JP4856752B2 - Method for producing drug-containing nanoparticles - Google Patents

Description

Translated fromJapanese

本発明は、乳酸・グリコール酸共重合体に生物活性成分を封入した薬物含有ナノ粒子の製造方法に関するものである。  The present invention relates to a method for producing drug-containing nanoparticles in which a bioactive component is encapsulated in a lactic acid / glycolic acid copolymer.

近年、病変部位や腫瘍組織への薬物のターゲティング能を高めるとともに、薬効を持続させることで、過剰な薬物投与を抑えようとする技術、いわゆるDrug Delivery System（以下、ＤＤＳという）が考案され、盛んに研究されている。ＤＤＳは、薬物を生体適合性の膜（キャリアー）で包むことにより、毛細血管の微小な穴を通り抜けることができる数十〜数百ナノメートル程度の粒子（以下、ナノ粒子という）とし、途中で吸収・分解されることなく目標とする患部に薬物を効果的かつ集中的に送り込み、患部で薬物を放出させる技術であり、薬物の治療効果を高めるだけでなく、副作用の軽減も期待できるというメリットがある。  In recent years, a technique to suppress excessive drug administration by enhancing drug targeting ability to a lesion site or tumor tissue and maintaining the drug effect has been devised, so-called Drug Delivery System (hereinafter referred to as DDS). Has been studied. DDS is a tens to hundreds of nanometer particles (hereinafter referred to as “nanoparticles”) that can pass through microscopic holes in capillaries by wrapping the drug with a biocompatible membrane (carrier). A technology that effectively and intensively delivers drugs to the target affected area without being absorbed or decomposed, and releases the drug in the affected area, and not only enhances the therapeutic effect of the drug, but also can be expected to reduce side effects There is.

ナノ粒子を構成する素材としての生体適合性高分子は、生体への刺激・毒性が低く、生体適合性で、投与後に分解して代謝される生体内分解性のものが望ましい。また、内包する薬物を持続して徐々に放出する粒子であることが好ましい。このような素材として、例えば乳酸・グリコール酸共重合体（以下、ＰＬＧＡという）が好適に用いられている。ＰＬＧＡは薬物を内包可能であり、当該薬物の効力を保持したまま長期間保存できることが知られている。さらに、ＰＬＧＡの加水分解・長期半減期の特徴から、数日から１ヶ月単位の徐放ができると考えられる。  The biocompatible polymer as the material constituting the nanoparticles is preferably a biocompatible polymer that has low irritation and toxicity to the living body, is biocompatible, and is decomposed and metabolized after administration. Moreover, it is preferable that it is the particle | grain which releases the drug to include continuously and gradually. As such a material, for example, a lactic acid / glycolic acid copolymer (hereinafter referred to as PLGA) is preferably used. It is known that PLGA can contain a drug and can be stored for a long time while maintaining the efficacy of the drug. Furthermore, it is considered that sustained release in units of several days to one month can be performed from the characteristics of PLGA hydrolysis and long-term half-life.

ＰＬＧＡを用いた薬物含有ナノ粒子（以下、単にＰＬＧＡナノ粒子という）の製造方法として、例えば特許文献１には、水中エマルジョン溶媒拡散法（Emulsion Solvent Diffusion method；ＥＳＤ法）を用いたＰＬＧＡナノ粒子の製造方法が開示されている。ＥＳＤ法では、ＰＬＧＡを水混和性の有機溶媒（良溶媒）に溶解し、これを貧溶媒となる水中へ添加した際に生じる自己乳化現象により微小なエマルジョン滴が形成される。これと同時に両溶媒が相互拡散して液滴内のＰＬＧＡが沈積し、ナノ粒子が生成するため、比較的穏やかな攪拌条件下においてＰＬＧＡナノ粒子を調製することができる。  As a method for producing drug-containing nanoparticles using PLGA (hereinafter simply referred to as PLGA nanoparticles), for example,Patent Document 1 discloses a method for producing PLGA nanoparticles using an emulsion solvent diffusion method (ESD method) in water. A manufacturing method is disclosed. In the ESD method, fine emulsion droplets are formed by the self-emulsification phenomenon that occurs when PLGA is dissolved in a water-miscible organic solvent (good solvent) and added to water as a poor solvent. At the same time, both solvents diffuse to each other and PLGA is deposited in the droplets to produce nanoparticles, so that PLGA nanoparticles can be prepared under relatively mild stirring conditions.

このようにして調製されたＰＬＧＡナノ粒子を無菌製剤に臨床応用するためには、何らかの方法でＰＬＧＡナノ粒子を滅菌する必要があるが、ＰＬＧＡのガラス転移点は約４５℃であるため加熱滅菌法は採用できない。そこで、放射線照射や加圧ろ過などの非加熱滅菌法を用いることが考えられる。このうち、放射線照射では薬物とＰＬＧＡが分解して薬物の放出特性等が変化するおそれがある。また、全ての分解物を同定し、それらの毒性試験を行うのは容易ではない。従って、ＰＬＧＡナノ粒子の滅菌法としては加圧ろ過法が好ましい。  In order to clinically apply the PLGA nanoparticles thus prepared to a sterile preparation, it is necessary to sterilize the PLGA nanoparticles by some method. However, since the glass transition point of PLGA is about 45 ° C., the heat sterilization method is used. Cannot be adopted. Therefore, it is conceivable to use a non-heat sterilization method such as radiation irradiation or pressure filtration. Among these, irradiation with radiation may cause the drug and PLGA to decompose and change the drug release characteristics. Moreover, it is not easy to identify all degradation products and perform their toxicity tests. Therefore, the pressure filtration method is preferable as a sterilization method for PLGA nanoparticles.

加圧ろ過法では、孔径０．２μｍのろ過滅菌用メンブレンフィルターを通過可能なＰＬＧＡナノ粒子を調製する必要がある。しかし、特許文献１の方法により調製された平均粒子径２００〜３００ｎｍのＰＬＧＡナノ粒子では、メンブレンフィルターを通過する粒子は最大でも１０％未満であって、実用に適うものではなかった。  In the pressure filtration method, it is necessary to prepare PLGA nanoparticles that can pass through a membrane filter for filtration sterilization having a pore diameter of 0.2 μm. However, PLGA nanoparticles with an average particle diameter of 200 to 300 nm prepared by the method ofPatent Document 1 have less than 10% of the particles that pass through the membrane filter, and are not suitable for practical use.

一方、特許文献２には、薬物及びＰＬＧＡを良溶媒に溶解した溶液を、異なる量の水または含水有機溶媒（貧溶媒）に拡散させることにより、ＰＬＧＡナノ粒子の粒子径を調整する方法が開示されている。また、良溶媒（アセトン）に対するＰＬＧＡの濃度を下げることでＰＬＧＡナノ粒子の粒子径を小さくできることも記載されている。  On the other hand, Patent Document 2 discloses a method of adjusting the particle size of PLGA nanoparticles by diffusing a solution in which a drug and PLGA are dissolved in a good solvent into different amounts of water or a water-containing organic solvent (poor solvent). Has been. It is also described that the particle diameter of PLGA nanoparticles can be reduced by reducing the concentration of PLGA with respect to a good solvent (acetone).

特開２００５−２１３１７０号公報JP-A-2005-213170特開２００６−１３１５７７号公報JP 2006-131577 A

ところで、ＰＬＧＡナノ粒子を実用化するためには、乾燥させたＰＬＧＡナノ粒子粉末が水中で再分散可能であることが要求される。ＰＬＧＡナノ粒子粉末の再分散性を高めるためには、貧溶媒中にポリビニルアルコール（ＰＶＡ）を添加してＰＬＧＡナノ粒子表面をＰＶＡで被覆することが有効である。  By the way, in order to put PLGA nanoparticles into practical use, it is required that the dried PLGA nanoparticle powder be redispersible in water. In order to improve the redispersibility of the PLGA nanoparticle powder, it is effective to add polyvinyl alcohol (PVA) in a poor solvent and coat the surface of the PLGA nanoparticle with PVA.

しかしながら、ＰＶＡ水溶液を貧溶媒とし、特許文献２のようにアセトンを良溶媒としてろ過滅菌可能なＰＬＧＡナノ粒子を調製しようとすると、アセトンに対するＰＬＧＡ濃度を１ｍｇ／ｍＬ未満まで下げる必要があり、多量のアセトンを使用する上、容器への付着等によりナノ粒子の歩留まりも低くなるため、実用的な製造方法とは言えなかった。  However, if an attempt is made to prepare PLGA nanoparticles that can be sterilized by filtration using PVA aqueous solution as a poor solvent and acetone as a good solvent as in Patent Document 2, it is necessary to reduce the PLGA concentration to less than 1 mg / mL, In addition to using acetone, the yield of the nanoparticles is reduced due to adhesion to the container and the like, so it was not a practical production method.

本発明は、上記問題点に鑑み、ろ過滅菌用メンブレンフィルターを通過可能であるＰＬＧＡナノ粒子の簡便且つ効率的な製造方法を提供することを目的とする。  An object of this invention is to provide the simple and efficient manufacturing method of the PLGA nanoparticle which can pass the membrane filter for filtration sterilization in view of the said problem.

上記目的を達成するために本発明は、ポリビニルアルコール水溶液から成る貧溶媒に、アセトンとエタノールを含む良溶媒中に少なくとも薬物と乳酸・グリコール酸共重合体とを溶解させた良溶媒溶液を加えて、薬物含有ナノ粒子を形成してナノ粒子含有溶液とするナノ粒子形成工程と、前記ナノ粒子含有溶液から前記良溶媒を留去してナノ粒子懸濁液とする留去工程と、を含む薬物含有ナノ粒子の製造方法であって、前記良溶媒及び前記貧溶媒に対する乳酸・グリコール酸共重合体の濃度が共に１ｍｇ／ｍＬ以上６ｍｇ／ｍＬ以下である薬物含有ナノ粒子の製造方法である。To achieve the above object, the present invention adds a good solvent solution in which at least a drug and a lactic acid / glycolic acid copolymer are dissolved in a good solvent containing acetone and ethanol to a poor solvent comprising an aqueous polyvinyl alcohol solution. And a nanoparticle forming step of forming a drug-containing nanoparticle to form a nanoparticle-containing solution, and a distilling step of distilling off the good solvent from the nanoparticle-containing solution to form a nanoparticle suspension. It is a manufacturing method of a content nanoparticle, Comprising: The density| concentration of the lactic acid and glycolic acid copolymer with respect to the said good solvent and the said poor solvent is1 mg / mL or more and 6 mg / mL or less.

また本発明は、上記構成の薬物含有ナノ粒子の製造方法において、前記留去工程の後に、前記ナノ粒子懸濁液を孔径０．２μｍのメンブレンフィルターを用いて加圧ろ過するろ過滅菌工程を有することを特徴としている。  The present invention further includes a filtration sterilization step of pressure-filtering the nanoparticle suspension using a membrane filter having a pore size of 0.2 μm after the distillation step in the method for producing drug-containing nanoparticles having the above-described configuration. It is characterized by that.

また本発明は、上記構成の薬物含有ナノ粒子の製造方法において、前記留去工程を４５℃以下の温度で３０時間以内に行うことを特徴としている。  Moreover, the present invention is characterized in that, in the method for producing drug-containing nanoparticles having the above-described configuration, the distillation step is performed at a temperature of 45 ° C. or less within 30 hours.

また本発明は、上記構成の薬物含有ナノ粒子の製造方法において、前記ナノ粒子形成工程において、貧溶媒中にカチオン性高分子を溶解させて前記ナノ粒子表面をカチオン性高分子で被覆することを特徴としている。  Further, the present invention provides a method for producing a drug-containing nanoparticle having the above-described configuration, wherein in the nanoparticle formation step, the cationic polymer is dissolved in a poor solvent to coat the surface of the nanoparticle with the cationic polymer. It is a feature.

また本発明は、上記構成の薬物含有ナノ粒子の製造方法において、前記カチオン性高分子がキトサンであり、乳酸・グリコール酸共重合体に対するキトサンの添加量が１重量％以上２０重量％以下であることを特徴としている。  In the method for producing drug-containing nanoparticles having the above-described configuration, the cationic polymer is chitosan, and the amount of chitosan added to the lactic acid / glycolic acid copolymer is 1 wt% or more and 20 wt% or less. It is characterized by that.

また本発明は、上記構成の薬物含有ナノ粒子の製造方法において、前記良溶媒中のエタノール濃度が１０体積％以上であることを特徴としている。  In the method for producing drug-containing nanoparticles having the above-described configuration, the present invention is characterized in that the ethanol concentration in the good solvent is 10% by volume or more.

また本発明は、上記構成の薬物含有ナノ粒子の製造方法において、前記貧溶媒中のポリビニルアルコール濃度が１０重量％以下であることを特徴としている。  In the method for producing drug-containing nanoparticles having the above-described configuration, the present invention is characterized in that the polyvinyl alcohol concentration in the poor solvent is 10% by weight or less.

本発明の第１の構成によれば、良溶媒に対するＰＬＧＡの濃度を６ｍｇ／ｍＬ以下とすることにより、エマルジョン内に一定密度で形成されるＰＬＧＡナノ粒子の一次サイズを小さくすることができる。さらに貧溶媒に対するＰＬＧＡの濃度を６ｍｇ／ｍＬ以下とすることにより、反応液中でのエマルジョン滴の分散性を高めるとともにＰＬＧＡの沈積速度を速くしてエマルジョン滴の合一を抑制することができる。その結果、ＰＬＧＡナノ粒子の粒子径をろ過滅菌可能な程度まで微小化することができる。一方、良溶媒及び貧溶媒に対するＰＬＧＡの濃度を共に１ｍｇ／ｍＬ以上とすることにより、溶媒使用量を極力少なくして装置の不必要な大型化を防止するとともに、得られるＰＬＧＡナノ粒子の歩留まりも向上する。According to the first configuration of the present invention, the primary size of the PLGA nanoparticles formed at a constant density in the emulsion can be reduced by setting the PLGA concentration with respect to the good solvent to 6 mg / mL or less. Furthermore, by making the PLGA concentration with respect to the poor solvent 6 mg / mL or less, the dispersibility of the emulsion droplets in the reaction solution can be increased, and the deposition rate of the PLGA can be increased to suppress the coalescence of the emulsion droplets. As a result, the particle diameter of the PLGA nanoparticles can be miniaturized to such an extent that it can be sterilized by filtration.On the other hand, by setting the concentration of PLGA with respect to the good solvent and the poor solvent to 1 mg / mL or more, the amount of solvent used is reduced as much as possible to prevent unnecessary enlargement of the apparatus, and the yield of the obtained PLGA nanoparticles is also increased. improves.

また、本発明の第２の構成によれば、上記第１の構成の薬物含有ナノ粒子の製造方法において、留去工程の後に、ＰＬＧＡナノ粒子懸濁液を孔径０．２μｍのメンブレンフィルターを用いて加圧ろ過するろ過滅菌工程を設けることにより、医薬品や化粧品の原料として好適な無菌のＰＬＧＡナノ粒子を簡便に且つ効率良く調製できる。Moreover, according to thesecond configuration of the present invention, in the method for producing drug-containing nanoparticles of thefirst configuration, the PLGA nanoparticle suspension is used as a membrane filter having a pore size of 0.2 μm after the distillation step. By providing a filtration sterilization step for pressure filtration, aseptic PLGA nanoparticles suitable as a raw material for pharmaceuticals and cosmetics can be prepared easily and efficiently.

また、本発明の第３の構成によれば、上記第１または第２の構成の薬物含有ナノ粒子の製造方法において、留去工程を４５℃以下の温度で３０時間以内に行うことにより、ＰＬＧＡナノ粒子同士の融着による加圧ろ過特性の低下を抑制することができる。Moreover, according to the3rd structure of this invention, in the manufacturing method of the drug containing nanoparticle ofthe said 1stor 2nd structure, by performing a distillation process within 30 hours at the temperature of 45 degrees C or less, PLGA A decrease in pressure filtration characteristics due to fusion of the nanoparticles can be suppressed.

また、本発明の第４の構成によれば、上記第１乃至第３のいずれかの構成の薬物含有ナノ粒子の製造方法において、貧溶媒中にカチオン性高分子を溶解させてＰＬＧＡナノ粒子表面をカチオン性高分子で被覆することにより、アニオン性薬物が内包された薬物含有ナノ粒子を容易に製造することができる。また、ＰＬＧＡナノ粒子のゼータ電位を高めて懸濁液中でのＰＬＧＡナノ粒子の凝集を抑制することができる。According to thefourth configuration of the present invention, in the method for producing drug-containing nanoparticles having any one of the first tothird configurations, the surface of the PLGA nanoparticles is obtained by dissolving a cationic polymer in a poor solvent. By coating with a cationic polymer, drug-containing nanoparticles in which an anionic drug is encapsulated can be easily produced. Further, the zeta potential of the PLGA nanoparticles can be increased to suppress the aggregation of the PLGA nanoparticles in the suspension.

また、本発明の第５の構成によれば、上記第４の構成の薬物含有ナノ粒子の製造方法において、カチオン性高分子としてキトサンを用い、乳酸・グリコール酸共重合体に対するキトサンの添加量を１重量％以上２０重量％以下とすることにより、アニオン性薬物を含有するＰＬＧＡナノ粒子を生体への悪影響がなく、安全性の高い方法で製造することができる。また、キトサンの被覆によるＰＬＧＡナノ粒子の粒子径の増大も抑制できる。According to thefifth configuration of the present invention, in the method for producing drug-containing nanoparticles of thefourth configuration, chitosan is used as the cationic polymer, and the amount of chitosan added to the lactic acid / glycolic acid copolymer is set. By setting the content to 1% by weight or more and 20% by weight or less, PLGA nanoparticles containing an anionic drug can be produced by a highly safe method without adversely affecting the living body. Moreover, the increase in the particle diameter of the PLGA nanoparticles due to the chitosan coating can also be suppressed.

また、本発明の第６の構成によれば、上記第１乃至第５のいずれかの構成の薬物含有ナノ粒子の製造方法において、良溶媒中のエタノール濃度を１０体積％以上とすることにより、ＰＬＧＡの溶解度が低下するため、エマルジョン滴内のＰＬＧＡがより短時間で沈積してエマルジョン滴の合一が抑制される。従って、ＰＬＧＡナノ粒子の粒子径を小さくすることができる。According to thesixth configuration of the present invention, in the method for producing drug-containing nanoparticles according to any one of the first tofifth configurations, by setting the ethanol concentration in the good solvent to 10% by volume or more, Since the solubility of PLGA is lowered, PLGA in the emulsion droplets is deposited in a shorter time and coalescence of the emulsion droplets is suppressed. Therefore, the particle diameter of PLGA nanoparticles can be reduced.

また、本発明の第７の構成によれば、上記第１乃至第６のいずれかの構成の薬物含有ナノ粒子の製造方法において、貧溶媒中のポリビニルアルコール濃度を１０重量％以下とすることにより、貧溶媒の粘度が低くなって貧溶媒中での良溶媒の拡散が速くなるため、エマルジョン滴内の沈積速度も速くなる。従って、ＰＬＧＡナノ粒子の粒子径を小さくすることができる。According to theseventh configuration of the present invention, in the method for producing drug-containing nanoparticles according to any one of the first tosixth configurations, by setting the polyvinyl alcohol concentration in the poor solvent to 10% by weight or less. Since the viscosity of the poor solvent is lowered and the diffusion of the good solvent in the poor solvent is accelerated, the deposition rate in the emulsion droplet is also increased. Therefore, the particle diameter of PLGA nanoparticles can be reduced.

試験例１におけるＰＬＧＡナノ粒子の平均粒子径と加圧ろ過率との関係を示すグラフThe graph which shows the relationship between the average particle diameter of the PLGA nanoparticle in Test Example 1, and the pressure filtration rate

以下、本発明の実施形態について詳細に説明する。本発明のＰＬＧＡナノ粒子の製造方法は、ＰＬＧＡナノ粒子を形成してＰＬＧＡナノ粒子含有溶液とするナノ粒子形成工程と、ＰＬＧＡナノ粒子含有溶液から良溶媒を留去してＰＬＧＡナノ粒子懸濁液とする留去工程とを含むものである。以下、ナノ粒子形成工程から留去工程、さらに留去工程の後にＰＬＧＡナノ粒子懸濁液を孔径０．２μｍのメンブレンフィルターを用いて加圧ろ過する、ろ過滅菌工程までを順を追って説明する。  Hereinafter, embodiments of the present invention will be described in detail. The method for producing PLGA nanoparticles of the present invention includes a nanoparticle formation step in which PLGA nanoparticles are formed to form a PLGA nanoparticle-containing solution, and a good solvent is distilled off from the PLGA nanoparticle-containing solution to obtain a PLGA nanoparticle suspension. And a distillation step. Hereinafter, steps from the nanoparticle formation step to the distillation step, and further to the filtration sterilization step in which the PLGA nanoparticle suspension is pressure-filtered using a membrane filter having a pore size of 0.2 μm after the distillation step will be described in order.

（ナノ粒子形成工程）
本発明におけるＰＬＧＡナノ粒子の製造方法として用いられるＥＳＤ法は、エマルジョンを形成してから、良溶媒と貧溶媒との相互拡散を利用して薬物を球状に結晶化させる方法である。操作手順としては、まず、良溶媒中にＰＬＧＡを溶解後、このＰＬＧＡが析出しないように、薬物溶解液を良溶媒中へ添加混合する。このＰＬＧＡと薬物とを含む良溶媒溶液を、攪拌下で貧溶媒中に滴下すると、混合液中の良溶媒（有機溶媒）が貧溶媒中へ急速に拡散移行する。その結果、貧溶媒中で良溶媒の自己乳化が起き、サブミクロンサイズの良溶媒のエマルジョン滴が形成される。さらに、良溶媒と貧溶媒の相互拡散が進むにつれ、エマルジョン滴内のＰＬＧＡ並びに薬物の溶解度が低下し、最終的に、薬物を包含した球形結晶粒子のＰＬＧＡナノ粒子が生成する。(Nanoparticle formation process)
The ESD method used as a method for producing PLGA nanoparticles in the present invention is a method of crystallizing a drug into a spherical shape by utilizing mutual diffusion between a good solvent and a poor solvent after forming an emulsion. As an operation procedure, first, after dissolving PLGA in a good solvent, a drug solution is added and mixed in the good solvent so that the PLGA does not precipitate. When the good solvent solution containing PLGA and the drug is dropped into the poor solvent under stirring, the good solvent (organic solvent) in the mixed solution rapidly diffuses and moves into the poor solvent. As a result, self-emulsification of the good solvent occurs in the poor solvent, and submicron sized good solvent emulsion droplets are formed. Furthermore, as the mutual diffusion of the good solvent and the poor solvent proceeds, the solubility of PLGA and the drug in the emulsion droplets decreases, and finally, PLGA nanoparticles of spherical crystal particles including the drug are generated.

上記球形晶析法では、物理化学的な手法でＰＬＧＡナノ粒子を形成でき、しかも得られるＰＬＧＡナノ粒子が略球形であるため、均質なナノ粒子を、触媒や原料化合物の残留といった問題を考慮する必要なく、容易に形成することができる。  In the above spherical crystallization method, PLGA nanoparticles can be formed by a physicochemical method, and the obtained PLGA nanoparticles are substantially spherical. It is not necessary and can be formed easily.

本発明に用いられるＰＬＧＡの分子量は、５，０００〜２００，０００の範囲内であることが好ましく、１５，０００〜２５，０００の範囲内であることがより好ましい。乳酸とグリコール酸との組成比は１：９９〜９９：１であればよいが、乳酸１に対しグリコール酸０．３３３であることが好ましい。  The molecular weight of PLGA used in the present invention is preferably in the range of 5,000 to 200,000, and more preferably in the range of 15,000 to 25,000. The composition ratio of lactic acid and glycolic acid may be 1:99 to 99: 1, but glycolic acid is preferably 0.333 with respect tolactic acid 1.

本発明のＰＬＧＡナノ粒子に内包される薬物としては、プラスミドＤＮＡ、遺伝子、ｓｉＲＮＡ、ポリヌクレオチド、オリゴヌクレオチド、アンチセンスオリゴヌクレオチド、リボザイム、アプタマー、インターロイキン、細胞間情報伝達物質（サイトカイン）等の核酸化合物、カルシトニン、インスリン、ガストリン、プロラクチン、副腎皮質刺激ホルモン（ＡＣＴＨ）、甲状腺刺激ホルモン（ＴＳＨ）、黄体形成ホルモン（ＬＨ）、卵胞刺激ホルモン（ＦＳＨ）等のホルモン、塩化ベンザルコニウム、塩化ベタネコール、臭化ピリドスチグミン等の医薬品、アルニカエキス、オトギリソウエキス、加水分解コンキオリン、キナエキス、クララエキス、セージエキス、チョウジエキス、冬虫夏草エキス、ペパーミントエキス、ホップエキス、グリチルレチン酸ジカリウム、β−グリチルレチン酸、オウゴンエキス、ローズマリーエキス、ボタンピエキス、ゴボウエキス、ニンジンエキス、ローヤルゼリーエキス、カミツレエキス、センキュウエキス、センブリエキス、トウガラシチンキ、ショウキョウチンキ、トウキエキス、ベニバナエキス、チンピエキス、セファランチン等の生薬成分、リン酸アスコルビルＭｇ、リン酸アスコルビルＮａ、塩酸クロコナゾール、塩酸ネチコナゾール等の水溶性薬物、ビタミンＣ等の水溶性ビタミン類等が挙げられるが、これらの物質に限定されるものではない。なお、上記薬物のうち何れか１種のみを封入しても良いが、効能や作用機序の異なる成分を複数種封入しておけば、各成分の相乗効果により薬効の促進が期待できる。  Examples of drugs encapsulated in the PLGA nanoparticles of the present invention include nucleic acids such as plasmid DNA, genes, siRNA, polynucleotides, oligonucleotides, antisense oligonucleotides, ribozymes, aptamers, interleukins, and intercellular signal transmitters (cytokines). Compound, calcitonin, insulin, gastrin, prolactin, adrenocorticotropic hormone (ACTH), thyroid stimulating hormone (TSH), luteinizing hormone (LH), hormone such as follicle stimulating hormone (FSH), benzalkonium chloride, betanechol chloride, Pharmaceuticals such as pyridostigmine bromide, arnica extract, hypericum extract, hydrolyzed conchiolin, kina extract, clara extract, sage extract, clove extract, cordyceps extract, peppermint extract, hop extract Glycyrrhetinic acid dipotassium, β-glycyrrhetinic acid, urgonum extract, rosemary extract, button pi extract, burdock extract, carrot extract, royal jelly extract, chamomile extract, senkyu extract, assembly extract, red pepper tincture, ginger tincture, citrus extract, safflower extract, Herbal medicine components such as chimpi extract and cephalanthin, water-soluble drugs such as ascorbyl phosphate Mg, ascorbyl phosphate Na, croconazole hydrochloride and neticonazole hydrochloride, and water-soluble vitamins such as vitamin C, etc. are limited to these substances. It is not something. It should be noted that only one of the above drugs may be encapsulated, but if a plurality of components having different efficacy and action mechanism are encapsulated, it is expected that the efficacy of each component is promoted by the synergistic effect of each component.

ところで、加圧ろ過法により滅菌可能な、即ち、孔径０．２μｍのろ過滅菌用メンブレンフィルターを通過可能なＰＬＧＡナノ粒子を製造するためには、ＰＬＧＡナノ粒子の粒子径とエマルジョン中での分散状態が重要となる。この粒子径及び分散状態は、使用する良溶媒及び貧溶媒の種類、並びに良溶媒及び貧溶媒に対するＰＬＧＡ濃度と密接な関係がある。  By the way, in order to produce PLGA nanoparticles that can be sterilized by pressure filtration, that is, can pass through a membrane filter for filtration sterilization with a pore size of 0.2 μm, the particle size of PLGA nanoparticles and the dispersion state in the emulsion Is important. The particle size and dispersion state are closely related to the types of good solvent and poor solvent used and the PLGA concentration with respect to the good solvent and poor solvent.

一般に、ＥＳＤ法において調製されるＰＬＧＡナノ粒子の粒子径は、エマルジョン内のＰＬＧＡの濃度並びにエマルジョン滴の分散性とＰＬＧＡの沈積速度の影響を受ける。ＰＬＧＡナノ粒子の粒子径を微小化するためには、エマルジョン内のＰＬＧＡの濃度を下げ、且つエマルジョン滴の分散性を高めるとともにＰＬＧＡの沈積速度を速くしてエマルジョン滴の合一を抑制する必要がある。そのためには、良溶媒及び貧溶媒に対するＰＬＧＡ濃度を下げることが効果的である。  In general, the particle size of PLGA nanoparticles prepared in the ESD method is affected by the concentration of PLGA in the emulsion, as well as the dispersibility of the emulsion droplets and the deposition rate of the PLGA. In order to reduce the particle size of PLGA nanoparticles, it is necessary to reduce the concentration of PLGA in the emulsion, increase the dispersibility of the emulsion droplets, and increase the deposition rate of PLGA to suppress the coalescence of the emulsion droplets. is there. For that purpose, it is effective to lower the PLGA concentration with respect to the good solvent and the poor solvent.

なお、良溶媒に対するＰＬＧＡ濃度が小さくなれば、エマルジョン滴中のＰＬＧＡの沈積速度は遅くなる方向に行くが、一定密度で粒子形成されるため粒子径は小さくなる。例えば、ＰＬＧＡ濃度が２倍薄くなれば粒子サイズは２の三乗根だけ小さくなる。  In addition, if the PLGA concentration with respect to the good solvent decreases, the deposition rate of PLGA in the emulsion droplets tends to decrease, but the particle diameter decreases because particles are formed at a constant density. For example, if the PLGA concentration is doubled, the particle size is reduced by the cube root of 2.

本発明においては、アセトンとエタノールを含む良溶媒を用いることで、良溶媒に対するＰＬＧＡ濃度を実用的な範囲に維持しつつ、ナノ粒子の粒子径を加圧ろ過法により滅菌可能なレベルまで小径化できることを見いだした。  In the present invention, by using a good solvent containing acetone and ethanol, the particle diameter of the nanoparticles is reduced to a sterilizable level by pressure filtration while maintaining the PLGA concentration in the good solvent within a practical range. I found what I could do.

良溶媒に対するＰＬＧＡ濃度が６ｍｇ／ｍＬを超えると、エマルジョン滴中のＰＬＧＡの沈積速度が遅くなることでエマルジョン同士が合一するため生成するＰＬＧＡナノ粒子の粒子径が大きくなる。従って、良溶媒に対するＰＬＧＡ濃度を６ｍｇ／ｍＬ以下とする必要がある。一方、良溶媒に対するＰＬＧＡ濃度が１ｍｇ／ｍＬ未満の場合は溶媒使用量が増加するとともに大型の装置が必要となり、得られるＰＬＧＡナノ粒子の歩留まりも悪くなるため好ましくない。従って、良溶媒に対するＰＬＧＡ濃度を１ｍｇ／ｍＬ以上とすることが好ましい。  When the PLGA concentration with respect to the good solvent exceeds 6 mg / mL, the deposition rate of PLGA in the emulsion droplets is slowed down so that the emulsions are coalesced to increase the particle diameter of the generated PLGA nanoparticles. Therefore, the PLGA concentration with respect to the good solvent needs to be 6 mg / mL or less. On the other hand, when the PLGA concentration with respect to the good solvent is less than 1 mg / mL, the amount of the solvent used increases and a large apparatus is required, and the yield of the resulting PLGA nanoparticles is also unfavorable. Therefore, the PLGA concentration with respect to the good solvent is preferably 1 mg / mL or more.

良溶媒中のアセトンとエタノールの混合比には特に制限はないが、エタノール濃度が増加するとＰＬＧＡの溶解度が低下するため、エマルジョン滴内のＰＬＧＡがより短時間で沈積してエマルジョン滴の合一が抑制される。従って、ＰＬＧＡナノ粒子内に封入される薬物の種類にもよるが、エタノール濃度を１０体積％以上とすることが好ましい。また、必要に応じて良溶媒中に水等のアセトンとエタノール以外の溶媒を混合しても良い。  The mixing ratio of acetone and ethanol in a good solvent is not particularly limited. However, as the ethanol concentration increases, the solubility of PLGA decreases, so that PLGA in the emulsion droplets settles in a shorter time and the emulsion droplets coalesce. It is suppressed. Therefore, the ethanol concentration is preferably 10% by volume or more, although it depends on the type of drug encapsulated in the PLGA nanoparticles. Moreover, you may mix solvents other than acetone, such as water, and ethanol in a good solvent as needed.

次に、貧溶媒に対するＰＬＧＡ濃度について説明する。ＰＬＧＡナノ粒子を医薬製剤や化粧品の原料として用いるためには、乾燥させたＰＬＧＡナノ粒子を水中で再分散させて生体内に速やかに浸透させる必要がある。そこで、貧溶媒としてポリビニルアルコール水溶液を用いることにより、ＰＬＧＡナノ粒子表面をポリビニルアルコールで被覆させることが有効である。  Next, the PLGA concentration with respect to the poor solvent will be described. In order to use PLGA nanoparticles as a raw material for pharmaceutical preparations and cosmetics, it is necessary to re-disperse the dried PLGA nanoparticles in water and quickly infiltrate the living body. Therefore, it is effective to coat the surface of PLGA nanoparticles with polyvinyl alcohol by using an aqueous polyvinyl alcohol solution as a poor solvent.

貧溶媒に対するＰＬＧＡ濃度が６ｍｇ／ｍＬを超えると、貧溶媒中でのエマルジョン滴濃度が増加するためエマルジョン滴が合一し易くなり、生成するＰＬＧＡナノ粒子の粒子径が大きくなる。従って、貧溶媒に対するＰＬＧＡ濃度を６ｍｇ／ｍＬ以下とする必要がある。一方、貧溶媒に対するＰＬＧＡ濃度が１ｍｇ／ｍＬ未満の場合は溶媒使用量が増加するとともに大型の装置が必要となり、得られるＰＬＧＡナノ粒子の歩留まりも悪くなるため好ましくない。従って、貧溶媒に対するＰＬＧＡ濃度を１ｍｇ／ｍＬ以上とすることが好ましい。  When the PLGA concentration with respect to the poor solvent exceeds 6 mg / mL, the emulsion droplet concentration in the poor solvent increases, so that the emulsion droplets are easily united, and the particle diameter of the generated PLGA nanoparticles increases. Therefore, the PLGA concentration with respect to the poor solvent needs to be 6 mg / mL or less. On the other hand, when the PLGA concentration with respect to the poor solvent is less than 1 mg / mL, the amount of the solvent used is increased and a large apparatus is required, and the yield of the obtained PLGA nanoparticles is also unfavorable. Therefore, the PLGA concentration with respect to the poor solvent is preferably 1 mg / mL or more.

貧溶媒中のポリビニルアルコール濃度には特に制限はないが、ポリビニルアルコール濃度が高くなると貧溶媒の粘度が高くなり、貧溶媒中での良溶媒の拡散速度が低下するためエマルジョン滴内の沈積速度も遅くなる。従って、ＰＬＧＡナノ粒子内に封入される薬物の種類にもよるが、ポリビニルアルコール濃度は１０重量％以下とすることが好ましい。  The polyvinyl alcohol concentration in the poor solvent is not particularly limited. However, the higher the polyvinyl alcohol concentration, the higher the viscosity of the poor solvent, and the lower the diffusion rate of the good solvent in the poor solvent. Become slow. Therefore, the polyvinyl alcohol concentration is preferably 10% by weight or less, depending on the type of drug encapsulated in the PLGA nanoparticles.

また、ＰＬＧＡナノ粒子に内包される薬物がアニオン性薬物である場合、上記ナノ粒子形成工程において貧溶媒にカチオン性高分子を添加することで、ＰＬＧＡナノ粒子へのアニオン性薬物の内包率を高めることができる。なお、本明細書中においてアニオン性薬物とは、水溶液中でアニオン分子として存在するような有機薬物を指すものとする。  When the drug encapsulated in the PLGA nanoparticles is an anionic drug, the inclusion rate of the anionic drug in the PLGA nanoparticles is increased by adding a cationic polymer to the poor solvent in the nanoparticle formation step. be able to. In the present specification, an anionic drug means an organic drug that exists as an anionic molecule in an aqueous solution.

一般に、液体中に分散された粒子の多くは正又は負に帯電しており、逆の電荷を有するイオンが粒子表面に強く引き寄せられ固定された層（固定層）と、その外側に存在する層（拡散層）とで、いわゆる拡散電気二重層が形成されており、拡散層の内側の一部と固定層とが粒子と共に移動するものと推定される。  In general, many particles dispersed in a liquid are positively or negatively charged, and a layer (fixed layer) in which ions having opposite charges are strongly attracted and fixed to the particle surface (a fixed layer) and a layer existing outside the layer A so-called diffusion electric double layer is formed with (diffusion layer), and it is presumed that a part of the inside of the diffusion layer and the fixed layer move together with the particles.

ゼータ電位は、粒子から十分に離れた電気的に中性な領域の電位を基準とした場合の、上記移動が生じる面（滑り面）の電位である。ゼータ電位の絶対値が増加すれば、粒子間の反発力が強くなって粒子の安定性は高くなり、逆にゼータ電位が０に近づくにつれて粒子は凝集を起こしやすくなる。そのため、ゼータ電位は粒子の分散状態の指標として用いられている。  The zeta potential is a potential of a surface (sliding surface) where the above movement occurs when the potential of an electrically neutral region sufficiently separated from the particle is used as a reference. If the absolute value of the zeta potential is increased, the repulsive force between the particles is increased and the stability of the particles is increased. Conversely, as the zeta potential approaches 0, the particles are likely to aggregate. Therefore, the zeta potential is used as an index of the dispersed state of particles.

ＥＳＤ法を用いてアニオン性薬物を内包したＰＬＧＡナノ粒子を製造しようとすると、良溶媒中に溶解混合した水溶性のアニオン性薬物が貧溶媒中に漏出、溶解してしまい、ＰＬＧＡナノ粒子を形成する高分子（ＰＬＧＡ）だけが沈積するため、アニオン性薬物がほとんど内包されなかった。これに対し、上記ナノ粒子形成工程においてカチオン性高分子を貧溶媒中に添加した場合は、ＰＬＧＡナノ粒子表面を被覆したカチオン性高分子がエマルジョン滴表面に存在するアニオン性薬物と相互作用し、貧溶媒中へのアニオン性薬物の漏出を抑制できるものと考えられる。  When an attempt is made to produce PLGA nanoparticles containing an anionic drug using the ESD method, the water-soluble anionic drug dissolved and mixed in a good solvent leaks into the poor solvent and dissolves to form PLGA nanoparticles. Since only the polymer (PLGA) that deposits, the anionic drug was hardly encapsulated. On the other hand, when a cationic polymer is added in a poor solvent in the nanoparticle formation step, the cationic polymer that coats the surface of the PLGA nanoparticles interacts with the anionic drug present on the emulsion droplet surface, It is considered that leakage of an anionic drug into a poor solvent can be suppressed.

また、生体内の細胞壁は負に帯電しているが、従来の球形晶析法で製造されたＰＬＧＡナノ粒子の表面は、一般的に負のゼータ電位を有しているため、電気的反発力によりＰＬＧＡナノ粒子の細胞接着性が悪くなるという問題点があった。従って、本発明のようにカチオン性高分子を用いてＰＬＧＡナノ粒子表面が正のゼータ電位を有するように帯電させることは、負帯電の細胞壁に対するＰＬＧＡナノ粒子の接着性を増大させ、アニオン性薬物の細胞内移行性を向上させる観点からも好ましい。  In addition, although the cell wall in the living body is negatively charged, the surface of the PLGA nanoparticles produced by the conventional spherical crystallization method generally has a negative zeta potential, so that the electric repulsive force As a result, the cell adhesiveness of the PLGA nanoparticles deteriorated. Therefore, charging the surface of the PLGA nanoparticle so as to have a positive zeta potential using a cationic polymer as in the present invention increases the adhesion of the PLGA nanoparticle to the negatively charged cell wall, and the anionic drug It is also preferable from the viewpoint of improving the intracellular transferability.

本発明に用いられるカチオン性高分子としては、キトサン及びキトサン誘導体、セルロースに複数のカチオン基を結合させたカチオン化セルロース、ポリエチレンイミン、ポリビニルアミン、ポリアリルアミン等のポリアミノ化合物、ポリオルニチン、ポリリジン等のポリアミノ酸、ポリビニルイミダゾール、ポリビニルピリジニウムクロリド、アルキルアミノメタクリレート４級塩重合物（ＤＡＭ）、アルキルアミノメタクリレート４級塩・アクリルアミド共重合物（ＤＡＡ）、細胞膜（生体膜）の構成成分であるリン脂質極性基（ホスホリルコリン基）と重合性に優れたメタクリロイル基とを併せ持つ２−メタクリロイルオキシエチルホスホルコリン（ＭＰＣ）を構成単位とする高分子に第４級アンモニウム塩等のカチオン基を結合させたカチオン性高分子（例えばＭＰＣと２−ヒドロキシ−３−メタクリロイルオキシプロピルトリメチルアンモニウムクロリドとのコポリマー）等が挙げられるが、特にキトサン或いはその誘導体が好適に用いられる。  Examples of the cationic polymer used in the present invention include chitosan and chitosan derivatives, cationized cellulose obtained by binding a plurality of cationic groups to cellulose, polyamino compounds such as polyethyleneimine, polyvinylamine and polyallylamine, polyornithine and polylysine. Polyamino acid, polyvinylimidazole, polyvinylpyridinium chloride, alkylaminomethacrylate quaternary salt polymer (DAM), alkylaminomethacrylate quaternary salt / acrylamide copolymer (DAA), phospholipid polarity which is a constituent of cell membrane (biological membrane) A cation group such as a quaternary ammonium salt is bonded to a polymer having 2-methacryloyloxyethyl phosphorcholine (MPC) as a structural unit, which has both a group (phosphorylcholine group) and a highly polymerizable methacryloyl group. Although such a cationic polymer (e.g., MPC and 2-hydroxy-3-methacryloyl copolymers of trimethylammonium chloride) and the like, is preferably used in particular chitosan or a derivative thereof.

キトサンは、エビやカニの外殻に含まれる、アミノ基を有する糖の１種であるグルコサミンが多数結合したカチオン性の天然高分子であり、乳化安定性、保形性、生分解性、生体適合性、抗菌性等の特徴を有するため、化粧品や食品、衣料品、医薬品等の原料として広く用いられている。このキトサンを貧溶媒中に添加することにより、生体への悪影響がなく、安全性の高いアニオン性薬物含有ナノ粒子を製造することができる。  Chitosan is a cationic natural polymer with many glucosamines, one of the sugars with amino groups, contained in the shell of shrimp and crabs, and has emulsion stability, shape retention, biodegradability, Since it has characteristics such as compatibility and antibacterial properties, it is widely used as a raw material for cosmetics, foods, clothing, pharmaceuticals and the like. By adding this chitosan into a poor solvent, it is possible to produce highly safe anionic drug-containing nanoparticles without adverse effects on the living body.

なお、カチオン性高分子の被覆によってＰＬＧＡナノ粒子の粒子径が増大するため、貧溶媒中に添加するカチオン性高分子の量が多すぎるとろ過滅菌ができなくなる。そのため、カチオン性高分子としてキトサンを用いる場合はＰＬＧＡに対し１重量％以上２０重量％以下の範囲で添加する必要がある。  In addition, since the particle diameter of PLGA nanoparticles increases by the coating of the cationic polymer, filtration sterilization cannot be performed if the amount of the cationic polymer added to the poor solvent is too large. Therefore, when chitosan is used as the cationic polymer, it needs to be added in the range of 1 wt% to 20 wt% with respect to PLGA.

その他、貧溶媒の攪拌速度、貧溶媒中への良溶媒の送液速度、全溶媒に対する貧溶媒の割合、貧溶媒の温度等の操作条件も、ＰＬＧＡナノ粒子の粒子径や分散性に影響を及ぼす因子である。送液速度が遅すぎると、送液チューブ先端から良溶媒が完全に排出されないままＰＬＧＡの沈積が終了するためエマルジョン滴は合一しやすく、チューブ先端や容器壁面へのＰＬＧＡの付着も生じる。反対に送液速度が速すぎると、貧溶媒中のエマルジョン滴濃度の増加によりエマルジョン滴は合一しやすくなるため粒子径は増大する。  In addition, operating conditions such as the stirring speed of the poor solvent, the feeding speed of the good solvent into the poor solvent, the ratio of the poor solvent to the total solvent, and the temperature of the poor solvent also affect the particle size and dispersibility of the PLGA nanoparticles. It is an effect factor. If the liquid feeding speed is too slow, the deposition of PLGA ends without the good solvent being completely discharged from the tip of the liquid feeding tube, so that the emulsion droplets are likely to coalesce, and PLGA adheres to the tube tip and the container wall surface. On the other hand, if the liquid feeding speed is too high, the emulsion droplets are likely to coalesce due to an increase in the concentration of the emulsion droplets in the poor solvent, so that the particle diameter increases.

また、全溶媒に対する貧溶媒の割合を高めるとエマルジョン滴濃度が低下し、エマルジョン滴の合一が抑制されるためＰＬＧＡナノ粒子の粒子径は微小化する。また、貧溶媒の温度上昇に伴い、貧溶媒の粘度低下により両溶媒の拡散速度が速くなるためエマルジョン滴内のＰＬＧＡの沈積速度も速くなり、エマルジョン滴の合一が抑制されるので粒子径は小さくなる。従って、上記の操作条件は、生成するＰＬＧＡナノ粒子がろ過滅菌可能な範囲となるように、製造スケール等に応じて適宜設定すれば良い。  Further, when the ratio of the poor solvent to the total solvent is increased, the emulsion droplet concentration is lowered and coalescence of the emulsion droplets is suppressed, so that the particle size of the PLGA nanoparticles is reduced. Also, as the temperature of the poor solvent increases, the diffusion rate of both solvents increases due to the decrease in the viscosity of the poor solvent, so the deposition rate of PLGA in the emulsion droplets also increases and the coalescence of the emulsion droplets is suppressed, so the particle size is Get smaller. Therefore, the above operating conditions may be appropriately set according to the production scale or the like so that the generated PLGA nanoparticles are within a range in which filtration sterilization is possible.

（留去工程）
その後、良溶媒である有機溶媒を減圧留去し、ＰＬＧＡナノ粒子懸濁液とする。この留去工程において、良溶媒である有機溶媒をＰＬＧＡのガラス転移点を超える温度で長時間に亘って減圧留去すると、ＰＬＧＡナノ粒子を構成するＰＬＧＡの剛性が低下して流動性が増すことによりＰＬＧＡナノ粒子同士が融着し、留去工程に続くろ過滅菌工程において加圧ろ過特性が著しく低下してしまう。そのため、留去工程はできるだけ低温で、且つ短時間で行う必要がある。具体的には、４５℃以下で３０時間以内に行うことが好ましい。(Distillation step)
Then, the organic solvent which is a good solvent is distilled off under reduced pressure to obtain a PLGA nanoparticle suspension. In this distillation step, if the organic solvent, which is a good solvent, is distilled under reduced pressure for a long time at a temperature exceeding the glass transition point of PLGA, the rigidity of PLGA constituting the PLGA nanoparticles is reduced and the fluidity is increased. As a result, the PLGA nanoparticles are fused to each other, and the pressure filtration characteristics are remarkably deteriorated in the filtration sterilization step following the distillation step. For this reason, the distillation step needs to be performed at as low a temperature as possible and in a short time. Specifically, it is preferably performed at 45 ° C. or less within 30 hours.

（ろ過滅菌工程）
留去工程で得られたＰＬＧＡナノ粒子懸濁液を精製水で希釈し、孔径０．２μｍのろ過滅菌用メンブレンフィルターが装着されたろ過装置に充填した後、窒素ガスで加圧しながらろ過滅菌する。(Filter sterilization process)
The PLGA nanoparticle suspension obtained in the distillation step is diluted with purified water, filled in a filtration device equipped with a membrane filter for filtration sterilization with a pore size of 0.2 μm, and then sterilized by filtration while being pressurized with nitrogen gas. .

本発明の方法により製造されたＰＬＧＡナノ粒子は、平均粒子径が２００ｎｍ以下であり、水中ではある程度凝集した状態にあるものの、孔径０．２μｍのメンブレンフィルターに対し、加圧ろ過後のＰＬＧＡナノ粒子の回収率（以下、加圧ろ過率と略す）は９０％以上と高い値を示す。従って、本発明の製造方法は、医薬製剤や化粧品の原料として好適な無菌のＰＬＧＡナノ粒子或いはその複合粒子を効率良く製造できるものである。  The PLGA nanoparticles produced by the method of the present invention have an average particle size of 200 nm or less and are in a state of being aggregated to some extent in water. However, the PLGA nanoparticles after pressure filtration are applied to a membrane filter having a pore size of 0.2 μm. The recovery rate (hereinafter abbreviated as pressure filtration rate) is as high as 90% or more. Therefore, the production method of the present invention can efficiently produce sterile PLGA nanoparticles or composite particles thereof suitable as a raw material for pharmaceutical preparations and cosmetics.

そして、ろ過滅菌されたＰＬＧＡナノ粒子をそのまま乾燥させて用いるか、或いは必要に応じて複合化する（複合化工程）。この複合化により、使用前まではＰＬＧＡナノ粒子が集まった取り扱いの容易な凝集粒子となっており、使用時に水分に触れることでＰＬＧＡナノ粒子に戻って高反応性等の特性を復元可能となる。  Then, the filter-sterilized PLGA nanoparticles are dried and used as they are, or are combined as necessary (compositing step). This composite makes it easy to handle aggregated particles with PLGA nanoparticles gathered before use. By touching moisture during use, it is possible to return to PLGA nanoparticles and restore properties such as high reactivity. .

ＰＬＧＡナノ粒子の複合化方法としては、凍結乾燥法が好適に用いられる。また、流動層乾燥造粒法（例えば、アグロマスタＡＧＭ（ホソカワミクロン（株）製を使用して流動造粒を行うこと）または乾式機械的粒子複合化法（例えば、メカノフュージョンシステムＡＭＳ（ホソカワミクロン（株）製）を使用して圧縮力および剪断力を加えること）により複合化しても良い。特に、流動層乾燥造粒法の中でも粒子化する材料を含む混合物を流動ガス中に噴霧する噴霧乾燥式流動層造粒法を用いた場合、時間と手間のかかる凍結乾燥工程を省略可能となり、複合粒子を容易に且つ短時間で製造できるため工業化にも有利となる。  As a method for combining PLGA nanoparticles, a freeze-drying method is preferably used. Also, fluidized bed dry granulation method (for example, Agromaster AGM (made by Hosokawa Micron Co., Ltd.) or dry mechanical particle composite method (for example, Mechanofusion System AMS (Hosokawa Micron Co., Ltd.)) By applying a compressive force and a shearing force using a product), in particular a spray-drying flow in which a mixture containing the material to be granulated is sprayed into a fluid gas in a fluidized bed dry granulation method. When the layer granulation method is used, a time-consuming and laborious lyophilization step can be omitted, and composite particles can be easily produced in a short time, which is advantageous for industrialization.

さらに、ナノ粒子形成工程において貧溶媒にカチオン性高分子を添加した場合、凍結乾燥によりＰＬＧＡナノ粒子を複合化する際に、凍結乾燥前のＰＬＧＡナノ粒子懸濁液にアニオン性薬物を添加することにより、正のゼータ電位を有するＰＬＧＡナノ粒子表面へアニオン性薬物を静電気的に担持させることもできる。  Furthermore, when a cationic polymer is added to a poor solvent in the nanoparticle formation step, an anionic drug should be added to the PLGA nanoparticle suspension before freeze-drying when the PLGA nanoparticles are combined by freeze-drying. Thus, the anionic drug can be electrostatically supported on the surface of the PLGA nanoparticles having a positive zeta potential.

上記のようにして製造されたＰＬＧＡナノ粒子は、経肺投与用、皮下、筋肉、静脈等への注射用、或いは経皮、経鼻、経口投与用等の種々の医薬製剤、或いは化粧料の原料として好適に使用することができる。また、金属や高分子材料で形成されたステントやバルーンカテーテルの表面に担持させることにより、薬物溶出型の管腔内留置用医療デバイスを製造することもできる。  The PLGA nanoparticles produced as described above can be used for various pharmaceutical preparations such as pulmonary administration, subcutaneous, intramuscular, intravenous injection, etc., or transdermal, nasal, or oral administration, or cosmetics. It can be suitably used as a raw material. In addition, a drug-eluting intraluminal medical device can be manufactured by supporting the stent on a surface of a stent or balloon catheter formed of a metal or a polymer material.

なお、本発明は上述した各実施形態に限定されるものではなく、請求項に示した範囲で種々の変更が可能であり、異なる実施形態にそれぞれ開示された技術的手段を適宜組み合わせて得られる実施形態についても本発明の技術的範囲に含まれる。以下、本発明のＰＬＧＡナノ粒子の製造方法について実施例及び比較例により更に具体的に説明する。  The present invention is not limited to the above-described embodiments, and various modifications are possible within the scope shown in the claims, and can be obtained by appropriately combining technical means disclosed in different embodiments. Embodiments are also included in the technical scope of the present invention. Hereinafter, the method for producing PLGA nanoparticles of the present invention will be described more specifically with reference to Examples and Comparative Examples.

［合成オリゴヌクレオチド封入ＰＬＧＡナノ粒子懸濁液の調製］
ポリビニルアルコール（ゴーセノールＥＧ０５、日本合成化学工業製）７５ｇ、キトサン（ＣＨＩＴＯＳＡＮ ＧＨ−４００ＥＦ、日油製）４ｇ、クエン酸（日本薬局方 クエン酸 「製造専用」、和光純薬工業製）０．０３ｇを水９１００ｍＬに溶解して貧溶媒とした。また、アセトン６４５０ｍＬ、エタノール２５００ｍＬ、水７５０ｍＬの混合液を調製し良溶媒とした。ＰＬＧＡ（ＰＬＧＡ７５２０、和光純薬工業製）５０ｇ、長さ１２ｍｅｒ、配列ｔｇｃｃｔｃｇｃａｃｃａである合成オリゴヌクレオチド（ＤＮＡ Ｏｌｉｇｏｍｅｒ（１２）ＳｅｔＡ０１、和光純薬工業製）１ｇを良溶媒中に溶解して良溶媒溶液とした。良溶媒に対するＰＬＧＡ濃度は５．２ｍｇ／ｍＬ、貧溶媒に対するＰＬＧＡ濃度は５．５ｍｇ／ｍＬである。[Preparation of synthetic oligonucleotide-encapsulated PLGA nanoparticle suspension]
Polyvinyl alcohol (GOHSENOL EG05, manufactured by Nippon Synthetic Chemical Industry Co., Ltd.) 75 g, chitosan (CHITOSAN GH-400EF, manufactured by NOF Corporation) 4 g, citric acid (Japanese Pharmacopoeia citric acid “Dedicated for Production”, Wako Pure Chemical Industries, Ltd.) 0.03 g Dissolved in 9100 mL of water to make a poor solvent. A mixed solution of 6450 mL of acetone, 2500 mL of ethanol, and 750 mL of water was prepared and used as a good solvent. 50 g of PLGA (PLGA7520, manufactured by Wako Pure Chemical Industries), 12 mer in length, 1 g of synthetic oligonucleotide (DNA Oligomer (12) SetA01, manufactured by Wako Pure Chemical Industries) having the sequence tgccctgcacca dissolved in a good solvent and a good solvent solution did. The PLGA concentration for the good solvent is 5.2 mg / mL, and the PLGA concentration for the poor solvent is 5.5 mg / mL.

先の貧溶媒を４０℃、４００ｒｐｍで攪拌下、良溶媒溶液を一定速度（１５０ｍＬ／分）で滴下し、良溶媒の貧溶媒中への拡散によって合成オリゴヌクレオチド封入ＰＬＧＡナノ粒子を形成した。続いて、減圧下（−６０ｋＰａ）４０℃で攪拌を続けながら、有機溶媒のアセトンとエタノールを３０時間かけて留去してＰＬＧＡナノ粒子懸濁液を得た。  While stirring the previous poor solvent at 40 ° C. and 400 rpm, the good solvent solution was dropped at a constant rate (150 mL / min), and the synthetic oligonucleotide-encapsulated PLGA nanoparticles were formed by diffusion of the good solvent into the poor solvent. Subsequently, while stirring at 40 ° C. under reduced pressure (−60 kPa), the organic solvents acetone and ethanol were distilled off over 30 hours to obtain a PLGA nanoparticle suspension.

得られたＰＬＧＡナノ粒子の平均粒子径を動的光散乱法（測定装置：ＭＩＣＲＯＴＲＡＣ ＵＰＡ、日機装社製）により測定した。その結果、平均粒子径は１５３ｎｍで良好な分散状態を示した。また、分光光度計（Ｖ−５３０、日本分光製）を用いて粒子内の合成オリゴヌクレオチドの封入率（ＰＬＧＡ重量に対する合成オリゴヌクレオチドの重量パーセント）を定量したところ２．３％であった。  The average particle diameter of the obtained PLGA nanoparticles was measured by a dynamic light scattering method (measuring device: MICROTRAC UPA, manufactured by Nikkiso Co., Ltd.). As a result, the average particle diameter was 153 nm and a good dispersion state was shown. Moreover, when the encapsulation rate (weight percentage of the synthetic oligonucleotide with respect to PLGA weight) of the synthetic oligonucleotide in the particles was quantified using a spectrophotometer (V-530, manufactured by JASCO Corporation), it was 2.3%.

貧溶媒中に溶解するキトサンを２ｇ、良溶媒中に溶解するＰＬＧＡを２５ｇ、合成オリゴヌクレオチドを０．５ｇとする以外は実施例１の製造方法と同一条件にて、ＰＬＧＡナノ粒子を調製した。良溶媒に対するＰＬＧＡ濃度は２．６ｍｇ／ｍＬ、貧溶媒に対するＰＬＧＡ濃度は２．７ｍｇ／ｍＬである。動的光散乱法により測定した平均粒子径は１２０ｎｍで良好な分散状態を示した。  PLGA nanoparticles were prepared under the same conditions as in the production method of Example 1 except that 2 g of chitosan dissolved in a poor solvent, 25 g of PLGA dissolved in a good solvent, and 0.5 g of synthetic oligonucleotide were used. The PLGA concentration for the good solvent is 2.6 mg / mL, and the PLGA concentration for the poor solvent is 2.7 mg / mL. The average particle diameter measured by the dynamic light scattering method was 120 nm, indicating a good dispersion state.

貧溶媒中に溶解するキトサンを０．８ｇ、良溶媒中に溶解するＰＬＧＡを１０ｇ、合成オリゴヌクレオチドを０．２ｇとする以外は実施例１の製造方法と同一条件にて、ＰＬＧＡナノ粒子を調製した。良溶媒に対するＰＬＧＡ濃度は１．０ｍｇ／ｍＬ、貧溶媒に対するＰＬＧＡ濃度は１．１ｍｇ／ｍＬである。動的光散乱法により測定した平均粒子径は８８ｎｍで良好な分散状態を示した。  Prepare PLGA nanoparticles under the same conditions as the production method of Example 1 except that 0.8 g of chitosan dissolved in a poor solvent, 10 g of PLGA dissolved in a good solvent, and 0.2 g of synthetic oligonucleotide. did. The PLGA concentration for the good solvent is 1.0 mg / mL, and the PLGA concentration for the poor solvent is 1.1 mg / mL. The average particle diameter measured by the dynamic light scattering method was 88 nm, indicating a good dispersion state.

比較例１Comparative Example 1

貧溶媒中に溶解するキトサンを１２ｇ、良溶媒中に溶解するＰＬＧＡを１５０ｇ、合成オリゴヌクレオチドを３ｇとする以外は実施例１の製造方法と同一条件にて、ＰＬＧＡナノ粒子を調製した。良溶媒に対するＰＬＧＡ濃度は１５．５ｍｇ／ｍＬ、貧溶媒に対するＰＬＧＡ濃度は１６．５ｍｇ／ｍＬである。動的光散乱法により測定した平均粒子径は２１８ｎｍで良好な分散状態を示した。  PLGA nanoparticles were prepared under the same conditions as in the production method of Example 1 except that 12 g of chitosan dissolved in a poor solvent, 150 g of PLGA dissolved in a good solvent, and 3 g of synthetic oligonucleotide were used. The PLGA concentration for the good solvent is 15.5 mg / mL, and the PLGA concentration for the poor solvent is 16.5 mg / mL. The average particle diameter measured by the dynamic light scattering method was 218 nm, indicating a good dispersion state.

比較例２Comparative Example 2

貧溶媒中に溶解するキトサンを２０ｇ、良溶媒中に溶解するＰＬＧＡを２５０ｇ、合成オリゴヌクレオチドを５ｇとする以外は実施例１の製造方法と同一条件にて、ＰＬＧＡナノ粒子を調製した。良溶媒に対するＰＬＧＡ濃度は２５．８ｍｇ／ｍＬ、貧溶媒に対するＰＬＧＡ濃度は２７．５ｍｇ／ｍＬである。動的光散乱法により測定した平均粒子径は２６５ｎｍで良好な分散状態を示した。  PLGA nanoparticles were prepared under the same conditions as in the production method of Example 1 except that 20 g of chitosan dissolved in a poor solvent, 250 g of PLGA dissolved in a good solvent, and 5 g of synthetic oligonucleotide were used. The PLGA concentration for the good solvent is 25.8 mg / mL, and the PLGA concentration for the poor solvent is 27.5 mg / mL. The average particle diameter measured by the dynamic light scattering method was 265 nm, indicating a good dispersion state.

比較例３Comparative Example 3

貧溶媒中に溶解するキトサンを４０ｇ、良溶媒中に溶解するＰＬＧＡを５００ｇ、合成オリゴヌクレオチドを１０ｇとする以外は実施例１の製造方法と同一条件にて、ＰＬＧＡナノ粒子を調製した。良溶媒に対するＰＬＧＡ濃度は５１．５ｍｇ／ｍＬ、貧溶媒に対するＰＬＧＡ濃度は５４．９ｍｇ／ｍＬである。動的光散乱法により測定した平均粒子径は３３２ｎｍで良好な分散状態を示した。  PLGA nanoparticles were prepared under the same conditions as in the production method of Example 1 except that 40 g of chitosan dissolved in a poor solvent, 500 g of PLGA dissolved in a good solvent, and 10 g of synthetic oligonucleotide were used. The PLGA concentration for the good solvent is 51.5 mg / mL, and the PLGA concentration for the poor solvent is 54.9 mg / mL. The average particle diameter measured by the dynamic light scattering method was 332 nm, indicating a good dispersion state.

試験例１Test example 1

［ＰＬＧＡナノ粒子の加圧ろ過特性評価］
実施例１〜３、及び比較例１〜３で得られたＰＬＧＡナノ粒子懸濁液の加圧ろ過特性について評価した。以下の（１）〜（４）の手順により加圧ろ過後の懸濁液中のＰＬＧＡ濃度を求め、加圧ろ過前後における懸濁液のＰＬＧＡ濃度の比率から、ＰＬＧＡナノ粒子の加圧ろ過率を求めた。良溶媒に対するＰＬＧＡ濃度と加圧ろ過率との関係をナノ粒子の平均粒子径と合わせて図１に示す。なお、図１では良溶媒に対するＰＬＧＡ濃度を対数で表示している。[Evaluation of pressure filtration characteristics of PLGA nanoparticles]
The pressure filtration characteristics of the PLGA nanoparticle suspensions obtained in Examples 1 to 3 and Comparative Examples 1 to 3 were evaluated. The PLGA concentration in the suspension after pressure filtration is determined by the following procedures (1) to (4), and the pressure filtration rate of PLGA nanoparticles is determined from the ratio of the PLGA concentration of the suspension before and after pressure filtration. Asked. FIG. 1 shows the relationship between the PLGA concentration with respect to the good solvent and the pressure filtration rate together with the average particle diameter of the nanoparticles. In FIG. 1, the PLGA concentration with respect to the good solvent is displayed in logarithm.

（１）精製水で０．２５重量％に希釈した５０ｍＬのＰＬＧＡナノ粒子懸濁液を、ステンレス製の円筒型容器（内径４２ｍｍ、長さ１６０ｍｍ）の底部に孔径０．２μｍ、φ４７ｍｍ、ポリエーテルスルホン製のメンブレンフィルター（SARTOPORE ２、ザルトリウス社製）を装着したろ過装置に充填した。円筒形容器内を窒素ガスで０．１５ＭＰａに加圧し、ＰＬＧＡナノ粒子懸濁液をろ過した。
（２）ＰＬＧＡナノ粒子懸濁液約１０ｍＬをガラス瓶（容量３０ｃｃ）に充填し、充填液の重量（Ｗｓｕｓ）を精密に測定した。
（３）懸濁液を凍結乾燥した後、アセトン１０ｍＬでガラス瓶中のＰＬＧＡを溶解した。これを孔径０．２μｍのＰＴＦＥメンブレンフィルター（アドバンテック製）を用いて、予め重量（Ｗｇｂ）を測定した別のガラス瓶中へろ過した。さらに１０ｍＬのアセトンで同様の操作を繰り返した。
（４）ろ液の入ったガラス瓶を室温で静置してアセトンを乾燥後、ガラス瓶の重量を精密に測定した（Ｗｇａ）。懸濁液中のＰＬＧＡ濃度を次式により算出した。
ＰＬＧＡ濃度（重量％）＝（Ｗｇａ−Ｗｇｂ）／Ｗｓｕｓ×１００(1) A 50 mL PLGA nanoparticle suspension diluted to 0.25% by weight with purified water was added to a bottom of a stainless steel cylindrical container (inner diameter 42 mm, length 160 mm) with a pore diameter of 0.2 μm, φ47 mm, polyether. The filter was equipped with a sulfone membrane filter (SARTOPORE 2, Sartorius). The inside of the cylindrical container was pressurized to 0.15 MPa with nitrogen gas, and the PLGA nanoparticle suspension was filtered.
(2) About 10 mL of PLGA nanoparticle suspension was filled in a glass bottle (capacity 30 cc), and the weight (Wsus) of the filling liquid was measured accurately.
(3) After freeze-drying the suspension, PLGA in the glass bottle was dissolved with 10 mL of acetone. This was filtered into another glass bottle whose weight (Wgb) was measured in advance using a PTFE membrane filter (manufactured by Advantech) having a pore diameter of 0.2 μm. Further, the same operation was repeated with 10 mL of acetone.
(4) The glass bottle containing the filtrate was allowed to stand at room temperature to dry the acetone, and then the weight of the glass bottle was precisely measured (Wga). The PLGA concentration in the suspension was calculated by the following formula.
PLGA concentration (% by weight) = (Wga−Wgb) / Wsus × 100

図１から明らかなように、実施例１〜３で調製された平均粒子径（●のデータ系列で表示）が８８ｎｍ〜１５３ｎｍのＰＬＧＡナノ粒子は９５％以上の加圧ろ過率（□のデータ系列で表示）を示した。一方、比較例１〜３で調製された平均粒子径が２１８ｎｍ〜３３２ｎｍのＰＬＧＡナノ粒子では、加圧ろ過率は１０％に満たなかった。実施例１〜３で調製されたＰＬＧＡナノ粒子は、比較例１〜３で調製されたＰＬＧＡナノ粒子に比べて粒子径が小さくなることで、メンブレンフィルターの細孔を通過する粒子量が増加し、その結果、加圧ろ過率が増加したものと考えられる。  As is clear from FIG. 1, PLGA nanoparticles having an average particle size (indicated by a data series of ●) prepared in Examples 1 to 3 have a pressure filtration rate of 95% or more (□ data series). Displayed). On the other hand, with the PLGA nanoparticles having an average particle diameter of 218 nm to 332 nm prepared in Comparative Examples 1 to 3, the pressure filtration rate was less than 10%. The PLGA nanoparticles prepared in Examples 1 to 3 have a smaller particle size than the PLGA nanoparticles prepared in Comparative Examples 1 to 3, so that the amount of particles passing through the pores of the membrane filter is increased. As a result, it is considered that the pressure filtration rate increased.

試験例２Test example 2

［加圧ろ過法によるＰＬＧＡナノ粒子の滅菌効果］
試験例１の加圧ろ過条件におけるメンブレンフィルターの除菌性能を、FDA Aseptic Processing Guidelineに準拠したバクテリアチャレンジ試験にて評価した。試験菌としては通常用いられるBrevundimonas diminutaを用いた。試験に供したＰＬＧＡナノ粒子が試験菌に対する抗菌性を有していないことを事前に確認し、ＰＬＧＡナノ粒子懸濁液に試験菌を直接懸濁させる方法で試験を行った。懸濁液とメンブレンフィルターとの接触時間は、ろ過装置の一次側のバルブを閉じて通液を途中で停止し、５時間となるように調整した。使用前後のメンブレンフィルターの完全性（Integrity test）はザルトチェック（ザルトリウス社製）を用いたバブルポイント法（Bubble point test）により評価した。[Sterilization effect of PLGA nanoparticles by pressure filtration]
The sterilization performance of the membrane filter under the pressure filtration conditions of Test Example 1 was evaluated by a bacterial challenge test based on the FDA Aseptic Processing Guideline. As a test bacterium, Brevundimonas diminuta, which is usually used, was used. It was confirmed in advance that the PLGA nanoparticles subjected to the test did not have antibacterial activity against the test bacteria, and the test was conducted by directly suspending the test bacteria in the PLGA nanoparticle suspension. The contact time between the suspension and the membrane filter was adjusted to 5 hours by closing the valve on the primary side of the filtration device and stopping the passage of the solution halfway. The integrity (Integrity test) of the membrane filter before and after use was evaluated by a bubble point test using a Zalt check (manufactured by Sartorius).

ろ液を塗布した後、培養した試験培地に試験菌は存在しなかった。また、バブルポイント法により使用前後のメンブレンフィルターの完全性が確認されたことに加え、滅菌ＲＯ水を用いたコントロール試験液が無菌であったこと、試験菌の培養液を孔径０．４５μｍのメンブレンフィルターでろ過した後、培養したところ、２４時間後に菌の増殖が確認されたことから、本試験結果の有効性が確認された。  After applying the filtrate, the test bacteria were not present in the cultured test medium. In addition, the integrity of the membrane filter before and after use was confirmed by the bubble point method, the control test solution using sterile RO water was sterile, and the culture solution of the test bacteria was passed through a membrane with a pore size of 0.45 μm. After culturing after filtration with a filter, the growth of the bacteria was confirmed after 24 hours, confirming the effectiveness of the test results.

本発明は、貧溶媒としてポリビニルアルコール水溶液を用い、アセトンとエタノールを含む良溶媒中に少なくとも薬物とＰＬＧＡとを溶解させた良溶媒溶液を貧溶媒に加えて、球形晶析法により薬物含有ナノ粒子を形成するナノ粒子形成工程と、ナノ粒子含有溶液から良溶媒を留去してナノ粒子懸濁液とする留去工程と、を含む薬物含有ナノ粒子の製造方法であって、良溶媒及び貧溶媒に対するＰＬＧＡの濃度を共に１ｍｇ／ｍＬ以上６ｍｇ／ｍＬ以下とするものであり、医薬製剤や化粧品の原料として好適な無菌のＰＬＧＡナノ粒子或いはその複合粒子を効率良く製造可能となる。The present invention uses a polyvinyl alcohol aqueous solution as a poor solvent, and adds a good solvent solution in which at least a drug and PLGA are dissolved in a good solvent containing acetone and ethanol to the poor solvent, and a drug-containing nanoparticle by a spherical crystallization method. A method for producing drug-containing nanoparticles, comprising: a nanoparticle formation step for forming a solution; and a distillation step for distilling off the good solvent from the nanoparticle-containing solution to form a nanoparticle suspension. The concentration of PLGA with respect to the solvent is1 mg / mL or more and 6 mg / mL or less, and aseptic PLGA nanoparticles or composite particles thereof suitable as a raw material for pharmaceutical preparations and cosmetics can be efficiently produced.

また、留去工程を４５℃以下の温度で３０時間以内に行うことにより、ＰＬＧＡの加水分解によるＰＬＧＡナノ粒子の加圧ろ過特性の低下を抑制することができる。  In addition, by performing the distillation step at a temperature of 45 ° C. or less within 30 hours, it is possible to suppress a decrease in the pressure filtration characteristics of the PLGA nanoparticles due to PLGA hydrolysis.

また、貧溶媒中にキトサンを添加する場合、ＰＬＧＡに対するキトサンの添加量を１重量％以上２０重量％以下とすることにより、アニオン性薬物を含有可能であり、加圧ろ過特性が高く、且つ安全性の高いＰＬＧＡナノ粒子を製造することができる。さらに、良溶媒中のエタノール濃度を１０体積％以上、貧溶媒中のポリビニルアルコール濃度を１０重量％以下とすれば、エマルジョン滴内のＰＬＧＡがより短時間で沈積してエマルジョン滴の合一が抑制されるため、ろ過滅菌可能な粒径の小さいＰＬＧＡナノ粒子を簡便に製造することができる。  In addition, when chitosan is added to a poor solvent, an anionic drug can be contained by setting the amount of chitosan added to PLGA to 1% by weight or more and 20% by weight or less, high pressure filtration characteristics, and safety. High-performance PLGA nanoparticles can be produced. Furthermore, if the ethanol concentration in the good solvent is 10% by volume or more and the polyvinyl alcohol concentration in the poor solvent is 10% by weight or less, the PLGA in the emulsion droplets is deposited in a shorter time and the coalescence of the emulsion droplets is suppressed. Therefore, PLGA nanoparticles having a small particle size that can be sterilized by filtration can be easily produced.

Claims (7)

Translated fromJapanese

ポリビニルアルコール水溶液から成る貧溶媒に、アセトンとエタノールを含む良溶媒中に少なくとも薬物と乳酸・グリコール酸共重合体とを溶解させた良溶媒溶液を加えて、薬物含有ナノ粒子を形成してナノ粒子含有溶液とするナノ粒子形成工程と、
前記ナノ粒子含有溶液から前記良溶媒を留去してナノ粒子懸濁液とする留去工程と、
を含む薬物含有ナノ粒子の製造方法であって、
前記良溶媒及び前記貧溶媒に対する乳酸・グリコール酸共重合体の濃度が共に１ｍｇ／ｍＬ以上６ｍｇ／ｍＬ以下であることを特徴とする薬物含有ナノ粒子の製造方法。A good solvent solution in which at least a drug and lactic acid / glycolic acid copolymer are dissolved in a good solvent containing acetone and ethanol is added to a poor solvent composed of an aqueous polyvinyl alcohol solution to form drug-containing nanoparticles. A nanoparticle forming step to be a containing solution;
A distillation step of distilling off the good solvent from the nanoparticle-containing solution to form a nanoparticle suspension;
A method for producing drug-containing nanoparticles comprising
The method for producing drug-containing nanoparticles, wherein the concentration of the lactic acid / glycolic acid copolymer with respect to the good solvent and the poor solvent is both1 mg / mL and 6 mg / mL.前記留去工程の後に、前記ナノ粒子懸濁液を孔径０．２μｍのメンブレンフィルターを用いて加圧ろ過する、ろ過滅菌工程を有することを特徴とする請求項１に記載の薬物含有ナノ粒子の製造方法。2. The drug-containing nanoparticle according to claim 1,further comprising a filtration sterilization step in which the nanoparticle suspension is subjected to pressure filtration using a membrane filter having a pore size of 0.2 μm after the distillation step. Production method.前記留去工程を４５℃以下の温度で３０時間以内に行うことを特徴とする請求項１または請求項２に記載の薬物含有ナノ粒子の製造方法。The method for producing drug-containing nanoparticles according to claim 1 or 2,wherein the distillation step is performed at a temperature of 45 ° C or less within 30 hours .前記ナノ粒子形成工程において、貧溶媒中にカチオン性高分子を溶解させて前記ナノ粒子表面をカチオン性高分子で被覆することを特徴とする請求項１乃至請求項３のいずれか１項に記載の薬物含有ナノ粒子の製造方法。4. The nanoparticle formation step according to claim 1,wherein a cationic polymer is dissolved in a poor solvent to coat the surface of the nanoparticle with the cationic polymer. 5. A method for producing drug-containing nanoparticles.前記カチオン性高分子がキトサンであり、乳酸・グリコール酸共重合体に対するキトサンの添加量が１重量％以上２０重量％以下であることを特徴とする請求項４に記載の薬物含有ナノ粒子の製造方法。The said cationic polymer is chitosan, The addition amount of chitosan with respect to lactic acid and glycolic acid copolymer is 1 to 20 weight% , The manufacture of the drug containing nanoparticle of Claim4 characterizedby the above-mentioned. Method.前記良溶媒中のエタノール濃度が１０体積％以上であることを特徴とする請求項１乃至請求項５のいずれか１項に記載の薬物含有ナノ粒子の製造方法。Method for producing a drug-containing nanoparticles according toany one ofclaims1 to 5, wherein theethanol concentration of the good solvent is 10% by volume or more.前記貧溶媒中のポリビニルアルコール濃度が１０重量％以下であることを特徴とする請求項１乃至請求項６のいずれか１項に記載の薬物含有ナノ粒子の製造方法。The method for producing drug-containing nanoparticles according to any one of claims 1 to 6,wherein the concentration of polyvinyl alcohol in the poor solvent is 10% by weight or less .

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