JP7525638B2 - Compositions and methods for the oral treatment of leukemia - Google Patents

Description

Translated fromJapanese

本発明は、白血病などの血液の癌（血液癌）を処置するための、特に小児においてそのような処置を行うための、経口治療用レジメンに関する。The present invention relates to an oral therapeutic regimen for treating blood cancers (hematological cancers), such as leukemia, particularly in children.

成人は、血液１マイクロリットル（μＬ）あたり約７０００個の白血球を有する。それらの白血球のうち、約６５パーセントが顆粒球であり（約４５００個／μＬ）、約３０パーセントが単球であり（約２１００個／μＬ）、約５パーセントがリンパ球である（約３５０個／μＬ）。Ｇｅｙｔｏｎ，Ｔｅｘｔｂｏｏｋ ｏｆ Ｍｅｄｉｃａｌ Ｐｈｙｓｉｏｌｏｇｙ，Ｓｅｖｅｎｔｈ ｅｄ．，Ｗ．Ｂ．Ｓａｕｎｄｅｒｓ Ｃｏ．，Ｐｈｉｌａｄｅｌｐｈｉａ（１９８６）。当然のことながら、上記の細胞数量は一般化された平均値であり、正常な患者、すなわち疾患のない患者の顆粒球数は、通常約２０００～約７０００個／μＬである。An adult has about 7,000 white blood cells per microliter (μL) of blood. Of these, about 65 percent are granulocytes (about 4,500/μL), about 30 percent are monocytes (about 2,100/μL), and about 5 percent are lymphocytes (about 350/μL). Geyton, Textbook of Medical Physiology, Seventh ed., W. B. Saunders Co., Philadelphia (1986). Of course, the above cell counts are generalized averages, and normal, i.e., disease-free, patients usually have granulocyte counts of about 2,000 to about 7,000 cells/μL.

急性リンパ芽球性白血病（ＡＬＬ）は骨髄で始まるリンパ系の血液細胞の癌であり、大量の未熟なリンパ球（リンパ芽球）が発生することを特徴とする。この疾患には基本的なタイプが２つある。１つがＢ細胞を冒すもの（Ｂ－ＡＬＬ）であり、もう１つがＴ細胞を冒すもの（Ｔ－ＡＬＬ）である。急性白血病として、ＡＬＬは、急速に進行し、処置せずにいると、通常、数週間から数ヶ月以内に死に至る。Acute lymphoblastic leukemia (ALL) is a cancer of the blood cells of the lymphatic system that begins in the bone marrow and is characterized by the development of large numbers of immature lymphocytes (lymphoblasts). There are two basic types of the disease: one that affects B cells (B-ALL) and one that affects T cells (T-ALL). As an acute leukemia, ALL progresses rapidly and, if left untreated, is usually fatal within weeks to months.

ＡＬＬは、小児と成人の両方において発生し、最も高い割合が３歳～７歳に見られる。症例の約７５パーセントが６歳までに発生し、４０歳を超えると第２の増加が見られる。２００１～２０１４年の米国における小児ＡＬＬの全発生率は、すべての人種／民族の群間で１００万人あたり３４．０例であった。ALL occurs in both children and adults, with the highest rates seen in those aged 3 to 7 years. Approximately 75 percent of cases occur by age 6, with a second increase seen after age 40. From 2001 to 2014, the overall incidence of childhood ALL in the United States was 34.0 cases per million across all racial/ethnic groups.

ＡＬＬは通常、はじめに、緩解をもたらすことを目的とした化学療法で処置される。その後、通常３年間にわたってさらなる化学療法が続く。全身化学療法は、中枢神経系への浸透が限定的であり得、中枢神経系はＡＬＬの再発が好発する部位であるので、通常、処置には髄腔内化学療法（脊髄注射）も含まれる。ALL is usually initially treated with chemotherapy aimed at bringing about remission. This is then usually followed by further chemotherapy over a period of three years. Because systemic chemotherapy may have limited penetration into the central nervous system, which is a common site of relapse in ALL, treatment usually also includes intrathecal chemotherapy (spinal injections).

慢性リンパ性白血病（ＣＬＬ）は、骨髄がリンパ球、特にＢ細胞を過剰に作る癌の一種である。ＣＬＬは一般に不治と考えられているが、ほとんどの場合ゆっくり進行する。そのため、ＣＬＬの処置は、完全な治癒ではなく、その疾患及びその症状をコントロールすることに重点を置く。その人の症状又は血球数から、生活の質に影響を及ぼす可能性があるところまで当該疾患が進行していると示される場合に、ＣＬＬ処置を開始する決断が下される。Chronic lymphocytic leukemia (CLL) is a type of cancer in which the bone marrow makes too many lymphocytes, especially B cells. CLL is generally considered incurable, but in most cases it progresses slowly. Therefore, treatment for CLL focuses on controlling the disease and its symptoms, rather than a complete cure. The decision to begin CLL treatment is made when a person's symptoms or blood counts indicate that the disease has progressed to a point where it may affect quality of life.

ＣＬＬは、主に高齢者の疾患であり、５０歳を超える人において最もよく発生し、診断時の年齢の中央値は７０歳である。ＣＬＬは、あまり一般的ではないが３０～３９歳の人でも発症することがある。ＣＬＬの発生率は、年齢が上がるにつれて急上昇する。診断後の５年生存率は、米国ではおよそ８３％である。CLL is primarily a disease of older adults, occurring most commonly in people over the age of 50, with a median age at diagnosis of 70 years. CLL can occur less commonly in people aged 30-39 years. The incidence of CLL increases sharply with age. The 5-year survival rate after diagnosis is approximately 83% in the United States.

急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）は、造血幹細胞の障害として骨髄で始まり、成人の白血病の中で最も一般的な形態である。急性骨髄性白血病は、小児と成人の両方で発生する。処置しなければ新しい白血球が作られ続けるので、ＡＭＬは体内で急速に進行し得る。Acute myeloid leukemia (AML) begins in the bone marrow as a disorder of hematopoietic stem cells and is the most common form of leukemia in adults. Acute myeloid leukemia occurs in both children and adults. If left untreated, AML can progress rapidly in the body as new white blood cells continue to be made.

慢性骨髄性白血病（ＣＭＬ）は、慢性顆粒球性白血病（ＣＧＬ）としても知られ、同じく骨髄で始まるが、ＡＭＬより進行が急速でない。ＣＭＬは、初期において、白血球増加、末梢血中に多数の未熟な顆粒球が存在すること、脾腫及び貧血を特徴とする。これらの未熟な顆粒球には、好塩基球、好酸球及び好中球が含まれる。また、未熟な顆粒球は、骨髄、脾臓、肝臓に蓄積し、他の組織に蓄積するときもある。この疾患を呈している患者は、１マイクロリットル（μＬ）あたり７５，０００個を超える白血球を有することが特徴的であり、その数は、５００，０００個／μＬを超えることもある。Chronic myelogenous leukemia (CML), also known as chronic granulocytic leukemia (CGL), also begins in the bone marrow but progresses less aggressively than AML. CML is characterized early on by leukocytosis, the presence of large numbers of immature granulocytes in the peripheral blood, splenomegaly, and anemia. These immature granulocytes include basophils, eosinophils, and neutrophils. Immature granulocytes also accumulate in the bone marrow, spleen, liver, and occasionally other tissues. Patients with this disease are characterized by having more than 75,000 white blood cells per microliter (μL), and may exceed 500,000/μL.

ＣＭＬは、米国における全白血病の約２０パーセントを占める。毎年１００万人あたり約１５例の新規症例が報告されており、１年あたり約３，０００～４，０００例の新規症例が発生していることになる。この疾患は、４５歳未満のヒトでは稀であるが、発生率は、６５歳まで急速に上昇し、その後も上昇したままである。慢性骨髄性白血病患者の診断時からの寿命の中央値は、およそ４年である。CML accounts for approximately 20 percent of all leukemias in the United States. Approximately 15 new cases per million people are reported each year, translating to approximately 3,000-4,000 new cases per year. The disease is rare in people under 45 years of age, but incidence rates increase rapidly up to age 65 and remain elevated thereafter. The median life expectancy of patients with chronic myeloid leukemia from time of diagnosis is approximately 4 years.

ＣＭＬ患者の約６０～８０パーセントは、急性転化を起こす。急性転化は、急性白血病の所見の１つである。芽細胞上に存在するある特定のマーカーによって、急性転化の際にこれらの細胞のリンパ系起源が示唆されることがある。Approximately 60-80 percent of patients with CML will develop blast crisis, a finding that is characteristic of acute leukemia. Certain markers present on blast cells may suggest the lymphoid origin of these cells during blast crisis.

急性転化を処置するために使用される化学療法剤は、他の急性白血病の処置に使用されるものと同じである。例えば、急性骨髄球性白血病の処置に用いられるシタラビン及びダウノルビシンが、ＣＭＬの急性転化を処置するために使用される。急性リンパ性白血病の処置において用いられる治療レジメンであるプレドニゾン及びビンクリスチンも、ＣＭＬの急性転化を処置するために使用される。それにもかかわらず、急性転化段階のＣＭＬのこれらの薬物療法は、他の急性白血病の処置よりもさらに成功しない。The chemotherapy agents used to treat blast crisis are the same as those used to treat other acute leukemias. For example, cytarabine and daunorubicin, which are used to treat acute myeloid leukemia, are used to treat blast crisis in CML. Prednisone and vincristine, a therapeutic regimen used in the treatment of acute lymphocytic leukemia, are also used to treat blast crisis in CML. Nevertheless, these drug therapies for blast crisis-stage CML are less successful than the treatment of other acute leukemias.

小児における癌は、稀であり、１年あたり１００万人（１５歳未満）あたり１４０～１５５人という発生率である。これは、毎年７，０００人に約１人の小児が癌と診断されていることになる。癌は、稀なことであるにもかかわらず、５～１４歳の小児の死因では事故に次いで悪性新生物が最も多く、死亡数の２３％を占める。化学療法が行われるようになる前の時代では多くが致命的であった小児癌からの生存率は、１９６０年代の２０～３０パーセントから１９７０年代には６２パーセント、最近では８３パーセントへと劇的に向上した。Ｓａｌｅｔｔａ ｅｔ ａｌ．，Ｔｒａｎｓｌ Ｐｅｄｉａｔｒ ３（２）：１５６－１８２（２０１４）。Cancer in children is rare, with an incidence of 140-155 cases per million (<15 years of age) per year. This translates into approximately 1 in every 7,000 children diagnosed with cancer each year. Despite its rarity, cancer is the second most common cause of death in children aged 5-14 years, after accidents, due to malignant neoplasms, accounting for 23% of deaths. Survival rates from childhood cancer, which was largely fatal in the pre-chemotherapy era, have improved dramatically, from 20-30% in the 1960s to 62% in the 1970s and 83% in recent years. Saletta et al., Transl Pediatr 3(2):156-182 (2014).

白血病は、最も一般的な小児癌であり、すべての小児（１～１４歳）癌の診断の約３０％を占める。急性リンパ芽球性白血病（ＡＬＬ）が、小児癌の約２５パーセントを占め、急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）が、残りの約５パーセントを占める。Ｓａｌｅｔｔａ ｅｔ ａｌ．，Ｔｒａｎｓｌ Ｐｅｄｉａｔｒ ３（２）：１５６－１８２（２０１４）Leukemia is the most common childhood cancer, accounting for approximately 30% of all childhood (ages 1-14) cancer diagnoses. Acute lymphoblastic leukemia (ALL) accounts for approximately 25% of childhood cancers, and acute myeloid leukemia (AML) accounts for the remaining 5%. Saletta et al., Transl Pediatr 3(2):156-182(2014)

ＡＬＬの現行の処置としては、ペグ化アスパラギナーゼ、リポソームダウノルビシン、リポソームアンナマイシン（ｌｉｐｏｓｏｍａｌ ａｎｎａｍｙｃｉｎ）、スフィンゴソームビンクリスチン及びリポソームシタラビンが挙げられる。ＡＭＬの場合、現行の処置としては、オールトランス－レチノイン酸（ＡＴＲＡ）の使用、三酸化ヒ素の使用、アントラサイクリンとＡＴＲＡとの併用、及びイダルビシンと高用量シタラビンとの併用が挙げられる。ソラフェニブ（マルチキナーゼ阻害剤）とクロファラビン及びシタラビンとの併用は、第Ｉ相試験で成功しており［Ｉｎａｂａ ｅｔ ａｌ，Ｊ Ｃｌｉｎ Ｏｎｃｏｌ ２９：３２９３－３３００（２０１１）］、Ｍｙｌｏｔａｒｇ（登録商標）として商業的に知られている、カリケアマイシン結合体化ＣＤ３３抗体であるゲムツズマブオゾガミシンが有望であると示された［Ｚｗａａｎ ｅｔ ａｌ．，Ｂｒ Ｊ Ｈａｅｍａｔｏｌ １４８：７６８－７７６（２０１０）］。Current treatments for ALL include pegylated asparaginase, liposomal daunorubicin, liposomal annamycin, sphingosomal vincristine, and liposomal cytarabine. For AML, current treatments include the use of all-trans-retinoic acid (ATRA), arsenic trioxide, anthracyclines in combination with ATRA, and idarubicin in combination with high-dose cytarabine. Sorafenib (a multikinase inhibitor) in combination with clofarabine and cytarabine has been successful in Phase I trials [Inaba et al, J Clin Oncol 29:3293-3300 (2011)], and gemtuzumab ozogamicin, a calicheamicin-conjugated CD33 antibody commercially known as Mylotarg®, has shown promise [Zwaan et al., Br J Haematol 148:768-776 (2010)].

小児白血病の生存率は、大幅に改善されたが、再発が、治療失敗の大きな原因となっている。小児ＡＬＬ患者のおよそ１５～２０パーセント及びＡＭＬ患者の３０～４０パーセントが再発し、再発ＡＬＬは、小児で４番目に多い悪性腫瘍と特定されている。Although survival rates for childhood leukemia have improved significantly, relapse remains a major cause of treatment failure. Approximately 15-20 percent of childhood ALL patients and 30-40 percent of AML patients will relapse, and recurrent ALL has been identified as the fourth most common malignancy in children.

再発した小児白血病の処置としては、化学療法レジメンの強化及び骨髄移植（ＢＭＴ）の使用が挙げられる。しかしながら、併用化学療法の強度を高め、第二選択薬を導入することは、累積毒性を伴うことが多く、恩恵の増加はほんのわずかである。Treatment of relapsed childhood leukemia includes intensification of chemotherapy regimens and the use of bone marrow transplantation (BMT). However, increasing the intensity of combination chemotherapy and the introduction of second-line agents is often accompanied by cumulative toxicity with only modest incremental benefit.

小児癌に対する免疫系の相互作用を理解するために重要な要素は、適用可能な動物モデルが利用可能であることである。現在の異種移植モデルは、重症複合免疫不全（ＳＣＩＤ）マウスにおいて確立されているため、免疫系の寄与に関する情報をもたらさないので、限界がある。免疫適格性動物におけるヒト造血幹細胞の再構成などの他のアプローチは、煩雑で費用がかかり、複雑な生物学的変数をその系に持ち込むことが多い。A key element to understanding immune system interactions in pediatric cancer is the availability of applicable animal models. Current xenograft models are established in severe combined immunodeficient (SCID) mice and are therefore limited as they do not provide information on immune system contributions. Other approaches, such as reconstitution of human hematopoietic stem cells in immunocompetent animals, are cumbersome, expensive, and often introduce complex biological variables into the system.

近年、マウス胎児をヒト腫瘍細胞に対して寛容化することによって、免疫適格性マウスにおける新規異種移植腫瘍モデルが開発された［Ｂａｓｅｌ ｅｔ ａｌ．，Ｃａｎｃｅｒ Ｌｅｔｔ．４１２：２５６－２６３（２０１８）］。このモデルは、異種移植の手法を通じて、癌性細胞と免疫系との複雑な相互作用をよりよく説明するために用いることができるので、有益である。Recently, a novel xenograft tumor model in immune-competent mice was developed by tolerizing mouse fetuses to human tumor cells [Basel et al., Cancer Lett. 412:256-263 (2018)]. This model is beneficial because it can be used to better explain the complex interactions between cancerous cells and the immune system through the xenograft approach.

成人の癌性腫瘍に有用な抗癌剤群の１つは、ハロゲン化キサンテン又はその薬学的に許容される塩である。米国特許第６，３３１，２８６号、同第７，３９０，６６８号、同第７，６４８，６９５号、同第９，１０７，８８７号、同第９，８０８，５２４号、同第９，８３９，６８８号及び同第１０，１３０，６５８号を参照のこと。それらのハロゲン化キサンテンのうち、ローズベンガル二ナトリウム（４，５，６，７－テトラクロロ－２’，４’，５’，７’－テトラヨードフルオレセイン二ナトリウム；ＲＢ）が、特に有効であり、容易に利用されることが見出された。One group of anticancer agents useful for treating cancerous tumors in adults are the halogenated xanthenes or pharma-ceutically acceptable salts thereof. See U.S. Patent Nos. 6,331,286, 7,390,668, 7,648,695, 9,107,887, 9,808,524, 9,839,688, and 10,130,658. Of these halogenated xanthenes, disodium rose bengal (4,5,6,7-tetrachloro-2',4',5',7'-tetraiodofluorescein disodium; RB) has been found to be particularly effective and readily available.

ヨウ素１３１で放射標識されたＲＢの溶液が、乳児の肝機能を計測するために臨床で用いられている［Ｙｖａｒｔ ｅｔ ａｌ．，Ｅｕｒ Ｊ Ｎｕｃｌ Ｍｅｄ ６：３５５－３５９（１９８１）］。注射用の０．９％塩化ナトリウム水溶液中の１０％ｗ／ｖ ＲＢ二ナトリウム滅菌溶液であるＰＶ－１０（登録商標）が、Ｋｎｏｘｖｉｌｌｅ，ＴＮのＰｒｏｖｅｃｔｕｓ Ｂｉｏｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ，Ｉｎｃ．が製造するより最近の製剤である。Solutions of RB radiolabeled with iodine-131 are used clinically to measure liver function in infants [Yvart et al., Eur J Nucl Med 6:355-359 (1981)]. PV-10®, a sterile 10% w/v disodium RB solution in 0.9% aqueous sodium chloride for injection, is a more recent formulation manufactured by Provectus Biopharmaceuticals, Inc., Knoxville, TN.

これまでの研究によって、ＰＶ－１０（登録商標）ＲＢ二ナトリウム水溶液のＲＢ又はその塩が、癌性細胞のリソソームに蓄積し［Ｗａｃｈｔｅｒ，ｅｔ ａｌ．，Ｐｒｏｃｅｅｄｉｎｇｓ ｏｆ ＳＰＩＥ，Ｍｕｌｔｉｐｈｏｔｏｎ Ｍｉｃｒｏｓｃｏｐｙ ｉｎ ｔｈｅ Ｂｉｏｍｅｄｉｃａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ ＩＩ，Ｐｅｒｉａｓａｍｙ，Ａ．ａｎｄ Ｓｏ，Ｐ．Ｔ．Ｃ．（ｅｄｓ），Ｂｅｌｌｉｎｇｈａｍ，Ｗａｓｈｉｎｇｔｏｎ：４６２０：１４３－１４７（２００２）］、一連の成人癌において細胞死を誘導する［Ｑｉｎ ｅｔ ａｌ．，Ｃｅｌｌ Ｄｅａｔｈ Ｄｉｓ ８：ｅ２５８４（２０１７）；Ｔｏｏｍｅｙ ｅｔ ａｌ．，ＰＬｏＳ ＯＮＥ ８（７）：ｅ６８５６１（２０１３）；Ｋｏｅｖａｒｙ ｅｔ ａｌ．，Ｉｎｔ Ｊ Ｐｈｙｓｉｏｌ Ｐａｔｈｏｐｈｙｓｉｏｌ Ｐｈａｒｍａｃｏｌ ４（２）：９９－１０７（２０１２）；Ｔｈｏｍｐｓｏｎ ｅｔ ａｌ．，Ｍｅｌａｎｏｍａ Ｒｅｓ １８（６）：４０５－４１１（２００８）；及びＺａｍａｎｉ ｅｔ ａｌ．，Ｊ Ｉｍｍｕｎｏｔｏｘｉｃ １１（４）：３６７－３７５（２０１４）］ことが示されている。Previous studies have demonstrated that RB or its salts in PV-10 (registered trademark) RB disodium aqueous solution accumulate in the lysosomes of cancer cells [Wachter, et al., Proceedings of SPIE, Multiphoton Microscopy in the Biomedical Sciences II, Periasamy, A. and So, P. T. C. (eds), Bellingham, Washington: 4620: 143-147 (2002)] and induce cell death in a range of adult cancers [Qin et al., Cell Death Dis 8: e2584 (2017); Tomey et al. , PLoS ONE 8(7):e68561(2013); Koevary et al., Int J Physiol Pathophysiol Pharmacol 4(2):99-107(2012); Thompson et al., Melanoma Res 18(6):405-411(2008); and Zamani et al., J Immunotoxic 11(4):367-375(2014)].

ＰＶ－１０（登録商標）ＲＢ二ナトリウム水溶液は、いくつかの臨床試験において、単一の抗癌剤と、モノクローナル抗体抗癌剤との併用の両方において使用され、病巣内（ＩＬ）投与によって固形腫瘍癌に投与された。それらの治験のうちのいくつかを下記で論じる。細胞傷害剤としてＰＶ－１０（登録商標）ＲＢ二ナトリウム水溶液を単独で使用した第Ｉ相及び第ＩＩ相臨床研究では、「有害事象は、主に軽度から中等度であり、処置部位に限局しており、処置に関連するグレード４又は５の有害事象は無かった」［Ｔｈｏｍｐｓｏｎ ｅｔ ａｌ．，Ａｎｎ Ｓｕｒｇ Ｏｎｃｏｌ ２２（７）：２１３５－２１４２（２０１５）］、及び「治療下で発現した有害事象（ＴＥＡＥ）は、各薬物に対して確立されていたパターンと一致し、主としてグレード１～２の注射部位反応が、ＰＶ－１０（登録商標）ＲＢ二ナトリウム水溶液に起因し、グレード１～３の免疫媒介性反応が、ペンブロリズマブに起因し、重大な重複又は予想外の毒性は認められなかった．．．」［Ａｇａｒｗａｌａ ｅｔ ａｌ．，Ｊ Ｃｌｉｎ Ｏｎｃｏｌ ３７（１５）ｓｕｐｐｌ ９５５９－９５５９（２０１９年５月２６日）］と実例が報告された。このように、ＲＢは、癌性細胞に対して毒性であるかのように見えるが、非癌性細胞に対しては無毒性である。PV-10® RB disodium aqueous solution has been used in several clinical trials, both as a single anticancer agent and in combination with monoclonal antibody anticancer agents, administered to solid tumor cancers by intralesional (IL) administration. Some of these trials are discussed below. In Phase I and II clinical studies using PV-10® RB disodium aqueous solution alone as a cytotoxic agent, "adverse events were primarily mild to moderate and localized to the treatment site, with no grade 4 or 5 adverse events related to treatment" [Thompson et al. , Ann Surg Oncol 22(7):2135-2142 (2015)], and "Treatment-emergent adverse events (TEAEs) were consistent with established patterns for each drug, with primarily grade 1-2 injection site reactions attributable to PV-10® RB disodium aqueous solution and grade 1-3 immune-mediated reactions attributable to pembrolizumab, with no significant overlapping or unexpected toxicities..." [Agarwala et al., J Clin Oncol 37(15)suppl 9559-9559 (May 26, 2019)]. Thus, RB appears to be toxic to cancerous cells, but is non-toxic to non-cancerous cells.

成人の腫瘍と小児の腫瘍では挙動が大きく異なることが多いので、ＲＢ及び類似のハロゲン化キサンテンを、小児の癌性細胞、特に小児の癌性血液細胞に対して使用したとき、それらが有効であるか否かは不明であった。ＲＢを単独で添加するか又は公知の抗癌剤とともに添加した細胞培養における神経芽腫細胞株に対する、及びマウスにおいて確立された固形腫瘍異種移植片への病巣内注射による、それぞれ予備的なインビトロ試験及び異種移植試験が、小児の癌性細胞の殺滅を示すと本発明者及び共同研究者のうちの一人によって報告された。Ｓｗｉｆｔ ｅｔ ａｌ．，Ｏｎｃｏｔａｒｇｅｔｓ Ｔｈｅｒ，１２：１２９３－１３０７（２０１９年２月）。Because adult and pediatric tumors often behave very differently, it was unclear whether RB and similar halogenated xanthenes would be effective when used against pediatric cancerous cells, particularly pediatric cancerous blood cells. Preliminary in vitro and xenograft studies, using RB alone or with known anticancer drugs on neuroblastoma cell lines in cell culture and by intralesional injection into established solid tumor xenografts in mice, respectively, have been reported by the inventors and one of their collaborators to show killing of pediatric cancerous cells. Swift et al., Oncotargets Ther, 12:1293-1307 (February 2019).

さらに、腫瘍へのハロゲン化キサンテン化合物の病巣内投与は、その活性な細胞傷害剤を最も高い濃度で腫瘍に直接提供する。下記で論じる現在企図されている処置の手法では、投与は、標的の癌性血液細胞から遠位において行われることが多く、それにより、殺癌性（ｃａｎｃｅｒｏｃｉｄａｌ）のハロゲン化キサンテン化合物薬（剤）の有効性が弱まる可能性がある。Furthermore, intralesional administration of halogenated xanthene compounds to tumors provides the highest concentrations of their active cytotoxic agents directly to the tumor. In currently contemplated treatment approaches discussed below, administration is often distal to the targeted cancerous blood cells, potentially reducing the efficacy of the cancerocidal halogenated xanthene compound drugs.

治療抵抗性転移性黒色腫を有する患者に対する第ＩＩ相臨床試験において、ＰＶ－１０（登録商標）ＲＢ二ナトリウム水溶液を病巣内注射することにより、５１％という全奏効率で腫瘍退縮が誘導された［Ｔｈｏｍｐｓｏｎ ｅｔ ａｌ．，Ａｎｎ Ｓｕｒｇ Ｏｎｃｏｌ ２２（７）：２１３５－２１４２（２０１５）］。また、病巣内のＰＶ－１０（登録商標）ＲＢ二ナトリウム水溶液は、イントランジット又は転移性の黒色腫を有する患者に対する第ＩＩ相臨床試験において、放射線療法と併用したとき、８６．６％という全奏効率で有効性を示した［Ｆｏｏｔｅ ｅｔ ａｌ．，Ｊ Ｓｕｒｇ Ｏｎｃｏｌ １１５（７）：８９１－８９７（２０１７）］。In a phase II clinical trial in patients with refractory metastatic melanoma, intralesional injection of PV-10® RB disodium solution induced tumor regression with an overall response rate of 51% [Thompson et al., Ann Surg Oncol 22(7):2135-2142(2015)]. Intralesional PV-10® RB disodium solution also showed efficacy with an overall response rate of 86.6% when combined with radiation therapy in a phase II clinical trial in patients with in-transit or metastatic melanoma [Foote et al., J Surg Oncol 115(7):891-897(2017)].

ＰＶ－１０（登録商標）ＲＢ二ナトリウム水溶液の病巣内投与は、直接的な癌細胞死を誘導することに加えて、マウス研究［Ｑｉｎ ｅｔ ａｌ．，Ｃｅｌｌ Ｄｅａｔｈ Ｄｉｓ ８：ｅ２５８４（２０１７）；Ｔｏｏｍｅｙ ｅｔ ａｌ．，ＰＬｏＳ ＯＮＥ ８（７）：ｅ６８５６１（２０１３）；及びＬｉｕ ｅｔ ａｌ．，Ｏｎｃｏｔａｒｇｅｔ ７（２５）：３７８９３－３７９０５（２０１６）］とヒト臨床試験［Ｌｉｐｐｅｙ ｅｔ ａｌ．，Ｊ Ｓｕｒｇ Ｏｎｃｏｌ １１４（３）：３８０－３８４（２０１６）；Ｒｏｓｓ，Ｊ Ｓｕｒｇ Ｏｎｃｏｌ １０９（４）：３１４－３１９（２１０４）；Ｌｉｕ ｅｔ ａｌ．，ＰＬｏＳ ＯＮＥ １３（４）：ｅ０１９６０３３（２０１８）；及びＢａｓｅｌ ｅｔ ａｌ．，Ｃａｎｃｅｒ Ｌｅｔｔ ４１２：２５６－２６３（２０１８）］の両方において腫瘍特異的な免疫応答を誘導するとも示されている。黒色腫のマウスモデルにおいて、ＰＶ－１０（登録商標）ＲＢ二ナトリウム水溶液で病巣内処置することにより、黒色腫細胞のネクローシス及び腫瘍浸潤単核リンパ球の局所的な増加が誘導された［Ｌｉｐｐｅｙ ｅｔ ａｌ．，Ｊ Ｓｕｒｇ Ｏｎｃｏｌ １１４（３）：３８０－３８４（２０１６）］。Intralesional administration of PV-10® RB disodium aqueous solution, in addition to inducing direct cancer cell death, has been shown to inhibit tumor growth in mice in mice [Qin et al., Cell Death Dis 8:e2584(2017); Tomey et al., PLoS ONE 8(7):e68561(2013); and Liu et al., Oncotarget 7(25):37893-37905(2016)] and in human clinical trials [Lippee et al. , J Surg Oncol 114(3):380-384(2016); Ross, J Surg Oncol 109(4):314-319(2104); Liu et al., PLoS ONE 13(4):e0196033(2018); and Basel et al., Cancer Lett 412:256-263(2018)]. Intralesional treatment with aqueous PV-10® RB disodium induced necrosis of melanoma cells and a local increase in tumor-infiltrating mononuclear lymphocytes in a mouse model of melanoma [Lippee et al. , J Surg Oncol 114(3):380-384 (2016)].

ＰＶ－１０（登録商標）ＲＢ二ナトリウム水溶液は、免疫原性細胞の死を誘導して、腫瘍抗原を近傍の抗原提示細胞（ＡＰＣ）に放出し、抗腫瘍Ｔ細胞及び抗腫瘍Ｂ細胞の活性化を促進することが示唆された。同系マウス結腸癌モデルでは、インビトロにおいてＰＶ－１０（登録商標）ＲＢ二ナトリウム水溶液で処置された癌細胞を、同じ腫瘍を有するマウスに注射したところ、腫瘍の成長が遅くなった［Ｑｉｎ ｅｔ ａｌ．，Ｃｅｌｌ Ｄｅａｔｈ Ｄｉｓ ８：ｅ２５８４（２０１７）］。さらに、同系マウス黒色腫モデルでは、病巣内のＰＶ－１０（登録商標）ＲＢ二ナトリウム水溶液と抗ＰＤ－１抗体との併用処置によって、腫瘍成長が遅れ、Ｔ細胞活性化が増大した［Ｌｉｕ ｅｔ ａｌ．，ＰＬｏＳ ＯＮＥ １３（４）：ｅ０１９６０３３（２１０８）］。PV-10® RB disodium aqueous solution has been suggested to induce the death of immunogenic cells, release tumor antigens to nearby antigen-presenting cells (APCs), and promote the activation of antitumor T cells and antitumor B cells. In a syngeneic mouse colon cancer model, tumor growth was slowed when cancer cells treated in vitro with PV-10® RB disodium aqueous solution were injected into mice bearing the same tumors [Qin et al., Cell Death Dis 8: e2584 (2017)]. Furthermore, in a syngeneic mouse melanoma model, combined treatment of intralesional PV-10® RB disodium aqueous solution with anti-PD-1 antibodies slowed tumor growth and increased T cell activation [Liu et al., PLoS ONE 13 (4): e0196033 (2108)].

２０１９年１１月１９日に出願された親出願の米国特許出願第１６／６８８，３１９は、ハロゲン化キサンテン、その薬学的に許容される塩又はＣ_１－Ｃ_４アルキルエステルを含む水性組成物との接触によって白血病細胞などの血液癌細胞を首尾よく処置（殺滅）できることを教示している。２０２１年３月２６日出願の共同譲渡された米国特許出願第１７／２１４，５９０は、ハロゲン化キサンテン、そのラクトン又はその薬学的に許容される塩もしくはエステルの経口投与によって、固形癌性腫瘍を首尾よく処置できることを教示している。その経口投与される薬剤は、固体又は液体の形態であり得る。 Parent application U.S. Patent Application No. 16/688,319, filed November 19, 2019, teaches that blood cancer cells, such as leukemia cells, can be successfully treated (killed) by contact with an aqueous composition comprising a halogenated xanthene, a pharma- ceutically acceptable salt or a_C1 -_C4 alkyl ester thereof. Coassigned U.S. Patent Application No. 17/214,590, filed March 26, 2021, teaches that solid cancer tumors can be successfully treated by oral administration of a halogenated xanthene, a lactone thereof, or a pharma- ceutically acceptable salt or ester thereof. The orally administered agent can be in solid or liquid form.

以下の開示は、企図される発明を説明し、小児及び成人の白血病の処置において、経口投与されるローズベンガルなどのハロゲン化キサンテン化合物を使用した研究の結果を提供する。The following disclosure describes contemplated inventions and provides results of studies using orally administered halogenated xanthene compounds such as Rose Bengal in the treatment of leukemia in children and adults.

本発明は、白血病を有する哺乳動物被験体を処置する方法を企図する。その方法は、そのような哺乳動物被験体に、治療有効量のハロゲン化キサンテン（ＨＸ）、そのラクトン、薬学的に許容され得る塩又はＣ_１－Ｃ_４アルキルエステルもしくは芳香族エステル（本明細書中で「ＨＸ化合物」と総称される）を、薬学的に許容され得る固体又は液体の希釈媒体に溶解又は分散された第１の白血病用細胞傷害剤として投与する工程を含む。企図される投与は、通常、繰り返される。 The present invention contemplates a method of treating a mammalian subject having leukemia comprising administering to such mammalian subject a therapeutically effective amount of a halogenated xanthene (HX), lactone, pharmaceutically acceptable salt, or_C1 -_C4 alkyl or aromatic ester thereof (collectively referred to herein as "HX compounds") as a first leukemia cytotoxic agent dissolved or dispersed in a pharmaceutically acceptable solid or liquid diluent medium. Administration is contemplated, typically repeated.

企図される処置方法はまた、薬学的に許容され得る媒体に溶解又は分散された、第２の治療有効量の第２の異なって作用する白血病用全身性細胞傷害剤をその同じ哺乳動物被験体に投与することとともに行うことができる。第２の白血病用全身性細胞傷害剤は、小分子、電離放射線、又はインタクトな抗体もしくはパラトープ含有抗体部分、例えば、炎症性ケモカイン活性を阻害するタンパク質性抗体分子又は免疫チェックポイント抗体であり得る。第１及び第２の白血病用細胞傷害剤は、同じもしくは異なる媒体において一緒に、又は同じもしくは異なる媒体において異なる時点において、投与され得る。第２の白血病用細胞傷害剤は、固体錠剤、カプセル剤、丸剤などとして、液体媒体において、又は静脈内注射もしくは静脈内注入として、投与され得る。Contemplated treatment methods may also be performed in conjunction with administering to the same mammalian subject a second therapeutically effective amount of a second, differently acting, leukemia systemic cytotoxic agent dissolved or dispersed in a pharma-ceutically acceptable vehicle. The second leukemia systemic cytotoxic agent may be a small molecule, ionizing radiation, or an intact antibody or paratope-containing antibody moiety, such as a proteinaceous antibody molecule or an immune checkpoint antibody that inhibits inflammatory chemokine activity. The first and second leukemia cytotoxic agents may be administered together in the same or different vehicles, or at different times in the same or different vehicles. The second leukemia cytotoxic agent may be administered as a solid tablet, capsule, pill, etc., in a liquid vehicle, or as an intravenous injection or infusion.

１つの態様において、約２００～約１０００Ｄａの分子量を有する白血病用小分子細胞傷害剤の使用が企図される。ドキソルビシン、エトポシド及びビンクリスチンなどの、ＨＸ化合物と相乗作用を示す化合物が好ましい。インタクトな抗体又はパラトープ含有抗体部分が、白血病用細胞傷害剤の第２の群である。これらの作用物質の中で好ましいのは、免疫チェックポイント阻害剤と称されるものである［例えば、Ｄａｒｖｉｎ ｅｔ ａｌ．，Ｅｘｐ Ｍｏｌ Ｍｅｄ，５０：１６５（２０１８）を参照のこと］。In one embodiment, the use of small molecule cytotoxic agents for leukemia having a molecular weight of about 200 to about 1000 Da is contemplated. Compounds that exhibit synergy with HX compounds, such as doxorubicin, etoposide, and vincristine, are preferred. Intact antibodies or paratope-containing antibody moieties are a second group of cytotoxic agents for leukemia. Preferred among these agents are those referred to as immune checkpoint inhibitors [see, e.g., Darvin et al., Exp Mol Med, 50:165 (2018)].

本発明は、白血病を有する哺乳動物被験体を処置するために、薬学的に許容され得る水性媒体に溶解又は分散された第１の白血病用細胞傷害剤として、治療有効量のＨＸ化合物を使用することも企図し、そのハロゲン化キサンテン化合物（ＨＸ化合物）は、白血病細胞の死を誘導するに十分な時間にわたってその哺乳動物被験体において維持される。さらなる実施形態において、第１の白血病用細胞傷害剤であるＨＸ化合物は、ローズベンガル、その薬学的に許容され得る塩、ラクトン又はＣ_１－Ｃ_４アルキルエステルもしくは芳香族エステルである。なおもさらなる実施形態において、ＨＸ化合物は、ローズベンガル二ナトリウム塩である。さらに、通常処置される白血病細胞は、急性Ｂ細胞リンパ芽球性白血病細胞もしくは急性Ｔ細胞リンパ芽球性白血病細胞、慢性リンパ性白血病細胞又は急性骨髄性白血病細胞である。 The present invention also contemplates the use of a therapeutically effective amount of a HX compound as a first leukemic cytotoxic agent dissolved or dispersed in a pharma- ceutically acceptable aqueous medium to treat a mammalian subject having leukemia, the halogenated xanthene compound (HX compound) being maintained in the mammalian subject for a time sufficient to induce death of leukemic cells. In a further embodiment, the first leukemic cytotoxic agent, HX compound, is Rose Bengal, a pharma- ceutically acceptable salt, lactone, or_C1 -_C4 alkyl ester or aromatic ester thereof. In yet a further embodiment, the HX compound is Rose Bengal disodium salt. Additionally, the leukemic cells typically treated are acute B-cell lymphoblastic leukemia cells or acute T-cell lymphoblastic leukemia cells, chronic lymphocytic leukemia cells, or acute myeloid leukemia cells.

ＨＸ化合物の低いバイオアベイラビリティ、その薬物の初回通過損失、及び他の状況においてローズベンガル（ＲＢ）などのＨＸ化合物について以前に報告された比較的短い循環半減期（約３０分）を理由に、任意の癌、ましてや直腸結腸癌のような消化管の癌性固形腫瘍が、２０２１年３月２６日出願の米国特許出願第１７／２１４，５９０に開示されているように経口投与されたＨＸ化合物から何らかの影響を受け得るということは、かなり予想外のことであった。したがって、水性希釈剤に溶解された薬学的に許容され得る塩の形態の、例証的なＨＸ化合物であるローズベンガル二ナトリウムを経口投与することにより、何らの処置もない場合に直腸結腸腫瘍を発生するように特別に作出された動物において直腸結腸腫瘍の発生の進行を遅くできたことは、予想外のことであった。経口的に送達された企図されるＨＸ化合物が、これらの特別に作出された動物において直腸結腸癌性腫瘍の形成を予防できたことは、さらに予想外のことであった。Due to the low bioavailability of HX compounds, the first-pass loss of the drug, and the relatively short circulating half-life (approximately 30 minutes) previously reported for HX compounds such as Rose Bengal (RB) in other contexts, it was quite unexpected that any cancer, much less a cancerous solid tumor of the digestive tract such as colorectal cancer, could be affected in any way by an orally administered HX compound as disclosed in U.S. Patent Application No. 17/214,590, filed March 26, 2021. Thus, it was unexpected that oral administration of an illustrative HX compound, Rose Bengal disodium, in the form of a pharma-ceutically acceptable salt dissolved in an aqueous diluent, could slow the progression of colorectal tumor development in animals specially engineered to develop colorectal tumors in the absence of any treatment. It was even more unexpected that a contemplated HX compound delivered orally could prevent the formation of colorectal cancerous tumors in these specially engineered animals.

経口投与された有効量のＨＸ化合物が、本明細書中に開示されるように、白血病細胞も効果的に殺滅できたことは、上で論じられた理由に加え、白血病細胞が血流中並びに骨髄中において全身に分布しているという事実から、さらに予想外のことであった。したがって、相対的に濃縮されており、腫瘍の動脈から直接供給される、又は腫瘍に直接、病巣内投与することによって接触される、固形腫瘍の細胞よりも、白血病細胞は、白血病用細胞傷害性ＨＸ化合物が「見つけて」取り込まれるための、より低濃度のより拡散した標的を提供する。That an effective dose of an orally administered HX compound, as disclosed herein, could also effectively kill leukemic cells was further unexpected for the reasons discussed above, as well as the fact that leukemic cells are distributed throughout the body in the bloodstream as well as in the bone marrow. Thus, leukemic cells provide a lower concentration and more diffuse target for the leukemic cytotoxic HX compound to "find" and take up, than the cells of solid tumors, which are relatively concentrated and supplied directly by the tumor's arteries or contacted by direct intralesional administration to the tumor.

本開示の一部を成す図面において。In the drawings which form part of this disclosure.

Ｃｈａｒｌｅｓ Ｒｉｖｅｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ，Ｉｎｃ．からのＣＢ１７ ＳＣＩＤマウスを経口投与のローズベンガル二ナトリウムで処置したときの生存率を示しているグラフである。指数関数的に増殖中のＳＥＭ細胞（ＧＦＰで標識された２．５×１０^６個のヒトＡＬＬ細胞）を各動物の静脈内に注射し、腫瘍の確立をモニターした。４週間、腫瘍を成長させた後、マウスを無作為に３つの群に分けた。群１（ｎ＝９匹のコントロール動物）には、２週間にわたって１週間に２回、１００μＬのＰＢＳを経口投与した。群２（ｎ＝８匹の処置コホートＩ動物）には、０．９％ＮａＣｌ水溶液中に１０％ｗ／ｖで存在する２５μＬのローズベンガル二ナトリウムを最終体積が１００μＬとなるようにＰＢＳに希釈したものを、２週間にわたって１週間に２回、経口投与した。群３（ｎ＝８匹の処置コホートＩＩ動物）には、最終体積が１００μＬとなるようにＰＢＳに希釈した、０．９％ＮａＣｌ水溶液中の１２．５μＬの上記１０％ｗ／ｖを、２週間にわたって１週間に２回、経口投与した。疾患進行のエビデンスをすべての動物においてモニターし、処置開始の１２０日後まで生存を追跡した。データをカプラン・マイヤー推定値として示す。５０～１００日の領域を調べると、Ｘ軸に最も近い線は、コントロールのデータを表しており、中央の線は、コホートＩＩ動物のデータを表しており、一番上の線は、コホートＩ動物のデータを示している。1 is a graph showing survival of CB17 SCID mice treated with orally administered Rose Bengal disodium (Charles River Laboratories International, Inc.). Exponentially growing SEM cells (2.5×10⁶ human ALL cells labeled with GFP) were injected intravenously into each animal and tumor establishment was monitored. After tumor growth for 4 weeks, mice were randomly divided into three groups. Group 1 (n=9 control animals) was orally administered 100 μL PBS twice a week for 2 weeks. Group 2 (n=8 treatment cohort I animals) was orally administered 25 μL of Rose Bengal disodium present at 10% w/v in 0.9% NaCl aqueous solution, diluted in PBS to a final volume of 100 μL, twice a week for 2 weeks. Group 3 (n=8 treatment cohort II animals) was orally administered 12.5 μL of the above 10% w/v in 0.9% NaCl aqueous solution, diluted in PBS to a final volume of 100 μL, twice weekly for 2 weeks. All animals were monitored for evidence of disease progression and survival was followed for up to 120 days after treatment initiation. Data are presented as Kaplan-Meier estimates. Inspecting the 50-100 day region, the line closest to the x-axis represents data for controls, the middle line represents data for cohort II animals, and the top line shows data for cohort I animals.いくつかの異なる研究からのデータの対数－対数プロットであり、固形腫瘍処置の評価時点までの被験体におけるＨＸ化合物の持続時間の対数に対して、投与されたローズベンガル濃度（モル濃度）の対数をプロットしており、２０２１年３月２６日出願の米国特許出願第１７／２１４，５９０にも以前の形態として示されている。「病巣内投与」は、Ｔｈｏｍｐｓｏｎ ｅｔ ａｌ．，Ｍｅｌａｎｏｍａ Ｒｅｓ １８：４０５－４１１（２００８）に存在するデータを表しており、「Ｓｗｉｆｔ ２０１８，２０１９」は、Ｓｗｉｆｔ ｅｔ ａｌ．，Ｊ Ｃｌｉｎ Ｏｎｃｏｌ ３６：Ｓｕｐｐｌ；ａｂｓｔｒ １０５５７（２０１８）及びＳｗｉｆｔ ｅｔ ａｌ．，Ｏｎｃｏｔａｒｇｅｔｓ Ｔｈｅｒ １２：１２９３－１３０７（２０１９）からのものであり、「経口Ａｐｃ^Ｍｉｎ」は、米国特許出願第１７／２１４，５９０において報告された研究のデータであり、「経口白血病」は、本願において提示される新しいデータである。Log-log plots of data from several different studies plotting the log of the concentration of Rose Bengal administered (molar) against the log of the duration of HX compound in subjects to the time of evaluation of solid tumor treatment, also shown in prior form in U.S. patent application Ser. No. 17/214,590, filed Mar. 26, 2021. "Intralesional administration" represents data present in Thompson et al., Melanoma Res 18:405-411 (2008), "Swift 2018,2019" represents data present in Swift et al., J Clin Oncol 36:Suppl;abstr 10557 (2018) and Swift et al. , Oncotargets Ther 12:1293-1307 (2019), where "Oral Apc^Min " is data from studies reported in U.S. patent application Ser. No. 17/214,590, and "Oral Leukemia" is new data presented in this application.

１つの態様において、本発明は、哺乳動物被験体に存在する白血病細胞の処置（殺滅）において使用するための、経口投与される薬学的組成物を企図する。その経口薬学的組成物中の主要な細胞傷害剤は、ハロゲン化キサンテン（ＨＸ）、そのラクトン、その薬学的に許容され得る塩、又はそのＣ_１－Ｃ_４アルキルエステルもしくは芳香族エステルであり、これらは本明細書中で「ＨＸ化合物」と総称され、白血病を処置する有効量で存在する。経口投与される薬学的組成物は、固体又は液体の形態であり得る。 In one aspect, the present invention contemplates an orally administered pharmaceutical composition for use in treating (killing) leukemia cells present in a mammalian subject. The primary cytotoxic agent in the oral pharmaceutical composition is a halogenated xanthene (HX), a lactone, a pharma- ceutically acceptable salt, or a_C1 -_C4 alkyl or aromatic ester thereof, collectively referred to herein as "HX compounds," present in an amount effective to treat leukemia. Orally administered pharmaceutical compositions may be in solid or liquid form.

企図されるハロゲン化キサンテン分子には、特に好ましいローズベンガル（４，５，６，７－テトラクロロ－２’，４’，５’，７’－テトラヨードフルオレセイン；ＲＢ）、エリスロシンＢ、フロキシンＢ、４，５，６，７－テトラブロモ－２’，４’，５’，７’－テトラ－ヨードフルオレセイン、２’，４，５，６，７－ペンタクロロ－４’，５’，７’－トリヨードフルオレセイン、４，４’，５，６，７－ペンタクロロ－２’，５’，７’－トリヨードフルオレセイン、２’，４，５，６，７，７’－ヘキサクロロ－４’，５’－ジヨードフルオレセイン、４，４’，５，５’，６，７－ヘキサクロロ－２’，７’－ジヨードフルオレセイン、２’，４，５，５’，６，７－ヘキサクロロ－４’，７’－ジヨードフルオレセイン、４，５，６，７－テトラクロロ－２’，４’，５’－トリヨードフルオレセイン、４，５，６，７－テトラクロロ－２’，４’，７’－トリヨードフルオレセイン、４，５，６，７－テトラブロモ－２’，４’，５’－トリヨードフルオレセイン及び４，５，６，７－テトラブロモ－２’，４’，７’－トリヨードフルオレセインが含まれる。Contemplated halogenated xanthene molecules include, particularly preferred, Rose Bengal (4,5,6,7-tetrachloro-2',4',5',7'-tetraiodofluorescein; RB), Erythrosine B, Phloxine B, 4,5,6,7-tetrabromo-2',4',5',7'-tetra-iodofluorescein, 2',4,5,6,7-pentachloro-4',5',7'-triiodofluorescein, 4,4',5,6,7-pentachloro-2',5',7'-triiodofluorescein, 2',4,5,6,7,7'-hexachloro-4',5'-diiodofluorescein, These include iodofluorescein, 4,4',5,5',6,7-hexachloro-2',7'-diiodofluorescein, 2',4,5,5',6,7-hexachloro-4',7'-diiodofluorescein, 4,5,6,7-tetrachloro-2',4',5'-triiodofluorescein, 4,5,6,7-tetrachloro-2',4',7'-triiodofluorescein, 4,5,6,7-tetrabromo-2',4',5'-triiodofluorescein and 4,5,6,7-tetrabromo-2',4',7'-triiodofluorescein.

上記のハロゲン化キサンテンなどの薬学的化合物と薬学的に許容され得る塩を形成する通常使用される薬学的に許容され得る酸及び塩基のリストについては、Ｂｅｒｇｅ，Ｊ．Ｐｈａｒｍ．Ｓｃｉ．１９７７ ６８（１）：１－１９を参照されたい。例証的なカチオンとしては、ナトリウム、カリウムなどのアルカリ金属、並びにアンモニウム、及びマグネシウム及びカルシウムなどのアルカリ土類塩が挙げられる。ローズベンガルの二ナトリウム塩が特に好ましい。For a list of commonly used pharma-ceutically acceptable acids and bases that form pharma-ceutically acceptable salts with pharmaceutical compounds such as the halogenated xanthenes listed above, see Berge, J. Pharm. Sci. 1977 68(1):1-19. Illustrative cations include alkali metals such as sodium, potassium, and ammonium, and alkaline earth salts such as magnesium and calcium. The disodium salt of Rose Bengal is particularly preferred.

企図されるハロゲン化キサンテンのラクトン型は、合成的に形成することができ、非常に純粋なローズベンガルの好ましい前駆体である。さらに、カルボン酸型のハロゲン化キサンテン塩は、哺乳動物の胃に存在するような強酸性の水性環境に置かれると、ラクトン型を自発的に形成する。そのラクトンは、哺乳動物の胃又は同様の酸性の水性媒体中でカルボン酸型又はカルボン酸塩型から形成されるとき、単に形成されるだけでなく、十二指腸及び隣接する小腸の領域では容易に溶解しない又は十二指腸のｐＨ値を有する水性媒体に容易に溶解しない凝集塊に凝集するとみられる。The lactone forms of contemplated halogenated xanthenes can be synthetically formed and are preferred precursors to highly pure Rose Bengal. Additionally, the carboxylate-form halogenated xanthene salts spontaneously form the lactone form when placed in a highly acidic aqueous environment such as that present in a mammalian stomach. The lactones, when formed from the carboxylate or carboxylate salt forms in a mammalian stomach or similar acidic aqueous medium, appear not only to form but also to aggregate into aggregates that are not readily soluble in the duodenum and adjacent regions of the small intestine or in aqueous media having the pH values of the duodenum.

上記のハロゲン化キサンテン化合物のうちの１つのＣ_１－Ｃ_４アルキルエステルも使用でき、Ｃ_２、すなわちエチルエステルが好ましい。ＲＢ、エチル－レッド３（エリスロシンエチルエステル；２’，４’，５’，７’－テトラヨード－フルオレセインエチルエステル）、４，５，６，７－テトラブロモ－２’，４’，５’，７’－テトラヨード－フルオレセイン及びエチル－フロキシンＢ（４，５，６，７－テトラクロロ－２’，４’，５’，７’－テトラブロモ－フルオレセインエチルエステル）の各々を用いたインビトロ研究は、ＣＣＬ－１４２腎腺癌に対して同様の抗腫瘍活性を示した。 C₁ -C₄ alkyl esters of one of the above halogenated xanthene compounds may also be used, with the C₂ , ethyl ester being preferred. In vitro studies with each of RB, Ethyl-Red 3 (Erythrosine ethyl ester; 2',4',5',7'-tetraiodo-fluorescein ethyl ester), 4,5,6,7-tetrabromo-2',4',5',7'-tetraiodo-fluorescein, and Ethyl-Phloxine B (4,5,6,7-tetrachloro-2',4',5',7'-tetrabromo-fluorescein ethyl ester) have shown similar antitumor activity against CCL-142 renal adenocarcinoma.

企図される芳香族エステルは、独立して窒素、酸素又は硫黄である０、１もしくは２個のヘテロ環原子を含む、５もしくは６員芳香環（ベンジルアルコールを含む）又は５，６－もしくは６，６－縮合芳香環系を有する芳香族アルコールとＨＸ分子との反応によって形成される。芳香族エステルが使用されるとき、それは、好ましくは、ベンジルエステル、フェニルエステル、又は２－、３－もしくは４－ピリジル（ピリジル）エステルであり、他の単環及び縮合環含有芳香族エステルも、本明細書中以後で論じられるように企図される。ベンジルエステルは、「アラルキルエステル」であると考えられることが多いが、本発明の目的では、ベンジルエステルは、芳香族エステルとみなされることが理解されるべきである。Aromatic esters contemplated are formed by the reaction of an aromatic alcohol having a 5- or 6-membered aromatic ring (including benzyl alcohol) or a 5,6- or 6,6-fused aromatic ring system containing 0, 1, or 2 heteroatoms, independently nitrogen, oxygen, or sulfur, with an HX molecule. When an aromatic ester is used, it is preferably a benzyl ester, a phenyl ester, or a 2-, 3-, or 4-pyridyl (pyridyl) ester, although other single- and fused-ring-containing aromatic esters are also contemplated as discussed hereinafter. Although benzyl esters are often considered to be "aralkyl esters," it should be understood that for purposes of the present invention, benzyl esters are considered aromatic esters.

そのような芳香族アルコールエステル部分の例証的な例を下記に示し、命名する。式中、Ｏは、酸素原子であり、線－Ｏは、環－酸素がその環の利用可能な任意の炭素からであり得ることを示し、波線を横断するＯ－線は、描かれているアルコキシ基が、別の分子であるエステル化されたＨＸ分子の一部であることを示す。Illustrative examples of such aromatic alcohol ester moieties are shown and named below, where O is an oxygen atom, the line -O indicates that the ring-oxygen can be from any available carbon in the ring, and the O-line crossing the wavy line indicates that the alkoxy group depicted is part of an esterified HX molecule that is a separate molecule.

ローズベンガルが、好ましいＨＸ分子であり、その二ナトリウム塩であるローズベンガル二ナトリウムが、最も好ましいＨＸ化合物である。ローズベンガル二ナトリウムの構造式を下記に示す。Rose Bengal is the preferred HX molecule, and its disodium salt, disodium rose bengal, is the most preferred HX compound. The structural formula for disodium rose bengal is shown below.

上述のＨＸ化合物を含む薬学的組成物の医薬用途のさらなる詳細は、米国特許第５，９９８，５９７号、同第６，３３１，２８６号、同第６，４９３，５７０号、同第７，３９０，６８８号、同第７，６４８，６９５号、同第８，９７４，３６３号、同第９，１０７，８８７号、同第９，８０８，５２４号、同第９，８３９，６８８号、同第１０，１３０，６５８号及び同第１０，４７１，１４４号（これらの開示は、その全体が参照により本明細書中に援用される）に記載されている。Further details of the pharmaceutical uses of pharmaceutical compositions containing the above-mentioned HX compounds are described in U.S. Patent Nos. 5,998,597, 6,331,286, 6,493,570, 7,390,688, 7,648,695, 8,974,363, 9,107,887, 9,808,524, 9,839,688, 10,130,658 and 10,471,144, the disclosures of which are incorporated herein by reference in their entireties.

投薬－図２
０．９％塩化ナトリウム含有水性媒体中の腫瘍細胞をＨＸ化合物に曝露すると、ＨＸ化合物の不可逆的な蓄積が腫瘍のリソソームにおいて生じ、リソソームの完全性を不安定化するのに十分な濃度に達したら、免疫原性の腫瘍の自己分解を引き起こす［Ｗａｃｈｔｅｒ ｅｔ ａｌ．，ＳＰＩＥ ４６２０：１４３－１４７（２００２）］。これは、この細胞死の免疫原性機構が、（濃度）・（時間関数）に基づいて、ある範囲の曝露条件にわたって誘発され得ることを示唆する。ここで、細胞傷害性は、これらの２つのパラメータの積に比例する［すなわち、細胞傷害性＝ｆ（［ＨＸ］・ｔ）であり、式中、「ｔ」は時間である］。 Medication - Figure 2
Exposure of tumor cells in aqueous media containing 0.9% sodium chloride to HX compounds results in irreversible accumulation of HX compounds in tumor lysosomes, which, once concentrations sufficient to destabilize lysosomal integrity are reached, induces immunogenic tumor autolysis [Wachter et al., SPIE 4620:143-147 (2002)]. This suggests that this immunogenic mechanism of cell death can be triggered over a range of exposure conditions based on a function of concentration·time, where cytotoxicity is proportional to the product of these two parameters [i.e., cytotoxicity=f([HX]·t), where "t" is time].

例えば、ＲＢが、一連の固形腫瘍（例えば、黒色腫、肝細胞癌、乳癌）への病巣内注射によってインビボで投与されたとき、およそ３０分以内におよそ２５～５０ｍｇ／ｇ腫瘍組織（２５～５０ｍＭ）という腫瘍内のＲＢ濃度で急性腫瘍細胞傷害性が顕われる［Ｔｈｏｍｐｓｏｎ ｅｔ ａｌ，Ｍｅｌａｎｏｍａ Ｒｅｓ １８：４０５－４１１（２００８）］。For example, when RB is administered in vivo by intralesional injection to a range of solid tumors (e.g., melanoma, hepatocellular carcinoma, breast cancer), acute tumor cytotoxicity is evident within approximately 30 minutes at intratumoral RB concentrations of approximately 25-50 mg/g tumor tissue (25-50 mM) [Thompson et al, Melanoma Res 18:405-411 (2008)].

Ｓｗｉｆｔら［Ｏｎｃｏｔａｒｇｅｔｓ Ｔｈｅｒ １２：１２９３－１３０７（２０１９）］は、およそ５０～１００μＭの濃度のＲＢとインビトロにおいて９６時間接触させたとき、処置抵抗性の小児固形腫瘍（神経芽細胞腫及び神経上皮腫）の細胞傷害性を示した。さらに、Ｓｗｉｆｔら［Ｊ Ｃｌｉｎ Ｏｎｃｏｌ ３６：Ｓｕｐｐｌ；ａｂｓｔｒ １０５５７（２０１８）］は、同等の曝露において、さらなる処置抵抗性小児固形腫瘍（ユーイング肉腫、骨肉腫及び横紋筋肉腫）における細胞傷害性を示した。Swift et al. [Oncotargets Ther 12:1293-1307 (2019)] demonstrated cytotoxicity in treatment-resistant pediatric solid tumors (neuroblastoma and neuroepithelioma) when exposed in vitro for 96 hours to RB at concentrations of approximately 50-100 μM. Furthermore, Swift et al. [J Clin Oncol 36:Suppl;abstr 10557 (2018)] demonstrated cytotoxicity in additional treatment-resistant pediatric solid tumors (Ewing's sarcoma, osteosarcoma, and rhabdomyosarcoma) at comparable exposures.

継続的な経口給餌の状況におけるＲＢへの長期曝露は、２０２１年３月２６日に出願された親出願である米国特許出願第１７／２１４５９０に開示されているように、マウスＡｐｃ^Ｍｉｎ直腸結腸腫瘍モデルにおいて結腸癌の形成を予防し（予防活性）、結腸癌を停止する（治療活性）と示された。治療での使用の場合、飲料水中の１ｍｇ／ｍＬの濃度のＲＢを自由に摂取させた症候性マウスは、未処置マウスと比べて平均生存時間がおよそ３８％延長した（１２．３±０．５週 対 ９．８±０．８週）。１日の飲料水消費率をおよそ２ｍＬ／１０ｇ体重と仮定すると、これは、およそ２ｍｇＲＢ／１０ｇ（２００ｍｇ／ｋｇ）の消費量に相当する。 Long-term exposure to RB in the context of continuous oral feeding has been shown to prevent colon cancer formation (prophylactic activity) and halt colon cancer (therapeutic activity) in the mouse Apc^Min colorectal tumor model, as disclosed in the parent application U.S. Patent Application No. 17/214,590, filed March 26, 2021. For therapeutic use, symptomatic mice given ad libitum access to RB at a concentration of 1 mg/mL in drinking water had a mean survival time increased by approximately 38% compared to untreated mice (12.3±0.5 weeks vs. 9.8±0.8 weeks). Assuming a daily drinking water consumption rate of approximately 2 mL/10 g body weight, this corresponds to a consumption of approximately 2 mg RB/10 g (200 mg/kg).

経口経路を介して水溶液として投与されたＲＢ二ナトリウムのバイオアベイラビリティは、本発明者らが行ったマスバランス試験に基づくと、限定的であるとみられ、０．１～１パーセントと推定され得、０．２～２ｍｇ／ｋｇという１日の全身曝露に相当する。この量が血流を介して分配され、血液量が体重のおよそ１０パーセントを構成すると仮定すると、これは、血液中においてＲＢの推定濃度が２～２０μＭであることに等しい。The bioavailability of RB disodium administered as an aqueous solution via the oral route appears to be limited based on mass balance studies performed by the inventors and can be estimated to be 0.1-1 percent, corresponding to a daily systemic exposure of 0.2-2 mg/kg. Assuming that this amount is distributed via the bloodstream and that blood volume constitutes approximately 10 percent of body weight, this equates to an estimated concentration of RB in the blood of 2-20 μM.

この同じアプローチを用いて、本願の図１に示されるデータをプロットした。このデータは、小児の急性Ｂリンパ芽球性白血病（ＡＬＬ）腫瘍細胞株の異種移植片が確立されたＣＢ１７ ＳＣＩＤマウスの生存を示し、連続した２週間にわたって１週間に２回、胃管栄養法によってＲＢを投与した２つの処置群のマウスについて治療活性が観察された。この経口ＲＢのバイオアベイラビリティを１％、投与１回あたりの腸管通過時間を６時間、及び血液量を体重のおよそ１０％と仮定すると、２つの処置群は、血液中において推定１２５～２５０μＭのＲＢに対応する。This same approach was used to plot the data shown in Figure 1 of the present application, which shows survival of CB17 SCID mice with established xenografts of a pediatric acute B-lymphoblastic leukemia (ALL) tumor cell line, with therapeutic activity observed for mice in two treatment groups that received RB by gavage twice a week for two consecutive weeks. Assuming a 1% bioavailability of this oral RB, a 6 hour intestinal transit time per dose, and a blood volume of approximately 10% of body weight, the two treatment groups correspond to an estimated 125-250 μM RB in the blood.

これらのデータをプロットすると、図２に図示されるように、仮定された関係（すなわち、細胞傷害性＝ｆ（［ＨＸ］・ｔ））が実験結果によって支持されることが確認された。Plotting these data, as shown in Figure 2, confirmed that the hypothesized relationship (i.e., cytotoxicity = f([HX]·t)) was supported by the experimental results.

より重要なことには、この関数関係から、全身投与の際に抗腫瘍の治療成績を達成するのに適切な用量レベル及びスケジュールを予測することが可能になる。Ａｐｃ^Ｍｉｎモデルを用いて検討されたものと同等の長期全身処置スケジュールの場合、およそ３ヶ月間のリソソーム蓄積及び腫瘍細胞破壊を達成するのに、低マイクロモル濃度（すなわち、約１０μＭ）の循環ＨＸ化合物で十分であるのに対して、およそ１２ヶ月間にわたって腫瘍細胞破壊を達成するのに、マイクロモル濃度からマイクロモル濃度以下の濃度（すなわち、約１μＭ）で十分である。 More importantly, this functional relationship allows prediction of appropriate dose levels and schedules to achieve antitumor therapeutic outcomes upon systemic administration. For chronic systemic treatment schedules comparable to those examined using the Apc^Min model, low micromolar concentrations (i.e., about 10 μM) of circulating HX compounds are sufficient to achieve lysosomal accumulation and tumor cell destruction for approximately 3 months, whereas micromolar to submicromolar concentrations (i.e., about 1 μM) are sufficient to achieve tumor cell destruction over approximately 12 months.

逆に、この経口白血病モデルで使用されたような、より高用量レベルでの、より短い期間又は断続的な反復全身投薬でも、腫瘍破壊を達成することができる。Conversely, tumor destruction can be achieved with shorter duration or intermittent repeated systemic dosing at higher dose levels, as used in this oral leukemia model.

白血病を有する小児患者の処置などの具体的な適応症に対して、図２の関係は、当業者が医薬品開発において日常的に使用している標準的なアプローチを適用して、潜在的な安全性リスクを最小限に抑えながら治療成績を最大化する適切な用量レベル及びスケジュールを選択できることを示している。For a specific indication, such as the treatment of pediatric patients with leukemia, the relationships in Figure 2 demonstrate that one of skill in the art can apply standard approaches routinely used in drug development to select appropriate dose levels and schedules that maximize therapeutic outcomes while minimizing potential safety risks.

出願第１７／２１４５９０のＡｐｃ^Ｍｉｎデータ及び本願の経口白血病処置データは、ＲＢの二ナトリウム塩の単純な製剤が、治療的に活性なレベルのＲＢを送達するのに十分であることを示している。しかしながら、これは、バイオアベイラビリティに関して理想的な効率よりも低い場合がある。したがって、経口送達されたＨＸ化合物の効率的な遊離及び吸収を達成するのに適した配合を決定することは、当業者によく知られた標準的な医薬品開発の問題であり、製剤の特性を変化させることにより、溶解したＨＸ化合物の血流への吸収が最大化するように消化管の適切な場所での遊離（崩壊、脱凝集及び溶解）を制御することによって所望のバイオアベイラビリティを達成することができる。 The Apc^Min data of application 17/214590 and the oral leukemia treatment data of this application show that a simple formulation of the disodium salt of RB is sufficient to deliver therapeutically active levels of RB. However, this may be less than ideally efficient in terms of bioavailability. Thus, determining the appropriate formulation to achieve efficient release and absorption of orally delivered HX compounds is a standard pharmaceutical development problem well known to those skilled in the art, and by varying the properties of the formulation, the desired bioavailability can be achieved by controlling the release (disintegration, disaggregation and dissolution) at the appropriate location in the gastrointestinal tract to maximize absorption of the dissolved HX compounds into the bloodstream.

配合の最適化は、所望の投与スケジュールにおいて必要な全身曝露（例えば、数日程度の短期間の曝露の場合は血流中に約１００μＭ、数ヶ月程度の中期の曝露の場合は約１～約１０μＭ、１年程度又はそれ以上の長期間の曝露の場合は約＜１μＭ又はそれ未満）が達成されるように用量レベル及び配合が調整されるように、吸収に関する標準的な薬物動態学的研究によって導かれ得る。Optimization of the formulation can be guided by standard pharmacokinetic studies of absorption such that dose levels and formulations are adjusted to achieve the required systemic exposure (e.g., about 100 μM in the bloodstream for short-term exposure of a few days, about 1 to about 10 μM for medium-term exposure of a few months, and about <1 μM or less for long-term exposure of a year or more) for the desired dosing schedule.

二塩基性塩の形態のＨＸ化合物は、およそ５を超えるｐＨを有する溶液中に存在するのに対して、＜５のｐＨ値において、それらのＨＸ化合物は、自然にラクトン型に変換される。二塩基性塩の形態は、水性媒体に非常に可溶性であるのに対して、ラクトン型は、水性媒体に不溶性であるので、前者は、後者に比べて高いバイオアベイラビリティを消化管において示す。したがって、消化管のｐＨ値を適切に補うための配合の最適化は、おそらく、バイオアベイラビリティに影響を与える最も重要なパラメータである。例えば、ｐＨ値が＜４である胃では、溶解したＨＸ化合物は、速やかに不溶性のラクトン型に変換される。ＨＸ化合物は、ラクトン型になったら、ヒステリシスを示し、吸収性の塩の形態に戻るけん化を妨げて、下流のバイオアベイラビリティを遅らせるか又は阻害する。HX compounds in the form of dibasic salts are present in solutions with a pH above approximately 5, whereas at pH values <5, they are spontaneously converted to the lactone form. The dibasic salt form is highly soluble in aqueous media, whereas the lactone form is insoluble in aqueous media, so that the former shows higher bioavailability in the gastrointestinal tract compared to the latter. Therefore, optimization of the formulation to adequately compensate for the pH value of the gastrointestinal tract is perhaps the most important parameter affecting bioavailability. For example, in the stomach, where pH values are <4, dissolved HX compounds are rapidly converted to the insoluble lactone form. Once in the lactone form, HX compounds show hysteresis and prevent saponification back to the absorbable salt form, slowing or inhibiting downstream bioavailability.

しかしながら、腔内ｐＨ値は、胃の強い酸性から十二指腸のｐＨ６前後に急激に上昇し、さらに小腸のｐＨ６から回腸末端のｐＨ約７．４に上昇する。ｐＨは、盲腸において５．７に低下した後、直腸ではｐＨ６．７に徐々に上昇する［ｐｕｂｍｅｄ．ｎｃｂｉ．ｎｌｍ．ｎｉｈ．ｇｏｖ／１０４２１９７８／］。したがって、好ましいｐＨ値が溶解性で吸収性の二塩基性塩の形態でのＨＸ化合物の遊離を容易にする腸内遊離を達成するように薬学的製剤の技術における標準的な手段を適用することによって、バイオアベイラビリティが最適化される。However, the intraluminal pH value rises rapidly from the strong acidity of the stomach to around pH 6 in the duodenum, and then from pH 6 in the small intestine to about pH 7.4 in the terminal ileum. The pH drops to 5.7 in the cecum, and then gradually rises to pH 6.7 in the rectum [pubmed. ncbi. nlm. nih. gov/10421978/]. Thus, bioavailability is optimized by applying standard measures in the art of pharmaceutical formulations to achieve intestinal release where a favorable pH value facilitates the release of the HX compound in the form of a soluble and absorbable dibasic salt.

１２ヶ月間の処置レジメンの場合、これらのデータは、およそ１μＭ（１ｍｇ／Ｌ）という目標濃度が血流中で達成されることを示している。血液量が体重のおよそ１０％（すなわち、約７Ｌ）を構成する７０ｋｇの成人の場合、これは、７ｍｇのＨＸ化合物／日という吸収を暗に示している。バイオアベイラビリティが、投与されたＨＸ化合物の１％に限定される場合、この目標血中濃度を達成するためには、１日あたり７００ｍｇの経口（ＰＯ）ＨＸ化合物が必要であり得る。For a 12-month treatment regimen, these data indicate that a target concentration of approximately 1 μM (1 mg/L) is achieved in the bloodstream. For a 70 kg adult whose blood volume constitutes approximately 10% of body weight (i.e., approximately 7 L), this implies an absorption of 7 mg of HX compound/day. If bioavailability were limited to 1% of the administered HX compound, then 700 mg of oral (PO) HX compound per day may be required to achieve this target blood concentration.

しかしながら、吸収を投与用量の５０％に最適化することによって、必要なＰＯ用量は、１日あたりおよそ１５ｍｇに減少する。より短い処置レジメン（すなわち、３ヶ月間）の場合、これらのデータは、およそ１０μＭ（１０ｍｇ／Ｌ）という目標血中濃度が達成されることを示している。バイオアベイラビリティが１％であると仮定すると、１日あたり７ｇのＰＯのＨＸ化合物が必要であるのに対して、バイオアベイラビリティが５０％となると、必要量が、１日あたりおよそ１５０ｍｇに減少する。However, by optimizing absorption to 50% of the administered dose, the required PO dose is reduced to approximately 15 mg per day. For shorter treatment regimens (i.e., 3 months), these data indicate that a target blood concentration of approximately 10 μM (10 mg/L) is achieved. Assuming a 1% bioavailability, 7 g of HX compound per day PO would be required, whereas a 50% bioavailability reduces the requirement to approximately 150 mg per day.

企図される１つの薬学的組成物は、ハロゲン化キサンテン化合物（ＨＸ化合物）である第１の白血病用細胞傷害剤の０．１％～約２０％（ｗ／ｖ）水性媒体（液体として）を含む。より好ましくは、その濃度は、約０．２～約１０％（ｗ／ｖ）であり、最も好ましくは、その濃度は、約０．２～約５％（ｗ／ｖ）である。したがって、例えば、１日あたり１５０ｍｇという上記の用量は、３ｍＬの５％（ｗ／ｖ）水溶液を用いることによって容易に達成され得る。One contemplated pharmaceutical composition comprises a 0.1% to about 20% (w/v) aqueous medium (as a liquid) of a first leukemic cytotoxic agent that is a halogenated xanthene compound (HX compound). More preferably, the concentration is about 0.2 to about 10% (w/v), and most preferably, the concentration is about 0.2 to about 5% (w/v). Thus, for example, the above dose of 150 mg per day can be readily achieved by using 3 mL of a 5% (w/v) aqueous solution.

特に好ましいハロゲン化キサンテン塩は、ローズベンガル（４，５，６，７－テトラクロロ－２’，４’，５’，７’－テトラヨードフルオレセイン）二ナトリウム（ＲＢ二ナトリウム）塩である。薬学的組成物は、治療有効量の第１の白血病用細胞傷害剤を、白血病、又はより詳細には、Ｔ－ＡＬＬもしくはＢ－ＡＬＬのような急性リンパ芽球性白血病（ＡＬＬ）、慢性リンパ性白血病（ＣＬＬ）又は急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）を有するヒトなどの哺乳動物に提供するために経口投与される。A particularly preferred halogenated xanthene salt is Rose Bengal (4,5,6,7-tetrachloro-2',4',5',7'-tetraiodofluorescein) disodium (RB disodium) salt. The pharmaceutical composition is orally administered to provide a therapeutically effective amount of a first leukemic cytotoxic agent to a mammal, such as a human, having leukemia, or more specifically, acute lymphoblastic leukemia (ALL), such as T-ALL or B-ALL, chronic lymphocytic leukemia (CLL), or acute myeloid leukemia (AML).

哺乳動物被験体は、通常、複数回処置される。白血病細胞を殺滅する事実及び相対量は、所与の白血病の哺乳動物被験体の状態をアッセイするための通常の手段によって明らかにされ得る。維持の持続時間とさらなる投与を行う選択との両方が、哺乳動物の種、個別の哺乳動物被験体、疾患の重症度、疾患のタイプ、被験体の年齢及び健康状態、並びに処置によって引き起こされる白血病細胞の負荷に対して観察される影響に依存し得る。これらの因子は、通常、白血病を処置する分野の熟練の医師によって対処される。Mammalian subjects are usually treated multiple times. The fact and relative amount of leukemic cell killing can be determined by routine means for assaying the status of a mammalian subject with a given leukemia. Both the duration of maintenance and the choice to administer further doses can depend on the mammalian species, the individual mammalian subject, the severity of the disease, the type of disease, the age and health of the subject, and the observed effect on the leukemic cell burden caused by the treatment. These factors are usually addressed by a physician skilled in the art of treating leukemia.

さらに、通常は、検出可能な白血病細胞を身体から取り除くことが望まれるが、必ずしもそれを行うことができるわけではない。十分な白血病細胞を殺滅して当該疾患を静穏化させること、又は白血病細胞の負荷を低減して他の治療法を行うことができるようにすることで十分なときもある。Furthermore, although it is usually desirable to rid the body of detectable leukemic cells, this is not always possible. Sometimes it is sufficient to kill enough leukemic cells to render the disease quiescent or to reduce the leukemic cell burden so that other therapies can be administered.

本明細書中以後に提供されるデータは、インビトロにおけるいくつかの白血病細胞株に対してＲＢを使用する場合のＩＣ_５０値が、１日から数日の曝露に対して約５０～約１００μＭであることを説明している。ＲＢ二ナトリウムの分子量が、１０１８ｇ／モルであることを考慮すると、上記のＩＣ_５０の値は、約５０～約１００ｍｇのＲＢ／リットルと計算される。インビボ処置中に白血病細胞と接触させるために、その濃度を達成することが好ましい。 Data provided hereinafter demonstrate that_IC50 values for RB against several leukemia cell lines in vitro are about 50 to about 100 μM for exposures of one to several days. Considering that the molecular weight of RB disodium is 1018 g/mol, the above_IC50 values calculate to about 50 to about 100 mg RB/liter. It is preferred to achieve this concentration for contacting leukemia cells during in vivo treatment.

ＲＢを用いた肝機能の古典的な静脈内（ＩＶ）診断法は、単回のＩＶ用量として１００ｍｇのＲＢを投与して行われた。ＰＶ－１０（登録商標）ＲＢ二ナトリウム水溶液の臨床試験において、ＲＢは、ＩＶ送達の１５００ｍｇにおいて許容された。成人の標準的な血液量は、およそ５Ｌである。したがって、血中において１００ｍｇ／Ｌを達成するために、成人患者は、およそ５００ｍｇのＲＢをＩＶ投与される必要があり得、それにより、ＩＣ_５０値が血流中で達成される。ＲＢが循環から迅速にクリアランスされる（ｔ_１／２が約３０分である）ことに起因して、循環中のＲＢのピークレベルを維持するために（すなわち、最大数時間又はそれ以上にわたって）、ＩＶ投与は、持続注入を必要とし得る。 Classical intravenous (IV) diagnostics of liver function with RB was performed with 100 mg of RB administered as a single IV dose. In clinical trials of PV-10® RB disodium aqueous solution, RB was tolerated at 1500 mg of IV delivery. The standard blood volume of an adult is approximately 5 L. Thus, to achieve 100 mg/L in the blood, an adult patient may need to receive approximately 500 mg of RB IV, thereby achieving an IC₅₀ value in the bloodstream. Due to the rapid clearance of RB from the circulation (t_½ is approximately 30 minutes), IV administration may require continuous infusion to maintain peak levels of RB in the circulation (i.e., for up to several hours or longer).

ＩＣ_５０値レベルでの投与は、循環している血液学的な非腫瘍性の白血病細胞すべてに対して毒性であるわけではないだろう。すなわち、ＩＣ_５０値ではおよそ半数の細胞だけしか影響を受けないだろう。ゆえに、ＲＢをＩＣ_５０値の倍数、最大およそ１５００ｍｇ（すなわち、３００μＭ）で投与することが好ましいことがある。 Dosing at_IC50 levels will not be toxic to all circulating hematologic non-neoplastic leukemic cells, i.e., only about half of the cells will be affected at the_IC50 level. Therefore, it may be preferable to administer RB at multiples of the_IC50 , up to about 1500 mg (i.e., 300 μM).

あるいは、残存する白血病の負荷に対して機能的な免疫応答を惹起するために、白血病細胞の一部だけを殺滅することで十分である場合がある。迅速に殺滅される白血病細胞が大量に存在することに起因する毒性反応（すなわち、いわゆる「腫瘍崩壊症候群」）を回避するために、後者の場合が好ましいことがある。この状況では、ハロゲン化キサンテンの白血病細胞に対する細胞傷害性が原因の白血病細胞の残屑は、カリウムなどの細胞内内容物を放出して、非特異的な細胞死を引き起こす。このプロセスは、悪性細胞に対して特異的に免疫系を活性化することもある。Alternatively, it may be sufficient to kill only a portion of the leukemic cells in order to elicit a functional immune response against the remaining leukemic burden. The latter case may be preferred to avoid toxic reactions due to the presence of a large number of rapidly killed leukemic cells (i.e., the so-called "tumor lysis syndrome"). In this situation, leukemic cell debris due to the cytotoxicity of halogenated xanthenes to leukemic cells releases intracellular contents such as potassium, leading to nonspecific cell death. This process may also activate the immune system specifically against the malignant cells.

先に列挙された同様に有用なハロゲン化キサンテン化合物及びそれらの薬学的に許容され得る塩は、互いに約３倍異なる分子量を有し得る（表３、米国特許第７，３９０，６８８号、カラム１５～１６を参照のこと）。使用されるＲＢ以外のハロゲン化キサンテンの正確な量は、そのような各化合物及びＲＢ又はＲＢ二ナトリウムの公表された分子量に基づいて算出されることが好ましい。The similarly useful halogenated xanthene compounds and their pharma-ceutically acceptable salts listed above may have molecular weights that differ from one another by about a factor of three (see Table 3, U.S. Pat. No. 7,390,688, columns 15-16). The exact amount of halogenated xanthene other than RB used is preferably calculated based on the published molecular weight of each such compound and RB or disodium RB.

処置を必要とし（哺乳動物被験体）、且つハロゲン化キサンテン化合物を含む薬学的組成物を投与され得る、白血病を有する哺乳動物被験体は、ヒトなどの霊長類、チンパンジーもしくはゴリラなどの類人猿、カニクイザルもしくはマカクなどのサル、ラット、マウスもしくはウサギなどの実験動物、イヌ、ネコ、ウマなどの伴侶動物、又は雌ウシもしくは雄子牛、ヒツジ、子ヒツジ、ブタ、ヤギ、ラマなどの食用動物などであり得る。The mammalian subject having leukemia in need of treatment (mammalian subject) and who may be administered a pharmaceutical composition comprising a halogenated xanthene compound may be a primate such as a human, an ape such as a chimpanzee or a gorilla, a monkey such as a cynomolgus monkey or a macaque, a laboratory animal such as a rat, a mouse or a rabbit, a companion animal such as a dog, a cat, a horse, or a food animal such as a cow or a bull calf, a sheep, a lamb, a pig, a goat, a llama, etc.

本発明の１つの態様において、経口投与用の企図されるＨＸ化合物は、通常、滅菌された水性薬学的組成物に溶解又は分散された状態で使用される。滅菌された水道水又は別の起源からの滅菌水を使用することができる。In one aspect of the invention, the HX compounds contemplated for oral administration are typically used dissolved or dispersed in a sterile aqueous pharmaceutical composition. Sterile tap water or sterile water from another source can be used.

企図される液体薬学的組成物の特色
ＨＸ化合物は、通常、企図される水性薬学的組成物中に約０．１～約２０％（ｗ／ｖ）で存在する。より好ましくは、その濃度は、約０．２～約１０％（ｗ／ｖ）であり、最も好ましくは、その濃度は、約０．２～約５％（ｗ／ｖ）である。したがって、例えば、１日あたり１５０ｍｇという上記の用量は、３ｍＬの５％（ｗ／ｖ）水溶液を用いることによって容易に達成され得る。 Features of Contemplated Liquid Pharmaceutical Compositions The HX compound is typically present in contemplated aqueous pharmaceutical compositions at about 0.1 to about 20% (w/v). More preferably, the concentration is about 0.2 to about 10% (w/v), and most preferably, the concentration is about 0.2 to about 5% (w/v). Thus, for example, the above dose of 150 mg per day can be readily achieved by using 3 mL of a 5% (w/v) aqueous solution.

ローズベンガル二ナトリウムなどの様々なＨＸ化合物のバイオアベイラビリティは、まだ十分に特徴付けられていない。譲受人の１人が委託した研究では、水溶液中の^１４Ｃ－ＲＢをマウスに経口投与した放射標識研究に基づくと、ローズベンガル二ナトリウムのバイオアベイラビリティは、１％未満（＜１％）であると結論付けられた。ｐＨ値が＜４である胃において、ＨＸ化合物は、ラクトン型である可能性が高い。胃でのラクトンへの変換は、そのＨＸ化合物を破壊しないが、このようなラクトン型への変換は、腸での吸収に必要な可溶性塩の形態への再変換に対して動態学的及び熱力学的な障壁となり得る。 The bioavailability of various HX compounds, such as disodium rose bengal, has not yet been fully characterized. A study sponsored by one of the assignees concluded that the bioavailability of disodium rose bengal was less than one percent (<1%) based on radiolabeling studies in which^14C -RB was orally administered to mice in aqueous solution. In the stomach, where pH values are <4, the HX compounds are likely in the lactone form. Although conversion to lactone in the stomach does not destroy the HX compound, such conversion to the lactone form may pose kinetic and thermodynamic barriers to reconversion to the soluble salt form required for intestinal absorption.

米国特許出願第１７／２１４５９０で論じられている、Ａｐｃ^ｍｉｎマウスを用いた研究は、飲料水中の４ｍｇ／ｍＬを自由に消費したそれらのマウスが、疾患の発症を停止したことを示した。それにより、それらのＡｐｃ^ｍｉｎマウスは、およそ８ｍｇ／１０ｇ／日＝８００ｍｇ／ｋｇ／日を消費したと理解される。その量は、そのような用量に耐えられることを示す毒性学データと一致する。例えば、食品着色料（Ｆｏｏｄ Ｒｅｄ Ｎｏ．１０５）としてのローズベンガルを調べたＩｔｏ ｅｔ ａｌ．，Ｊ Ｎａｔｌ Ｃａｎｃｅｒ Ｉ，７７：２７７－２８１（１９８６）では、Ｃ５７ＢＬ６Ｎマウスに対して９７０ｍｇ／ｋｇ／日という用量で２年間、継続的に自由に摂取させたローズベンガルに十分耐えられることが見出されている。以前に使用された静脈内（ＩＶ）肝臓診断薬は、標準的な６０ｋｇの成人の場合の１．９ｍｇ／ｋｇと等しい、１１２ｍｇのローズベンガルをボーラスとして送達されていたが、これは、罹患をもたらすと報告されていない。 A study with Apc^min mice, discussed in U.S. Patent Application Serial No. 17/214590, showed that those mice consuming 4 mg/mL ad libitum in their drinking water stopped developing the disease. It is understood that the Apc^min mice thereby consumed approximately 8 mg/10 g/day = 800 mg/kg/day, an amount consistent with toxicological data showing that such doses are tolerable. For example, Ito et al., J Natl Cancer I, 77:277-281 (1986), which examined Rose Bengal as a food coloring (Food Red No. 105), found that Rose Bengal was well tolerated in C57BL6N mice at a dose of 970 mg/kg/day given ad libitum continuously for two years. Previously used intravenous (IV) liver diagnostics consisted of 112 mg of Rose Bengal delivered as a bolus, equivalent to 1.9 mg/kg in a standard 60 kg adult, but this has not been reported to cause morbidity.

経口投与用の液体薬学的組成物は、血漿の浸透圧未満の浸透圧を有することが好ましい。血漿の浸透圧の正常な（十分な）ヒト参照範囲は、１キログラムあたり約２７５～２９９ミリオスモル（ｍＯｓｍ／ｋｇ）である。Liquid pharmaceutical compositions for oral administration preferably have an osmolality less than that of plasma. The normal (sufficient) human reference range for plasma osmolality is approximately 275-299 milliosmoles per kilogram (mOsm/kg).

より好ましくは、その組成物は、マンニトール及びデキストロースのような糖などの等張化剤（又は張度調整剤）、プロピレングリコール、グリセロール及びソルビトールなどのＣ_３－Ｃ_６ポリヒドロキシ化合物、塩化ナトリウムもしくは塩化カリウムなどの等張塩、並びに／又は風味及び穏やかな緩衝作用（５ｍｍｏｌ未満の緩衝剤）のために提供され得る、クエン酸、リンゴ酸、酢酸及び他の食物の酸並びにそれらの塩などの緩衝剤以外の緩衝剤を含まない。胃及び下部消化管は、通過する材料に対して適切な張度を提供するように十分適合されており、さらなる塩及び／又は緩衝剤を必要としない。周知であるように１つ以上の薬学的に許容され得る味覚マスキング剤又は香味料は、組成物の飲用性を高めるために最大約５重量％で存在できる。 More preferably, the composition does not contain any buffering agents other than isotonicity agents (or tonicity adjusters) such as sugars, such as mannitol and dextrose,_C3 -_C6 polyhydroxy compounds, such as propylene glycol, glycerol and sorbitol, isotonicity salts, such as sodium chloride or potassium chloride, and/or buffering agents such as citric acid, malic acid, acetic acid and other food acids and their salts, which may be provided for flavor and gentle buffering action (less than 5 mmol of buffering agent). The stomach and lower gastrointestinal tract are well adapted to provide appropriate tonicity to materials passing therethrough and do not require additional salts and/or buffering agents. As is well known, one or more pharma- ceutically acceptable taste masking agents or flavorings may be present at up to about 5% by weight to enhance the palatability of the composition.

水性ビヒクル中でＨＸ化合物の最大溶解度を得るため、及び生物学的組織との適合性を確保するためには、薬学的に許容され得る水性希釈剤のｐＨ値が約５～約９であることが好ましい。特に好ましいｐＨ値は、約５～約８であり、より好ましくは、約６～約７．５である。これらのｐＨ値では、ハロゲン化キサンテンは通常、低ｐＨ値で形成されるラクトンではなく、二塩基性の形態のままである。To obtain maximum solubility of the HX compound in the aqueous vehicle and to ensure compatibility with biological tissues, it is preferred that the pH value of the pharma-ceutically acceptable aqueous diluent be from about 5 to about 9. Particularly preferred pH values are from about 5 to about 8, and more preferably from about 6 to about 7.5. At these pH values, the halogenated xanthenes typically remain in the dibasic form rather than the lactones that are formed at lower pH values.

ローズベンガルなどのＨＸ化合物は、２．５２及び１．８１というｐＫａ値を有する二塩基性である。いくつかの企図されるハロゲン化キサンテンに対するｐＫａ値の決定は、Ｂａｔｓｉｔｅｌａ ｅｔ ａｌ．，Ｓｐｅｃｔｒｏｃｈｉｍ Ａｃｔａ Ｐａｒｔ Ａ ７９（５）：８８９－８９７（２０１１年９月）に見られる。HX compounds such as Rose Bengal are dibasic with pKa values of 2.52 and 1.81. Determinations of pKa values for some contemplated halogenated xanthenes can be found in Batsitela et al., Spectrochim Acta Part A 79(5):889-897 (September 2011).

本発明において、ここでの目的が最終的に、細胞傷害濃度のハロゲン化キサンテン化合物を、白血病細胞をハロゲン化キサンテン化合物と接触できる白血病細胞環境に提供することであるので、その組成物が腫瘍に病巣内注射される場合のように、薬学的組成物中のハロゲン化キサンテン化合物の具体的な量は、重要ではないと考えられている。本明細書中の以後に提供されるデータは、ローズベンガル二ナトリウムのＩＣ_５０濃度が、インビトロで培養された白血病細胞に対して約５０～約１００μＭであることを示している。 In the present invention, the specific amount of halogenated xanthene compound in the pharmaceutical composition is not believed to be critical since the objective here is ultimately to provide a cytotoxic concentration of the halogenated xanthene compound to a leukemic cell environment where the leukemic cells can contact the halogenated xanthene compound, such as when the composition is injected intralesionally into a tumor. Data provided hereinafter indicates that the_IC50 concentration of Rose Bengal disodium is about 50 to about 100 μM for leukemic cells cultured in vitro.

インビトロで培養された白血病細胞を用いたときの上記で述べた結果は驚いたことに、Ｓｗｉｆｔ ｅｔ ａｌ．，ＯｎｃｏＴａｒｇｅｔｓ ａｎｄ Ｔｈｅｒａｐｙ １２：１－１５（２０１９）によって報告された、培養されたＳＫ－Ｎ－ＡＳ、ＳＫ－Ｎ－ＢＥ（２）、ＩＭＲ５、ＬＡＮ１、ＳＨＥＰ及びＳＫ－Ｎ－ＳＨ神経芽腫細胞、ＳＫ－Ｎ－ＭＣ神経上皮腫細胞、並びに正常な初代線維芽細胞、ＢＪ線維芽細胞及びＷＩ３８線維芽細胞のインビトロ細胞傷害性研究において得られたデータと類似のデータを提供した。その著者らは、ＰＶ－１０（登録商標）ＲＢ二ナトリウム水溶液で処置された細胞に対する最大半量阻害濃度（ＩＣ_５０）値が、処置の９６時間後において、アッセイされた神経芽細胞腫株に対しては６５～８５μＭ、及び神経上皮腫株ＳＫ－Ｎ－ＭＣに対しては４９μＭであったことを報告した。その著者らは、３つの組織起源からのヒト上皮細胞に対する毒性も調べ、９３～１４３μＭというＩＣ_５０値を報告した。 The results described above with in vitro cultured leukemia cells surprisingly provided similar data to those obtained in an in vitro cytotoxicity study of cultured SK-N-AS, SK-N-BE(2), IMR5, LAN1, SHEP and SK-N-SH neuroblastoma cells, SK-N-MC neuroepithelioma cells, as well as normal primary fibroblasts, BJ fibroblasts and WI38 fibroblasts reported by Swift et al., OncoTargets and Therapy 12:1-15 (2019), in which the authors reported half-maximal inhibitory concentration (IC₅₀ ) values for cells treated with PV-10® RB disodium in water of 65-85 μM for the neuroblastoma lines assayed and 49 μM for the neuroepithelioma line SK-N-MC after 96 hours of treatment. The authors also examined toxicity against human epithelial cells from three tissue origins and reported IC₅₀ values ranging from 93 to 143 μM.

ＰＶ－１０（登録商標）ＲＢ二ナトリウム水溶液の臨床研究において、ＲＢは、ＩＶ送達された１５００ｍｇにおいて許容された。ＲＢが循環から迅速にクリアランスされる（ｔ_１／２が約３０分である）ことに起因して、ＩＶ投与は、単回の投与の間に、循環中のＲＢのピークレベルを維持するために（すなわち、最大数時間又はそれ以上にわたって）、持続注入を必要とし得る。 In clinical studies of PV-10® RB disodium aqueous solution, RB was tolerated at 1500 mg delivered IV. Because RB is rapidly cleared from the circulation (t_½ is approximately 30 minutes), IV administration may require continuous infusion to maintain peak levels of RB in the circulation between single doses (i.e., for up to several hours or longer).

企図される固体薬学的組成物の特色
ＲＢもしくはＲＢ二ナトリウムなどのＨＸ化合物又はＲＢラクトンなどのＨＸ化合物ラクトンが、胃を通過して腸でＨＸ化合物を放出するために腸溶コーティングされた、経口投与用の固体の薬学的組成物として投与されることがさらに企図される。ＨＸ化合物は、通常、固体の希釈媒体中に溶解されているか、又は希釈媒体に溶解もしくは希釈媒体上に分散されている。 Features of Contemplated Solid Pharmaceutical Compositions It is further contemplated that the HX compound, such as RB or disodium RB, or the HX compound lactone, such as RB lactone, is administered as a solid pharmaceutical composition for oral administration that is enteric coated to pass through the stomach and release the HX compound in the intestine. The HX compound is typically dissolved in a solid diluent medium or dissolved in or dispersed on the diluent medium.

経口投与された固体の医薬製品の哺乳動物の身体内での溶解において果たされる因子がいくつかある。それらの因子には、消化管に沿った種々の位置における薬剤の滞留時間、粒径、口から肛門までに遭遇する可能性のある体液における薬剤の個々の成分の溶解度、様々なコーティング層が存在する場合にはそれらが薬剤に適用される順序、並びに特定のコーティング層が可溶性であるｐＨ値が含まれる。There are several factors that play a role in the dissolution of an orally administered solid pharmaceutical product in the mammalian body. These factors include the residence time of the drug at various locations along the digestive tract, particle size, the solubility of the individual components of the drug in the bodily fluids that may be encountered from the mouth to the anus, the order in which various coating layers, if present, are applied to the drug, and the pH values at which a particular coating layer is soluble.

例えば、強酸性の胃の環境（絶食状態ではｐＨ１．５～２、摂食状態ではｐＨ３～６）は、十二指腸において約ｐＨ６に急上昇し、回腸末端のｐＨ７．４まで小腸に沿って上昇する。盲腸のｐＨ値は、ｐＨ６をわずかに下回り、結腸で再び上昇して直腸でｐＨ６．７に達する［Ｈｕａ，Ｆｒｏｎｔ Ｐｈａｒｍａｃｏｌ １１：Ａｒｔｉｃｌｅ ５２４（２０２０年４月）］。ヒトの胃のｐＨ値を有する水溶液にＲＢ二ナトリウムの溶液を混合したのを観察したところ、その混合物は急速に混濁し、それまで可溶性であったＲＢ二ナトリウムがおそらくラクトン型に凝集することが明らかになった。For example, the highly acidic stomach environment (pH 1.5-2 in the fasted state, pH 3-6 in the fed state) rises sharply to about pH 6 in the duodenum and increases along the small intestine to a pH of 7.4 at the terminal ileum. The pH value in the cecum drops slightly below pH 6 and rises again in the colon to reach a pH of 6.7 in the rectum [Hua, Front Pharmacol 11:Article 524 (April 2020)]. When a solution of disodium RB was mixed with an aqueous solution having a pH value of the human stomach, the mixture rapidly became turbid, revealing that the previously soluble disodium RB aggregated, presumably to the lactone form.

胃の通過は、絶食状態で０～２時間の範囲であり得、摂食状態では最大６時間まで延長し得る。一般に、小腸の通過時間は、３～４時間前後で比較的一定と考えられているが、健康個体では２～６時間の幅があり得る。結腸の通過時間は、大きく変動することがあり、６～７０時間の範囲が報告されている［Ｈｕａ，Ｆｒｏｎｔ Ｐｈａｒｍａｃｏｌ １１：Ａｒｔｉｃｌｅ ５２４（２０２０年４月）］。Gastric transit can range from 0 to 2 hours in the fasted state and can extend up to 6 hours in the fed state. Small intestinal transit time is generally considered to be relatively constant around 3-4 hours, but can range from 2 to 6 hours in healthy individuals. Colonic transit time can vary widely, with a reported range of 6 to 70 hours [Hua, Front Pharmacol 11:Article 524 (April 2020)].

薬物が循環器系に吸収されるためには、消化管の内壁を裏打ちする上皮細胞を通過又は透過しなければならない。所与の薬物の上皮細胞による吸収を防ぐことができる細胞バリアは、細胞膜である。細胞膜は、本質的に、半透膜を形成する脂質二重層である。For a drug to be absorbed into the circulatory system, it must pass through or permeate the epithelial cells that line the inner wall of the digestive tract. The cellular barrier that can prevent a given drug from being absorbed by epithelial cells is the cell membrane. The cell membrane is essentially a lipid bilayer that forms a semipermeable membrane.

純粋な脂質二重層は、一般に、無電荷の小さな溶質のみ透過させる。ゆえに、イオン性分子は帯電しているので、分子がイオン化しているか否かが吸収に影響する。溶解度は、荷電種に有利に働き、透過度は、中性種に有利に働く。Pure lipid bilayers are generally permeable only to small, uncharged solutes. Therefore, ionic molecules are charged, and whether a molecule is ionized or not affects absorption. Solubility favors charged species, and permeability favors neutral species.

上皮細胞膜は、リン脂質二重層で構成されているので、通常、イオンは、消化管を通って受動的に拡散することができない。この二重層は、２層のリン脂質で構成されており、帯電した親水性頭部が外側を向いており、帯電していない疎水性脂肪酸鎖が、層の中央に存在する。無電荷の脂肪酸鎖は、イオン化した荷電分子に反発する。これは、イオン化した分子が、腸管膜を容易に通過できず、吸収されないことを意味する。Ions normally cannot passively diffuse through the digestive tract because epithelial cell membranes are composed of a phospholipid bilayer. This bilayer is made up of two layers of phospholipids with the charged hydrophilic heads facing outwards and the uncharged hydrophobic fatty acid chains in the middle of the layer. The uncharged fatty acid chains repel ionized charged molecules. This means that ionized molecules cannot easily cross the intestinal membrane and are not absorbed.

エステル化による化学修飾を用いることにより、溶解度を制御することができる。例えば、ＨＸ化合物のＣ_２－Ｃ_４アルキルエステル及び芳香族エステルの形態は、通常、水性液体への溶解度が低く、そのイオン電荷が中性であるため、通常、カルボン酸の形態よりも腸上皮細胞によってより良好に取り込まれる。後に、消化管壁内及び血液中のエステラーゼが、これらのエステルを加水分解することにより、親薬物が放出される。 Chemical modification by esterification can be used to control solubility. For example,_C2 -_C4 alkyl and aromatic ester forms of HX compounds are usually less soluble in aqueous fluids and, due to their neutral ionic charge, are usually taken up better by intestinal epithelial cells than the carboxylic acid forms. Esterases in the gut wall and in the blood subsequently hydrolyze these esters, releasing the parent drug.

また、錠剤又はペレットへのコーティングフィルムは、一般に水性媒体中、特に胃における、組成物の溶解及び／又は崩壊の速度を低下させるバリアとして作用することができる。コーティングは、溶解が起きる場所を変更するためにも使用することができる。例えば、薬物を含む薬剤に腸溶コーティングを適用することができ、その結果、そのコーティング及び薬物は、腸の基本的な環境でのみ溶解する。消化管の腸の部分及び／又は消化管の特定の位置における薬剤からの薬物の予測可能な放出にとって有用なアプローチの１つは、事前に選択された消化管のｐＨ値（例えば、先に述べたもの）において溶解又は崩壊するｐＨ特異的なコーティング及びマトリックスに依存するものである。Coating films on tablets or pellets can also act as a barrier to slow the rate of dissolution and/or disintegration of the composition in aqueous media in general, and in the stomach in particular. Coatings can also be used to modify where dissolution occurs. For example, an enteric coating can be applied to a drug-containing formulation, such that the coating and drug dissolve only in the basic environment of the intestine. One useful approach for predictable release of drug from a formulation in intestinal segments and/or specific locations in the digestive tract relies on pH-specific coatings and matrices that dissolve or disintegrate at preselected digestive tract pH values (e.g., those mentioned above).

下記の表は、標的化放出（局所処置）の目的で単独又は組み合わせで使用されてきたｐＨ依存性ポリマーコーティングのいくつかの例を示しており、それには、いくつかのメタクリル樹脂（Ｅｕｄｒａｇｉｔ（登録商標）としてＥｖｏｎｉｋ Ｉｎｄｕｓｔｒｉｅｓ，ＡＧ，Ｅｓｓｅｎ，Ｇｅｒｍａｎｙから商業的に入手可能）及びヒドロキシプロピルメチルセルロース（ＨＰＭＣ；Ｍｅｔｈｏｃｅｌ（商標）としてＤｕＰｏｎｔ，Ｗｉｌｍｉｎｇｔｏｎ，ＤＥから入手可能、及びＢｅｎｅｃｅｌ（商標）としてＡｓｈｌａｎｄ，Ｉｎｃ．，Ｗｉｌｍｉｎｇｔｏｎ，ＤＥから入手可能）誘導体も含まれる。腸溶コーティングは、特定のｐＨ値範囲において放出の引き金を引くことに加えて、組み込まれた活性な作用物質を苛酷な消化管環境（例えば、胃液、胆汁酸及び微生物分解）から保護でき、延長及び遅延された薬物放出プロファイルをもたらして、治療効率を高めることができる。The table below shows some examples of pH-dependent polymer coatings that have been used alone or in combination for targeted release (localized treatment), including some methacrylic resins (commercially available as Eudragit® from Evonik Industries, AG, Essen, Germany) and hydroxypropyl methylcellulose (HPMC; available as Methocel™ from DuPont, Wilmington, DE, and as Benecel™ from Ashland, Inc., Wilmington, DE) derivatives. In addition to triggering release at a specific pH range, enteric coatings can protect incorporated active agents from the harsh gastrointestinal environment (e.g., gastric juices, bile acids, and microbial degradation) and can provide an extended and delayed drug release profile to enhance therapeutic efficacy.

各ポリマーに対する「公開されている放出ｐＨ」値は、製造者からのものである。この「公開されている放出ｐＨ」値は、すべての組成物又は環境に対して絶対的なものではなく、本明細書中で述べられる溶解又は崩壊のためのｐＨ値は、これらの公開された値に基づく。The "published release pH" values for each polymer are from the manufacturer. These "published release pH" values are not absolute for all compositions or environments, and the pH values for dissolution or disintegration stated herein are based on these published values.

従来の非標的化療法は、標的部位に到達する前に薬物が全身に吸収されるため、望ましくない副作用及び低い有効性を有することがあるので、結腸での放出のために、結腸を標的とした薬物送達系が盛んに探求されている。Ｌｉｕ ｅｔ ａｌ．，Ｅｕｒ．Ｊ．Ｐｈａｒｍ．Ｂｉｏｐｈａｒｍ．７４：３１１－３１５（２０１０）は、内層用の、緩衝剤を含む、Ｅｕｄｒａｇｉｔ（登録商標）Ｓのアルカリ性水溶液、及び外層用のＥｕｄｒａｇｉｔ（登録商標）Ｓの有機溶液を使用することによって、二重コーティングのアプローチを採用し、７を超えるｐＨでの薬物溶解を加速させた。続いて、Ｖａｒｕｍ ｅｔ ａｌ．，Ｅｕｒ．Ｊ．Ｐｈａｒｍ．Ｂｉｏｐｈａｒｍ．８４：５７３－５７７（２０１３）は、この二重コーティングされた系のインビボ性能をヒトにおいて評価したところ、二重コーティングされた錠剤が、主に下部腸管において、より安定して崩壊することが実証された。Since traditional non-targeted therapies can have undesirable side effects and low efficacy due to systemic absorption of drugs before reaching the target site, colon-targeted drug delivery systems are being actively explored for release in the colon. Liu et al., Eur. J. Pharm. Biopharm. 74:311-315 (2010) adopted a dual-coating approach to accelerate drug dissolution at pH above 7 by using an alkaline aqueous solution of Eudragit® S with buffer for the inner layer and an organic solution of Eudragit® S for the outer layer. Subsequently, Varum et al., Eur. J. Pharm. Biopharm. 84:573-577 (2013) evaluated the in vivo performance of this double-coated system in humans and demonstrated that the double-coated tablets disintegrated more stably, primarily in the lower intestinal tract.

Ｈａｓｈｅｍ ｅｔ ａｌ．，Ｂｒ．Ｊ．Ｐｈａｒｍ．Ｒｅｓ．３：４２０－４３４（２０１３）は、プレドニゾロンの結腸送達のために、時間依存性の系とｐＨ依存性の系とを組み合わせたミクロスフェアを開発した。Ｈａｓｈｅｍらは、Ｅｕｄｒａｇｉｔ（登録商標）Ｓとエチルセルロースとの組み合わせを用いることによって、上部腸での薬物の早期放出を防ぎつつ、結腸へのより大きな薬物送達を達成した。Hashem et al., Br. J. Pharm. Res. 3:420-434 (2013) developed microspheres that combined time-dependent and pH-dependent systems for colonic delivery of prednisolone. By using a combination of Eudragit® S and ethylcellulose, Hashem et al. achieved greater drug delivery to the colon while preventing premature release of the drug in the upper intestine.

Ｅｕｄｒａｃｏｌ（登録商標）は、結腸への標的化薬物送達を薬物の遅延放出かつ均一放出で提供する複合技術の別の例である。この系は、ペレットをＥｕｄｒａｇｉｔ（登録商標）ＲＬ／ＲＳ及びＥｕｄｒａｇｉｔ（登録商標）ＦＳ ３０Ｄでコーティングすることに基づき、ｐＨ及び時間に依存した様式で結腸特異的な薬物放出をもたらす［Ｐａｔｅｌ，Ｅｘｐｅｒｔ Ｏｐｉｎ．Ｄｒｕｇ Ｄｅｌｉｖ．８：１２４７－１２５８（２０１１）］。Eudracol® is another example of a combination technology that provides targeted drug delivery to the colon with delayed and uniform release of the drug. The system is based on coating pellets with Eudragit® RL/RS and Eudragit® FS 30D, resulting in colon-specific drug release in a pH- and time-dependent manner [Patel, Expert Opin. Drug Deliv. 8:1247-1258 (2011)].

小腸を標的とする組成物の１つは、約６０～約９５重量％のフリーラジカル重合した、アクリル酸又はメタクリル酸のＣ_１－Ｃ_４－アルキルエステル、及び約５～約４０重量％の、アルキルラジカルに酸性基を含む（メタ）アクリレートモノマーから構成される１層又は複数層の（メタ）アクリレート共重合体でコーティングされた粒状のローズベンガル（ＲＢ）でコーティングされた糖／スクロースビーズの希釈媒体を含む。 One small intestine-targeting composition comprises a dilute medium of granular Rose Bengal_{(RB)-coated sugar/sucrose beads coated with one or more layers of (meth)acrylate copolymers composed of about 60 to about 95% by weight of free-radically polymerized C 1} -C₄ -alkyl esters of acrylic or methacrylic acid, and about 5 to about 40% by weight of (meth)acrylate monomers containing an acidic group on the alkyl radical.

特に好適な（メタ）アクリレート共重合体は、約１０～約３０重量％のメタクリル酸メチル、約５０～約７０重量％のアクリル酸メチル及び約５～約１５重量％のメタクリル酸（Ｅｕｄｒａｇｉｔ（登録商標）ＦＳタイプ）を含む。同様に好適なのは、約２０～約４０重量％のメタクリル酸及び約８０～約６０重量％のメタクリル酸メチル（Ｅｕｄｒａｇｉｔ（登録商標）Ｓタイプ）の（メタ）アクリレート共重合体である。単語「（メタ）アクリレート」は、アクリレートモノマーとメタクリレートモノマーのいずれか又は両方を使用できることを意味するために本明細書中で使用される。Particularly suitable (meth)acrylate copolymers include about 10 to about 30% by weight methyl methacrylate, about 50 to about 70% by weight methyl acrylate, and about 5 to about 15% by weight methacrylic acid (Eudragit® FS type). Also suitable are (meth)acrylate copolymers of about 20 to about 40% by weight methacrylic acid and about 80 to about 60% by weight methyl methacrylate (Eudragit® S type). The word "(meth)acrylate" is used herein to mean that either or both acrylate and methacrylate monomers can be used.

これらのコーティングポリマーは、その粒子が胃から出る前に任意のＨＸ化合物をほとんど放出させない。十二指腸内の流体のｐＨ値は通常、約６であり、回腸に向かって約７．４に上昇する。These coating polymers do not release much of any HX compound before the particle leaves the stomach. The pH value of fluid in the duodenum is normally about 6 and increases to about 7.4 toward the ileum.

通常の錠剤又はロゼンジは、高速ミキサー（ＤＩＯＳＮＡタイプＰ１０，Ｏｓｎａｂｒｕｃｋ，Ｇｅｒｍａｎｙ）において混合されたラクトース（２０％）と活性成分（８０％；ＨＸ化合物）との混合物によって調製され得る。均一な組成物が得られるまで、ポビドン（Ｓｉｇｍａ－Ａｌｄｒｉｃｈ Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ ＧｍｂＨ，Ｂｕｃｈｓ，ＣＨ）などのポリビニルピロリドン（ＰＶＰ）賦形剤を含む水溶液を少量ずつ加える。その湿った粉末混合物をふるいにかける。その後、周知であるように、それらから錠剤を作製し、乾燥させる。Conventional tablets or lozenges can be prepared by mixing lactose (20%) and the active ingredient (80%; HX compound) in a high-speed mixer (DIOSNA type P10, Osnabruck, Germany). An aqueous solution containing a polyvinylpyrrolidone (PVP) excipient such as povidone (Sigma-Aldrich International GmbH, Buchs, CH) is added in small portions until a homogenous composition is obtained. The wet powder mixture is sieved. Tablets are then made from them and dried, as is well known.

その後、得られた錠剤又はロゼンジは、たいてい流動床装置を用いて、好ましくは保護性ポリマーフィルムでコーティングされる。フィルム形成ポリマーは、通常、周知のプロセスによって可塑剤及び離型剤と混合される。そのフィルム形成剤は、この場合、溶液又は懸濁液の形態であり得る。フィルム形成用の賦形剤も、同様に溶解又は懸濁され得る。有機溶媒もしくは水性溶媒又は有機分散剤もしくは水性分散剤が使用され得る。分散液を安定化するために安定剤をさらに使用できる（例えば、Ｔｗｅｅｎ（登録商標）８０又は他の好適な乳化剤もしくは安定剤）。The resulting tablets or lozenges are then preferably coated with a protective polymer film, usually using a fluidized bed apparatus. The film-forming polymer is usually mixed with a plasticizer and a release agent by well-known processes. The film-forming agent can in this case be in the form of a solution or suspension. The film-forming excipients can be dissolved or suspended as well. Organic or aqueous solvents or organic or aqueous dispersants can be used. Stabilizers can additionally be used to stabilize the dispersion (e.g. Tween® 80 or other suitable emulsifiers or stabilizers).

離型剤の例は、モノステアリン酸グリセロールもしくは他の好適な脂肪酸誘導体、ケイ酸誘導体又はタルクである。可塑剤の例としては、プロピレングリコール、フタレート、ポリエチレングリコール、セバケート又はシトレート、並びに上記及び文献で述べられた他の物質が挙げられる。Examples of release agents are glycerol monostearate or other suitable fatty acid derivatives, silicic acid derivatives or talc. Examples of plasticizers include propylene glycol, phthalates, polyethylene glycols, sebacates or citrates, as well as others mentioned above and in the literature.

別の好ましいタイプの薬剤は、水溶性のカプセル又はブリスターであって、そのカプセルが水又は体液において溶解又は崩壊したらすぐにＨＸ化合物を放出する１層以上のポリマー樹脂で覆われた、ローズベンガル二ナトリウム又はローズベンガルラクトンなどのＨＸ化合物の複数の粒子を含む水溶性のカプセル又はブリスターである。カプセルは通常、ゼラチンでできており、ジェルカプセルと称されることが多い。ゼラチンは、動物性の生成物である。菜食主義者向けのカプセルは、ヒドロキシプロピルメチルセルロース（ＨＰＭＣ）でできていることが多い。Another preferred type of formulation is a water-soluble capsule or blister containing a plurality of particles of an HX compound, such as rose bengal disodium or rose bengal lactone, coated with one or more layers of polymeric resin that releases the HX compound as soon as the capsule dissolves or disintegrates in water or body fluids. Capsules are usually made of gelatin and are often referred to as gel capsules. Gelatin is an animal product. Vegetarian capsules are often made of hydroxypropyl methylcellulose (HPMC).

いくつかの実施形態において、ＨＸ化合物は、１以上のポリマーコートで直接積層されることにより、概して球状の形状である粒子が形成される。そのような粒子は、ビーズと称されることが多い。好ましい態様において、粒子（ビーズ）は、約９０重量パーセントが２０メッシュの篩（開口部＝８５０μｍ）スクリーンを通り抜け、約９０重量パーセントが、８０メッシュの篩（開口部＝１８０μｍ）スクリーン上に保持されるようなサイズにされる。In some embodiments, the HX compound is directly coated with one or more polymer coats to form particles that are generally spherical in shape. Such particles are often referred to as beads. In a preferred embodiment, the particles (beads) are sized such that about 90 percent by weight pass through a 20 mesh sieve (openings=850 μm) screen and about 90 percent by weight are retained on an 80 mesh sieve (openings=180 μm) screen.

例示的なｐＨ値感受性のコーティングポリマー樹脂は、上で論じた。コーティングポリマー樹脂のｐＨ値感受性は、上で論じられたものなど、消化管に沿って生理的に存在するｐＨ値に関して理解されるべきである。Exemplary pH-sensitive coating polymer resins are discussed above. The pH-sensitivity of the coating polymer resin should be understood with respect to pH values physiologically present along the gastrointestinal tract, such as those discussed above.

他の実施形態では、概して球形の小さなコアである、糖／デンプンのシード、ノンパレル又は小球などの小さなペレットが、１層又は複数層のＨＸ化合物及び１層以上のポリマーコーティングでコーティングされる。例証的な糖／デンプンコアは、約４０メッシュの篩（４２５ｍｍの開口部）スクリーンから約５０メッシュの篩（３００ｍｍの開口部）スクリーンを通り抜ける糖スフェアＮＦであって、６２．５パーセント以上且つ９１．５パーセント以下のスクロース（乾燥ベースで計算される）を含み、残りは主にデンプンからなる糖スフェアＮＦである（ＵＳＰ ＮＦ １９９５ ２３１３）。In other embodiments, small pellets such as sugar/starch seeds, nonpareils or globules, which are generally spherical small cores, are coated with one or more layers of HX compound and one or more layers of polymer coating. An exemplary sugar/starch core is SugarSpheres NF, which passes through about a 40 mesh sieve (425 mm opening) screen to about a 50 mesh sieve (300 mm opening) screen and contains not less than 62.5 percent and not more than 91.5 percent sucrose (calculated on a dry basis), with the remainder consisting primarily of starch (USP NF 1995 2313).

例証的な例では、１００キログラム（ｋｇ）の量のローズベンガル二ナトリウム、７．１ｋｇの量の架橋カルボキシメチルセルロース（好ましくは、クロスカルメロースナトリウムＮＦ）、及び１１．９ｋｇの量のデンプンＮＦを各々半分に分け、これら３つの成分を一緒にブレンドして、２つの同一のバッチを形成する。各バッチを、Ｆｉｔｚｐａｔｒｉｃｋ Ｍｉｌｌなどの粉砕機を用いて８０メッシュスクリーンに通して粉砕する。次いで、その粉砕された２つのバッチをブレンドして混合物を形成し、それを、当業者に周知の一般に認められた品質保証試験法に従って組成について試験する。In an illustrative example, a 100 kilogram (kg) quantity of Rose Bengal disodium, a 7.1 kg quantity of cross-linked carboxymethylcellulose (preferably croscarmellose sodium NF), and an 11.9 kg quantity of starch NF are each split in half and the three ingredients are blended together to form two identical batches. Each batch is ground through an 80 mesh screen using a grinder such as a Fitzpatrick Mill. The two ground batches are then blended to form a mixture that is tested for composition according to accepted quality assurance testing methods well known to those skilled in the art.

その後、上記ローズベンガル二ナトリウム混合物を３等分し、第１の部分は、そのまま残し、第２及び第３の部分は、それぞれ５０パーセント、３０パーセント及び２０パーセントのロットに分割する。ステンレス鋼コーティングパンに、２５．６ｋｇの量の４０～５０メッシュの糖／デンプンのシード（例えば、糖スフェアＮＦ）を入れる。粒子上に噴霧するために、８０リットル（Ｌ）の量の５パーセントのポビドン／イソプロパノール（ＩＰＡ）溶液を調製する。The above Rose Bengal disodium mixture is then divided into three equal portions, the first portion remaining intact, and the second and third portions being split into 50 percent, 30 percent, and 20 percent lots, respectively. A 25.6 kg quantity of 40-50 mesh sugar/starch seeds (e.g., SugarSpheres NF) is placed in a stainless steel coating pan. An 80 liter (L) quantity of 5 percent povidone/isopropanol (IPA) solution is prepared for spraying onto the particles.

コーティングパンは、糖スフェアから開始され、その上にポビドン－アルコール溶液の適用を噴霧し（１回の適用につきおよそ０．１７３ｋｇ）、その上に第１の部分（そのまま残された部分）のローズベンガル二ナトリウム混合物を振りかけて適用する（およそ０．３２ｋｇ）。振りかけは、標準的なふるいを用いて行われる。噴霧及び振りかけの工程は、混合物の第１の部分が糖スフェアに適用され、部分的にコーティングされたスフェアのバッチを形成するまで続けられる。The coating pan starts with sugar spheres, onto which a sprayed application of the povidone-alcohol solution (approximately 0.173 kg per application) is applied, and the first portion (the portion left intact) of the rose bengal disodium mixture is sprinkled and applied onto them (approximately 0.32 kg). The sprinkling is done using a standard sieve. The spraying and sprinkling process is continued until the first portion of the mixture has been applied to the sugar spheres to form a batch of partially coated spheres.

次いで、部分的にコーティングされたスフェアを、２つのロットに等分し、各ロットをコーティングパンに入れる。この２つのロットの各々について別々に、ポビドン／ＩＰＡ溶液の噴霧及び５０パーセントのロットに分けられたローズベンガル二ナトリウム混合物の振りかけを、それらの５０パーセントのロットがスフェアに適用されるまで継続する。５０パーセントのロットを適用した後、必要であれば２５メッシュスクリーンを用いてスフェアをふるいにかけることができる。The partially coated spheres are then divided equally into two lots and each lot is placed in a coating pan. Spraying of the povidone/IPA solution and sprinkling of the Rose Bengal disodium mixture divided into 50 percent lots continues for each of the two lots separately until the 50 percent lots have been applied to the spheres. After the 50 percent lots have been applied, the spheres can be screened using a 25 mesh screen if necessary.

ポビドン／ＩＰＡ溶液の噴霧と、３０パーセントのロットに分けられたローズベンガル二ナトリウム混合物の振りかけを開始し、それらの３０パーセントのロットがスフェアに適用されるまで継続する。コーティングされたスフェアは、２５メッシュスクリーンを用いて再度ふるいにかけられ得る。Begin spraying with the Povidone/IPA solution and sprinkling of the Rose Bengal disodium mixture in 30 percent lots and continue until the 30 percent lots have been applied to the spheres. The coated spheres can be screened again using a 25 mesh screen.

２０パーセントのロットに分けた混合物を用いて、それらの２０パーセントのロットがスフェアに適用されるまで、ポビドン／ＩＰＡ溶液の噴霧及びローズベンガル二ナトリウム混合物の振りかけを継続する。このプロセスのこの時点において、ローズベンガル二ナトリウム混合物の全量がスフェアに適用され、約５０ｋｇの５パーセントのポビドン／ＩＰＡ溶液がスフェアに適用された。Continue spraying the povidone/IPA solution and sprinkling the rose bengal disodium mixture with the mixture divided into 20 percent lots until the 20 percent lots have been applied to the spheres. At this point in the process, the entire amount of the rose bengal disodium mixture has been applied to the spheres and approximately 50 kg of the 5 percent povidone/IPA solution has been applied to the spheres.

７．５パーセントのポビドン／ＩＰＡ溶液を調製し、シーラントとしてスフェアに適用する。シールされたスフェアを、約１時間タンブル乾燥し、計量し、約１２２°Ｆ（５０℃）のオーブン内に２４時間置く。乾燥後、スフェアを２０メッシュスクリーン及び３８メッシュスクリーンのふるいにかけて、即時放出粒子（遅延型粒子に比べて迅速又は高速）を形成する。A 7.5 percent povidone/IPA solution is prepared and applied to the spheres as a sealant. The sealed spheres are tumble dried for approximately 1 hour, weighed, and placed in an oven at approximately 122°F (50°C) for 24 hours. After drying, the spheres are sieved through a 20 mesh screen and a 38 mesh screen to form immediate release particles (fast or rapid compared to delayed release particles).

また、上で論じたＨＸ化合物含有スフェア又はそのカプセル（又はブリスター）を、先に論じたようにｐＨ値感受性の腸溶コーティングポリマーでコーティングすることもでき、それらのスフェアは、消化管で放出されても、ｐＨ値が少なくとも所望の消化管の位置のものでなければ、活性成分であるＨＸ化合物をその周囲に提供しない。The HX compound-containing spheres or capsules (or blisters) thereof discussed above can also be coated with a pH-sensitive enteric coating polymer as previously discussed, such that the spheres, upon release in the digestive tract, do not provide the active HX compound to their surroundings unless the pH is at least at the desired location in the digestive tract.

ＨＸ化合物の放出位置を制御する別のやり方は、上で論じたスフェア（ＨＸでコーティングされた粒子）をさらにコートすることであり、それらのスフェアからのＨＸ化合物の放出が制御され、６～１０時間にわたって放出されるように、スフェアの表面にポリマー樹脂の溶解制御コートが適用される。この目的のために用いられる材料は、エチルセルロース、ヒドロキシプロピルメチル－セルロース、ヒドロキシプロピルセルロース、メチルセルロース、ヒドロキシエチルセルロース、ニトロセルロース、カルボキシメチル－セルロース、並びにエタクリル酸及びメタクリル酸の共重合体（Ｅｕｄｒａｇｉｔ（登録商標））であり得るがこれらに限定されないか、又は他の任意のアクリル酸誘導体（Ｃａｒｂｏｐｏｌ（登録商標）など）を使用することができる。Another way to control the release location of the HX compound is to further coat the spheres (HX coated particles) discussed above, where a dissolution controlled coat of polymeric resin is applied to the surface of the spheres such that the release of the HX compound from those spheres is controlled and released over a period of 6-10 hours. Materials used for this purpose can be, but are not limited to, ethyl cellulose, hydroxypropylmethyl-cellulose, hydroxypropyl cellulose, methyl cellulose, hydroxyethyl cellulose, nitrocellulose, carboxymethyl-cellulose, and copolymers of ethacrylic acid and methacrylic acid (Eudragit®), or any other acrylic acid derivative (such as Carbopol®) can be used.

さらに、腸溶コーティング材料も、単独で、又は上記の非ｐＨ感受性コーティングと組み合わせて、使用され得る。これらの材料としては、ヒドロキシプロピルメチルセルロースフタレート、及びあらゆるセルロースエーテルのフタル酸エステルが挙げられるが、これらに限定されない。さらに、アクリル酸誘導体（Ｅｕｄｒａｇｉｔ（登録商標））のフタル酸エステル、又は酢酸フタル酸セルロースが挙げられる。Additionally, enteric coating materials may also be used, either alone or in combination with the non-pH sensitive coatings described above. These materials include, but are not limited to, hydroxypropyl methylcellulose phthalate, and any phthalate ester of cellulose ether. Additionally, phthalate esters of acrylic acid derivatives (Eudragit®), or cellulose acetate phthalate.

これらのコーティング材料は、表面をコーティングする際に約１．０パーセント（ｗ／ｗ）～約２５％（ｗ／ｗ）の量で使用され得る。好ましくは、これらのコーティング材料は、約８．０～約１２．０パーセント（ｗ／ｗ）で存在する。These coating materials may be used in amounts of about 1.0 percent (w/w) to about 25% (w/w) when coating a surface. Preferably, these coating materials are present in an amount of about 8.0 to about 12.0 percent (w/w).

賦形剤
薬学において通例の賦形剤は、ＨＸ化合物含有薬剤の生成において、それ自体公知の様式で使用され得る。これらの賦形剤は、コア又はコーティング剤に存在し得る。 Excipients Excipients customary in pharmacy can be used in a manner known per se in the preparation of HX compound-containing medicaments. These excipients can be present in the core or in the coating.

ポリマー
糖小球又は糖スフェアへのＨＸ化合物の接着を助ける際に接着剤として使用されるポリマー材料は、ＨＸ化合物のコーティング層が使用される場合、賦形剤であるとみなされる。そのようなポリマーの例示は、他の水溶性の薬学的に許容され得るフィルム形成ポリマー、例えば、ヒドロキシプロピルセルロースであるような、ポリビニルピロリドン及びポリビニルアルコールである。 Polymers Polymeric materials used as adhesives in aiding in the adhesion of the HX compound to the sugar globules or sugar spheres are considered to be excipients when a coating layer of the HX compound is used. Examples of such polymers are polyvinylpyrrolidone and polyvinyl alcohol, as are other water-soluble pharma- ceutically acceptable film-forming polymers, e.g., hydroxypropyl cellulose.

乾燥促進剤（非粘着剤）
乾燥促進剤は、以下の特性を有する。乾燥促進剤は、比表面積が大きく、化学的に不活性であり、流動性であり、微細な粒子を含む。これらの特性のため、乾燥促進剤は、官能基として極性コモノマーを含むポリマーの粘着性を低下させる。乾燥促進剤の例は、アルミナ、酸化マグネシウム、カオリン、タルク、ヒュームドシリカ、硫酸バリウム及びセルロースである。 Drying accelerator (anti-adhesive agent)
The drying accelerator has the following properties: it has a large specific surface area, is chemically inert, is fluid, and contains fine particles. Due to these properties, the drying accelerator reduces the adhesion of polymers that contain polar comonomers as functional groups. Examples of drying accelerators are alumina, magnesium oxide, kaolin, talc, fumed silica, barium sulfate, and cellulose.

崩壊剤
崩壊剤は、脱凝集を助けるために経口固形剤形に加えられる。崩壊剤は、固形剤形が水分と接触したときに急速に崩壊させるために製剤化される。崩壊は、通常、溶解プロセスにおける第１の工程とみなされる。例証的な崩壊剤としては、クロスカルメロースナトリウム、内部架橋カルボキシメチルセルロースナトリウム、架橋ポリビニルピロリドン（クロスポビドン）及びデンプングリコール酸ナトリウムが挙げられる。 Disintegrants Disintegrants are added to oral solid dosage forms to aid in deagglomeration. Disintegrants are formulated to rapidly disintegrate the solid dosage form when it comes into contact with moisture. Disintegration is usually considered the first step in the dissolution process. Illustrative disintegrants include croscarmellose sodium, internally cross-linked sodium carboxymethylcellulose, cross-linked polyvinylpyrrolidone (crospovidone) and sodium starch glycolate.

離型剤
離型剤の例は、脂肪酸又は脂肪酸アミドのエステル、脂肪族の長鎖カルボン酸、脂肪アルコール及びそれらのエステル、モンタンろう又はパラフィンろう及び金属せっけんであり、特に、モノステアリン酸グリセロール、ステアリルアルコール、グリセロールベヘン酸エステル、セチルアルコール、パルミチン酸、カルナウバろう、蜜ろうなどが挙げられるだろう。通常の相応の量は、共重合体に基づく０．０５～５重量パーセント、好ましくは、０．１～３重量パーセントの範囲内である。 Release Agents Examples of release agents are esters of fatty acids or fatty acid amides, aliphatic long-chain carboxylic acids, fatty alcohols and their esters, montan or paraffin waxes and metal soaps, in particular glycerol monostearate, stearyl alcohol, glycerol behenate, cetyl alcohol, palmitic acid, carnauba wax, beeswax, etc. Typical corresponding amounts are in the range of 0.05 to 5 weight percent, preferably 0.1 to 3 weight percent, based on the copolymer.

薬学における通例の他の賦形剤
例えば、安定剤、着色料、酸化防止剤、湿潤剤、色素、光沢剤がここで挙げられるだろう。それらは通常、加工助剤として使用され、信頼できる且つ再現性のある生成プロセス及び良好な長期貯蔵安定性を保証するために意図されている。薬学における通例のさらなる賦形剤は、ポリマーコーティングに基づく０．００１重量％～１０重量％、好ましくは、０．１～１０重量％の量で存在し得る。 Other excipients customary in pharmacy such as stabilizers, colorants, antioxidants, wetting agents, pigments, gloss agents may be mentioned here. They are usually used as processing aids and are intended to ensure a reliable and reproducible production process and good long-term storage stability. Further excipients customary in pharmacy may be present in an amount of 0.001% to 10% by weight, preferably 0.1 to 10% by weight, based on the polymer coating.

可塑剤
可塑剤として適した物質は通常、１００～２０，０００の分子量を有し、その分子内に１つ以上の親水性基、例えば、ヒドロキシル基、エステル基又はアミノ基を含む。クエン酸、フタル酸、セバシン酸、ひまし油が好適である。さらなる好適な可塑剤の例は、クエン酸アルキルエステル、グリセロールエステル、フタル酸アルキルエステル、セバシン酸アルキルエステル、スクロースエステル、ソルビタンエステル、セバシン酸ジブチル及びポリエチレングリコール４０００～２００００である。好ましい可塑剤は、クエン酸トリブチル、クエン酸トリエチル、クエン酸アセチルトリエチル、セバシン酸ジブチル及びセバシン酸ジエチルである。使用される量は、（メタ）アクリレート共重合体に基づく１～３５、好ましくは、２～１０重量％である。 Plasticizers Substances suitable as plasticizers usually have a molecular weight of 100 to 20,000 and contain one or more hydrophilic groups in the molecule, such as hydroxyl, ester or amino groups. Citric acid, phthalic acid, sebacic acid, castor oil are suitable. Examples of further suitable plasticizers are alkyl esters of citrate, glycerol esters, alkyl esters of phthalate, alkyl esters of sebacate, sucrose esters, sorbitan esters, dibutyl sebacate and polyethylene glycol 4000 to 20000. Preferred plasticizers are tributyl citrate, triethyl citrate, acetyl triethyl citrate, dibutyl sebacate and diethyl sebacate. The amount used is 1 to 35, preferably 2 to 10,% by weight based on the (meth)acrylate copolymer.

全身バイオアベイラビリティの最適化
固体薬剤の組成物によって送達されるＨＸ化合物の量は、水性組成物からの量と実質的に同じである。ＩＣ_５０レベルの循環ＲＢ濃度を達成するのに十分な、例証的なＨＸ化合物としての、ＲＢの投与は、定義上、循環しているすべての白血病細胞に対して毒性ではないだろう（すなわち、ＩＣ_５０では、白血病細胞のおよそ半数しか影響されないだろう）。いくつかの実施形態において、およそ１５００ｍｇ（すなわち、３００ｍＭ）までの、ＩＣ_５０レベルの倍数である量でＲＢを投与することが好ましいことがある。しかしながら、一方で、個々の投与の結果として、腫瘍細胞の一部だけを殺滅することで十分である場合がある。 Optimizing systemic bioavailability The amount of HX compound delivered by the solid drug composition is substantially the same as that from the aqueous composition. Administration of RB, as an illustrative HX compound, sufficient to achieve circulating RB concentrations at_IC50 levels will, by definition, not be toxic to all circulating leukemic cells (i.e., at_IC50 , only approximately half of the leukemic cells will be affected). In some embodiments, it may be preferable to administer RB in an amount that is a multiple of the_IC50 level, up to approximately 1500 mg (i.e., 300 mM). However, in other cases, it may be sufficient to kill only a portion of the tumor cells as a result of each individual administration.

急速に殺滅された腫瘍細胞の負荷に起因し得る毒性反応（すなわち、「腫瘍崩壊症候群」）を回避するために、後者の場合が好ましいことがある。例えば、Ｈｏｗａｒｄ ｅｔ ａｌ．，Ｎ Ｅｎｇｌ Ｊ Ｍｅｄ ３６４（１９）：１８４４－１８５４（２０１１年５月１２日）では、腫瘍崩壊症候群は、白血病などの血液癌を処置する医師が遭遇する最も一般的な疾患関連緊急事態であると報告されている。The latter case may be preferred to avoid toxic reactions (i.e., "tumor lysis syndrome") that may result from the burden of rapidly killed tumor cells. For example, Howard et al., N Engl J Med 364(19):1844-1854 (May 12, 2011) reported that tumor lysis syndrome is the most common disease-related emergency encountered by physicians treating blood cancers such as leukemia.

下記でより詳細に論じるように、残存する白血病細胞の負荷に対して機能的な免疫応答を惹起するために、単一の処置において白血病細胞の一部だけを殺滅することも有益であり得る。ＲＢによって惹起される機能的な免疫系応答は、少なくとも部分的に、体内に循環する、ＲＢによって引き起こされた壊死細胞残屑の作用によって生じると考えられており、ＲＢなどのハロゲン化キサンテンの初回投与の効果を延長することができる免疫応答を誘導する。As discussed in more detail below, it may be beneficial to kill only a portion of the leukemic cells in a single treatment in order to elicit a functional immune response against the remaining leukemic cell burden. The functional immune system response elicited by RB is believed to result, at least in part, from the action of necrotic cell debris caused by RB that circulates in the body, inducing an immune response that can extend the effect of the initial dose of halogenated xanthenes such as RB.

誘導された免疫応答が生じるのには、接触した白血病細胞の即座の殺滅よりも長い時間がかかることがある。この効果の遅れの理由は、白血病細胞を攻撃して殺滅するのに適切なＢ及びＴ細胞の集団を誘導するため、並びに、その循環が続くことで患者を再発から守ることができる持続性のメモリーＴ細胞を誘導するために時間が必要であるからであり得る。このような初期の遅れは、そのように誘導されたメモリー免疫細胞に起因して、被験者の生涯にわたって増強され得る。The induced immune response may take longer to develop than the immediate killing of the contacted leukemic cells. The reason for this delayed effect may be the time required to induce the appropriate populations of B and T cells to attack and kill the leukemic cells, as well as to induce persistent memory T cells whose continued circulation can protect the patient from relapse. This initial delay may be amplified throughout the life of the subject due to the memory immune cells so induced.

併用処置
別の態様では、上記の薬学的組成物は、第２の異なって作用する抗白血病全身性細胞傷害剤、すなわち、作用機序がＨＸ化合物である第１の細胞傷害剤のそれと異なる抗白血病細胞傷害剤とともに使用される。先に述べたように、ハロゲン化キサンテンは、癌細胞のリソソームに局在し、細胞周期のＧ１期にある細胞のパーセンテージを上昇させ、アポトーシスによる細胞死を誘導する［Ｓｗｉｆｔ ｅｔ ａｌ．，Ｏｎｃｏｔａｒｇｅｔｓ Ｔｈｅｒ，１２：１２９３－１３０７（２０１９年２月）］。 Combination Treatment In another embodiment, the pharmaceutical composition is used with a second, differently acting, anti-leukemic systemic cytotoxic agent, i.e., an anti-leukemic cytotoxic agent whose mechanism of action is different from that of the first cytotoxic agent, which is an HX compound. As previously mentioned, halogenated xanthenes localize to the lysosomes of cancer cells, increase the percentage of cells in the G1 phase of the cell cycle, and induce cell death by apoptosis [Swift et al., Oncotargets Ther, 12:1293-1307 (February 2019)].

第１のタイプの第２の抗白血病全身性細胞傷害剤は、いわゆる「小分子」である。そのような小分子は、白血病細胞の殺滅において非白血病細胞よりも概して特異的であるに過ぎないという点において、半特異的な細胞毒ととらえることができる。ほぼすべての小分子抗癌剤が、企図されるＨＸ化合物よりも白血病特異性が低く、そのレシピエント被験体に対して病的状態、禿頭症及び他の外傷を引き起こすことがあり、それは、被験体の処置レジメン離れをもたらす可能性がある。The first type of second anti-leukemic systemic cytotoxic agent is a so-called "small molecule." Such small molecules can be considered semi-specific cytotoxins in that they are only generally more specific in killing leukemic cells than non-leukemic cells. Nearly all small molecule anticancer agents are less leukemia specific than the contemplated HX compounds and can cause morbidity, baldness and other trauma to the recipient subject, which can lead to the subject abandoning the treatment regimen.

これらの小分子は、通常、約１５０～約１０００ダルトン（Ｄａ）、好ましくは、約２５０～約８５０Ｄａの分子量を有する。この群の小分子には、カリケアマイシン（１３６８Ｄａ）、ビンブラスチン（８１１Ｄａ）、ビンクリスチン（８２５Ｄａ）、イマチニブ（４９４Ｄａ）、モノメチルオーリスタチン（７１８Ｄａ）、エトポシド（５８９Ｄａ）、ダウノルビシン（５２８Ｄａ）、ドキソルビシン（５４４Ｄａ）、クラドリビン（２８６Ｄａ）、フルダラビン（３６５Ｄａ）、ミトキサントロン（４４４Ｄａ）、６－チオグアニン（１６７Ｄａ）、メトトレキサート（４５４Ｄａ）、６－メルカプトプリン（１５２Ｄａ）、アザシチジン（２４４Ｄａ）、アンナマイシン（ａｎｎａｍｙｃｉｎ）（６４０Ｄａ）、ソラフェニブ（４６５Ｄａ）、クロファラビン（３０４Ｄａ）、シスプラチン（３００Ｄａ）、イリノテカン（５８７Ｄａ）及びシタラビン（２４３Ｄａ）などの血液学的白血病を処置するために使用される小分子の多くが含まれる。上記の抗白血病小分子の１つ以上が、第２の白血病用細胞傷害剤を構成し得る。これらの小分子の多くが、それらの塩、プロドラッグ及び／又はエステル（これらは結果的に上記のそれらのおおよその値よりも大きい分子量を有する）として使用されることに注意されたい。These small molecules typically have a molecular weight of about 150 to about 1000 Daltons (Da), preferably about 250 to about 850 Da. Small molecules in this group include calicheamicin (1368 Da), vinblastine (811 Da), vincristine (825 Da), imatinib (494 Da), monomethyl auristatin (718 Da), etoposide (589 Da), daunorubicin (528 Da), doxorubicin (544 Da), cladribine (286 Da), fludarabine (365 Da), mitoxantrone (444 Da), 6-thioguanine ( These include many of the small molecules used to treat hematological leukemias, such as azacytidine (167 Da), methotrexate (454 Da), 6-mercaptopurine (152 Da), azacitidine (244 Da), annamycin (640 Da), sorafenib (465 Da), clofarabine (304 Da), cisplatin (300 Da), irinotecan (587 Da) and cytarabine (243 Da). One or more of the above anti-leukemia small molecules may constitute the second leukemia cytotoxic agent. It is noted that many of these small molecules are used as their salts, prodrugs and/or esters, which consequently have molecular weights greater than their approximate values above.

第２の抗白血病全身性細胞傷害剤を有する薬学的組成物は、タンパク質、洗浄剤、及び／又はポリ（エチレングリコール）［ＰＥＧ］などのポリマーなどのより大きな分子に結合体化された上記の小分子も含み得る。そのような結合体は、小分子の毒性を最小限に抑えることが多く、白血病細胞に結合する抗体の使用のように送達位置を強化することが多い。さらに、小分子細胞傷害剤は、白血病細胞に特異的に結合するように及び／又は白血病細胞によってエンドサイトーシスされるように適合され得る、リポソーム、ミセル又はシクロデキストリン分子内に包まれ得る。この被包及び結合体化された小分子の群は、その活性な細胞傷害剤が小分子であるので、先に論じられた第２の全身性細胞傷害剤の小分子の群に含められる。Pharmaceutical compositions with a second anti-leukemic systemic cytotoxic agent may also include the above small molecules conjugated to larger molecules such as proteins, detergents, and/or polymers such as poly(ethylene glycol) [PEG]. Such conjugates often minimize the toxicity of the small molecule and often enhance the delivery location, such as the use of antibodies that bind to leukemic cells. Additionally, small molecule cytotoxic agents may be encapsulated within liposomes, micelles, or cyclodextrin molecules that may be adapted to specifically bind to and/or be endocytosed by leukemic cells. This group of encapsulated and conjugated small molecules is included in the group of small molecules of the second systemic cytotoxic agent discussed above, since the active cytotoxic agent is a small molecule.

そのような第２の抗白血病全身性細胞傷害剤の例示は、リポソームダウノルビシン、リポソームアンナマイシン、スフィンゴソームビンクリスチン、リポソームシタラビン、ゲムツズマブオゾガミシンと呼ばれるカリケアマイシン結合体化ＣＤ３３抗体、及びブレンツキシマブベドチンと呼ばれるＣＤ３０抗体とモノメチルオーリスタチンＥとのキメラである。Examples of such second anti-leukemic systemic cytotoxic agents are liposomal daunorubicin, liposomal annamycin, sphingosomal vincristine, liposomal cytarabine, a calicheamicin-conjugated CD33 antibody called gemtuzumab ozogamicin, and a chimera of a CD30 antibody and monomethyl auristatin E called brentuximab vedotin.

簡潔には、リポソームは、概して球形の人工小胞であって、１つ又は２つの二重層を構成し、小分子である第２の全身性細胞傷害剤を被包して送達を補助する、コレステロール及びリン脂質分子から通常は調製される小胞である。Ａｋｂａｒｚａｄｅｈ ｅｔ ａｌ．，Ｎａｎｏｓｃａｌｅ Ｒｅｓ Ｌｅｔｔ，８：１０２（２０１３）を参照のこと。Briefly, liposomes are generally spherical artificial vesicles, typically prepared from cholesterol and phospholipid molecules, that comprise one or two bilayers and encapsulate a second systemic cytotoxic agent, a small molecule, to aid in its delivery. See Akbarzadeh et al., Nanoscale Res Lett, 8:102 (2013).

カリケアマイシンは、高分子量の小分子（１３６８Ｄａ）であり、結合した４つのサッカライドがベンゾチオエートＳ－エステル結合によって中断されたもの、ならびにＤＮＡ配列を切断するエン－ジイン基を含む。カリケアマイシンは、毒性が強すぎて単独で使用できず、ヌードマウスにおけるＬＤ_５０は、３２０μｇ／ｋｇである［ＤｉＪｏｓｅｐｈ ｅｔ ａｌ．，Ｂｌｏｏｄ １０３：１８０７－１８１４（２００４）］。同様に、モノメチルオーリスタチンは、ＣＤ３０（細胞膜タンパク質且つ癌マーカーであるＴＮＦレセプターファミリーメンバー）に対する抗体への結合によって媒介される、一般的な（広範囲の）高い毒性を示し［いくつかの癌細胞株に対して＜１ｎＭのＩＣ_５０；ＡｐｅｘＢｉｏ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ Ｐｒｏｄｕｃｔ Ｃａｔａｌｏｇ（２０１３）］、大細胞型リンパ腫及びホジキン病に対して有用と報告された［Ｆｒａｎｃｉｓｃｏ ｅｔ ａｌ．，Ｂｌｏｏｄ １０２：１４５８－１４６５（２００３）］のに対して、抗ＣＤ７９ｂモノクローナルへの結合は、ＮＨＬの３つの異種移植モデルの処置において利点を提供した［Ｄｏｒｎａｎ ｅｔ ａｌ．，Ｂｌｏｏｄ １１４：２７２１－２７２９（２００９）］。 Calicheamicin is a small molecule with a high molecular weight (1368 Da) that contains four attached saccharides interrupted by benzothioate S-ester bonds, as well as an ene-diyne group that cleaves DNA sequences. Calicheamicin is too toxic to be used alone, with an_LD50 of 320 μg/kg in nude mice [DiJoseph et al., Blood 103:1807-1814 (2004)]. Similarly, monomethylauristatin exhibited general (broad) high toxicity mediated by binding to antibodies against CD30 (a TNF receptor family member that is a cell membrane protein and cancer marker) [IC₅₀ of <1 nM against several cancer cell lines; ApexBio Technology Product Catalog (2013)] and was reported to be useful against large cell lymphoma and Hodgkin's disease [Francisco et al., Blood 102:1458-1465 (2003)], whereas binding to an anti-CD79b monoclonal provided advantage in the treatment of three xenograft models of NHL [Dornan et al., Blood 114:2721-2729 (2009)].

小分子（非タンパク質性で約１０００グラム／モル未満）であるか又はより大きなタンパク質性分子である全身性抗白血病薬は、その薬が被験体の身体全体に広がるように、処置される哺乳動物被験体に投与される。静脈内投与が、薬の広がりを達成する好ましい方法の１つである。一方、イマチニブは通常、経口投与される。Systemic anti-leukemia drugs, which may be small molecules (non-proteinaceous and less than about 1000 grams/mole) or larger proteinaceous molecules, are administered to the mammalian subject being treated so that the drug is distributed throughout the subject's body. Intravenous administration is one of the preferred methods of achieving drug distribution. Imatinib, on the other hand, is usually administered orally.

白血病の処置に有用な例証的な小分子抗癌薬としては、親出願の第１６／６８８，３１９において使用されたドキソルビシン、エトポシド、ビンクリスチン、シスプラチン、イリノテカン及びシタラビンが挙げられるのに対して、例示的なタンパク質性分子は、ペグアスパラギナーゼである。それらの小分子薬のうち、各々が哺乳動物被験体にＩＶ投与され得るドキソルビシン、エトポシド及びビンクリスチンは、致死量未満のＰＶ－１０（登録商標）ＲＢ二ナトリウム水溶液による処置において相乗作用を示すとみられ、好ましい。Illustrative small molecule anti-cancer drugs useful for the treatment of leukemia include doxorubicin, etoposide, vincristine, cisplatin, irinotecan, and cytarabine, as used in parent application Ser. No. 16/688,319, while an exemplary proteinaceous molecule is pegasparaginase. Of those small molecule drugs, doxorubicin, etoposide, and vincristine, each of which may be administered IV to a mammalian subject, appear to exhibit synergistic effects in treatment with sublethal doses of PV-10® RB disodium aqueous solution and are preferred.

本明細書中で論じられる第２の白血病用全身性細胞傷害剤のいずれかの投与は、複数回試みることができることが理解されるだろう。そのような複数回の投与は、処置する医師の権限の範囲内であり、第１の白血病用細胞傷害剤であるＨＸ化合物の投与とともに行うこともできるし、別々に行うこともできる。It will be understood that multiple attempts may be made to administer any of the second leukemic systemic cytotoxic agents discussed herein. Such multiple administrations are within the purview of the treating physician and may be administered together with or separately from the administration of the first leukemic cytotoxic agent, the HX compound.

小分子全身性抗白血病薬の有用な有効投与量は、ＦＤＡ、国家機関又は国際機関が承認した薬のラベル情報に示された投与量である。通常、単剤療法の投与スケジュールは、初期段階の臨床試験において最大耐用量（ＭＴＤ）を決定することによって設定される。次いで、そのＭＴＤ（又はそれに近い変動値）は、有効性の評価及びより詳細な安全性の評価のために、後期臨床試験に公表される。これらのＭＴＤはしばしば、臨床試験終了後、確立された治療用量となる。しかしながら、その小分子全身性抗白血病薬は、固体又は液体製剤においてＨＸ化合物とともに使用することが企図されているので、ＭＴＤは、通常使用される最大量であり、通常の手順に従って下方に用量設定される量である。The useful effective dose of the small molecule systemic anti-leukemia agent is the dose indicated in the label information of the drug approved by the FDA, a national agency, or an international agency. Typically, the dosing schedule for monotherapy is established by determining the maximum tolerated dose (MTD) in early-stage clinical trials. The MTD (or a variation close to it) is then published in later-stage clinical trials for evaluation of efficacy and more detailed evaluation of safety. These MTDs often become established therapeutic doses after clinical trials are completed. However, since the small molecule systemic anti-leukemia agent is intended for use with the HX compound in a solid or liquid formulation, the MTD is the maximum amount that is typically used and titrated downward according to normal procedures.

本発明におけるハロゲン化キサンテン療法と併用され得るいくつかの全身性抗癌（抗白血病）薬（剤）の例示的な投与スケジュールを、下記の表Ａに提供する。下記に列挙される薬のいくつかは、上で定義されたような「小分子」であるのに対して、他のものは、抗体、好ましくはモノクローナル抗体などの大きなタンパク質性分子であり、炎症性ケモカイン活性を阻害することに注意されたい。それにもかかわらず、それらは、全身投与される。表Ａの薬は、通常、単一の活性な作用物質として使用される。しかしながら、本明細書中以後で論じられる免疫チェックポイント阻害抗体と同様に、１つ以上のもの、特に抗体を一緒に使用することもできる。Exemplary dosing schedules for some systemic anti-cancer (antileukemia) drugs (agents) that may be combined with halogenated xanthene therapy in the present invention are provided in Table A below. Note that some of the drugs listed below are "small molecules" as defined above, whereas others are large proteinaceous molecules, such as antibodies, preferably monoclonal antibodies, that inhibit inflammatory chemokine activity. Nevertheless, they are administered systemically. The drugs in Table A are typically used as the single active agent. However, more than one may be used together, particularly antibodies, as with the immune checkpoint inhibitor antibodies discussed hereinafter.

相加効果又は相乗効果があるため、本発明の併用療法及び処置方法は、一般に、下記の治療などのＩＶ投与治療とともに使用されるとき、表Ａに記載されているものなどの全身性の作用物質の典型的な投与スケジュール以下のレベルでその全身性の作用物質を使用することを許容する。しかしながら、表Ａに提供された投与スケジュールは、処置を開始するための有用な指針を提供するものであり、そこから投与量を、所与の患者を担当する医師が適切と判断する量まで漸減することができる。Because of additive or synergistic effects, the combination therapies and treatment methods of the present invention generally permit the use of systemic agents at levels below the typical dosing schedules for systemic agents such as those set forth in Table A when used with IV-administered therapies such as those described below. However, the dosing schedules provided in Table A provide useful guidelines for initiating treatment, from which dosages can be tapered to amounts as deemed appropriate by the physician treating a given patient.

ＨＸ化合物と第２の抗白血病細胞傷害剤とは、一緒に投与される必要もないし、同じ投与手段で投与される必要もないことに注意されたい。したがって、第１の抗白血病細胞傷害剤であるＨＸ化合物を投与するために丸剤又はカプセルの形態を使用することができるのに対して、イマチニブのような小分子又は大分子の第２の抗白血病剤は、ＩＶ又は経口によって投与される。当業者は、抗白血病剤を投与する様々な方法を承知している。It should be noted that the HX compound and the second anti-leukemic cytotoxic agent do not have to be administered together or by the same means of administration. Thus, a pill or capsule form can be used to administer the first anti-leukemic cytotoxic agent, the HX compound, while the second anti-leukemic agent, a small or large molecule such as imatinib, is administered IV or orally. Those skilled in the art are aware of the various methods of administering anti-leukemic agents.

ＲＢ二ナトリウム水溶液中又は前記の固形剤形に存在するものなど、ハロゲン化キサンテンとの併用処置に有用な第２のタイプの第２の全身性細胞傷害剤は、特別な全身性抗白血病薬とも見なすことができる免疫チェックポイント阻害剤である。免疫チェックポイント阻害剤は、Ｔ細胞及び一部の白血病細胞などの免疫系細胞によって産生されるある特定のチェックポイントタンパク質に結合してそれを遮断する薬物である。それらのタンパク質は、遮断されないと免疫応答を阻害して、免疫応答の抑制を助け、Ｔ細胞又は他の免疫細胞が白血病細胞を殺滅しないようにする。それらの免疫チェックポイントタンパク質を遮断することにより、免疫系に対する「ブレーキ」が解除されて、免疫細胞が活性化されること及び白血病細胞を殺滅することが可能になる。A second type of second systemic cytotoxic agent useful for combination treatment with halogenated xanthenes, such as those present in RB disodium aqueous solution or in the solid dosage forms described above, are immune checkpoint inhibitors, which can also be considered special systemic anti-leukemia drugs. Immune checkpoint inhibitors are drugs that bind to and block certain checkpoint proteins produced by immune system cells, such as T cells and some leukemia cells. These proteins would otherwise inhibit the immune response, helping to suppress the immune response and preventing T cells or other immune cells from killing leukemia cells. Blocking these immune checkpoint proteins releases the "brakes" on the immune system, allowing immune cells to become activated and kill leukemia cells.

有用な免疫チェックポイント阻害剤は、好ましくは、ヒトモノクローナル抗体もしくはヒト化モノクローナル抗体又はそれらの結合部分であり、その投与により、それらのある特定のタンパク質の作用が遮断される。その遮断により、免疫系が白血病細胞を異物として認識すること、及びそれらの白血病細胞を体内から排除するのを助けることが可能になる。Useful immune checkpoint inhibitors are preferably human or humanized monoclonal antibodies or binding portions thereof, the administration of which blocks the action of certain of these proteins. This blockage allows the immune system to recognize leukemia cells as foreign and to help eliminate them from the body.

例証的な免疫チェックポイント阻害剤としては、ＣＴＬＡ－４活性を阻止することによって免疫系のダウンレギュレーションに対抗し、ゆえに白血病に対するＴ細胞応答を増強するようにデザインされた、抗ＣＴＬＡ－４（細胞傷害性Ｔリンパ球関連抗原４）モノクローナル抗体であるイピリムマブ及びトレメリムマブが挙げられる。同様に、ピジリズマブ（ｐｉｄｉｌｉｚｕｍａｂ）、ニボルマブ、チスレリズマブ（ｔｉｓｌｅｌｉｚｕｍａｂ）、スパルタリズマブ（ｓｐａｒｔａｌｉｚｕｍａｂ）、セミプリマブ（ｃｅｍｉｐｌｉｍａｂ）、ペンブロリズマブ、カムレリズマブ（ｃａｍｒｅｌｉｚｕｍａｂ）、シンチリマブ（ｓｉｎｔｉｌｉｍａｂ）、トリパリマブ（ｔｏｒｉｐａｌｉｍａｂ）及びドスタルリマブ（ｄｏｓｔａｒｌｉｍａｂ）などのモノクローナル抗体が、ＰＤ－１（プログラム死１）レセプターに結合して、免疫系のダウンレギュレーションに対抗し、癌性細胞に対するＴ細胞応答を増強する。ＰＤ－１レセプター（抗ＰＤ－１）に対する免疫チェックポイントタンパク質リガンド（抗ＰＤ－Ｌ１）を標的化する３つのモノクローナル抗体は、アテゾリズマブ、アベルマブ及びデュルバルマブである。ＰＤ－１レセプターリガンドであるＰＤ－Ｌ１及びＰＤ－Ｌ２に対する抗体（例えば、ＰＤ－Ｌ１に対するＢＭＳ－９３６５５９及びＭＥＤＩ４７３６（デュルバルマブ））を用いた最初の研究も、免疫系のダウンレギュレーションの阻害及び白血病に対するＴ細胞応答の増強を示している。Exemplary immune checkpoint inhibitors include ipilimumab and tremelimumab, which are anti-CTLA-4 (cytotoxic T-lymphocyte-associated antigen 4) monoclonal antibodies designed to counteract immune system downregulation by blocking CTLA-4 activity, thus enhancing T-cell responses against leukemia. Similarly, monoclonal antibodies such as pidilimab, nivolumab, tislelizumab, spartalizumab, cemiplimab, pembrolizumab, camrelizumab, sintilimab, toripalimab, and dostarlimab bind to the PD-1 (programmed death 1) receptor to counteract downregulation of the immune system and enhance T-cell responses against cancerous cells. Three monoclonal antibodies targeting the immune checkpoint protein ligand (anti-PD-L1) to the PD-1 receptor (anti-PD-1) are atezolizumab, avelumab, and durvalumab. Initial studies with antibodies against the PD-1 receptor ligands PD-L1 and PD-L2 (e.g., BMS-936559 and MEDI4736 (durvalumab) against PD-L1) have also shown inhibition of immune system downregulation and enhancement of T cell responses against leukemia.

上記の免疫チェックポイント阻害抗体は、単独でＨＸ化合物とともに投与されたとき、並びに異なる２タイプの免疫チェックポイント阻害剤をＨＸ化合物とともに使用して投与されたとき、有用であることが見出されている。Ｐａｔｅｌ ｅｔ ａｌ．，ＡＭＥＲＩＣＡＮ ＳＯＣＩＥＴＹ ｏｆ ＣＬＩＮＩＣＡＬ ＯＮＣＯＬＯＧＹ（ＡＳＣＯ）２０２０ ＶＩＲＴＵＡＬ ＳＣＩＥＮＴＩＦＩＣ ＰＲＯＧＲＡＭ（２０２０年５月２９～３１日）のポスターには、抗ＰＤ－１抗体の全身投与又は抗ＰＤ－１抗体とＣＴＬＡ－４抗体の両方の全身投与とともに、ローズベンガル二ナトリウムを、肝臓に転移したブドウ膜黒色腫の腫瘍内に注射して使用した研究のデータが提供された。The immune checkpoint inhibitor antibodies described above have been found to be useful when administered alone with HX compounds, as well as when administered with two different types of immune checkpoint inhibitors in combination with HX compounds. Patel et al., poster at the AMERICAN SOCIETY of CLINICAL ONCOLOGY (ASCO) 2020 VIRTUAL SCIENTIFIC PROGRAM (May 29-31, 2020), provided data from a study using rose bengal disodium injected intratumorally in uveal melanoma metastases to the liver, along with systemic administration of anti-PD-1 antibodies or both anti-PD-1 and CTLA-4 antibodies.

より最近では、チェックポイント阻害活性を有するいくつかのさらなる抗体群が特定された。それらの作用の類似性から、それらは、本明細書中で免疫チェックポイント阻害剤であるとみなされる。１つの例証的な群は、細胞表面レセプターＯＸ４０（ＣＤ１３４）と免疫反応して、メモリーＴリンパ球及びエフェクターＴリンパ球の増殖を刺激し、それによって、癌性細胞に対するＴ細胞媒介性免疫応答を刺激する。例示的なそのようなヒト化抗ＯＸ４０モノクローナル抗体としては、現在、文献においてｇｓｋ３１７４９９８（ＩｇＧ１）、ポガリズマブ（ｐｏｇａｌｉｚｕｍａｂ）（ＭＯＸＲ０９１６）、ＭＥＤ１０５６２と称されているもの、及びＰＦ－０４５１８６００（ＰＦ－８６００）と命名されたヒト抗ＯＸ４０ ＩｇＧ２抗体が挙げられる。More recently, several additional antibody groups have been identified that have checkpoint inhibitory activity. Due to the similarity of their actions, they are considered herein to be immune checkpoint inhibitors. One illustrative group immunoreacts with the cell surface receptor OX40 (CD134) to stimulate the proliferation of memory and effector T lymphocytes, thereby stimulating a T cell-mediated immune response against cancerous cells. Exemplary such humanized anti-OX40 monoclonal antibodies include those currently referred to in the literature as gsk3174998 (IgG1), pogalizumab (MOXR0916), MED10562, and a human anti-OX40 IgG2 antibody designated PF-04518600 (PF-8600).

別の群は、リガンドの細胞外ドメインに結合するがゆえに、Ｔ細胞の過剰活性化によって引き起こされる自己免疫を回避することによってＴリンパ球を負に制御する、リンパ球活性化遺伝子３タンパク質（抗ＬＡＧ－３；ＣＤ２２３）と免疫反応する。ＬＡＧ－３は、インビボにおける重要な免疫チェックポイントであり、ヒトの免疫系においてバランスのとれた調節的役割を果たす［Ｓｈａｎ ｅｔ ａｌ．，Ｏｎｃｏｌ Ｌｅｔｔ ２０：２０７（２０２０）］。Another group immunoreacts with lymphocyte activation gene 3 protein (anti-LAG-3; CD223), which binds to the extracellular domain of the ligand and thus negatively regulates T lymphocytes by avoiding autoimmunity caused by T cell overactivation. LAG-3 is a key immune checkpoint in vivo and plays a balancing regulatory role in the human immune system [Shan et al., Oncol Lett 20:207 (2020)].

ＬＡＧ－３分子は、Ｔ細胞活性化のシグナル伝達経路を遮断する。しかしながら、ＬＡＧ－３分子の細胞内セグメントは、ＣＤ４＋Ｔ細胞の活性を制御すると見出された免疫抑制性シグナルを生成する。ＬＡＧ－３は、３つのやり方でＴ細胞の免疫応答を制御する。第１に、ＬＡＧ－３は、Ｔ細胞の負の制御を介して、Ｔ細胞の増殖及び活性化を直接阻害する。第２に、ＬＡＧ－３は、制御性Ｔ細胞（Ｔｒｅｇ）の阻害機能を促進することができ、次いで、そのＴ細胞応答を間接的に阻害することができる。第３に、ＬＡＧ－３は、抗原提示細胞（ＡＰＣ）の機能を制御することによって、Ｔ細胞の活性化を防ぐことができる［Ｊｏｌｌｅｒ ｅｔ ａｌ．，Ｃｕｒｒ Ｔｏｐ Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ Ｉｍｍｕｎｏｌ ４１０：１２７－１５６（２０１７）］。The LAG-3 molecule blocks the signaling pathway of T cell activation. However, the intracellular segment of the LAG-3 molecule generates an immunosuppressive signal that was found to control the activity of CD4+ T cells. LAG-3 controls the immune response of T cells in three ways. First, LAG-3 directly inhibits T cell proliferation and activation through negative control of T cells. Second, LAG-3 can promote the inhibitory function of regulatory T cells (Tregs), which can then indirectly inhibit the T cell response. Third, LAG-3 can prevent T cell activation by controlling the function of antigen-presenting cells (APCs) [Joller et al., Curr Top Microbiol Immunol 410:127-156 (2017)].

現在までに、ＬＡＧ－３に対するモノクローナル抗体で、米国食品医薬品局から販売及び使用が承認されたものは知られていない。ＭＫ－４２８０と称されるＭｅｒｃｋのヒト化ＩｇＧ４モノクローナル抗体を用いた研究、及びレラトリマブ（ｒｅｌａｔｌｉｍａｂ）というＩＮＮ名を有するＢｒｉｓｔｏｌ Ｍｙｅｒｓ Ｓｑｕｉｂｂの別のヒト化ＩｇＧ４モノクローナル抗体を用いた研究が進行中である。To date, no monoclonal antibodies against LAG-3 are known to be approved for sale or use by the U.S. Food and Drug Administration. Studies are ongoing with a humanized IgG4 monoclonal antibody from Merck called MK-4280, and with another humanized IgG4 monoclonal antibody from Bristol Myers Squibb that has the INN name relatlimab.

なおもさらなるタイプの免疫チェックポイント阻害剤は、ＣＤ４７に対するモノクローナル抗体及びマクロファージチェックポイント阻害剤であり、そのマクロファージチェックポイント阻害剤は、マクロファージ上のＳＩＲＰαレセプターによるＣＤ４７の認識を阻害し、ゆえに、マクロファージに飲み込まれるのを回避するために癌細胞が用いる「私を食べるな」というシグナルを遮断する。このモノクローナルは、ＩＮＮ名がマグロリマブ（ｍａｇｒｏｌｉｍａｂ）であり、骨髄異形成症候群（ＭＤＳ）を含むいくつかの血液及び固形腫瘍の悪性腫瘍において、Ｇｉｌｉａｄ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ，Ｉｎｃ．が開発中のものである。マグロリマブは、骨髄異形成症候群（ＭＤＳ）、急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）、びまん性大細胞型Ｂ細胞リンパ腫（ＤＬＢＣＬ）及び濾胞性リンパ腫の処置についてＦＤＡからファスト・トラック指定（Ｆａｓｔ Ｔｒａｃｋ Ｄｅｓｉｇｎａｔｉｏｎ）を付与されている。マグロリマブは、ＭＤＳ及びＡＭＬについてＦＤＡから、ＡＭＬについて欧州医薬品庁から、希少疾病用医薬品の指定も付与されている。Yet another type of immune checkpoint inhibitor is a monoclonal antibody against CD47 and a macrophage checkpoint inhibitor that inhibits recognition of CD47 by the SIRPα receptor on macrophages, thus blocking the "don't eat me" signal used by cancer cells to avoid being engulfed by macrophages. This monoclonal, with the INN name magrolimab, is being developed by Giliad Sciences, Inc. in several hematological and solid tumor malignancies, including myelodysplastic syndromes (MDS). Magrolimab has been granted Fast Track Designation by the FDA for the treatment of myelodysplastic syndromes (MDS), acute myeloid leukemia (AML), diffuse large B-cell lymphoma (DLBCL), and follicular lymphoma. Magrolimab has also been granted Orphan Drug Designation by the FDA for MDS and AML and by the European Medicines Agency for AML.

別のチェックポイントマーカーであるＴ細胞免疫グロブリン・ムチンドメイン３に対するモノクローナル抗体（抗ＴＩＭ－３）は、白血病幹細胞の差次的発現、共阻害性Ｔ細胞コレセプターとしてのその役割、及びおそらくは抗体依存性細胞食作用（ＡＤＣＰ）の促進における役割に基づいてＭＤＳ及びＡＭＬ治療において使用するために、サバトリマブ（ｓａｂａｔｏｌｉｍａｂ）（以前のＭＢＧ－４５３）というＩＮＮ名でＮｏｖａｒｔｉｓ Ｏｎｃｏｌｏｇｙ Ｃｏ．による初期開発の段階にある。ＴＩＭ－３は、ＡＭＬ白血病前駆細胞上に発現されているが、正常な造血幹細胞上には見られず、その発現は、骨髄異形成症候群の重症度並びにＡＭＬへの進行の可能性と相関している。現在、ＴＩＭ－３抗体であるＭＢＧ－４５３は、第一線の骨髄異形成症候群及びＡＭＬにおいて複数の治験が行われており、デシタビンと組み合わせて使用したとき、有望な抗白血病活性を示す。Another checkpoint marker, a monoclonal antibody against T cell immunoglobulin mucin domain 3 (anti-TIM-3), is in early development by Novartis Oncology Co. under the INN name sabatolimab (formerly MBG-453) for use in MDS and AML treatment based on its differential expression on leukemic stem cells, its role as a coinhibitory T cell coreceptor, and possibly its role in promoting antibody-dependent cellular phagocytosis (ADCP). TIM-3 is expressed on AML leukemic progenitor cells but not on normal hematopoietic stem cells, and its expression correlates with the severity of myelodysplastic syndromes and the likelihood of progression to AML. MBG-453, a TIM-3 antibody, is currently undergoing multiple clinical trials in frontline myelodysplastic syndromes and AML and has shown promising anti-leukemic activity when used in combination with decitabine.

インタクトなモノクローナル抗体、並びにそれらのパラトープ含有部分（結合部位含有部分）（例えば、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）２及びＦｖ領域）、並びに一本鎖ペプチド結合配列が、免疫チェックポイントタンパク質阻害剤として有用であり得る。これらの抗体の多くが、ＩＶ経路を介して投与される。インタクトなチェックポイント阻害性モノクローナル抗体は、ヒトの体内において約１～３週間の半減期を有し［例えば、Ｙｅｒｖｏｙ（登録商標）（イピリムマブ）ターミナルｔ_１／２＝１５．４日；添付文書１２／２０１３；Ｋｅｙｔｒｕｄａ（登録商標）（ペンブロリズマブ）ターミナルｔ_１／２＝２３日；添付文書０３／２０１７］、一本鎖オリゴ又はポリペプチドは、インビボにおいてそれより短い半減期を有する傾向がある。 Intact monoclonal antibodies, as well as their paratope-containing (binding site-containing) portions (e.g., Fab, Fab', F(ab')2 and Fv regions), and single-chain peptide binding sequences may be useful as immune checkpoint protein inhibitors. Many of these antibodies are administered via the IV route. Intact checkpoint inhibitory monoclonal antibodies have half-lives in the human body of about 1-3 weeks [e.g., Yervoy® (ipilimumab) terminal t_1/2 =15.4 days; Package insert 12/2013; Keytruda® (pembrolizumab) terminal t_1/2 =23 days; Package insert 03/2017], while single-chain oligo- or polypeptides tend to have shorter half-lives in vivo.

小分子である第２の抗白血病細胞傷害剤及びハロゲン化キサンテン化合物含有薬剤は、半減期が比較的短いので、両方の薬剤を単一の組成物又は別々の組成物として投与することができる。別々に投与する場合、両方のタイプの抗癌剤（抗白血病剤）を互いの数分以内から約３時間以内に投与することが好ましい。より好ましくは、両方を、他方の１時間未満のうちに投与する。Because the second anti-leukemic cytotoxic agent, which is a small molecule, and the halogenated xanthene compound-containing agent have relatively short half-lives, both agents can be administered as a single composition or as separate compositions. If administered separately, it is preferred that both types of anti-cancer (antileukemic) agents be administered within a few minutes to about 3 hours of each other. More preferably, both are administered within less than an hour of the other.

単語「投与」は、処置レジメンの開始を意味するために本明細書中で使用される。したがって、ＩＶ流を開始する時点のように、錠剤又は他の経口剤形を嚥下することが、処置レジメンの開始である。第１の抗白血病細胞傷害剤と第２の抗白血病細胞傷害剤の両方が、同じ単一の組成物に共に存在するとき、その単位組成物が被験体の体内に入った時点で投与が開始する。The word "administration" is used herein to mean the initiation of a treatment regimen. Thus, swallowing a tablet or other oral dosage form is the initiation of a treatment regimen, as is the time at which IV flow is initiated. When both the first and second antileukemic cytotoxic agents are present together in the same unitary composition, administration begins when that unitary composition enters the subject's body.

第２の抗白血病全身性細胞傷害剤が、モノクローナル抗体などの免疫チェックポイント阻害剤である場合、ハロゲン化キサンテン化合物と第２の抗白血病細胞傷害剤である免疫チェックポイント阻害剤とは、一緒に投与してもよいし、一方を他方の前に投与してもよく、第２の抗白血病細胞傷害剤である免疫チェックポイント阻害剤は、ハロゲン化キサンテンの約１ヶ月前までに投与される。好ましくは、それら２つの抗白血病細胞傷害剤は、一緒に投与されるか、又はハロゲン化キサンテンの後、数日以内に第２の抗白血病全身性細胞傷害剤である免疫チェックポイント阻害剤が投与される。また、第２の抗白血病全身性細胞傷害剤である免疫チェックポイント阻害剤は、ハロゲン化キサンテンの約１ヶ月後にも投与され得る。When the second anti-leukemia systemic cytotoxic agent is an immune checkpoint inhibitor such as a monoclonal antibody, the halogenated xanthene compound and the second anti-leukemia cytotoxic immune checkpoint inhibitor may be administered together or one before the other, with the second anti-leukemia cytotoxic immune checkpoint inhibitor being administered up to about one month before the halogenated xanthene. Preferably, the two anti-leukemia cytotoxic agents are administered together or the second anti-leukemia systemic cytotoxic immune checkpoint inhibitor is administered within a few days after the halogenated xanthene. The second anti-leukemia systemic cytotoxic immune checkpoint inhibitor may also be administered about one month after the halogenated xanthene.

研究
マウス：
Ｃｈａｒｌｅｓ Ｒｉｖｅｒからの雌Ｃ１７ ＳＣＩＤマウス Research Mice:
Female C17 SCID mice from Charles River

異種移植において使用した細胞株：
まず、急性Ｂリンパ芽球性白血病を有する５歳女性からＳＥＭ細胞株を樹立した。その細胞株は、ＭＬＬ－ＡＦＦＦ１遺伝子融合を有し、ＣＤＫＮ２Ａ及びＴＰ５３についてヘテロ接合性であった。抗癌薬感受性研究におけるこの細胞株の有用性は、報告されている（Ｂａｒｒｅｔｉｎａ ｅｔ ａｌ．Ｎａｔｕｒｅ ４８３：６０３－６０７，２０１２）。 Cell lines used in xenografts:
First, we established a SEM cell line from a 5-year-old female with acute B-lymphoblastic leukemia. The cell line harbored the MLL-AFFF1 gene fusion and was heterozygous for CDKN2A and TP53. The utility of this cell line in anticancer drug sensitivity studies has been reported (Barretina et al. Nature 483:603-607, 2012).

指数関数的に増殖中の２．５×１０^６個のＳＥＭ細胞［緑色蛍光タンパク質（ＧＦＰ）で標識されたもの］を各動物の静脈内に注射し、腫瘍の確立をモニターした。４週間、腫瘍を成長させた後、マウスを無作為に３つの群に分けた。 Exponentially growing 2.5 ×¹⁰⁶ SEM cells [labeled with green fluorescent protein (GFP)] were injected intravenously into each animal and tumor establishment was monitored. After allowing tumors to grow for 4 weeks, mice were randomly divided into three groups.

群１（ｎ＝９）。コントロール
これらの動物には、２週間にわたって１週間に２回、１００μＬのＰＢＳを経口投与した。 Group 1 (n=9). Control The animals were orally dosed with 100 μL PBS twice a week for two weeks.

群２（ｎ＝８）。処置コホートＩ
これらの動物には、最終体積が１００μＬとなるようにＰＢＳに希釈された２５μＬのＰＶ－１０（登録商標）（０．９パーセント食塩水溶液中の１０％ローズベンガル二ナトリウムｗ／ｖ）を、２週間にわたって１週間に２回、胃管栄養法によって経口投与した。 Group 2 (n=8). Treatment Cohort I
The animals were orally administered 25 μL of PV-10® (10% Rose Bengal disodium w/v in 0.9 percent saline solution) diluted in PBS to a final volume of 100 μL by gavage twice weekly for two weeks.

群３（ｎ＝８）。処置コホートＩＩ
これらの動物には、最終体積が１００μＬとなるようにＰＢＳに希釈された１２．５μＬのＰＶ－１０（登録商標）（上で論じられたとおり）を２週間にわたって１週間に２回、胃管栄養法によって経口投与した。 Group 3 (n=8). Treatment Cohort II
The animals were orally administered 12.5 μL of PV-10® (as discussed above) diluted in PBS to a final volume of 100 μL, by gavage, twice a week for two weeks.

疾患進行のエビデンスをすべての動物においてモニターし、処置開始の１２０日後まで生存を追跡した。データをカプラン・マイヤー推定値として図１に示す。All animals were monitored for evidence of disease progression and followed for survival up to 120 days after treatment initiation. Data are presented as Kaplan-Meier estimates in Figure 1.

図１のグラフから分かるように、ＨＸ化合物の経口送達は、処置されたマウスの用量依存的生存率によって明確に証明される。As can be seen from the graph in Figure 1, oral delivery of HX compounds is clearly evidenced by the dose-dependent survival rate of treated mice.

親出願である第１６／６８８，３１９に開示されている結果は、原発性又は再発性の小児白血病を有する患者由来の、ＰＶ－１０（登録商標）で処置された１１個の商業的に入手可能な白血病細胞株、及び細胞培養中の２つの原発性白血病サンプルを、ＰＶ－１０（登録商標）の用量を増加させて投与することによって殺滅することができたことを示した。細胞生存率は、処置の９６時間後にアラマーブルーアッセイによって計測された。Results disclosed in parent application Ser. No. 16/688,319 showed that eleven commercially available leukemia cell lines treated with PV-10® and two primary leukemia samples in cell culture derived from patients with primary or recurrent childhood leukemia could be killed by administering increasing doses of PV-10®. Cell viability was measured by Alamar Blue assay 96 hours after treatment.

ＰＶ－１０（登録商標）を投与することにより、白血病細胞の生存率が、調べた１１個の小児白血病細胞株（平均ＩＣ_５０９２．８μＭ）及び３つの原発性白血病サンプル（平均ＩＣ_５０１２２．５μＭ）において濃度依存的様式及び時間依存的様式で低下した。この結果から、ＰＶ－１０は、９２．８μＭという平均ＩＣ_５０値で白血病細胞株に対して細胞傷害性であり（下記の表１）、１２２．５μＭという平均ＩＣ_５０値で２つの原発性白血病サンプルに対して細胞傷害性である（下記の表２）ことが示された。 Administration of PV-10® reduced leukemic cell viability in a concentration- and time-dependent manner in 11 pediatric leukemic cell lines (mean IC₅₀ 92.8 μM) and three primary leukemic samples (mean IC₅₀ 122.5 μM) examined. The results showed that PV-10 was cytotoxic against leukemic cell lines with a mean IC₅₀ value of 92.8 μM (Table 1 below) and against two primary leukemic samples with a mean IC₅₀ value of 122.5 μM (Table 2 below).

類似の結果が、白血病細胞株ＣＣＲＦ－ＣＥＭ、ＨＬ－６０（ＴＢ）、Ｋ－５６２、ＭＯＬＴ－４、ＲＰＭＩ－８２２６及びＳＲを用いて別々に得られた。Similar results were obtained separately using the leukemia cell lines CCRF-CEM, HL-60(TB), K-562, MOLT-4, RPMI-8226 and SR.

これらの研究において使用されたＲＢ二ナトリウムの濃度（ＩＣ_５０値に基づきおよそ１０^－４～約１０^－５モル濃度であった）で白血病細胞を完全に殺滅できたことは驚くべきことである。それでも、必要なＨＸ化合物の濃度は、先に述べたように、本研究において経口投与によって達成されると考えられている濃度より高かった。したがって、図１のデータが示すように、未処置の白血病マウス及びより少ない量のＨＸ化合物で処置された白血病マウスはかなり低い生存率を示したのに対して、ＨＸ化合物で処置された白血病マウスの６２．５％が１２０日間生存したことは、さらにより驚くべきことであった。 It is surprising that the concentrations of RB disodium used in these studies (which were approximately 10⁻⁴ to about 10⁻⁵ molar based on IC₅₀ values) were able to completely kill leukemic cells. Nevertheless, the concentrations of HX compound required were higher than those believed to be achieved by oral administration in the present studies, as mentioned above. Thus, it is even more surprising that 62.5% of the leukemic mice treated with HX compound survived for 120 days, whereas untreated leukemic mice and leukemic mice treated with lower amounts of HX compound showed significantly lower survival rates, as shown by the data in Figure 1.

本明細書に引用された特許、特許出願及び論文は、各々、参照により援用される。冠詞「ａ」及び「ａｎ」は、その冠詞の１つの又は１つより多い（すなわち、少なくとも１つの）文法上の対象物のことを指すために本明細書中で使用される。本明細書に引用された特許、特許出願及び論文は、各々、参照により援用される。Each of the patents, patent applications, and articles cited herein is incorporated by reference. The articles "a" and "an" are used herein to refer to one or to more than one (i.e., to at least one) of the grammatical object of the article. Each of the patents, patent applications, and articles cited herein is incorporated by reference.

前述の説明及び例は、例証と意図されたものであって、限定と解釈されるべきではない。本発明の趣旨及び範囲内でさらに他の変形が可能であり、当業者はそれらを容易に思いつくだろう。The foregoing description and examples are intended to be illustrative and should not be construed as limiting. Still other variations within the spirit and scope of the invention are possible and will readily occur to those skilled in the art.

Claims (30)

Translated fromJapanese

白血病細胞を有する哺乳動物被験体の処置に使用するための薬学的組成物であって、前記薬学的組成物は、薬学的に許容され得る固体組成物又は液体組成物に溶解又は分散された第１の白血病用細胞傷害剤として、治療有効量のハロゲン化キサンテン、その薬学的に許容され得る塩、ラクトン又はＣ_１－Ｃ_４アルキルエステルもしくは芳香族エステル（ＨＸ化合物）を含み、白血病細胞を有する前記哺乳動物被験体に経口投与される、薬学的組成物。 1. A pharmaceutical composition for use in treating a mammalian subject having leukemic cells, said pharmaceutical composition comprising a therapeutically effective amount of a halogenated xanthene, a pharma- ceutical acceptable salt, lactone, or_C1 -_C4 alkyl or aromatic ester thereof (HX compound) as a first leukemic cytotoxic agent dissolved or dispersed in a pharma- ceutical acceptable solid or liquid composition, which is orally administered to said mammalian subject having leukemic cells. 前記経口投与が、繰り返される、請求項１に記載の薬学的組成物。The pharmaceutical composition of claim 1, wherein the oral administration is repeated. 前記組成物が、固体である、請求項１に記載の薬学的組成物。The pharmaceutical composition of claim 1, wherein the composition is a solid. 前記ＨＸ化合物が、固体希釈媒体中に溶解されているか、又は固体希釈媒体中もしくは固体希釈媒体上に分散されている、請求項３に記載の薬学的組成物。The pharmaceutical composition of claim 3, wherein the HX compound is dissolved in a solid diluent medium or dispersed in or on a solid diluent medium. 前記固体組成物が、錠剤、ロゼンジ又は複数の概して球状の糖小球の形態である、請求項３に記載の薬学的組成物。The pharmaceutical composition of claim 3, wherein the solid composition is in the form of a tablet, lozenge, or a plurality of generally spherical sugar globules. 前記固体組成物が、１層又は複数層の前記ＨＸ化合物でコーティングされた概して球状の糖小球を含む、請求項５に記載の薬学的組成物。The pharmaceutical composition of claim 5, wherein the solid composition comprises generally spherical sugar spheres coated with one or more layers of the HX compound. 前記固体組成物が、水性媒体中での前記組成物の溶解速度及び／又は崩壊速度を低下させるバリアフィルムでコーティングされている、請求項３に記載の薬学的組成物。The pharmaceutical composition of claim 3, wherein the solid composition is coated with a barrier film that reduces the dissolution rate and/or disintegration rate of the composition in an aqueous medium. 前記バリアフィルムコーティングが、５又はそれを超える生理学的ｐＨ値において溶解及び／又は崩壊する腸溶コーティングである、請求項７に記載の薬学的組成物。The pharmaceutical composition of claim 7, wherein the barrier film coating is an enteric coating that dissolves and/or disintegrates at a physiological pH value of 5 or greater. 前記第１の白血病用細胞傷害剤ハロゲン化キサンテン化合物が、ローズベンガル、その薬学的に許容され得る塩、ラクトン又はＣ_１－Ｃ_４アルキルエステルもしくは芳香族エステルである、請求項１に記載の薬学的組成物。 2. The pharmaceutical composition of claim 1, wherein said firstleukemic cytotoxic halogenated xanthene compound is Rose Bengal, a pharma- ceutically acceptable salt, lactone, or_C1 -_C4 alkyl ester or aromatic ester thereof. 前記ＨＸ化合物が、ローズベンガル、その薬学的に許容され得る塩、ラクトン又はＣ_１－Ｃ_４アルキルエステルもしくは芳香族エステルである、請求項１に記載の薬学的組成物。 2. The pharmaceutical composition of claim 1, wherein the HX compound is Rose Bengal, a pharma- ceutically acceptable salt, lactone, or_C1 -_C4 alkyl ester or aromatic ester thereof. 前記組成物が、水性液体である、請求項１に記載の薬学的組成物。The pharmaceutical composition of claim 1, wherein the composition is an aqueous liquid. 前記水性液体組成物が、正常なヒトの浸透圧未満の浸透圧として存在する、請求項１１に記載の薬学的組成物。The pharmaceutical composition of claim 11, wherein the aqueous liquid composition is present at an osmolality less than that of a normal human. 前記経口投与が、薬学的に許容され得る媒体に溶解又は分散された、第２の治療有効量の、第２の異なって作用する白血病用全身性細胞傷害剤を前記哺乳動物被験体に投与することとともに行われ、前記白血病用全身性細胞傷害剤は、小分子、炎症性ケモカイン活性を阻害するタンパク質性分子、電離放射線療法、及びインタクトなチェックポイント阻害抗体又はそのパラトープ含有部分である、請求項１に記載の薬学的組成物。The pharmaceutical composition of claim 1, wherein the oral administration is accompanied by administration to the mammalian subject of a second therapeutically effective amount of a second, differently acting, leukemia systemic cytotoxic agent dissolved or dispersed in a pharma-ceutical acceptable vehicle, the leukemia systemic cytotoxic agent being a small molecule, a proteinaceous molecule that inhibits inflammatory chemokine activity, ionizing radiation therapy, and an intact checkpoint inhibitor antibody or a paratope-containing portion thereof. 前記第２の白血病用細胞傷害剤が、薬学的に許容され得る固体媒体に溶解又は分散されている、請求項１３に記載の薬学的組成物。The pharmaceutical composition of claim 13, wherein the second leukemia cytotoxic agent is dissolved or dispersed in a pharma-ceutical acceptable solid medium. 前記第２の白血病用細胞傷害剤を含む前記薬学的に許容され得る固体媒体が、経口的に投与される、請求項１４に記載の薬学的組成物。The pharmaceutical composition of claim 14, wherein the pharma-ceutical acceptable solid vehicle containing the second leukemia cytotoxic agent is administered orally. 前記第２の白血病用細胞傷害剤が、電離放射線である、請求項１３に記載の薬学的組成物。The pharmaceutical composition of claim 13, wherein the second leukemia cytotoxic agent is ionizing radiation. 前記小分子が、前記第１の白血病用細胞傷害剤と相乗作用を示す、請求項１３に記載の薬学的組成物。The pharmaceutical composition of claim 13, wherein the small molecule exhibits synergy with the first leukemia cytotoxic agent. 前記第２の白血病用細胞傷害剤が、薬学的に許容され得る水性媒体に溶解又は分散されている、請求項１３に記載の薬学的組成物。The pharmaceutical composition of claim 13, wherein the second leukemia cytotoxic agent is dissolved or dispersed in a pharma-ceutical acceptable aqueous medium. 前記第２の白血病用細胞傷害剤を含む前記薬学的に許容され得る水性媒体が、静脈内に投与される、請求項１８に記載の薬学的組成物。The pharmaceutical composition of claim 18, wherein the pharma-ceutical acceptable aqueous medium containing the second leukemia cytotoxic agent is administered intravenously. 前記第２の白血病用細胞傷害剤が、約１５０～約１０００Ｄａの分子量を有する小分子である、請求項１３に記載の薬学的組成物。The pharmaceutical composition of claim 13, wherein the second leukemia cytotoxic agent is a small molecule having a molecular weight of about 150 to about 1000 Da. 前記小分子が、ビンブラスチン、ビンクリスチン、イマチニブ、モノメチルオーリスタチン、エトポシド、ダウノルビシン、ドキソルビシン、クラドリビン、フルダラビン、ミトキサントロン、６－チオグアニン、メトトレキサート、６－メルカプトプリン、アザシチジン、アンナマイシン、ソラフェニブ、クロファラビン、シスプラチン、イリノテカン及びシタラビンからなる群のうちの１つ以上から選択される、請求項２０に記載の薬学的組成物。21. The pharmaceutical composition of claim 20, wherein the small molecule is selected from one or more of the group consisting of vinblastine, vincristine, imatinib, monomethylauristatin, etoposide, daunorubicin, doxorubicin, cladribine, fludarabine, mitoxantrone, 6-thioguanine, methotrexate, 6-mercaptopurine, azacytidine, annamycin, sorafenib, clofarabine, cisplatin, irinotecan, and cytarabine. 前記第２の白血病用細胞傷害剤が、インタクトなモノクローナル抗体又はそのパラトープ含有部分を含む、請求項１９に記載の薬学的組成物。20. The pharmaceutical composition of claim 19, wherein the second leukemia cytotoxic agent comprises an intact monoclonal antibody or a paratope-containing portion thereof. 前記インタクトなモノクローナル抗体又はそのパラトープ含有部分が、免疫チェックポイント阻害剤である、請求項２２に記載の薬学的組成物。23. The pharmaceutical composition of claim 22, wherein the intact monoclonal antibody or a paratope-containing portion thereof is an immune checkpoint inhibitor. 前記免疫チェックポイント阻害剤が、抗ＣＴＬＡ－４、抗ＰＤ－１、抗ＰＤ－Ｌ１、抗ＰＤ－Ｌ２、抗ＯＸ４０、抗ＬＡＧ－３、抗ＣＤ４７及び抗ＴＩＭ－３からなる群のうちの１つ以上から選択される１つ以上のタンパク質性材料に結合する、請求項２３に記載の薬学的組成物。The pharmaceutical composition of claim 23, wherein the immune checkpoint inhibitor is bound to one or more proteinaceous materials selected from one or more of the group consisting of anti-CTLA-4, anti-PD-1, anti-PD-L1, anti-PD-L2, anti-OX40, anti-LAG-3, anti-CD47, and anti-TIM-3. 前記インタクトなモノクローナル抗体が、アダリムマブ、ブロダルマブ、セルトリズマブペゴール、エタネルセプト、ゴリムマブ、グセルクマブ、インフリキシマブ、イキセキズマブ、サリルマブ、セクキヌマブ及びウステキヌマブからなる群より選択される、炎症性ケモカイン活性を阻害するタンパク質性分子である、請求項２２に記載の薬学的組成物。23. The pharmaceutical composition of claim 22, wherein the intact monoclonal antibody is a proteinaceous molecule that inhibits inflammatory chemokine activity selected from the group consisting of adalimumab, brodalumab, certolizumab pegol, etanercept, golimumab, guselkumab, infliximab, ixekizumab, sarilumab, secukinumab, and ustekinumab. 前記抗体又はそのパラトープ含有部分が、前記ＨＸ化合物の投与後に投与される、請求項２２に記載の薬学的組成物。23. The pharmaceutical composition of claim 22, wherein the antibody or paratope-containing portion thereof is administered after administration of the HX compound. 前記抗体又はそのパラトープ含有部分が、前記ＨＸ化合物の投与前に投与される、請求項２２に記載の薬学的組成物。23. The pharmaceutical composition of claim 22, wherein the antibody or paratope-containing portion thereof is administered prior to administration of the HX compound. 前記抗体又はそのパラトープ含有部分が、前記ＨＸ化合物の投与と同時に投与される、請求項２２に記載の薬学的組成物。23. The pharmaceutical composition of claim 22, wherein the antibody or paratope-containing portion thereof is administered simultaneously with administration of the HX compound. 前記第１のＨＸ化合物と前記第２の白血病用細胞傷害剤とが、互いの約３時間以内に同時に投与される、請求項１３に記載の薬学的組成物。The pharmaceutical composition of claim 13, wherein the first HX compound and the second leukemia cytotoxic agent are administered simultaneously within about 3 hours of each other. 前記ＨＸ化合物が、ローズベンガル、その薬学的に許容され得る塩、ラクトン又はＣ_１－Ｃ_４アルキルエステルもしくは芳香族エステルである、請求項１３に記載の薬学的組成物。 14. The pharmaceutical composition of claim 13, wherein the HX compound is Rose Bengal, a pharma- ceutically acceptable salt, lactone, or_C1 -_C4 alkyl ester or aromatic ester thereof.

Images