【０００１】0001
【産業上の利用分野】この発明は、免疫療法や免疫学的
検査（イムノアッセイ）等に用られる免疫グロブリン用
吸着材および抗原用吸着材に関する。BACKGROUND OF THE INVENTION 1. Field of the Invention The present invention relates to an immunoglobulin adsorbent and an antigen adsorbent used in immunotherapy, immunoassay, and the like.
【０００２】0002
【従来の技術】免疫グロブリンは、血液中に出現し、自
己免疫疾患、アレルギーなどの原因に関係があると考え
られている。このため、免疫グロブリンの関係する疾患
などの検査や治療のために、免疫グロブリンを選択的に
吸着する免疫グロブリン用吸着材が使用されている。BACKGROUND OF THE INVENTION Immunoglobulins appear in the blood and are thought to be involved in the causes of autoimmune diseases, allergies, and the like. For this reason, immunoglobulin adsorbents that selectively adsorb immunoglobulins are used for testing and treating diseases related to immunoglobulins.
【０００３】免疫グロブリン用吸着材としては、近年、
キトサンを用いたものが種々提案されている。これは、
キトサンが免疫グロブリンの吸着能を有するからである
。たとえば、特開昭５７−６３６２号公報では、キトサ
ンの有するアミノ基やヒドロキシル基と反応しうる官能
基を少なくとも２個有する化合物とキトサンとを活性炭
やシリコーン樹脂製ディスクなどの固体表面上で反応さ
せて該固体表面上にキトサン皮膜を形成させ、このキト
サン皮膜と免疫反応性物質とを結合させてなる吸着材が
開示されている。この吸着材において免疫反応性物質が
抗原である場合には、この吸着材は免疫グロブリンと特
異的に結合する。特開昭６２−５３６６９号公報では、
球状またはビーズ状のキトサン担体にカップリング剤を
介して複素環式化合物を結合させてなる吸着材が開示さ
れている。特開昭６４−７２７５４号公報では、キトサ
ンもしくはキトサン誘導体を造粒して得られる、粒径が
５０〜５０００μｍφの多孔質粒状体を、アルデヒド基
、カルボキシル基、エポキシ基およびイソシアナート基
から選ばれた官能基を１分子中に２個以上有する多官能
性架橋剤を用いて架橋させ、不溶不融化させた免疫グロ
ブリン選択吸着材が開示されている。In recent years, as an adsorbent for immunoglobulin,
Various products using chitosan have been proposed. this is,
This is because chitosan has the ability to adsorb immunoglobulin. For example, in JP-A-57-6362, chitosan is reacted with a compound having at least two functional groups capable of reacting with the amino groups and hydroxyl groups of chitosan on a solid surface such as activated carbon or a silicone resin disk. An adsorbent is disclosed in which a chitosan film is formed on the solid surface and an immunoreactive substance is bonded to the chitosan film. When the immunoreactive substance in the adsorbent is an antigen, the adsorbent specifically binds to immunoglobulin. In Japanese Patent Application Laid-open No. 62-53669,
An adsorbent is disclosed in which a heterocyclic compound is bonded to a spherical or bead-shaped chitosan carrier via a coupling agent. JP-A No. 64-72754 discloses that porous granules with a particle size of 50 to 5000 μmφ obtained by granulating chitosan or a chitosan derivative are prepared by granulating a material selected from aldehyde groups, carboxyl groups, epoxy groups, and isocyanate groups. A selective adsorbent for immunoglobulin has been disclosed which is crosslinked using a multifunctional crosslinking agent having two or more functional groups in one molecule to render it insoluble and infusible.
【０００４】他方、免疫グロブリンに含まれる抗体は、
生体中に生成した抗原と抗原抗体反応により特異的に結
合するため、酵素免疫測定法などに利用される。上記特
開昭５７−６３６２号公報記載の吸着材において免疫反
応性物質が免疫グロブリンである場合には、この吸着材
は抗原と特異的に結合するため、抗原の検出や分離に利
用できる。On the other hand, antibodies contained in immunoglobulins are
Because it specifically binds to antigens produced in living organisms through antigen-antibody reactions, it is used in enzyme-linked immunosorbent assays. When the immunoreactive substance in the adsorbent described in JP-A-57-6362 is an immunoglobulin, this adsorbent specifically binds to the antigen and can therefore be used for detection and separation of the antigen.
【０００５】[0005]
【発明が解決しようとする課題】上記各公報で開示され
た吸着材は、キトサンの吸着機能の発現に有効な官能基
であるアミノ基が架橋や化学反応のために消費され、本
来の吸着機能を十分に発揮できない。しかも、キトサン
だけでなく担体への固定化や架橋に用いられる化学物質
の溶出または脱離を起こすという問題を有する。特に、
臨床に使われた場合に、架橋剤などの物質が脱離して患
者の血中に流入する可能性がある。キトサン自身を粒子
状に加工して用いる場合には、粒子内部においては吸着
に対する活性が利用されておらず、むだが多い。[Problems to be Solved by the Invention] In the adsorbents disclosed in the above-mentioned publications, the amino group, which is a functional group effective for expressing the adsorption function of chitosan, is consumed due to crosslinking and chemical reactions, and the original adsorption function is lost. cannot fully demonstrate their abilities. Moreover, there is a problem in that not only chitosan but also chemical substances used for immobilization on the carrier and crosslinking occur, causing elution or desorption. especially,
When used clinically, there is a possibility that substances such as cross-linking agents may be released and enter the patient's bloodstream. When chitosan itself is processed into particles and used, the adsorption activity inside the particles is not utilized and there is a lot of waste.
【０００６】そこで、この発明は、免疫グロブリンの吸
着性能が著しく改善され、しかも、化学薬品の溶出また
は脱離が起こらない免疫グロブリン用吸着材を提供する
ことを第１の課題とし、免疫グロブリンの吸着量が従来
のものよりも多く、しかも、化学薬品の溶出または脱離
が起こらない抗原用吸着材を提供することを第２の課題
とする。[0006] Therefore, the first object of the present invention is to provide an adsorbent for immunoglobulin which has significantly improved adsorption performance for immunoglobulin and which does not cause elution or desorption of chemicals. A second object of the present invention is to provide an antigen adsorbent that has a larger adsorption amount than conventional ones and does not cause elution or desorption of chemicals.
【０００７】[0007]
【課題を解決するための手段】上記第１の課題を解決す
るために、この発明は、ポリスルホン系樹脂からなる担
体にキトサンが固定化されてなる免疫グロブリン用吸着
材を提供する。上記第２の課題を解決するために、この
発明は、免疫グロブリン用吸着材に免疫グロブリンが固
定化されてなる抗原用吸着材において、前記免疫グロブ
リン用吸着材として、ポリスルホン系樹脂からなる担体
にキトサンが固定化されてなるものが用いられているこ
とを特徴とする抗原用吸着材を提供する。[Means for Solving the Problems] In order to solve the first problem described above, the present invention provides an adsorbent for immunoglobulins in which chitosan is immobilized on a carrier made of polysulfone resin. In order to solve the above second problem, the present invention provides an antigen adsorbent in which immunoglobulin is immobilized on an immunoglobulin adsorbent, in which a carrier made of polysulfone resin is used as the immunoglobulin adsorbent. To provide an antigen adsorbent characterized in that chitosan is immobilized thereon.
【０００８】キトサンは、Ｄ−グルコサミンを単位とし
たβ−（１，４）結合を有する多糖類であり、通常、カ
ニ、エビ等の甲殻類の外皮構成物質であるキチンを苛性
ソーダ水溶液との強熱処理などにより脱アセチル化して
得られるが、製造方法には特に制限はない。この発明に
用いるキトサンの脱アセチル化度は、たとえば、５０〜
１００％が好ましく、７０〜１００％がより好ましい。キトサンの脱アセチル化度がこの範囲を外れると溶解性
が低く均一な溶液にするのが困難である。また、キトサ
ンの平均分子量は、たとえば、５０万〜１５０万が好ま
しい。キトサンの平均分子量がこの範囲よりも小さくな
るとキトサン自身の性能が不均一で吸着性能等の再現性
が得られないことがあり、その範囲よりも大きくなると
溶液が粘稠となり、使用しにくくなるおそれがある。Chitosan is a polysaccharide having β-(1,4) bonds with D-glucosamine as a unit, and chitin, which is a component of the outer skin of crustaceans such as crabs and shrimp, is usually prepared by strongly mixing chitin with an aqueous solution of caustic soda. It can be obtained by deacetylation by heat treatment, etc., but there are no particular restrictions on the manufacturing method. The degree of deacetylation of chitosan used in this invention is, for example, 50 to
100% is preferable, and 70 to 100% is more preferable. If the deacetylation degree of chitosan is outside this range, the solubility will be low and it will be difficult to form a uniform solution. Moreover, the average molecular weight of chitosan is preferably 500,000 to 1,500,000, for example. If the average molecular weight of chitosan is smaller than this range, the performance of chitosan itself may be uneven and reproducibility of adsorption performance etc. may not be obtained.If it is larger than this range, the solution may become viscous and difficult to use. There is.
【０００９】この発明では、キトサンを固着させるため
の担体としてポリスルホン系樹脂を使用する。ポリスル
ホン系樹脂としては、ポリスルホンおよびポリエーテル
スルホンのいずれか一方または両方を使用する。担体の
形態には特に制限はないが、たとえば、膜（またはフィ
ルム）、粒状体、その他成形体などがあり、特に、多孔
質の膜であることが好ましい。これは、ポリスルホン系
樹脂が疎水性を有するため、後述するようにしてキトサ
ンを担持させるときにキトサン水溶液をはじきやすいが
、アルコール等で湿潤処理をすると、多孔質であれば、
孔にキトサン水溶液が入り込みやすくなり、キトサンを
確実にかつ多量に担持させることができる。多孔質の膜
は表面積が大きくなるためキトサンが固着されうる面積
が非常に大きくなり好ましい。しかも、膜だと、ビーズ
などの形態よりも取扱が容易である。多孔質の膜である
場合、その孔径は、たとえば、０．０５〜５μｍが好ま
しく、０．１〜１μｍがより好ましい。膜厚は、０．０
５〜０．５ｍｍが好ましく、０．１〜０．３ｍｍがより
好ましい。[0009] In this invention, a polysulfone resin is used as a carrier for fixing chitosan. As the polysulfone resin, one or both of polysulfone and polyethersulfone is used. The form of the carrier is not particularly limited, but examples include membranes (or films), granules, and other molded bodies, with porous membranes being particularly preferred. This is because polysulfone resin has hydrophobicity, so it easily repels chitosan aqueous solution when supporting chitosan as described below, but when wetted with alcohol etc., if it is porous,
The chitosan aqueous solution can easily enter the pores, and a large amount of chitosan can be supported reliably. A porous membrane is preferable because it has a large surface area, so the area to which chitosan can be fixed is very large. Furthermore, membranes are easier to handle than beads or other forms. In the case of a porous membrane, the pore diameter thereof is, for example, preferably 0.05 to 5 μm, more preferably 0.1 to 1 μm. Film thickness is 0.0
5 to 0.5 mm is preferable, and 0.1 to 0.3 mm is more preferable.
【００１０】ポリスルホン系樹脂製の担体は、たとえば
従来公知の方法で作られたものが使用される。多孔質の
膜である場合も、異方性であると等方性であるとを問わ
ずに使用できる。そのような素材からなる担体にキトサ
ンを固着するには、たとえば次のように行う。キトサン
を酸性の水溶液に溶解し、キトサン水溶液を調製する。酸性の水溶液としては、たとえば、酢酸の数％水溶液な
どが使用される。キトサン水溶液のキトサン濃度は、た
とえば、０．０５〜１重量％が好ましく、０．１〜０．
５重量％がより好ましい。この範囲よりも低い場合は免
疫グロブリンの吸着効率が小さいおそれがあり、高い場
合は粘性が高く均一固着しないおそれがある。アルコー
ル水溶液に前記担体を浸漬し、取り出して直ぐに水中に
入れるという上記湿潤処理の終わった湿潤担体をキトサ
ン水溶液と接触させる。この接触は、たとえば、浸漬、
コーティング、多孔膜の場合は濾過などにより行われる
。ここでコーティングは、たとえば、担体表面にキトサ
ンの皮膜が形成されている状態であり、担体が多孔質で
ある場合には、内部表面（空隙内の表面）も含めてキト
サンの皮膜が形成されている状態である。担体とキトサ
ン水溶液の接触時間は、たとえば、０．５〜１時間とさ
れ、この範囲よりも短いとキトサンの固着量が少なくな
るおそれがあり、長くても固着量に大きな変化がない。その後、乾燥させてから塩基性水溶液と接触させる。一
旦乾燥させることによりキトサン水溶液が塩基性水溶液
中に流出するのを防ぐ。塩基性水溶液との接触は、キト
サン塩から元のキトサンとするために行われる。塩基性
水溶液としては、たとえば、ＮａＯＨ，ＫＯＨ，Ｃａ（
ＯＨ）２などの０．５〜４％水溶液などが使用される。その後、洗浄を行う。[0010] As the polysulfone resin carrier, for example, one made by a conventionally known method is used. Even in the case of a porous membrane, it can be used regardless of whether it is anisotropic or isotropic. To fix chitosan on a carrier made of such a material, for example, the following procedure is performed. Chitosan is dissolved in an acidic aqueous solution to prepare a chitosan aqueous solution. As the acidic aqueous solution, for example, a several percent aqueous solution of acetic acid is used. The chitosan concentration of the chitosan aqueous solution is, for example, preferably 0.05 to 1% by weight, and 0.1 to 0.0% by weight.
5% by weight is more preferred. If it is lower than this range, the adsorption efficiency of immunoglobulin may be low, and if it is higher, the viscosity may be high and it may not be fixed uniformly. The wet carrier, which has been subjected to the above-mentioned wetting treatment in which the carrier is immersed in an alcohol aqueous solution, taken out and immediately placed in water, is brought into contact with the chitosan aqueous solution. This contact can be, for example, immersion,
In the case of coating or porous membranes, this is done by filtration or the like. Coating here refers to, for example, a state in which a chitosan film is formed on the surface of the carrier, and if the carrier is porous, a chitosan film is formed on the internal surface (the surface inside the voids) as well. It is in a state of being. The contact time between the carrier and the aqueous chitosan solution is, for example, 0.5 to 1 hour; if it is shorter than this range, the amount of chitosan that sticks may decrease, and even if it is longer, there is no significant change in the amount of stuck chitosan. Thereafter, it is dried and brought into contact with a basic aqueous solution. Once dried, the chitosan aqueous solution is prevented from flowing out into the basic aqueous solution. Contact with a basic aqueous solution is performed to convert the chitosan salt back to chitosan. Examples of basic aqueous solutions include NaOH, KOH, Ca(
A 0.5-4% aqueous solution such as OH)2 is used. After that, wash.
【００１１】他方、ポリスルホン系樹脂担体を作るとき
にキトサンを添加しておいても、この発明の免疫グロブ
リン用吸着材が得られる。すなわち、この発明の免疫グ
ロブリン用吸着材は、ポリスルホン系樹脂の担体の表面
上にキトサンが固定化されている必要はなく、担体中に
含有されていてその一部が表面に臨んでいてもよいので
ある。その製造方法は、たとえば、ポリスルホン系樹脂
を溶剤に溶かし、さらにキトサンを添加した液をキャス
トすることにより得られる。On the other hand, the immunoglobulin adsorbent of the present invention can also be obtained by adding chitosan when preparing the polysulfone resin carrier. That is, in the immunoglobulin adsorbent of the present invention, chitosan does not need to be immobilized on the surface of a polysulfone resin carrier, but may be contained in the carrier and a part of it may be exposed to the surface. It is. The manufacturing method thereof is, for example, by dissolving a polysulfone resin in a solvent and then casting a solution containing chitosan.
【００１２】この発明の免疫グロブリン用吸着材は、担
体であるポリスルホン系樹脂と固着されているキトサン
との相乗効果により、免疫グロブリン、特にγ−グロブ
リンを選択的に吸着することができ、しかも、吸着量が
従来の免疫グロブリン用吸着材よりも多くなっている。この発明の免疫グロブリン用吸着材は、たとえば、免疫
系に絡んだ疾患の治療として血中の抗体あるいは抗体抗
原複合体を血中から選択的に除去する場合に血漿分離交
換法より効率の良い方法として用いられる可能性が考え
られる。The immunoglobulin adsorbent of the present invention can selectively adsorb immunoglobulin, especially γ-globulin, due to the synergistic effect of the polysulfone resin as a carrier and the fixed chitosan. The amount of adsorption is greater than that of conventional immunoglobulin adsorbents. The immunoglobulin adsorbent of the present invention is a method more efficient than plasma separation method when selectively removing blood antibodies or antibody-antigen complexes from blood as a treatment for diseases related to the immune system, for example. It is thought that it may be used as a.
【００１３】上記のようにして得られた免疫グロブリン
用吸着材に免疫グロブリンを固定化させると、従来より
も優れた抗原吸着能力を持つ抗原用吸着材になる。免疫
グロブリンの固定化方法は、特に制限はないが、たとえ
ば次のようなやり方が採用される。すなわち、上記吸着
材を免疫グロブリンを含む液中に浸漬する。あるいは、
吸着材と免疫グロブリンとの間に多官能性化学物質を介
して化学結合させても良い。[0013] When immunoglobulin is immobilized on the immunoglobulin adsorbent obtained as described above, the antigen adsorbent has a superior antigen adsorption ability than the conventional adsorbent. The method for immobilizing immunoglobulin is not particularly limited, but for example, the following method may be employed. That is, the adsorbent is immersed in a liquid containing immunoglobulin. or,
A chemical bond may be formed between the adsorbent and the immunoglobulin via a polyfunctional chemical substance.
【００１４】この発明の抗原用吸着材は、たとえば、抗
原吸着材の免疫グロブリンに対応する抗体さらに酵素で
マークした抗体を特異的に結合させ、この複合体に基質
を加えて呈色させ、目的の抗原を検出する診断薬材料と
して用いられる。[0014] The antigen adsorbent of the present invention, for example, specifically binds an antibody corresponding to the immunoglobulin of the antigen adsorbent as well as an antibody marked with an enzyme, and adds a substrate to this complex to give it a color. It is used as a diagnostic material to detect antigens.
【００１５】[0015]
【作用】ポリスルホン系樹脂からなる担体にキトサンを
固着してなる免疫グロブリン用吸着材は、免疫グロブリ
ンの吸着量が高く、牛血清アルブミンとの選択性を持つ
ようになる。この吸着能は、ポリスルホン系樹脂と、キ
トサンとのいずれか一方だけの場合に比べて相乗的に高
くなっている。このような相乗効果は、前記担体とキト
サンとの組み合わせに特異的に見られる。[Function] The immunoglobulin adsorbent, which is made by adhering chitosan to a carrier made of polysulfone resin, has a high adsorption amount of immunoglobulin and has selectivity to bovine serum albumin. This adsorption capacity is synergistically higher than when using only either the polysulfone resin or chitosan. Such a synergistic effect is specifically seen in the combination of the carrier and chitosan.
【００１６】しかも、前記担体へのキトサンの固着は、
通常、物理吸着という簡単な手段で強固に行うことがで
き、架橋剤やカップリング剤が不要になる。キトサンは
、一般に中性〜アルカリ性の水には溶出しにくく、また
、仮に溶出したとしても生体への悪影響はほとんどない
。免疫グロブリン用吸着材に免疫グロブリンを吸着させ
ると、免疫グロブリンの吸着量の高い抗原用吸着材が得
られる。このような抗原用吸着材には、抗原がより多く
吸着されるため、これを診断材料等に使用する場合に抗
原検出力に優れるといった利点がある。[0016] Moreover, the adhesion of chitosan to the carrier is
Usually, this can be strongly achieved by a simple means of physical adsorption, eliminating the need for crosslinking agents or coupling agents. Chitosan is generally difficult to elute in neutral to alkaline water, and even if it does elute, it will have almost no adverse effect on living organisms. When immunoglobulin is adsorbed to an immunoglobulin adsorbent, an antigen adsorbent with a high amount of immunoglobulin adsorbed can be obtained. Such an adsorbent for antigens has the advantage of excellent antigen detection ability when used as a diagnostic material, etc., since a larger amount of antigen can be adsorbed.
【００１７】担体として、上記素材の多孔膜を用いると
、吸着効率が良いため、操作が迅速となるといった利点
がある。[0017] When a porous membrane made of the above material is used as a carrier, the adsorption efficiency is high, so there is an advantage that the operation is quick.
【００１８】[0018]
【実施例】以下に、この発明の具体的な実施例および比
較例を示すが、この発明は下記実施例に限定されない。−実施例１−（株）加ト吉製キトサン（商品名キトサン７Ｂ、公称平
均分子量１００万〜１５０万、脱アセチル化度７０％）
を３重量％酢酸水溶液中に溶解して０．１重量％溶液と
した。この溶液に９９．５％のエタノールに浸漬した後
水中に浸漬したポリエーテルスルホンからなる孔径０．
４５μｍの多孔膜を浸漬して２時間静置した。その後、
膜を溶液より引き上げ、室温で６時間乾燥した。次に、
この膜を水酸化ナトリウム２重量％水溶液中に浸漬し、
３０分後にこの水溶液より引き上げ、流水で充分に水洗
した。さらに、この膜を乾燥し、キトサン固着ポリエー
テルスルホン膜を得た。キトサンの膜への固着は、たと
えば、酸性染料での染色により確認できる。[Examples] Specific examples and comparative examples of the present invention are shown below, but the present invention is not limited to the following examples. -Example 1- Chitosan manufactured by Katokichi Co., Ltd. (trade name Chitosan 7B, nominal average molecular weight 1 million to 1.5 million, degree of deacetylation 70%)
was dissolved in a 3% by weight acetic acid aqueous solution to make a 0.1% by weight solution. This solution consists of polyether sulfone immersed in 99.5% ethanol and then in water with a pore size of 0.
A 45 μm porous membrane was immersed and left to stand for 2 hours. after that,
The membrane was removed from the solution and dried at room temperature for 6 hours. next,
This membrane was immersed in a 2% by weight aqueous solution of sodium hydroxide,
After 30 minutes, it was removed from the aqueous solution and thoroughly washed with running water. Furthermore, this membrane was dried to obtain a chitosan-adhered polyether sulfone membrane. The adhesion of chitosan to the membrane can be confirmed, for example, by staining with an acid dye.
【００１９】−比較例１−実施例１において、ポリエーテルスルホンからなる多孔
膜の代わりに再生セルロースからなる多孔膜を用いたこ
と以外は実施例１と同様にして、キトサン固着再生セル
ロース膜を得た。−比較例２−実施例１において、ポリエーテルスルホンからなる多孔
膜の代わりにナイロンからなる多孔膜を用いたこと以外
は実施例１と同様にして、キトサン固着ナイロン膜を得
た。Comparative Example 1 A chitosan-fixed regenerated cellulose membrane was obtained in the same manner as in Example 1, except that a porous membrane made of regenerated cellulose was used instead of the porous membrane made of polyethersulfone. Ta. -Comparative Example 2- A chitosan-adhered nylon membrane was obtained in the same manner as in Example 1, except that a porous membrane made of nylon was used instead of the porous membrane made of polyethersulfone.
【００２０】−比較例３−ノニオン系界面活性剤（エマルゲン８１０、花王（株）
製）の０．１重量％水溶液にポリエーテルスルホンから
なる孔径０．４５μｍの多孔膜を浸漬して２時間静置し
た。その後、膜を溶液より引き上げ、室温で６時間乾燥
した。次に、この膜を充分に水洗した後、乾燥して界面
活性剤固着ポリエーテルスルホン膜を得た。- Comparative Example 3 - Nonionic surfactant (Emulgen 810, Kao Corporation)
A porous membrane made of polyether sulfone and having a pore diameter of 0.45 μm was immersed in a 0.1% by weight aqueous solution of A. Thereafter, the membrane was removed from the solution and dried at room temperature for 6 hours. Next, this membrane was thoroughly washed with water and then dried to obtain a surfactant-fixed polyether sulfone membrane.
【００２１】上記実施例および比較例で得られた各キト
サン固着膜、比較例で得られた界面活性剤固着膜、およ
び、固着処理前の多孔膜〔ポリエーテルスルホン（比較
例４）、ナイロン（比較例５）、再生セルロース（比較
例６）〕について、固着処理前後の膜の重量測定からキ
トサンの固着量を求めた。各固着膜をγ−グロブリンお
よび牛血清アルブミンの２つのリン酸バッファー溶液（
蛋白質濃度１００ｐｐｍ、ｐＨ７）にそれぞれ別々に浸
漬し、蛋白質の吸着処理を行った。この吸着処理は、３
０℃で２時間振とうして行った。膜への吸着量（μｇ／
ｃｍ２ ）は、この吸着処理前後の蛋白溶液の濃度変化
より算出した。濃度は、ＵＶ２８０ｎｍでの吸光度測定
により求めた。結果を表１に示した。なお、ポリエーテ
ルスルホンの多孔膜については、まずアルコール（エタ
ノール）で濡らし、このアルコールを水に置換していっ
て吸着処理を行った。Each chitosan-fixed film obtained in the above Examples and Comparative Examples, the surfactant-fixed film obtained in the Comparative Example, and the porous film before fixation treatment [polyether sulfone (Comparative Example 4), nylon ( Comparative Example 5) and regenerated cellulose (Comparative Example 6)], the amount of chitosan fixed was determined from the weight measurement of the membrane before and after the fixing treatment. Each adherent membrane was diluted with two phosphate buffered solutions of γ-globulin and bovine serum albumin (
Each sample was immersed separately in a solution (protein concentration: 100 ppm, pH 7) to perform protein adsorption treatment. This adsorption process consists of 3
This was done by shaking at 0°C for 2 hours. Adsorption amount to membrane (μg/
cm2) was calculated from the change in concentration of the protein solution before and after this adsorption treatment. Concentration was determined by UV absorbance measurement at 280 nm. The results are shown in Table 1. Note that the porous membrane of polyether sulfone was first wetted with alcohol (ethanol), and the alcohol was replaced with water to perform an adsorption treatment.
【００２２】[0022]
【表１】[Table 1]
【００２３】表１の結果から次のことがわかる。再生セ
ルロースの多孔膜は、上記２つの蛋白質を全く吸着しな
いし、キトサンを固着させても全く吸着しない。ナイロ
ンの多孔膜は、ある程度γ−グロブリンを選択的に吸着
するが、吸着量が低く、キトサンの固着によりγ−グロ
ブリンの吸着量は若干低下する。ポリエーテルスルホン
の多孔膜は、元来水をはじくため、水溶液の透過が困難
である。そこでアルコールから水への置換を利用して吸
着を行うと、γ−グロブリンと牛血清アルブミンの吸着
に選択性は全くない。常法に従って界面活性剤で親水性
を付与した場合（比較例３）には、γ−グロブリンと牛
血清アルブミンの吸着量が極端に低下してしまう。これ
に対し、ポリエーテルスルホンの多孔膜にキトサンを固
着した実施例では、γ−グロブリンの吸着量が比較例２
の約２倍と非常に高く、かつ、牛血清アルブミンの吸着
量がほとんどない。すなわち、キトサンを固着する対象
の材質を特定することによりγ−グロブリンの吸着量が
格段に向上し、しかも、牛血清アルブミンの吸着量とに
大きな差が生じるのである。From the results in Table 1, the following can be seen. A porous membrane of regenerated cellulose does not adsorb the above two proteins at all, and even if chitosan is fixed thereon, it does not adsorb at all. Although the nylon porous membrane selectively adsorbs γ-globulin to some extent, the amount of adsorption is low, and due to the adhesion of chitosan, the amount of γ-globulin adsorbed is slightly reduced. Polyether sulfone porous membranes inherently repel water, making it difficult for aqueous solutions to pass through them. Therefore, when adsorption is performed using substitution of alcohol with water, there is no selectivity at all in the adsorption of γ-globulin and bovine serum albumin. When hydrophilicity is imparted using a surfactant according to a conventional method (Comparative Example 3), the amount of adsorption of γ-globulin and bovine serum albumin is extremely reduced. On the other hand, in the example in which chitosan was fixed to the porous membrane of polyether sulfone, the amount of adsorption of γ-globulin was lower than that of the comparative example.
The amount of bovine serum albumin adsorbed is very high, approximately twice that of the previous one. That is, by specifying the material to which chitosan is fixed, the adsorption amount of γ-globulin can be significantly improved, and there is also a large difference in the adsorption amount of bovine serum albumin.
【００２４】−実施例２および比較例７，８−実施例１
および比較例１，２で得られた各キトサン固着膜をγ−
グロブリンのリン酸バッファー溶液（γ−グロブリン１
００ｐｐｍ、ｐＨ７）にそれぞれ浸漬し、γ−グロブリ
ンの固定化処理を行った。それぞれ実施例２および比較
例７，８とする。この固定化処理は、３０℃で２時間振
とうして行った。膜への固定化量（μｇ／ｃｍ２ ）は
、この固定化処理前後のγ−グロブリン溶液の濃度変化
より算出した。濃度は、ＵＶ２８０ｎｍでの吸光度測定
により求めた。結果を表２に示した。- Example 2 and Comparative Examples 7 and 8 - Example 1
And each chitosan-fixed film obtained in Comparative Examples 1 and 2 was
Phosphate buffer solution of globulin (γ-globulin 1
00 ppm, pH 7) to perform γ-globulin immobilization treatment. These are referred to as Example 2 and Comparative Examples 7 and 8, respectively. This fixation treatment was performed by shaking at 30°C for 2 hours. The amount of immobilization on the membrane (μg/cm 2 ) was calculated from the change in concentration of the γ-globulin solution before and after the immobilization treatment. Concentration was determined by UV absorbance measurement at 280 nm. The results are shown in Table 2.
【００２５】実施例２および比較例７，８で得られたγ
−グロブリン固定化膜を用いて酵素免疫測定法を行った
。そのやり方は次のとおりである。各膜をそれぞれマイ
クロプレートにセットし、各試料についてウサギ血清原
液とさらにそれを５段階（１／１０、１／１００、１／
１０００、１／１００００）に希釈したものを各々のホ
ールに滴下した。次にカゼインでブロッキング操作を行
い、さらにβ−ガラクトシターゼで標識した抗ウサギＩ
ｇＧを各ホールに所定量滴下した。最後に上記酵素の基
質であるＣＰＲＧを滴下し、呈色させた。この呈色状況
を目視で観察し、膜の性能を次の３つの面より評価した
。〔感度〕１／１００００に希釈した血清液を滴下した膜が呈色す
るか。γ obtained in Example 2 and Comparative Examples 7 and 8
- Enzyme immunoassay was performed using a globulin-immobilized membrane. Here's how: Each membrane was set in a microplate, and rabbit serum stock solution was added to each sample in 5 stages (1/10, 1/100, 1/10).
1000, 1/10000) was dropped into each hole. Next, block with casein, and then anti-rabbit I labeled with β-galactosidase.
A predetermined amount of gG was dropped into each hole. Finally, CPRG, which is a substrate for the above enzyme, was added dropwise to develop color. The color development was visually observed and the performance of the film was evaluated from the following three aspects. [Sensitivity] Does the membrane change color when serum solution diluted to 1/10000 is dropped?
【００２６】○：濃く呈色する×：うすく呈色する〔非特異的吸着性〕血清の代わりにイオン交換水を滴下
した膜が呈色しないか。○：呈色しない×：呈色する〔吸着容量〕血清原液を滴下した膜が濃く呈色するか。○: Deeply colored ×: Lightly colored [Non-specific adsorption] Is the membrane onto which ion-exchanged water is dropped instead of serum colored? ○: No color development ×: Color development [Adsorption capacity] Does the membrane onto which the serum stock solution is dropped develop a deep color?
【００２７】○：濃く呈色する×：うすく呈色する○: Darkly colored×: Lightly colored
【００２８】[0028]
【表２】[Table 2]
【００２９】表２にみるように、実施例２の膜は、比較
例のものに比べて抗原の検出力が優れていた。As shown in Table 2, the membrane of Example 2 had better antigen detection power than that of the comparative example.
【００３０】[0030]
【発明の効果】この発明の免疫グロブリン用吸着材は、
免疫グロブリンを吸着する能力が高く、選択性があり、
しかも、この吸着材の有するキトサンが仮に溶出したと
しても生体への悪影響はほとんどない。この発明の抗原
用吸着材は、免疫グロブリンの吸着量が高く、しかも、
選択的に吸着されているため、抗原を吸着する能力が高
い。[Effect of the invention] The immunoglobulin adsorbent of this invention is
It has a high ability to adsorb immunoglobulins and is highly selective.
Moreover, even if the chitosan contained in this adsorbent were to be eluted, it would have almost no adverse effect on living organisms. The antigen adsorbent of the present invention has a high adsorption amount of immunoglobulin, and
Because it is selectively adsorbed, it has a high ability to adsorb antigens.
【００３１】このため、この発明の免疫グロブリン用吸
着材および抗原用吸着材は、免疫治療や免疫学的検査な
どの免疫的手法に有用である。Therefore, the immunoglobulin adsorbent and antigen adsorbent of the present invention are useful in immunological techniques such as immunotherapy and immunological testing.
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP13930291AJPH04364132A (en) | 1991-06-11 | 1991-06-11 | Adsorbents for immunoglobulins and antigens |
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP13930291AJPH04364132A (en) | 1991-06-11 | 1991-06-11 | Adsorbents for immunoglobulins and antigens |
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPH04364132Atrue JPH04364132A (en) | 1992-12-16 |
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP13930291APendingJPH04364132A (en) | 1991-06-11 | 1991-06-11 | Adsorbents for immunoglobulins and antigens |
| Country | Link |
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| JP (1) | JPH04364132A (en) |
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