【０００１】[0001]
【発明の属する技術分野】本発明は、液体試料中のマグ
ネシウムを測定するための乾式試験片に関する。FIELD OF THE INVENTION The present invention relates to a dry test piece for measuring magnesium in a liquid sample.
【０００２】一般にマグネシウムは、動植物の細胞内に
広く存在し、成長と生命維持に不可欠な元素である。マ
グネシウムは、カルシウムと拮抗的に変動し、中枢神経
系や心臓の機能不全時、あるいは腎不全、急性膵炎時な
どに、その変動が観察されることから、マグネシウムの
測定は重要な検査項目の一つになりつつある。Generally, magnesium is widely present in cells of animals and plants and is an element essential for growth and life support. Magnesium changes antagonistically with calcium, and its fluctuation is observed during dysfunction of the central nervous system and heart, renal failure, acute pancreatitis, etc. Therefore, magnesium measurement is an important test item. It is becoming one.
【０００３】[0003]
【従来の技術】従来、マグネシウムの測定方法として
は、キシリジルブルーを用いてキレートを生成させる比
色法や、原子吸光法などが知られているが、これらの方
法のうち、前者はカルシウムに対する影響等の特異性面
で問題を有し、後者については特殊な装置が必要で簡便
ではないという欠点を有していた。2. Description of the Related Art Conventionally, as a method for measuring magnesium, a colorimetric method in which a chelate is generated using xylidyl blue, an atomic absorption method, and the like have been known. Of these methods, the former is for calcium. There is a problem in specificity such as influence, and the latter has a drawback that a special device is required and it is not simple.
【０００４】また、米国特許４６５７８５４号において
は、イソクエン酸脱水素酵素（以下、ＩＣＤＨとい
う）、β−ニコチンアミドアデニンジヌクレオチドリン
酸（以下ＮＡＤＰという）及びイソクエン酸（以下、Ｉ
Ｃという）を含む反応溶液を用い、マグネシウムを触媒
的に反応させ、生成するＮＡＤＰＨ（還元型ＮＡＤＰ）
の量を３４０ｎｍの吸光度で測定する方法が提案されて
いる。In US Pat. No. 4,657,854, isocitrate dehydrogenase (hereinafter referred to as ICDH), β-nicotinamide adenine dinucleotide phosphate (hereinafter referred to as NADP) and isocitrate (hereinafter referred to as IDP).
NADPH (reduced NADP) produced by catalytically reacting magnesium with a reaction solution containing C)
It has been proposed to measure the amount of A. by the absorbance at 340 nm.
【０００５】しかしながら、上記方法によって血清中の
マグネシウムを測定すると、正確な値を得ることはでき
なかった。なぜならば、ごく微量のマグネシウムに対し
てもＩＣＤＨは強く反応するために、正確な検量線が得
られないからである。それを解決するために、特開平２
−１４５１９６号においては、ＩＣＤＨ、ＮＡＤＰ、イ
ソクエン酸及びマグネシウムキレート剤を含む反応溶液
をマグネシウム含有液に添加してしばらく放置した後、
ＮＡＤＰＨの増加量を測定する方法が提案されている。However, when magnesium in serum was measured by the above method, an accurate value could not be obtained. This is because ICDH strongly reacts even with a very small amount of magnesium, and an accurate calibration curve cannot be obtained. In order to solve this, Japanese Patent Laid-Open No. Hei 2
In No. 145196, after adding a reaction solution containing ICDH, NADP, isocitric acid and a magnesium chelating agent to a magnesium-containing solution and allowing it to stand for a while,
A method for measuring the increase in NADPH has been proposed.
【０００６】さらに特開平６−２０９７９２号において
は、ＩＣＤＨを含まずにマグネシウムキレート剤を含む
定量試薬１によって先ず大部分のマグネシウムをキレー
トし、残ったわずかなマグネシウムをＩＣＤＨ及びＮＡ
ＤＰを含む定量試薬２で反応させた後、ＮＡＤＰＨの増
加量を測定する方法が提案されている。Further, in JP-A-6-209792, most of the magnesium is first chelated by the quantitative reagent 1 containing no magnesium-chelating agent but containing ICDH, and the remaining small amount of magnesium is mixed with ICDH and NA.
A method of measuring the amount of increase in NADPH after reacting with a quantitative reagent 2 containing DP has been proposed.
【０００７】しかし、これらはいずれも、以下のような
課題があった。 １）紫外部での吸収を測定するので、目視判定に対応で
きない。 ２）粉末状態の試薬を溶液状態にするための再溶解時に
マグネシウムのコンタミネーションに注意が必要で、調
整に手間がかかる。 ３）ＩＣＤＨが水溶液中では不安定なため、測定結果が
不正確である。しかも、ＩＣＤＨはマグネシウム濃度に
応じて活性が増加する。従って、ＩＣＤＨ含有量は過剰
量入れることができず、量的制限を受ける。従って、Ｉ
ＣＤＨの安定性を保つことは極めて重要かつ困難であ
る。However, all of them have the following problems. 1) Since the absorption in the ultraviolet is measured, it cannot be applied to visual judgment. 2) It is necessary to pay attention to the contamination of magnesium at the time of redissolving the reagent in the powder state to make it into a solution state, and it takes time and effort to adjust it. 3) Since ICDH is unstable in an aqueous solution, the measurement result is inaccurate. Moreover, the activity of ICDH increases with the magnesium concentration. Therefore, the ICDH content cannot be added in excess and is subject to quantitative restrictions. Therefore, I
Maintaining the stability of CDH is extremely important and difficult.
【０００８】[0008]
【発明が解決しようとする課題】本発明の目的は、上記
課題を解決し、液体試料中のマグネシウムを正確に測定
するための試験片を提供することにある。SUMMARY OF THE INVENTION An object of the present invention is to solve the above problems and provide a test piece for accurately measuring magnesium in a liquid sample.
【０００９】[0009]
【課題を解決するための手段】上記課題を解決するため
に、本発明は、液体試料中のマグネシウムを測定するた
めの試験片において、試薬成分として少なくとも以下の
成分を含有することを特徴とする、液体中のマグネシウ
ム測定用試験片である。 ・ＩＣＤＨ ・ＩＣ ・β−ＮＡＤ（Ｐ） ・ジアホラーゼ ・還元系発色剤In order to solve the above-mentioned problems, the present invention is characterized in that a test piece for measuring magnesium in a liquid sample contains at least the following components as reagent components. , A test piece for measuring magnesium in a liquid.・ ICDH ・ IC ・ β-NAD (P) ・ Diaphorase ・ Reducing color developer
【００１０】本発明の試薬組成では、還元型ＮＡＤ又は
ＮＡＤＰによる紫外部での吸収を測定するのではなく、
それら補酵素から還元系発色剤を発色させる系へ持ち込
むために、目視判定に対応できる。With the reagent composition of the present invention, rather than measuring the absorption by the reduced NAD or NADP in the ultraviolet,
Since the reduction enzyme is brought from the coenzyme to the system for developing the color, the visual determination can be performed.
【００１１】本発明の試験片の好ましい形態は、支持体
と、支持体上に担持された検出部位とからなる試験片で
ある。検出部位中に上記の試薬成分を含有させること
で、試薬類を乾式で提供することができる。すなわち、
粉末状態の試薬を溶液状態にする必要もなく、手間もか
からない。A preferred form of the test piece of the present invention is a test piece comprising a support and a detection site carried on the support. Reagents can be provided in a dry form by including the above-mentioned reagent component in the detection site. That is,
There is no need to make the reagent in the powder state into a solution state, and there is no trouble.
【００１２】検出部位において、還元系発色剤を他の試
薬成分とは物理的に離して含有させることで、安定性の
高い試験片が得られる。これは、還元系発色剤との共存
によってＩＣＤＨの活性が低下することを防止している
ためと考えられる。At the detection site, a reducing color-developing agent is contained so as to be physically separated from other reagent components, whereby a highly stable test piece can be obtained. It is considered that this is because ICDH activity is prevented from decreasing due to coexistence with the reducing color former.
【００１３】[0013]
【発明の実施の形態】本発明で使用されるような乾式の
試験片における検出部位において試薬類を含有させるた
めの手段として、多孔性マトリックス中に試薬溶液を含
浸・乾燥させる方法や、バインダーとなる糊状の物質に
試薬を練り込む方法がある。BEST MODE FOR CARRYING OUT THE INVENTION As a means for incorporating reagents at a detection site in a dry test strip as used in the present invention, a method of impregnating and drying a reagent solution in a porous matrix, and a binder are used. There is a method of kneading a reagent into a paste-like substance.
【００１４】検出部位中において、希望する試薬成分を
他の試薬成分とは物理的に離して含有させる方法として
は、例えば検出部位を二層に分割し、一方の層中へ希望
する試薬成分を独立して含有させる方法がある。As a method of containing a desired reagent component in the detection site physically separated from other reagent components, for example, the detection site is divided into two layers, and the desired reagent component is placed in one layer. There is a method of containing them independently.
【００１５】両層が多孔性マトリックスだと積層が困難
であるので、二層に分割する際には一方を多孔性マトリ
ックス、他方を糊状のバインダー層にするとよい。例と
しては、支持体となるプラスティックフィルム上に、一
層目となるバインダー層のもとであるバインダー溶液を
塗布・乾燥し、二層目となる多孔性マトリックスをその
バインダー層の上にラミネートする等し、このバインダ
ー層と多孔性マトリックス中にそれぞれの試薬類を含ま
せることで達成することができる。Since it is difficult to laminate when both layers are porous matrices, it is preferable to use one as a porous matrix and the other as a pasty binder layer when dividing into two layers. As an example, a binder solution, which is the base of a binder layer that is the first layer, is applied and dried on a plastic film that is a support, and a porous matrix that is the second layer is laminated on the binder layer. However, this can be achieved by including the respective reagents in the binder layer and the porous matrix.
【００１６】バインダー層に使用されるバインダーとし
ては、体液等が水溶液であることを鑑みて水溶性ポリマ
ーが好ましく、ポリビニルピロリドン（ＰＶＰ），ヒド
ロキシプロピルセルロース（ＨＰＣ），メチルセルロー
ス（ＭＣ），エチルセルロース（ＥＣ），アルギン酸ナ
トリウム，ポリビニルアルコール（ＰＶＡ）等が使用で
きる。多孔性マトリックスの例としては種々あるが、例
えば濾紙や布，メンブレンフィルターなどが使用でき
る。The binder used in the binder layer is preferably a water-soluble polymer in view of the fact that the body fluid is an aqueous solution, such as polyvinylpyrrolidone (PVP), hydroxypropylcellulose (HPC), methylcellulose (MC), ethylcellulose (EC). ), Sodium alginate, polyvinyl alcohol (PVA), etc. can be used. There are various examples of the porous matrix, and for example, filter paper, cloth, membrane filter and the like can be used.
【００１７】検出部位において還元系発色剤を他の試薬
成分とは物理的に離して含有させるための更に好適な例
として、検出部位を二層に分割して更に中間層をはさみ
込み、その中間層の上下部分にそれぞれ希望する試薬類
を含ませることで達成することができる。As a more preferable example of containing the reducing color former at the detection site physically separated from other reagent components, the detection site is divided into two layers, and an intermediate layer is sandwiched between them, and the intermediate This can be achieved by including desired reagents in the upper and lower parts of the layer.
【００１８】中間層の配置の方法は種々のものがあげら
れる。例えば、検出部位中に水透過性の基材をはさむ方
法や、水溶性ポリマー製の層を配置する方法等がある。
水透過性の基材としてはブラッシュポリマーが例として
挙げられ、水溶性ポリマーとしては、ＰＶＰ，ＨＰＣ，
ＭＣ，ＥＣ，アルギン酸ナトリウム，ＰＶＡ等を用いる
ことができる。There are various methods for disposing the intermediate layer. For example, there are a method of sandwiching a water-permeable base material in the detection site, a method of disposing a layer made of a water-soluble polymer, and the like.
Examples of water-permeable base materials include brush polymers, and examples of water-soluble polymers include PVP, HPC,
MC, EC, sodium alginate, PVA, etc. can be used.
【００１９】また、検出部位において還元系発色剤を他
の試薬成分とは物理的に離して含有させるための手段と
して、写真フィルムの技術による多層分離、バインダー
層への試薬をスプレーすること等による吹き付け、多孔
性マトリックスへの直接印刷等が挙げられる。Further, as a means for containing the reducing color-forming agent in the detection site physically separated from other reagent components, multi-layer separation by the technique of photographic film, spraying the reagent to the binder layer, etc. Examples include spraying and direct printing on a porous matrix.
【００２０】還元系発色剤は、ジアホラーゼといった電
子伝達性化合物により還元され、長波長領域において検
出可能な化合物（染料）を形成する物質である。使用で
きる還元系発色剤としては種々あるが、この種の臨床検
査用として使用されているテトラゾリウム塩といった還
元系発色剤で良く、具体的には２，５−ジフェニル−３
−［α−ナフチル］−テトラゾリウムクロリド（以下、
ＴＶ又はテトラゾリウムバイオレットという）、３，
３’−［３，３’−ジメトキシ−（１，１’−ビフェニ
ル）−４，４’−ジイル］−ビス［２−（４−ニトロフ
ェニル）−５−フェニル−２Ｈテトラゾリウムクロリ
ド］（以下、ＮＴＢ又はニトロテトラゾリウムブルーと
いう）、２−（４−インドフェニル）−３−（４−ニト
ロフェニル）−５−フェニル−２Ｈテトラゾリウムクロ
リド（以下、ＩＮＴという）、３−（４，５−ジメチル
−２−チアゾリル）−２，５−ジフェニル−２Ｈテトラ
ゾリウムブロミド（以下、ＭＴＴという）、３，３’−
［３，３’−ジメトキシ−（１，１’−ビフェニル）−
４，４’−ジイル］−ビス（２，５−ジフェニル−２Ｈ
テトラゾリウムクロリド）（以下、ＴＢ又はテトラゾリ
ウムブルー）、３，３’−（１，１’−ビフェニル−
４，４’−ジイル）−ビス（２，５−ジフェニル−２Ｈ
テトラゾリウムクロリド）（ネオテトラゾリウムブル
ー）、等を用いることができる。The reducing color former is a substance that is reduced by an electron transfer compound such as diaphorase to form a compound (dye) that can be detected in the long wavelength region. There are various reducing color developing agents that can be used, but reducing color developing agents such as tetrazolium salts used for this type of clinical test may be used, and specifically, 2,5-diphenyl-3
-[Α-naphthyl] -tetrazolium chloride (hereinafter,
TV or tetrazolium violet), 3,
3 ′-[3,3′-dimethoxy- (1,1′-biphenyl) -4,4′-diyl] -bis [2- (4-nitrophenyl) -5-phenyl-2H tetrazolium chloride] (hereinafter, NTB or nitrotetrazolium blue), 2- (4-indophenyl) -3- (4-nitrophenyl) -5-phenyl-2H tetrazolium chloride (hereinafter referred to as INT), 3- (4,5-dimethyl-2) -Thiazolyl) -2,5-diphenyl-2H tetrazolium bromide (hereinafter referred to as MTT), 3,3'-
[3,3'-dimethoxy- (1,1'-biphenyl)-
4,4'-Diyl] -bis (2,5-diphenyl-2H
Tetrazolium chloride) (hereinafter, TB or tetrazolium blue), 3,3 ′-(1,1′-biphenyl-
4,4'-diyl) -bis (2,5-diphenyl-2H
For example, tetrazolium chloride) (neotetrazolium blue) can be used.
【００２１】本発明の系には、液体試料が体液の場合、
通常、マグネシウムのキレート剤が既述の試薬成分に追
加して添加される。その理由は、例えば、血清中には、
１．８〜２．６（ｍｇ／ｄｌ）のマグネシウムが存在す
るのに対し、本発明の反応系では、ごく微量のマグネシ
ウムでＩＣＤＨが活性化されるからである。もちろん、
マグネシウムを多量に含まない、体液以外の液体試料に
は上記キレート剤は必要としない。In the system of the present invention, when the liquid sample is a body fluid,
Usually, a magnesium chelating agent is added in addition to the aforementioned reagent components. The reason is, for example, in serum,
This is because, although 1.8 to 2.6 (mg / dl) of magnesium is present, ICDH is activated by a very small amount of magnesium in the reaction system of the present invention. of course,
The above chelating agent is not required for liquid samples other than body fluid that do not contain a large amount of magnesium.
【００２２】マグネシウムキレート剤としては、例えば
エチレンジアミン四酢酸（ＥＤＴＡ）、トランス−１，
２−シクロヘキサンジアミン−Ｎ，Ｎ，Ｎ’，Ｎ’−四
酢酸、Ｎ，Ｎ−ジ（ヒドロキシエチル）グリシン−１，
３−ジアミノプロパン−２−オール−Ｎ，Ｎ，Ｎ’，
Ｎ’−四酢酸、ジエチレントリアミン−Ｎ，Ｎ，Ｎ’，
Ｎ’’，Ｎ’’’−五酢酸、エチレンジアミン−Ｎ，
Ｎ’−二酢酸、エチレンジアミン−Ｎ，Ｎ’−プロピオ
ン酸、Ｎ−ヒドロキシエチルエチレンジアミン−Ｎ，
Ｎ’，Ｎ’−三酢酸、エチレンジアミン−Ｎ，Ｎ，
Ｎ’，Ｎ’−テトラキス（メチレンホスホン酸）、グリ
コールエーテルジアミン−Ｎ，Ｎ，Ｎ’，Ｎ’−四酢
酸、ヘキサメチレンジアミン−Ｎ，Ｎ，Ｎ’，Ｎ’−四
酢酸、ヒドロキシエチルイミノ二酢酸、イミノ二酢酸、
１，２−ジアミノプロパン−Ｎ，Ｎ，Ｎ’，Ｎ’−四酢
酸、ニトリロ三酢酸、ニトリロ三プロピオン酸、ニトリ
ロトリス（メチレンホスホン酸）、トリエチレンテトラ
ミン−Ｎ，Ｎ，Ｎ’，Ｎ’’，Ｎ’’’，Ｎ’’’−六
酢酸、エチレンジアミン−Ｎ，Ｎ’−ビス（メチレンホ
スホン酸）、エチレンジアミン−ジ（ｏ−ヒドロキシフ
ェニル酢酸）、１，２−ビス（２−アミノフェノキシ）
エタン−Ｎ，Ｎ，Ｎ’，Ｎ’−四酢酸などの物質又はそ
の塩が使用できる。As the magnesium chelating agent, for example, ethylenediaminetetraacetic acid (EDTA), trans-1,
2-cyclohexanediamine-N, N, N ', N'-tetraacetic acid, N, N-di (hydroxyethyl) glycine-1,
3-diaminopropan-2-ol-N, N, N ',
N'-tetraacetic acid, diethylenetriamine-N, N, N ',
N ", N"'-pentaacetic acid, ethylenediamine-N,
N'-diacetic acid, ethylenediamine-N, N'-propionic acid, N-hydroxyethylethylenediamine-N,
N ', N'-triacetic acid, ethylenediamine-N, N,
N ', N'-tetrakis (methylenephosphonic acid), glycol ether diamine-N, N, N', N'-tetraacetic acid, hexamethylenediamine-N, N, N ', N'-tetraacetic acid, hydroxyethylimino Diacetic acid, iminodiacetic acid,
1,2-diaminopropane-N, N, N ', N'-tetraacetic acid, nitrilotriacetic acid, nitrilotripropionic acid, nitrilotris (methylenephosphonic acid), triethylenetetramine-N, N, N', N '',N''', N '''-hexaacetic acid, ethylenediamine-N, N'-bis (methylenephosphonic acid), ethylenediamine-di (o-hydroxyphenylacetic acid), 1,2-bis (2-aminophenoxy) )
Substances such as ethane-N, N, N ', N'-tetraacetic acid or salts thereof can be used.
【００２３】また更に、体液中に含まれるマンガン及び
カルシウムのキレート剤の添加も行える。その理由は、
マンガン及びカルシウムにおいても、マグネシウムと同
様にＩＣＤＨの活性化がみられるからである。マンガン
及びカルシウムのキレート剤としては、例えば、Ｏ，
Ｏ’−ビス（２−アミノエチル）エチレングルコール−
Ｎ，Ｎ，Ｎ’，Ｎ’−四酢酸（以下、ＧＥＤＴＡとい
う）、Ｏ，Ｏ’−ビス（２−アミノフェニル）エチレン
グルコール−Ｎ，Ｎ，Ｎ’，Ｎ’−四酢酸四カリウム水
和物（以下、ＢＡＰＴＡという）などが挙げられる。た
だし、ＩＣＤＨに対するマンガンとカルシウムの活性度
はマグネシウムと比較して低いので、検体の種類によっ
てはマンガン及びカルシウムのキレート剤の添加は必要
としない。Further, a chelating agent for manganese and calcium contained in body fluid can be added. The reason is,
This is because the activation of ICDH is also seen in manganese and calcium as in magnesium. Examples of the chelating agent for manganese and calcium include O,
O'-bis (2-aminoethyl) ethylene glycol-
N, N, N ', N'-tetraacetic acid (hereinafter referred to as GEDTA), O, O'-bis (2-aminophenyl) ethylene glycol-N, N, N', N'-tetraacetic acid tetrapotassium water Japanese products (hereinafter referred to as BAPTA) and the like can be mentioned. However, since the activity of manganese and calcium with respect to ICDH is lower than that of magnesium, it is not necessary to add a chelating agent for manganese and calcium depending on the type of sample.
【００２４】[0024]
【実施例】以下に、本発明に関わる試験片の実施例を示
し、本発明に関わる構造の試験片と従来の構造の試験片
間の比較を示すが、本発明はこれに限定されるものでは
ない。EXAMPLES Examples of test pieces according to the present invention will be shown below, and a comparison between test pieces having a structure according to the present invention and test pieces having a conventional structure will be shown, but the present invention is not limited thereto. is not.
【００２５】｛実施例１・中間層なし｝ 〇本発明によるマグネシウム測定用試験片の作製 （Ａ液） トリス緩衝剤（ｐＨ９．０） ０．０５ ｍｍｏｌ／ｌ テトラゾリウムバイオレット（シグマ製） ４５ ｍｍｏｌ／ｌ （Ｂ液） トリス緩衝剤（ｐＨ９．０） １５０ ｍｍｏｌ／ｌ イソクエン酸・カリウム塩 ４５．７ ｍｍｏｌ／ｌ ＩＣＤＨ １５ Ｕ／ｍｌ β−ＮＡＤＰ（オリエンタル酵母製） ７．８ ｍｍｏｌ／ｌ ジアホラーゼ（旭化成製） ３０ Ｕ／ｍｌ ＥＤＴＡ・２ナトリウム・２水塩 １６０ ｍｍｏｌ／ｌ ＧＥＤＴＡ（同仁化学製） ９００ ｍｍｏｌ／ｌ ＰＶＰ Ｋ−９０（和光純薬製） ９．５ ％ ※以上、全て精製水による水溶液{Example 1 without intermediate layer} Preparation of test piece for measuring magnesium according to the present invention (solution A) Tris buffer (pH 9.0) 0.05 mmol / l tetrazolium violet (manufactured by Sigma) 45 mmol / l (solution B) Tris buffer (pH 9.0) 150 mmol / l isocitrate / potassium salt 45.7 mmol / l ICDH 15 U / ml β-NADP (manufactured by Oriental Yeast) 7.8 mmol / l diaphorase (Asahi Kasei) 30 U / ml EDTA / disodium / dihydrate 160 mmol / l GEDTA (manufactured by Dojindo) 900 mmol / l PVP K-90 (manufactured by Wako Pure Chemical Industries, Ltd.) 9.5% * All above, aqueous solution with purified water
【００２６】上記の処方に従い、Ａ液を編物基材（ザビ
ーナミニマックス；（株）カネボウの商標）にグラビア
含浸し、４０℃の送風で乾燥させた。一方、Ｂ液を厚さ
１８８μｍ白色ポリエステルフィルム（ルミラー；
（株）東レの商標）に濡れ厚さ１００μｍで塗布し、４
０℃で乾燥させた。上記の調整後の編物基材層とＢ液層
をラミネートし、得られた検出部位の原反を５ｍｍ×５
ｍｍに裁断し、５ｍｍ×６０ｍｍの厚さ２５０μｍ白色
ポリエステルフィルムの先端に両面テープを用いて貼付
し、試験片を得た。According to the above formulation, the liquid A was gravure impregnated into a knitted base material (Sabina Minimax; trademark of Kanebo Co., Ltd.) and dried by blowing air at 40 ° C. On the other hand, liquid B was applied to a white polyester film having a thickness of 188 μm (Lumirror;
Toray Co., Ltd.) with a wet thickness of 100 μm,
Dried at 0 ° C. The knitted base material layer after the above-mentioned adjustment and the liquid B layer are laminated, and the original fabric of the obtained detection site is 5 mm × 5.
It was cut into mm and attached to the tip of a 5 mm × 60 mm 250 μm thick white polyester film with a double-sided tape to obtain a test piece.
【００２７】｛実施例２・中間層あり｝ （Ａ液） イソクエン酸・カリウム塩 ４５．７ ｍｍｏｌ／ｌ トリス緩衝剤（ｐＨ９．０） ０．０５ ｍｍｏｌ／ｌ テトラゾリウムバイオレット（シグマ製） ４５ ｍｍｏｌ／ｌ （Ｂ液） ＰＶＰ Ｋ−９０（和光純薬製） ９．５ ％ （Ｃ液） トリス緩衝剤（ｐＨ９．０） １５０ ｍｍｏｌ／ｌ イソクエン酸・カリウム塩 ４５．７ ｍｍｏｌ／ｌ ＩＣＤＨ １５ Ｕ／ｍｌ β−ＮＡＤＰ（オリエンタル酵母製） ７．８ ｍｍｏｌ／ｌ ジアホラーゼ （旭化成製） ３０ Ｕ／ｍｌ ＥＤＴＡ・２ナトリウム・２水塩 １６０ ｍｍｏｌ／ｌ ＧＥＤＴＡ（同仁化学製） ９００ ｍｍｏｌ／ｌ ＰＶＰ Ｋ−９０（和光純薬製） ９．５ ％ ※以上、全て精製水による水溶液Example 2 With Intermediate Layer (Solution A) Isocitrate / potassium salt 45.7 mmol / l Tris buffer (pH 9.0) 0.05 mmol / l Tetrazolium violet (manufactured by Sigma) 45 mmol / l (solution B) PVP K-90 (manufactured by Wako Pure Chemical Industries, Ltd.) 9.5% (solution C) Tris buffer (pH 9.0) 150 mmol / l isocitric acid / potassium salt 45.7 mmol / l ICDH 15 U / ml β-NADP (manufactured by Oriental Yeast) 7.8 mmol / l diaphorase (manufactured by Asahi Kasei) 30 U / ml EDTA.2 sodium dihydrate 160 mmol / l GEDTA (manufactured by Dojindo) 900 mmol / l PVP K-90 (Wako Pure Chemical Industries, Ltd.) 9.5% * Above, all are aqueous solutions with purified water
【００２８】上記の処方に従い、Ａ液を編物基材にグラ
ビア含浸し、４０℃の送風で乾燥させた。乾燥後、この
編物基材の片側にＢ液をキスコーティングし、４０℃で
乾燥させた。一方Ｃ液を、厚さ１８８μｍ白色ポリエス
テルフィルムに濡れ厚さ１００μｍで塗布し、４０℃で
乾燥させた。上記の調整後の編物基材層を、Ｂ液側をＣ
液層と接するようにラミネートし、得られた検出部位の
原反を５ｍｍ×５ｍｍに裁断し、５ｍｍ×６０ｍｍの厚
さ２５０μｍ白色ポリエステルフィルムに両面テープを
用いて貼付し、試験片を得た。According to the above formulation, the knitted base material was gravure impregnated with the liquid A and dried by blowing air at 40 ° C. After drying, the liquid B was kiss-coated on one side of this knitted material and dried at 40 ° C. On the other hand, the liquid C was applied to a white polyester film having a thickness of 188 μm so as to have a wet thickness of 100 μm and dried at 40 ° C. The knitted base material layer after the above adjustment is
A test piece was obtained by laminating so as to be in contact with the liquid layer, cutting the obtained original fabric of the detection site into 5 mm × 5 mm, and sticking it to a 5 mm × 60 mm white polyester film having a thickness of 250 μm using a double-sided tape.
【００２９】｛比較例・還元系発色剤を分離せず｝ （Ａ液） テトラゾリウムバイオレット（シグマ製） ４５ ｍｍｏｌ／ｌ トリス緩衝剤（ｐＨ９．０） １５０ ｍｍｏｌ／ｌ イソクエン酸・カリウム塩 ４５．７ ｍｍｏｌ／ｌ ＩＣＤＨ １５ Ｕ／ｍｌ β−ＮＡＤＰ（オリエンタル酵母製） ７．８ ｍｍｏｌ／ｌ ジアホラーゼ（旭化成製） ３０ Ｕ／ｍｌ ＥＤＴＡ・２ナトリウム・２水塩 １６０ ｍｍｏｌ／ｌ ＧＥＤＴＡ（同仁化学製） ９００ ｍｍｏｌ／ｌ ＰＶＰ Ｋ−９０（和光純薬製） ９．５ ％ ※以上、全て精製水による水溶液[Comparative Example: No reducing color developer is separated] (Solution A) Tetrazolium violet (manufactured by Sigma) 45 mmol / l Tris buffer (pH 9.0) 150 mmol / l Isocitrate / potassium salt 45.7 mmol / l ICDH 15 U / ml β-NADP (manufactured by Oriental Yeast) 7.8 mmol / l diaphorase (manufactured by Asahi Kasei) 30 U / ml EDTA / disodium dihydrate 160 mmol / l GEDTA (manufactured by Dojindo) 900 mmol / l PVP K-90 (manufactured by Wako Pure Chemical Industries, Ltd.) 9.5% * Above, all are aqueous solutions with purified water
【００３０】上記の処方に従い、Ａ液を厚さ１８８μｍ
白色ポリエステルフィルムに濡れ厚さ１００μｍで塗布
し、４０℃で乾燥させた。上記のＡ液層上に編物基材を
ラミネートし、得られた検出部位の原反を５ｍｍ×５ｍ
ｍに裁断し、５ｍｍ×６０ｍｍの厚さ２５０μｍ白色ポ
リエステルフィルムの先端に両面テープを用いて貼付
し、試験片を得た。According to the above-mentioned prescription, the solution A was added to a thickness of 188 μm.
It was applied to a white polyester film with a wet thickness of 100 μm and dried at 40 ° C. A knitted base material is laminated on the above-mentioned A liquid layer, and the original fabric of the obtained detection site is 5 mm × 5 m.
It was cut into m pieces and attached to the tip of a 5 mm × 60 mm white polyester film having a thickness of 250 μm using a double-sided tape to obtain a test piece.
【００３１】〇マグネシウムの測定と、各試験片の保存
安定性確認 実施例１，実施例２，比較例の各例で作製した試験片
を、別々に乾燥剤と共に褐色ビンに入れ、４０℃におけ
る保存安定性を経時的な反射率変化で測定した。方法と
して、試料にマグネシウム濃度２ｍｇ／ｄｌのプール血
清と、濃度が５ｍｇ／ｄｌのマグネシウム高濃度血清を
用い、試料を試験片に点着後、２分３０秒〜３分３０秒
後の５５０ｎｍにおける反射率変化を分光反射率計で測
定し、下記のクベルカ−ムンクの式より、Ｋ／Ｓ値変化
（以下、ΔＫ／Ｓ値という）に換算した。実施例１と実
施例２におけるΔＫ／Ｓ値変化の結果を、表１に示した
（ｎ＝６の平均値）。比較例におけるΔＫ／Ｓ値変化の
結果を、表２に示した（ｎ＝６の平均値）。ΔＫ／Ｓ値
が大きいと、濃度も高いことを示す。 ※クベルカ−ムンクの式；Ｋ／Ｓ＝（１−Ｒ）２／２Ｒ （Ｋ：定数， Ｓ：散乱係数， Ｒ：反射率（％）／１
００）Measurement of Magnesium and Confirmation of Storage Stability of Each Test Specimen The test specimen prepared in each of Example 1, Example 2 and Comparative Example was separately put in a brown bottle together with a desiccant at 40 ° C. Storage stability was measured by the change in reflectance over time. As a method, a pooled serum having a magnesium concentration of 2 mg / dl and a magnesium high-concentration serum having a concentration of 5 mg / dl were used as the sample, and the sample was spotted on the test piece, and after 2 minutes 30 seconds to 3 minutes 30 seconds at 550 nm. The reflectance change was measured with a spectral reflectometer and converted into a K / S value change (hereinafter referred to as ΔK / S value) by the Kubelka-Munk equation below. The results of ΔK / S value changes in Example 1 and Example 2 are shown in Table 1 (average value of n = 6). The results of the ΔK / S value change in the comparative example are shown in Table 2 (average value of n = 6). A large ΔK / S value indicates a high concentration. * Kubelka-Munk equation; K / S = (1-R)2 / 2R (K: constant, S: scattering coefficient, R: reflectance (%) / 1
00)
【００３２】[0032]
【表１】[Table 1]
【００３３】[0033]
【表２】[Table 2]
【００３４】表１から明らかなように、還元系発色剤を
他の試薬から物理的に離して別層に含ませた本発明の試
験片において、中間層を有さない実施例１の試験片でも
十分な保存安定性を示している。また更に、中間層を設
けた実施例２の中間層では、実施例１以上に保存安定性
が向上している。表２に示したように、従来行われてい
た一回含浸の構造の試験片では保存期間中に感度が低下
し、保存安定性が有意に低下している。As is clear from Table 1, in the test piece of the present invention in which the reducing color former was physically separated from other reagents and contained in another layer, the test piece of Example 1 having no intermediate layer. However, it shows sufficient storage stability. Furthermore, the storage stability of the intermediate layer of Example 2 provided with the intermediate layer is higher than that of Example 1. As shown in Table 2, in the case of the test piece having the structure of single impregnation which has been conventionally performed, the sensitivity is lowered during the storage period and the storage stability is significantly lowered.
【００３５】[0035]
【発明の効果】本発明のマグネシウム測定用試験片は、
ＮＡＤ（Ｐ）を色素発色系へ応用したので容易に目視が
でき、検出部位において還元系発色剤を他の試薬から分
離することにより、試験片の保存安定性を向上させるこ
とができた。本発明のマグネシウム測定用試験片は、血
清、血漿、尿中のマグネシウムが短時間に正確に測定で
きるので、臨床検査に大いに貢献する。The test piece for measuring magnesium according to the present invention is
Since NAD (P) was applied to the dye coloring system, it was easily visible, and the storage stability of the test piece could be improved by separating the reducing coloring agent from other reagents at the detection site. The test strip for measuring magnesium according to the present invention can accurately measure magnesium in serum, plasma, and urine in a short time, and thus contributes greatly to clinical examination.
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP11290696AJPH09266796A (en) | 1996-03-29 | 1996-03-29 | Testing piece for determination of magnesium in liquid |
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP11290696AJPH09266796A (en) | 1996-03-29 | 1996-03-29 | Testing piece for determination of magnesium in liquid |
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPH09266796Atrue JPH09266796A (en) | 1997-10-14 |
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP11290696APendingJPH09266796A (en) | 1996-03-29 | 1996-03-29 | Testing piece for determination of magnesium in liquid |
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JPH09266796A (en) |
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN119464447A (en)* | 2024-12-25 | 2025-02-18 | 北京中生金域诊断技术股份有限公司 | A detection reagent and detection method for isocitrate dehydrogenase activity |
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN119464447A (en)* | 2024-12-25 | 2025-02-18 | 北京中生金域诊断技术股份有限公司 | A detection reagent and detection method for isocitrate dehydrogenase activity |
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