시켰다. 사용된 항체는 뮤린 단일 항체 IgG 인 CC-49 로서, 종양 관련항원ㅇ인 TAG-72 의 에피토프(epitope)에 결합한다. 정제된 CC-49 IgG (0.05 M 초산나트륨 중의 10mg/㎖, pH5.2) 1mg을 암소에서 1시간동안 실온에서 NaIO₄1밀리몰(0.100M 용액 0.001㎖)로 처리했다. 이 활성화된 항체를 분리하고 원심분리 겔 여과에 의해 과잉의 NaIO 4 로부터 회수했다. 이 활성화된 항체에 [105Rh(BA-2,3,2-tet) CI2]+ 착화합물 0.100㎖ (약 5mCi/㎖, 1 × 10^-4M) 및 NaCNBH 0.01㎖ (0.10M)를 가했다. 실온에서 2시간동안 커플링시켰다. 원심겔여과 과정을 반복하여¹⁰⁵RH로 표지된 항체를 단리시켰다. 표준 생화학적 및 면역학적 과정으로 항체의 보존을 확인했다.The antibody to the^{[105 Rh (BA-2,3,2-} tet) CI 2] + of the conjugate screen^{[105 Rh (BA-2,3,2-} tet) CI 2] + complex of summary by Murayama Basic Process [References: A.Murayama, K. himada and Tt. Yamamoto, Immunochemistry, 15, 523-528 (1978)] was used to bind antibodies through carbohydrate side chains. The antibody used was CC-49, a murine single antibody IgG, that binds to the epitope of TAG-72, a tumor associated antigen. 1 mg of purified CC-49 IgG (10 mg / ml in 0.05 M sodium acetate, pH5.2) was treated with 1 mmol of NaIO₄ (0.001 ml of 0.100 M solution) at room temperature for 1 hour in the dark. This activated antibody was isolated and recovered from excess NaIO 4 by centrifugal gel filtration. To this activated antibody was added 0.100 mL (about 5 mCi / mL, 1 × 10⁻⁴ M) of [105Rh (BA-2,3,2-tet) CI 2] + complex and 0.01 mL (0.10M) of NaCNBH. Coupling for 2 hours at room temperature. Centrifugal gel filtration was repeated to isolate the antibody labeled with¹⁰⁵ RH. Standard biochemical and immunological procedures confirmed the conservation of the antibody.

실시예 17Example 17

[105Rh(BITC-2,3,2-tet) CI2]+의 제조Preparation of [105Rh (BITC-2,3,2-tet) CI2] +

[105Rh(BA-2,3,2-tet) CI2]+(약 5mCi/㎖, 1 × 10^-4 M) 2㎖를 티오포스겐 0.002㎖ 와 혼합하여 [105Rh(BA-2,3,2-tet) CI2]+를 반응성 [105Rh(BITC-2,3,2-tet) CI2]+ 유도체(''BITC'' 는 p-이소티오시아네이토 벤질을 뜻한다)로 전환시켰다. 실온에서 15분간 반응을 진행시켰다. 용액을 해밀톤 PRP-1 크롬팩에 통과시켜 생성물을 단리시켰다 .[105Rh(BITC-2,3,2-tet) CI2]+ 를 아세토니트릴 2㎖ 로 용출시켰다. 생성물은 양이온 교환 및 전환상 크로마토그라피를 이용하여 공지의 표준물과 비교하여 특징을 나타내었다. 이 공정을 사용하여 50 내지 85% 수율을 얻었다.2 ml of [105Rh (BA-2,3,2-tet) CI2] + (about 5 mCi / ml, 1 × 10 ^ -4 M) was mixed with 0.002 ml of thiophosgen to [105Rh (BA-2,3,2 -tet) CI2] + was converted to reactive [105Rh (BITC-2,3,2-tet) CI2] + derivative (`` BITC '' means p-isothiocyanato benzyl). The reaction was allowed to proceed for 15 minutes at room temperature. The product was isolated by passing the solution through a Hamilton PRP-1 chromium pack. [105Rh (BITC-2,3,2-tet) CI2] + was eluted with 2 ml of acetonitrile. The product was characterized by comparison with known standards using cation exchange and conversion phase chromatography. This process was used to obtain 50-85% yield.

실시예 17 aExample 17 a

항체에 [105Rh(BITC-2,3,2-tet) CI2]+ 의 콘쥬게이트화 하기 공정에 따라 [105Rh(BITC-2,3,2-tet) CI2]+를 종양특이성 항체(IgG)의 라이신 잔기에 커플링시켰다. 이용된 항체는 CC-49 와 B72.3(이 하이브리도마 세포주 B72.3 은 미합중국 매릴랜드 록빌 파크런 드라이브 12301 의 아메리칸 타입 컬춰 콜렉션에 기탁번호 ATCC HB 8108 로 기탁되었다)으로 이들은 모두 뮤린 단일항체로서 종양관련항원인 TAG-72의 에피토프에 결합한다Conjugation of [105Rh (BITC-2,3,2-tet) CI2] + to Antibody [105Rh (BITC-2,3,2-tet) CI2] + was synthesized according to the following procedure for tumor specific antibody (IgG). Coupling to lysine residues. The antibodies used were CC-49 and B72.3 (the hybridoma cell line B72.3 was deposited with the accession number ATCC HB 8108 in the American Type Culture Collection of Rockville Parkrun Drive 12301, Maryland, USA), all of which were murine monoantibodies. Binds to the epitope of tumor-associated antigen TAG-72

[105Rh(BITC-2,3,2-tet) CI2]+1.5× 10^-5[105Rh (BITC-2,3,2-tet) CI2] + 1.5 × 10 ^ -5

밀리몰 (90.5mCi)을 1.5㎖ 에펜도르프 뷰렛튜브에서 질소하에 증발 건조시켰다. 이 건조된 용기에 적당한 항체 0.10㎖ ( Na_2 CO_3 0.1M 중에서 10mg/㎖ pH 9.5)를 가했다. 실온에서 1시간동안 커플링시켰다. 105RH 로 표지된 항체를 원심 겔 여과에 의해 단리시켰다. 표준 생화학적 면역학적 과정으로 항체의 보존을 확인했다.Millimoles (90.5 mCi) were evaporated to dryness under nitrogen in 1.5 ml Eppendorf burette tubes. To this dried container was added 0.10 mL of a suitable antibody (10 mg / mL pH 9.5 in Na_2 CO_3 0.1M). Coupling was at room temperature for 1 hour. Antibodies labeled with 105RH were isolated by centrifugal gel filtration. Standard biochemical immunological procedures confirmed the conservation of the antibody.

실시예 17bExample 17b

¹⁰⁵RH 로 표시된 항체의 생체내 배치흉선을 절제한 마우스에서 인간종양 이종이식에 의한 105RH 표지화 항체의 흡수를 측정해본 결과¹⁰⁵RH 표지화 항체의 유용성을 알았다. 암컷 마우스 (Nu/Nu)에게 인간 콜론 암세포주, LS-174T (약 4× 10⁶세포/동물)를 피하(S.C.) (0.1㎖/원료)로 접종하였다. 접종한지 약 2주후 각 동물의 꼬리정맥에¹⁰⁵RH 표지화 항체(CC-49 또는 B 72.3)3 mu Ci(15mug)를 주사했다. 다양한 시간에 마우스들을 죽이고 종양과 선택된 조직을 절제한 다음 무게를 달고 감마 계수기에서 방사능을 측정했다. 각 조직에서¹⁰⁵RH 그람당 분당계수(cpm/g)를 측정하고 주사량의 함수로 표시했다. 결과는 하기표에 나와 있다.^The in vivo absorption of¹⁰⁵ RH-labeled antibody by¹⁰⁵ tumors in mice with excised thymus in vivo showed the usefulness of the¹⁰⁵ RH-labeled antibody. Female mice (Nu / Nu) were inoculated subcutaneously (SC) (0.1 ml / raw) with the human colon cancer cell line, LS-174T (about 4 × 10⁶ cells / animal). About two weeks after inoculation, the tail vein of each animal was injected with¹⁰⁵ RH labeled antibody (CC-49 or B 72.3) 3 mu Ci (15 mug). At various times mice were killed, tumors and selected tissues were excised, weighed and radioactivity measured in a gamma counter. The counts per minute (cpm / g) per¹⁰⁵ RH gram in each tissue were measured and expressed as a function of the dosage. The results are shown in the table below.

실시예 18Example 18

항체 단편에 대한 [105Rh(BITC-2,3,2-tet) CI2]+의 콘쥬게이트Conjugates of [105Rh (BITC-2,3,2-tet) CI2] + to Antibody Fragments

[105Rh(BITC-2,3,2-tet) CI2]+를 다음 과정에 따라 CC-49 항체의 F(ab)'_2 단편의 라이신 잔기에 연결시킨다.[105Rh(BITC-2,3,2-tet) CI2]+1.5× 10^-5 밀리몰(90.5mCi)을 1.5㎖ 에펜도르프 뷰렛튜브내에서 질소하에 증발 건조시켰다. 이 건조된 용기에, 라모이와 니소노프(Lamoyi and Nisonoff)가 기술한 효소분해법 (E.Lamoyi and A. Nisonoff, J. immunol. Meth ods, 56, pp. 235-243, (1983))에 의해 제조된 CC-49 F(ab')_2 단편 0.10㎖ (0.1M Na2CO3 중의 10mg/㎖, pH9.5)를 가한다. 반응을 실온에서 1시간동안 진행시킨다. 원심 겔 여과에 의해¹⁰⁵RH-표지된 항체 단편을 분리해낸다. 항체 통합성을 표준 생화학적 면역학적 과정으로 확인한다.[105Rh (BITC-2,3,2-tet) CI2] + is linked to the lysine residue of the F (ab) '_ 2 fragment of the CC-49 antibody according to the following procedure. [105Rh (BITC-2,3,2 -tet) CI 2] + 1.5 × 10 −5 mmol (90.5 mCi) was evaporated to dryness under nitrogen in 1.5 ml Eppendorf burette tubes. In this dried container, enzymatic digestion method described by Lamoiyi and Nisonoff (E. Lamoyi and A. Nisonoff, J. immunol.Meth ods, 56, pp. 235-243, (1983)). 0.10 mL (10 mg / mL in 0.1 M Na 2 CO 3, pH9.5) of the prepared CC-49 F (ab ′) —2 fragment is added. The reaction is allowed to proceed for 1 hour at room temperature. Centrifugal gel filtration separates the¹⁰⁵ RH-labeled antibody fragments. Antibody integrity is confirmed by standard biochemical immunological processes.

실시예 19Example 19

¹⁰⁵RH-표지된 CC-49(Fab')2 의 생체내 배치^In vivo placement of¹⁰⁵ RH-labeled CC-49 (Fab ') 2

¹⁰⁵RH-표지된 항체 단편의 유용도는 흉선 절제한 마우스에서 인간의 종양 이종이식에 의한 물질의 소비량을 측정해야 입증된다. 흉선 절제한 마우스(Nu/Nu) 암컷에 인체에 결장암 세포주, LS-174T (대략 4×106 세포/동물)를 피하 접종 (S.C.0.1㎖/공급원)한다. 접종한지 대략 2 주가 경과한 후에, 인산염 완충염수 중의 105RH-표지된 CC-49(Fab')23μCi (15μg)를 각각의 동물의 꼬리정맥을 통해 주입한다. 시간을 달리하여 마우스를 희생시키고 종양과 선택 조직을 절제하여 칭량하고 감마 계수기에서 방사활성도를 측정한다. 각 조직에서 105RH g 에 대한 분당 계수(cpm/g)를 측정하여 주입량의 함수로서 환산한다. 그 결과는 하기 표에 나타내었다.The utility of the¹⁰⁵ RH-labeled antibody fragments is demonstrated by measuring the consumption of a substance by human tumor xenografts in thymic-excised mice. Thymic excised mice (Nu / Nu) females are subcutaneously inoculated (SC0.1 ml / source) with colon cancer cell line LS-174T (approximately 4 × 10 6 cells / animal) to humans. Approximately two weeks after inoculation, 105 RH-labeled CC-49 (Fab ') 23 μCi (15 μg) in phosphate buffered saline is injected through the tail vein of each animal. Mice are sacrificed at different times, tumors and selected tissues are excised and weighed and radioactivity measured in a gamma counter. The counts per minute (cpm / g) for 105 RH g in each tissue are measured and converted as a function of dose. The results are shown in the table below.

제시된 생체분포 데이터는 종양 조직상에 편재되도록 하는데 있어서 로듐 킬레이트/항체 콘쥬게이트의 유용성을 명백히 입증해 준다. 로듐 킬레이트/항체 콘쥬게인트는 종양 조직을 신속히 발견해 내고 나머지 부분이 신장을 거쳐 신체를 정화시킨다. 종양 대 정상조직 비율은 높으며, 이는 면역방어 및/또는 치료가 가능함을 나타내는 것이다.The biodistribution data presented clearly demonstrate the usefulness of rhodium chelate / antibody conjugates in ensuring localization on tumor tissue. Rhodium chelate / antibody conjugates quickly detect tumor tissue and allow the rest to clear the body through the kidneys. The tumor to normal tissue ratio is high, indicating that immunodefense and / or treatment is possible.

실시예 20Example 20

실시예 19 에 기술된 바와 유사한 방법으로, LS-174T 종양을 지닌 흉선 절제한 마우스에 로듐 킬레이트/항체 콘쥬게이트(양항체 단편, 즉 (Fab')2 를 105RH 로 표지)을 주입하고 전(全) IgG 모노클로날 항체를 개별적으로 시험한다. 주입후 시간을 달리하여, 319 및 306Kev 감마선을 사용하여 동물 전체의 감마선 영상을 얻는다. 이 영상들은 실시예 19에서 수득한 정량적 결과에 합치되어 종양에서 혈액 및 흡수로부터 방사활성의 신속한 청정을 나타내었다.In a manner similar to that described in Example 19, thymicectomized mice with LS-174T tumors were injected with rhodium chelate / antibody conjugate (labeling both antibody fragments, ie, (Fab ') 2 with 105RH) and ) IgG monoclonal antibodies are tested individually. By varying the time after injection, gamma-ray images of the entire animal are obtained using 319 and 306Kev gamma rays. These images were consistent with the quantitative results obtained in Example 19, showing a rapid clearing of radioactivity from blood and absorption in tumors.

포유동물의 질환상태를 진단 또는 치료하기 위해 본 발명의 로듐 킬레이트/항체 콘쥬게이트를 사용할때, 로듐 킬레이트/항체 콘쥬게이트는 로듐 킬레이트/항체 콘쥬게이트를 약제학적으로 허용되는 담체(즉, 활성 물질에 대해 불활성이며 사용 조건하에 그다지 심한 부작용 또는 독성을 갖지 않는 담체)와의 혼합물로 포함하는 조성물의 형태로 투여하는 것이 바람직하다. 로듐 킬레이트/ 항체 조성물은 특정 용도에 적합한 방식으로, 전형적으로 비경구, 예를 들면 복강내, 피하 또는 정맥 주사로 투여한다 그러한 용도에 있어서, 로듐 킬레이트/항체 콘쥬게이트 하나 이상의 유효량(즉, 목적하는 효과를 제공하기에 충분한 양)을 조성물에 사용한다. 특정 조성물에 사용될 특정 로듐 킬레이트/항체 콘쥬게이트의 선택은 투여의 용이성, 안정도, 적합한 담체와의 상용성 등과 같은 고려사항에 따른다. 특별한 경우에, 투여량은 본 분야에 공지된 과정으로 확인할 수 있다. 투여된 조성물은 전형적으로 멸균 주사용 현탁액 또는 용액과 같은 액체 형태로 존재한다. 어떤 특정 상황이던지간에 사용될 약제학적으로 허용되는 담체는 쉽게 결정될 수 있으며 본 분야에 잘 알려져 있고, 또한 이는 다른 활성물질 및/또는 부형제를 임의로 함유할 수 있다.When using the rhodium chelate / antibody conjugates of the invention to diagnose or treat a disease state in a mammal, the rhodium chelate / antibody conjugate may be incorporated into a pharmaceutically acceptable carrier (ie, an active agent). It is preferred to administer it in the form of a composition comprising a mixture with a carrier which is inert to the medium and has no severe side effects or toxicity under the conditions of use. The rhodium chelate / antibody composition is typically administered parenterally, eg, intraperitoneally, subcutaneously or intravenously, in a manner suitable for a particular use. In such applications, one or more effective amounts of the rhodium chelate / antibody conjugate (ie, desired Sufficient amount to provide an effect) is used in the composition. The choice of a particular rhodium chelate / antibody conjugate to be used in a particular composition depends on considerations such as ease of administration, stability, compatibility with a suitable carrier, and the like. In special cases, the dosage can be ascertained by procedures known in the art. The administered composition is typically in liquid form, such as a sterile injectable suspension or solution. In any particular situation, pharmaceutically acceptable carriers to be used may be readily determined and are well known in the art and may also optionally contain other active agents and / or excipients.

Claims (22)

Translated fromKorean

다음 화학식 1의 화합물과 착화된 로륨을 포함하는 로듐 착화합물:A rhodium complex comprising rhodium complexed with a compound of formula[화학식 1][Formula 1]

상기식에서, R 은 각각 독립적으로 탄소수 2 내지 10 의 적쇄 또는 분지된 알킬렌 그룹을 나타내나, 단 R 그룹에 의해 연결된 2 개의 인접한 질소 어느것에 대해서든 R 그룹은 이것이 연결하는 질소들 사이에 3 개 이상의 단일결합을 제공해야 하며; R1 은 각각 독립적으로 탄소수 1 내지 10 의 직쇄 또는 분지된 알킬렌 그룹 또는 수소를 나타내고; X 및 X1 은 수소이거나, 또는 X 와 X1 은 함께 탄소수 2 내지 10 의 가교 직쇄 또는 분지된 알킬렌 그룹 또는 가교 아르알킬렌 그룹(여기에서, 알킬렌은 탄소수 2 내지10 의 직쇄 또는 분지된 알킬렌 그룹이다)을 형성하나, 단 X 와 X1 이 함께 형성하는 경우에, X 와 X1 이 나타내는 그룹은 그것이 연결하는 인접한 질소 사이에 3 개 이상의 단일결합을 제공해야 하고;n 은 0 또는 1 의 정수이나, 단 L 그룹이 동일 질소원자에 결합되면 n 은 0 이어야하고, 만약 그렇지 않다면 n 은 1 이어야 하고; y 는 1 내지 3 의 정수이고; L 은 질소 또는 탄소원자중 어느하나에 공유결합된 링커(linker)/스페이서(spacer) 그룹으로, 질소 또는 탄소원자상의 수소원자 하나와 치환되며, 이때 링커/스페이서 그룹은 다음 화학식 2 로 표기된다:Wherein each R independently represents a red or branched alkylene group having 2 to 10 carbon atoms, provided that for any two adjacent nitrogens connected by the R group, the R group is selected from At least one single bond must be provided; Each R 1 independently represents a straight or branched alkylene group having 1 to 10 carbon atoms or hydrogen; X and X1 are hydrogen, or X and X1 together are a crosslinked linear or branched alkylene group or a crosslinked aralkylene group having 2 to 10 carbon atoms, wherein alkylene is a straight or branched alkylene having 2 to 10 carbon atoms Where X and X1 form together, the group represented by X and X1 must provide at least three single bonds between adjacent nitrogens to which it connects; n is an integer of 0 or 1 Provided that when the L group is bonded to the same nitrogen atom n must be 0, otherwise n must be 1; y is an integer from 1 to 3; L is a linker / spacer group covalently bonded to either nitrogen or carbon atom, which is substituted with one hydrogen atom on nitrogen or carbon atom, wherein the linker / spacer group is represented by the following formula (2):[화학식 2][Formula 2]

상기식에서, s 은 0 또는 1 의 정수이고; t 는 0 내지 20 의 정수이며; R2 는 항체 또는 이의 단편에 공유 결합할 수 있는 친핵성 또는 친전자성 잔기이거나, 또는 항체 또는 이의 단편에 결합될 수 있는 합성 링커이고;Wherein s is an integer of 0 or 1; t is an integer from 0 to 20; R2 is a nucleophilic or electrophilic moiety capable of covalently binding to an antibody or fragment thereof, or a synthetic linker capable of binding to an antibody or fragment thereof;

는 지환족 잔기, 방향족 잔기, 지방족 헤테로사이클릭 잔기 또는 방향족 헤테로사이클릭 잔기이며, 이 잔기들은 각각 항체 또는 항체 단편과의 결합을 방해하지 않는 하나이상의 그룹에 의해 임의로 치환된다]

Are alicyclic moieties, aromatic moieties, aliphatic heterocyclic moieties or aromatic heterocyclic moieties, each of which is optionally substituted by one or more groups that do not interfere with the binding of the antibody or antibody fragment, respectively]제 1 항에 있어서, L 이 하기 화학식 4를 갖는 제 1 항에 정의된 화학식 1의 화합물과 착화된 로듐을 포함하는 로듐 착화합물:The rhodium complex of claim 1, wherein L comprises rhodium complexed with a compound of formula 1 as defined in claim 1 having the formula[화학식 4][Formula 4]

상기식에서, R2 및 s 는 제 1 항에서 정의한 바와 같고, t 는 0 내지 6 의 정수이다.Wherein R2 and s are as defined in claim 1 and t is an integer from 0 to 6.제1항 또는 제2항에 있어서, R 이 탄소수 2 또는 3 의 알킬렌 그룹이고, R1 이 수소 또는 메틸이며, X 및 X1 이 수소이거나, X 및 X1 이 함께 벤질 또는 탄소수 2 또는 3 의 알킬렌 그룹을 나타내는 제 1항에 정의된 화학식 1의 화합물과 착화된 로듐을 포함하는 로듐 착화합물.3. A compound according to claim 1 or 2, wherein R is an alkylene group of 2 or 3 carbon atoms, R1 is hydrogen or methyl, X and X1 are hydrogen, or X and X1 together are benzyl or alkylene of 2 or 3 carbon atoms. A rhodium complex comprising rhodium complexed with a compound of formula 1 as defined in claim 1 representing a group.제3항에 있어서, y 가 정수 1 인 제 1 항에 정의된 화학식 1의 화합물과 착화된 로듐을 포함하는 로듐 착화합물.4. The rhodium complex of claim 3 comprising rhodium complexed with a compound of formula (1) as defined in claim 1, wherein y is an integer.제3항에 있어서, R2 가 이소티오시아네이트, 세미카바자이드, 티오세미카바자이드, 아미노 또는 카복실인 제1항에 정의된 화학식 1의 화합물과 착화된 로듐을 포함하는 로듐 착화합물.4. A rhodium complex comprising rhodium complexed with a compound of formula 1 as defined in claim 1 wherein R2 is isothiocyanate, semicarbazide, thiosemicarbazide, amino or carboxyl.제1항에 있어서, 3-[4-(아미노페닐)메틸]-1,5,8,12-테트라아자사이클로테트라데칸, 6-[4-(아미노페닐)메틸]-1,4,8,11-테트라아자운데칸, 6-(3-아미노프로필)-1,4,8,11-테트라아자운데칸 및 1,4,7,10-테트라아자-1-[(4-아미노페닐)메틸]사이클로도데칸으로 이루어진 군으로부터 선택된 화합물과 착화된 로듐을 포함하는 로듐 착화합물.The compound of claim 1, wherein 3- [4- (aminophenyl) methyl] -1,5,8,12-teazacyclotetedecane, 6- [4- (aminophenyl) methyl] -1,4,8, 11-tetraazadecane, 6- (3-aminopropyl) -1,4,8,11-tetraazadecane and 1,4,7,10-tetraaza-1-[(4-aminophenyl) methyl ] Rhodium complex compound comprising rhodium complexed with a compound selected from the group consisting of cyclododecane.제1항에 있어서, 3-[4-(아미노페닐)메틸]-1,5,8,12-테트라아자-2.4.9-트리옥소사이클로테트라데칸, 3-[4-(아미노페닐)메틸]-1,5,8,12-테트라아자-2,4,9,11-테트라옥소사이클로테트라데칸 및 6 - [4-아미노페닐)메틸] - 1,4,8,11 = - 테트라아자 - 5,7 - 디옥소운데칸으로 이루어진 군으로부터 선택된 화합물과 착화된 로듐을 포함하는 로듐 착화합물.The compound of claim 1, wherein 3- [4- (aminophenyl) methyl] -1,5,8,12-tetraaza-2.4.9-trioxocyclotetradecane, 3- [4- (aminophenyl) methyl] -1,5,8,12-tetraaza-2,4,9,11-tetraoxocyclotetradecane and 6- [4-aminophenyl) methyl] -1,4,8,11 = tetraaza-5 , 7-rhodium complex compound comprising rhodium complexed with a compound selected from the group consisting of dioxooundcane.다음 화학식 3의 로듐 착화합물:Rhodium complex of formula[RhChP1P2]A[RhChP1P2] A상기식에서, Rh는 로듐원자를 나타내고; Ch 는 제 1 항에 정의된 화학식 1의 화합물을 나타내며; P1 및P2 는 각각 동일하거나 상이한 한자리 리간드를 나타내거나, 또는 P1 과 P2 는 함께 2 자리 리간드를 나타내나, 단, (a) 제 1 항에 정의된 화학식 1에서 y 가 2 이면 P2 는 존재하지 않으며,Wherein Rh represents a rhodium atom; Ch represents a compound of formula 1 as defined in claim 1; P1 and P2 each represent the same or different monodentate ligands, or P1 and P2 together represent a bidentate ligand, provided that (a) if y is 2 in Formula 1 as defined in claim 1, then P2 is not present; ,(b) 제 1 항에 정의된 화학식 1에서 y 가 3 이면 P1 및 P2 가 존재하지 않고, A 는 로듐 착화합물을 중성으로 만들기에 충분한 전하를 갖는 하나 이상의 음이온을 나타낸다.(b) If y in formula 1 as defined in claim 1 is 3, then P1 and P2 are absent and A represents at least one anion with sufficient charge to make the rhodium complex neutral.제1항에 있어서, 로듐의 적어도 일부가 방사활성 로듐인 로듐 착화합물The rhodium complex of claim 1 wherein at least a portion of the rhodium is radioactive rhodium제1항에 있어서, 로듐의 적어도 일부가 105RH 인 로듐 착화합물.The rhodium complex of claim 1 wherein at least a portion of rhodium is 105 RH.제8항에 있어서, 상기 화합물이 3-[4-(아미노페닐)메틸]-1,5,8,12-테트라아자사이클로테트라데칸, 6-[4-(아미노페닐)메틸]1,4,8,11-테트라아자운데칸, 6-(3-아미노프로필)-1,4,8,11-테트라아자운데칸 및 1,4,7,10-테트라아자-1-[(4-아미노페닐)메틸]사이클로도데칸으로 이루어진 군으로부터 선택된 화합물인 로듐 착화합물.The compound of claim 8, wherein the compound is 3- [4- (aminophenyl) methyl] -1,5,8,12-teazacyclotetedecane, 6- [4- (aminophenyl) methyl] 1,4, 8,11-tetraazadecane, 6- (3-aminopropyl) -1,4,8,11-tetraazadecane and 1,4,7,10-tetraaza-1-[(4-aminophenyl Rhodium complex compound which is a compound selected from the group consisting of (methyl) cyclododecane.제8항에 있어서, [Rh(BA-2,3,2-tet)CI2]CI·HCI 또는 [Rh(BA-사이클람)CI2]CI·HCI인 로듐 착화합물.The rhodium complex of Claim 8 which is [Rh (BA-2,3,2-tet) CI2] CI * HCI or [Rh (BA-cyclam) CI2] CI * HCI.제1항에 있어서, 중합성 지지체에 공유 결합된 로듐 착화합물.The rhodium complex of claim 1 which is covalently bound to the polymeric support.항체 도는 항체 단편에 공유 결합된 제 10 항의 로듐 착화합물을 포함하는 로듐 킬레이트/항체 콘쥬게이트.A rhodium chelate / antibody conjugate comprising the rhodium complex of claim 10 covalently bound to an antibody or antibody fragment.제14항에 있어서, 항체 또는 항체 단편이 B72.3, CC-49 또는 CC-49 (Fab')2 인 로듐 킬레이트/항체 콘쥬게이트.The rhodium chelate / antibody conjugate of claim 14, wherein the antibody or antibody fragment is B72.3, CC-49 or CC-49 (Fab ') 2.제14항에 있어서, 항체 또는 항체 단편이 모노클로날 항체 또는 이의 단편인 로듐 킬레이트/항체 콘쥬게이트.The rhodium chelate / antibody conjugate of claim 14, wherein the antibody or antibody fragment is a monoclonal antibody or fragment thereof.제14항의 로듐 킬레이트/항체 콘쥬게이트 및 약제학적으로 허용되는 담체를 포함하는, 포유동물의 암을 진단 또는 치료하기 위한 로듐 킬레이트/항체 조성물.A rhodium chelate / antibody composition for diagnosing or treating cancer in a mammal, comprising the rhodium chelate / antibody conjugate of claim 14 and a pharmaceutically acceptable carrier.제17항에 있어서, 약제학적으로 허용되는 담체가 액체인 로듐 킬레이트/항체 조성물.18. The rhodium chelate / antibody composition of claim 17 wherein the pharmaceutically acceptable carrier is a liquid.제10항의 로듐 착화합물을 투여하여 사람을 제외한 포유동물의 암을 진단 또는 치료하는 방법.A method of diagnosing or treating cancer in mammals other than humans by administering the rhodium complex compound of claim 10.포유동물의 암을 진단 또는 치료하는데 사용하기 위한 제 10 항의 로듐 착화합물.The rhodium complex of claim 10 for use in diagnosing or treating cancer in a mammal.Rh A·nH2O를 ChP1P2 와 반응시키는 것을 포함하는 하기 화학식 3의 로듐 착화합물을 제조하는 방법:Method for preparing a rhodium complex of formula (3) comprising reacting Rh A.nH2O with ChP1P2:[화학식 3][Formula 3][RhChP1P2]A[RhChP1P2] A상기식에서, Rh 는 로듐원자이고; Ch 는 제 1 항에서 정의된 화학식 P1 의 화합물을 나타내며; P₁및 P₂ 각각 동일하거나 상이한 한자리 리간드이거나, 또는 P1 과 P₂는 함께 2 자리 리간드( P1 P₂)를 나타내나, 단,Wherein Rh is a rhodium atom; Ch represents a compound of formula P1 as defined in claim 1; P₁ and P₂ are the same or different monodentate ligands, or P1 and P₂ together represent a bidentate ligand (P1 P₂), provided that(a) 제 1 항에 정의된 화학식 1에서 y 가 2 이면 P₂가 존재하지 않으며,(a) P is not present when y is 2 in Formula 1 as defined in claim 1,(b) 제 1 항에 정의된 화학식 1에서 y 가 3 이면 P1 및 P2 가 존재하지 않고, A 는 착화합물을 중성으로 만들기에 충분한 전하를 갖는 하나이상의 음이온을 나타내며; n 은 0 내지 수화물을 형성하기는데 필요한 수이다.(b) when y is 3 in formula (1) as defined in claim 1, then P1 and P2 are absent and A represents at least one anion with sufficient charge to make the complex neutral; n is from 0 to a number needed to form a hydrate.제 21 항에 있어서,The method of claim 21,반응을 수용액중에서 약 pH 7에서 환류하에 수행하는 방법.The reaction is carried out under reflux at about pH 7 in aqueous solution.