【０００１】[0001]
【産業上の利用分野】本発明は、式（１）又は式（２）
で示されるような４，４−ジアルコキシ−２−ブタノー
ルの光学活性体の製造方法に関する。BACKGROUND OF THE INVENTION The present invention relates to formula (1) or formula (2).
The present invention relates to a method for producing an optically active substance of 4,4-dialkoxy-2-butanol as shown by
【０００２】[0002]
【化６】さらに詳しくは、式（１）又は式（２）で示される４，
４−ジアルコキシ−２−ブタノールのエナンチオマー混
合物に微生物を作用させ、式（１）又は式（２）で示さ
れる４，４−ジアルコキシ−２−ブタノールの光学異性
体の一方を、他方の光学異性体よりも多く残存させるこ
とを特徴とする光学活性な４，４−ジアルコキシ−２−
ブタノールの製造方法に関する。Embedded image More specifically, 4, represented by the formula (1) or the formula (2)
A microorganism is allowed to act on an enantiomeric mixture of 4-dialkoxy-2-butanol, and one of the optical isomers of 4,4-dialkoxy-2-butanol represented by the formula (1) or (2) is replaced with the other optical isomer. Optically active 4,4-dialkoxy-2-characterized by remaining more than isomer
The present invention relates to a method for producing butanol.
【０００３】なお、本発明で対象にしている式（１）又
は式（２）で示される光学活性な４，４−ジアルコキシ
−２−ブタノールの不斉炭素とは、式（１）又は式
（２）で示される４，４−ジアルコキシ−２−ブタノー
ルの２位の炭素を意味する。The asymmetric carbon of the optically active 4,4-dialkoxy-2-butanol represented by the formula (1) or (2), which is the object of the present invention, is defined by the formula (1) or the formula (1). It means the carbon at the 2-position of 4,4-dialkoxy-2-butanol shown in (2).
【０００４】また、式（１）又は式（２）で示される化
合物には、Ｒ1、Ｒ2が異なる場合や、Ａが非対称であ
る化合物も含まれ、この場合はアセタール炭素も不斉炭
素になるが、このアセタール炭素の立体は特に問題にし
ない。The compounds represented by the formulas (1) and (2) include compounds having different R1 and R2 and compounds having A asymmetry. In this case, the acetal carbon and the asymmetric carbon are used. However, the configuration of this acetal carbon is not particularly problematic.
【０００５】[0005]
【従来の技術】式（１）で示される４，４−ジアルコキ
シ−２−ブタノールの光学活性体は抗生物質をはじめと
する種々の医薬品の重要な合成中間体である。従来、式
（１）又は式（２）で示される４，４−ジアルコキシ−
２−ブタノールの光学活性体を製造する方法としては、
４，４−ジメトキシ−２−ブタノンをアルコールデヒド
ロゲナーゼにより選択的に還元して、（Ｓ）−４，４−
ジメトキシ−２−ブタノールを得る方法（J.Am.Chem.So
c.,107,4028(1985))、（Ｓ）−α−メチル−１，３−ジ
チアン−２−エタノールにＰｂＯ2、ＢＦ3存在下にメ
タノールを反応させて、（Ｓ）−４，４−ジメトキシ−
２−ブタノールを得る方法（TetrahedronLett.,24,287
(1983)）、（Ｒ）−３−（エトキシエトキシ）ブタナー
ルにピリジニウムトシレートの存在下でエチレングリコ
ールを反応させて、（Ｒ）−α−メチル−１，３−ジオ
キソラン−２−エタノールを得る方法（TetrahedronLe
tt.,28,6587(1987) ）や、ラセミの酢酸２−（１，３−
ジオキソラン−２−イル）−１−メチルエチルエステル
または酪酸２−（１，３−ジオキソラン−２−イル）−
１−メチルエチルエステルをリパーゼ存在下で、選択的
に加水分解させて、（Ｓ）−α−メチル−１，３−ジオ
キサン−２−エタノールまたは（Ｒ）−α−メチル−
１，３−ジオキサン−２−エタノールを得る方法（Tetr
ahedron,45,869(1989)やJ.Org.Chem.,56,2656(1991))等
が知られている。2. Description of the Related Art The optically active form of 4,4-dialkoxy-2-butanol represented by the formula (1) is an important synthetic intermediate for various pharmaceuticals including antibiotics. Conventionally, 4,4-dialkoxy- represented by the formula (1) or the formula (2)
As a method for producing an optically active substance of 2-butanol,
4,4-Dimethoxy-2-butanone is selectively reduced by alcohol dehydrogenase to give (S) -4,4-
Method for obtaining dimethoxy-2-butanol (J. Am. Chem. So
c., 107, 4028 (1985)), reacting (S) -α-methyl-1,3-dithiane-2-ethanol with methanol in the presence of PbO2 and BF3 to give (S) -4,4 -Dimethoxy-
Method for obtaining 2-butanol (Tetrahedron Lett., 24, 287)
(1983)), (R) -3- (ethoxyethoxy) butanal is reacted with ethylene glycol in the presence of pyridinium tosylate to obtain (R) -α-methyl-1,3-dioxolan-2-ethanol. Method (TetrahedronLe
tt., 28, 6587 (1987)) and racemic acetic acid 2- (1,3-
Dioxolan-2-yl) -1-methylethyl ester or 2- (1,3-dioxolan-2-yl) butyrate
1-methylethyl ester is selectively hydrolyzed in the presence of lipase to give (S) -α-methyl-1,3-dioxane-2-ethanol or (R) -α-methyl-
Method for obtaining 1,3-dioxane-2-ethanol (Tetr
ahedron, 45,869 (1989) and J. Org. Chem., 56, 2656 (1991)) are known.
【０００６】しかし、アルコールデヒドロゲナーゼによ
り選択的に還元する方法は、使用するアルコールデヒド
ロゲナーゼなどの酵素が高価であること、（Ｓ）−α−
メチル−１，３−ジチアン−２−エタノールにＰｂ
Ｏ2、ＢＦ3存在下にメタノールを反応させる方法は、
有害な鉛化合物を使用すること、（Ｒ）−３−（エトキ
シエトキシ）ブタナールをアセタール化する方法は、
（Ｒ）−３−（エトキシエトキシ）ブタナールの合成が
多工程であること、リパーゼ存在下で選択的に加水分解
させる方法は、選択性が低いことなどの欠点がある。[0006] However, the method of selective reduction using alcohol dehydrogenase requires that the enzyme such as alcohol dehydrogenase to be used is expensive, and that (S) -α-
Pb in methyl-1,3-dithiane-2-ethanol
The method of reacting methanol in the presence of O2 and BF3 is as follows:
The use of harmful lead compounds, the method of acetalizing (R) -3- (ethoxyethoxy) butanal,
The method of synthesizing (R) -3- (ethoxyethoxy) butanal is multi-step, and the method of selectively hydrolyzing in the presence of lipase has disadvantages such as low selectivity.
【０００７】また、ラセミの４，４−ジメトキシ−２−
ブタノールにリパーゼ存在下で石油エーテル中、ペンタ
ン酸ビニルを反応させて、カルボン酸エステルである
（Ｒ）−２−ペンタノイルオキシ−４，４−ジメトキシ
ブタンを得る際には、式（１）で示される化合物に含ま
れる（Ｓ）−４，４−ジメトキシ−２−ブタノールが副
生していると考えられる（J.Am.Chem.Soc.,110,7200(19
88））が、使用するリパーゼが高価であること、ペンタ
ン酸ビニル等のエステル化剤が必要であること、選択性
が低いことなどの欠点がある。Also, racemic 4,4-dimethoxy-2-
When butanol is reacted with vinyl pentanoate in petroleum ether in the presence of lipase to obtain (R) -2-pentanoyloxy-4,4-dimethoxybutane as a carboxylic acid ester, the formula (1) is used. It is considered that (S) -4,4-dimethoxy-2-butanol contained in the compound shown is by-produced (J. Am. Chem. Soc., 110, 7200 (19
88)) have drawbacks such as that the lipase used is expensive, that an esterifying agent such as vinyl pentanoate is required, and that the selectivity is low.
【０００８】[0008]
【発明が解決しようとする課題】これらの事情により、
経済的に優れ、かつ簡便な手段により光学純度の高い式
（１）又は式（２）で示される光学活性４，４−ジアル
コキシ−２−ブタノールを得る方法の確立が望まれてい
た。SUMMARY OF THE INVENTION Under these circumstances,
It has been desired to establish a method for obtaining optically active 4,4-dialkoxy-2-butanol represented by formula (1) or (2) having high optical purity by economical and simple means.
【０００９】本願発明は、経済性に優れ、かつ簡便な手
段により光学純度の高い式（１）又は式（２）で示され
る光学活性４，４−ジアルコキシ−２−ブタノールを得
る方法に関するものである。The present invention relates to a method for obtaining an optically active 4,4-dialkoxy-2-butanol represented by the formula (1) or (2) having high optical purity by economical and simple means. It is.
【００１０】[0010]
【課題を解決するための手段】本発明者らは経済的に優
れ、かつ簡便な方法で、光学純度の高い式（１）又は式
（２）で示される光学活性４，４−ジアルコキシ−２−
ブタノールを得る方法として、式（１）又は式（２）で
示される４，４−ジアルコキシ−２−ブタノールのエナ
ンチオマー混合物に微生物を作用させる方法に着目し
た。Means for Solving the Problems The present inventors are economically superior and use a simple method to obtain an optically active 4,4-dialkoxy-compound represented by the formula (1) or (2) having a high optical purity. 2-
As a method for obtaining butanol, attention has been paid to a method of causing a microorganism to act on an enantiomeric mixture of 4,4-dialkoxy-2-butanol represented by the formula (1) or (2).
【００１１】この目的に適した微生物を検索した結果、
キャンディダ（Candida)属、シルシネラ（Circinella）
属、ゲオトリカム（Geotrichum）属、ゴナトボツリウム
（Gonatobotryum)属、ゴングロネラ（Gongronella)属、
ハンセヌラ（Hansenula)属、ロデロマイセス（Lodderom
yces）属、ロドコッカス（Rhodococcus)属、シゾブラス
トスポリオン（Schizoblastosporion)属、ステファノア
スカス（Stephanoascus)属、シリンゴスポラ（Syringos
pora）属のいずれかの属に属する微生物群から選ばれた
微生物が、式（１）又は式（２）で示される４，４−ジ
アルコキシ−２−ブタノールのエナンチオマー混合物に
作用して対応する（Ｒ）体を残存させること、およびア
グロバクテリウム（Agrobacterium)属、バチルス（Baci
llus）属、クルイベロマイセス（Kluyveromyces)属、ミ
クロコッカス（Micrococcus)属、パラコッカス（Paraco
ccus）属のいずれかの属に属する微生物群から選ばれた
微生物が、式（１）又は式（２）で示される４，４−ジ
アルコキシ−２−ブタノールのエナンチオマー混合物に
作用して対応する（Ｓ）体を残存させることを見出し、
本発明を完成したものである。[0011] As a result of searching for microorganisms suitable for this purpose,
Candida, Circinella
Genus, Geotrichum, Gonatobotryum, Gongronella,
Hansenula, Roderomyces
yces), Rhodococcus, Schizoblastosporion, Stephanoascus, Syringospora
A microorganism selected from a group of microorganisms belonging to any of the genera of the genus pora) acts on the corresponding enantiomer mixture of 4,4-dialkoxy-2-butanol represented by the formula (1) or (2) to correspond thereto. (R) leaving the body, Agrobacterium genus, Bacillus (Baci
llus), Kluyveromyces, Micrococcus, Paracoccus
ccus) A microorganism selected from the group of microorganisms belonging to any genus acts on the corresponding enantiomer mixture of 4,4-dialkoxy-2-butanol represented by the formula (1) or (2). (S) found that the body remains,
The present invention has been completed.
【００１２】本発明に使用する微生物としては、キャン
ディダ（Candida)属、シルシネラ（Circinella）属、ゲ
オトリカム（Geotrichum）属、ゴナトボツリウム（Gona
tobotryum)属、ゴングロネラ（Gongronella)属、ハンセ
ヌラ（Hansenula)属、ロデロマイセス（Lodderomyces）
属、ロドコッカス（Rhodococcus)属、シゾブラストスポ
リオン（Schizoblastosporion)属、ステファノアスカス
（Stephanoascus)属、またはシリンゴスポラ（Syringos
pora）属のいずれかの属に属する微生物で、式（１）又
は式（２）で示される４，４−ジアルコキシ−２−ブタ
ノールのエナンチオマー混合物に作用し、対応する
（Ｒ）体を残存させうる能力を有する微生物、あるいは
アグロバクテリウム（Agrobacterium)属、バチルス（Ba
cillus) 属、クルイベロマイセス（Kluyveromyces)属、
ミクロコッカス（Micrococcus)属、パラコッカス（Para
coccus）属のいずれかの属に属する微生物で、式（１）
で示される４，４−ジアルコキシ−２−ブタノールのエ
ナンチオマー混合物に作用し、対応する（Ｓ）体を残存
させうる微生物であればいずれも使用可能である。The microorganisms used in the present invention include the genus Candida, the genus Circinella, the genus Geotrichum, and the gonatobotulium.
tobotryum), Gongronella, Hansenula, Roderomyces
Genus, Rhodococcus, Schizoblastosporion, Stephanoascus, or Syringospora
a microorganism belonging to any of the genera pora), which acts on an enantiomeric mixture of 4,4-dialkoxy-2-butanol represented by the formula (1) or (2), and the corresponding (R) form remains Microorganisms that have the ability to cause genus Agrobacterium or Bacillus (Ba
cillus), Kluyveromyces,
Micrococcus, Paracoccus (Para)
microorganism belonging to any of the genera of the genus coccus
Any microorganism can be used as long as it acts on an enantiomeric mixture of 4,4-dialkoxy-2-butanol represented by the formula and can leave the corresponding (S) form.
【００１３】具体的には、式（１）又は式（２）で示さ
れる４，４−ジアルコキシ−２−ブタノールのエナンチ
オマー混合物に作用し、対応する（Ｒ）体を残存させう
る能力を有する微生物としては、キャンディダ・キャリ
オシリグニコラ（Candida cariosilignicola)DSM2148、
キャンディダ・パラプシロシス（Candida parapsilosi
s)IFO1396、シルシネラ・ムコロイデス（Circinella mu
coroides)IFO4453 、ゲオトリカム・カンディダム（Geo
trichum candidum)IFO5368 、ゲオトリカム・カンディ
ダム（Geotrichum candidum)1964B 、ゲオトリカム・フ
ァーメンタンス（Geotrichum fermentans)JCM2467 、ゲ
オトリカム・フラグランス（Geotrichum fragrans)JCM1
749 、ゲオトリカム・クレバニー（Geotrichum klebahn
ii)JCM2171、ゲオトリカム・エスピー（Geotrichum s
p.)1870 、ゴナトボツリウム・アピキュラータム（Gona
tobotryum apiculatum)IFO9098、ゴングロネラ・ブツレ
リ（Gongronella butleri)IFO8080 、ハンセヌラ・ホル
ステイ（Hansenula holstii)IFO0980 、ロデロマイセス
・エロンジスポラス(Lodderomyces elongisporus)IFO16
76、ロドコッカス・エリスロポリス(Rhodococcus eryth
ropolis)DSM43200、シゾブラストスポリオン・コバヤシ
（Schizoblastosporion kobayasii)IFO1644 、ステファ
ノアスカス・シフェリィ（Stephanoascus ciferrii)IFO
1854、シリンゴスポラ・クラウセニー（Syringospora c
laussenii)IFO0759 等を挙げることができる。Specifically, it has an ability to act on an enantiomeric mixture of 4,4-dialkoxy-2-butanol represented by the formula (1) or (2) and to leave the corresponding (R) form. As microorganisms, Candida cariosilignicola (Candida cariosilignicola) DSM2148,
Candida parapsilosi
s) IFO1396, Circinella mu
coroides) IFO4453, Geotricum Candi Dam (Geo
trichum candidum) IFO5368, Geotrichum candidum 1964B, Geotrichum fermentans JCM2467, Geotrichum fragrans JCM1
749, Geotrichum klebahn
ii) JCM2171, Geotrichum sp.
p.) 1870, Gonatobotulium Apicularatum (Gona
tobotryum apiculatum) IFO9098, Gongronella butleri IFO8080, Hansenula holstii IFO0980, Loderomyces elongisporus IFO16
76, Rhodococcus erythropolis
ropolis) DSM43200, Schizoblastosporion kobayasii IFO1644, Stephanoascus ciferrii IFO
1854, Syringospora c
laussenii) IFO0759.
【００１４】また、式（１）又は式（２）で示される
４，４−ジアルコキシ−２−ブタノールのエナンチオマ
ー混合物に作用し、対応する（Ｓ）体を残存させうる能
力を有する微生物としては、アグロバクテリウム・ラジ
オバクター（Agrobacterium radiobacter)IFO13259、バ
チルス・ブレビス（Bacillus brevis)IFO3331、バチル
ス・セレウス（Bacillus cereus)AHU1355 、クルイベロ
マイセス・フラジリス（Kluyveromyces fragilis)IFO02
88、ミクロコッカス・ロセウス（Micrococcus roseus)I
FO3764、パラコッカス・デニトリフィキャンス（Paraco
ccus denitrificans)IFO12442 等を挙げることができ
る。Microorganisms which act on enantiomeric mixtures of 4,4-dialkoxy-2-butanols of the formula (1) or (2) and which have the ability to leave the corresponding (S) form include , Agrobacterium radiobacter IFO13259, Bacillus brevis IFO3331, Bacillus cereus AHU1355, Kluyveromyces fragilis IFO02
88 、 Micrococcus roseus I
FO3764, Paracoccus denitrificans (Paraco
ccus denitrificans) IFO12442.
【００１５】これらの微生物は、野生株、変異株、また
は細胞融合もしくは遺伝子操作法などの遺伝的手法によ
り誘導される株など、いずれの株でも好適に用いること
ができる。Any of these microorganisms can be suitably used, such as a wild-type strain, a mutant strain, or a strain derived by a genetic technique such as cell fusion or genetic engineering.
【００１６】なお、ＩＦＯ番号の付された微生物は、
（財）発酵研究所（ＩＦＯ）発行のList of Culture 、
第９版、第１巻(1992)に記載されており、該ＩＦＯから
入手することができる。ＡＨＵ番号の付された微生物
は、日本微生物株保存連盟（ＪＦＣＣ）発行のCatalogu
e of Cultures 、第４版(1987)に記載されており、北海
道大学農学部から入手することができる。ＪＣＭ番号の
付されている微生物は、理化学研究所微生物系保存施設
発行の微生物株カタログ第５版(1992)に記載されてお
り、該施設から入手することができる。ＤＳＭ番号の付
されている微生物はDeutsche Sammlung von Mikroorgan
isumen(DSM) 発行のCatalogueof strains(1989)に記載
されており、該ＤＳＭから入手することができる。The microorganisms with IFO numbers are:
List of Culture, published by the Institute of Fermentation (IFO)
Ninth Edition, Volume 1 (1992), available from the IFO. Microorganisms with AHU numbers are Catalogu issued by the Japan Federation of Microbial Strains (JFCC).
e of Cultures, 4th edition (1987), and can be obtained from the Faculty of Agriculture, Hokkaido University. The microorganisms with JCM numbers are described in the microorganism strain catalog, 5th edition (1992) issued by RIKEN Microorganism Preservation Facility, and can be obtained from the facility. The microorganisms with DSM numbers areDeutsche Sammlung von Mikroorgan
It is described inCatalog of strains (1989) issued by isumen (DSM) and can be obtained from the DSM.
【００１７】また、ゲオトリカム・カンディダム（Geot
richum candidum)1964B 、ゲオトリカム・エスピー（Ge
otrichum sp.)1870 は茨城県の土壌より分離された菌株
であり、それぞれＦＥＲＭ Ｐ−１４０２９、ＦＥＲＭ
Ｐ−１４０３０として工業技術院生命工学工業技術研
究所に寄託されている。以下これらの菌学的性質を示
す。Also, Geotricum Candidum (Geot
richum candidum) 1964B, Geotricum SP (Ge
otrichum sp.) 1870 is a strain isolated from the soil of Ibaraki Prefecture, FERM P-14029 and FERM respectively.
Agency of Industrial Science and Technology have been deposited with the life ofIndustrial Science andTechnology Research Institute <br/> as P-14030. Hereinafter, these mycological properties are shown.
【００１８】ゲオトリカム・カンディダム（Geotrichum
candidum)1964B 培地における生育状態 麦芽エキス寒天培地（麦芽エキス２％、ペプトン０．１
％、ブドウ糖２％、寒天２％、ｐＨ無調整）上でコロニ
ーは無色、気中菌糸はない。２５℃、１週間の培養でコ
ロニー直径は７０ｍｍに達する。出芽型分生子はなく、
菌糸体が多数存在する。菌糸は直径７μｍに達し、両軸
に分岐している。また菌糸は円筒状の分節胞子となる。[0018] Geotrichum Candi Dam
growth state in 1964B medium Malt extract agar medium (malt extract 2%, peptone 0.1
%, Glucose 2%, agar 2%, no pH adjustment), the colonies are colorless and have no aerial hyphae. After one week of culture at 25 ° C., the colony diameter reaches 70 mm. There are no budding conidia,
There are many mycelia. The hypha reaches a diameter of 7 μm and branches off on both axes. Hyphae become cylindrical segmented spores.
【００１９】生理生化学的性質Physiological and biochemical properties
【表１】 １）炭素源の資化性 嫌気条件；グルコース − 好気条件 グルコース ＋ α−メチルグリコシド − ガラクトース ＋ サリシン − ソルボース ＋ セロビオース − ラムノース − マルトース − ズルシット − ラクトース − イノシトール − メリビオース − マンニトール − シュークロース − ソルビトール ＋ トレハロース − グリセロール ＋ イヌリン − エリスリトール − メレジトース − Ｄ−アラビノース − ラフィノース − Ｌ−アラビノース − 澱粉 − リボース − キシリトール − Ｄ−キシロース ＋ グルコン酸塩 − Ｌ−キシロース − ２−ケトグルコン酸塩 − アドニトール − ５−ケトグルコン酸塩 − グルコノラクトン − クエン酸塩 − ２）窒素源の利用性 硝酸塩 − エチルアミン ＋ ３）生育温度 ３０℃ ＋ ３７℃ − 以上の性質をCamichael,J.W の報告｛Myclogia,49,820
(1957) ｝に基づいて分類するとゲオトリカム・カンデ
ィダム（Geotrichum candidum)と同定された。Table 1 1) Utilization of carbon source Anaerobic condition; glucose-aerobic condition glucose + α-methylglycoside-galactose + salicin-sorbose + cellobiose-rhamnose-maltose-dulcit-lactose-inositol-melibiose-mannitol-shoe Claus-sorbitol + trehalose-glycerol + inulin-erythritol-merezitose-D-arabinose-raffinose-L-arabinose-starch-ribose-xylitol-D-xylose + gluconate-L-xylose-2-ketogluconate-adonitole 5-ketogluconate-gluconolactone-citrate-2) availability of nitrogen source nitrate-ethylamine + 3) growth temperature 30 ° C + 37 ° C-less The above properties are reported by Camichael, JW ｛Myclogia, 49,820
(1957) When classified based on｝, it was identified as Geotrichum candidum.
【００２０】ゲオトリカム・エスピー（Geotrichum s
p.)1870 培地における生育状態 麦芽エキス寒天培地（麦芽エキス２％、ペプトン０．１
％、ブドウ糖２％、寒天２％、ｐＨ無調整）上でコロニ
ーは無色、中心部は粉状で、周辺部は埋没している。気
中菌糸はない。２５℃、１週間の培養でコロニー直径は
６０ｍｍに達する。出芽型分生子はなく、菌糸体が多数
存在する。菌糸は直径９μｍに達し、同じような角度で
分岐している。また菌糸は円筒状の分節胞子となる。[0020] Geotrichum sp.
p.) Growth state in 1870 medium Malt extract agar medium (malt extract 2%, peptone 0.1
%, Glucose 2%, agar 2%, pH not adjusted), the colony was colorless, the center was powdery, and the periphery was buried. There are no aerial hyphae. After one week of culture at 25 ° C., the colony diameter reaches 60 mm. There are no budding conidia and many mycelia. The mycelium reaches 9 μm in diameter and branches at similar angles. Hyphae become cylindrical segmented spores.
【００２１】生理生化学的性質Physiological and biochemical properties
【表２】 １）炭素源の資化性 嫌気条件；グルコース − 好気条件 グルコース ＋ α−メチルグリコシド − ガラクトース ＋ サリシン − ソルボース ＋ セロビオース − ラムノース − マルトース − ズルシット − ラクトース − イノシトール − メリビオース − マンニトール ＋ シュークロース − ソルビトール ＋ トレハロース − グリセロール ＋ イヌリン − エリスリトール − メレジトース − Ｄ−アラビノース − ラフィノース − Ｌ−アラビノース − 澱粉 − リボース − キシリトール − Ｄ−キシロース ＋ グルコン酸塩 − Ｌ−キシロース − ２−ケトグルコン酸塩 − アドニトール − ５−ケトグルコン酸塩 − クエン酸塩 − ２）窒素源の利用性 硝酸塩 − エチルアミン − ３）生育温度 ３０℃ ＋ ４０℃ − 以上の性質をCamichael,J.W の報告（Myclogia,49,820
(1957) ）に基づいて分類すると、ゲオトリカム・エス
ピー（Geotrichum sp.) と同定された。1) Assimilation of carbon source Anaerobic condition; Glucose-aerobic condition Glucose + α-methylglycoside-galactose + salicin-sorbose + cellobiose-rhamnose-maltose-dursit-lactose-inositol-melibiose-mannitol + shoes Claus-sorbitol + trehalose-glycerol + inulin-erythritol-merezitose-D-arabinose-raffinose-L-arabinose-starch-ribose-xylitol-D-xylose + gluconate-L-xylose-2-ketogluconate-adonitole 5-ketogluconate-citrate-2) availability of nitrogen source nitrate-ethylamine-3) growth temperature 30 ° C + 40 ° C Report (Myclogia, 49,820
(1957)), it was identified as Geotrichum sp.
【００２２】本発明に用いる微生物を培養するための培
地は、その微生物が増殖し得るものであれば特に制限は
ない。例えば、炭素源としては、上記微生物が利用可能
であればいずれも使用でき、具体的には、グルコース、
フルクトース、シュクロース、デキストリンなどの糖
類、ソルビトール、エタノール、グリセロールなどのア
ルコール類、フマール酸、クエン酸、酢酸、プロピオン
酸などの有機酸類およびその塩類、パラフィンなどの炭
化水素類など、あるいは、これらの混合物を使用するこ
とができる。窒素源としては例えば、塩化アンモニウ
ム、硫酸アンモニウム、リン酸アンモニウムなどの無機
酸のアンモニウム塩、フマル酸アンモニウム、クエン酸
アンモニウムなどの有機酸のアンモニウム塩、肉エキ
ス、酵母エキス、コーンスティープリカー、カゼイン加
水分解物、尿素などの無機有機含窒素化合物、あるいは
これらの混合物を使用することができる。他に無機塩、
微量金属塩、ビタミン類など、通常の培養に用いられる
栄養源を適宜、混合して用いることができる。また必要
に応じて微生物の増殖を促進する因子、本発明の目的化
合物の生成能力を高める因子、あるいは培地のｐＨ保持
に有効な物質も添加できる。The medium for culturing the microorganism used in the present invention is not particularly limited as long as the microorganism can grow. For example, as the carbon source, any of the above microorganisms can be used, and specifically, glucose,
Fructose, sucrose, sugars such as dextrin, sorbitol, ethanol, alcohols such as glycerol, fumaric acid, citric acid, acetic acid, organic acids such as propionic acid and salts thereof, and hydrocarbons such as paraffin, or these Mixtures can be used. Examples of the nitrogen source include ammonium salts of inorganic acids such as ammonium chloride, ammonium sulfate and ammonium phosphate, ammonium salts of organic acids such as ammonium fumarate and ammonium citrate, meat extract, yeast extract, corn steep liquor, and casein hydrolysis. , Urea and other inorganic or organic nitrogen-containing compounds, or mixtures thereof. Other inorganic salts,
Nutrient sources used in ordinary culture, such as trace metal salts and vitamins, can be used as appropriate. If necessary, a factor that promotes the growth of the microorganism, a factor that enhances the ability to produce the target compound of the present invention, or a substance that is effective in maintaining the pH of the medium can be added.
【００２３】培養方法としては、培地ｐＨは３．０〜
９．５、好ましくは４〜８、培養温度は２０〜４５℃、
好ましくは２５〜３７℃で、嫌気的あるいは好気的に、
その微生物の生育に適した条件下５〜１２０時間、好ま
しくは１２〜７２時間程度培養する。As for the culturing method, the medium pH is 3.0 to 3.0.
9.5, preferably 4-8, the culture temperature is 20-45 ° C,
Preferably at 25-37 ° C, anaerobically or aerobically,
The cells are cultured under conditions suitable for the growth of the microorganism for 5 to 120 hours, preferably about 12 to 72 hours.
【００２４】式（１）又は式（２）で示される４，４−
ジアルコキシ−２−ブタノールのエナンチオマー混合物
からその光学活性体を得る方法としては、培養液をその
まま用い該培養液に式（１）又は式（２）で示される
４，４−ジアルコキシ−２−ブタノールのエナンチオマ
ー混合物を添加する方法、遠心分離などにより菌体を分
離し、これをそのままあるいは洗浄した後、緩衝液、水
などに再懸濁したものに式（１）又は式（２）で示され
る４，４−ジアルコキシ−２−ブタノールのエナンチオ
マー混合物を添加し反応させる方法などがある。この反
応の際、グルコース、シュクロースなどの炭素源をエネ
ルギー源として添加したほうが良い場合もある。また、
菌体は生菌体のままでも良いし、菌体破砕物、アセトン
処理、凍結乾燥などの処理を施したものでも良い。The 4,4-formula represented by the formula (1) or (2)
As a method for obtaining an optically active substance thereof from a mixture of an enantiomer of dialkoxy-2-butanol, a culture solution is used as it is, and the 4,4-dialkoxy-2-compound represented by the formula (1) or (2) is added to the culture solution. The method of adding an enantiomeric mixture of butanol, the cells are separated by centrifugation or the like, and the cells are directly or washed and then resuspended in a buffer solution, water, or the like, represented by the formula (1) or (2). And an enantiomeric mixture of 4,4-dialkoxy-2-butanol. In this reaction, it may be better to add a carbon source such as glucose or sucrose as an energy source. Also,
The cells may be live cells, or may be cells that have been crushed, treated with acetone, freeze-dried, or the like.
【００２５】また、これらの菌体を、例えば、ポリアク
リルアミドゲル法、含硫多糖ゲル法（カラギーナンゲル
法など）、アルギン酸ゲル法、寒天ゲル法などの公知の
方法で固定化して用いることもできる。Further, these cells can be immobilized by a known method such as a polyacrylamide gel method, a sulfur-containing polysaccharide gel method (such as a carrageenan gel method), an alginic acid gel method, and an agar gel method. .
【００２６】式（１）又は式（２）で示される４，４−
ジアルコキシ−２−ブタノールのエナンチオマー混合物
はそのまま、あるいは水に溶解し、または反応に影響を
与えないような有機溶媒に溶解したり、界面活性剤など
に分散させたりして、反応開始から一括にあるいは分割
して添加しても良い。The 4,4-formula represented by the formula (1) or (2)
The enantiomer mixture of dialkoxy-2-butanol may be used as it is, or dissolved in water, or dissolved in an organic solvent that does not affect the reaction, or dispersed in a surfactant, etc. Alternatively, they may be added in portions.
【００２７】反応はｐＨ２〜１０、好ましくはｐＨ３〜
９の範囲で、温度は１０〜６０℃、好ましくは２０〜４
０℃の範囲で１〜１２０時間程度、攪拌下あるいは静置
下で行う。反応時間を長くすると式（１）又は式（２）
で示される４，４−ジアルコキシ−２−ブタノールの残
存量は減少する場合が多いが、光学純度の高い光学活性
な式（１）又は式（２）で示される４，４−ジアルコキ
シ−２−ブタノールを得ることが可能である。基質の使
用濃度は特に制限されないが、０．１〜２０％程度が好
ましい。The reaction is carried out at pH 2 to 10, preferably at pH 3 to
9, the temperature is 10-60 ° C, preferably 20-4 ° C.
The reaction is carried out at 0 ° C. for about 1 to 120 hours under stirring or standing. When the reaction time is increased, the formula (1) or the formula (2)
In many cases, the residual amount of 4,4-dialkoxy-2-butanol represented by the formula (1) or (2) is reduced, but the 4,4-dialkoxy- represented by the optically active formula (1) or (2) having high optical purity is obtained. It is possible to obtain 2-butanol. The concentration of the substrate used is not particularly limited, but is preferably about 0.1 to 20%.
【００２８】反応によって残存生成した光学活性な式
（１）又は式（２）で示される４，４−ジアルコキシ−
２−ブタノールは、反応液から直接あるいは菌体分離
後、有機溶媒による抽出、蒸留、カラムクロマトなどの
通常の精製方法を用いることにより、容易に単離でき
る。また、精製操作の前に、適当な化合物で処理するこ
とも可能である。The optically active 4,4-dialkoxy represented by the formula (1) or (2) remaining by the reaction
2-Butanol can be easily isolated by using a conventional purification method such as extraction with an organic solvent, distillation, and column chromatography directly or after separating cells from the reaction solution. It is also possible to treat with an appropriate compound before the purification operation.
【００２９】本発明において、微生物を作用させる式
（１）又は式（２）で示される４，４−ジアルコキシ−
２−ブタノールは、（Ｒ）体、（Ｓ）体の任意の割合の
混合物で良い。すなわち、原料としてラセミ体あるいは
（Ｒ）体、（Ｓ）体のいずれかが過剰の混合物が用いら
れる。In the present invention, a 4,4-dialkoxy-formula represented by the formula (1) or (2), which acts on a microorganism,
2-Butanol may be a mixture of the (R) form and the (S) form in any ratio. That is, a mixture in which the racemic form, the (R) form, or the (S) form is excessive is used as a raw material.
【００３０】Ｒ1、Ｒ2は、直鎖又は分岐状のアルキル
基の中から任意に選択できるが、アルキル基の炭素数は
１〜７であることが好ましい。アルキル基の好適な例と
しては、メチル基、エチル基、ｎ−プロピル基、イソプ
ロピル基、ｎ−ブチル基、イソブチル基、ｔ−ブチル
基、ｎ−ペンチル基、イソペンチル基、ｎ−ヘキシル
基、ｎ−ヘプチル基などが挙げられる。Ｒ1、Ｒ2は同
じ基でも異なる基でもよいが、同じ基である方が合成上
は簡便である。R1 and R2 can be arbitrarily selected from linear or branched alkyl groups, and the alkyl group preferably has 1 to 7 carbon atoms. Preferred examples of the alkyl group include methyl, ethyl, n-propyl, isopropyl, n-butyl, isobutyl, t-butyl, n-pentyl, isopentyl, n-hexyl, and n-hexyl. -etc. heptylgroup. R1, R2 maybe either different groups in the same group, but on who is the same group synthesized is simple.
【００３１】Ａは、直鎖又は分岐状のアルキレン基の中
から任意に選択できるが、アルキレン基の炭素数は２〜
５であることが好ましい。アルキレン基の好適な例とし
ては、エチレン、トリメチレン、テトラメチレン、プロ
ピレン、エチルエチレン、１−メチルトリメチレン、２
−メチルトリメチレン、１，３−ジメチルトリメチレ
ン、などが挙げられる。A can be arbitrarily selected from linear or branched alkylene groups, and the alkylene group has 2 to 2 carbon atoms.
It is preferably 5. Preferred examples of the alkylene group include ethylene, trimethylene, tetramethylene, propylene, ethylethylene, 1-methyltrimethylene, 2
-Methyltrimethylene, 1,3-dimethyltrimethylene, and the like.
【００３２】式（１）又は式（２）で示される４，４−
ジアルコキシ−２−ブタノールの具体的な例としては、
４，４−ジメトキシ−２−ブタノール、４，４−ジエト
キシ−２−ブタノール、４，４−ジプロポキシ−２−ブ
タノール、４，４−ジイソプロポキシ−２−ブタノー
ル、４，４−ジブトキシ−２−ブタノール、４，４−ジ
イソブトキシ−２−ブタノール、４，４−ジ−ｔ−ブト
キシ−２−ブタノール、４，４−ジペントキシ−２−ブ
タノール、４，４−ジイソペントキシ−２−ブタノー
ル、４，４−ジヘキシルオキシ−２−ブタノール、４，
４−ジヘプチルオキシ−２−ブタノール、α−メチル−
１，３−ジオキソラン−２−エタノール、α−メチル−
１，３−ジオキサン−２−エタノール、α−メチル−
１，３−ジオキセパン−２−エタノール、α，４−ジメ
チル−１，３−ジオキソラン−２−エタノール、α−メ
チル−４−エチル−１，３−ジオキソラン−２−エタノ
ール、α，４−ジメチル−１，３−ジオキサン−２−エ
タノール、α，５−ジメチル−１，３−ジオキサン−２
−エタノール、α，４，５−トリメチル−１，３−ジオ
キサン−２−エタノールなどが挙げられる。The 4,4-formula represented by the formula (1) or (2)
Specific examples of dialkoxy-2-butanol include:
4,4-dimethoxy-2-butanol, 4,4-diethoxy-2-butanol, 4,4-dipropoxy-2-butanol, 4,4-diisopropylSopu propoxy-2-butanol, 4,4-dibutoxy-2- Butanol, 4,4-diisobutoxy-2-butanol, 4,4-di-tert-butoxy-2-butanol, 4,4-dipentoxy-2-butanol, 4,4-diisopentoxy-2-butanol, 4,4- Dihexyloxy-2-butanol, 4,
4-diheptyloxy-2-butanol, α -methyl-
1,3-dioxolan-2-ethanol, α-methyl-
1,3-dioxane-2-ethanol, α-methyl-
1,3-dioxepane-2-ethanol, α, 4-dimethyl-1,3-dioxolan-2-ethanol, α-methyl-4-ethyl-1,3-dioxolan-2-ethanol, α, 4-dimethyl- 1,3-dioxane-2-ethanol, α, 5-dimethyl-1,3-dioxane-2
-Ethanol, α, 4,5-trimethyl-1,3-dioxane-2-ethanol and the like.
【００３３】式（１）又は式（２）で示される４，４−
ジアルコキシ−２−ブタノールのラセミ体は、既知の方
法により容易に合成できる。例えば、３−ケトブタナー
ルの対応するアセタールを還元することにより（例え
ば、J.Org.Chem.,53,4175(1988))、あるいは酸触媒存在
下でアルドールと対応するアルコールとを反応させるこ
とにより（例えば、Chem.Ber.,52,1800(1919））容易に
合成できる。The 4,4-formula represented by the formula (1) or (2)
The racemic dialkoxy-2-butanol can be easily synthesized by a known method. For example, 3-Ketobuta by reduction of the corresponding acetals ofNa over <br/> Le (e.g., J.Org.Chem., 53,4175 (1988) ), or the corresponding alcohol as aldol in the presence of an acid catalyst (For example, Chem. Ber., 52, 1800 (1919)) .
【００３４】[0034]
【実施例】以下、本発明を具体的に説明するが、本発明
はこれらの実施例のみに限定されるものではない。EXAMPLES The present invention will be described in detail below, but the present invention is not limited to these examples.
【００３５】なお、実施例における反応液の遠心分離上
澄液中の式（１）又は式（２）で示される４，４−ジア
ルコキシ−２−ブタノールの定量は、ガスクロマトグラ
フィー（カラム：ＦＡＬ−Ｍ（２ｍ）、インジェクショ
ン温度：２００℃、カラム温度：１４０℃）により測定
した。The amount of 4,4-dialkoxy-2-butanol represented by the formula (1) or (2) in the supernatant of the reaction solution centrifuged in the Examples was determined by gas chromatography (column: FAL-M (2 m), injection temperature: 200 ° C, column temperature: 140 ° C).
【００３６】なお、残存率（％）とは（残存濃度）／
（仕込み濃度）×１００を意味する。また、異性体過剰
率（％ee）はベンゾイル化後、光学分割カラムを用いた
高速液体クロマトグラフィー（カラム：ダイセル化学工
業製キラルセルＯＤ−Ｈ、溶媒：ｎ−ヘキサン：２−プ
ロパノール＝２５０：１、波長：２５４ｎｍ、流速：
１．０ｍｌ／ｍｉｎ、カラム温度：室温）により測定し
た。The residual ratio (%) is (residual concentration) /
(Prepared concentration) × 100. After the benzoylation, the isomer excess (% ee) was determined by high performance liquid chromatography using an optical resolution column (column: Chiralcel OD-H manufactured by Daicel Chemical Industries, solvent: n-hexane: 2-propanol = 250: 1). , Wavelength: 254 nm, flow rate:
1.0 ml / min, column temperature: room temperature).
【００３７】（実施例１） （菌体調製用培地） グルコース ２ ％ 酵母エキス ０．３％ ヘプトン ０．５％ 麦芽エキス ０．３％ ｐＨ ６．０ 上記の菌体調製用培地５ｍｌを２１ｍｍφ試験管に入
れ、滅菌後、表３及び４に示した微生物をそれぞれ植菌
し、３０℃で４８時間振盪培養を行った。続いて遠心分
離で菌体を分離し、生菌体を得た。(Example 1) (Medium for preparing bacterial cells) Glucose 2% Yeast extract 0.3% Heptone 0.5% Malt extract 0.3% pH 6.0 5 ml of the above medium for preparing bacterial cells was subjected to a 21 mmφ test. After placing in a tube and sterilizing, the microorganisms shown in Tables 3 and 4 were inoculated, respectively, and cultured at 30 ° C. for 48 hours with shaking. Subsequently, the cells were separated by centrifugation to obtain live cells.
【００３８】次に、２１ｍｍφ試験管中の４，４−ジメ
トキシ−２−ブタノールのラセミ体０．５％およびＣａ
ＣＯ3０．１％を含む水溶液２ｍｌに、遠心分離で得た
菌体を添加し、３０℃で４８時間往復振盪反応させた。Next, 0.5% of racemic 4,4-dimethoxy-2-butanol and Ca in a 21 mmφ test tube were prepared.
The cells obtained by centrifugation were added to 2 ml of an aqueous solution containing 0.1% of CO3, and a reciprocal shaking reaction was performed at 30 ° C. for 48 hours.
【００３９】反応終了後、遠心分離により除菌し、上澄
液を得た。上澄液をガスクロマトグラフィー分析して
４，４−ジメトキシ−２−ブタノールの残存濃度を測定
し、残存率を求めた。After completion of the reaction, the bacteria were removed by centrifugation to obtain a supernatant. The supernatant was analyzed by gas chromatography to measure the residual concentration of 4,4-dimethoxy-2-butanol, and the residual ratio was determined.
【００４０】（カラム：ＦＡＬ−Ｍ（２ｍ）、インジェ
クション温度：２００℃、カラム温度：１４０℃、４，
４−ジメトキシ−２−ブタノールの保持時間：１１．１
分） また、この上澄液に塩化ナトリウムを添加後、酢酸エチ
ル２ｍｌを用いて抽出し、酢酸エチル層を無水硫酸ナト
リウムにより乾燥し、減圧下溶媒を留去しシロップを得
た。(Column: FAL-M (2 m), injection temperature: 200 ° C., column temperature: 140 ° C., 4,
Retention time of 4-dimethoxy-2-butanol: 11.1
After addition of sodium chloride to the supernatant, extraction was performed using 2 ml of ethyl acetate. The ethyl acetate layer was dried over anhydrous sodium sulfate, and the solvent was distilled off under reduced pressure to obtain a syrup.
【００４１】このシロップをヘキサン２ｍｌに溶解さ
せ、ピリジン存在下、塩化ベンゾイルで１昼夜ベンゾイ
ル化した。反応液に水を添加し、重曹水、クエン酸水で
洗浄後、ヘキサン層を高速液体クロマトグラフィーにて
異性体過剰率（％ee）を分析した。（カラム：ダイセル
化学工業製キラルセルＯＤ−Ｈ、溶媒：ｎ−ヘキサン：
２−プロパノール＝２５０：１、波長：２５４ｎｍ、流
速：１．０ｍｌ／ｍｉｎ、カラム温度：室温、ベンゾイ
ル体の保持時間：（Ｓ）体 ９．５分、（Ｒ）体１０．
６分））なお、絶対立体配置の決定は（Ｒ）−ＭＴＰＡ
エステル化し、１Ｈ−ＮＭＲ（５００ＭＨｚ）のケミカ
ルシフト値の文献（J.Am.Chem.Soc.,107,4028(1985))と
の比較により行った。This syrup was dissolved in 2 ml of hexane and benzoylated with benzoyl chloride in the presence of pyridine for one day. Water was added to the reaction solution, and after washing with aqueous sodium bicarbonate and aqueous citric acid, the hexane layer was analyzed for isomer excess (% ee) by high performance liquid chromatography. (Column: Chiral Cell OD-H manufactured by Daicel Chemical Industries, Solvent: n-hexane:
2-propanol = 250: 1, wavelength: 254 nm, flow rate: 1.0 ml / min, column temperature: room temperature, retention time of benzoyl form: (S) form 9.5 minutes, (R) form 10.
6 minutes)) The absolute configuration was determined by (R) -MTPA
Esterification was performed by comparing the chemical shift value of1 H-NMR (500 MHz) with the literature (J. Am. Chem. Soc., 107, 4028 (1985)).
【００４２】得られた結果を表３及び４に示す。The results obtained are shown in Tables 3 and 4.
【００４３】[0043]
【表３】 微生物 絶対 ％ 残存率 配置 ee (%) キャンディダ・キャリオシリグニコラ Ｒ 79 47 （Candida cariosilignicola)DSM2148 キャンディダ・パラプシロシス Ｒ 88 88 （Candida parapsilosis)IFO1396 シルシネラ・ムコロイデス Ｒ 11 47 （Circinella mucoroides)IFO4453 ゲオトリカム・カンディダム Ｒ 93 44 （Geotrichum candidum)IFO5368 ゲオトリカム・カンディダム Ｒ 76 41 （Geotrichum candidum)1964B ゲオトリカム・ファーメンタンス Ｒ 78 44 （Geotrichum fermentans)JCM2467 ゲオトリカム・フラグランス Ｒ 99 42 （Geotrichum fragrans)JCM1749 ゲオトリカム・クレバニー Ｒ 81 43 （Geotrichum klebahnii)JCM2171 ゲオトリカム・エスピー Ｒ 90 44 （Geotrichum sp.)1870 ゴナトボツリウム・アピキュラータム Ｒ 68 53 （Gonatobotryum apiculatum)IFO9098 ゴングロネラ・ブツレリ Ｒ 16 28 （Gongronella butleri)IFO8080 ハンセヌラ・ホルステイ Ｒ 43 63 （Hansenula holstii)IFO0980[Table 3] Microbial Absolute% Residual rate Arrangement ee (%) Candida cariosilignicola R7947 (Candida cariosilignicola) DSM2148 Candida parapsilosis R8888 (Candida parapsilosis) IFO1396 Circinella mucoloides R1147 (Circinella mucoroides) ) IFO4453 Geotrichum candidum R 9344 (Geotrichum candidum) IFO5368 Geotrichum candidum R 7641 (Geotrichum candidum) 1964B Geotrichum fermentans R7844 (Geotrichum fermentans) JCM2467 Geotrichum fragrance R 9942s・ Clebany R8143 (Geotrichum klebahnii) JCM2171 Geotrichum sp. I R43 63 (Hansenula holstii) IFO0980
【表４】 微生物 絶対 ％ 残存率 配置 ee (%) ロデロマイセス・エロンジスポラス Ｒ 85 55 (Lodderomyces elongisporus)IFO1676 ロドコッカス・エリスロポリス Ｒ 90 43 (Rhodococcus erythropolis)DSM43200 シゾブラストスポリオン・コバヤシ Ｒ 15 89 （Schizoblastosporion kobayasii)IFO1644 ステファノアスカス・シフェリィ Ｒ 10 82 （Stephanoascus ciferrii)IFO1854 シリンゴスポラ・クラウセニー Ｒ 68 78 （Syringospora claussenii)IFO0759 アグロバクテリウム・ラジオバクター Ｓ 13 69 （Agrobacterium radiobacter)IFO13259 バチルス・ブレビス Ｓ 14 79 （Bacillus brevis)IFO3331 バチルス・セレウス Ｓ 19 72 （Bacillus cereus)AHU1355 クルイベロマイセス・フラジリス Ｓ 76 50 （Kluyveromyces fragilis)IFO0288 ミクロコッカス・ロセウス Ｓ 88 45 （Micrococcus roseus)IFO3764 パラコッカス・デニトリフィキャンス Ｓ 74 44 （Paracoccus denitrificans)IFO12442 （実施例２）実施例１と同様に、４，４−ジエトキシ−
２−ブタノールのラセミ体を用いて実施した。Table 4 Microorganisms Absolute% Residual Percentage Arrangement ee (%) Roderomyces elongisporus R8555 (Lodderomyces elongisporus) IFO1676 Rhodococcus erythropolis R9043 (Rhodococcus erythropolis) DSM43200 ) IFO1644 Stephanoascus ciferrii R1082 (Stephanoascus ciferrii) IFO1854 Syringospora claussenii R6878 (Syringospora claussenii) IFO0759 Agrobacterium radiobacter IFO13259 Bacillus visbis S14bre IFO3331 Bacillus cereus S1972 (Bacillus cereus) AHU1355 Kluyveromyces fragilis S7650 (Kluyveromyces fragilis) IFO0288 Micrococcus roseus S8845 (Micrococcus roseus) IFO3764 denitrifi cans) IFO12442 (Example 2) As in Example 1, 4,4-diethoxy-
This was performed using a racemic form of 2-butanol.
【００４４】残存濃度は、反応液の遠心分離上澄液を以
下のガスクロマトグラフィー条件で測定して求めた。The residual concentration was determined by measuring the supernatant of the reaction solution by centrifugation under the following gas chromatography conditions.
【００４５】（カラム：ＦＡＬ−Ｍ（２ｍ）、インジェ
クション温度：２００℃、カラム温度：１４０℃、４，
４−ジエトキシ−２−ブタノールの保持時間：１７．５
分） 異性体過剰率（％ee）は、ベンゾイル体を以下の高速液
体クロマトグラフィー条件で測定して求めた。(Column: FAL-M (2 m), injection temperature: 200 ° C., column temperature: 140 ° C., 4,
Retention time for 4-diethoxy-2-butanol: 17.5
Min) The isomer excess (% ee) was determined by measuring the benzoyl form under the following high-performance liquid chromatography conditions.
【００４６】（カラム：ダイセル化学工業製キラルセル
ＯＤ−Ｈ、溶媒：ｎ−ヘキサン：２−プロパノール＝２
５０：１、波長：２５４ｎｍ、流速：１．０ｍｌ／ｍｉ
ｎ、カラム温度：室温、ベンゾイル体の保持時間：
（Ｓ）体 ６．５分、（Ｒ）体 ７．１分） なお、絶対立体配置の決定は、得られた光学活性４，４
−ジエトキシ−２−ブタノールを塩化ベンジルおよびＮ
ａＨでベンジル化した、４，４−ジエトキシ−２−ベン
ジルオキシブタンと、（Ｒ）−３−ヒドロキシ酪酸メチ
ルエステルから誘導した（Ｒ）−４，４−ジエトキシ−
２−ベンジルオキシブタンとの比較により行った。(Column: Chiral Cell OD-H manufactured by Daicel Chemical Industries, Solvent: n-hexane: 2-propanol = 2)
50: 1, wavelength: 254 nm, flow rate: 1.0 ml / mi
n, column temperature: room temperature, retention time of benzoyl form:
(S) form 6.5 minutes, (R) form 7.1 minutes) The absolute configuration was determined based on the obtained optical activity 4,4.
-Diethoxy-2-butanol with benzyl chloride and N
4,4-Diethoxy-2-benzyloxybutane benzylated with aH and (R) -4,4-diethoxy-derived from (R) -3-hydroxybutyric acid methyl ester.
The comparison was performed with 2-benzyloxybutane.
【００４７】ベンジル体は、以下の高速液体クロマトグ
ラフィー条件で測定した。The benzyl form was measured under the following high performance liquid chromatography conditions.
【００４８】（カラム：ダイセル化学工業製キラルセル
ＯＤ−Ｈ、溶媒：ｎ−ヘキサン：２−プロパノール＝２
５０：１、波長：２５４ｎｍ、流速：１．０ｍｌ／ｍｉ
ｎ、カラム温度：室温、ベンジル体の保持時間：（Ｒ）
体 ６．２分、（Ｓ）体 ７．６分）得られた結果を表
５に示す。(Column: Chiral Cell OD-H manufactured by Daicel Chemical Industries, Solvent: n-hexane: 2-propanol = 2)
50: 1, wavelength: 254 nm, flow rate: 1.0 ml / mi
n, column temperature: room temperature, Bendi Le compound with a retention time: (R)
Body 6.2 minutes, (S) body 7.6 minutes) The results obtained are shown in Table 5.
【００４９】[0049]
【表５】 微生物 絶対 ％ 残存率 配置 ee (%) キャンディダ・パラプシロシス Ｒ 70 53 （Candida parapsilosis)IFO1396 ゲオトリカム・カンディダム Ｒ 95 42 （Geotrichum candidum)IFO5368 ゲオトリカム・カンディダム Ｒ 91 46 （Geotrichum candidum)1964B ゲオトリカム・ファーメンタンス Ｒ 81 48 （Geotrichum fermentans)JCM2467 ゲオトリカム・エスピー Ｒ 92 46 （Geotrichum sp.)1870 （実施例３）実施例１と同様に、α−メチル−１，３−
ジオキソラン−２−エタノールのラセミ体を用いて実施
した。Table 5 Microorganisms Absolute% Residual rate Allocation ee (%) Candida parapsilosis R 7053 (Candida parapsilosis) IFO1396 Geotrichum candidum R 9542 (Geotrichum candidum) IFO5368 Geotrichum candidum R 9146 (Geotrichum candidum) 1964B Fermentans R 8148 (Geotrichum fermentans) JCM2467 Geotrichum sp. R 9246 (Geotrichum sp.) 1870 (Example 3) As in Example 1, α-methyl-1,3-
This was performed using a racemic dioxolane-2-ethanol.
【００５０】残存濃度は、反応液の遠心分離上澄液を以
下のガスクロマトグラフィー条件で測定して求めた。The residual concentration was determined by measuring the supernatant of the reaction solution by centrifugation under the following gas chromatography conditions.
【００５１】（カラム：ＦＡＬ−Ｍ（２ｍ）、インジェ
クション温度：２００℃、カラム温度：１４０℃、α−
メチル−１，３−ジオキソラン−２−エタノールの保持
時間：２０．６分）異性体過剰率（％ｅｅ）は、ベンゾ
イル体を以下の高速液体クロマトグラフィー条件で測定
して求めた。(Column: FAL-M (2 m), injection temperature: 200 ° C., column temperature: 140 ° C., α-
Retention time of methyl-1,3-dioxolan-2-ethanol: 20.6 minutes) Theisomer excess (% ee)
The yl form was determined by measurementunder the following high performance liquid chromatography conditions.
【００５２】（カラム：ダイセル化学工業製キラルセル
ＯＤ−Ｈ、溶媒：ｎ−ヘキサン：２−プロパノール＝２
５０：１、波長：２５４ｎｍ、流速：１．０ｍｌ／ｍｉ
ｎ、カラム温度：室温、ベンゾイル体の保持時間：
（Ｓ）体 １６．３分、（Ｒ）体１８．２分） なお、絶対立体配置の決定は、得られた光学活性α−メ
チル−１，３−ジオキソラン−２−エタノールを塩化ベ
ンジルおよびＮａＨでベンジル化した、２−（２−ベン
ジルオキシプロピル）−１，３−ジオキソランと、
（Ｒ）−３−ヒドロキシ酪酸メチルエステルから誘導し
た（Ｒ）−２−（２−ベンジルオキシプロピル）−１，
３−ジオキソランとの比較により行った。(Column: Chiral Cell OD-H manufactured by Daicel Chemical Industries, Solvent: n-hexane: 2-propanol = 2)
50: 1, wavelength: 254 nm, flow rate: 1.0 ml / mi
n, column temperature: room temperature, retention time of benzoyl form:
(S) form 16.3 minutes, (R) form 18.2 minutes) The absolute configuration was determined by converting the obtained optically active α-methyl-1,3-dioxolan-2-ethanol into benzyl chloride and NaH 2- (2-benzyloxypropyl) -1,3-dioxolan, benzylated with
(R) -2- (2-benzyloxypropyl) -1, derived from (R) -3-hydroxybutyric acid methyl ester,
Performed by comparison with 3-dioxolane.
【００５３】ベンジル体は、以下の高速液体クロマトグ
ラフィー条件で測定した。The benzyl form was measured under the following high performance liquid chromatography conditions.
【００５４】（カラム：ダイセル化学工業製キラルセル
ＯＤ−Ｈ、溶媒：ｎ−ヘキサン：２−プロパノール＝２
５０：１、波長：２５４ｎｍ、流速：１．０ｍｌ／ｍｉ
ｎ、カラム温度：室温、ベンジル体の保持時間：（Ｓ）
体 １２．９分、（Ｒ）体 １５．４分）得られた結果
を表６に示す。(Column: Chiral Cell OD-H manufactured by Daicel Chemical Industries, Solvent: n-hexane: 2-propanol = 2)
50: 1, wavelength: 254 nm, flow rate: 1.0 ml / mi
n, column temperature: room temperature, Bendi Le of retention time: (S)
(12.9 minutes for the compound, 15.4 minutes for the (R) compound) The results obtained are shown in Table 6.
【００５５】[0055]
【表６】 微生物 絶対 ％ 残存率 配置 ee (%) キャンディダ・パラプシロシス Ｒ 95 56 （Candida parapsilosis)IFO1396 ゲオトリカム・カンディダム Ｒ 100 56 （Geotrichum candidum)IFO5368 ゲオトリカム・カンディダム Ｒ 100 58 （Geotrichum candidum)1964B ゲオトリカム・ファーメンタンス Ｒ 99 79 （Geotrichum fermentans)JCM2467 ゲオトリカム・エスピー Ｒ 100 81 （Geotrichum sp.)1870[Table 6] Microbial Absolute% Residual rate Allocation ee (%) Candida parapsilosis R9556 (Candida parapsilosis) IFO1396 Geotrichum candidum R10056 (Geotrichum candidum) IFO5368 Geotrichum candidum R10058 (Geotrichum candidum) 1964B Fermentans R 99 79 (Geotrichum fermentans) JCM2467 Geotrichum sp. R 100 81 (Geotrichum sp.) 1870
【００５６】[0056]
【発明の効果】本発明の微生物を用いた光学活性な式
（１）又は式（２）で示される２−ブタノールの製造方
法によれば、簡便に光学純度の高い光学活性な式（１）
又は式（２）で示される４，４−ジアルコキシ−２−ブ
タノールを製造することができる。According to the method for producing the optically active 2-butanol represented by the formula (1) or (2) using the microorganism of the present invention, the optically active formula (1) having a high optical purity can be easily obtained.
Alternatively, 4,4-dialkoxy-2-butanol represented by the formula (2) can be produced.
───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (51)Int.Cl.7 識別記号 ＦＩ (Ｃ１２Ｐ 41/00 Ｃ１２Ｒ 1:365） (Ｃ１２Ｐ 41/00 Ｃ１２Ｒ 1:08） (Ｃ１２Ｐ 41/00 Ｃ１２Ｒ 1:265） (Ｃ１２Ｐ 41/00 Ｃ１２Ｒ 1:085） (Ｃ１２Ｐ 41/00 Ｃ１２Ｒ 1:645） (Ｃ１２Ｐ 41/00 Ｃ１２Ｒ 1:01） (58)調査した分野(Int.Cl.7，ＤＢ名) C12P 41/00 ＢＩＯＳＩＳ（ＤＩＡＬＯＧ) ＣＡ（ＳＴＮ)──────────────────────────────────────────────────続 き Continued on the front page (51) Int.Cl.7 Identification code FI (C12P 41/00 C12R 1: 365) (C12P 41/00 C12R 1:08) (C12P 41/00 C12R 1: 265) (C12P 41/00 C12R 1: 085) (C12P 41/00 C12R 1: 645) (C12P 41/00 C12R 1:01) (58) Fields investigated (Int. Cl.7 , DB name) C12P 41/00 BIOSIS ( DIALOG) CA (STN)
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