JPS5892619A - Stable composition containing interferon - Google Patents

Abstract

PURPOSE:To provide the titled composition containing interferon as active component and a specific sugar alcohol as stabilizing agent. CONSTITUTION:The objective composition containing stably compounded interferon is prepared by compounding >=1X10<4> IU of interferon (having a titer of >=1X10<5> IU/mg-protein) per 100g of the composition and >=15wt%, preferably >=35wt% stabilizer comprising >=3-hydric sugar alcohol (e.g. glycerin, erythritol, arabitol, etc.) based on the whole composition. The stability of interferon can be further improved by adding an acidic sugar, an organic acid buffering agent, a sulfur-containing mild reducing agent having sulfuhydryl selectivity, a human serum albumin, etc. to the composition. It can be administered in the oral cavity, to the skin, or in the rectum, vagina, urethra, eye, ear, or nose, etc.

Description

Translated fromJapanese

【発明の詳細な説明】本発明はインターフェロンを安定に配合した組成物に関
する。DETAILED DESCRIPTION OF THE INVENTION The present invention relates to compositions stably containing interferon.

インターフェロンは、ウィルスや二本鎖ＲＮＡなどの刺
激によって動物細胞から産生されるウィルス増殖抑制作
用を有するある種の蛋白質であり、その作用は動物種特
異性を有することが知られている。Interferon is a type of protein that is produced by animal cells in response to stimulation by viruses, double-stranded RNA, etc. and has the effect of suppressing the proliferation of viruses, and its effect is known to be specific to animal species.

近年、ヒト細胞由来およびヒトインターフェロン遺伝子
を組み込んだ微生物由来のインターフェロンがヒトの各
種疾病に対して治療効果を示すことがしだいに明らかに
され、その臨床的応用が試みられるようになっている。In recent years, it has become increasingly clear that interferons derived from human cells and microorganisms incorporating human interferon genes exhibit therapeutic effects on various human diseases, and clinical applications are being attempted.

かかるインターフェロンの治療効果から、インターフェ
ロンは医薬品、医薬部外品、化粧品を包含する種々の組
成物に配合する薬効剤として利用できるものと期待され
る。しかし、インターフェロンはきわめて不安定な物質
であり、ことに、臨床的に適用できる程度に精製された
ものは温度（高温）や物理的加圧によってその活性が著
しく減少し、容易に失効する。した；が、って、インタ
ーフェロンの組成物中における安定化を図らないかぎり
、その配合効果は期待でき々い。Because of the therapeutic effects of interferon, it is expected that interferon can be used as a medicinal agent to be incorporated into various compositions including pharmaceuticals, quasi-drugs, and cosmetics. However, interferon is an extremely unstable substance, and in particular, when it is purified to a clinically applicable level, its activity is significantly reduced by temperature (high temperature) or physical pressure, and it easily expires. However, unless the interferon is stabilized in the composition, the effects of its combination cannot be expected.

そこで、本発明者らはヒト由来のインターフェロンを安
定に配合した組成物を得るべく鋭意研究をつづけた結果
、意外にも、ある種の糖アルコールを共存δせると、組
成物中でのインターフェロンの安定性が著しく向上する
ことを見出し、本発明を完成するにいたった。Therefore, the present inventors continued their intensive research in order to obtain a composition containing human-derived interferon in a stable manner, and found that, unexpectedly, when a certain sugar alcohol is present in the composition, the amount of interferon in the composition increases. It was discovered that the stability was significantly improved, and the present invention was completed.

すなわち、本発明は、有効成分としてヒト由来のインタ
ーフ刊ロンを含み、その安定化剤として３価以上の糖ア
ルコールを配合してなるインターフェロンを安定に配合
した組成物を提供するものである。本発明によれば、イ
ンターフェロンを口腔内適用、皮膚外用、直腸、膣また
は尿道内投与、眼、耳まだは葎内投与′用などの種々の
細形の組成物に配合しても、その活性が長期°にわたっ
て安定に保持式れる。That is, the present invention provides a composition stably containing interferon, which contains human-derived interferon as an active ingredient and contains a trivalent or higher valent sugar alcohol as a stabilizer. According to the present invention, the activity of interferon can be improved even if interferon is incorporated into various compact compositions for oral administration, external skin administration, rectal, vaginal or intraurethral administration, ocular, ear or intraepinal administration. is maintained stably over a long period of time.

かくして、本発明の組成物に配合するインターフェロン
はヒト由来のものであればいずれでもよく、例えば、ヒ
ト白血球や正常二倍体細胞由来あるいは組換えＤＮＡ技
法を用いてヒトインターフェロン遺伝子を組み込んだ微
生物由来のものが用いられる。その配合量は特に限定す
るものではなく、実際の細形等に応じて適宜選択できる
が、効果上の観点から、一般に、ｌＸＩＯ３国際単位／
ダ蛋白以上の力価を有するインターフェロンを組成物１
００ｇ当り、ｌＸｌ０’国際単位以上となるような割合
で配合することが好ましい。Thus, the interferon incorporated in the composition of the present invention may be of any human origin, for example, human leukocytes, normal diploid cells, or microorganisms into which human interferon genes have been incorporated using recombinant DNA techniques. are used. The blending amount is not particularly limited and can be selected appropriately depending on the actual shape, etc., but from the viewpoint of effectiveness, it is generally lXIO3 international unit /
Composition 1 contains interferon with a titer higher than da protein.
It is preferable to mix it at a ratio of 1X10' international unit or more per 00g.

安定化剤として用いる３価以上の糖アルコールとしては
、グリセリン、エリスリトール、アラビトール、キシリ
トール、ソルビトール、マンニトールなどが挙げられ、
これらは単独でも、２種以上を併用してもよく、インタ
ーフェロンの安定化効果の観点から、その配合量は糖ア
ルコールとして組成−物全量に基いて１５％（重量％、
以下同じ）以上、好ましくは、８５“％以上とすること
が望ましい。Examples of trihydric or higher sugar alcohols used as stabilizers include glycerin, erythritol, arabitol, xylitol, sorbitol, mannitol, etc.
These may be used alone or in combination of two or more, and from the viewpoint of stabilizing effect on interferon, the blending amount is 15% (wt%) based on the total amount of the composition as a sugar alcohol.
The same applies hereinafter) or more, preferably 85% or more.

本発明の組成物は、前記のごとく、パスタ、練歯磨、含
漱剤のごとき口腔内適用の細形、ゲル、軟膏のごとき皮
膚外用の細形、ゲル、合剤のごとき直腸、膣ま起は尿道
内投与用の細形、液剤、ゲル、軟膏、スプレー剤のごと
き眼、耳または鼻内投与用の細形など、種々の細形とす
ることができる。これらは通常の製剤化技術に従って製
造することができ、製剤化の最終工程においてインター
フェロンを添加すればよい。他の配合成分はインターフ
ェロンの安定性に影響を及ぼさないかぎり、特に限定す
るものではなく、通常、この種の製剤に使用されるもの
いずれでもよい。また、３価以上の糖アルコールと共に
、イズロン酸、ガラクツロン１１１、り）Ｖクロン酸、
クルロンハ、マンヌロン酸、ケトグルコン酸、ケトグル
コン酸、ケトグロン酸、アスコルビン酸のよう々は性糖
およびその塩、クエン酸塩緩衝剤、コハク酸塩緩衝剤、
酒石酸塩緩衝剤、フマル酸塩緩衝剤、グルコン酸塩緩衝
剤、シュウ酸塩緩衝剤、乳酸塩緩衝剤、酢酸塩緩衝剤の
ような有機酸緩衝剤、チオクト酸、Ｎ−アセチルシステ
ィン、Ｎ−アセチルホモシスティン、グルタチオン、チ
オジグリコール、チオエタノールアミ・ン、モノチオグ
リセロール、ジチオトレイトール、炭素数１〜７のチオ
アルカン酸のようなスルフヒドリル基選択性の温和な含
硫還元剤およびヒト血清アルブミンからな不詳から選ば
れる１種または２種以上の物質を配合するとインターフ
ェロンの安定性がさらに向上するので、これらを適宜配
合してもよい。As mentioned above, the composition of the present invention can be used in small forms for oral application such as pasta, toothpaste, and mouthwash, in small forms for external use on the skin such as gels and ointments, and for rectal and vaginal applications such as gels and mixtures. It can be in a variety of forms, including forms for intraurethral administration, forms for ocular, otic or intranasal administration such as solutions, gels, ointments, and sprays. These can be manufactured according to conventional formulation techniques, and interferon may be added in the final step of formulation. Other ingredients are not particularly limited as long as they do not affect the stability of interferon, and any of those commonly used in this type of preparation may be used. In addition, along with trivalent or higher sugar alcohols, iduronic acid, galacturon 111, ri) V-curonic acid,
Currona, mannuronic acid, ketogluconic acid, ketogluconic acid, ketogulonic acid, ascorbic acid, etc. are sugars and their salts, citrate buffers, succinate buffers,
Organic acid buffers such as tartrate buffers, fumarate buffers, gluconate buffers, oxalate buffers, lactate buffers, acetate buffers, thioctic acid, N-acetylcysteine, N- Sulfhydryl group-selective mild sulfur-containing reducing agents such as acetylhomocysteine, glutathione, thiodiglycol, thioethanolamine, monothioglycerol, dithiothreitol, thioalkanoic acids having 1 to 7 carbon atoms, and human serum albumin. Since the stability of interferon is further improved by blending one or more substances selected from the following, these may be blended as appropriate.

つぎに実嫉例および実施例を挙げて本発明をさらに詳し
く説・明する。なお、これらの実験例および実施例にお
いて用いたインターフェロンは、ヒト包皮由来の線維芽
細胞から得られたものであり、その活性の測定は、シン
ドビスウイルス（３ｉｎｄｂｉ　５ｖｉｒｕｓ）および
ヒト羊膜由来の株化細胞（ＦＬ細胞）を用い、細胞変性
効果（ＣＰＥ）法により測定【［、た　（Ｈａｖｅ　Ｉ
　ｌ　　、Ｅ、Ａ、　　ａｎｄ　　Ｖｉ　ｌεｅｋ、Ｊ
　　（１９７２）。Next, the present invention will be described and explained in more detail with reference to actual examples and examples. The interferon used in these experimental examples and examples was obtained from human foreskin-derived fibroblasts, and its activity was measured using Sindbis virus (3indbi 5virus) and human amnion-derived cell lines. Cells (FL cells) were measured by the cytopathic effect (CPE) method.
l, E, A, and Vi lεek, J
(1972).

Ａｎｔｉｍｉｃｒｏｂ、　Ａｇｅｎｔｓ　Ｃｈｅｍｏｔ
ｈｅｒ、　２　、４７６　；Ｏｉｅ、　Ｈ，Ｋ、　（１
９７７）、　Ｔｅｘａｓ　Ｒｅｐ、’Ｂｉｏ１．Ｍｅｄ
、　、　８５１５４）。また、インターフェロン力価は
同時に測定した標準インターフェロンの活性と比較して
国際単位（以下、ＩＵと略す）に換算した。Antimicrob, Agents Chemot
her, 2, 476; Oie, H, K, (1
977), Texas Rep, 'Bio1. Med
, , 85154). Furthermore, the interferon titer was compared with the activity of standard interferon measured at the same time and converted into international units (hereinafter abbreviated as IU).

実験例１インターフェロン凍結乾燥品Ｉ　Ｘ　１０６ＩＵヲ生理
食塩水１−で復元し、さらに生理食塩水で稀釈してＩＸ
　１０５ＩＵ／−の濃度のインターフェロン溶液を調製
した。この溶液０１ｌ−を、種々の糖アルコールを含有
する生理食塩水溶液０．９−と混合し、４５°Ｃで２４
時間放置した。２４時ｔｔｉｉ後、各混合欣のインター
フェロン活性を測示し、初期活性（Ｉ　Ｘ　１０’　Ｉ
Ｕ／ｘ、ｔ　）を１００％としてインターフェロンの活
性調存率を算出した。Experimental Example 1 Lyophilized interferon I
An interferon solution with a concentration of 105 IU/- was prepared. 01 l of this solution was mixed with 0.9 l of physiological saline solution containing various sugar alcohols and heated at 45°C for 24 hours.
I left it for a while. After 24 hours, the interferon activity of each mixture was measured, and the initial activity (I
The interferon activity retention rate was calculated using U/x, t ) as 100%.

第１表に、用いた糖アルコールの種類および濃度と活性
残存率の関係を示す。Table 1 shows the relationship between the type and concentration of the sugar alcohol used and the residual activity rate.

実験例２実験例１と同様にして、３７℃、１ケ月放置および４℃
で６ケ月放置を行なった。その結果を第２表に示す。Experimental Example 2 Same as Experimental Example 1, left at 37℃ for 1 month and 4℃
I left it alone for 6 months. The results are shown in Table 2.

第２表第１表および第２表の結果から明らかなごとく、糖アル
コールはいずれもインターフェロン安定化効果を有し、
特に、グリセリン、キシリトール、エリスリトールがす
ぐれた効果を示している。Table 2 As is clear from the results in Tables 1 and 2, all sugar alcohols have interferon stabilizing effects;
In particular, glycerin, xylitol, and erythritol have shown excellent effects.

実施例１つぎの処方により、常法に従ってパスタを調製した。Example 1Pasta was prepared according to a conventional method using the following recipe.

パスタ処方成分　　　　　　　％セタノール　　　　　　　　　　　　　　　　２・０グ
リセリ！レモノステアレート　　　　　　　９．２７ツ
イーン８０　　　　　　　　　　　　　　　２．０ヒド
ロキシエチルセルロース　　　　　　５．５ケツカリｙ
　　　　　　　　　　　　　　　　０．０９糖アルコー
ル（第３表に示す）４０精製水　　　　　　　　　　　　　　　　残部各成分を
混合し、インターフェロンをｌＸｌ０ＩＵ／１００ｙパ
スタの割合で添加し、よく混合して、インターフェロン
自己合パスタを得た。Pasta prescription ingredients % Setanol 2.0 glycerin! Lemonostearate 9.27 Tween 80 2.0 Hydroxyethylcellulose 5.5 Caliy
0.09 sugar alcohol (shown in Table 3) 40 Purified water The remaining components were mixed, interferon was added at a ratio of 1X10IU/100y pasta, and the mixture was thoroughly mixed to obtain interferon self-compound pasta.

得られたパスタを３７°Ｃ，１ケ月および４℃で６ケ月
保存後、そのインターフェロン活性を測定し、製造直後
の活性を１００％としてインターフェロンの活性残存率
を算出した。結果を第３表に示す。After storing the obtained pasta at 37°C for 1 month and at 4°C for 6 months, its interferon activity was measured, and the residual rate of interferon activity was calculated by setting the activity immediately after production as 100%. The results are shown in Table 3.

第８表実施例２第４表に示す処方により、常法に従って練歯磨を調製し
た。各成すを混合後、最後にインターフェロンをｌＸ１
０’ＩＵ／１００Ｎ練歯磨の割合で添加し、よく混合し
て、インターフェロン配合練歯磨を得た。Table 8 Example 2 A toothpaste was prepared according to the conventional method according to the formulation shown in Table 4. After mixing each component, finally add 1X1 interferon.
The mixture was added at a ratio of 0'IU/100N toothpaste and mixed well to obtain an interferon-containing toothpaste.

これを実施例１のパスタにおけると同様に、３７℃、１
ケ月および４°Ｃ，６ケ月保存後、そのインターフェロ
ンの活性残存率を算出した。結果を第４表に示す。This was prepared at 37°C for 1 hour in the same manner as in Example 1 for the pasta.
After storage for 6 months and 6 months at 4°C, the residual activity of the interferon was calculated. The results are shown in Table 4.

第４表実施例８つぎの処方により、常法に従って皮膚外用のゲル剤を調
製した。Table 4 Example 8 A gel preparation for external use on the skin was prepared according to a conventional method using the following formulation.

ゲル剤処方成分　　　　　　　　％糖アルコール（第５表に示す）４５ツイーン３Ｑ　　　　　　　　　　　　　　　Ｏ，２カ
ーボポール９４０　　　　　　　　　　　２精製水　　
　　　　　　　　　　　　　残部各成分を混合し、最後
にインターフェロンをＩＸ　ｔｏ７ＩＵ／１００　ｆゲ
ルの割合で添加、混合し、インターフェロン配合皮膚外
用ゲル剤を得た。Gel formulation ingredients % Sugar alcohol (shown in Table 5) 45 Tween 3Q O,2 Carbopol 940 2 Purified water
The remaining components were mixed, and finally interferon was added and mixed at a ratio of IX to 7 IU/100 f gel to obtain an interferon-containing gel for external use on the skin.

これを実施例１のパスタにおけると同様に、８７°Ｃ，
１”ケ月および４℃、６ケ月保存後、そのインターフェ
ロンの活性残存率を算出した。結果を第５表に示す。This was heated to 87°C in the same way as in the pasta of Example 1.
After storage for 1 month and 6 months at 4°C, the residual activity of interferon was calculated. The results are shown in Table 5.

第５表実施例４つぎの処方により、常法に従って皮膚外用のゲル剤を調
製した。Table 5 Example 4 A gel preparation for external use on the skin was prepared according to a conventional method using the following formulation.

ゲル剤処方成分　　　　　　　　％エリスリト−Ｉし　　　　　　　　　　　　　　　４５
カーボポール９−４０　　　　　　　　　　　２精製水
　　　　　　　　　　　　　　　残部各成分を混合し、
最後に、インターフェロンをｌＸ１０６ＩＵ／１００ｇ
の割合で添加、混合し、インターフェロン配合皮膚外用
ゲル剤を得た。こ−のゲル剤を３７゛Ｃで１ケ月２よｒ
！４℃で６ケ月保存した場合のインターフェロンの活性
残存率は、各々、３０％および４５％であった。なお、
対照として、エリスリトールを精製水に代えて得られた
ゲル剤を同様に保存試験した場合の活性残存率は、各々
、０％および１％であった。Gel formulation ingredient % Erythrit-I 45
Carbopol 9-40 2 Purified water Mix the remaining ingredients,
Finally, add interferon lX106IU/100g
were added and mixed in the following proportions to obtain an interferon-containing gel for external use on the skin. Apply this gel at 37°C for 1 month.
! The residual activity rate of interferon when stored at 4°C for 6 months was 30% and 45%, respectively. In addition,
As a control, gels obtained by replacing erythritol with purified water were similarly subjected to a storage test, and the residual activity rates were 0% and 1%, respectively.

特許出願人　サンスター株式会社ほか１名代理人弁理士
青山　裸線か２名Patent applicant Sunstar Co., Ltd. and 1 other patent attorney Aoyama Naked wire or 2 people

Claims (1)

Translated fromJapanese

【特許請求の範囲】（１）有効成分どしてインターフェロンを含み、その安
定化剤として８価以上の糖アルコールを配合したことを
特徴とするインターフェロンを安定に配合した組成物。（２）該糖アルコールが、グリセリン、エリスリトール
、アラビトール、キシリトール、ソルビトールおよびマ
ンニトールからなる群から選ばれる１種または２種以上
の糖アルコールである前記第（１）項の組成物。（８）糖アルコールを組成物全量に基いて１５重量％以
上配合した前記第（１）項の組成物。（４）さらに安定化剤として、酸性糖、有機酸緩衝剤、
スルフヒドリル基選択性の温和な含硫還元剤およびヒト
血清アルブミンからなる群から選ばれる１種または２種
以上の物質を配合した前記第（１）項〜第（８）項いず
れか１つの組成物。（５）口腔内適用の細形である前記第（１）項〜第（４
）項いずれか１つの組°成物。（６）皮膚外用剤の細形である前記第（１）項〜水（４
）項いずれか１つの組成物。（７）直腸内投与用の細形であるｌｌＪ記第（１）項〜
第（４）項いずれか１つの組成物。（８）膣内投与用の細形である前記第（１）項〜第（４
）項いずれか１つの組成物。（９）尿道内投与用の細形である前記第（１）項〜第（
４）項いずれか１つの組成物。（ｌＯ）眼投与用の細形でやる前記第（１）項〜第（４
）項いずれか１つの組成物。（１１）耳投与用の細形である前記第（１）項〜第（４
）項いずれか１つの組成物。（１２）鼻投与用の細形である前記第（１）項〜第（４
）項いずれか１つの組成物。[Scope of Claims] (1) A composition stably containing interferon, which contains interferon as an active ingredient and contains a sugar alcohol of octavalent or higher valence as a stabilizer. (2) The composition according to item (1) above, wherein the sugar alcohol is one or more sugar alcohols selected from the group consisting of glycerin, erythritol, arabitol, xylitol, sorbitol, and mannitol. (8) The composition according to item (1) above, which contains 15% by weight or more of a sugar alcohol based on the total amount of the composition. (4) Furthermore, as a stabilizer, acidic sugar, organic acid buffer,
The composition according to any one of items (1) to (8) above, which contains one or more substances selected from the group consisting of a sulfhydryl group-selective mild sulfur-containing reducing agent and human serum albumin. . (5) Items (1) to (4) above, which are narrow shapes for intraoral application.
) The composition of any one of the items. (6) Items (1) to Water (4), which are thin forms of skin external preparations.
) The composition of any one of the items. (7) Paragraph (1) of llJ, which is a narrow form for intrarectal administration.
The composition of any one of paragraph (4). (8) Items (1) to (4) above, which are in a narrow form for intravaginal administration.
) The composition of any one of the items. (9) Items (1) to (1) above, which are in a narrow form for intraurethral administration.
4) The composition of any one of item 4). (lO) Items (1) to (4) above in a narrow form for ocular administration.
) The composition of any one of the items. (11) The above-mentioned items (1) to (4) are in a narrow form for ear administration.
) The composition of any one of the items. (12) Items (1) to (4) above, which are narrow for nasal administration.
) The composition of any one of the items.