【発明の詳細な説明】【０００１】
【産業上の利用分野】本発明は、２−Ｏ−α−Ｄ−グル
コピラノシル−Ｌ−アスコルビン酸高含有物の製造方法
に関し、詳細には、２−Ｏ−α−Ｄ−グルコピラノシル
−Ｌ−アスコルビン酸とともに直接還元性を示すＬ−ア
スコルビン酸糖誘導体を含有する溶液からの２−Ｏ−α
−Ｄ−グルコピラノシル−Ｌ−アスコルビン酸高含有物
の製造方法に関する。
【０００２】
【従来の技術】２−Ｏ−α−Ｄ−グルコピラノシル−Ｌ
−アスコルビン酸は、特開平３−１３５９９２号公報、
特開平３−１３９２８８号公報などで開示されているよ
うに、化Ｉで示される化学構造を有し、直接還元性を示
さず、安定性に優れ、しかも生体内で容易に加水分解さ
れ、Ｌ−アスコルビン酸本来の生理活性を発揮するＬ−
アスコルビン酸の新規糖誘導体である。
【０００３】
【化１】
【０００４】その工業的製造方法は、特開平３−１８３
４９２号公報に開示されているように、例えば、Ｌ−ア
スコルビン酸とα−グルコシル糖化合物とを含有する溶
液に糖転移酵素または糖転移酵素とグルコアミラーゼと
を作用させて得られる２−Ｏ−α−Ｄ−グルコピラノシ
ル−Ｌ−アスコルビン酸とともにそれ以外の夾雑物を含
有する溶液を原料溶液として、強酸性カチオン交換樹脂
を用いるカラムクロマトグラフィーを行ない、この溶出
液の２−Ｏ−α−Ｄ−グルコピラノシル−Ｌ−アスコル
ビン酸高含有画分を採取することにより、２−Ｏ−α−
Ｄ−グルコピラノシル−Ｌ−アスコルビン酸高含有物含
有溶液を製造しうること、更に、これを濃縮して過飽和
とし、結晶２−Ｏ−α−Ｄ−グルコピラノシル−Ｌ−ア
スコルビン酸を製造しうることが開示されている。
【０００５】しかしながら、本発明者等は、２−Ｏ−α
−Ｄ−グルコピラノシル−Ｌ−アスコルビン酸高含有物
の製造方法について研究を続けていたところ、原料溶液
である２−Ｏ−α−Ｄ−グルコピラノシル−Ｌ−アスコ
ルビン酸とともにそれ以外の夾雑物を含有する溶液に
は、強酸性カチオン交換樹脂を用いるカラムクロマトグ
ラフィーにおいて、Ｌ−アスコルビン酸、グルコースな
どのように、２−Ｏ−α−Ｄ−グルコピラノシル−Ｌ−
アスコルビン酸との分離が比較的容易な夾雑物以外に、
分離が困難で２−Ｏ−α−Ｄ−グルコピラノシル−Ｌ−
アスコルビン酸高含有画分の純度向上を妨げ、更に、過
飽和溶液からの結晶２−Ｏ−α−Ｄ−グルコピラノシル
−Ｌ−アスコルビン酸の析出を阻害する比較的少量の未
知夾雑物が混在していることを見いだした。
【０００６】更に、本未知物質は、結晶２−Ｏ−α−Ｄ
−グルコピラノシル−Ｌ−アスコルビン酸を分離除去し
た母液中に蓄積され、母液からの結晶２−Ｏ−α−Ｄ−
グルコピラノシル−Ｌ−アスコルビン酸の析出を阻害
し、２番晶、３番晶の析出量を著しく低下させることを
見いだした。
【０００７】
【発明が解決しようとする課題】糖転移反応により得ら
れた２−Ｏ−α−Ｄ−グルコピラノシル−Ｌ−アスコル
ビン酸含有溶液に混在する未知夾雑物を解明し、併せ
て、２−Ｏ−α−Ｄ−グルコピラノシル−Ｌ−アスコル
ビン酸とともに夾雑物を含有する溶液からその夾雑物を
容易に除去し、より高純度の２−Ｏ−α−Ｄ−グルコピ
ラノシル−Ｌ−アスコルビン酸高含有物を工業的により
高収率で大量生産する方法の確立が望まれる。
【０００８】
【課題を解決するための手段】本発明者等は、糖転移反
応により得られた２−Ｏ−α−Ｄ−グルコピラノシル−
Ｌ−アスコルビン酸とともにそれ以外の夾雑物を含有す
る溶液を用いて、強酸性カチオン交換樹脂を用いるカラ
ムクロマトグラフィーにより、より高純度の２−Ｏ−α
−Ｄ−グルコピラノシル−Ｌ−アスコルビン酸高含有物
を工業的に容易に製造する方法の確立を目指して鋭意研
究を続けた。
【０００９】その結果、強酸性カチオン交換樹脂を用い
るカラムクロマトグラフィーにおいて、２−Ｏ−α−Ｄ
−グルコピラノシル−Ｌ−アスコルビン酸との分離が困
難で、２−Ｏ−α−Ｄ−グルコピラノシル−Ｌ−アスコ
ルビン酸高含有画分の純度向上を妨げ、更に、過飽和溶
液からの結晶２−Ｏ−α−Ｄ−グルコピラノシル−Ｌ−
アスコルビン酸の析出を阻害する夾雑物として、５−Ｏ
−α−Ｄ−グルコピラノシル−Ｌ−アスコルビン酸およ
び６−Ｏ−α−Ｄ−グルコピラノシル−Ｌ−アスコルビ
ン酸を見い出した。
【００１０】５−Ｏ−α−Ｄ−グルコピラノシル−Ｌ−
アスコルビン酸は、文献未記載の新規物質であり、６−
Ｏ−α−Ｄ−グルコピラノシル−Ｌ−アスコルビン酸
は、特公昭４８−３８１５８号公報に開示されている公
知物質であり、これらは、２−Ｏ−α−Ｄ−グルコピラ
ノシル−Ｌ−アスコルビン酸の場合とは違って、直接還
元性を示すＬ−アスコルビン酸糖誘導体であることが判
明した。
【００１１】更に、直接還元性を示さない２−Ｏ−α−
Ｄ−グルコピラノシル−Ｌ−アスコルビン酸と直接還元
性を示す５−Ｏ−α−Ｄ−グルコピラノシル−Ｌ−アス
コルビン酸、６−Ｏ−α−Ｄ−グルコピラノシル−Ｌ−
アスコルビン酸などのＬ−アスコルビン酸糖誘導体との
性質の違いに着目して研究を続け、２−Ｏ−α−Ｄ−グ
ルコピラノシル−Ｌ−アスコルビン酸とともに直接還元
性を示すＬ−アスコルビン酸糖誘導体を含有する溶液を
酸化処理して、直接還元性を示すＬ−アスコルビン酸糖
誘導体だけを酸化せしめ、次いで、強酸性カチオン交換
樹脂を用いるカラムクロマトグラフィーを行うことによ
り、２−Ｏ−α−Ｄ−グルコピラノシル−Ｌ−アスコル
ビン酸と直接還元性を示すＬ−アスコルビン酸糖誘導体
の酸化物とを容易に分離できることを見いだし、併せ
て、より高純度の２−Ｏ−α−Ｄ−グルコピラノシル−
Ｌ−アスコルビン酸高含有物を工業的規模でより高収率
で製造しうることを見いだし、本発明を完成した。
【００１２】また、このようにして得られるより高純度
の２−Ｏ−α−Ｄ−グルコピラノシル−Ｌ−アスコルビ
ン酸高含有物の過飽和溶液は、結晶の析出が容易で収率
も高く、結晶２−Ｏ−α−Ｄ−グルコピラノシル−Ｌ−
アスコルビン酸の工業的製造方法としてきわめて有利で
あることが判明した。
【００１３】本発明において、２−Ｏ−α−Ｄ−グルコ
ピラノシル−Ｌ−アスコルビン酸とともに直接還元性を
示すＬ−アスコルビン酸糖誘導体を含有する溶液とは、
２−Ｏ−α−Ｄ−グルコピラノシル−Ｌ−アスコルビン
酸とともに直接還元性を示す５−Ｏ−α−Ｄ−グルコピ
ラノシル−Ｌ−アスコルビン酸、６−Ｏ−α−Ｄ−グル
コピラノシル−Ｌ−アスコルビン酸などのＬ−アスコル
ビン酸糖誘導体を含有する溶液であって、例えば、Ｌ−
アスコルビン酸とα−グルコシル糖化合物とを含有する
溶液に糖転移酵素または糖転移酵素とグルコアミラーゼ
とを作用させて得られる溶液、この溶液を強酸性カチオ
ン交換樹脂を用いるカラムクロマトグラフィーにより得
られる２−Ｏ−α−Ｄ−グルコピラノシル−Ｌ−アスコ
ルビン酸高含有溶液、または、この溶液を濃縮、過飽和
にし、結晶２−Ｏ−α−Ｄ−グルコピラノシル−Ｌ−ア
スコルビン酸を析出、分離して得られる母液などを意味
する。
【００１４】本明細書でいう直接還元性を示すとは、Ｌ
−アスコルビン酸の場合と同様に、そのままで、２，６
−ジクロルフェノールインドフェノールを還元脱色する
ことを意味する。
【００１５】また、本明細書でいうＬ−アスコルビン酸
とは、Ｌ−アスコルビン酸のみならず、Ｌ−アスコルビ
ン酸のアルカリ金属塩若しくはアルカリ土類金属塩など
のＬ−アスコルビン酸塩、または、それらの混合物を意
味する。
【００１６】従って、糖転移反応に用いるＬ−アスコル
ビン酸としては、通常、遊離のＬ−アスコルビン酸だけ
でなく、必要に応じて、Ｌ−アスコルビン酸ナトリウ
ム、Ｌ−アスコルビン酸カルシウムなどが適宜用いられ
る。
【００１７】また、同様に、本明細書でいう２−Ｏ−α
−Ｄ−グルコピラノシル−Ｌ−アスコルビン酸、５−Ｏ
−α−Ｄ−グルコピラノシル−Ｌ−アスコルビン酸、６
−Ｏ−α−Ｄ−グルコピラノシル−Ｌ−アスコルビン
酸、α−グリコシル−Ｌ−アスコルビン酸などについて
も、特に不都合が生じない限り、遊離の酸のみならず、
それらの塩をも意味する。
【００１８】２−Ｏ−α−Ｄ−グルコピラノシル−Ｌ−
アスコルビン酸とともに直接還元性を示すＬ−アスコル
ビン酸糖誘導体を含有する溶液を酸化処理するには、で
きるだけ、２−Ｏ−α−Ｄ−グルコピラノシル−Ｌ−ア
スコルビン酸に作用することなく、直接還元性を示すＬ
−アスコルビン酸糖誘導体を優先的に酸化する条件が選
ばれ、例えば、通気撹拌などの好気的条件にさらす方法
が有利に採用できる。
【００１９】この際、ｐＨを弱酸性乃至アルカリ性にし
たり、銅塩、鉄塩などの金属塩、水蒸気炭、塩化亜鉛炭
などの活性炭など酸化促進剤の共存下で酸化を促進する
ことも有利に実施できる。
【００２０】必要ならば、過酸化水素、過マンガン酸カ
リウムなどの酸化剤を添加することも有利に実施でき
る。
【００２１】このようにして得られる２−Ｏ−α−Ｄ−
グルコピラノシル−Ｌ−アスコルビン酸とともに直接還
元性を示すＬ−アスコルビン酸糖誘導体の酸化物（以
下、単にＬ−アスコルビン酸糖誘導体酸化物と略称す
る。）を含有する溶液は、強酸性カチオン交換樹脂を用
いるカラムクロマトグラフィーによって、２−Ｏ−α−
Ｄ−グルコピラノシル−Ｌ−アスコルビン酸とＬ−アス
コルビン酸糖誘導体酸化物とを容易に分離できることが
判明した。
【００２２】以下、本発明で採用される強酸性カチオン
交換樹脂を用いるカラムクロマトグラフィーについて、
より具体的に説明する。
【００２３】強酸性カチオン交換樹脂は、公知の、例え
ば、スルホン酸基を結合したスチレン−ジビニルベンゼ
ン架橋共重合体樹脂のＮａ＋型、Ｋ＋型などのアルカリ
金属塩型、または、Ｃａ＋＋型、Ｍｇ＋＋型などのアル
カリ土類金属塩型、またはＨ＋型などが適宜使用され、
市販品としては、例えば、ダウケミカル社製造の商品名
ダウエックス ５０Ｗ×８、ローム＆ハース社製造の商
品名アンバーライトＣＧ−１２０、東京有機化学工業社
製造の商品名 ＸＴ−１０２２Ｅ、三菱化成工業社製造
の商品名ダイヤイオン ＳＫ１０４などがある。
【００２４】これら樹脂は、２−Ｏ−α−Ｄ−グルコピ
ラノシル−Ｌ−アスコルビン酸高含有画分の分画に優れ
ているだけでなく、耐熱性、耐摩耗性にも優れ、２−Ｏ
−α−Ｄ−グルコピラノシル−Ｌ−アスコルビン酸高含
有物の工業的大量生産に極めて有利である。
【００２５】原料溶液として、例えば、目的とする２−
Ｏ−α−Ｄ−グルコピラノシル−Ｌ−アスコルビン酸と
ともにＬ−アスコルビン酸糖誘導体酸化物、Ｄ−グルコ
ースなどの夾雑物を含有する溶液を用いる場合には、強
酸性カチオン交換樹脂を充填したカラムに原料溶液を流
し、次いで、水で溶出し、Ｌ−アスコルビン酸糖誘導体
酸化物高含有画分、Ｌ−アスコルビン酸糖誘導体酸化物
・２−Ｏ−α−Ｄ−グルコピラノシル−Ｌ−アスコルビ
ン酸高含有画分、２−Ｏ−α−Ｄ−グルコピラノシル−
Ｌ−アスコルビン酸高含有画分、２−Ｏ−α−Ｄ−グル
コピラノシル−Ｌ−アスコルビン酸・Ｄ−グルコース高
含有画分、Ｄ−グルコース高含有画分などの順に複数の
画分に分画して、この２−Ｏ−α−Ｄ−グルコピラノシ
ル−Ｌ−アスコルビン酸高含有画分を採取することによ
り、容易に２−Ｏ−α−Ｄ−グルコピラノシル−Ｌ−ア
スコルビン酸高含有物が製造される。
【００２６】また、原料溶液をカラムに流して分画する
に際し、既に得られているＬ−アスコルビン酸糖誘導体
酸化物・２−Ｏ−α−Ｄ−グルコピラノシル−Ｌ−アス
コルビン酸高含有画分、２−Ｏ−α−Ｄ−グルコピラノ
シル−Ｌ−アスコルビン酸・Ｄ−グルコース高含有画分
などの２−Ｏ−α−Ｄ−グルコピラノシル−Ｌ−アスコ
ルビン酸含有画分を原料溶液の前後に、または、原料溶
液とともに流すことにより、分画に要する水の使用量を
減少させ、原料溶液から２−Ｏ−α−Ｄ−グルコピラノ
シル−Ｌ−アスコルビン酸高含有物を高濃度、高収率で
採取することも有利に実施できる。
【００２７】本発明で使用される分画方式は固定床方
式、移動床方式、擬似移動床方式のいずれであってもよ
い。
【００２８】このようにして得られた本発明の２−Ｏ−
α−Ｄ−グルコピラノシル−Ｌ−アスコルビン酸高含有
物、望ましくは、純度７０％以上の高含有物は、溶液上
であっても、また濃縮してシラップ状にあっても、はる
かに安定であり、その取扱いは、容易である。
【００２９】次に、２−Ｏ−α−Ｄ−グルコピラノシル
−Ｌ−アスコルビン酸高含有物とそれの結晶２−Ｏ−α
−Ｄ−グルコピラノシル−Ｌ−アスコルビン酸の製造方
法について述べる。
【００３０】本発明で使用する晶出用２−Ｏ−α−Ｄ−
グルコピラノシル−Ｌ−アスコルビン酸高含有物は、結
晶２−Ｏ−α−Ｄ−グルコピラノシル−Ｌ−アスコルビ
ン酸の析出を阻害していた直接還元性を示すＬ−アスコ
ルビン酸糖誘導体を実質的に除去しているので、その結
晶の析出は、きわめて容易であり、結晶収率も高い。晶
出方法は、通常２０乃至６０℃の比較的高温の過飽和２
−Ｏ−α−Ｄ−グルコピラノシル−Ｌ−アスコルビン酸
を助晶缶にとり、これに種晶を望ましくは、０．１乃至
１０％共存せしめて、ゆっくり撹拌しつつ徐冷し、晶出
を促してマスキットにすればよい。
【００３１】このように、本発明の結晶２−Ｏ−α−Ｄ
−グルコピラノシル−Ｌ−アスコルビン酸は、過飽和２
−Ｏ−α−Ｄ−グルコピラノシル−Ｌ−アスコルビン酸
溶液に結晶２−Ｏ−α−Ｄ−グルコピラノシル−Ｌ−ア
スコルビン酸を種晶として加えることにより容易に晶出
させることができる。
【００３２】晶出したマスキットから結晶２−Ｏ−α−
Ｄ−グルコピラノシル−Ｌ−アスコルビン酸を製造する
方法は、結晶２−Ｏ−α−Ｄ−グルコピラノシル−Ｌ−
アスコルビン酸が採取できればよく、例えば、分蜜方
法、ブロック粉砕方法、流動造粒方法、噴霧乾燥方法な
どの公知方法を利用すればよい。
【００３３】このようにして得られる結晶２−Ｏ−α−
Ｄ−グルコピラノシル−Ｌ−アスコルビン酸は、その純
度、晶出率によって多少変動するものの、実質的に非吸
湿性または、難吸湿性であり、流動性であり、固着の懸
念もなく、その優れた特長は、次の通りである。
【００３４】（１）直接還元性を示さず、きわめて安定
である。
【００３５】Ｌ−アスコルビン酸とは違って、メイラー
ド反応を起こしにくい。
【００３６】従って、アミノ酸、ペプチド、蛋白質、脂
質、糖質、生理活性物質などが共存しても無用の反応を
起こさず、むしろ、これら物質を安定化する。
【００３７】（２）加水分解を受けてＬ−アスコルビン
酸を生成し、Ｌ−アスコルビン酸と同様の還元作用、抗
酸化作用を示す。
【００３８】（３）体内の酵素により、Ｌ−アスコルビ
ン酸とＤ−グルコースとに容易に加水分解され、Ｌ−ア
スコルビン酸本来の生理活性を示す。
【００３９】また、ビタミンＥ、ビタミンＰなどとの併
用により、その生理活性を増強することができる。
【００４０】（４）Ｌ−アスコルビン酸とα−グルコシ
ル糖化合物などとを経口摂取することにより、生体内で
生成され、代謝される物質であることから、その安全性
は極めて高い。
【００４１】（５）実質的に、非吸湿性、難吸湿性であ
るにもかかわらず、水に対して大きな溶解速度、溶解度
を有しており、粉末、顆粒、錠剤などのビタミン剤、サ
ンドクリーム、チョコレート、チューインガム、即席ジ
ュース、即席調味料など飲食物のビタミンＣ強化剤、呈
未改善剤、酸味剤、安定剤などとして有利に利用でき
る。
【００４２】（６）実質的に非吸湿性または難吸湿性で
あり、固結しないことから流動性であり、その取扱いは
容易で非晶質の場合と比較して、その包装、輸送、貯蔵
に要する物的、人的経費が大幅に削減できる。
【００４３】以下、本発明を実験で詳細に説明する。
【００４４】
【実験１】 未知物質の生成と単離
【００４５】デキストリン（ＤＥ約６）３０重量部を水
４０重量部に加熱溶解し、還元下に保って、Ｌ−アスコ
ルビン酸７重量部を加え、ｐＨ５．６、６０℃に維持し
つつ、これに、シクロマルトデキストリン・グルカノト
ランスフェラーゼ（株式会社林原生物化学研究所販売）
をデキストリングラム当り２５０単位加えて、４０時間
反応させた。
【００４６】反応液を、高速液体クロマトグラフィー
［ポンプ；島津製作所ＬＣ−６Ａ，カラム；Ｗａｋｏｐ
ａｋ ＷＢ Ｔ−３３０，溶離液；０．０１Ｗ／Ｖ％硝
酸，流速；毎分０．５ミリリットル，検出；示差屈折計
ＲＩ−７５２０（エルマ），ＵＶ検出器８７５−ＵＶ
（ＪＡＳＣＯ）］で分析したところ、Ｌ−アスコルビン
酸の約６５％が、α−グリコシル−Ｌ−アスコルビン酸
に変換していた。
【００４７】本反応液をＵＦ膜で濾過して酵素を回収除
去した後、５０℃、ｐＨ５．０に調整し、これにグルコ
アミラーゼをデキストリングラム当り１００単位加えて
６時間反応させた。
【００４８】本反応液を加熱して酵素を失活させ、活性
炭で脱色濾過し、濾液を濃縮し、次いで、特開昭５８−
２３７９９号公報に開示されているカラムクロマトグラ
フィーの方法に準じて、強酸性カチオン交換樹脂（ダウ
ケミカル社製造、商品名ダウエックス ５０Ｗ×４、Ｃ
ａ＋＋型）を充填したカラムを用いてカラムクロマトグ
ラフィーを行ない、この溶出液の２−Ｏ−α−Ｄ−グル
コピラノシル−Ｌ−アスコルビン酸高含有画分を採取
し、これをカチオン交換樹脂（Ｈ＋型）で脱ミネラルし
て精製し、減圧濃縮して、濃度約７７Ｗ／Ｗ％とし、こ
れを助晶缶にとり、２−Ｏ−α−Ｄ−グルコピラノシル
−Ｌ−アスコルビン酸の種晶を加えて、４０℃とし、ゆ
っくり撹拌しつつ、徐冷して２日間を要して２０℃まで
下げ、更に、バスケット型遠心分離機にかけ、結晶２−
Ｏ−α−Ｄ−グルコピラノシル−Ｌ−アスコルビン酸を
分離除去し、一番母液を原料のＬ−アスコルビン酸に対
して固形物当り約５０％の収率で得た。
【００４９】この母液を、同様に、減圧濃縮し、２−Ｏ
−α−Ｄ−グルコピラノシル−Ｌ−アスコルビン酸の二
番晶を晶出させ、これを分離除去して二番母液を原料の
Ｌ−アスコルビン酸に対して固形物当り約２５％の収率
で得た。
【００５０】この二番母液を高速液体クロマトグラフィ
ーで分析したところ、２−Ｏ−α−Ｄ−グルコピラノシ
ル−Ｌ−アスコルビン酸が１８．７分の位置に現われ、
Ｌ−アスコルビン酸が２９．７分の位置に現われたのに
対し、この中間の２１．７分と２３．１分の位置に未知
物質のピークが認められ、それぞれ、物質Ｘ、物質Ｙと
仮に命名した。
【００５１】物質Ｘおよび物質Ｙの含量は、それぞれ、
固形物当り約１０％であり、２−Ｏ−α−Ｄ−グルコピ
ラノシル−Ｌ−アスコルビン酸の含量は約６５％であっ
た。
【００５２】次に、二番母液から物質Ｘおよび物質Ｙを
単離するためには、大量に共存する２−Ｏ−α−Ｄ−グ
ルコピラノシル−Ｌ−アスコルビン酸を除去する必要が
あった。
【００５３】そこで、２−Ｏ−α−Ｄ−グルコピラノシ
ル−Ｌ−アスコルビン酸を除去する条件を種々検討した
ところ、強酸性、高温条件で２−Ｏ−α−Ｄ−グルコピ
ラノシル−Ｌ−アスコルビン酸が、物質Ｘ、物質Ｙと比
較して加水分解を受け易いことを見出し、この方法を利
用して２−Ｏ−α−Ｄ−グルコピラノシル−Ｌ−アスコ
ルビン酸を除去した。
【００５４】即ち、二番母液を濃度２５Ｗ／Ｗ％とし、
これを塩酸でｐＨ１．７に調整後、１００℃に保って、
２−Ｏ−α−Ｄ−グルコピラノシル−Ｌ−アスコルビン
酸を優先的に加水分解した後、冷却し、アニオン交換樹
脂（ＯＨ−型）を充填したカラムに流して物質Ｘおよび
物質Ｙを吸着させ、水洗し、次いで、０．５Ｎ塩酸で溶
出し、物質Ｘおよび物質Ｙを含有する溶液を得た。
【００５５】次いで、本溶液を調製用高速液体クロマト
グラフィー［ポンプ；Ｍｏｄｅｌ５１０（ウォーター
ズ），カラム；Ｄ−ＯＤＳ−５（ワイエムシィ），溶離
液；０．０１ＭＮａＨ２ＰＯ４−Ｈ３ＰＯ４（ｐＨ２．
０），流速；毎分４．５ミリリットル，検出；ＵＶ検出
器］にかけ、物質Ｘまたは物質Ｙの高含有画分を採取
し、脱塩装置（旭化成株式会社、マイクロアシライザー
Ｇ１、カートリッジＡＣ−１１０使用）により脱塩し、
濃縮、凍結乾燥して、粉末状の物質Ｘおよび物質Ｙを原
料母液に含まれるそれぞれに対して、約２０％の収率で
得た。
【００５６】これを、前述の高速液体クロマトグラフィ
ーで分析したところ、物質Ｘは純度約９８％、物質Ｙは
純度約９７％の高純度品であった。
【００５７】
【実験２】 理化学的性質
【００５８】実験１で調製した高純度の物質Ｘおよび物
質Ｙを用いて、次に示す理化学的性質を調べた。
【００５９】（ａ）元素分析：Ｃ１２Ｈ１８Ｏ１１とし
て 理論値 Ｃ＝４２．６％ Ｈ＝５．３６％ 物質Ｘ実測値 Ｃ＝４２．４％ Ｈ＝５．３７％ 物質Ｙ実測値 Ｃ＝４２．５％ Ｈ＝５．３７％
【００６０】 （ｂ）グルコースとＬ−アスコルビン酸の構成比 理論値 グルコース：Ｌ−アスコルビン酸＝１：１ 物質Ｘ実測値 グルコース：Ｌ−アスコルビン酸＝１．００：１．０５ 物質Ｙ実測値 グルコース：Ｌ−アスコルビン酸＝１．００：０．９９ （注）グルコースはアンスロン硫酸法により測定し、Ｌ
−アスコルビン酸はインドフェノール・キシレン法によ
り測定した。
【００６１】（ｃ）紫外線吸収スペクトル 物質Ｘ、物質Ｙともに、ｐＨ２．０で２４３ｎｍに、ｐ
Ｈ７．０で２６５ｎｍに吸収極大を示す。
【００６２】（ｄ）小腸粘膜酵素による加水分解 岡田等が日本栄養・食糧学会誌、 第４３巻、第１号、
第２３乃至２９頁（１９９０年）で報告している方法に
準じて、小腸粘膜酵素による物質Ｘまたは物質Ｙの加水
分解試験を行なったところ、物質Ｘはよく加水分解され
るのに対し、物質Ｙはほとんど加水分解されなかった。
【００６３】（ｅ）ＮＭＲ 核磁気共鳴分析（１３Ｃ−ＮＭＲ）により、１２本のシ
グナルが得られ、本物質の１２個の炭素はすべて異なる
化学シフトを示した。得られた各シグナルを、標準物
質、α−Ｄ−グルコピラノースおよびＬ−アスコルビン
酸に帰属し、両標準物質の化学シフトとともに表１に示
した。
【００６４】
【表１】
【００６５】表１の結果より、物質Ｘは化２で示される
新規物質、５−Ｏ−α−Ｄ−グルコピラノシル−Ｌ−ア
スコルビン酸の構造を有し、物質Ｙは、化３で示される
公知物質、６−Ｏ−α−Ｄ−グルコピラノシル−Ｌ−ア
スコルビン酸の構造を有しているものと判断される。
【００６６】
【化２】
【００６７】
【化３】
【００６８】
【実験３】 酸化処理
【００６９】実験１の方法で調製した２−Ｏ−α−Ｄ−
グルコピラノシル−Ｌ−アスコルビン酸、５−Ｏ−α−
Ｄ−グルコピラノシル−Ｌ−アスコルビン酸、６−Ｏ−
α−Ｄ−グルコピラノシル−Ｌ−アスコルビン酸および
二番母液を、それぞれ濃度１０Ｗ／Ｗ％、ｐＨ５．０に
調整し、それぞれに水蒸気炭を固形物当り５％加えて２
７℃で２４時間通気撹拌したところ、直接還元性を示す
Ｌ−アスコルビン酸糖誘導体である５−Ｏ−α−Ｄ−グ
ルコピラノシル−Ｌ−アスコルビン酸、６−Ｏ−α−Ｄ
−グルコピラノシル−Ｌ−アスコルビン酸および二番母
液中に含まれるこれらの直接還元性を示すＬ−アスコル
ビン酸糖誘導体は酸化され、それらが持つ特有の紫外部
吸収が消失した。
【００７０】これに対し、２−Ｏ−α−Ｄ−グルコピラ
ノシル−Ｌ−アスコルビン酸は、単独溶液中、二番母液
中いずれの場合も安定で、量的にも、質的にも変化がな
かった。
【００７１】
【実験４】 強酸性カチオン交換樹脂を用いるカラムクロマトグラフ
ィー
【００７２】実験１の方法で調製した二番母液未処理
液、または該母液を実験３の方法で酸化処理した後、水
蒸気炭を除去、強酸性カチオン交換樹脂（Ｈ＋型）で脱
ミネラルした溶液を原料溶液として、特開昭５８−２３
７９９号公報に開示されている強酸性カチオン交換樹脂
を用いるカラムクロマトグラフィーの方法に準じて、強
酸性カチオン交換樹脂（東京有機化学工業製造、商品名
ＸＴ−１０１６、Ｈ＋型）を充填したカラムを用いてカ
ラムクロマトグラフィーを行った。
【００７３】未処理液の場合には、２−Ｏ−α−Ｄ−グ
ルコピラノシル−Ｌ−アスコルビン酸と比較的少量含ま
れている直接還元性を示す５−Ｏ−α−Ｄ−グルコピラ
ノシル−Ｌ−アスコルビン酸および６−Ｏ−α−Ｄ−グ
ルコピラノシル−Ｌ−アスコルビン酸とは同一挙動を示
し、分離困難であった。
【００７４】これに対し、酸化処理液の場合には、溶出
液が、Ｌ−アスコルビン酸糖誘導体酸化物高含有画分、
Ｌ−アスコルビン酸糖誘導体酸化物・２−Ｏ−α−Ｄ−
グルコピラノシル−Ｌ−アスコルビン酸高含有画分、２
−Ｏ−α−Ｄ−グルコピラノシル−Ｌ−アスコルビン酸
高含有画分の順に溶出し、２−Ｏ−α−Ｄ−グルコピラ
ノシル−Ｌ−アスコルビン酸とＬ−アスコルビン酸糖誘
導体酸化物との分離が達成され、工業的に実施容易であ
ることが判明した。
【００７５】以下、本発明の実施例を述べる。
【００７６】
【実施例１】デキストリン（ＤＥ約６）３０重量部を水
４０重量部に加熱溶解し、還元下に保って、Ｌ−アスコ
ルビン酸７重量部を加え、ｐＨ５．６、６０℃に維持し
つつ、これに、シクロマルトデキストリン グルカノト
ランスフェラーゼをデキストリングラム当り２５０単位
加えて、４０時間反応させた。
【００７７】本反応液をＵＦ膜で濾過して酵素を回収除
去した後、５０℃、ｐＨ５．０に調整し、これにグルコ
アミラーゼをデキストリングラム当り１００単位加えて
６時間反応させた。
【００７８】本反応液を加熱して酵素を失活させ、活性
炭で脱色濾過し、濾液を濃縮し、次いで、強酸性カチオ
ン交換樹脂（ダウケミカル社製造、商品名ダウエックス
５０Ｗ×４、Ｃａ＋＋型）を充填したカラムを用いて
カラムクロマトグラフィーを行ない、この溶出液の２−
Ｏ−α−Ｄ−グルコピラノシル−Ｌ−アスコルビン酸高
含有画分を採取した。
【００７９】本画分を高速液体クロマトグラフィーで分
析したところ、固形物当り２−Ｏ−α−Ｄ−グルコピラ
ノシル−Ｌ−アスコルビン酸９０％、５−Ｏ−α−Ｄ−
グルコピラノシル−Ｌ−アスコルビン酸２．５％、およ
び６−Ｏ−α−Ｄ−グルコピラノシル−Ｌ−アスコルビ
ン酸２．５％を含有する溶液であった。
【００８０】本溶液を濃度約３６Ｗ／Ｗ％、ｐＨ４．０
に調整し、これに硫酸第二鉄を固形物当り０．１％加え
て３０℃で２０時間通気撹拌して酸化処理し、次いで、
前記方法に準じて、強酸性カチオン交換樹脂を用いるカ
ラムクロマトグラフィーを行ない、この溶出液の２−Ｏ
−α−Ｄ−グルコピラノシル−Ｌ−アスコルビン酸高含
有画分を採取した。
【００８１】これを強酸性カチオン交換樹脂（Ｈ＋型）
で脱ミネラルして精製し、減圧濃縮して、濃度約７７Ｗ
／Ｗ％とし、これを助晶缶にとり、２−Ｏ−α−Ｄ−グ
ルコピラノシル−Ｌ−アスコルビン酸を種晶として２％
加えて４０℃とし、ゆっくり撹拌しつつ徐冷して２日間
を要して２０℃まで下げ、更にバスケット型遠心分離機
にかけ、結晶２−Ｏ−α−Ｄ−グルコピラノシル−Ｌ−
アスコルビン酸を原料のＬ−アスコルビン酸に対して収
率約５０％で得た。
【００８２】本品は、直接還元性を示さず、安定性、生
理活性も充分で、ビタミンＣ強化剤としてばかりでな
く、呈味改善剤、酸味剤、安定剤、品質改良剤、抗酸化
剤、生理活性剤、紫外線吸収剤、医薬原料、化学品など
として、飲食物、抗感受性疾患剤、化粧品などに有利に
利用できる。
【００８３】
【実施例２】デキストリン（ＤＥ１０）９重量部を水２
０重量部に加熱溶解し、還元下に保って、Ｌ−アスコル
ビン酸３重量部を加え、ｐＨ５．５、６５℃に維持しつ
つ、これにシクロマルトデキストリン・グルカノトラン
スフェラーゼをデキストリングラム当り１５０単位加え
て４０時間反応させた。
【００８４】反応液を高速液体クロマトグラフィーで分
析したところ、Ｌ−アスコルビン酸の約６５％がα−グ
リコシル−Ｌ−アスコルビン酸へ変換していた。
【００８５】本反応液を加熱して酵素を失活させた後、
５５℃、ｐＨ４．５に調整し、これにグルコアミラーゼ
をデキストリングラム当り５０単位加えて、２４時間反
応させた。
【００８６】本反応液を加熱して酵素を失活させ、活性
炭で脱色濾過し、濾液をカチオン交換樹脂（Ｈ＋型）の
カラムにかけ脱ミネラルし、次いで、アニオン交換樹脂
（ＯＨ−型）のカラムにかけアニオンを樹脂に吸着さ
せ、水洗してＤ−グルコースなどを除去後、０．５Ｎ−
塩酸溶液で溶出、濃縮し、この濃縮液を原料溶液とし
て、強酸性カチオン交換樹脂（Ｈ＋型）を充填したカラ
ムを用いてカラムクロマトグラフィーを行ない、この溶
出液の２−Ｏ−α−Ｄ−グルコピラノシル−Ｌ−アスコ
ルビン酸高含有画分を採取した。
【００８７】次いで、これを濃度約７６Ｗ／Ｗ％に減圧
濃縮して助晶缶にとり、結晶２−Ｏ−α−Ｄ−グルコピ
ラノシル−Ｌ−アスコルビン酸を種晶として１％加えて
４０℃とし、ゆっくり撹拌しつつ徐冷して２日間を要し
て２０℃まで下げ、バスケット型遠心分離機にかけ、結
晶２−Ｏ−α−Ｄ−グルコピラノシル−Ｌ−アスコルビ
ン酸を分離し、母液を固形物収率約５５％で得た。
【００８８】本母液を高速液体クロマトグラフィーで分
析したところ、２−Ｏ−α−Ｄ−グルコピラノシル−Ｌ
−アスコルビン酸約８０％、５−Ｏ−α−Ｄ−グルコピ
ラノシル−Ｌ−アスコルビン酸約５％、６−Ｏ−α−Ｄ
−グルコピラノシル−Ｌ−アスコルビン酸約５％を含有
していた。
【００８９】本母液を濃度１８Ｗ／Ｗ％、ｐＨ５．０に
調整し、これに塩化亜鉛炭を固形物当り０．５％加えて
５０℃で２０時間通気撹拌して酸化処理し、次いで、前
記方法に準じて、強酸性カチオン交換樹脂を用いるカラ
ムクロマトグラフィーを行ない、この溶出液の２−Ｏ−
α−Ｄ−グルコピラノシル−Ｌ−アスコルビン酸高含有
画分を採取し、これをイオン交換樹脂で脱ミネラルし、
減圧濃縮して、実施例１の方法に準じて晶出、分蜜し、
結晶２−Ｏ−α−Ｄ−グルコピラノシル−Ｌ−アスコル
ビン酸を、母液固形物当り収率約５５％で得た。
【００９０】本品は、実施例１の場合と同様に、飲食
物、抗感受性疾患剤、化粧品などに有利に利用できる。
【００９１】
【実施例３】実施例２の方法で調製した母液を濃度２０
Ｗ／Ｗ％、ｐＨ７．５に調整し、５０℃で４８時間通気
撹拌して酸化処理し、次いで、実施例２の方法に準じ
て、強酸性カチオン交換樹脂を用いるカラムクロマトグ
ラフィーを行ない、この溶出液の２−Ｏ−α−Ｄ−グル
コピラノシル−Ｌ−アスコルビン酸高含有画分を採取
し、これをイオン交換樹脂で脱ミネラルし、減圧濃縮し
て、実施例１の方法に準じて晶出、分蜜し、結晶２−Ｏ
−α−Ｄ−グルコピラノシル−Ｌ−アスコルビン酸を母
液固形物当り収率約５３％で得た。
【００９２】本品は、実施例１の場合と同様に、飲食
物、抗感受性疾患剤、化粧品などに有利に利用できる。
【００９３】
【発明の効果】本文で述べたことく、本発明において、
２−Ｏ−α−Ｄ−グルコピラノシル−Ｌ−アスコルビン
酸とともに直接還元性を示すＬ−アスコルビン酸糖誘導
体とを含有する溶液を酸化処理し、次いで、強酸性カチ
オン交換樹脂を用いるカラムクロマトグラフィーを行う
ことにより、２−Ｏ−α−Ｄ−グルコピラノシル−Ｌ−
アスコルビン酸とＬ−アスコルビン酸糖誘導体酸化物と
が容易に分離できることから、得られる２−Ｏ−α−Ｄ
−グルコピラノシル−Ｌ−アスコルビン酸高含有画分の
純度が向上し、結晶２−Ｏ−α−Ｄ−グルコピラノシル
−Ｌ−アスコルビン酸の析出が容易になり、その収率も
向上する。
【００９４】従って、本発明は、２−Ｏ−α−Ｄ−グル
コピラノシル−Ｌ−アスコルビン酸高含有物の製造方法
としての工業的意義がきわめて大きい。