【発明の詳細な説明】（産業上の利用分野）本発明は、リパーゼ活性測定用基質として有用な新規脂
肪酸エステルおよびそれを利用したリパーゼ活性の測定
用試薬ならびに測定方法に関する。DETAILED DESCRIPTION OF THE INVENTION (Field of Industrial Application) The present invention relates to a novel fatty acid ester useful as a substrate for measuring lipase activity, a reagent for measuring lipase activity using the same, and a method for measuring lipase activity.
（従来の技術）血中リパーゼ活性の測定は、膵炎等の膵疾患の消退を判
断するための重要な材料となる。(Prior Art) Measurement of blood lipase activity is an important material for determining resolution of pancreatic diseases such as pancreatitis.
従来のリパーゼ活性の測定法としては、次のようなもの
が知られている。The following methods are known as conventional methods for measuring lipase activity.
（１）乳化したオリーブ油または合成トリグリセリドを
基質として用いリパーゼを作用させて加水分解する方法
：（ｉ）加水分解によって生じる脂肪酸を中和滴定する方
法［Ｒ６Ｐ、ＭａｃＤｏｎａｌｄ、Ｃｌ１ｎ、 Ｃｈｅ
＋ｓ、 ８− ５０９〜５１９（１９８２） ］ 。(1) A method in which emulsified olive oil or synthetic triglyceride is used as a substrate and hydrolyzed by the action of lipase: (i) A method in which fatty acids produced by hydrolysis are neutralized and titrated [R6P, MacDonald, Cl1n, Che
+s, 8-509-519 (1982)].
（ｉｉ）加水分解によって生じる脂肪酸を抽出した後、
ジエチルチオカルバミン酸ナトリウムで発色させ比色定
量する方法［Ｐ、Ｈ，Ｄｉｒｓｔｉｎｅ、ｅｔ ａｌ。(ii) After extracting the fatty acids produced by hydrolysis,
Colorimetric determination method using sodium diethylthiocarbamate [P, H, Dirstine, et al.
Ｃｌ１ｎ−Ｃｈｅｍ、１４ １０９７（１９６８月。Cl1n-Chem, 14 1097 (August 196.
（ｉｉｉ）加水分解による濁度の減少を測定する方法［
Ｗ、Ｃ，Ｖｏｇｅｌ ｅｔ ａＬｃｌｉｎ、ｃｈｅｍ、
９１８８〜１８１（１９６３）］。(iii) Method for measuring turbidity reduction due to hydrolysis [
W. C. Vogel et aLclin, chem.
9188-181 (1963)].
（２）フェノール、ｐ−ニトロフェノール、α−ナフト
ール等のフェノール類の長鎖脂肪酸エステルを７！質と
し、リパーゼの作用により生じるフェノール類を発色さ
せ比色定量する方法［Ａ、５ａｉｆｅｒ、ｅｔ ａｌ
、 Ｃｌ１ｎ、 Ｃｈｅｗ、 Ｌ １７８〜１
８４（１９６１）、Ｊ、Ｆ、 Ｗｈｉｔａｋｅｒ、 Ｃ
１１ｎｉｃａ Ｇｈｉｍｉｃａ ａｃｔａ４４１３３（
１９７３月（３）１．２−ジメルカプト−３−プロパツールトリカ
ルボン酸エステルなどのＳ−アシル化合物にリパーゼを
作用させて加水分解し、生じるチオールを５，５゛−ジ
チオビス（２−ニトロ安息香酸）と反応させ黄色色素３
−カルボキシ−４−二トロベンゼンチオレートを生じさ
せ、比色定量する方法（例えば、特開昭５８−９４４０
０、同５１−３３８９４、同５〇−１５１５９４および
同１５９７９３号など）。(2) Long-chain fatty acid esters of phenols such as phenol, p-nitrophenol, and α-naphthol 7! A method for colorimetric determination of phenols produced by the action of lipase [A, 5aifer, et al.
, Cl1n, Chew, L 178-1
84 (1961), J.F., Whitaker, C.
11nica Ghimica acta44133(
March 197 (3) S-acyl compounds such as 1,2-dimercapto-3-propatol tricarboxylic acid ester are hydrolyzed by the action of lipase, and the resulting thiol is converted to 5,5'-dithiobis(2-nitrobenzoic acid). React with yellow dye 3
- A method of producing carboxy-4-nitrobenzene thiolate and quantifying it colorimetrically (for example, JP-A-58-9440
0, No. 51-33894, No. 50-151594, No. 159793, etc.).
（４）ナフトール系橙色アゾ色素の高級脂肪酸エステル
にリパーゼを作用させて加水分解し、生じる橙色々素を
比色定量する方法（特開昭５４−４６７５８、米国特許
４１８８３２０号）。(4) A method of hydrolyzing higher fatty acid esters of naphthol-based orange azo dyes with lipase and colorimetrically quantifying the resulting orange dyes (Japanese Unexamined Patent Publication No. 54-46758, US Pat. No. 4,188,320).
（発明が解決すべき問題点）しかしながら、これら従来技術について、前記方法（１
）においては安定かつ均一な基質乳化液の調製が困難で
、操作性および再現性に問題があり、また方法（２）、
（３）では基質が水に不溶のため酵素反応を乳濁状態あ
るいはアルコール等の有機溶媒の存在下で行なう必要が
あり、また操作も繁雑であることが指摘されている。ま
た（４）の方法では前記の欠点が一応解決されているが
、この方法では比色定量される色素が橙色であって血中
色素等の有色物の影響を受ける。(Problems to be solved by the invention) However, regarding these conventional techniques, the method (1)
), it is difficult to prepare a stable and uniform substrate emulsion, and there are problems with operability and reproducibility;
In (3), since the substrate is insoluble in water, the enzymatic reaction must be carried out in an emulsified state or in the presence of an organic solvent such as alcohol, and it has been pointed out that the operation is complicated. Furthermore, although the above-mentioned drawbacks have been solved to some extent in the method (4), in this method the dye to be measured colorimetrically is orange and is affected by colored substances such as blood pigments.
このため水溶性でありかつ長波長に光吸収帯をもつ色素
を遊離する基質が望まれている。また測定感度に影響す
る遊離色素のモル吸光係数の大きさについても一層の改
良が望まれている。Therefore, there is a need for a substrate that is water-soluble and releases a dye that has a light absorption band at a long wavelength. Further, it is desired to further improve the magnitude of the molar extinction coefficient of free dyes, which affects measurement sensitivity.
このような問題点を解消するものとして前記米国特許４
１８８３２０号に開示された高級脂肪酸エステルに代え
てナフトール系アゾ色素の高級脂肪酸エステルを用いる
例が報告されているが（特公昭６Ｏ−３５１１７） 、
実際の測定操作に際して反応活性がさらに高く、特に大
量の検体の迅速な処理に適する）＆質の開発が望ましい
。The above-mentioned U.S. Pat.
An example has been reported in which a higher fatty acid ester of a naphthol-based azo dye is used in place of the higher fatty acid ester disclosed in No. 188320 (Japanese Patent Publication No. 6O-35117).
In actual measurement operations, it is desirable to develop products with higher reaction activity (especially suitable for rapid processing of large amounts of samples) and quality.
したがって、本発明の目的はリパーゼ活性測定用基質と
して利用したときに操作性および再現性に優れ、かつ血
中色素等の物質による影響を受けにくい脂肪酸エステル
、それを用いたリパーゼ活性測定用試薬ならびに測定方
法を提供することにある。Therefore, the object of the present invention is to provide a fatty acid ester that has excellent operability and reproducibility when used as a substrate for measuring lipase activity, and is less affected by substances such as blood pigments, a reagent for measuring lipase activity using the same, and The objective is to provide a measurement method.
（問題点を解決するための手段）本発明の前記の目的は、下記一般式１で示される脂肪酸
エステルまたはその水溶性の塩：Ｈ式中、ＲＩ：炭素数７−１７の直鎖アルキル基、Ｒ２二
水素原子、ハロゲン原子、アルキル基または水酸基、Ｒ３：水素原子、スルホキシル基、カルボキシル基、水
酸基またはアルキル基、Ｘ：水素原子、スルホキシル基、カルボキシル基。(Means for Solving the Problems) The above object of the present invention is to provide a fatty acid ester represented by the following general formula 1 or a water-soluble salt thereof: H, where RI: a straight chain alkyl group having 7 to 17 carbon atoms. , R2 dihydrogen atom, halogen atom, alkyl group or hydroxyl group, R3: hydrogen atom, sulfoxyl group, carboxyl group, hydroxyl group or alkyl group, X: hydrogen atom, sulfoxyl group, carboxyl group.
およびそれらを含有してなるリパーゼ活性測定用試薬な
らびに上記一般式で示される脂肪酸エステルまたは七の
水溶性の塩にリパーゼを作用させ、遊離する色素を比色
定量することからなるリパーゼ活性測定力法によって達
成される。and a reagent for measuring lipase activity containing the same, and a lipase activity measuring method comprising applying lipase to a fatty acid ester represented by the above general formula or a water-soluble salt of 7, and colorimetrically quantifying the liberated pigment. achieved by.
前記一般式Ｉ中、Ｒ２のハロゲン原子としては塩素およ
び臭素等が、アルキル基としては、メチル基、エチル基
、ｎ−プロピル基およびｉ−プロピル基等が挙げられる
。Ｒ３のアルキル基はメチル基、エチル基、ｎ−プロピ
ル基およびｉ−プロピル基が挙げられる。In the general formula I, examples of the halogen atom of R2 include chlorine and bromine, and examples of the alkyl group include a methyl group, an ethyl group, an n-propyl group, and an i-propyl group. Examples of the alkyl group for R3 include a methyl group, an ethyl group, an n-propyl group, and an i-propyl group.
これらの脂肪酸エステルのうち特に好ましい具体例とし
ては１次のようなものが挙げられる。Among these fatty acid esters, particularly preferred specific examples include the following.
Ｈ式中、ＲＩ ： ｎ−ＣＩＨｔ５．ｎ−ＣｑＨ＋９、ｎ
−Ｃ＋＋Ｈｚｘ、ｎ−Ｃ１３Ｈ２／ 。H where RI: n-CIHt5. n-CqH+9, n
-C++Hzx, n-C13H2/.
ｎ−Ｃ＋ｓＨ３＋、ｎ−Ｃ：＋ｚＨ３５またこれら化合
物はナトリウム塩やカリウム塩等の水溶性の塩であって
もよい。n-C+sH3+, n-C:+zH35 These compounds may also be water-soluble salts such as sodium salts and potassium salts.
前記一般式ｌで表わされるフェノールスルホフタレイン
の脂肪酸エステルは新規化合物であり、カルボン酸アリ
ールエステルを合成する際の常法にしたがって合成する
ことができる。The fatty acid ester of phenolsulfophthalein represented by the general formula 1 is a new compound, and can be synthesized according to the conventional method for synthesizing carboxylic acid aryl ester.
すなわち、前記各化合物は対応するフェノールスルホフ
タレイン色素と高級脂肪酸の無水物あるいはハロゲン化
合物とを、ピリジン等の酸捕捉剤の存在下でＮ、Ｎ−ジ
メチルホルムアミド、Ｎ、Ｎ−ジメチルアセトアミド等
のアミド類、アセトニトリル等のニトリル類あるいはピ
リジン等の芳香族環状アミン類を溶媒として反応させる
ことにより合成される。目的物の精製は常法によって行
なわれる。That is, each of the above compounds is prepared by combining the corresponding phenolsulfophthalein dye with an anhydride of a higher fatty acid or a halogen compound in a solution of N,N-dimethylformamide, N,N-dimethylacetamide, etc. in the presence of an acid scavenger such as pyridine. It is synthesized by reacting with amides, nitriles such as acetonitrile, or aromatic cyclic amines such as pyridine as a solvent. Purification of the target product is carried out by conventional methods.
反応は常温および常圧下で容易に進行し１〜５時間程度
で完結するが、必要により加熱してもよい。The reaction proceeds easily at room temperature and pressure and is completed in about 1 to 5 hours, but may be heated if necessary.
たとえば目的化合物に対応するフェ／−ルスルホフタレ
イン色素をアセトニトリルに分散させ、対応する高級脂
肪酸のハロゲン化物およびピリジンを加えて混合し、室
温で１〜２時間反応させることによって合成される。For example, it is synthesized by dispersing a phe/-lsulfophthalein dye corresponding to the target compound in acetonitrile, adding and mixing the corresponding higher fatty acid halide and pyridine, and reacting at room temperature for 1 to 2 hours.
（効果）こうして得られた本発明の脂肪酸エステル化合物はリパ
ーゼ酵素活性測定試薬としてすぐれている。(Effect) The fatty acid ester compound of the present invention thus obtained is excellent as a reagent for measuring lipase enzyme activity.
すなわち、本発明の化合物はリパーゼ酵素測定用試薬と
して用いた場合従来の化合物に対して以下のような利点
を有する。That is, the compound of the present invention has the following advantages over conventional compounds when used as a reagent for measuring lipase enzyme.
（ｉ）水溶性であるため、水溶液中での測定が可能であ
り輻広い測定条件を選択することが可能である。(i) Since it is water-soluble, it is possible to measure it in an aqueous solution, and it is possible to select measurement conditions with a wide range of convergence.
（ｉｉ）赤紫色ないし青紫色に発色するため血中色素の
可視吸収による妨害を受けずにリパーゼ等の酵素活性を
測定することができる。(ii) Since it develops a reddish-purple to bluish-purple color, enzyme activities such as lipase can be measured without interference from visible absorption of blood pigments.
（ｉｉｉ）加水分解されて放出される色素のモル吸光係
数が大きく、定量感度の高い測定が可能である。(iii) The dye released upon hydrolysis has a large molar extinction coefficient, allowing measurement with high quantitative sensitivity.
（ｉｉ）加水分解の際の反応性がたとえば特公昭８〇−
３５１１７号開示の脂肪酸エステルに比較して著しく高
く、レートアッセイが可能であって迅速な分析を行ない
得る。(ii) The reactivity during hydrolysis is, for example,
The rate is significantly higher than that of the fatty acid ester disclosed in No. 35117, and rate assays are possible, allowing rapid analysis.
実施例次に本発明に用いる化合物の合成例を示す。ExampleNext, a synthesis example of the compound used in the present invention will be shown.
合成例１化合物１ａ（式（１）中：Ｒ１＝ｎ−Ｃ１ｌＨ２３；
Ｒ２、Ｒ３、Ｘ＝）ｌ）の合成４．４’−（３Ｈ−２，１−ベンゾオキサチオール−３
−イリデン）ビスフェノールＳ、Ｓ−ジオキシド１．７
７ｇをＮ、Ｎ−ジメチルホルムアミド４０ｍ１に溶解し
、塩化ラウロイル１．１０ｇおよびピリジン２１を加え
、室温で２時間撹拌反応させて４．４’−（３）１−２
．１−ベンゾオキサチオール−３−イリデン）ビスフェ
ノールＳ、Ｓ−ジオキシドラウリン酸エステルを得た０
反応混合物から減圧で溶媒を除去した次いでシリカゲル
カラムクロマトグラフィ（キイーゼルゲル６０、溶媒：
ベンゼン−メタノール）で精製した。Synthesis Example 1 Compound 1a (in formula (1): R1=n-C11H23;
Synthesis of R2, R3, X=)l) 4.4'-(3H-2,1-benzoxathiol-3
-ylidene) bisphenol S, S-dioxide 1.7
7 g was dissolved in 40 ml of N,N-dimethylformamide, 1.10 g of lauroyl chloride and 21 pyridine were added, and the reaction was stirred at room temperature for 2 hours to obtain 4.4'-(3)1-2.
．． 1-benzoxathiol-3-ylidene) bisphenol S, S-dioxide lauric acid ester obtained 0
The solvent was removed from the reaction mixture under reduced pressure and then subjected to silica gel column chromatography (Kieselgel 60, solvent:
Purified with benzene-methanol).
収硬： １９０ ｇ入ｗａｘ： ３７１ｎｍ、ｅ ＝１．８５ Ｘ １０’
（メタノール中で測定）ＩＲ： ｙＯＨ： ３３３０ ｃｓ＋−１； νｃ＊ｏ
： １７４５ｃｍ−１（クロロホルム中で測定）ＮＭＲ： （ＣＤ＋ＣＩ）δ、 ０．８２〜１．５４ （２２Ｈ，ｍ）δ：
２．５０ （２Ｈ，ｔ）δ： ６．８０〜８．０８ （１２Ｈ，■）合成例２化合物１ｂ（式（１）中： Ｒ１＝ｎ−Ｃ１ｌＨ２３；
Ｒｚｓ（：１ ）の合成４．４”−（３Ｈ−２，１−ベンゾオキサチオール−３
−イリデン）ビス（２−クロロフェノール）Ｓ、Ｓ−ジ
オキシド２．１２ｇをアセトニトリル４０鳳ｌに分散さ
せ、塩化ラウロイル１．１０ｇおよびピリジン２ｍｌを
加え、室温で２時間撹拌反応させて４．４°−（３Ｈ−
２，１−ベンゾオキサチオール−３−イリデン）ビス（
２−クロロフェノール）Ｓ、Ｓ−ジオキシドラウリン酸
エステルを得た０反応混合物から減圧で溶媒を除去次い
でシリカゲルカラムクロマトグラフィ（キイーゼルゲル
８０、溶媒：ベンゼン−メタノール）・で精製した。Hardness: 190 g Wax: 371 nm, e = 1.85 x 10'
(Measured in methanol) IR: yOH: 3330 cs+-1; νc*o
: 1745 cm-1 (measured in chloroform) NMR: (CD+CI) δ, 0.82-1.54 (22H, m) δ:
2.50 (2H, t) δ: 6.80-8.08 (12H, ■) Synthesis Example 2 Compound 1b (in formula (1): R1=n-C11H23;
Synthesis of Rzs(:1) 4.4”-(3H-2,1-benzoxathiol-3
-ylidene)bis(2-chlorophenol)S,S-dioxide (2.12 g) was dispersed in 40 liters of acetonitrile, 1.10 g of lauroyl chloride and 2 ml of pyridine were added, and the mixture was reacted with stirring at room temperature for 2 hours. -(3H-
2,1-benzoxathiol-3-ylidene)bis(
The solvent was removed from the reaction mixture under reduced pressure to obtain 2-chlorophenol)S,S-dioxydlauric acid ester, and the mixture was purified by silica gel column chromatography (Kieselgel 80, solvent: benzene-methanol).
収ψ： １．７５ ｇ入ｍａｎ： ３７３ ｎｍ 、 ｅｘ２．２４ ＸＩＯ
’ （メタノール中で測定）ＩＲニジＯＨ： ３３００ ｃｍｉ；シｃ−ｏ ： １
７５０ｃｍ−１（クロロホルム中で測定）ＮＭＲ： （ＣＤ：＋ＣＩ）δ： ０．８４〜１．８５ （２２Ｈ，ｍ）δ：
２．５Ｂ （２Ｈ，ｔ）δ： ８．８２〜８．００（ＩＯＨ，ｍ）合成例３化合物１ｂ（式（Ｉ）中：Ｒ１＊ｎ−（＋３Ｈ２ｌ、ｎ
−Ｃ＋ｓＨ：ｎ。Amount ψ: 1.75 g Input man: 373 nm, ex2.24 XIO
' (Measured in methanol) IR NijiOH: 3300 cmi; C-O: 1
750 cm-1 (measured in chloroform) NMR: (CD:+CI) δ: 0.84-1.85 (22H, m) δ:
2.5B (2H,t) δ: 8.82-8.00 (IOH,m) Synthesis Example 3 Compound 1b (in formula (I): R1*n-(+3H2l,n
-C+sH:n.
ｎ−Ｃ＋ｚＨｘｓ；Ｒ２＝＝ Ｃ１； Ｒ３，Ｘ＝ Ｈ
）（７）合成合成例２において塩化ラウロイルの代りに
塩化ミリストイル、塩化バルミトイルおよび塩化ステア
ロイルを用い、合成例２と同様の操作で反応、分離およ
び精製して前記式１ｂの各高級脂肪酸エステル化合物を
得た。n-C+zHxs;R2==C1;R3,X=H
) (7) Synthesis In Synthesis Example 2, myristoyl chloride, balmitoyl chloride and stearoyl chloride were used instead of lauroyl chloride, and the same procedures as in Synthesis Example 2 were used to react, separate and purify each higher fatty acid ester compound of formula 1b. Obtained.
得られた合成物のＵＶ、 ＩＲおよびＮＭＲの測定結果
を下に示した。The results of UV, IR and NMR measurements of the obtained compound are shown below.
ミリスチン酸エステル入ｗａｘ ： ３７３ ｎｍ、 ｅ ＝
２．２４ ＸＩＯ’ＩＲ： ｐＯＨ： ３３００ｃ
ｍ−１； ｙｃ＝ｏ ： １７５０ｃｍ−１（ク
ロロホルム中で測定）ＮにＲ： （ＣＩｈＣ１）δ： ０−ＳＯ〜１．５８ （２８Ｈ，ｍ）δ：
１５０ （２Ｈ，ｔ）δ： ８．８４〜８．０１（ＩＯＨ，■）バルミチン
酸エステル入ｌ１ａｘ ： ３７４ ｎｍ、ｅ ＝ ２．２８
Ｘ１０４ＩＲ： ｐＯＨ： ３３００ｃｓ＋−１
； ＦＣ＝Ｏ： １７５０ｃｍ−１（クロロホルム
中で測定）ＮＭＲ： （ＣＤ３ＣＩ）δ： ０．８７〜１．５１ （３０）１．■）δ：
２．５１ （２Ｈ，ｔ）δ： ６．８８〜８．００（ＩＯＨ，■）ステアリン
酸エステル入ｗａｘ ： ３７３ ｎｉｐ、 ｅ ＝ ２．
：ｌＪ ＸＩＯ’ＩＲ： ｙＯＨ： ３３００ｃｍ−’
； ＦＣ＝Ｏ： １７５０ｃｍ−１（クロロホルム中で
測定）ＮＭＲ： （ＣＩ）３ＣＩ）δ ： （Ｃ８８〜 １．５３ （３４Ｂ、瀧）
δ ： ２．５０ （２Ｈ，ｔ）δ ： ８．８８ 〜７．５ａ（ｌｏｎ、ｍ）（測定
試験例）次に本発明の前記高級脂肪酸エステルを含む測定用試薬
を調製し、それによってリパーゼ酵素活性の測定を行な
った。Wax containing myristate ester: 373 nm, e =
2.24 XIO'IR: pOH: 3300c
m-1; yc=o: 1750 cm-1 (measured in chloroform) R to N: (CIhC1) δ: 0-SO~1.58 (28H, m) δ:
150 (2H, t) δ: 8.84-8.01 (IOH, ■) l1ax with valmitic acid ester: 374 nm, e = 2.28
X104IR: pOH: 3300cs+-1
; FC=O: 1750 cm-1 (measured in chloroform) NMR: (CD3CI) δ: 0.87-1.51 (30)1. ■) δ:
2.51 (2H, t) δ: 6.88-8.00 (IOH, ■) Stearic acid ester-containing wax: 373 nip, e = 2.
:lJ XIO'IR: yOH: 3300cm-'
; FC=O: 1750 cm-1 (measured in chloroform) NMR: (CI)3CI) δ: (C88~1.53 (34B, Taki)
δ: 2.50 (2H, t) δ: 8.88 to 7.5a (lon, m) (Measurement test example) Next, a measurement reagent containing the higher fatty acid ester of the present invention was prepared, and thereby lipase Enzyme activity was measured.
測定例１反応液（Ｉ）の調製コール酸ナトリウム２１５ｍｇにｐＨ８１７）１／ＩＯ
Ｍリン酸緩物液を加え１００論ｌとした。Measurement Example 1 Preparation of reaction solution (I) Add 215 mg of sodium cholate to pH 817) 1/IO
M phosphate solution was added to make 100 liters.
反応液（■）（基質溶液）の調製４．４’−（３Ｈ−２，１−ベンゾオキサチオール−３
−イリデン）ビスフェノールＳ、Ｓ−ジオキシドカプリ
ン酸エステル（式Ｉａ中： Ｒ＋−ＣｑＨＩｑ＞ （５
，０７ｍｇ）ニｐＨ４，５の１／１００％酢酸緩衝液を
加え５１とした。Preparation of reaction solution (■) (substrate solution) 4.4'-(3H-2,1-benzoxathiol-3
-ylidene) bisphenol S, S-dioxide capric acid ester (in formula Ia: R+-CqHIq> (5
, 07 mg) was added with a 1/100% acetate buffer with a pH of 4.5 to 51.
酵素溶液の調製粗リパーゼ（シグマケミカル社： Ｔｙｐｅｌｌ ）０
．４ｇに生理食塩水２０１を加え不溶部を濾去した。こ
の溶液を生理食塩水で１ノＳ 、 ２１５ 、３１５
、４１５に夫々希釈し合計５種の酵素溶液とした。Preparation of enzyme solution Crude lipase (Sigma Chemical Company: Typell) 0
．． Physiological saline 201 was added to 4 g, and the insoluble portion was filtered off. This solution was diluted with physiological saline for 1 noS, 215, 315
, 415, respectively, to obtain a total of five types of enzyme solutions.
酵素活性の測定上記反応液（Ｉ）２．０ｍｌに上記酵素溶液０．０５ｍ
１を加え３７℃で５分間ブレインキュベートした後、」
−記反応液（ＩＩ） ０．５＋＋＋１を加え、３７℃、
５５７ｍｍにおける吸光度を測定してレートアッセイし
た。Measurement of enzyme activity Add 0.05 ml of the above enzyme solution to 2.0 ml of the above reaction solution (I).
1 and incubate at 37°C for 5 minutes.
- Add 0.5+++1 of the reaction solution (II), and heat at 37°C.
Rate assay was performed by measuring absorbance at 557 mm.
なおブランク検液として、上記酵素溶液の代りに生理食
塩水０．０５ｍ１を加えて同様の処理をしたものを用い
た。検液とブランク検液の吸光度変化量の差をよみ取り
、結果を第１図中の直線ｌで示した。As a blank test solution, a solution treated in the same manner with the addition of 0.05 ml of physiological saline instead of the enzyme solution was used. The difference in the amount of change in absorbance between the test solution and the blank test solution was read, and the results are shown by the straight line 1 in FIG.
第１図は本発明による測定用試薬化合物を含む検液のブ
ランク検液を対照とした吸光度変化量の差（６ｍ ００
） ／騰ｉｎ）を縦軸に酵素濃度（ｉｉ５〜５１５）を
横軸に夫々とって示すそれらの間の関係を示すグラフで
ある。Figure 1 shows the difference in absorbance (6 m 00
It is a graph showing the relationship between the enzyme concentrations (ii5-515) and the enzyme concentration (ii5 to 515) on the vertical axis and the horizontal axis, respectively.
測定例２反応液（Ｉ）の調製コール酸ナトリウム２１５１ｇにｐＨ８のｌ／１０Ｍリ
ン酸緩衝液を加え１００ｍ ｌとした。Measurement Example 2 Preparation of Reaction Solution (I) To 2151 g of sodium cholate was added l/10M phosphate buffer with pH 8 to make 100 ml.
反応液（■）（基質溶液）の調製合成例２で得た式１ｂのラウリン酸エステル（８，Ｏｆ
ｌｉｍｇ） ニｐＨ４，５（７）１／１００％酢Ｍ緩衝
液を加え５腸ｌとした。Preparation of reaction solution (■) (substrate solution) Lauric acid ester of formula 1b (8, Of
limg) pH 4.5 (7) 1/100% vinegar M buffer was added to make 5 liters.
酵素溶液の調製粗リパーゼ（シグマケミカル社 Ｔ７ｐｅ■）０．４ｇ
に生理食塩水２０ｍ１を加え不溶部を濾去した。この溶
液を生理食塩水で１１５．２１５ 、３１５ 、４１５
に夫々希釈し合計５種の酵素溶液とした。Preparation of enzyme solution Crude lipase (Sigma Chemical Co., Ltd. T7pe) 0.4g
20 ml of physiological saline was added to the solution, and the insoluble portion was filtered off. Add this solution to physiological saline at 115.215, 315, 415
Each enzyme solution was diluted to make a total of five types of enzyme solutions.
酵素活性の測定」−記反応液（Ｉ）２．０ｍｌにｔ記酵素溶液０．０５
１を加え３７℃で５分間ブレインキュベートした後１、
に記反応液（ｎ） ０．５ ｍｌを加え、３７℃、５７
５ｍｍにおける吸光度を測定してレートアッセイした。"Measurement of Enzyme Activity" - Add 0.05 mL of the enzyme solution described above to 2.0 ml of the reaction solution (I) described above.
After adding 1 and incubating at 37°C for 5 minutes, 1,
Add 0.5 ml of the reaction solution (n) described above, and heat at 37°C, 57°C.
Rate assay was performed by measuring absorbance at 5 mm.
なおブランク検液として、上記酵素溶液のかわりに生理
食塩水０．０５層１を加えて同様の処理をしたものを用
いた。検液とブランク検液の吸光度変化量の差をよみ取
り、結果を第１図中直線２で示した。As a blank test solution, a solution obtained by adding 0.05 layer 1 of physiological saline instead of the above enzyme solution and performing the same treatment was used. The difference in absorbance change between the test solution and the blank test solution was read, and the results are shown by straight line 2 in FIG.
測定例３反応液ＣＩ）の調製コール酸ナトリウム２１５ｍｇにｐｕｓの１／ＩＯＭリ
ン酸緩衝液を加え１００ ｍｌとした。Measurement Example 3 Preparation of Reaction Solution CI) PUS 1/IOM phosphate buffer was added to 215 mg of sodium cholate to make 100 ml.
反応液（■）（基質溶液）の調製合成例２と同様な手順で調製した化合物ｉｂで示される
カプリン酸エステル（５，５０ｍｇ）にＰ）１４．５の
１／１００Ｍ酢酸緩衝液を加え５ｍｌとした。Preparation of reaction solution (■) (substrate solution) Add 1/100M acetate buffer of P) 14.5 to the capric acid ester represented by compound ib (5.50 mg) prepared in the same manner as in Synthesis Example 2 to make 5 ml. And so.
酵素溶液の調製粗リパーゼ（シグマケミカル社 Ｔｙｐｅｎ ）０．２
ｇに生理食塩水２０１を加え不溶部を濾去した。この溶
液を生理食塩水で１１５ 、２１５．３１５ 、４１５
に夫々希釈し合計５種の酵素溶液とした。Preparation of enzyme solution Crude lipase (Sigma Chemical Co., Ltd. Typen) 0.2
Physiological saline 201 was added to g, and the insoluble portion was filtered off. Add this solution to physiological saline at 115, 215, 315, 415
Each enzyme solution was diluted to make a total of five types of enzyme solutions.
酵素活性の測定Ｅ記反応液（Ｉ）２．０層ｌに上酵素素溶液０−０５ｍ
１を加え３７℃で５分間ブレインキュベートした後、上
記反応液（ｎ）０．５ｍｌを加え、３７℃、５７５ｎｍ
における吸光度を測定してレートアッセイした。なおブ
ランク検液として、上記酵素溶液のかわりに生理食塩水
０．０５ｍ１を加えて同様の処理をしたものを用いた。Measurement of enzyme activity Add 0-05ml of superenzyme solution to 2.0 liters of reaction solution (I).
After adding 1 and incubating at 37°C for 5 minutes, add 0.5ml of the above reaction solution (n) and incubate at 37°C at 575 nm.
The rate assay was performed by measuring the absorbance at . As a blank test solution, a solution obtained by adding 0.05 ml of physiological saline instead of the enzyme solution and performing the same treatment was used.
検液とブランク検液の吸光度変化量の差をよみ取り、結
果を第２図中の直線３で示した。第２図は吸光度変化量
の中位を変えた以外は第１図と同様な傾向を示すグラフ
であるThe difference in absorbance change between the test solution and the blank test solution was read, and the results are shown by straight line 3 in FIG. Figure 2 is a graph showing the same trend as Figure 1, except that the median amount of absorbance change has been changed.
第１図は本発明に係る測定法の実施例の結果を示すグラ
フ、第２図は別の実施例の効果を示すグラフである。FIG. 1 is a graph showing the results of an example of the measuring method according to the present invention, and FIG. 2 is a graph showing the effects of another example.
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP10953987AJPS63275579A (en) | 1987-05-01 | 1987-05-01 | Fatty acid ester, reagent containing said ester for measuring lipase activity and method for measuring lipase activity using said reagent |
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP10953987AJPS63275579A (en) | 1987-05-01 | 1987-05-01 | Fatty acid ester, reagent containing said ester for measuring lipase activity and method for measuring lipase activity using said reagent |
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPS63275579Atrue JPS63275579A (en) | 1988-11-14 |
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP10953987APendingJPS63275579A (en) | 1987-05-01 | 1987-05-01 | Fatty acid ester, reagent containing said ester for measuring lipase activity and method for measuring lipase activity using said reagent |
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JPS63275579A (en) |
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JP2007506732A (en)* | 2003-09-25 | 2007-03-22 | テル アヴィヴ ユニヴァーシティ フューチャー テクノロジー ディヴェロップメント エル．ピー． | Compositions for treating amyloid-related diseases and methods of use thereof |
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPS5446758A (en)* | 1977-09-22 | 1979-04-12 | Chugai Pharmaceut Co Ltd | Higher fatty acid ester |
| JPS5542703A (en)* | 1978-09-11 | 1980-03-26 | Marton Miksa | Pad assembled body of vacuum rotary sander |
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPS5446758A (en)* | 1977-09-22 | 1979-04-12 | Chugai Pharmaceut Co Ltd | Higher fatty acid ester |
| JPS5542703A (en)* | 1978-09-11 | 1980-03-26 | Marton Miksa | Pad assembled body of vacuum rotary sander |
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JP2007506732A (en)* | 2003-09-25 | 2007-03-22 | テル アヴィヴ ユニヴァーシティ フューチャー テクノロジー ディヴェロップメント エル．ピー． | Compositions for treating amyloid-related diseases and methods of use thereof |
| US8372880B2 (en) | 2003-09-25 | 2013-02-12 | Tel Aviv University Future Technology Development L.P. | Compositions and methods using same for treating amyloid-associated diseases |
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| US4281181A (en) | Novel L-γ-glutamyl-3-carboxy-4-hydroxyanilide and salts thereof | |
| EP0488756B1 (en) | Oxidizable color producing reagent | |
| JPS63275579A (en) | Fatty acid ester, reagent containing said ester for measuring lipase activity and method for measuring lipase activity using said reagent | |
| CN113061109A (en) | Morpholine-pyridine-merocyanine derivative fluorescent probe and preparation method and application thereof | |
| CN110218215B (en) | Application of a two-photon ratiometric fluorescent probe in the detection of monoamine oxidase B | |
| WO2008152305A2 (en) | Novel nitroreductase enzymatic substrates | |
| US5081274A (en) | 4-acyl-2,6-dihalophenyl-phosphoric acid derivatives useful in the determination of acid phosphatase activity | |
| JP2838866B2 (en) | Method for suppressing the activity of reducing substances in oxidative colorimetric analysis | |
| JPS60197643A (en) | Novel choline derivative | |
| US5126329A (en) | Glucosamine derivatives and compositions reagents and containing the same | |
| US4933277A (en) | Method of quantitative analysis of hydrogen peroxide and reagent therefor | |
| US4717659A (en) | Novel method for determining cholinesterase activity | |
| JP4004095B2 (en) | Novel substrate compound and method for measuring cholinesterase activity | |
| US5227291A (en) | Method for determination of acid phosphatase activity using 4-acyl-2, 6-dihalophenyl phosphoric acid derivatives | |
| US4822891A (en) | 4-amino-2,3-di-substituted-1-(mono- or trichlorophenyl)-3-pyrazolin-5-ones | |
| US4983756A (en) | Novel choline derivative and method for detemining serum cholinesterase activity using the same | |
| JPH0215826B2 (en) | ||
| US4950593A (en) | Improved method for assaying proteolytic enzymes | |
| JPS6293261A (en) | Novel diphenylamine derivative and measurement using said derivative as coloring component | |
| USRE34284E (en) | Method for assaying proteolytic enzymes | |
| JP2566790B2 (en) | Diphenylamine derivative | |
| JP3124444B2 (en) | Method and reagent for measuring exo-type sugar hydrolase activity | |
| JPH0650997B2 (en) | New method for measuring cholinesterase activity | |
| JPH05262716A (en) | Oxidizable color reagent | |
| JPS62234070A (en) | Aminoantipyrine derivative and use thereof |