JP7670408B1 - Blood collection container - Google Patents
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Abstract
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Description
Translated fromJapanese本発明は、血液採取容器に関する。また、本発明は、上記血液採取容器を用いた血漿の分離方法、細胞外遊離核酸の分離方法及び細胞外小胞の分離方法に関する。The present invention relates to a blood collection container. The present invention also relates to a method for separating plasma, a method for separating extracellular free nucleic acids, and a method for separating extracellular vesicles using the blood collection container.
臨床検査において、抗凝固剤が収容された血液採取容器が広く用いられている。抗凝固剤が収容された血液採取容器に血液を採取した後、血液採取容器を遠心分離することにより、血液を血漿と血球とに分離することができる。In clinical testing, blood collection containers containing anticoagulants are widely used. After blood is collected in a blood collection container containing an anticoagulant, the blood can be separated into plasma and blood cells by centrifuging the blood collection container.
また、下記の特許文献１，２に示すように、血漿分離材が収容された血液採取容器も知られている。例えば、下記の特許文献１には、樹脂及び無機粉末を含む血漿分離用組成物が収容された血液採取容器が記載されており、下記の特許文献２には、血漿分離用冶具が収容された血液採取容器が記載されている。As shown in the following
臨床現場では、血液採取容器に採取した血液を遠心分離により血漿と血球とに分離した後、血漿が検査に供されるまでに数日程度の時間が経過することがある。従来の血液採取容器では、血漿が検査に供されるまでに、血漿中に混入した血小板からエクソソームが放出されることがある。In clinical practice, after blood collected in a blood collection container is separated into plasma and blood cells by centrifugation, several days may pass before the plasma is subjected to testing. With conventional blood collection containers, exosomes may be released from platelets mixed in the plasma before the plasma is subjected to testing.
血小板由来のエクソソームにはｍｉＲＮＡ（ｍｉｃｒｏＲＮＡ）が含まれている。そのため、血小板からエクソソームが放出された場合には、検査結果に影響を及ぼすことがある。例えば、血漿中の細胞外遊離核酸（例えばｃｅｌｌ ｆｒｅｅ ＲＮＡ）を検出する検査では、血漿中に混入したｍｉＲＮＡによって、検査結果が変動する。Platelet-derived exosomes contain miRNA (microRNA). Therefore, when exosomes are released from platelets, they can affect test results. For example, in tests that detect extracellular free nucleic acids (e.g., cell free RNA) in plasma, the test results can vary depending on the miRNA that is mixed into the plasma.
本発明の目的は、血小板からのエクソソームの放出を抑えることができ、従って、血漿中への血小板由来のエクソソームの混入を抑えることができる血液採取容器を提供することである。また、本発明は、上記血液採取容器を用いた血漿の分離方法、細胞外遊離核酸の分離方法及び細胞外小胞の分離方法を提供することも目的とする。The object of the present invention is to provide a blood collection container that can suppress the release of exosomes from platelets, and therefore can suppress the contamination of plasma with platelet-derived exosomes. The present invention also aims to provide a method for separating plasma, a method for separating extracellular free nucleic acids, and a method for separating extracellular vesicles using the above blood collection container.
本明細書において、以下の血液採取容器、血漿の分離方法、細胞外遊離核酸の分離方法及び細胞外小胞の分離方法を開示する。This specification discloses the following blood collection container, plasma separation method, extracellular free nucleic acid separation method, and extracellular vesicle separation method.
項１．所定量の血液が採取される血液採取容器であり、血液採取容器本体と、前記血液採取容器本体内に収容された血漿分離材と、前記血液採取容器本体内に収容された水溶液とを備え、前記水溶液が、抗凝固剤を含み、下記のｐＨの測定をしたときに、混合液（Ｘ）のｐＨが３．５以上５．５以下である、血液採取容器。Item 1. A blood collection container for collecting a predetermined amount of blood, comprising a blood collection container body, a plasma separation material contained in the blood collection container body, and an aqueous solution contained in the blood collection container body, the aqueous solution containing an anticoagulant, and the pH of the mixed solution (X) is 3.5 or more and 5.5 or less when the pH is measured as described below.
ｐＨの測定：８ｇ／Ｌの塩化ナトリウムと、０．２ｇ／Ｌの塩化カリウムと、１．４４ｇ／Ｌのリン酸水素二ナトリウムと、０．２４ｇ／Ｌのリン酸二水素カリウムと、水とを含むｐＨが７．４の液を得る。血液採取容器に採取される血液の所定量と等量の前記ｐＨが７．４の液を血液採取容器内に採取して、前記ｐＨが７．４の液と前記水溶液とが混合された混合液（Ｘ）を得る。得られた混合液（Ｘ）のｐＨを測定する。pH measurement: A liquid with a pH of 7.4 is obtained, containing 8 g/L sodium chloride, 0.2 g/L potassium chloride, 1.44 g/L disodium hydrogen phosphate, 0.24 g/L potassium dihydrogen phosphate, and water. An amount of the liquid with a pH of 7.4 equal to the predetermined amount of blood to be collected in the blood collection container is collected in the blood collection container, and a mixed liquid (X) is obtained in which the liquid with a pH of 7.4 and the aqueous solution are mixed. The pH of the resulting mixed liquid (X) is measured.
項２．前記水溶液が、有機酸又は無機酸を含む、項１に記載の血液採取容器。
項３．前記水溶液が、有機酸を含む、項１又は２に記載の血液採取容器。
項４．前記有機酸が、クエン酸又はコハク酸を含む、項３に記載の血液採取容器。
項５．前記水溶液１００重量％中、前記有機酸の含有量が、１重量％以上１０重量％以下である、項３又は４に記載の血液採取容器。
項６．前記水溶液が、二糖類を含み、前記二糖類が、スクロースを含む、項１～５のいずれか１項に記載の血液採取容器。Item 6. The blood collection container according to any one of items 1 to 5, wherein the aqueous solution contains a disaccharide, and the disaccharide contains sucrose.
項７．前記水溶液が、無機塩を含む、項１～６のいずれか１項に記載の血液採取容器。Item 7. The blood collection container according to any one of items 1 to 6, wherein the aqueous solution contains an inorganic salt.
項８．前記水溶液のｐＨが、３．０以上６．０以下である、項１～７のいずれか１項に記載の血液採取容器。Item 8. The blood collection container according to any one of items 1 to 7, wherein the pH of the aqueous solution is 3.0 or more and 6.0 or less.
項９．前記血漿分離材の２５℃での比重が、１．０２０以上１．０４０以下である、項１～８のいずれか１項に記載の血液採取容器。Item 9. The blood collection container according to any one of items 1 to 8, wherein the specific gravity of the plasma separation material at 25°C is 1.020 or more and 1.040 or less.
項１０．前記血漿分離材が、血漿分離用組成物である、項１～９のいずれか１項に記載の血液採取容器。Item 10. The blood collection container according to any one of items 1 to 9, wherein the plasma separation material is a plasma separation composition.
項１１．前記血漿分離用組成物が、２５℃で流動性を有する有機成分と、無機微粉末とを含み、前記有機成分が、樹脂を含み、前記無機微粉末が、微粉末シリカを含む、項１０に記載の血液採取容器。Item 11. The blood collection container according to Item 10, wherein the plasma separation composition comprises an organic component having fluidity at 25°C and an inorganic fine powder, the organic component comprises a resin, and the inorganic fine powder comprises fine silica powder.
項１２．前記樹脂が、石油樹脂、シクロペンタジエン系樹脂、ポリエステル樹脂又は（メタ）アクリル系樹脂を含む、項１１に記載の血液採取容器。Item 12. The blood collection container according to item 11, wherein the resin includes a petroleum resin, a cyclopentadiene-based resin, a polyester resin, or a (meth)acrylic resin.
項１３．前記血液採取容器本体内に収容されている前記水溶液１ｍＬに対して、血液が４ｍＬ以上９．５ｍＬ以下採取される血液採取容器である、項１～１２のいずれか１項に記載の血液採取容器。Item 13. The blood collection container according to any one of items 1 to 12, in which 4 mL to 9.5 mL of blood is collected per 1 mL of the aqueous solution contained in the blood collection container body.
項１４．血液中の細胞外遊離核酸又は細胞外小胞を分離するために用いられる、項１～１３のいずれか１項に記載の血液採取容器。Item 14. A blood collection container according to any one of items 1 to 13, used to separate extracellular free nucleic acids or extracellular vesicles in blood.
項１５．項１～１４のいずれか１項に記載の血液採取容器内に血液を採取する工程と、前記血液が採取された前記血液採取容器を遠心分離する工程とを備える、血漿の分離方法。Item 15. A method for separating plasma, comprising the steps of collecting blood in a blood collection container according to any one of items 1 to 14, and centrifuging the blood collection container in which the blood has been collected.
項１６．項１～１４のいずれか１項に記載の血液採取容器内に血液を採取する工程と、前記血液が採取された前記血液採取容器を遠心分離して、血液から血漿を分離する工程と、分離された前記血漿から、細胞外遊離核酸を分離する工程とを備える、細胞外遊離核酸の分離方法。Item 16. A method for separating free extracellular nucleic acid comprising the steps of: collecting blood in a blood collection container according to any one of items 1 to 14; centrifuging the blood collection container into which the blood has been collected to separate plasma from the blood; and separating free extracellular nucleic acid from the separated plasma.
項１７．項１～１４のいずれか１項に記載の血液採取容器内に血液を採取する工程と、前記血液が採取された前記血液採取容器を遠心分離して、血液から血漿を分離する工程と、分離された前記血漿から、細胞外小胞を分離する工程とを備える、細胞外小胞の分離方法。Item 17. A method for separating extracellular vesicles, comprising the steps of: collecting blood in a blood collection container according to any one of items 1 to 14; centrifuging the blood collection container into which the blood has been collected to separate plasma from the blood; and separating extracellular vesicles from the separated plasma.
本発明に係る血液採取容器は、所定量の血液が採取される血液採取容器である。本発明に係る血液採取容器は、血液採取容器本体と、上記血液採取容器本体内に収容された血漿分離材と、上記血液採取容器本体内に収容された水溶液とを備え、上記水溶液が、抗凝固剤を含む。本発明に係る血液採取容器では、特定のｐＨの測定をしたときに、特定の混合液（Ｘ）のｐＨが３．５以上５．５以下である。本発明に係る血液採取容器では、上記の構成が備えられているので、血小板からのエクソソームの放出を抑えることができ、従って、血漿中への血小板由来のエクソソームの混入を抑えることができる。The blood collection container according to the present invention is a blood collection container from which a predetermined amount of blood is collected. The blood collection container according to the present invention comprises a blood collection container body, a plasma separation material contained in the blood collection container body, and an aqueous solution contained in the blood collection container body, the aqueous solution containing an anticoagulant. In the blood collection container according to the present invention, when a specific pH is measured, the pH of the specific mixed solution (X) is 3.5 or more and 5.5 or less. Since the blood collection container according to the present invention is provided with the above configuration, it is possible to suppress the release of exosomes from platelets, and therefore to suppress the incorporation of platelet-derived exosomes into plasma.
以下、本発明を詳細に説明する。The present invention is described in detail below.
（血液採取容器）
本発明に係る血液採取容器は、所定量の血液が採取される血液採取容器である。本発明に係る血液採取容器は、血液採取容器本体と、上記血液採取容器本体内に収容された血漿分離材と、上記血液採取容器本体内に収容された水溶液とを備え、上記水溶液が、抗凝固剤を含む。 (Blood collection container)
The blood collection container according to the present invention is a blood collection container for collecting a predetermined amount of blood. The blood collection container according to the present invention comprises a blood collection container body, a plasma separation material contained in the blood collection container body, and an aqueous solution contained in the blood collection container body, the aqueous solution containing an anticoagulant.
本発明に係る血液採取容器では、下記のｐＨの測定をしたときに、混合液（Ｘ）のｐＨが３．５以上５．５以下である。In the blood collection container according to the present invention, when the pH is measured as described below, the pH of the mixed liquid (X) is 3.5 or more and 5.5 or less.
ｐＨの測定：８ｇ／Ｌの塩化ナトリウムと、０．２ｇ／Ｌの塩化カリウムと、１．４４ｇ／Ｌのリン酸水素二ナトリウムと、０．２４ｇ／Ｌのリン酸二水素カリウムと、水とを含むｐＨが７．４の液を得る。血液採取容器に採取される血液の所定量と等量の上記ｐＨが７．４の液を血液採取容器内に採取して、上記ｐＨが７．４の液と上記水溶液とが混合された混合液（Ｘ）を得る。得られた混合液（Ｘ）のｐＨを測定する。pH measurement: A liquid with a pH of 7.4 is obtained, containing 8 g/L sodium chloride, 0.2 g/L potassium chloride, 1.44 g/L disodium hydrogen phosphate, 0.24 g/L potassium dihydrogen phosphate, and water. An amount of the liquid with a pH of 7.4 equal to the predetermined amount of blood to be collected in the blood collection container is collected in the blood collection container, and a mixed liquid (X) is obtained in which the liquid with a pH of 7.4 and the aqueous solution are mixed. The pH of the resulting mixed liquid (X) is measured.
本発明に係る血液採取容器では、上記の構成が備えられているので、血小板からのエクソソームの放出を抑えることができ、従って、血漿中への血小板由来のエクソソームの混入を抑えることができる。The blood collection container according to the present invention has the above-mentioned configuration, and therefore can suppress the release of exosomes from platelets, thereby suppressing the contamination of plasma with exosomes derived from platelets.
一般に、血液採取容器では、血漿中への血小板の混入を抑えることは困難である。血漿分離材を備える血液採取容器では、血漿中への赤血球及び白血球の混入をある程度抑えることができるものの、血漿中への血小板の混入を抑えることは困難である。これは、血漿分離材の比重が、血小板の比重と同程度であることに起因する。そのため、従来の血液採取容器では、血漿中に混入した血小板からエクソソームが放出されることがある。本発明者らは、血小板からのエクソソームの放出を効果的に抑えるための構成を鋭意検討した。その結果、本発明者らは、血小板と接触している液のｐＨが特定の範囲内である場合には、血小板からのエクソソームの放出が効果的に抑えられることを見出した。In general, it is difficult to prevent platelets from being mixed into plasma in a blood collection container. Although a blood collection container equipped with a plasma separation material can prevent red blood cells and white blood cells from being mixed into plasma to some extent, it is difficult to prevent platelets from being mixed into plasma. This is because the specific gravity of the plasma separation material is approximately the same as that of platelets. Therefore, in conventional blood collection containers, exosomes may be released from platelets mixed into plasma. The present inventors have intensively studied a configuration for effectively preventing the release of exosomes from platelets. As a result, the present inventors have found that the release of exosomes from platelets can be effectively prevented when the pH of the liquid in contact with the platelets is within a specific range.
上記ｐＨの測定における上記ｐＨが７．４の液は、血液と同程度のｐＨを有する液であり、上記混合液（Ｘ）は、血液と上記水溶液との混合液と同程度のｐＨを有する液である。本発明に係る血液採取容器に血液を採取すると、血液と上記水溶液との混合液は弱酸性となり、また、遠心分離により分離される血漿も弱酸性となる。そのため、本発明に係る血液採取容器では、分離された血漿が数日程度保管されたとしても、血漿中に混入している血小板からのエクソソームの放出が効果的に抑えられ、その結果、血漿中への血小板由来のエクソソームの混入を抑えることができる。The liquid with a pH of 7.4 in the above pH measurement is a liquid having a pH similar to that of blood, and the above mixed liquid (X) is a liquid having a pH similar to that of a mixed liquid of blood and the above aqueous solution. When blood is collected in the blood collection container according to the present invention, the mixed liquid of blood and the above aqueous solution becomes weakly acidic, and the plasma separated by centrifugation also becomes weakly acidic. Therefore, in the blood collection container according to the present invention, even if the separated plasma is stored for several days, the release of exosomes from platelets mixed in the plasma is effectively suppressed, and as a result, the contamination of the plasma with exosomes derived from platelets can be suppressed.
また、本発明に係る血液採取容器では、血漿分離材が備えられているので、該血漿分離材の比重を制御することにより、血漿中への赤血球及び白血球の混入を抑えることができる。In addition, the blood collection container according to the present invention is equipped with a plasma separation material, and by controlling the specific gravity of the plasma separation material, it is possible to prevent red blood cells and white blood cells from being mixed into the plasma.
本発明に係る血液採取容器では、血漿中への血小板由来のエクソソームの混入、並びに、血漿中への赤血球及び白血球の混入を抑えることができるので、分離された血漿が数日程度保管されたとしても、血漿中へのｍｉＲＮＡの混入量を少なくすることができる。The blood collection container of the present invention can suppress the contamination of plasma with platelet-derived exosomes, as well as the contamination of plasma with red blood cells and white blood cells, so that even if the separated plasma is stored for several days, the amount of miRNA that is contaminated in the plasma can be reduced.
上記混合液（Ｘ）のｐＨは、以下のようにして測定される。The pH of the above mixture (X) is measured as follows:
８ｇ／Ｌの塩化ナトリウムと、０．２ｇ／Ｌの塩化カリウムと、１．４４ｇ／Ｌのリン酸水素二ナトリウムと、０．２４ｇ／Ｌのリン酸二水素カリウムと、水とを含むｐＨが７．４の液を用意する。上記ｐＨが７．４の液は、例えば、８ｇの塩化ナトリウムと、０．２ｇの塩化カリウムと、１．４４ｇのリン酸水素二ナトリウムと、０．２４ｇのリン酸二水素カリウムと、９００ｍＬの水とを混合し、必要に応じてｐＨ調整剤（例えば塩酸）にてｐＨを調整し、水にて１Ｌにメスアップすることにより得ることができる。血液採取容器に採取される血液の所定量と等量の上記ｐＨが７．４の液を血液採取容器内に採取して、上記ｐＨが７．４の液と上記水溶液とが混合された混合液（Ｘ）を得る。例えば、５ｍＬの血液が採取される血液採取容器では、５ｍＬの上記ｐＨが７．４の液を該血液採取容器内に採取して、転倒混和するなどして、上記ｐＨが７．４の液と上記水溶液とを混合し、混合液（Ｘ）を得る。得られた混合液（Ｘ）のｐＨを測定する。A solution having a pH of 7.4 containing 8 g/L sodium chloride, 0.2 g/L potassium chloride, 1.44 g/L disodium hydrogen phosphate, 0.24 g/L potassium dihydrogen phosphate, and water is prepared. The solution having a pH of 7.4 can be obtained, for example, by mixing 8 g sodium chloride, 0.2 g potassium chloride, 1.44 g disodium hydrogen phosphate, 0.24 g potassium dihydrogen phosphate, and 900 mL of water, adjusting the pH with a pH adjuster (e.g., hydrochloric acid) as necessary, and diluting to 1 L with water. The solution having a pH of 7.4 is collected in a blood collection container in an amount equal to the predetermined amount of blood to be collected in the blood collection container, and a mixed solution (X) is obtained in which the solution having a pH of 7.4 and the aqueous solution are mixed. For example, in a blood collection container that can collect 5 mL of blood, 5 mL of the liquid with a pH of 7.4 is collected in the blood collection container, and the liquid with a pH of 7.4 is mixed with the aqueous solution by inversion or other means to obtain a mixed liquid (X). The pH of the resulting mixed liquid (X) is measured.
上記混合液（Ｘ）及び上記ｐＨが７．４の液のｐＨは、ｐＨ計を用いて、２２℃にて測定される。The pH of the above mixed solution (X) and the above solution with a pH of 7.4 are measured at 22°C using a pH meter.
本発明の効果を発揮する観点から、上記混合液（Ｘ）のｐＨは、３．５以上５．５以下である。上記混合液（Ｘ）のｐＨは、好ましくは３．８以上、より好ましくは４．０以上、更に好ましくは４．２以上、好ましくは５．２以下、より好ましくは５．０以下、更に好ましくは４．８以下、特に好ましくは４．６以下である。上記混合液（Ｘ）のｐＨが上記下限以上及び上記上限以下であると、本発明の効果をより一層効果的に発揮することができる。From the viewpoint of exerting the effects of the present invention, the pH of the mixed solution (X) is 3.5 or more and 5.5 or less. The pH of the mixed solution (X) is preferably 3.8 or more, more preferably 4.0 or more, even more preferably 4.2 or more, preferably 5.2 or less, more preferably 5.0 or less, even more preferably 4.8 or less, and particularly preferably 4.6 or less. When the pH of the mixed solution (X) is equal to or more than the above lower limit and equal to or less than the above upper limit, the effects of the present invention can be exerted even more effectively.
以下、本発明に係る血液採取容器の詳細などを説明する。なお、本明細書において、「（メタ）アクリル」は「アクリル」と「メタクリル」との一方又は双方を意味する。The blood collection container according to the present invention will be described in detail below. In this specification, "(meth)acrylic" means either or both of "acrylic" and "methacrylic".
（血漿分離材）
上記血液採取容器は、上記血液採取容器本体内に収容された血漿分離材を備える。上記血漿分離材として、従来公知の血漿分離材を用いることができる。上記血漿分離材としては、血漿分離用組成物、及び血漿分離用冶具等が挙げられる。血漿分離材の作製が容易であることから、上記血漿分離材は、上記血漿分離用組成物であることが好ましい。 (Plasma separation material)
The blood collection container includes a plasma separation material contained in the blood collection container body. As the plasma separation material, a conventionally known plasma separation material can be used. As the plasma separation material, a plasma separation composition, a plasma separation tool, and the like can be mentioned. Since the plasma separation material is easily prepared, the plasma separation material is preferably the plasma separation composition.
上記血漿分離材の２５℃での比重は、好ましくは１．０２０以上、より好ましくは１．０２２以上、更に好ましくは１．０２５以上、特に好ましくは１．０２８以上、好ましくは１．０４０以下、より好ましくは１．０３８以下、更に好ましくは１．０３６以下である。上記血漿分離材の２５℃での比重が上記下限以上及び上記上限以下であると、血漿中への白血球及び赤血球の混入をより一層効果的に抑えることができる。また、上記血漿分離材の２５℃での比重が上記下限以上及び上記上限以下であると、血漿中への血小板の混入をより一層効果的に抑えることができる。さらに、血液から血漿をより一層良好に分離することができる。The specific gravity of the plasma separation material at 25°C is preferably 1.020 or more, more preferably 1.022 or more, even more preferably 1.025 or more, particularly preferably 1.028 or more, preferably 1.040 or less, more preferably 1.038 or less, and even more preferably 1.036 or less. When the specific gravity of the plasma separation material at 25°C is equal to or more than the above lower limit and equal to or less than the above upper limit, the inclusion of white blood cells and red blood cells in the plasma can be more effectively prevented. Furthermore, when the specific gravity of the plasma separation material at 25°C is equal to or more than the above lower limit and equal to or less than the above upper limit, the inclusion of platelets in the plasma can be more effectively prevented. Furthermore, the plasma can be separated from the blood more effectively.
上記血漿分離材の収容箇所は、上記血液採取容器本体内であれば特に限定されない。上記血漿分離材は、上記血液採取容器本体の底部に配置されていてもよく、上記血液採取容器本体の内壁面上に配置されていてもよい。The location where the plasma separation material is contained is not particularly limited as long as it is inside the blood collection container body. The plasma separation material may be disposed at the bottom of the blood collection container body, or on the inner wall surface of the blood collection container body.
＜血漿分離用組成物＞
上記血漿分離用組成物は、遠心分離時に血漿層と血球層との間に移動して隔壁を形成する組成物である。また、上記血漿分離用組成物は、遠心分離後に血漿層と血球層との間の成分移行を防止する目的で用いられる。上記血漿分離用組成物は、チクソトロピー性を有することが好ましい。上記血漿分離用組成物は、上記血液採取容器本体の底部に収容されていてもよく、内壁面上に配置されていてもよい。本発明の効果をより一層効果的に発揮する観点から、上記血漿分離用組成物は、上記血液採取容器本体の底部に収容されていることが好ましい。 <Composition for plasma separation>
The plasma separation composition is a composition that migrates between the plasma layer and the blood cell layer during centrifugation to form a partition. The plasma separation composition is also used for the purpose of preventing component migration between the plasma layer and the blood cell layer after centrifugation. The plasma separation composition is preferably thixotropic. The plasma separation composition may be contained in the bottom of the blood collection container body, or may be disposed on the inner wall surface. From the viewpoint of exerting the effects of the present invention more effectively, the plasma separation composition is preferably contained in the bottom of the blood collection container body.
上記血漿分離用組成物として、従来公知の血漿分離用組成物を用いることができる。A conventionally known plasma separation composition can be used as the plasma separation composition.
上記血漿分離用組成物は、２５℃で流動性を有する有機成分と、無機微粉末とを含むことが好ましい。この場合には、血漿分離用組成物の流動性が高められ、遠心分離後に形成される隔壁の強度を高めることができる。上記２５℃で流動性を有する有機成分、及び上記無機微粉末はそれぞれ、１種のみが用いられてもよく、２種以上が併用されてもよい。The plasma separation composition preferably contains an organic component having fluidity at 25°C and an inorganic fine powder. In this case, the fluidity of the plasma separation composition is increased, and the strength of the partition wall formed after centrifugation can be increased. The organic component having fluidity at 25°C and the inorganic fine powder may each be used alone or in combination of two or more types.
２５℃で流動性を有する有機成分：
上記「２５℃で流動性を有する」とは、２５℃での粘度が５００Ｐａ・ｓ以下であることを意味する。 Organic components that are flowable at 25° C.:
The above phrase "having fluidity at 25°C" means that the viscosity at 25°C is 500 Pa·s or less.
上記有機成分の２５℃での粘度は、好ましくは１０Ｐａ・ｓ以上、より好ましくは３０Ｐａ・ｓ以上、好ましくは３００Ｐａ・ｓ以下、より好ましくは２００Ｐａ・ｓ以下である。上記粘度が上記下限以上及び上記上限以下であると、血漿分離用組成物の流動性が高められ、遠心分離後に形成される隔壁の強度を高めることができる。The viscosity of the organic component at 25°C is preferably 10 Pa·s or more, more preferably 30 Pa·s or more, and preferably 300 Pa·s or less, and more preferably 200 Pa·s or less. If the viscosity is equal to or greater than the lower limit and equal to or less than the upper limit, the fluidity of the plasma separation composition is increased, and the strength of the partition wall formed after centrifugation can be increased.
上記有機成分の２５℃での粘度は、Ｅ型粘度計（例えば、東機産業社製「ＴＶＥ－３５」）を用いて、２５℃及びせん断速度１．０秒－１の条件で測定される。 The viscosity of the organic component at 25° C. is measured using an E-type viscometer (for example, “TVE-35” manufactured by Toki Sangyo Co., Ltd.) under conditions of 25° C. and a shear rate of 1.0 sec−1 .
上記有機成分としては、樹脂、及び樹脂と可塑剤等の有機化合物との混合物等が挙げられる。したがって、上記有機成分は、上記樹脂を含むことが好ましく、上記樹脂と上記有機化合物とを含むことがより好ましい。上記有機成分が、上記樹脂と上記有機化合物との混合物である場合に、該混合物（上記有機成分）として流動性を有していればよく、該樹脂又は該有機化合物が流動性を有していなくてもよい。上記有機成分が、上記樹脂と上記有機化合物との混合物である場合に、該樹脂は、例えば、２５℃で固体の樹脂であってもよい。上記樹脂及び上記有機化合物はそれぞれ１種のみが用いられてもよく、２種以上が併用されてもよい。The organic component may be a resin, or a mixture of a resin and an organic compound such as a plasticizer. Therefore, the organic component preferably contains the resin, and more preferably contains the resin and the organic compound. When the organic component is a mixture of the resin and the organic compound, the mixture (the organic component) may have fluidity, and the resin or the organic compound may not have fluidity. When the organic component is a mixture of the resin and the organic compound, the resin may be, for example, a resin that is solid at 25°C. Only one type of the resin and the organic compound may be used, or two or more types may be used in combination.
上記樹脂としては、石油樹脂、シクロペンタジエン系樹脂、ポリエステル樹脂、ポリウレタン樹脂、（メタ）アクリル系樹脂、シリコーン樹脂、α－オレフィン－フマル酸エステル共重合体、セバシン酸と２，２－ジメチル－１，３－プロパンジオールと１，２－プロパンジオールとの共重合体、ポリエーテルポリウレタン系樹脂、及びポリエーテルポリエステル系樹脂等が挙げられる。上記樹脂は、１種のみが用いられてもよく、２種以上が併用されてもよい。Examples of the resins include petroleum resins, cyclopentadiene resins, polyester resins, polyurethane resins, (meth)acrylic resins, silicone resins, α-olefin-fumaric acid ester copolymers, copolymers of sebacic acid, 2,2-dimethyl-1,3-propanediol, and 1,2-propanediol, polyether polyurethane resins, and polyether polyester resins. Only one of the resins may be used, or two or more of them may be used in combination.
上記樹脂は、石油樹脂、シクロペンタジエン系樹脂、ポリエステル樹脂又は（メタ）アクリル系樹脂を含むことが好ましい。この場合には、血漿分離用組成物の流動性がより一層高められ、遠心分離後に形成される隔壁の強度をより一層高めることができる。The resin preferably contains a petroleum resin, a cyclopentadiene resin, a polyester resin, or a (meth)acrylic resin. In this case, the fluidity of the plasma separation composition is further increased, and the strength of the partition wall formed after centrifugation can be further increased.
上記石油樹脂の市販品としては、イーストマンケミカル社製「リガライトＳ５０９０」等が挙げられる。Commercially available petroleum resins include "Regalite S5090" manufactured by Eastman Chemical Company.
上記シクロペンタジエン系樹脂としては、シクロペンタジエン系モノマーの重合体、シクロペンタジエン系モノマーと芳香族系モノマーとの共重合体、及びジシクロペンタジエン樹脂等が挙げられる。上記シクロペンタジエン系樹脂は、水素添加されていてもよい。上記シクロペンタジエン系モノマーの重合体及び上記シクロペンタジエン系モノマーと芳香族系モノマーとの共重合体は、オリゴマーであってもよい。The cyclopentadiene resin may be a polymer of a cyclopentadiene monomer, a copolymer of a cyclopentadiene monomer and an aromatic monomer, or a dicyclopentadiene resin. The cyclopentadiene resin may be hydrogenated. The polymer of a cyclopentadiene monomer and the copolymer of a cyclopentadiene monomer and an aromatic monomer may be an oligomer.
上記シクロペンタジエン系モノマーとしては、シクロペンタジエン、ジシクロペンタジエン、及びシクロペンタジエンのアルキル置換誘導体等が挙げられる。Examples of the cyclopentadiene monomers include cyclopentadiene, dicyclopentadiene, and alkyl-substituted derivatives of cyclopentadiene.
上記芳香族系モノマーとしては、スチレン、メチルスチレン、インデン、及びメチルインデン等が挙げられる。Examples of the aromatic monomers include styrene, methylstyrene, indene, and methylindene.
上記ジシクロペンタジエン樹脂の市販品としては、コロン社製「スコレッツＳＵ５００」及び「スコレッツＳＵ９０」等が挙げられる。Commercially available products of the above dicyclopentadiene resin include "Scoretz SU500" and "Scoretz SU90" manufactured by Colon Co., Ltd.
上記ポリエステル樹脂としては、ポリアルキレンテレフタレート樹脂、及びポリアルキレンナフタレート樹脂等が挙げられる。上記ポリアルキレンテレフタレート樹脂としては、ポリエチレンテレフタレート、ポリブチレンテレフタレート及びポリ－１，４－シクロヘキサンジメチレンテレフタレート等が挙げられる。The polyester resins include polyalkylene terephthalate resins and polyalkylene naphthalate resins. The polyalkylene terephthalate resins include polyethylene terephthalate, polybutylene terephthalate, and poly-1,4-cyclohexanedimethylene terephthalate.
上記ポリウレタン樹脂としては、ポリオール化合物とイソシアネート化合物との反応物等が挙げられる。Examples of the polyurethane resin include a reaction product of a polyol compound and an isocyanate compound.
上記（メタ）アクリル系樹脂としては、少なくとも１種の（メタ）アクリル酸エステル単量体を重合することにより得られる樹脂、及び少なくとも１種の（メタ）アクリル酸エステル単量体と少なくとも１種の（メタ）アクリル酸エステル単量体以外の単量体とを重合することにより得られる樹脂が挙げられる。The above-mentioned (meth)acrylic resins include resins obtained by polymerizing at least one type of (meth)acrylic acid ester monomer, and resins obtained by polymerizing at least one type of (meth)acrylic acid ester monomer and at least one type of monomer other than the (meth)acrylic acid ester monomer.
上記（メタ）アクリル酸エステル単量体としては、（メタ）アクリル酸アルキルエステル、（メタ）アクリル酸ポリアルキレングリコールエステル、（メタ）アクリル酸アルコキシアルキルエステル、（メタ）アクリル酸ヒドロキシアルキルエステル、（メタ）アクリル酸グリシジルエステル、（メタ）アクリル酸ジアルキルアミノアルキルエステル、（メタ）アクリル酸ベンジルエステル、（メタ）アクリル酸フェノキシアルキルエステル、（メタ）アクリル酸シクロヘキシルエステル、（メタ）アクリル酸イソボルニルエステル、及び（メタ）アクリル酸アルコキシシリルアルキルエステル等が挙げられる。上記（メタ）アクリル酸エステル単量体がアルキル基を有する場合に、該アルキル基の炭素数は、好ましくは１以上、好ましくは２０以下である。上記（メタ）アクリル酸アルキルエステルは、炭素数が１以上２０以下であるアルキル基を有する（メタ）アクリル酸アルキルエステルであることが好ましい。上記（メタ）アクリル酸エステル単量体は、１種のみが用いられてもよく、２種以上が併用されてもよい。Examples of the (meth)acrylic acid ester monomer include (meth)acrylic acid alkyl ester, (meth)acrylic acid polyalkylene glycol ester, (meth)acrylic acid alkoxyalkyl ester, (meth)acrylic acid hydroxyalkyl ester, (meth)acrylic acid glycidyl ester, (meth)acrylic acid dialkylamino alkyl ester, (meth)acrylic acid benzyl ester, (meth)acrylic acid phenoxy alkyl ester, (meth)acrylic acid cyclohexyl ester, (meth)acrylic acid isobornyl ester, and (meth)acrylic acid alkoxysilyl alkyl ester. When the (meth)acrylic acid ester monomer has an alkyl group, the number of carbon atoms of the alkyl group is preferably 1 or more and preferably 20 or less. The (meth)acrylic acid alkyl ester is preferably a (meth)acrylic acid alkyl ester having an alkyl group having a carbon number of 1 to 20. The (meth)acrylic acid ester monomer may be used alone or in combination of two or more.
上記有機化合物としては、ベンゼンポリカルボン酸アルキルエステル誘導体等が挙げられる。上記有機化合物は、ベンゼンポリカルボン酸アルキルエステル誘導体であることが好ましい。したがって、上記有機成分は、上記樹脂と、上記ベンゼンポリカルボン酸アルキルエステル誘導体との混合物であることが好ましい。The organic compound may be a benzene polycarboxylic acid alkyl ester derivative. The organic compound is preferably a benzene polycarboxylic acid alkyl ester derivative. Therefore, the organic component is preferably a mixture of the resin and the benzene polycarboxylic acid alkyl ester derivative.
上記ベンゼンポリカルボン酸アルキルエステル誘導体としては、フタル酸エステル、トリメリット酸エステル、及びピロメリット酸エステル等が挙げられる。上記ベンゼンポリカルボン酸アルキルエステル誘導体は、１種のみが用いられてもよく、２種以上が併用されてもよい。The above-mentioned benzene polycarboxylic acid alkyl ester derivatives include phthalic acid esters, trimellitic acid esters, pyromellitic acid esters, etc. The above-mentioned benzene polycarboxylic acid alkyl ester derivatives may be used alone or in combination of two or more kinds.
上記トリメリット酸エステルとしては、トリメリット酸トリｎ－オクチル、トリメリット酸トリイソオクチル、及びトリメリット酸トリイソデシル等が挙げられる。Examples of the trimellitic acid esters include trimellitic acid trimellitate tri-n-octyl, trimellitic acid triisooctyl, and trimellitic acid triisodecyl.
上記ピロメリット酸エステルとしては、ピロメリット酸テトライソオクチル等が挙げられる。Examples of the pyromellitic acid esters include tetraisooctyl pyromellitic acid.
上記トリメリット酸エステルの市販品としては、ＤＩＣ社製「モノサイザーＷ７００」、及び「モノサイザーＷ－７５０」、新日本理化社製「サンソサイザーＴＯＴＭ」及び「サンソサイザーＴＩＴＭ」等が挙げられる。Commercially available products of the above trimellitic acid esters include "Monocizer W700" and "Monocizer W-750" manufactured by DIC Corporation, and "Sansocizer TOTM" and "Sansocizer TITM" manufactured by New Japan Chemical Co., Ltd.
上記ピロメリット酸エステルの市販品としては、ＤＩＣ社製「モノサイザーＷ－７０１０」等が挙げられる。Commercially available pyromellitic acid esters include "Monocizer W-7010" manufactured by DIC Corporation.
上記ベンゼンポリカルボン酸アルキルエステル誘導体は、フタル酸エステル、トリメリット酸エステル、又はピロメリット酸エステルであることが好ましく、トリメリット酸エステルであることがより好ましい。The benzene polycarboxylic acid alkyl ester derivative is preferably a phthalate ester, a trimellitate ester, or a pyromellitate ester, and more preferably a trimellitate ester.
上記血漿分離用組成物１００重量％中、上記有機成分の含有量は、好ましくは７５重量％以上、より好ましくは８５重量％以上、更に好ましくは９０重量％以上、好ましくは９７重量％以下である。In the plasma separation composition (100% by weight), the content of the organic component is preferably 75% by weight or more, more preferably 85% by weight or more, even more preferably 90% by weight or more, and preferably 97% by weight or less.
無機微粉末：
上記無機微粉末としては、微粉末シリカ、酸化チタン粉末、炭酸カルシウム粉末、酸化亜鉛粉末、アルミナ粉末、ガラス微粉末、タルク粉末、カオリン粉末、ベントナイト粉末、チタニア粉末、及びジルコニウム粉末等が挙げられる。 Inorganic fine powder:
Examples of the inorganic fine powder include fine silica powder, titanium oxide powder, calcium carbonate powder, zinc oxide powder, alumina powder, fine glass powder, talc powder, kaolin powder, bentonite powder, titania powder, and zirconium powder.
上記無機微粉末は、微粉末シリカ、酸化チタン粉末、炭酸カルシウム粉末、酸化亜鉛粉末、アルミナ粉末、ガラス微粉末、タルク粉末、カオリン粉末、ベントナイト粉末、チタニア粉末、又はジルコニウム粉末であることが好ましい。The inorganic fine powder is preferably silica fine powder, titanium oxide powder, calcium carbonate powder, zinc oxide powder, alumina powder, glass fine powder, talc powder, kaolin powder, bentonite powder, titania powder, or zirconium powder.
血漿分離用組成物の比重とチクソトロピー性との双方を共に好適な範囲に維持する観点からは、上記無機微粉末は、微粉末シリカを含むことが好ましい。上記無機微粉末は、微粉末シリカと、微粉末シリカ以外の無機微粉末（第２の無機微粉末）とを含んでいてもよい。上記無機微粉末、上記微粉末シリカ及び上記第２の無機微粉末はそれぞれ、１種のみが用いられてもよく、２種以上が併用されてもよい。From the viewpoint of maintaining both the specific gravity and thixotropy of the plasma separation composition within a suitable range, it is preferable that the inorganic fine powder contains fine silica. The inorganic fine powder may contain fine silica and an inorganic fine powder other than fine silica (second inorganic fine powder). The inorganic fine powder, the fine silica, and the second inorganic fine powder may each be used alone or in combination of two or more kinds.
上記微粉末シリカとしては、天然シリカ及び合成シリカが挙げられる。合成シリカとしては、親水性シリカ及び疎水性シリカが挙げられる。親水性シリカは、例えば、粒子表面の水酸基同士が水素結合することにより、血漿分離用組成物にチクソトロピー性を付与すると共に、比重を調整する作用を有する。一方、疎水性シリカは、親水性シリカに比べてチクソトロピー性の付与効果は小さい。The above-mentioned finely powdered silica includes natural silica and synthetic silica. Synthetic silica includes hydrophilic silica and hydrophobic silica. Hydrophilic silica, for example, imparts thixotropy to the plasma separation composition by hydrogen bonding between hydroxyl groups on the particle surface, and also has the effect of adjusting the specific gravity. On the other hand, hydrophobic silica has a smaller effect of imparting thixotropy than hydrophilic silica.
血漿分離用組成物の比重とチクソトロピー性との双方を共に好適な範囲に維持する観点からは、上記微粉末シリカは、親水性シリカを含むことが好ましく、親水性シリカと疎水性シリカとを含むことがより好ましい。From the viewpoint of maintaining both the specific gravity and thixotropy of the plasma separation composition within a suitable range, the finely powdered silica preferably contains hydrophilic silica, and more preferably contains hydrophilic and hydrophobic silica.
上記第２の無機微粉末は、微粉末シリカよりも比重が大きい無機微粉末であることが好ましく、酸化亜鉛粉末、酸化チタン粉末、アルミナ粉末等の比重が３以上である無機微粉末であることがより好ましい。The second inorganic fine powder is preferably an inorganic fine powder having a higher specific gravity than fine silica powder, and more preferably an inorganic fine powder having a specific gravity of 3 or more, such as zinc oxide powder, titanium oxide powder, or alumina powder.
上記第２の無機微粉末の比重は、好ましくは３以上、より好ましくは３．５以上、更に好ましくは４以上である。上記第２の無機微粉末の比重は大きいほどよい。上記比重が上記下限以上であると、血漿分離用組成物の比重を効果的に大きくすることができる。なお、上記第２の無機微粉末の比重は、１０以下であってもよく、６以下であってもよい。The specific gravity of the second inorganic fine powder is preferably 3 or more, more preferably 3.5 or more, and even more preferably 4 or more. The higher the specific gravity of the second inorganic fine powder, the better. If the specific gravity is equal to or higher than the lower limit, the specific gravity of the plasma separation composition can be effectively increased. The specific gravity of the second inorganic fine powder may be 10 or less, or 6 or less.
上記無機微粉末、上記微粉末シリカ及び上記第２の無機微粉末の平均粒子径は、特に限定されない。上記無機微粉末、上記微粉末シリカ及び上記第２の無機微粉末の平均粒子径は、１ｎｍ以上であってもよく、１０ｎｍ以上であってもよく、５００ｎｍ以下であってもよく、１００ｎｍ以下であってもよい。The average particle diameter of the inorganic fine powder, the fine silica powder, and the second inorganic fine powder is not particularly limited. The average particle diameter of the inorganic fine powder, the fine silica powder, and the second inorganic fine powder may be 1 nm or more, 10 nm or more, 500 nm or less, or 100 nm or less.
上記無機微粉末、上記微粉末シリカ及び上記第２の無機微粉末の平均粒子径は、体積基準で測定される平均径（体積平均粒子径）であり、５０％となるメディアン径（Ｄ５０）の値である。上記体積平均粒子径（Ｄ５０）は、レーザー回折・散乱法、画像解析法、コールター法、及び遠心沈降法等により測定可能である。上記体積平均粒子径（Ｄ５０）は、レーザー回折・散乱法又は画像解析法により求めることが好ましい。The average particle diameters of the inorganic fine powder, the fine silica powder, and the second inorganic fine powder are average diameters measured on a volume basis (volume average particle diameters), and are the 50% median diameter (D50) values. The volume average particle diameter (D50) can be measured by laser diffraction/scattering method, image analysis method, Coulter method, centrifugal sedimentation method, etc. The volume average particle diameter (D50) is preferably determined by laser diffraction/scattering method or image analysis method.
上記微粉末シリカの比表面積は、特に限定されない。上記微粉末シリカの比表面積は、２０ｍ２／ｇ以上であってもよく、１００ｍ２／ｇ以上であってもよく、５００ｍ２／ｇ以下であってもよく、３００ｍ２／ｇ以下であってもよい。 The specific surface area of the finely powdered silica is not particularly limited. The specific surface area of the finely powdered silica may be 20 m2 /g or more, 100 m2 /g or more, 500 m2 /g or less, or 300 m2 /g or less.
上記微粉末シリカの比表面積は、ＢＥＴ法により測定される。The specific surface area of the above finely powdered silica is measured by the BET method.
上記血漿分離用組成物１００重量％中、上記親水性シリカの含有量は、好ましくは０．０１重量％以上、より好ましくは０．１０重量％以上、更に好ましくは０．３０重量％以上、好ましくは２．５０重量％以下、より好ましくは２．００重量％以下である。上記親水性シリカの含有量が上記下限以上及び上記上限以下であると、血漿分離用組成物の比重とチクソトロピー性との双方をより一層好適な範囲に維持することができる。In 100% by weight of the plasma separation composition, the content of the hydrophilic silica is preferably 0.01% by weight or more, more preferably 0.10% by weight or more, even more preferably 0.30% by weight or more, preferably 2.50% by weight or less, and more preferably 2.00% by weight or less. When the content of the hydrophilic silica is equal to or more than the lower limit and equal to or less than the upper limit, both the specific gravity and thixotropy of the plasma separation composition can be maintained within an even more suitable range.
上記血漿分離用組成物１００重量％中、上記微粉末シリカの含有量は、好ましくは０．１重量％以上、より好ましくは０．５重量％以上、好ましくは１０重量％以下、より好ましくは７重量％以下である。上記微粉末シリカの含有量が上記下限以上及び上記上限以下であると、血漿分離用組成物の比重とチクソトロピー性との双方をより一層好適な範囲に維持することができる。In 100% by weight of the plasma separation composition, the content of the finely powdered silica is preferably 0.1% by weight or more, more preferably 0.5% by weight or more, preferably 10% by weight or less, more preferably 7% by weight or less. When the content of the finely powdered silica is equal to or more than the lower limit and equal to or less than the upper limit, both the specific gravity and thixotropy of the plasma separation composition can be maintained within a more suitable range.
上記血漿分離用組成物１００重量％中、上記第２の無機微粉末の含有量は、好ましくは０．０１重量％以上、より好ましくは０．１重量％以上、好ましくは１０重量％以下、より好ましくは７重量％以下である。上記第２の無機微粉末の含有量が上記下限以上及び上記上限以下であると、血漿分離用組成物の比重を効果的に大きくすることができる。In 100% by weight of the plasma separation composition, the content of the second inorganic fine powder is preferably 0.01% by weight or more, more preferably 0.1% by weight or more, preferably 10% by weight or less, more preferably 7% by weight or less. When the content of the second inorganic fine powder is equal to or more than the lower limit and equal to or less than the upper limit, the specific gravity of the plasma separation composition can be effectively increased.
上記血漿分離用組成物１００重量％中、上記無機微粉末の含有量は、好ましくは０．１重量％以上、より好ましくは０．５重量％以上、好ましくは１０重量％以下、より好ましくは７重量％以下である。上記無機微粉末の含有量が上記下限以上及び上記上限以下であると、血漿分離用組成物の比重を効果的に大きくすることができる。In 100% by weight of the plasma separation composition, the content of the inorganic fine powder is preferably 0.1% by weight or more, more preferably 0.5% by weight or more, preferably 10% by weight or less, more preferably 7% by weight or less. When the content of the inorganic fine powder is equal to or more than the lower limit and equal to or less than the upper limit, the specific gravity of the plasma separation composition can be effectively increased.
他の成分：
上記血漿分離用組成物は、本発明の効果を損なわない限り、上述した成分以外の他の成分を含んでいてもよい。上記他の成分としては、有機ゲル化剤、熱可塑性エラストマー、ポリアルキレングリコール、シリコーンオイル、補助溶媒、酸化防止剤、着色剤及び水等が挙げられる。上記他の成分はそれぞれ、１種のみが用いられてもよく、２種以上が併用されてもよい。 Other Ingredients:
The plasma separation composition may contain other components in addition to the above-mentioned components, so long as the effects of the present invention are not impaired. Examples of the other components include organic gelling agents, thermoplastic elastomers, polyalkylene glycols, silicone oils, auxiliary solvents, antioxidants, colorants, and water. Each of the other components may be used alone or in combination of two or more.
上記血漿分離用組成物の２５℃での比重は、好ましくは１．０２０以上、より好ましくは１．０２２以上、更に好ましくは１．０２５以上、特に好ましくは１．０２８以上、好ましくは１．０４０以下、より好ましくは１．０３８以下、更に好ましくは１．０３６以下である。上記血漿分離用組成物の２５℃での比重が上記下限以上及び上記上限以下であると、血漿中への白血球及び赤血球の混入をより一層効果的に抑えることができる。上記血漿分離用組成物の２５℃での比重が上記下限以上及び上記上限以下であると、血漿中への血小板の混入をより一層効果的に抑えることができる。さらに、血液から血漿をより一層良好に分離することができる。The specific gravity of the plasma separation composition at 25°C is preferably 1.020 or more, more preferably 1.022 or more, even more preferably 1.025 or more, particularly preferably 1.028 or more, preferably 1.040 or less, more preferably 1.038 or less, and even more preferably 1.036 or less. When the specific gravity of the plasma separation composition at 25°C is equal to or more than the above lower limit and equal to or less than the above upper limit, the inclusion of white blood cells and red blood cells in the plasma can be more effectively suppressed. When the specific gravity of the plasma separation composition at 25°C is equal to or more than the above lower limit and equal to or less than the above upper limit, the inclusion of platelets in the plasma can be more effectively suppressed. Furthermore, plasma can be separated from blood more effectively.
上記血漿分離用組成物の２５℃での比重は、血漿分離用組成物１滴を、比重を０．００２の間隔で段階的に調整した２５℃の食塩水中に順次滴下し、食塩水中における浮沈により測定される。The specific gravity of the above plasma separation composition at 25°C is measured by dropping one drop of the plasma separation composition into saline at 25°C, the specific gravity of which has been adjusted stepwise at intervals of 0.002, and observing whether the composition floats or sinks in the saline.
上記血漿分離用組成物の２５℃での粘度は、好ましくは５０Ｐａ・ｓ以上、より好ましくは７０Ｐａ・ｓ以上、好ましくは５００Ｐａ・ｓ以下、より好ましくは４００Ｐａ・ｓ以下である。上記粘度が上記下限以上及び上記上限以下であると、血漿分離用組成物の流動性が高められ、遠心分離後に形成される隔壁の強度を高めることができる。The viscosity of the plasma separation composition at 25°C is preferably 50 Pa·s or more, more preferably 70 Pa·s or more, preferably 500 Pa·s or less, more preferably 400 Pa·s or less. If the viscosity is equal to or greater than the lower limit and equal to or less than the upper limit, the fluidity of the plasma separation composition is increased, and the strength of the partition wall formed after centrifugation can be increased.
上記血漿分離用組成物の２５℃での粘度は、Ｅ型粘度計（例えば、東機産業社製「ＴＶＥ－３５」）を用いて、２５℃及びせん断速度１．０秒－１の条件で測定される。 The viscosity of the above-mentioned plasma separation composition at 25° C. is measured using an E-type viscometer (for example, "TVE-35" manufactured by Toki Sangyo Co., Ltd.) under conditions of 25° C. and a shear rate of 1.0 sec-1 .
＜血漿分離用冶具＞
上記血漿分離用冶具は、遠心分離時に血漿層と血球層との間に移動して隔壁を形成する冶具である。また、上記血漿分離用冶具は、血漿層と血球層との間の成分移行を防止する目的で用いられる。 <Plasma separation tool>
The plasma separation device is a device that moves between the plasma layer and the blood cell layer during centrifugation to form a partition wall, and is used for the purpose of preventing component migration between the plasma layer and the blood cell layer.
上記血漿分離用冶具として、従来公知の血漿分離用冶具を用いることができる。上記血漿分離用冶具としては、例えば、ＷＯ２０１０／１３２７８３Ａ１等に記載の機械的セパレータ（血漿分離用冶具）等が挙げられる。A conventionally known plasma separation tool can be used as the plasma separation tool. Examples of the plasma separation tool include the mechanical separator (plasma separation tool) described in WO2010/132783A1, etc.
上記血漿分離用冶具の材料としては、例えば、エラストマー等が挙げられる。Examples of materials for the plasma separation tool include elastomers.
（水溶液）
上記血液採取容器は、上記血液採取容器本体内に収容された水溶液を備える。上記水溶液は、抗凝固剤を含む。抗凝固剤等の血液に溶解させる成分が水溶液に溶解した状態で血液採取容器本体内に収容されていることにより、血液との混合性を高めることができ、また、溶血を効果的に抑えることができる。 (Aqueous solution)
The blood collection container includes an aqueous solution contained within the blood collection container body. The aqueous solution includes an anticoagulant. By dissolving components that dissolve in blood, such as the anticoagulant, in the aqueous solution contained within the blood collection container body, it is possible to enhance mixing with the blood and effectively suppress hemolysis.
＜抗凝固剤＞
上記水溶液は、抗凝固剤を含む。上記抗凝固剤として、従来公知の抗凝固剤を用いることができる。上記抗凝固剤は、１種のみが用いられてもよく、２種以上が併用されてもよい。 <Anticoagulant>
The aqueous solution contains an anticoagulant. As the anticoagulant, a conventionally known anticoagulant can be used. The anticoagulant may be used alone or in combination of two or more kinds.
上記抗凝固剤としては、ヘパリン、ヘパリンの金属塩、エチレンジアミン四酢酸（ＥＤＴＡ）、ＥＤＴＡの金属塩、及びクエン酸ナトリウム等が挙げられる。The above anticoagulants include heparin, metal salts of heparin, ethylenediaminetetraacetic acid (EDTA), metal salts of EDTA, and sodium citrate.
抗凝固性能を良好に発揮させる観点から、上記抗凝固剤は、ヘパリン、ヘパリンの金属塩、ＥＤＴＡ、ＥＤＴＡの金属塩、又はクエン酸ナトリウムであることが好ましい。From the viewpoint of exerting good anticoagulant performance, the anticoagulant is preferably heparin, a metal salt of heparin, EDTA, a metal salt of EDTA, or sodium citrate.
上記水溶液中の上記抗凝固剤の含有量は、抗凝固性能が発揮される濃度である限り特に限定されない。上記水溶液１００重量％中、上記抗凝固剤の含有量は、好ましくは０．５重量％以上、より好ましくは１重量％以上、更に好ましくは２重量％以上、好ましくは１０重量％以下、より好ましくは６重量％以下、更に好ましくは４重量％以下である。上記抗凝固剤の含有量が上記下限以上及び上記上限以下であると、抗凝固性能を良好に発揮させることができる。The content of the anticoagulant in the aqueous solution is not particularly limited as long as it is a concentration at which anticoagulant performance is exhibited. In 100% by weight of the aqueous solution, the content of the anticoagulant is preferably 0.5% by weight or more, more preferably 1% by weight or more, even more preferably 2% by weight or more, preferably 10% by weight or less, more preferably 6% by weight or less, and even more preferably 4% by weight or less. When the content of the anticoagulant is equal to or more than the lower limit and equal to or less than the upper limit, the anticoagulant performance can be exhibited well.
＜有機酸又は無機酸＞
上記水溶液は、有機酸又は無機酸を含むことが好ましい。この場合に、上記水溶液は、有機酸を含んでいてもよく、無機酸を含んでいてもよく、有機酸と無機酸とを含んでいてもよい。上記水溶液が有機酸又は無機酸を含むことにより、上記混合液（Ｘ）のｐＨを特定の範囲内に調整しやすくなる。上記有機酸及び上記無機酸は、ｐＨ調整剤としての役割を果たす。上記有機酸は、１種のみが用いられてもよく、２種以上が併用されてもよい。上記無機酸は、１種のみが用いられてもよく、２種以上が併用されてもよい。 <Organic or inorganic acids>
The aqueous solution preferably contains an organic acid or an inorganic acid. In this case, the aqueous solution may contain an organic acid, may contain an inorganic acid, or may contain an organic acid and an inorganic acid. By containing an organic acid or an inorganic acid in the aqueous solution, the pH of the mixed liquid (X) can be easily adjusted to a specific range. The organic acid and the inorganic acid serve as a pH adjuster. Only one type of the organic acid may be used, or two or more types may be used in combination. Only one type of the inorganic acid may be used, or two or more types may be used in combination.
上記有機酸としては、クエン酸、コハク酸、ギ酸、酢酸、乳酸、シュウ酸、グルコン酸、マロン酸、フマル酸、リンゴ酸及び酒石酸等が挙げられる。上記無機酸としては、塩酸、リン酸、硝酸、硫酸、ホウ酸及びフッ化水素酸等が挙げられる。The organic acids include citric acid, succinic acid, formic acid, acetic acid, lactic acid, oxalic acid, gluconic acid, malonic acid, fumaric acid, malic acid, and tartaric acid. The inorganic acids include hydrochloric acid, phosphoric acid, nitric acid, sulfuric acid, boric acid, and hydrofluoric acid.
本発明の効果をより一層効果的に発揮する観点及び混合液（Ｘ）のｐＨを容易に調整する観点からは、上記水溶液は、有機酸を含むことが好ましい。From the viewpoint of more effectively exerting the effects of the present invention and from the viewpoint of easily adjusting the pH of the mixed liquid (X), it is preferable that the aqueous solution contains an organic acid.
上記有機酸の分子量は、好ましくは２０以上、より好ましくは１００以上、好ましくは５００以下、より好ましくは３００以下、更に好ましくは２５０以下である。上記有機酸の分子量が上記下限以上及び上記上限以下であると、本発明の効果をより一層効果的に発揮することができる。The molecular weight of the organic acid is preferably 20 or more, more preferably 100 or more, and preferably 500 or less, more preferably 300 or less, and even more preferably 250 or less. When the molecular weight of the organic acid is equal to or more than the above lower limit and equal to or less than the above upper limit, the effects of the present invention can be more effectively exhibited.
上記有機酸は、カルボン酸であることが好ましく、クエン酸又はコハク酸を含むことがより好ましく、クエン酸を含むことが更に好ましい。上記水溶液は、カルボン酸を含むことが好ましく、クエン酸又はコハク酸を含むことがより好ましく、クエン酸を含むことが更に好ましい。この場合には、本発明の効果をより一層効果的に発揮することができる。また、水溶液がクエン酸を含む場合には、溶血を効果的に抑えることもできる。The organic acid is preferably a carboxylic acid, more preferably contains citric acid or succinic acid, and even more preferably contains citric acid. The aqueous solution preferably contains a carboxylic acid, more preferably contains citric acid or succinic acid, and even more preferably contains citric acid. In this case, the effects of the present invention can be more effectively exerted. In addition, when the aqueous solution contains citric acid, hemolysis can also be effectively suppressed.
上記水溶液中の上記有機酸の含有量及び上記無機酸の含有量は、上記混合液（Ｘ）のｐＨを所望のｐＨとすることができる限り特に限定されない。The content of the organic acid and the content of the inorganic acid in the aqueous solution are not particularly limited as long as the pH of the mixed solution (X) can be adjusted to the desired pH.
上記水溶液１００重量％中、上記有機酸の含有量は、好ましくは１重量％以上、より好ましくは２重量％以上、更に好ましくは２．５重量％以上、好ましくは１０重量％以下、より好ましくは５重量％以下、更に好ましくは４重量％以下である。上記有機酸の含有量が上記下限以上及び上記上限以下であると、上記混合液（Ｘ）のｐＨを所望のｐＨとしやすくなり、本発明の効果をより一層効果的に発揮することができる。In the aqueous solution (100% by weight), the content of the organic acid is preferably 1% by weight or more, more preferably 2% by weight or more, even more preferably 2.5% by weight or more, preferably 10% by weight or less, more preferably 5% by weight or less, and even more preferably 4% by weight or less. When the content of the organic acid is equal to or more than the lower limit and equal to or less than the upper limit, the pH of the mixed solution (X) can be easily adjusted to the desired pH, and the effects of the present invention can be more effectively achieved.
上記水溶液１００重量％中、クエン酸の含有量は、好ましくは１重量％以上、より好ましくは２重量％以上、更に好ましくは２．５重量％以上、好ましくは１０重量％以下、より好ましくは５重量％以下、更に好ましくは４重量％以下である。上記クエン酸の含有量が上記下限以上及び上記上限以下であると、上記混合液（Ｘ）のｐＨを所望のｐＨとしやすくなり、本発明の効果をより一層効果的に発揮することができる。また、上記クエン酸の含有量が上記下限以上及び上記上限以下であると、溶血をより一層効果的に抑えることができる。In the aqueous solution (100% by weight), the content of citric acid is preferably 1% by weight or more, more preferably 2% by weight or more, even more preferably 2.5% by weight or more, preferably 10% by weight or less, more preferably 5% by weight or less, and even more preferably 4% by weight or less. When the content of citric acid is equal to or more than the lower limit and equal to or less than the upper limit, the pH of the mixed solution (X) can be easily adjusted to the desired pH, and the effects of the present invention can be more effectively exhibited. Furthermore, when the content of citric acid is equal to or more than the lower limit and equal to or less than the upper limit, hemolysis can be more effectively suppressed.
上記水溶液１００重量％中、コハク酸の含有量は、好ましくは１重量％以上、より好ましくは２重量％以上、更に好ましくは２．５重量％以上、好ましくは１０重量％以下、より好ましくは８重量％以下、更に好ましくは６重量％以下である。上記コハク酸の含有量が上記下限以上及び上記上限以下であると、上記混合液（Ｘ）のｐＨを所望のｐＨとしやすくなり、本発明の効果をより一層効果的に発揮することができる。In the aqueous solution (100% by weight), the succinic acid content is preferably 1% by weight or more, more preferably 2% by weight or more, even more preferably 2.5% by weight or more, preferably 10% by weight or less, more preferably 8% by weight or less, and even more preferably 6% by weight or less. When the succinic acid content is equal to or more than the lower limit and equal to or less than the upper limit, the pH of the mixed solution (X) can be easily adjusted to the desired pH, and the effects of the present invention can be more effectively achieved.
＜二糖類＞
上記水溶液は、二糖類を含むことが好ましい。この場合には、溶血を効果的に抑えることができる。また、赤血球及び白血球へ栄養源が供給されるので、赤血球及び白血球の生存率を高めることができ、その結果、赤血球及び白血球からのｍｉＲＮＡの漏出をより一層抑えることができる。上記二糖類は、１種のみが用いられてもよく、２種以上が併用されてもよい。 <Disaccharides>
The aqueous solution preferably contains a disaccharide. In this case, hemolysis can be effectively suppressed. In addition, since a source of nutrition is supplied to red blood cells and white blood cells, the survival rate of red blood cells and white blood cells can be increased, and as a result, leakage of miRNA from red blood cells and white blood cells can be further suppressed. The disaccharide may be used alone or in combination of two or more kinds.
上記二糖類としては、スクロース、トレハロース、マルトース及びラクトース等が挙げられる。The above disaccharides include sucrose, trehalose, maltose, and lactose.
上記二糖類は、スクロースを含むことが好ましい。上記水溶液は、スクロースを含むことが好ましい。この場合には、溶血をより一層効果的に抑えることができる。また、赤血球及び白血球からのｍｉＲＮＡの漏出をより一層抑えることができる。The disaccharide preferably contains sucrose. The aqueous solution preferably contains sucrose. In this case, hemolysis can be more effectively suppressed. Also, leakage of miRNA from red blood cells and white blood cells can be more effectively suppressed.
上記水溶液１００重量％中、上記二糖類の含有量は、好ましくは０．２重量％以上、より好ましくは０．５重量％以上、更に好ましくは１重量％以上、好ましくは１０重量％以下、より好ましくは６重量％以下、更に好ましくは４重量％以下である。上記二糖類の含有量が上記下限以上及び上記上限以下であると、溶血をより一層効果的に抑えることができる。また、赤血球及び白血球からのｍｉＲＮＡの漏出をより一層抑えることができる。In the aqueous solution (100% by weight), the content of the disaccharide is preferably 0.2% by weight or more, more preferably 0.5% by weight or more, even more preferably 1% by weight or more, preferably 10% by weight or less, more preferably 6% by weight or less, and even more preferably 4% by weight or less. When the content of the disaccharide is equal to or more than the lower limit and equal to or less than the upper limit, hemolysis can be more effectively suppressed. In addition, leakage of miRNA from red blood cells and white blood cells can be more effectively suppressed.
上記水溶液１００重量％中、スクロースの含有量は、好ましくは０．２重量％以上、より好ましくは０．５重量％以上、より一層好ましくは１重量％以上、更に好ましくは１．５重量％以上、更に一層好ましくは２重量％以上、好ましくは１０重量％以下、より好ましくは６重量％以下、更に好ましくは４重量％以下である。上記スクロースの含有量が上記下限以上及び上記上限以下であると、溶血をより一層効果的に抑えることができる。また、赤血球及び白血球からのｍｉＲＮＡの漏出をより一層抑えることができる。In the aqueous solution (100% by weight), the sucrose content is preferably 0.2% by weight or more, more preferably 0.5% by weight or more, even more preferably 1% by weight or more, even more preferably 1.5% by weight or more, even more preferably 2% by weight or more, preferably 10% by weight or less, more preferably 6% by weight or less, and even more preferably 4% by weight or less. When the sucrose content is equal to or more than the lower limit and equal to or less than the upper limit, hemolysis can be more effectively suppressed. In addition, leakage of miRNA from red blood cells and white blood cells can be more effectively suppressed.
＜無機塩＞
上記水溶液は、無機塩を含むことが好ましい。この場合には、血液と上記水溶液との混合液の浸透圧を調整しやすくなる。上記無機塩は、１種のみが用いられてもよく、２種以上が併用されてもよい。 <Inorganic salts>
The aqueous solution preferably contains an inorganic salt. In this case, it is easy to adjust the osmotic pressure of the mixture of blood and the aqueous solution. The inorganic salt may be used alone or in combination of two or more kinds.
上記無機塩としては、塩化ナトリウム及びリン酸水素ナトリウム等のナトリウム塩、並びに、塩化カリウム及び炭酸水素カリウム等のカリウム塩等が挙げられる。The above inorganic salts include sodium salts such as sodium chloride and sodium hydrogen phosphate, and potassium salts such as potassium chloride and potassium hydrogen carbonate.
上記水溶液１００重量％中、上記無機塩の含有量は、好ましくは０．１重量％以上、より好ましくは０．３重量％以上、好ましくは６重量％以下、より好ましくは３重量％以下である。上記無機塩の含有量が上記下限以上及び上記上限以下であると、血液と上記水溶液との混合液の浸透圧を好適な範囲にしやすくなる。In the aqueous solution (100% by weight), the content of the inorganic salt is preferably 0.1% by weight or more, more preferably 0.3% by weight or more, preferably 6% by weight or less, more preferably 3% by weight or less. When the content of the inorganic salt is equal to or more than the lower limit and equal to or less than the upper limit, the osmotic pressure of the mixture of blood and the aqueous solution is easily adjusted to a suitable range.
＜水＞
上記水溶液は、水を含むことが好ましい。上記水溶液において、水は溶媒としての役割を果たす。 <Water>
The aqueous solution preferably contains water, in which the water serves as a solvent.
上記水溶液１００重量％中、上記水の含有量は、好ましくは７０重量％以上、より好ましくは８０重量％以上、より一層好ましくは８５重量％以上、更に好ましくは８８重量％以上、特に好ましくは９０重量％以上、好ましくは９８重量％以下、より好ましくは９５重量％以下である。In the aqueous solution (100% by weight), the content of the water is preferably 70% by weight or more, more preferably 80% by weight or more, even more preferably 85% by weight or more, even more preferably 88% by weight or more, particularly preferably 90% by weight or more, preferably 98% by weight or less, more preferably 95% by weight or less.
＜他の成分＞
上記水溶液は、上述した成分（抗凝固剤、有機酸、無機酸、二糖類、無機塩及び水）以外の他の成分を含んでいてもよい。上記他の成分としては、単糖類、多糖類及び糖アルコール等が挙げられる。上記他の成分はそれぞれ、１種のみが用いられてもよく、２種以上が併用されてもよい。 <Other Ingredients>
The aqueous solution may contain other components in addition to the above-mentioned components (anticoagulant, organic acid, inorganic acid, disaccharide, inorganic salt, and water). Examples of the other components include monosaccharides, polysaccharides, and sugar alcohols. Only one type of each of the other components may be used, or two or more types may be used in combination.
上記水溶液は、アルデヒドを放出可能な化合物を含んでいてもよく、含んでいなくてもよい。上記アルデヒドを放出可能な化合物としては、ジアゾリジニル尿素、イミダゾリジニル尿素、１，３，５－トリス（ヒドロキシエチル）－ｓ－トリアジン、オキサゾリジン、１，３－ビス（ヒドロキシメチル）－５，５－ジメチルイミダゾリジン－２，４－ジオン、クオタニウム－１５、ＤＭＤＭヒダントイン、２－ブロモ－２－ニトロプロパン－１，３－ジオール、５－ブロモ－５－ニトロ－１，３－ジオキサン、トリス（ヒドロキシメチル）ニトロメタン、ヒドロキシメチルグリシネート、及びポリクオタニウム等が挙げられる。The aqueous solution may or may not contain a compound capable of releasing an aldehyde. Examples of the compound capable of releasing an aldehyde include diazolidinyl urea, imidazolidinyl urea, 1,3,5-tris(hydroxyethyl)-s-triazine, oxazolidine, 1,3-bis(hydroxymethyl)-5,5-dimethylimidazolidine-2,4-dione, quaternium-15, DMDM hydantoin, 2-bromo-2-nitropropane-1,3-diol, 5-bromo-5-nitro-1,3-dioxane, tris(hydroxymethyl)nitromethane, hydroxymethylglycinate, and polyquaternium.
＜水溶液の他の詳細＞
上記水溶液１００重量％中、上記抗凝固剤と上記有機酸と上記水との合計含有量は、好ましくは７０重量％以上、より好ましくは８０重量％以上、より一層好ましくは８５重量％以上、更に好ましくは９０重量％以上、特に好ましくは９５重量％以上である。上記合計含有量が上記下限以上であると、本発明の効果をより一層効果的に発揮することができる。なお、上記水溶液１００重量％中、上記抗凝固剤と上記有機酸と上記水との合計含有量は、１００重量％以下であってもよく、１００重量％未満であってもよく、９９重量％以下であってもよい。 <Other details of the aqueous solution>
In the 100% by weight aqueous solution, the total content of the anticoagulant, the organic acid, and the water is preferably 70% by weight or more, more preferably 80% by weight or more, even more preferably 85% by weight or more, even more preferably 90% by weight or more, and particularly preferably 95% by weight or more. When the total content is equal to or more than the lower limit, the effect of the present invention can be more effectively exhibited. In addition, in the 100% by weight aqueous solution, the total content of the anticoagulant, the organic acid, and the water may be 100% by weight or less, less than 100% by weight, or 99% by weight or less.
上記水溶液１００重量％中、上記抗凝固剤と上記有機酸と上記二糖類と上記水との合計含有量は、好ましくは７５重量％以上、より好ましくは８５重量％以上、より一層好ましくは９０重量％以上、更に好ましくは９５重量％以上、特に好ましくは９８重量％以上、最も好ましくは９９重量％以上である。上記合計含有量が上記下限以上であると、本発明の効果をより一層効果的に発揮することができる。なお、上記水溶液１００重量％中、上記抗凝固剤と上記有機酸と上記二糖類と上記水との合計含有量は、１００重量％以下であってもよく、１００重量％未満であってもよく、９９重量％以下であってもよい。In the 100% by weight aqueous solution, the total content of the anticoagulant, the organic acid, the disaccharide, and the water is preferably 75% by weight or more, more preferably 85% by weight or more, even more preferably 90% by weight or more, even more preferably 95% by weight or more, particularly preferably 98% by weight or more, and most preferably 99% by weight or more. When the total content is equal to or more than the lower limit, the effects of the present invention can be more effectively exhibited. In addition, in the 100% by weight aqueous solution, the total content of the anticoagulant, the organic acid, the disaccharide, and the water may be 100% by weight or less, less than 100% by weight, or 99% by weight or less.
上記水溶液のｐＨは、好ましくは３．０以上、より好ましくは３．５以上、好ましくは６．０以下、より好ましくは５．５以下、更に好ましくは５．０以下である。上記ｐＨが上記下限以上及び上記上限以下であると、本発明の効果をより一層効果的に発揮することができる。The pH of the aqueous solution is preferably 3.0 or more, more preferably 3.5 or more, and preferably 6.0 or less, more preferably 5.5 or less, and even more preferably 5.0 or less. When the pH is equal to or more than the lower limit and equal to or less than the upper limit, the effects of the present invention can be more effectively exhibited.
上記水溶液のｐＨは、ｐＨ計を用いて、２２℃にて測定される。The pH of the above aqueous solution is measured at 22°C using a pH meter.
上記血液採取容器本体内に収容されている水溶液の量は、血液採取容器本体のサイズ、及び採取される血液量等により適宜変更される。上記血液採取容器本体内に収容されている水溶液の量は、好ましくは０．１ｍＬ以上、より好ましくは０．５ｍＬ以上、更に好ましくは０．７ｍＬ以上、好ましくは５ｍＬ以下、より好ましくは３ｍＬ以下、更に好ましくは２．５ｍＬ以下である。上記水溶液の量が上記下限以上及び上記上限以下であると、血液が過度に希釈されることなく、本発明の効果をより一層効果的に発揮することができる。The amount of aqueous solution contained in the blood collection container body is changed as appropriate depending on the size of the blood collection container body, the amount of blood to be collected, etc. The amount of aqueous solution contained in the blood collection container body is preferably 0.1 mL or more, more preferably 0.5 mL or more, even more preferably 0.7 mL or more, preferably 5 mL or less, more preferably 3 mL or less, and even more preferably 2.5 mL or less. When the amount of the aqueous solution is equal to or more than the lower limit and equal to or less than the upper limit, the blood is not excessively diluted and the effects of the present invention can be more effectively achieved.
（血液採取容器本体）
上記血液採取容器本体の形状は特に限定されない。上記血液採取容器本体は、有底の管状容器であることが好ましい。上記血液採取容器本体は、一端に開口端を有し、他端に閉口端を有することが好ましい。上記血液採取容器本体は、他端に閉じられた底部を有することが好ましい。 (Blood collection container body)
The shape of the blood collection container body is not particularly limited. The blood collection container body is preferably a tubular container with a bottom. The blood collection container body preferably has an open end at one end and a closed end at the other end. The blood collection container body preferably has a closed bottom at the other end.
上記血液採取容器本体の素材は特に限定されない。上記血液採取容器本体の素材としては、ポリエチレン、ポリプロピレン、ポリスチレン、ポリエチレンテレフタレート、ポリメチルメタクリレート、ポリアクリロニトリル等の熱可塑性樹脂；不飽和ポリエステル樹脂、エポキシ樹脂、エポキシ－アクリレート樹脂等の熱硬化性樹脂；酢酸セルロース、プロピオン酸セルロース、エチルセルロース、エチルキチン等の変性天然樹脂；ソーダ石灰ガラス、リンケイ酸ガラス、ホウケイ酸ガラス等のケイ酸塩ガラス、石英ガラス等のガラスが挙げられる。上記血液採取容器本体の素材は、１種のみが用いられてもよく、２種以上が併用されてもよい。The material of the blood collection container body is not particularly limited. Examples of materials for the blood collection container body include thermoplastic resins such as polyethylene, polypropylene, polystyrene, polyethylene terephthalate, polymethyl methacrylate, and polyacrylonitrile; thermosetting resins such as unsaturated polyester resins, epoxy resins, and epoxy-acrylate resins; modified natural resins such as cellulose acetate, cellulose propionate, ethyl cellulose, and ethyl chitin; and glass such as silicate glass, such as soda-lime glass, phosphosilicate glass, and borosilicate glass, and quartz glass. Only one type of material may be used for the blood collection container body, or two or more types may be used in combination.
（栓体）
上記血液採取容器は、栓体を備えることが好ましい。上記栓体は、血液採取容器本体の開口端に取り付けられていることが好ましい。上記栓体として、従来公知の栓体を用いることができる。上記栓体は、血液採取容器本体の開口端に、気密的かつ液密的に取り付けることが可能な素材、形状からなる栓体であることが好ましい。上記栓体は、採血針が刺通され得るように構成されていることが好ましい。 (Plug)
The blood collection container preferably includes a stopper. The stopper is preferably attached to the open end of the blood collection container body. A conventionally known stopper can be used as the stopper. The stopper is preferably made of a material and has a shape that allows it to be attached to the open end of the blood collection container body in an airtight and liquidtight manner. The stopper is preferably configured to be pierced by a blood collection needle.
上記栓体としては、血液採取容器本体の開口端に嵌合する形状を有する栓体、シート状のシール栓体等が挙げられる。Examples of the stopper include a stopper shaped to fit into the open end of the blood collection container body, a sheet-shaped seal stopper, etc.
また、上記栓体は、ゴム栓等の栓本体と、プラスチック等で構成されたキャップ部材とを備える栓体であってもよい。この場合には、血液採取後に、血液採取容器本体の開口端から栓体を引き抜く際に、血液が人体と接触するリスクを抑えることができる。The stopper may also be a stopper comprising a stopper body such as a rubber stopper and a cap member made of plastic or the like. In this case, the risk of blood coming into contact with the human body can be reduced when the stopper body is pulled out from the open end of the blood collection container body after blood collection.
上記栓体（又は上記栓本体）の材料としては、例えば、合成樹脂、エラストマー、ゴム、金属箔等が挙げられる。上記ゴムとしては、ブチルゴム、及びハロゲン化ブチルゴム等が挙げられる。上記金属箔としては、アルミニウム箔等が挙げられる。密封性を高める観点からは、上記栓体の材料は、ブチルゴムであることが好ましい。上記栓体（又は上記栓本体）は、ブチルゴム栓であることが好ましい。Examples of the material of the stopper (or the stopper main body) include synthetic resin, elastomer, rubber, metal foil, etc. Examples of the rubber include butyl rubber and halogenated butyl rubber. Examples of the metal foil include aluminum foil. From the viewpoint of improving the sealing performance, the material of the stopper is preferably butyl rubber. The stopper (or the stopper main body) is preferably a butyl rubber stopper.
（血液採取容器の他の詳細）
上記血液採取容器は、所定量の血液が採取される血液採取容器である。上記血液の上記所定量は、血液採取容器のサイズ及び内圧等により適宜変更される。上記血液の上記所定量は、１ｍＬ以上であってもよく、２ｍＬ以上であってもよく、４ｍＬ以上であってもよく、１２ｍＬ以下であってもよく、１１ｍＬ以下であってもよく、１０ｍＬ以下であってもよい。 (Other details of blood collection container)
The blood collection container is a blood collection container in which a predetermined amount of blood is collected. The predetermined amount of blood is appropriately changed depending on the size and internal pressure of the blood collection container. The predetermined amount of blood may be 1 mL or more, 2 mL or more, 4 mL or more, 12 mL or less, 11 mL or less, or 10 mL or less.
上記血液採取容器は、上記血液採取容器本体内に収容されている上記水溶液１ｍＬに対して、血液が４ｍＬ以上採取される血液採取容器であることが好ましく、血液が５ｍＬ以上採取される血液採取容器であることがより好ましく、血液が９．５ｍＬ以下採取される血液採取容器であることが好ましく、血液が９ｍＬ以下採取される血液採取容器であることがより好ましい。この場合には、血液が過度に希釈されることなく、本発明の効果をより一層効果的に発揮することができる。The blood collection container is preferably a blood collection container that collects 4 mL or more of blood per 1 mL of the aqueous solution contained in the blood collection container body, more preferably a blood collection container that collects 5 mL or more of blood, preferably a blood collection container that collects 9.5 mL or less of blood, and more preferably a blood collection container that collects 9 mL or less of blood. In this case, the blood is not excessively diluted, and the effects of the present invention can be exerted even more effectively.
上記血液採取容器は、採血管であることが好ましい。上記血液採取容器本体は、採血管本体であることが好ましい。The blood collection container is preferably a blood collection tube. The blood collection container body is preferably a blood collection tube body.
上記血液採取容器は、血液から血漿を分離するために用いられることが好ましい。また、上記血液採取容器は、血液中の細胞外遊離核酸又は細胞外小胞を分離するために用いられることが好ましく、血液中の細胞外遊離核酸又は細胞外小胞を単離するために用いられることが好ましい。上記細胞外遊離核酸は、ｃｅｌｌ ｆｒｅｅ ＤＮＡ（ｃｆＤＮＡ）であってもよく、ｃｅｌｌ ｆｒｅｅ ＲＮＡ（ｃｆＲＮＡ）であってもよい。上記細胞外遊離核酸は、ｃｆＲＮＡであることが好ましい。The blood collection container is preferably used to separate plasma from blood. The blood collection container is also preferably used to separate extracellular free nucleic acids or extracellular vesicles in blood, and is preferably used to isolate extracellular free nucleic acids or extracellular vesicles in blood. The extracellular free nucleic acids may be cell free DNA (cfDNA) or cell free RNA (cfRNA). The extracellular free nucleic acids are preferably cfRNA.
上記血液採取容器は、例えば、以下のようにして製造することができる。The blood collection container can be manufactured, for example, as follows:
抗凝固剤と有機酸とを水に溶解して水溶液を得る。なお、必要に応じてこれら以外の成分も水に溶解して水溶液を得る。得られた水溶液を血液採取容器本体内に添加する。水溶液を添加する前又は添加した後に、血液採取容器本体内に血漿分離材を収容する。An anticoagulant and an organic acid are dissolved in water to obtain an aqueous solution. If necessary, other components are also dissolved in water to obtain an aqueous solution. The aqueous solution obtained is added to the blood collection container body. Before or after adding the aqueous solution, the plasma separation material is placed in the blood collection container body.
図１は、本発明の一実施形態に係る血液採取容器を模式的に示す正面断面図である。Figure 1 is a schematic front cross-sectional view of a blood collection container according to one embodiment of the present invention.
図１に示す血液採取容器１は、血液採取容器本体２と、血漿分離用組成物３と、水溶液４と、栓体５とを備える。血液採取容器本体２は、開口端２ａと閉口端２ｂとを有する。開口端２ａは、血液採取容器本体２の長さ方向における一端に対応し、閉口端２ｂは、血液採取容器本体２の長さ方向における他端（底部側）に対応する。血漿分離用組成物３は、血液採取容器本体２の底部に収容されている。水溶液４は、抗凝固剤を含む。栓体５は、血液採取容器本体２の開口端２ａに挿入されている。The blood collection container 1 shown in FIG. 1 comprises a blood
水溶液４は、血漿分離用組成物３の表面上に配置されており、より具体的には、血漿分離用組成物３の上面（血液採取容器本体２の開口端２ａ側の表面）に配置されている。水溶液４は、血液採取容器１を正立状態としたときに、血漿分離用組成物３の表面上に配置されている。The
本発明に係る血液採取容器では、上記血漿分離用組成物が上記血液採取容器本体の側壁面上に配置されており、かつ上記水溶液が、血液採取容器を正立状態としたときに、血液採取容器本体の底部に配置されていてもよい。また、上記血漿分離用組成物の代わりに上記血漿分離用冶具が用いられてもよい。In the blood collection container according to the present invention, the plasma separation composition may be disposed on the side wall surface of the blood collection container body, and the aqueous solution may be disposed at the bottom of the blood collection container body when the blood collection container is in an upright position. Also, the plasma separation tool may be used instead of the plasma separation composition.
上記血液採取容器の内圧は特に限定されない。上記血液採取容器は、内部が排気された上で、上記栓体によって密閉された真空採血管として用いることもできる。上記真空採血管の内圧は、所定量の血液が採取可能となるように減圧されている。真空採血管である場合、採血者の技術差によらず一定量の血液を簡便に採取することができる。The internal pressure of the blood collection container is not particularly limited. The blood collection container can also be used as a vacuum blood collection tube, with the interior evacuated and sealed with the stopper. The internal pressure of the vacuum blood collection tube is reduced so that a predetermined amount of blood can be collected. In the case of a vacuum blood collection tube, a constant amount of blood can be easily collected regardless of the skill level of the blood collector.
細菌感染を防止する観点から、血液採取容器の内部はＩＳＯ又はＪＩＳの基準に則って滅菌されていることが好ましい。To prevent bacterial infection, it is preferable that the inside of the blood collection container is sterilized in accordance with ISO or JIS standards.
（血漿の分離方法）
上記血液採取容器を用いて、血液から血漿を分離することができる。本発明に係る血漿の分離方法は、上述した血液採取容器内に血液を採取する工程と、上記血液が採取された上記血液採取容器を遠心分離する工程とを備える。 (Method of separating plasma)
The blood collection container can be used to separate plasma from blood. A method for separating plasma according to the present invention includes the steps of collecting blood in the blood collection container and centrifuging the blood collection container in which the blood has been collected.
本発明に係る血漿の分離方法では、上記血液を採取する工程と上記遠心分離する工程との間に、採取された血液と、上記水溶液とを混合する工程を備えることが好ましい。採取された血液と上記水溶液とを混合する方法としては、転倒混和等が挙げられる。In the plasma separation method according to the present invention, it is preferable to include a step of mixing the collected blood with the aqueous solution between the step of collecting the blood and the step of centrifuging. Methods for mixing the collected blood with the aqueous solution include mixing by inversion, etc.
上記遠心分離する工程における遠心分離条件は、上記血漿分離材により隔壁を形成させて、血漿と血球とを分離させることができる限り、特に限定されない。上記遠心分離条件としては、例えば、４００Ｇ以上４０００Ｇ以下で１０分間以上１２０分間以下で遠心分離する条件等が挙げられる。The centrifugation conditions in the centrifugation step are not particularly limited as long as a partition can be formed using the plasma separation material to separate the plasma from the blood cells. Examples of the centrifugation conditions include centrifugation at 400 G or more and 4000 G or less for 10 minutes or more and 120 minutes or less.
（細胞外遊離核酸の分離方法及び細胞外小胞の分離方法）
本発明に係る細胞外遊離核酸の分離方法は、上述した血液採取容器内に血液を採取する工程と、上記血液が採取された上記血液採取容器を遠心分離して、血液から血漿を分離する工程と、分離された上記血漿から、細胞外遊離核酸を分離する工程とを備える。 (Method for isolating extracellular free nucleic acid and method for isolating extracellular vesicles)
The method for isolating extracellular free nucleic acid according to the present invention comprises the steps of collecting blood in the blood collection container described above, centrifuging the blood collection container in which the blood has been collected to separate plasma from the blood, and separating extracellular free nucleic acid from the separated plasma.
本発明に係る細胞外小胞の分離方法は、上述した血液採取容器内に血液を採取する工程と、上記血液が採取された上記血液採取容器を遠心分離して、血液から血漿を分離する工程と、分離された上記血漿から、細胞外小胞を分離する工程とを備える。The method for separating extracellular vesicles according to the present invention includes the steps of collecting blood in the blood collection container described above, centrifuging the blood collection container in which the blood has been collected to separate plasma from the blood, and separating extracellular vesicles from the separated plasma.
本発明に係る細胞外遊離核酸の分離方法及び細胞外小胞の分離方法では、上記血液を採取する工程と上記遠心分離する工程との間に、採取された血液と、上記水溶液とを混合する工程を備えることが好ましい。採取された血液と上記水溶液とを混合する方法としては、転倒混和等が挙げられる。In the method for separating extracellular free nucleic acids and the method for separating extracellular vesicles according to the present invention, it is preferable to include a step of mixing the collected blood with the aqueous solution between the step of collecting the blood and the step of centrifuging. Methods for mixing the collected blood with the aqueous solution include mixing by inversion, etc.
上記遠心分離する工程における遠心分離条件は、上記血漿分離材により隔壁を形成させて、血漿と血球とを分離させることができる限り、特に限定されない。上記遠心分離条件としては、例えば、４００Ｇ以上４０００Ｇ以下で１０分間以上１２０分間以下で遠心分離する条件等が挙げられる。The centrifugation conditions in the centrifugation step are not particularly limited as long as a partition can be formed using the plasma separation material to separate the plasma from the blood cells. Examples of the centrifugation conditions include centrifugation at 400 G or more and 4000 G or less for 10 minutes or more and 120 minutes or less.
上記細胞外遊離核酸を分離する工程では、従来公知の方法を用いて、血漿から細胞外遊離核酸を分離することができる。上記細胞外遊離核酸としては、ｃｅｌｌ ｆｒｅｅ ＤＮＡ（ｃｆＤＮＡ）、ｃｅｌｌ ｆｒｅｅ ＲＮＡ（ｃｆＲＮＡ）等が挙げられる。上記血漿から細胞外遊離核酸を分離する方法としては、市販の核酸精製キットを用いる方法等が挙げられる。市販の核酸精製キットを用いることで、血漿から細胞外遊離核酸を簡便に分離することができる。核酸精製キットの市販品としては、ＱＩＡａｍｐ Ｃｉｒｃｕｌａｔｉｎｇ Ｎｕｃｌｅｉｃ Ａｃｉｄ Ｋｉｔ（ＱＩＡＧＥＮ社製）、ＱＩＡａｍｐ ＭｉｎＥｌｕｔｅ ｃｃｆＤＮＡ Ｋｉｔｓ（ＱＩＡＧＥＮ社製）及びＭａｇＭＡＸ Ｃｅｌｌ－Ｆｒｅｅ ＤＮＡ Ｉｓｏｌａｔｉｏｎ Ｋｉｔ（Ａｐｐｌｉｅｄ ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ社製）等が挙げられる。In the step of isolating the extracellular free nucleic acid, the extracellular free nucleic acid can be separated from the plasma using a conventional method. Examples of the extracellular free nucleic acid include cell free DNA (cfDNA) and cell free RNA (cfRNA). Examples of a method for separating the extracellular free nucleic acid from the plasma include a method using a commercially available nucleic acid purification kit. By using a commercially available nucleic acid purification kit, the extracellular free nucleic acid can be easily separated from the plasma. Examples of commercially available nucleic acid purification kits include QIAamp Circulating Nucleic Acid Kit (manufactured by QIAGEN), QIAamp MinElute ccfDNA Kits (manufactured by QIAGEN), and MagMAX Cell-Free DNA Isolation Kit (manufactured by Applied biosystems).
上記細胞外小胞を分離する工程では、従来公知の方法を用いて、血漿から細胞外小胞を分離することができる。In the step of separating the extracellular vesicles, the extracellular vesicles can be separated from the plasma using a conventional method.
（血小板からのエクソソームの放出を抑制する方法）
本明細書では、血小板をｐＨが３．５以上７．０未満の環境下で保管する、血小板からのエクソソームの放出を抑制する方法も提供する。上記「ｐＨが３．５以上７．０未満の環境下」とは、血小板と接触している液のｐＨが３．５以上７．０未満であることを意味する。 (Method for inhibiting exosome release from platelets)
The present specification also provides a method for suppressing exosome release from platelets, which comprises storing platelets in an environment having a pH of 3.5 or more and less than 7.0. The above "environment having a pH of 3.5 or more and less than 7.0" means that the pH of the liquid in contact with the platelets is 3.5 or more and less than 7.0.
上記方法では、血小板を、ｐＨが４．０以上の環境下で保管することが好ましく、ｐＨが４．５以上の環境下で保管することがより好ましく、ｐＨが５．０以上の環境下で保管することが更に好ましく、ｐＨが６．９以下の環境下で保管することが好ましく、ｐＨが６．６以下の環境下で保管することがより好ましく、ｐＨが６．４以下の環境下で保管することが更に好ましい。上記ｐＨが上記下限以上及び上記上限以下であると、血小板からのエクソソームの放出をより一層効果的に抑制することができる。In the above method, the platelets are preferably stored in an environment with a pH of 4.0 or higher, more preferably stored in an environment with a pH of 4.5 or higher, even more preferably stored in an environment with a pH of 5.0 or higher, preferably stored in an environment with a pH of 6.9 or lower, more preferably stored in an environment with a pH of 6.6 or lower, and even more preferably stored in an environment with a pH of 6.4 or lower. When the pH is equal to or higher than the above lower limit and equal to or lower than the above upper limit, the release of exosomes from the platelets can be more effectively suppressed.
上記方法は、以下の方法（１）又は以下の方法（２）であることが好ましい。The above method is preferably the following method (1) or the following method (2).
方法（１）は、血液と、抗凝固剤を含む水溶液とを混合して液（Ａ）を得る工程と、上記液（Ａ）を保管する工程とを備える。方法（１）では、上記液（Ａ）のｐＨが３．５以上７．０未満である。方法（１）では、上記液（Ａ）が、上記血小板と接触している液である。Method (1) includes a step of obtaining liquid (A) by mixing blood with an aqueous solution containing an anticoagulant, and a step of storing the liquid (A). In method (1), the pH of the liquid (A) is 3.5 or more and less than 7.0. In method (1), the liquid (A) is in contact with the platelets.
方法（２）は、血液と、抗凝固剤を含む水溶液とを混合して液（Ａ）を得る工程と、上記液（Ａ）から、血小板を含む血漿を分離する工程と、上記血小板を含む血漿を保管する工程とを備える。方法（２）では、上記血小板を含む血漿が、上記血小板と接触している液である。Method (2) includes the steps of: mixing blood with an aqueous solution containing an anticoagulant to obtain liquid (A); separating plasma containing platelets from liquid (A); and storing the plasma containing platelets. In method (2), the plasma containing platelets is a liquid in contact with the platelets.
上記方法（１）及び上記方法（２）において、上記液（Ａ）を得る工程では、血液と上記水溶液と他の成分（液等）とを混合してもよい。また、上記方法（１）及び上記方法（２）において、上記水溶液（抗凝固剤を含む水溶液）として、上述した水溶液を使用可能である。In the above method (1) and method (2), in the step of obtaining the liquid (A), blood, the aqueous solution, and other components (liquids, etc.) may be mixed. In addition, in the above method (1) and method (2), the aqueous solution described above can be used as the aqueous solution (aqueous solution containing an anticoagulant).
上記方法（１）及び上記方法（２）において、上記液（Ａ）のｐＨは、好ましくは４．０以上、より好ましくは４．５以上、更に好ましくは５．０以上、好ましくは６．９以下、より好ましくは６．６以下、更に好ましくは６．４以下である。上記液（Ａ）のｐＨが上記下限以上及び上記上限以下であると、血小板からのエクソソームの放出をより一層効果的に抑制することができる。In the above method (1) and method (2), the pH of the above liquid (A) is preferably 4.0 or higher, more preferably 4.5 or higher, even more preferably 5.0 or higher, and preferably 6.9 or lower, more preferably 6.6 or lower, and even more preferably 6.4 or lower. When the pH of the above liquid (A) is equal to or higher than the above lower limit and equal to or lower than the above upper limit, the release of exosomes from platelets can be more effectively suppressed.
上記方法（２）において、上記血小板を含む血漿のｐＨは、好ましくは４．０以上、より好ましくは４．５以上、更に好ましくは５．０以上、好ましくは６．９以下、より好ましくは６．６以下、更に好ましくは６．４以下である。上記血小板を含む血漿のｐＨが上記下限以上及び上記上限以下であると、血小板からのエクソソームの放出をより一層効果的に抑制することができる。In the above method (2), the pH of the platelet-containing plasma is preferably 4.0 or higher, more preferably 4.5 or higher, even more preferably 5.0 or higher, and preferably 6.9 or lower, more preferably 6.6 or lower, and even more preferably 6.4 or lower. When the pH of the platelet-containing plasma is equal to or higher than the above lower limit and equal to or lower than the above upper limit, the release of exosomes from platelets can be more effectively suppressed.
上記液（Ａ）のｐＨ及び上記血小板を含む血漿のｐＨは、ｐＨ計を用いて、２２℃にて測定される。The pH of the liquid (A) and the platelet-containing plasma are measured at 22°C using a pH meter.
以下、実施例を挙げて本発明をさらに詳しく説明する。本発明は以下の実施例のみに限定されない。The present invention will be described in more detail below with reference to examples. The present invention is not limited to the following examples.
血漿分離用組成物の材料として、以下を用意した。The following materials were prepared for the plasma separation composition:
（２５℃で流動性を有する有機成分の材料）
（メタ）アクリル系樹脂：
アクリル酸－２－エチルヘキシルとアクリル酸ブチルとをアゾ系重合開始剤の存在下で溶液重合法によりラジカル重合させ、２５℃で流動性を有する（メタ）アクリル酸エステル系重合体を得た。 (Materials of organic components having fluidity at 25° C.)
(Meth)acrylic resin:
2-Ethylhexyl acrylate and butyl acrylate were radically polymerized by solution polymerization in the presence of an azo polymerization initiator to obtain a (meth)acrylic acid ester polymer having fluidity at 25°C.
（無機微粉末）
親水性シリカ（微粉末シリカ、日本アエロジル社製「２００ＣＦ」） (Inorganic fine powder)
Hydrophilic silica (fine silica powder, "200CF" manufactured by Nippon Aerosil Co., Ltd.)
（その他の成分）
シリコーンオイル（東レダウコーニング社製「ＳＦ８４１０」）
有機ゲル化剤（新日本理化社製「ゲルオールＤ」）
１－メチル－２－ピロリドン（補助溶媒） (Other ingredients)
Silicone oil (Toray Dow Corning "SF8410")
Organic gelling agent ("Gelall D" manufactured by New Japan Chemical Co., Ltd.)
1-Methyl-2-pyrrolidone (auxiliary solvent)
血漿分離用組成物Ａの作製：
表１に記載の配合割合で、２５℃で流動性を有する有機成分と無機微粉末とその他の成分とを混合し、血漿分離用組成物Ａを作製した。 Preparation of plasma separation composition A:
An organic component having fluidity at 25° C., inorganic fine powder, and other components were mixed in the blending ratios shown in Table 1 to prepare a composition A for plasma separation.
得られた血漿分離用組成物１滴を、比重を０．００２の間隔で段階的に調整した２５℃の食塩水中に順次滴下し、食塩水中における浮沈により比重を測定した。得られた血漿分離用組成物の２５℃での比重は表２～５に示した。A drop of each of the obtained plasma separation compositions was dropped into saline at 25°C, the specific gravity of which had been adjusted stepwise at intervals of 0.002, and the specific gravity was measured by floating or sinking in the saline. The specific gravities of the obtained plasma separation compositions at 25°C are shown in Tables 2 to 5.
水溶液の材料として、以下を用意した。また、顆粒状のエチレンジアミン四酢酸二ナトリウム（ＥＤＴＡ２Ｎａ）二水和物（抗凝固剤）も用意した。The following materials were prepared for the aqueous solution. Granular disodium ethylenediaminetetraacetate (EDTA2Na) dihydrate (anticoagulant) was also prepared.
（抗凝固剤）
クエン酸三ナトリウム二水和物 (Anticoagulant)
Trisodium Citrate Dihydrate
クエン酸一水和物
コハク酸
スクロース
塩化ナトリウム
水 Citric acid monohydrate Succinic acid Sucrose Sodium chloride Water
血液採取容器本体として、以下を用意した。The following items were prepared as the blood collection container body:
長さ（開口端と閉口端との距離）が１００ｍｍであり、開口端の内径が１４ｍｍであるＰＥＴ有底管（ポリエチレンテレフタレート管）A PET bottomed tube (polyethylene terephthalate tube) with a length (distance between the open end and closed end) of 100 mm and an inner diameter of the open end of 14 mm.
（実施例１）
表２に示す成分を水（注射用水）に溶解して水溶液を得た。得られた水溶液中の成分の種類及び濃度を表２に示す。 Example 1
The components shown in Table 2 were dissolved in water (water for injection) to obtain aqueous solutions. The types and concentrations of the components in the obtained aqueous solutions are shown in Table 2.
１．２ｇの血漿分離用組成物Ａを、血液採取容器本体の底部に収容した。また、得られた水溶液１．０ｍＬを血漿分離用組成物Ａの表面上に添加した。血液採取容器内部を、血液採取量が８．５ｍＬとなるように減圧し、ブチルゴム栓により密封した。このようにして血液採取容器を作製した。1.2 g of plasma separation composition A was placed in the bottom of the blood collection container body. 1.0 mL of the resulting aqueous solution was added onto the surface of plasma separation composition A. The pressure inside the blood collection container was reduced so that the amount of blood collected was 8.5 mL, and the container was sealed with a butyl rubber stopper. In this manner, the blood collection container was prepared.
（実施例２～５，８～１０及び比較例２，３）
水溶液の組成を表２～５のように変更したこと以外は、実施例１と同様にして、血液採取容器を作製した。 (Examples 2 to 5, 8 to 10 and Comparative Examples 2 and 3)
A blood collection container was produced in the same manner as in Example 1, except that the composition of the aqueous solution was changed as shown in Tables 2 to 5.
（実施例６，７）
水溶液の組成を表３のように変更した。血液採取容器内部を血液採取量が５．０ｍＬ（実施例６）又は９．５ｍＬ（実施例７）となるように減圧し、ブチルゴム栓により密封した。これら以外は、実施例１と同様にして、血液採取容器を作製した。 (Examples 6 and 7)
The composition of the aqueous solution was changed as shown in Table 3. The inside of the blood collection container was depressurized so that the amount of blood collected was 5.0 mL (Example 6) or 9.5 mL (Example 7), and the container was sealed with a butyl rubber stopper. Except for these, the blood collection container was prepared in the same manner as in Example 1.
（比較例１）
顆粒状のエチレンジアミン四酢酸二ナトリウム（ＥＤＴＡ２Ｎａ）二水和物（抗凝固剤）１０ｍｇを血液採取容器本体の底部に収容した。血液採取容器内部を血液採取量が５．０ｍＬとなるように減圧し、ブチルゴム栓により密封した。このようにして血液採取容器を作製した。 (Comparative Example 1)
10 mg of granular disodium ethylenediaminetetraacetate (EDTA2Na) dihydrate (anticoagulant) was placed in the bottom of the blood collection container body. The inside of the blood collection container was depressurized so that the blood collection volume was 5.0 mL, and the container was sealed with a butyl rubber stopper. In this way, the blood collection container was prepared.
（評価）
（１）水溶液のｐＨ
得られた水溶液のｐＨを、ｐＨ計（ＨＯＲＩＢＡ社製「Ｆ－５２Ｓ」）を用いて、２２℃にて測定した。 (evaluation)
(1) pH of the aqueous solution
The pH of the resulting aqueous solution was measured at 22° C. using a pH meter ("F-52S" manufactured by HORIBA).
（２）混合液（Ｘ）のｐＨ
８ｇの塩化ナトリウムと、０．２ｇの塩化カリウムと、１．４４ｇのリン酸水素二ナトリウムと、０．２４ｇのリン酸二水素カリウムと、９００ｍＬの水とを混合し、塩酸（ｐＨ調整剤）にてｐＨを調整し、次いで、水にて１Ｌにメスアップすることにより、ｐＨが７．４の液を得た。なお、ｐＨが７．４の液のｐＨは、ｐＨ計（ＨＯＲＩＢＡ社製「Ｆ－５２Ｓ」）を用いて、２２℃にて測定することにより確認した。得られた血液採取容器にｐＨが７．４の液を採取した。なお、実施例１～５，８～１０及び比較例２，３では、血液採取容器にｐＨが７．４の液を８．５ｍＬ採取し、実施例６では、血液採取容器にｐＨが７．４の液を５．０ｍＬ採取し、実施例７では、血液採取容器にｐＨが７．４の液を９．５ｍＬ採取した。次いで、転倒混和して、ｐＨが７．４の液と水溶液とを混合し、混合液（Ｘ）を得た。なお、比較例１では、血液採取容器にｐＨが７．４の液を５．０ｍＬ採取した後、転倒混和して、ｐＨが７．４の液に顆粒状の抗凝固剤を溶解させた液を混合液（Ｘ）とした。得られた混合液（Ｘ）のｐＨを、ｐＨ計（ＨＯＲＩＢＡ社製「Ｆ－５２Ｓ」）を用いて、２２℃にて測定した。 (2) pH of mixed solution (X)
8 g of sodium chloride, 0.2 g of potassium chloride, 1.44 g of disodium hydrogen phosphate, 0.24 g of potassium dihydrogen phosphate, and 900 mL of water were mixed, the pH was adjusted with hydrochloric acid (pH adjuster), and then water was added to make up to 1 L, to obtain a solution with a pH of 7.4. The pH of the solution with a pH of 7.4 was confirmed by measuring at 22°C using a pH meter ("F-52S" manufactured by HORIBA). The solution with a pH of 7.4 was collected in the obtained blood collection container. In Examples 1 to 5, 8 to 10 and Comparative Examples 2 and 3, 8.5 mL of the solution with a pH of 7.4 was collected in the blood collection container, 5.0 mL of the solution with a pH of 7.4 was collected in the blood collection container in Example 6, and 9.5 mL of the solution with a pH of 7.4 was collected in the blood collection container in Example 7. Next, the liquid with a pH of 7.4 and the aqueous solution were mixed by inversion to obtain a mixed liquid (X). In Comparative Example 1, 5.0 mL of the liquid with a pH of 7.4 was collected in a blood collection container, and then the liquid was inverted to dissolve a granular anticoagulant in the liquid with a pH of 7.4 to obtain a mixed liquid (X). The pH of the obtained mixed liquid (X) was measured at 22° C. using a pH meter (HORIBA "F-52S").
（３）血液評価
２名の採血者から得られた血液採取容器に血液を採取した。なお、実施例１～５，８～１０及び比較例２，３では、血液採取容器に血液を８．５ｍＬ採取し、実施例６では、血液採取容器に血液を５．０ｍＬ採取し、実施例７では、血液採取容器に血液を９．５ｍＬ採取した。血液を採取した後、転倒混和して、血液と血液採取容器内に収容された水溶液とを混合した。また、比較例１では、血液採取容器に血液を５．０ｍＬ採取した後、転倒混和して、血液に顆粒状の抗凝固剤を溶解させた。 (3) Blood Evaluation Blood was collected from two blood donors in blood collection containers. In Examples 1 to 5, 8 to 10 and Comparative Examples 2 and 3, 8.5 mL of blood was collected in the blood collection container, in Example 6, 5.0 mL of blood was collected in the blood collection container, and in Example 7, 9.5 mL of blood was collected in the blood collection container. After collecting the blood, the blood was mixed by inversion to mix with the aqueous solution contained in the blood collection container. In Comparative Example 1, 5.0 mL of blood was collected in the blood collection container, and then the blood was mixed by inversion to dissolve the granular anticoagulant in the blood.
比較例１以外の実施例及び比較例では、血液と上記水溶液とを混合後、以下の（ｉ）及び（ｉｉ）を行った。In the examples and comparative examples other than Comparative Example 1, the blood and the above aqueous solution were mixed, and then the following (i) and (ii) were carried out.
（ｉ）血液採取容器を、２０℃にて、１９００Ｇで１５分間遠心分離した。遠心分離後、血漿分離用組成物により形成された隔壁よりも上方に血漿が位置していた。また、得られた血漿の一部を回収した。回収した血漿を別の容器に移し、該容器を、４℃にて、１６０００Ｇで１０分間遠心分離した。遠心分離後、該容器から、上澄みの血漿を回収し、回収した血漿を「血漿（Ａ）」とした。(i) The blood collection container was centrifuged at 1900G for 15 minutes at 20°C. After centrifugation, the plasma was located above the partition formed by the plasma separation composition. A portion of the resulting plasma was collected. The collected plasma was transferred to another container, and the container was centrifuged at 16000G for 10 minutes at 4°C. After centrifugation, the supernatant plasma was collected from the container, and the collected plasma was designated "plasma (A)".
（ｉｉ）上記（ｉ）で血漿の一部を採取した後の上記血液採取容器（血漿分離用組成物により形成された隔壁よりも上方に血漿が位置している血液採取容器）を４℃で３日間保管した。保管後の血液採取容器から血漿を回収した。回収した血漿を別の容器に移し、該容器を、４℃にて、１６０００Ｇで１０分間遠心分離した。遠心分離後、該容器から、上澄みの血漿を回収し、回収した血漿を「血漿（Ｂ）」とした。(ii) After collecting a portion of the plasma in (i) above, the blood collection container (the blood collection container in which the plasma is located above the partition formed by the plasma separation composition) was stored at 4°C for 3 days. Plasma was collected from the blood collection container after storage. The collected plasma was transferred to another container, and the container was centrifuged at 16,000G for 10 minutes at 4°C. After centrifugation, the supernatant plasma was collected from the container, and the collected plasma was designated "plasma (B)".
比較例１では、血液に顆粒状の抗凝固剤を溶解させた後、以下の（ａ）及び（ｂ）をそれぞれ行った。In Comparative Example 1, after dissolving a granular anticoagulant in blood, the following steps (a) and (b) were carried out.
（ａ）：血液採取容器を、２０℃にて、１９００Ｇで１５分間遠心分離し、血球層と血漿層とに分離した。血漿層から血漿を回収し、回収した血漿を別の容器に移し、該容器を、４℃にて、１６０００Ｇで１０分間遠心分離した。遠心分離後、該容器から、上澄みの血漿を回収し、回収した血漿を「血漿（Ａ）」とした。(a): The blood collection container was centrifuged at 1,900 G for 15 minutes at 20°C to separate the blood cell layer and plasma layer. Plasma was collected from the plasma layer and transferred to another container, which was then centrifuged at 16,000 G for 10 minutes at 4°C. After centrifugation, the supernatant plasma was collected from the container, and the collected plasma was designated "plasma (A)."
（ｂ）：上記血液採取容器を４℃で３日間保管した。保管後の血液採取容器を、２０℃にて、１９００Ｇで１５分間遠心分離し、血球層と血漿層とに分離した。血漿層から血漿を回収し、回収した血漿を別の容器に移し、該容器を、４℃にて、１６０００Ｇで１０分間遠心分離した。遠心分離後、該容器から、上澄みの血漿を回収し、回収した血漿を「血漿（Ｂ）」とした。(b): The blood collection container was stored at 4°C for 3 days. After storage, the blood collection container was centrifuged at 1,900G for 15 minutes at 20°C to separate into a blood cell layer and a plasma layer. The plasma was collected from the plasma layer and transferred to another container, which was then centrifuged at 16,000G for 10 minutes at 4°C. After centrifugation, the supernatant plasma was collected from the container, and the collected plasma was designated "plasma (B)".
（３－１）血漿のｐＨ
血漿（Ａ）のｐＨを、ｐＨ計（ＨＯＲＩＢＡ社製「Ｆ－５２Ｓ」）を用いて、２２℃にて測定した。 (3-1) Plasma pH
The pH of the plasma (A) was measured at 22° C. using a pH meter (HORIBA "F-52S").
（３－２）血漿中への血小板由来のエクソソームの混入
（３－２－１）ＣＤ９陽性エクソソームの吸光度（波長４５０ｎｍ）
血漿（Ａ）及び血漿（Ｂ）をそれぞれ、０．２２μｍのフィルター（Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ社製「０．２２μｍ ＧＶ ＤＵＲＡＰＯＲＥ」）で遠心ろ過した。ろ液を、ＰＢＳ（－）で２０倍希釈した後、ＣＤ９－Ｃａｐｔｕｒｅ ヒトエクソソームＥＬＩＳＡキット（Ｗａｋｏ社製「ストレプトアビジンＨＲＰ」）を用いて、吸光度（波長４５０ｎｍ）を測定した。 (3-2) Contamination of plasma with platelet-derived exosomes (3-2-1) Absorbance of CD9-positive exosomes (wavelength 450 nm)
Plasma (A) and plasma (B) were each centrifuged through a 0.22 μm filter (Millipore's "0.22 μm GV DURAPORE"). The filtrate was diluted 20-fold with PBS(-), and then the absorbance (wavelength 450 nm) was measured using a CD9-Capture human exosome ELISA kit (Wako's "Streptavidin HRP").
また、下記式により、吸光度の増加率を求めた。吸光度の増加率が小さいほど、血小板からのエクソソームの放出が抑えられており、従って、血漿中への血小板由来のエクソソームの混入が抑えられていることを意味する。The rate of increase in absorbance was calculated using the following formula. The smaller the rate of increase in absorbance, the more suppressed the release of exosomes from platelets, and therefore the more suppressed the incorporation of platelet-derived exosomes into plasma.
吸光度の増加率（％）＝Ｂ／Ａ×１００
Ａ：血漿（Ａ）の吸光度
Ｂ：血漿（Ｂ）の吸光度 Increase rate of absorbance (%) = B/A x 100
A: Absorbance of plasma (A) B: Absorbance of plasma (B)
＜ＣＤ９陽性エクソソームの吸光度の判定基準＞
○：吸光度の増加率が３５０％以下
△：吸光度の増加率が３５０％を超え６００％以下
×：吸光度の増加率が６００％を超える <Criteria for determining absorbance of CD9-positive exosomes>
○: The increase in absorbance is 350% or less. △: The increase in absorbance is more than 350% and less than 600%. ×: The increase in absorbance is more than 600%.
（３－２－２）血漿におけるＥＶ－ｍｉＲＮＡ（ｍｉＲ－１２６－３ｐ）濃度の増加率 血漿（Ａ）及び血漿（Ｂ）のそれぞれについて、以下の試験を行った。精製キット（ｅｘｏＲＮｅａｓｙ Ｍｉｄｉ Ｋｉｔ、Ｑｉａｇｅｎ）を用いて、血漿０．５ｍＬから、Ｔｏｔａｌ ＥＶ－ＲＮＡを精製した。次いで、下記の試薬及び測定機器を用いて逆転写反応を行い、ｍｉＲ－１２６－３ｐのＰＣＲを行った。(3-2-2) Increase rate of EV-miRNA (miR-126-3p) concentration in plasma The following test was performed for each of plasma (A) and plasma (B). Total EV-RNA was purified from 0.5 mL of plasma using a purification kit (exoRNeasy Midi Kit, Qiagen). Next, a reverse transcription reaction was performed using the following reagents and measuring equipment, and PCR of miR-126-3p was performed.
逆転写反応の試薬：miRCURY LNA RT Kit (Qiagen)
ＰＣＲの試薬：miRCURY LNA SYBR Green PCR Kit (Qiagen)
プライマー：miRCURY LNA miRNA PCR Assay (Qiagen, 339306), プライマー#: YP00204227
測定機器：Ｃ1000 TouchTM Thermal Cycler、CFX96 Deep WellTM Real-Time System (BioRad) Reverse transcription reagent: miRCURY LNA RT Kit (Qiagen)
PCR reagent: miRCURY LNA SYBR Green PCR Kit (Qiagen)
Primer: miRCURY LNA miRNA PCR Assay (Qiagen, 339306), Primer#: YP00204227
Measuring equipment: C1000 TouchTM Thermal Cycler, CFX96 Deep WellTM Real-Time System (BioRad)
また、下記式により、血漿におけるＥＶ－ｍｉＲＮＡ（ｍｉＲ－１２６－３ｐ）濃度の増加率を求めた。ＥＶ－ｍｉＲＮＡ（ｍｉＲ－１２６－３ｐ）濃度の増加率が小さいほど、血小板からのエクソソームの放出が抑えられており、従って、血漿中への血小板由来のエクソソームの混入が抑えられていることを意味する。The rate of increase in EV-miRNA (miR-126-3p) concentration in plasma was calculated using the following formula. The smaller the rate of increase in EV-miRNA (miR-126-3p) concentration, the more suppressed the release of exosomes from platelets, and therefore the more suppressed the contamination of plasma with platelet-derived exosomes.
Ｒ３Ｐ＝２（－ΔＣＴ）
Ｒ３Ｐ：ＥＶ－ｍｉＲＮＡ（ｍｉＲ－１２６－３ｐ）濃度の増加率
ΔＣＴ：血漿（Ｂ）の平均ＣＴ－血漿（Ａ）の平均ＣＴ
平均ＣＴ：各サンプルをＮ＝２でＰＣＲを行ったときの各サンプルのＣＴの平均値 R3P = 2(-ΔCT)
R3P : Increase rate of EV-miRNA (miR-126-3p) concentration ΔCT: Mean CT of plasma (B) - Mean CT of plasma (A)
Average CT : The average CT value of each sample when PCR was performed on N=2 samples
＜血漿におけるＥＶ－ｍｉＲＮＡ（ｍｉＲ－１２６－３ｐ）濃度の増加率の判定基準＞
○：ＥＶ－ｍｉＲＮＡ（ｍｉＲ－１２６－３ｐ）濃度の増加率が３倍以下
△：ＥＶ－ｍｉＲＮＡ（ｍｉＲ－１２６－３ｐ）濃度の増加率が３倍を超え６倍以下
×：ＥＶ－ｍｉＲＮＡ（ｍｉＲ－１２６－３ｐ）濃度の増加率が６倍を超える <Criteria for determining the rate of increase in EV-miRNA (miR-126-3p) concentration in plasma>
○: The increase rate of EV-miRNA (miR-126-3p) concentration is 3 times or less. △: The increase rate of EV-miRNA (miR-126-3p) concentration is more than 3 times and 6 times or less. ×: The increase rate of EV-miRNA (miR-126-3p) concentration is more than 6 times.
（３－３）血漿中への赤血球由来のエクソソームの混入（血漿におけるＥＶ－ｍｉＲＮＡ（ｍｉＲ－４５１ａ）濃度の増加率）
血漿（Ａ）及び血漿（Ｂ）のそれぞれについて、以下の試験を行った。精製キット（ｅｘｏＲＮｅａｓｙ Ｍｉｄｉ Ｋｉｔ、Ｑｉａｇｅｎ）を用いて、血漿０．５ｍＬから、Ｔｏｔａｌ ＥＶ－ＲＮＡを精製した。次いで、下記の試薬及び測定機器を用いて逆転写反応を行い、ｍｉＲ－４５１ａのＰＣＲを行った。 (3-3) Contamination of plasma with exosomes derived from red blood cells (increase in EV-miRNA (miR-451a) concentration in plasma)
The following tests were carried out for each of plasma (A) and plasma (B). Total EV-RNA was purified from 0.5 mL of plasma using a purification kit (exoRNeasy Midi Kit, Qiagen). Next, reverse transcription was carried out using the following reagents and measuring equipment, and PCR of miR-451a was carried out.
逆転写反応の試薬：miRCURY LNA RT Kit (Qiagen)
ＰＣＲの試薬：miRCURY LNA SYBR Green PCR Kit (Qiagen)
プライマー：miRCURY LNA miRNA PCR Assay (Qiagen, 339306), プライマー#: YP02119305
測定機器：Ｃ1000 TouchTM Thermal Cycler、CFX96 Deep WellTM Real-Time System (BioRad) Reverse transcription reagent: miRCURY LNA RT Kit (Qiagen)
PCR reagent: miRCURY LNA SYBR Green PCR Kit (Qiagen)
Primer: miRCURY LNA miRNA PCR Assay (Qiagen, 339306), Primer#: YP02119305
Measuring equipment: C1000 TouchTM Thermal Cycler, CFX96 Deep WellTM Real-Time System (BioRad)
また、下記式により、血漿におけるＥＶ－ｍｉＲＮＡ（ｍｉＲ－４５１ａ）濃度の増加率を求めた。ＥＶ－ｍｉＲＮＡ（ｍｉＲ－４５１ａ）濃度の増加率が小さいほど、赤血球からのエクソソームの放出が抑えられており、従って、血漿中への赤血球由来のエクソソームの混入が抑えられていることを意味する。The rate of increase in EV-miRNA (miR-451a) concentration in plasma was calculated using the following formula. The smaller the rate of increase in EV-miRNA (miR-451a) concentration, the more suppressed the release of exosomes from red blood cells, and therefore the more suppressed the contamination of plasma with exosomes derived from red blood cells.
Ｒ４５１ａ＝２（－ΔＣＴ）
Ｒ４５１ａ：ＥＶ－ｍｉＲＮＡ（ｍｉＲ－４５１ａ）濃度の増加率
ΔＣＴ：血漿（Ｂ）の平均ＣＴ－血漿（Ａ）の平均ＣＴ
平均ＣＴ＝各サンプルをＮ＝２でＰＣＲを行ったときの各サンプルのＣＴの平均値 R451a = 2(-ΔCT)
R451a : Increase rate of EV-miRNA (miR-451a) concentration ΔCT: Mean CT of plasma (B) - Mean CT of plasma (A)
Mean CT = the average CT value for each sample when PCR was performed on N=2 samples
＜血漿におけるＥＶ－ｍｉＲＮＡ（ｍｉＲ－４５１ａ）濃度の増加率の判定基準＞
○：ＥＶ－ｍｉＲＮＡ（ｍｉＲ－４５１ａ）濃度の増加率が３倍以下
△：ＥＶ－ｍｉＲＮＡ（ｍｉＲ－４５１ａ）濃度の増加率が３倍を超え６倍以下
×：ＥＶ－ｍｉＲＮＡ（ｍｉＲ－４５１ａ）濃度の増加率が６倍を超える <Criteria for determining the rate of increase in EV-miRNA (miR-451a) concentration in plasma>
○: The increase rate of EV-miRNA (miR-451a) concentration is 3 times or less. △: The increase rate of EV-miRNA (miR-451a) concentration is more than 3 times and 6 times or less. ×: The increase rate of EV-miRNA (miR-451a) concentration is more than 6 times.
（３－４）血漿におけるＴｏｔａｌ ＥＶ－ｍｉＲＮＡ濃度
血漿（Ａ）及び血漿（Ｂ）のそれぞれについて、以下の試験を行った。精製キット（ｅｘｏＲＮｅａｓｙ Ｍｉｄｉ Ｋｉｔ、Ｑｉａｇｅｎ）を用いて、血漿０．５ｍＬから、Ｔｏｔａｌ ＥＶ－ＲＮＡを精製した。次いで、測定機器（Qubit microRNA Assay Kit (Thermo, Q32881)）を用いて、Ｔｏｔａｌ ＥＶ－ｍｉＲＮＡ濃度を測定した。 (3-4) Total EV-miRNA concentration in plasma The following test was performed for each of plasma (A) and plasma (B). Total EV-RNA was purified from 0.5 mL of plasma using a purification kit (exoRNeasy Midi Kit, Qiagen). The total EV-miRNA concentration was then measured using a measuring device (Qubit microRNA Assay Kit (Thermo, Q32881)).
また、下記式により、血漿におけるＴｏｔａｌ ＥＶ－ｍｉＲＮＡ濃度の増加率を求めた。The increase rate of total EV-miRNA concentration in plasma was calculated using the following formula:
Ｔｏｔａｌ ＥＶ－ｍｉＲＮＡ濃度の増加率（％）＝Ｂ／Ａ×１００
Ａ：血漿（Ａ）におけるＴｏｔａｌ ＥＶ－ｍｉＲＮＡ濃度（ｎｇ／血漿１ｍＬ）
Ｂ：血漿（Ｂ）におけるＴｏｔａｌ ＥＶ－ｍｉＲＮＡ濃度（ｎｇ／血漿１ｍＬ） Increase rate of total EV-miRNA concentration (%) = B/A x 100
A: Total EV-miRNA concentration in plasma (A) (ng/mL of plasma)
B: Total EV-miRNA concentration in plasma (B) (ng/mL of plasma)
＜血漿におけるＴｏｔａｌ ＥＶ－ｍｉＲＮＡ濃度の判定基準＞
○：Ｔｏｔａｌ ＥＶ－ｍｉＲＮＡ濃度の増加率が１５０％以下
△：Ｔｏｔａｌ ＥＶ－ｍｉＲＮＡ濃度の増加率が１５０％を超え２００％以下
×：Ｔｏｔａｌ ＥＶ－ｍｉＲＮＡ濃度の増加率が２００％を超える <Criteria for determining total EV-miRNA concentration in plasma>
○: The increase rate of total EV-miRNA concentration is 150% or less. △: The increase rate of total EV-miRNA concentration is more than 150% and less than 200%. ×: The increase rate of total EV-miRNA concentration is more than 200%.
構成及び結果を下記の表２～５に示す。なお、表中、水溶液における抗凝固剤の濃度及び有機酸の濃度は、無水物状態での濃度である。The compositions and results are shown in Tables 2 to 5 below. Note that the concentrations of the anticoagulant and organic acid in the aqueous solution in the tables are the concentrations in an anhydrous state.
１…血液採取容器
２…血液採取容器本体
２ａ…開口端
２ｂ…閉口端
３…血漿分離用組成物
４…水溶液
５…栓体 1...
Claims (16)
Translated fromJapanese血液採取容器本体と、
前記血液採取容器本体内に収容された血漿分離材と、
前記血液採取容器本体内に収容された水溶液とを備え、
前記水溶液が、抗凝固剤を含み、
前記水溶液のｐＨが、３．０以上５．５以下であり、
下記のｐＨの測定をしたときに、混合液（Ｘ）のｐＨが３．５以上５．５以下である、血液採取容器。
ｐＨの測定：８ｇ／Ｌの塩化ナトリウムと、０．２ｇ／Ｌの塩化カリウムと、１．４４ｇ／Ｌのリン酸水素二ナトリウムと、０．２４ｇ／Ｌのリン酸二水素カリウムと、水とを含むｐＨが７．４の液を得る。血液採取容器に採取される血液の所定量と等量の前記ｐＨが７．４の液を血液採取容器内に採取して、前記ｐＨが７．４の液と前記水溶液とが混合された混合液（Ｘ）を得る。得られた混合液（Ｘ）のｐＨを測定する。 a blood collection container into which a predetermined amount of blood is collected;
A blood collection container body;
A plasma separation material contained in the blood collection container body;
an aqueous solution contained in the blood collection container body;
the aqueous solution comprises an anticoagulant;
The pH of the aqueous solution is 3.0 or more and 5.5 or less,
A blood collection container in which the pH of the mixed solution (X) is 3.5 or more and 5.5 or less when the pH is measured as described below.
Measurement of pH: A solution having a pH of 7.4 is obtained, which contains 8 g/L sodium chloride, 0.2 g/L potassium chloride, 1.44 g/L disodium hydrogen phosphate, 0.24 g/L potassium dihydrogen phosphate, and water. The solution having a pH of 7.4 is collected in a blood collection container in an amount equal to a predetermined amount of blood to be collected in the blood collection container, and a mixed solution (X) is obtained in which the solution having a pH of 7.4 and the aqueous solution are mixed. The pH of the resulting mixed solution (X) is measured.
前記二糖類が、スクロースを含む、請求項１～６のいずれか１項に記載の血液採取容器。 the aqueous solution comprises a disaccharide,
The blood collection container of any one of claims 1 to 6, wherein the disaccharide comprises sucrose.
前記有機成分が、樹脂を含み、
前記無機微粉末が、微粉末シリカを含む、請求項１２に記載の血液採取容器。 The plasma separation composition comprises an organic component having fluidity at 25° C. and an inorganic fine powder,
the organic component comprises a resin;
13. The blood collection container of claim 12, wherein the fine inorganic powder comprises finely divided silica.
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|---|---|---|---|---|
| JP2002350429A (en)* | 2002-02-07 | 2002-12-04 | Ikagaku:Kk | Method for increasing plasma separation efficiency of plasma separation membrane |
| WO2010053180A1 (en)* | 2008-11-07 | 2010-05-14 | 日立化成工業株式会社 | Blood serum or blood plasma separating material and blood-collecting tube using same |
| WO2010132783A1 (en)* | 2009-05-15 | 2010-11-18 | Becton, Dickinson And Company | Density phase separation device |
| WO2022250142A1 (en)* | 2021-05-28 | 2022-12-01 | 積水メディカル株式会社 | Blood collection container, method for separating plasma, method for separating extracellular free nucleic acid, and method for separating extracellular vesicle |
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Patent Citations (5)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JP2002350429A (en)* | 2002-02-07 | 2002-12-04 | Ikagaku:Kk | Method for increasing plasma separation efficiency of plasma separation membrane |
| WO2010053180A1 (en)* | 2008-11-07 | 2010-05-14 | 日立化成工業株式会社 | Blood serum or blood plasma separating material and blood-collecting tube using same |
| WO2010132783A1 (en)* | 2009-05-15 | 2010-11-18 | Becton, Dickinson And Company | Density phase separation device |
| WO2022250142A1 (en)* | 2021-05-28 | 2022-12-01 | 積水メディカル株式会社 | Blood collection container, method for separating plasma, method for separating extracellular free nucleic acid, and method for separating extracellular vesicle |
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