【発明の詳細な説明】【０００１】【産業上の利用分野】本発明は新規かつ有用なオキシア
ルキレン誘導体に関する。さらに詳しくは酵素、抗体等
のタンパク質、糖、核酸等の生体由来物質、その他種々
の機能性物質の固定化剤もしくは修飾剤、または高分子
材料、医薬・農薬、色素等の原料、あるいはその他のフ
ァインケミカルの原料などとして有用なオキシアルキレ
ン誘導体に関する。【０００２】【従来の技術】従来、タンパク質−タンパク質複合体、
または薬剤−タンパク質複合体を調製する際や、アフィ
ニティークロマトグラフィ担体へのアフィニティー物質
を固定化する際に、Ｎ−（ｍ−マレイミドベンゾイルオ
キシ）スクシンイミド（ＭＢＳ）またはＮ−（４−マレ
イミドブチリロキシ）スクシンイミド（ＧＭＢＳ）など
の異反応性２価試薬が広く用いられている（特公昭５８
−８３９５号、J. Immunological Methods, 122, 77-83
(1988)）。これらは、片末端にアミノ基と特異的に反応
する活性化エステル部位、またもう一方の片末端にチオ
ール基と特異的に反応するマレイミド基を有する異反応
性２価試薬である。【０００３】しかし上記ＭＢＳ、ＧＭＢＳなどの試薬を
用いた架橋反応では、スペーサー部位の長さが短く、例
えばシリカゲル担体上に高分子量のタンパク質などを固
定化する際、タンパク質が担体から疎水的な相互作用を
強く受け、変性、失活しやすいという問題点がある。ま
たスペーサーの長さを任意に調節することができないと
いう問題点がある。【０００４】ところで、オキシアルキレン誘導体の中
で、特にポリエチレングリコールは水溶性、非免疫原性
などの特性を有し、タンパク質や薬物などの生理活性物
質を架橋する架橋剤としての利用をはじめ、生物学、医
用工学分野への応用が注目されている。そしてポリエチ
レングリコールの両端に種類の異なるタンパク質などの
物質を選択的に結合させる場合には、両末端に相異なる
官能基を有するポリエチレングリコール誘導体が必要と
なる（ＤＥ４００４２９６（１９９１））。【０００５】工業的に合成されているポリエチレングリ
コール誘導体としては、片末端にメトキシ基などの非反
応性の基、もう一方の片末端に水酸基を有するもの、ま
たは両末端に水酸基を有するものが殆どである。しか
し、水酸基は反応性に乏しいので、このようなポリエチ
レングリコール誘導体を上記のような架橋剤として利用
するには反応性の点で満足できるものとは言い難い。【０００６】このため、ポリエチレングリコールの両末
端の水酸基を反応性の高い他の官能基に変換する試みも
行われている（J. Bioact. Compat. Polym., 5(2)227-2
31(1990)）が、この方法では未反応の水酸基末端が残る
可能性があり、また反応生成物は両末端に同一の官能基
を有するものと、片末端に水酸基を有するものとの混合
物として得られるため、カラムクロマトグラフィーなど
の方法で精製する必要があり、収率や純度の面で問題が
ある。またこの方法では、反応性が高くしかも反応性の
異なる官能基が両末端に存在するポリエチレングリコー
ル誘導体を得ることは困難である。【０００７】【発明が解決しようとする課題】本発明の目的は、（ポ
リ）オキシアルキレン鎖の片末端に、アミノ基と特異的
に反応するオキシカルボニルイミダゾール基、またもう
一方の片末端にチオール基と特異的に反応するマレイミ
ド基を有し、しかも所望のスペーサー長および親水性を
容易に得ることができ、種々の物質の固定化剤などとし
て利用できる新規かつ有用なオキシアルキレン誘導体を
提供することである。【０００８】【課題を解決するための手段】本発明は、下記一般式
（１）で示されるオキシアルキレン誘導体である。【化２】〔式中、ＯＡは炭素数２〜４のオキシアルキレン基、ｎ
はオキシアルキレン基の平均付加モル数で、１〜１００
０の正数を表わす。ｎが２以上の場合、オキシアルキレ
ン基は同一でも異なっていてもよく、またランダム状に
付加していても、ブロック状に付加していてもよい。Ｙ
は２価の有機残基、Ｒ1は水素原子またはメチル基を表
わす。〕【０００９】本発明において、「（ポリ）オキシアルキ
レン」は、ｎが１のオキシアルキレンまたはｎが２以上
のポリオキシアルキレンを意味する。【００１０】一般式（１）においてＯＡで表わされるオ
キシアルキレン基は、炭素数２〜４のオキシアルキレン
基であり、オキシエチレン基、オキシプロピレン基、オ
キシトリメチレン基、オキシ−１−エチルエチレン基、
オキシ−１，２−ジメチルエチレン基、オキシテトラメ
チレン基などがあげられる。これらのオキシアルキレン
基は、エチレンオキシド、プロピレンオキシド、オキセ
タン、１−ブテンオキシド、２−ブテンオキシド、テト
ラヒドロフランなどのアルキレンオキシドを開環付加重
合させた基である。【００１１】一般式（１）のｎは１〜１０００の正数で
ある。本発明のオキシアルキレン誘導体を、後述するよ
うに２官能性架橋剤として用い、種々の物質の固定化剤
として用いる場合は、ｎの数を調節することにより、ス
ペーサーの長さを任意に調節することができる。【００１２】ｎが２以上の場合、オキシアルキレン基の
種類は同一のものでも、異なるものでもよい。後者の場
合、ランダム状に付加していても、ブロック状に付加し
ていてもよい。オキシアルキレン基の種類が異なるもの
としては、例えばオキシエチレン基とオキシプロピレン
基とがランダム状に付加したもの、ポリオキシエチレン
／ポリオキシプロピレンのようにブロック状に付加した
もの、またはポリオキシエチレン／ポリオキシプロピレ
ン／ポリオキシエチレンのようにブロック状に付加した
ものなどがあげられる。【００１３】親水性を付与する場合、ＯＡとしてはエチ
レンオキシドが単独で付加したものが好ましく、この場
合、ｎが１０以上のものが好ましい。また種類の異なる
アルキレンオキシドが付加している場合、エチレンオキ
シドが２０モル％以上、好ましくは５０モル％以上付加
しているのが望ましい。ポリオキシアルキレン鎖に親油
性を付与する場合はエチレンオキシド以外の付加モル数
を多くする。【００１４】一般式（１）においてＹで表わされる２価
の有機残基としては、メチレン基、エチレン基、トリメ
チレン基、テトラメチレン基、メチルエチレン基等の炭
素数１〜６のアルキレン基；フェニレン基などがあげら
れる。その他にも下記式で表わされるようなアリールア
ルキレン基など、炭素数が７〜９の２価の有機残基があ
げられる。【化３】【００１５】一般式（１）で表わされるオキシアルキレ
ン誘導体は、例えばα−ヒドロ−ω−アミノ−ポリ（オ
キシアルキレン）およびアミノ基と特異的に反応するマ
レイミド誘導体を反応させてα−ヒドロ−ω−アミノ−
ポリ（オキシアルキレン）のアミノ基末端をマレイミド
化した後、この反応生成物にカルボニルジイミダゾール
またはその誘導体を反応させることにより製造すること
ができる。【００１６】上記製造方法において使用するマレイミド
誘導体としては、Ｎ−（４−マレイミドブチリロキシ）
スクシンイミド（ＧＭＢＳ）、Ｎ−（ｍ−マレイミドベ
ンゾイルオキシ）スクシンイミド（ＭＢＳ）、Ｎ−（６
−マレイミドカプロイルオキシ）スクシンイミドなどが
あげられる。【００１７】上記の反応は、いずれのステップも無溶媒
で、あるいはベンゼン、トルエン、キシレン、クロロホ
ルム、塩化メチレン、アセトニトリル、ジメチルホルム
アミド、ジメチルスルホキシド、ジオキサン、テトラヒ
ドロフラン、ジエチルエーテル、酢酸エチルなどの有機
溶媒中において、−１２０〜＋１６０℃、好ましくは−
１０〜＋６０℃で、１分間〜１００時間、好ましくは１
０分間〜１２時間攪拌することにより、容易に行うこと
ができる。反応終了後、必要によりカラム処理、透析、
限外ろ過、ゲルろ過、吸着剤処理、再沈殿などの方法に
より単離・精製することができる。【００１８】α−ヒドロ−ω−アミノ−ポリ（オキシア
ルキレン）としてα−ヒドロ−ω−アミノ−ポリ（オキ
シエチレン）、マレイミド誘導体としてＮ−（４−マレ
イミドブチリロキシ）スクシンイミド（ＧＭＢＳ）を用
いた場合の反応式を次式（２）に示す。式中、ｎおよび
Ｒ1は前記と同じものを示す。またＣＤＩはカルボニル
ジイミダゾールまたはその誘導体を示す。【化４】【００１９】本発明のオキシアルキレン誘導体は、一般
式（１）に示されているように、片末端にオキシカルボ
ニルイミダゾール基またはその誘導体、もう一方の片末
端にマレイミド基を有している。オキシカルボニルイミ
ダゾール基またはその誘導体はアミノ基、特に第１級ア
ミノ基と特異的に反応する部位であり、マレイミド基は
チオール基と特異的に反応する部位である。このように
本発明のオキシアルキレン誘導体は２つの異なる反応性
部位を有するため、２官能性架橋剤、例えばアミノ基を
有する物質またはチオール基を有する物質の固定化剤も
しくは修飾剤として利用することができる。そしてこの
ように利用することにより、さまざまな機能性複合体を
形成することができる。なおオキシカルボニルイミダゾ
ール基またはその誘導体もチオール基と反応するが、マ
レイミド基に比べると反応性は小さいので、チオール基
のほとんどがマレイミド基と反応する。【００２０】本発明のオキシアルキレン誘導体と反応さ
せることができる物質はアミノ基またはチオール基を有
する物質であれば特に限定されず、例えば酵素、抗体等
のタンパク質；糖類、多糖類、核酸等の生体由来物質；
医薬、農薬、色素等の機能性物質などがあげられる。こ
れらの他にもシランカップリング剤などによりアミノ基
またはチオール基を導入したガラス、シリカゲル、アル
ミナ等の無機材料；アミノ基、チオール基を有する合成
高分子；あるいは細胞、リポソーム、マイクロスフェア
ーなどがあげられる。機能性物質および担体を本発明の
オキシアルキレン誘導体と反応させると、（ポリ）オキ
シアルキレン鎖をスペーサーとして機能性物質を担体に
固定化することができる。【００２１】本発明のオキシアルキレン誘導体とアミノ
基を有する機能性物質、例えばタンパク質との反応を模
式的に示すと次式（３）のようになる。式中、ＯＡ、
ｎ、ＹおよびＲ1は前記と同じものを示す。【化５】【００２２】またチオール基を有する機能性物質、例え
ばタンパク質との反応を模式的に示すと次式（４）のよ
うになる。式中、ＯＡ、ｎ、ＹおよびＲ1は前記と同じ
ものを示す。【化６】【００２３】本発明のオキシアルキレン誘導体とアミノ
基またはチオール基を有する物質との反応は、緩衝液、
生理的食塩水などの水系溶媒、またはエタノール、メタ
ノール、アセトニトリル、１，４−ジオキサン、テトラ
ヒドロフラン、ジメチルホルムアミド、ジメチルスルホ
キシド、ジメチルアセチルアミドなどの有機溶媒、ある
いはこれらの有機溶媒と前記水系溶媒との混合溶媒中に
おいて、−１２０〜＋１４０℃、好ましくは０〜６０℃
で、３０秒間〜１６８時間、好ましくは３０分間〜２４
時間反応させることにより容易に行うことができる。【００２４】本発明のオキシアルキレン誘導体は上記の
ような固定化剤もしくは修飾剤の他にも、高分子材料、
医薬、農薬、色素等の原料、あるいはその他のファイン
ケミカルの原料などとしても利用することができる。【００２５】【発明の効果】本発明のオキシアルキレン誘導体は新規
かつ有用である。本発明のオキシアルキレン誘導体をア
ミノ基またはチオール基を有する物質の固定化剤として
用いることにより、（ポリ）オキシアルキレン鎖をスペ
ーサーとして機能性物質を担体に固定化することができ
る。【００２６】【実施例】以下、実施例により本発明をさらに詳細に説
明するが、本発明はこれらに限定されるものではない。実施例１テトラヒドロフラン５０ｍｌ中に２−アミノエトキシエ
タノール１．０ｇ（９．５ｍｍｏｌ）およびＮ−（４−
マレイミドブチリロキシ）スクシンイミド２．７ｇ
（９．５ｍｍｏｌ）を加え、室温で５時間攪拌した。さ
らにカルボニルジイミダゾール１．５ｇ（９．５ｍｍｏ
ｌ）を加え、室温で１時間攪拌した後、展開溶媒として
酢酸エチル／ヘキサン（Ｖ／Ｖ＝１／１）混合溶媒を用
いたシリカゲルカラムにより単離・精製し、下式（５）
で示される目的物を得た（収率８８％）。【化７】【００２７】得られた化合物の1Ｈ−ＮＭＲの分析結果
は次の通りである。1Ｈ−ＮＭＲ（ＣＤＣｌ3），δ（ｐｐｍ）：１．９８
（ｃ；２Ｈ），２．１１（ｄ；２Ｈ），３．３８〜３．
９７（ｂ，ｆ，ｇ，ｈ；約８Ｈ），４．６０（ｉ；２
Ｈ），６．７８（ａ；２Ｈ），７．０５（ｋ；１Ｈ），
７．４２（ｌ；１Ｈ），８．１９（ｊ；１Ｈ）【００２８】実施例２テトラヒドロフラン５０ｍｌ中にα−ヒドロ−ω−アミ
ノ−ポリ（オキシエチレン）１．０ｇ（０．５ｍｍｏ
ｌ）およびＮ−（４−マレイミドブチリロキシ）スクシ
ンイミド０．１４ｇ（０．５ｍｍｏｌ）を加え、室温で
１０時間攪拌した。さらにカルボニルジイミダゾール
０．０８ｇ（０．５ｍｍｏｌ）を加え、室温で３時間攪
拌した。次に、反応液を５００ｍｌのジエチルエーテル
に滴下して再沈した後真空乾燥し、下式（６）で示され
る目的物を得た（収率８５％）。【化８】【００２９】得られた化合物の1Ｈ−ＮＭＲの分析結果
は次の通りである。1Ｈ−ＮＭＲ（ＣＤＣｌ3），δ（ｐｐｍ）：１．９７
（ｃ；２Ｈ），２．１１（ｄ；２Ｈ），３．３８〜３．
９７（ｂ，ｆ，ｇ，ｈ；約１８０Ｈ），４．６０（ｉ；
２Ｈ），６．７８（ａ；２Ｈ），７．０５（ｋ；１
Ｈ），７．４２（ｌ；１Ｈ），８．１９（ｊ；１Ｈ）【００３０】参考例１膜組成分として卵黄レシチン、ホスファチジルエタノー
ルアミンおよびコレステロールの各々等モル量からなる
小さな一枚膜リポソームを、固形分量として１０％含む
リン酸緩衝液（ｐＨ＝７．５）中に、実施例１で得られ
たオキシアルキレン誘導体１０ｍｇを加え、４℃で１昼
夜緩やかに攪拌し、オキシアルキレン誘導体をリポソー
ムに結合させた。【００３１】反応終了後、Ｓｅｐｈａｄｅｘ Ｇ−５０
を用いてゲルろ過し、得られたリポソーム分画に、西洋
山葵ペルオキシダーゼ（以下、ＨＲＰと略す）１００μ
ｇを加え、４℃で２４時間振とうし、ＨＲＰをオキシエ
チレン基の先端に固定化した。反応終了後、再度Ｓｅｐ
ｈａｄｅｘ Ｇ−５０を用いてゲルろ過を行い、リポソ
ーム分画を分取した。これに、ＨＲＰの基質である１，
２−フェニレンジアミン溶液（１０ｍｍｏｌ／ｌ）１０
０μｌを加え、３０℃で１０分間インキュベートし、さ
らに０．１Ｎ硫酸１０ｍｌを加えたところ、強い褐色の
呈色が見られた。この結果から、実施例１で得られたオ
キシアルキレン誘導体を用いることにより、リポソーム
表面にＨＲＰを容易に固定化できることが分る。Description: BACKGROUND OF THE INVENTION 1. Field of the Invention The present invention relates to a novel and useful oxyalkylene derivative. More specifically, enzymes or proteins such as antibodies, biological substances such as sugars and nucleic acids, immobilizing agents or modifiers for various other functional substances, or polymeric materials, raw materials such as pharmaceuticals / pesticides, dyes, or other The present invention relates to oxyalkylene derivatives useful as raw materials for fine chemicals. [0002] Conventionally, protein-protein complexes,
Alternatively, N- (m-maleimidobenzoyloxy) succinimide (MBS) or N- (4-maleimidobutyryloxy) succinimide is used when preparing a drug-protein complex or when immobilizing an affinity substance on an affinity chromatography carrier. Heterogeneous bivalent reagents such as (GMBS) are widely used (Japanese Patent Publication No. 58-58).
No.-8395, J. Immunological Methods, 122, 77-83
(1988)). These are heteroreactive bivalent reagents having an activated ester site specifically reacting with an amino group at one end and a maleimide group specifically reacting with a thiol group at the other end. [0003] However, in the crosslinking reaction using the above-mentioned reagents such as MBS and GMBS, the length of the spacer portion is short. For example, when a high molecular weight protein or the like is immobilized on a silica gel carrier, the protein becomes hydrophobic from the carrier. There is a problem that it is strongly affected and easily denatures and inactivates. Further, there is a problem that the length of the spacer cannot be arbitrarily adjusted. [0004] Among oxyalkylene derivatives, polyethylene glycol, in particular, has properties such as water solubility and non-immunogenicity, and has been used as a crosslinking agent for crosslinking bioactive substances such as proteins and drugs. Applications in the fields of science and medical engineering are attracting attention. When substances such as different types of proteins are selectively bonded to both ends of polyethylene glycol, a polyethylene glycol derivative having different functional groups at both ends is necessary (DE4402006 (1991)). [0005] Polyethylene glycol derivatives that have been industrially synthesized are mostly those having a non-reactive group such as a methoxy group at one end, a hydroxyl group at the other end, or a hydroxyl group at both ends. It is. However, since the hydroxyl group has poor reactivity, it is hard to say that the use of such a polyethylene glycol derivative as a crosslinking agent as described above is satisfactory in terms of reactivity. For this reason, attempts have been made to convert the hydroxyl groups at both ends of polyethylene glycol into other highly reactive functional groups (J. Bioact. Compat. Polym., 5 (2) 227-2).
31 (1990)), there is a possibility that unreacted hydroxyl terminal may remain in this method, and the reaction product may be a mixture of one having the same functional group at both ends and one having a hydroxyl group at one end. Therefore, it needs to be purified by a method such as column chromatography, and there is a problem in yield and purity. Further, in this method, it is difficult to obtain a polyethylene glycol derivative having high reactivity and having different reactive functional groups at both ends. An object of the present invention is to provide an oxycarbonylimidazole group specifically reacting with an amino group at one end of a (poly) oxyalkylene chain, and a thiol at the other end. A novel and useful oxyalkylene derivative having a maleimide group which specifically reacts with a group, and which can easily obtain a desired spacer length and hydrophilicity and can be used as a fixing agent for various substances, etc. That is. Means for Solving the Problems The present invention is an oxyalkylene derivative represented by the following general formula (1). Embedded image [WhereinOA is an oxyalkylene group having 2 to 4 carbon atoms, n
Is an average number of added moles of the oxyalkylene group, from 1 to 100
Represents a positive number of 0. When n is 2 or more, the oxyalkylene groups may be the same or different, and may be added randomly or in blocks. Y
Represents a divalent organic residue, and R1 represents a hydrogen atom or a methyl group. In the present invention, "(poly) oxyalkylene" means oxyalkylene wherein n is 1 or polyoxyalkylene wherein n is 2 or more. The oxyalkylene group represented byOA in the general formula (1) is an oxyalkylene group having 2 to 4 carbon atoms, such as an oxyethylene group, an oxypropylene group, an oxytrimethylene group, and an oxy-1-ethylethylene group. ,
Examples thereof include an oxy-1,2-dimethylethylene group and an oxytetramethylene group. These oxyalkylene groups are groups obtained by ring-opening addition polymerization of alkylene oxides such as ethylene oxide, propylene oxide, oxetane, 1-butene oxide, 2-butene oxide, and tetrahydrofuran. In the general formula (1), n is a positive number from 1 to 1000. When the oxyalkylene derivative of the present invention is used as a bifunctional crosslinking agent as described below and used as a fixing agent for various substances, the length of the spacer is arbitrarily adjusted by adjusting the number of n. be able to. When n is 2 or more, the types of oxyalkylene groups may be the same or different. In the latter case, they may be added randomly or in blocks. Examples of different types of oxyalkylene groups include those in which an oxyethylene group and an oxypropylene group are added randomly, those in which blocks are added as in polyoxyethylene / polyoxypropylene, and those in which polyoxyethylene / oxypropylene are added. Those added in a block shape, such as polyoxypropylene / polyoxyethylene, can be mentioned. When imparting hydrophilicity,OA is preferably a substance to which ethylene oxide is independently added, and in this case, n is preferably 10 or more. When different types of alkylene oxides are added, it is desirable that ethylene oxide is added in an amount of 20 mol% or more, preferably 50 mol% or more. When imparting lipophilicity to the polyoxyalkylene chain, the number of moles added other than ethylene oxide is increased. The divalent organic residue represented by Y in the general formula (1) includes alkylene groups having 1 to 6 carbon atoms such as methylene group, ethylene group, trimethylene group, tetramethylene group and methylethylene group; And the like. Other examples include divalent organic residues having 7 to 9 carbon atoms, such as an arylalkylene group represented by the following formula. Embedded image The oxyalkylene derivative represented by the general formula (1) is reacted with, for example, α-hydro-ω-amino-poly (oxyalkylene) and a maleimide derivative which specifically reacts with an amino group to form α-hydro-ω -Amino-
Poly (oxyalkylene) can be produced by maleimidating the amino group terminal of the poly (oxyalkylene), and then reacting the reaction product with carbonyldiimidazole or a derivative thereof. The maleimide derivative used in the above production method includes N- (4-maleimidobutylyloxy)
Succinimide (GMBS), N- (m-maleimidobenzoyloxy) succinimide (MBS), N- (6
-Maleimidocaproyloxy) succinimide and the like. The above reaction can be carried out without any solvent in any of the steps, or in an organic solvent such as benzene, toluene, xylene, chloroform, methylene chloride, acetonitrile, dimethylformamide, dimethylsulfoxide, dioxane, tetrahydrofuran, diethyl ether, and ethyl acetate. At −120 to + 160 ° C., preferably −
10 minutes to 100 hours at 10 to + 60 ° C., preferably 1 minute
The stirring can be easily performed by stirring for 0 minute to 12 hours. After the reaction is completed, if necessary, column treatment, dialysis,
It can be isolated and purified by methods such as ultrafiltration, gel filtration, adsorbent treatment, and reprecipitation. As the α-hydro-ω-amino-poly (oxyalkylene), α-hydro-ω-amino-poly (oxyethylene) was used, and as the maleimide derivative, N- (4-maleimidobutylyloxy) succinimide (GMBS) was used. The reaction formula in this case is shown in the following formula (2). In the formula, n and R1 are the same as described above. CDI indicates carbonyldiimidazole or a derivative thereof. Embedded image As shown in the general formula (1), the oxyalkylene derivative of the present invention has an oxycarbonylimidazole group or a derivative thereof at one terminal and a maleimide group at the other terminal. An oxycarbonylimidazole group or a derivative thereof is a site that specifically reacts with an amino group, particularly a primary amino group, and a maleimide group is a site that specifically reacts with a thiol group. As described above, since the oxyalkylene derivative of the present invention has two different reactive sites, it can be used as a bifunctional crosslinking agent, for example, a fixing agent or a modifying agent for a substance having an amino group or a substance having a thiol group. it can. And by utilizing in this way, various functional complexes can be formed. Although an oxycarbonylimidazole group or a derivative thereof also reacts with a thiol group, most of the thiol group reacts with the maleimide group because the reactivity is lower than that of the maleimide group. The substance which can be reacted with the oxyalkylene derivative of the present invention is not particularly limited as long as it has an amino group or a thiol group. For example, proteins such as enzymes and antibodies; Substance of origin;
Functional substances such as pharmaceuticals, agricultural chemicals, and pigments are exemplified. In addition to these, inorganic materials such as glass, silica gel, and alumina having amino groups or thiol groups introduced by a silane coupling agent; synthetic polymers having amino groups and thiol groups; or cells, liposomes, microspheres, and the like. can give. When the functional substance and the carrier are reacted with the oxyalkylene derivative of the present invention, the functional substance can be immobilized on the carrier using the (poly) oxyalkylene chain as a spacer. The reaction of the oxyalkylene derivative of the present invention with a functional substance having an amino group, for example, a protein, is schematically represented by the following formula (3).Where OA ,
n, Y and R1 are the same as described above. Embedded image The reaction with a functional substance having a thiol group, for example, a protein, is schematically represented by the following formula (4). In the formula,OA , n, Y and R1 are the same as described above. Embedded image The reaction between the oxyalkylene derivative of the present invention and a substance having an amino group or a thiol group is carried out by a buffer,
Aqueous solvents such as physiological saline, or organic solvents such as ethanol, methanol, acetonitrile, 1,4-dioxane, tetrahydrofuran, dimethylformamide, dimethylsulfoxide, and dimethylacetylamide, or a mixture of these organic solvents and the aqueous solvent In a solvent, -120 to + 140C, preferably 0 to 60C
30 seconds to 168 hours, preferably 30 minutes to 24 hours
It can be easily carried out by reacting for a time. The oxyalkylene derivative of the present invention may further comprise a polymer material,
It can also be used as a raw material for pharmaceuticals, agricultural chemicals, pigments, etc., or as a raw material for other fine chemicals. The oxyalkylene derivative of the present invention is novel and useful. By using the oxyalkylene derivative of the present invention as a fixing agent for a substance having an amino group or a thiol group, a functional substance can be fixed to a carrier using a (poly) oxyalkylene chain as a spacer. EXAMPLES Hereinafter, the present invention will be described in more detail by way of examples, but the present invention is not limited to these examples. Example 1 1.0 g (9.5 mmol) of 2-aminoethoxyethanol and N- (4-
2.7 g of maleimide butyryloxy) succinimide
(9.5 mmol), and the mixture was stirred at room temperature for 5 hours. Further, 1.5 g of carbonyldiimidazole (9.5 mmol)
l), and the mixture was stirred at room temperature for 1 hour, and then isolated and purified through a silica gel column using a mixed solvent of ethyl acetate / hexane (V / V = 1/1) as a developing solvent.
Was obtained (88% yield). Embedded image The results of1 H-NMR analysis of the obtained compound are as follows.1 H-NMR (CDCl3 ), δ (ppm): 1.98
(C; 2H), 2.11 (d; 2H), 3.38-3.
97 (b, f, g, h; about 8H), 4.60 (i; 2
H), 6.78 (a; 2H), 7.05 (k; 1H),
7.42 (l; 1H), 8.19 (j; 1H) Example 2 1.0 g (0.5 mmo) of α-hydro-ω-amino-poly (oxyethylene) in 50 ml of tetrahydrofuran.
l) and 0.14 g (0.5 mmol) of N- (4-maleimidobutyryloxy) succinimide were added, and the mixture was stirred at room temperature for 10 hours. Further, 0.08 g (0.5 mmol) of carbonyldiimidazole was added, and the mixture was stirred at room temperature for 3 hours. Next, the reaction solution was dropped into 500 ml of diethyl ether and reprecipitated, followed by vacuum drying to obtain the target product represented by the following formula (6) (yield: 85%). Embedded image The results of1 H-NMR analysis of the obtained compound are as follows.1 H-NMR (CDCl3 ), δ (ppm): 1.97
(C; 2H), 2.11 (d; 2H), 3.38-3.
97 (b, f, g, h; about 180H), 4.60 (i;
2H), 6.78 (a; 2H), 7.05 (k; 1
H), 7.42 (l; 1H), 8.19 (j; 1H) Reference Example 1 Small unilamellar liposomes consisting of equimolar amounts of egg yolk lecithin, phosphatidylethanolamine and cholesterol as membrane components Was added to a phosphate buffer solution (pH = 7.5) containing 10% as a solid content, and 10 mg of the oxyalkylene derivative obtained in Example 1 was added, followed by gentle stirring at 4 ° C. for 24 hours. Attached to liposomes. After completion of the reaction, Sephadex G-50
The mixture was subjected to gel filtration using a filter, and the resulting liposome fraction was added to a horseradish peroxidase (hereinafter abbreviated as HRP) 100 μl.
g was added and shaken at 4 ° C. for 24 hours to immobilize HRP on the tip of the oxyethylene group. After the reaction is completed,
Gel filtration was performed using hadex G-50, and a liposome fraction was collected. In addition, HRP substrate 1,
2-phenylenediamine solution (10 mmol / l) 10
0 μl was added, the mixture was incubated at 30 ° C. for 10 minutes, and 10 ml of 0.1N sulfuric acid was further added. As a result, a strong brown coloration was observed. From these results, it is understood that HRP can be easily immobilized on the liposome surface by using the oxyalkylene derivative obtained in Example 1.
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