【発明の詳細な説明】DETAILED DESCRIPTION OF THE INVENTION
【０００１】[0001]
【発明の属する技術分野】本発明は、クロマトグラフ装
置に係り、特には、分析条件を自動決定するクロマトグ
ラフィ、及び、既知試料の測定結果に基づいて未知試料
の分析条件を自動的に決定に好適なクロマトグラフ装置
に関する。BACKGROUND OF THE INVENTION 1. Field of the Invention The present invention relates to a chromatographic apparatus and, more particularly, to a chromatography for automatically determining analysis conditions and a method for automatically determining analysis conditions for an unknown sample based on a measurement result of a known sample. Related to a simple chromatographic apparatus.
【０００２】[0002]
【従来の技術】一般に、分析装置を使用する際、分析者
が分析条件を決定し、キーボードから数値等を入力する
ことや可変抵抗器により分析条件を設定している。特に
複数の成分を分析する場合、まず各成分を同定するため
に分析条件を設定しなければならない。例えば、クロマ
トグラフィの成分同定における保持時間とその許容幅
は、操作者が準備試料の測定結果から判断し、データ処
理装置を入力している。ピーク追跡を目的とする特開昭
63−290958号も、基準となるクロマトグラム上のピーク
の保持時間は分析者が入力している。2. Description of the Related Art Generally, when using an analyzer, an analyst determines analysis conditions, inputs numerical values or the like from a keyboard, and sets analysis conditions using a variable resistor. In particular, when analyzing a plurality of components, analysis conditions must first be set to identify each component. For example, the operator determines the retention time and the permissible range in the component identification of the chromatography based on the measurement result of the preparation sample, and inputs the data processing device. JP Akira for peak tracking
In 63-290958 as well, the retention time of the peak on the reference chromatogram is entered by the analyst.
【０００３】さらに、特開昭60−239669号では、２つの
クロマトグラム間で主要ピークを基準として、一方から
他方への時間軸の変換を行っている。これは保持時間の
変化したクロマトグラム間でピーク同定方法としては有
効であるが、やはり基準となるクロマトグラム上のピー
クの保持時間は操作者が判断することになる。Further, in Japanese Patent Application Laid-Open No. 60-239669, the time axis is converted from one chromatogram to the other on the basis of a main peak between two chromatograms. This is effective as a peak identification method between chromatograms having changed retention times, but the operator also determines the retention time of the peak on the reference chromatogram.
【０００４】ゲル浸透クロマトグラフィにおける保持時
間から分子量への対応や、マススペクトロメトリーにお
けるＭ／Ｚ軸の設定も、最初に操作者が同定の分析条件
を決定しなければならない。[0004] The correspondence between the retention time and the molecular weight in gel permeation chromatography and the setting of the M / Z axis in mass spectrometry also require the operator to first determine the analysis conditions for identification.
【０００５】[0005]
【発明が解決しようとする課題】上述した特開昭63−29
0958号および特開昭60−239669号などの先行技術では、
未知試料を分析する前に、操作者が必ず一度はタイムウ
インドウ等の分析条件を設定しなければならなかった。SUMMARY OF THE INVENTION The above-mentioned Japanese Patent Application Laid-Open No. 63-29
In the prior art such as 0958 and JP-A-60-239669,
Before analyzing an unknown sample, the operator must always set analysis conditions such as a time window.
【０００６】本発明の目的は、正確なタイムウインドウ
を用いて、正確な分析が可能なクロマトグラフ装置を提
供することにある。さらには、分析装置の操作者が分析
条件を分析装置に対して設定する代りに、分析装置自体
が分析条件を自動決定し得るクロマトグラフ装置を提供
することにある。[0006] It is an object of the present invention to provide a chromatographic apparatus capable of performing an accurate analysis using an accurate time window. It is still another object of the present invention to provide a chromatograph device in which the analyzer itself can automatically determine the analysis conditions instead of setting the analysis conditions for the analyzer by the operator of the analyzer.
【０００７】[0007]
【課題を解決するための手段】本発明では、試料中の複
数の成分に対してタイムウインドウを用いて同定を行う
クロマトグラフ装置において、任意の成分の保持時間に
対する主タイムウインドウを設定する主タイムウインド
ウ設定手段と、前記主タイムウインドウによって同定さ
れた成分の保持時間を基に、少なくとも２つの副タイム
ウインドウを設定する副タイムウインドウ設定手段とを
有するように構成した。According to the present invention,multiple samples in a sample are prepared.
Identify a number of components using a time window
In chromatographic equipment, the retention time of any component
Main time window to set main time window for
C) the means identified by the setting means and the main time window
At least two minor times, based on the retention times of the components
Sub time window setting means for setting the window
It was configured to have.
【０００８】[0008]
【０００９】[0009]
【００１０】さらに好適には、被検成分を含む既知試料
をクロマトグラフィ分離し、分離されたクロマトグラム
に基づいて上記成分に関するタイムウインドウの幅を決
定し、未知試料のクロマトグラムに対して上記タイムウ
インドウの幅で選ばれた成分ピークを測定することを特
徴とする。[0010] More preferably, a known sample containing a test component is chromatographed, the width of a time window for the component is determined based on the separated chromatogram, and the time window is determined with respect to the chromatogram of an unknown sample. Is characterized by measuring a component peak selected with a width of
【００１１】さらに、好適には、分析装置自体が分析条
件を決定する。その決定の基準になるのは、既知試料
（標準試料）の測定結果、すなわちクロマトグラフィで
はクロマトグラムである。Furthermore, preferably, the analyzer itselfdetermine the analysis condition. The basis for the determination is the measurement result of a known sample (standard sample), that is, a chromatogram in chromatography.
【００１２】まず、標準試料の測定結果から定性，定量
分析のための情報を抽出する。次いで、この情報が十分
か否か判断する。不十分の場合には、制御のための分析
条件を再検討し、十分となるまで標準試料の測定を続け
る。十分の場合には、定性，定量分析の基準を数値化
し、同定やデータ解析等の分析条件を決定する。First, information for qualitative and quantitative analysis is extracted from the measurement result of the standard sample. Next, it is determined whether this information is sufficient. If not, review the analysis conditions for control and continue measuring standard samples until sufficient. If it is sufficient, the qualitative and quantitative analysis standards are digitized, and analysis conditions such as identification and data analysis are determined.
【００１３】本発明を実行するためには、分析装置を構
成する各部品及び各試薬は所定のものを使用する。例え
ば、クロマトグラフ装置の場合、カラム，溶離液及び標
準試料がそれに該当する。部品及び試薬は必ずしも１組
である必要はない。複数種の組合せがあっても、何れの
組であるかが分析装置に認識できれば構わない。認識手
段としては、スイッチ，キーボード，バーコードリーダ
ー，ＩＣカード等からの入力と、標準試料の測定結果か
ら判断する方法がある。In order to carry out the present invention, predetermined components and reagents constituting the analyzer are used. For example, in the case of a chromatographic apparatus, a column, an eluent, and a standard sample correspond thereto. Parts and reagents do not necessarily have to be one set. Even if there are a plurality of types of combinations, it suffices if the analyzer can recognize which combination is which. As a recognition means, there is a method of judging from an input from a switch, a keyboard, a barcode reader, an IC card or the like and a measurement result of a standard sample.
【００１４】次に、そのような分析装置を使用しても、
測定結果はいくつかの要因により、多少変動することが
ある。例えば、クロマトグラフ装置の結果、カラムと溶
離液のロット差や劣化，室温や流量の変化により、保持
時間が変動する。その場合でも、一般に操作者が標準試
料の測定結果に基づき判断し、同定や制御等の分析条件
を決定することにより、定性，定量条件が可能となる。Next, using such an analyzer,
Measurement results may vary slightly due to several factors. For example, as a result of a chromatographic apparatus, the retention time fluctuates due to the lot difference and deterioration between the column and the eluent, and changes in room temperature and flow rate. Even in such a case, qualitative and quantitative conditions can be obtained by the operator generally determining based on the measurement result of the standard sample and determining analysis conditions such as identification and control.
【００１５】[0015]
【発明の実施の形態】本発明に基づく一実施例を図１〜
図３を参照して説明する。DESCRIPTION OF THE PREFERRED EMBODIMENTS One embodiment according to the present invention is shown in FIGS.
This will be described with reference to FIG.
【００１６】図１は、本発明を適用したカテコールアミ
ン分析用液体クロマトグラフ分析装置のシステム構成図
である。この分析装置は、カテコールアミンを分離する
前に蛍光標識でプレラベルし、反応部に設けたプレカラ
ム内に一旦吸着して夾雑物を除去した後、分離カラムに
試料として導入する。制御部６にはスタートキーを備え
た入力部が接続されている。オートサンプラ５は、可動
のピペッティングニードルを備えており、収容されてい
る蛍光ラベル化剤溶液１０，標準試料１１，混合室１
２，未知試料９の列の各々にニードルを対応づけ得る。FIG. 1 is a system configuration diagram of a liquid chromatograph analyzer for catecholamine analysis to which the present invention is applied. In this analyzer, catecholamines are prelabeled with a fluorescent label before separation, and once adsorbed in a precolumn provided in a reaction section to remove impurities, and then introduced into a separation column as a sample. An input unit having a start key is connected to the control unit 6. The autosampler 5 includes a movable pipetting needle, and accommodates a fluorescent labeling agent solution 10, a standard sample 11, and a mixing chamber 1.
2. A needle can be associated with each of the rows of unknown samples 9.
【００１７】分析装置の操作者が分析装置のスタートキ
ーを押すと、制御部６からの命令により、サンプラ５
が、標準試料１１を４００μｌ吸引し混合室１２内に吐
出する。サンプラ５は、Ｘ，Ｙ，Ｚ軸方向にピペッティ
ングニードルを自在に運動できる。標準試料１１には、
ノルエピネフリン（ＮＥ），エピネフリン（Ｅ），ドー
パミン（ＤＡ）の３種類のカテコールアミンが各１００
０ｐｇ／ｍｌ含まれている。次に４００μｌの６０ｍＭ
１，２−ジフェニルエチレンジアミン（ＤＰＥ）蛍光ラ
ベル化剤溶液１０を吸引し、混合室１２に吐出し、標準
試料１１と混合する。この混合液４００μｌは反応部２
に送りこまれ、蛍光ラベル化反応を起こす。３分後、ラ
ベル化カテコールアミンは一旦反応部２内のプレカラム
に吸着される。さらに３分後、ラベル化カテコールアミ
ンはバルブ切換により溶離液送液ポンプ１から送液され
た溶離液と共に分離カラム３に送り込まれ、逆相クロマ
トグラフィに分離展開され、最後に蛍光検出器４で検出
される。この検出データであるクロマトグラムはデータ
解析部７に記憶される。When the operator of the analyzer presses the start key of the analyzer, the sampler 5 is operated in accordance with a command from the controller 6.
However, 400 μl of the standard sample 11 is sucked and discharged into the mixing chamber 12. The sampler 5 can freely move the pipetting needle in the X, Y, and Z axis directions. In the standard sample 11,
Three types of catecholamines, norepinephrine (NE), epinephrine (E), and dopamine (DA), are 100 each.
0 pg / ml. Then 400 μl of 60 mM
The 1,2-diphenylethylenediamine (DPE) fluorescent labeling agent solution 10 is sucked, discharged into the mixing chamber 12, and mixed with the standard sample 11. 400 μl of this mixed solution was used in reaction section 2
To cause a fluorescent labeling reaction. After 3 minutes, the labeled catecholamine is once adsorbed on the precolumn in the reaction section 2. After a further 3 minutes, the labeled catecholamine is sent to the separation column 3 together with the eluent sent from the eluent sending pump 1 by valve switching, separated and developed by reverse phase chromatography, and finally detected by the fluorescence detector 4. You. The chromatogram, which is the detection data, is stored in the data analyzer 7.
【００１８】図２を参照して、クロマトグラム２０から
のピーク同定方法（縮小ウインドウ法）を説明する。こ
れは同定許容幅であるタイムウインドウを標準試料１１
の測定結果に基づいて幅制限させる方法である。標準試
料１１に含まれる３成分のピークは不純物のピークより
もかなり大きく検出されるため、この方法が有効であ
る。データ解析部７はクロマトグラム２０から表１のタ
イムウインドウを用いて、３本のピークを保持時間の長
いほうから順にピーク２３，２２，２１をそれぞれＤ
Ａ，Ｅ，ＮＥと同定する。ウインドウ内に複数のピーク
がある場合、保持時間の長いほうを同定する。Referring to FIG. 2, a method of identifying peaks from the chromatogram 20 (reduced window method) will be described. This is because the time window, which is the allowable range of identification, is
This is a method of restricting the width based on the measurement result. This method is effective because the peaks of the three components contained in the standard sample 11 are detected to be considerably larger than the peaks of the impurities. Using the time window shown in Table 1 from the chromatogram 20, the data analysis unit 7 converts the three peaks into peaks 23, 22, and 21 in ascending order of retention time, respectively.
Identify as A, E, NE. If there are multiple peaks in the window, identify the one with the longer retention time.
【００１９】[0019]
【表１】[Table 1]
【００２０】同定ピークの保持時間ｔＲ，ピーク面積
Ａ，ピーク高さｈを分析条件決定部１４に転送する。分
析条件決定部１４は測定結果を表２により診断し、合格
していれば、表３のようにタイムウインドウの中心は標
準試料１１のピークの保持時間、許容幅は未知試料９の
同定誤りをなくするために縮小するようデータ解析部７
に命令する。ここではピーク高さにしきい値を設け、そ
のしきい値を越えるピークが３本でない場合はエラーと
している。The retention time tR, peak area A, and peak height h of the identified peak are transferred to the analysis condition determining unit 14. The analysis condition determination unit 14 diagnoses the measurement result based on Table 2, and if the measurement result is passed, the center of the time window is the peak holding time of the standard sample 11 and the allowable width is the identification error of the unknown sample 9 as shown in Table 3. Data analysis unit 7 to reduce to eliminate
To order. Here, a threshold value is provided for the peak height, and if there are not three peaks exceeding the threshold value, an error is determined.
【００２１】[0021]
【表２】[Table 2]
【００２２】[0022]
【表３】[Table 3]
【００２３】次に、別のピーク同定方法を図３を参照し
て説明する。この同定法は、単一のタイムウインドウに
よって複数の被検成分ピークを同定する方法である。Next, another peak identification method will be described with reference to FIG. This identification method is a method of identifying a plurality of test component peaks using a single time window.
【００２４】データ解析部７はクロマトグラム２０か
ら、タイムウインドウ内にあって、面積100,000μＶ・ｓ
以上のピークを数える。３本のピークがあるときだけ、
保持時間ｔＲ，ピーク面積Ａ，ピーク高さｈを分析条件
決定部１４に転送する。それ以外はエラーとなる。この
１つのタイムウインドウはクロマトグラムの全領域であ
っても構わない。分析条件決定部１４は上述したのと同
様に測定結果を表２により診断し、合格していれば、表
３のタイムウインドウを用いるようデータ解析部７に命
令する。From the chromatogram 20, the data analysis unit 7 finds an area of 100,000 μV · s within the time window.
Count the above peaks. Only when there are three peaks,
The retention time tR, the peak area A, and the peak height h are transferred to the analysis condition determination unit 14. Otherwise, an error occurs. This one time window may be the entire region of the chromatogram. The analysis condition determination unit 14 diagnoses the measurement result based on Table 2 in the same manner as described above, and instructs the data analysis unit 7 to use the time window in Table 3 if the measurement result is passed.
【００２５】図２又は図３の方法に基づいて自動的に決
定された表３のタイムウインドウは、プリンタ１３によ
りクロマトグラム２０上に重ね描きする。また、ＣＲＴ
８上のクロマトグラムに表示することもできる。以降、
血しょう等の未知試料９の分析にはこのタイムウインド
ウを用いて、データ解析する。定量分析は標準試料１１
のピーク面積を１０００ｐｇ／ｍｌとして比例計算す
る。The time window shown in Table 3 automatically determined based on the method shown in FIG. 2 or 3 is superimposed on the chromatogram 20 by the printer 13. Also, CRT
8 can also be displayed on the chromatogram. Or later,
Data analysis is performed using the time window to analyze the unknown sample 9 such as plasma. Quantitative analysis was performed using standard sample 11
Is calculated proportionally with the peak area of 1000 pg / ml.
【００２６】分析操作の途中では、エラーの発生する場
合がある。これはいくつか原因が考えられる。カラムや
試薬または部品の劣化がある場合には分析者に伝え、交
換を促す。それ以外に、分析装置が自ら制御条件を変更
することにより、分析を支障なく行える場合がある。例
えば、ピークが全体的に小さいときには、蛍光検出器４
の増幅倍率を大きくするとか、反応部２の反応温度を上
げることや反応時間を伸ばすことが実行可能である。ま
たピークの保持時間が短いときには、ポンプ１の流量を
減らすとか、カラム３の温度を下げることができる。エ
ラー発生時には、分析条件決定部１４がクロマトグラム
２０やセンサからのデータをもとに定式化されたルール
を用いて、制御部６に制御条件を変更するよう命令す
る。例えば、最終ピークの保持時間が基準より長い場
合、まず、各ピークの分離の余裕を、分解能ＲＳや、保
持時間の間隔ΔＴＲ及び理論段数Ｎにより評価する。分
離に余裕があり、圧力が基準値未満であれば、最終ピー
クの保持時間が基準値内に収まるように計算し、ポンプ
１の流量を増す。分離に余裕があっても、圧力が基準値
以上であれば、ルールに従い計算し、カラム３の温度を
上げることとポンプ１の流量を増すことを同時に命令す
る。制御部６は以上述べたように制御の条件を変更し、
再び標準試料１１を測定する。An error may occur during the analysis operation. This can have several causes. If the column, reagents, or parts have deteriorated, notify the analyst and request replacement. In addition, there are cases where the analyzer can perform the analysis without any trouble by changing the control conditions by itself. For example, when the peak is small overall, the fluorescence detector 4
It is feasible to increase the amplification factor, increase the reaction temperature of the reaction section 2, or extend the reaction time. When the retention time of the peak is short, the flow rate of the pump 1 can be reduced or the temperature of the column 3 can be reduced. When an error occurs, the analysis condition determination unit 14 instructs the control unit 6 to change the control condition using a rule formulated based on the chromatogram 20 and data from the sensor. For example, when the retention time of the last peak is longer than the reference, first, the margin of separation of each peak is evaluated based on the resolution RS, the retention time interval ΔTR, and the number N of theoretical stages. If there is a margin for separation and the pressure is less than the reference value, calculation is performed so that the retention time of the final peak falls within the reference value, and the flow rate of the pump 1 is increased. Even if there is room for separation, if the pressure is equal to or higher than the reference value, calculation is performed according to the rules, and an instruction to increase the temperature of the column 3 and an increase in the flow rate of the pump 1 at the same time. The control unit 6 changes the control conditions as described above,
The standard sample 11 is measured again.
【００２７】また反応の状態を計るために、含有濃度が
既知である２種の試料を用いる方法がある。前述の３成
分がそれぞれ１０００ｐｇ／ｍｌ含まれている標準試料
１１と、ＮＥ，Ｅ，ＤＡがそれぞれ５００，１０００，
２０００ｐｇ／ｍｌ含まれている参照のための試料を測
定する。反応の直線性が正常であれば、参照試料の測定
結果が含有濃度に比例した定量値になる。基準以下の直
線性である場合は、分析条件決定部１４がルールに従い
計算し、反応部２の反応温度や反応時間の条件を再設定
するよう制御部６に命令する。In order to measure the state of the reaction, there is a method in which two kinds of samples having known concentrations are used. A standard sample 11 containing 1000 pg / ml of each of the above three components, and NE, E, and DA of 500, 1000,
Measure a sample containing 2000 pg / ml for reference. If the linearity of the reaction is normal, the measurement result of the reference sample becomes a quantitative value proportional to the content concentration. If the linearity is lower than the standard, the analysis condition determination unit 14 calculates according to the rules and instructs the control unit 6 to reset the conditions of the reaction temperature and the reaction time of the reaction unit 2.
【００２８】また血しょうと尿の分析のためにそれぞれ
含有濃度の異なる標準試料か、または含有濃度比率の異
なる標準試料を用意してあれば、分析条件決定部１４が
ピーク面積のしきい値か、３成分の面積比率により判断
し、何れの分析をするのか、分析者の入力がなくても認
識することができる。分析条件決定部１４は制御部６に
対し認識した分析方法を設定できる。If a standard sample having a different concentration or a standard sample having a different concentration ratio is prepared for analysis of plasma and urine, the analysis condition determining unit 14 determines whether the peak area is a threshold value. Judgment can be made based on the area ratio of the three components, and which analysis should be performed can be recognized without input from an analyst. The analysis condition determination unit 14 can set the recognized analysis method for the control unit 6.
【００２９】ここまでカテコールアミンをＮＥ，Ｅ，Ｄ
Ａの３成分として説明してきたが、ＤＯＰＡ，ＤＯＰＡ
Ｃ，ＤＯＰＥＧを含め６成分として分析することもでき
る。この場合、３成分分析のほうが６成分分析より短時
間で済む制御の分析条件が選べる。一般的には分析者が
どちらの分析方法にするか、分析装置に入力する。しか
し分析者が入力操作することなく、３成分か６成分の標
準試料を選択するだけで分析方法を決定できる方法があ
る。クロマトグラフ装置の準備運転中に、標準試料を測
定し、前述の単一ウインドウによる複数ピーク同定法を
応用する。分析条件決定部１４は、面積が基準のしきい
値を越えるピークを数え、３本であれば３成分分析，６
本であれば６成分分析の分析方法を制御部６に命令す
る。以降、標準試料，未知試料と分析を進める。また準
備運転中に測定しなくても、分析時間の長い６成分分析
方法により標準試料を測定し、３本のピークを検出した
ときに、３成分分析方法に切り換えることもできる。Up to this point, catecholamines were NE, E, D
A has been described as three components of A, DOPA, DOPA
It can also be analyzed as six components including C and DOPEG. In this case, it is possible to select control analysis conditions in which the three-component analysis requires less time than the six-component analysis. Generally, an analyst inputs to the analyzer which analysis method to use. However, there is a method in which an analysis method can be determined only by selecting a standard sample of three or six components without an input operation performed by an analyst. During the preparatory operation of the chromatographic apparatus, a standard sample is measured, and the above-described single window multiple peak identification method is applied. The analysis condition determination unit 14 counts the number of peaks whose area exceeds the reference threshold value.
If it is a book, the control unit 6 is instructed on the analysis method of the six-component analysis. Thereafter, the analysis proceeds with a standard sample and an unknown sample. Further, even if the measurement is not performed during the preparatory operation, the standard sample can be measured by the six-component analysis method having a long analysis time, and when the three peaks are detected, the method can be switched to the three-component analysis method.
【００３０】次に、図４を参照して本発明の他の実施例
を説明する。この実施例は、イオン交換クロマトグラフ
ィによってグリコヘモグロビンを分析する液体クロマト
グラフ装置システムである。Next, another embodiment of the present invention will be described with reference to FIG. This embodiment is a liquid chromatograph system for analyzing glycated hemoglobin by ion exchange chromatography.
【００３１】溶離液送液ポンプ４０はステップワイズ溶
出を行うために溶離液Ａ４８，溶離液Ｂ４９，溶離液Ｃ
５０をそれぞれ１.９，１.０，０.４分間ずつ３.３分間
サイクルで切り換え送液する。可動ニードルを有するサ
ンプラ４３はヘモグロビン（Ｈｂ）の標準試料５２を５
μｌ吸引し、溶血希釈し、カラム４１への流路に送り込
む。標準試料５２は溶離液Ａ４８と共に分離カラム４１
に送り込まれ、含有成分が分離展開され、可視吸光度検
出器４２で検出される。この検出データであるクロマト
グラムはデータ解析部４５に記憶される。The eluent sending pump 40 is provided with an eluent A48, an eluent B49, and an eluent C for performing stepwise elution.
50 are switched at a cycle of 1.9 minutes, 1.0 minutes, and 0.4 minutes, respectively, for 3.3 minutes, and then sent. A sampler 43 having a movable needle is used to convert a standard sample 52 of hemoglobin (Hb) into 5 samples.
Aspirate μl, dilute with hemolysis, and send to the channel to column 41. The standard sample 52 is separated from the separation column 41 together with the eluent A48.
The components are separated and developed, and are detected by the visible absorbance detector 42. The chromatogram as the detection data is stored in the data analysis unit 45.
【００３２】ここで、クロマトグラムからのピーク同定
方法を説明する。この同定法は、保持時間が安定した成
分のピークを主要なピーク（主ピーク）とし、この保持
時間からその他の保持時間が単純に比例関係にならない
溶出成分のピークを副ピークとして、この副ピークのタ
イムウインドウを即時計算する個々のクロマトグラムの
ための可変ウインドウ法である。この可変ウインドウ法
では、面積３,０００μＶ・ｓ以上のピークを選別し、
表４のタイムウインドウを用いて順次同定を行う。Here, a method for identifying a peak from a chromatogram will be described. This identification method has astable retention time.
The minutes of peakand major peak(main peak),the other of holding time from the retention time ofthisis not a simple proportional relationship
The peaks of the eluted componentsasFukupi over clicka variable window scheme for individual chromatograms to calculate the time window ofthe sub-peak instant.This variable window method
In, screened over a peak area 3,000μV · s,
Identificationis performed sequentially using the time window shown in Table 4.
【００３３】[0033]
【表４】[Table 4]
【００３４】ウインドウ内に複数のピークがあるとき
は、次の（１)〜(６）のルールに従う。When there are a plurality of peaks in the window, the following rules (1) to (6) are followed.
【００３５】（１） Ａ0は面積の一番大きなピークと
する。(1) A0 is a peak having the largest area.
【００３６】（２） Ａ1cは面積の一番大きなピークと
する。(2) A1c is a peak having the largest area.
【００３７】（３） １−Ａ1cは面積の一番大きなピー
クとする。(3) 1-A1c is a peak having the largest area.
【００３８】（４） Ｆは面積の一番大きなピークとす
る。(4) F is a peak having the largest area.
【００３９】（５） Ａ1bは保持時間の一番長いピーク
とする。(5) A1b is a peak having the longest retention time.
【００４０】（６） Ａ1aは保持時間の一番長いピーク
とする。(6) A1a is a peak having the longest retention time.
【００４１】この方法は副ピークとなるピークが検出さ
れない場合でも、支障なく同定できる特長がある。[0041]peak this method isto beFukupi over clickthe detection of
There is a feature that can be identified without any trouble even if itis not possible.
【００４２】また、Ｈｂ標準試料５２からは、副ピーク
であるｌ−Ａ1CまたはＦが分離検出されないことがある
ため、この方法が有効である。データ解析部４５は、ク
ロマトグラムから上述の手続きに従って同定を行う。以
下に、更に詳細に説明する。まず、ピーク面積のしきい
値を越えるものを選別する。次に保持時間が安定であり
クロマトグラムの最後に出てくる成分であるＡ0とＡ1c
を前述の縮小するタイムウインドウ法により同定する。
分析条件決定部５３は、血液の未知試料５１のために許
容幅を表４で示されている±０.４０，±０.３０から、
どちらも±０.１５に縮小させる。ここで残りのピーク
のウインドウを主ピークであるＡ1Cの保持時間に基づき
計算し、データ解析部４５に同定するよう命令する。Further, from the Hb standard sample52, because it can l-A1C or F isFukupi over click is not separateddetected, the method is effective. The data analysis unit 45 performs identification fromthe chromatogram according to the above-described procedure.Less than
This will be described in more detail below. First, those exceeding the peak area threshold are selected. Next, theretention time is stable
A0 and A1cis a component that comes out at the end of the chromatogram
Are identified by the time window method for reduction described above.
Analysis condition determination unit53,± 0.40 for the allowable widthis shown in Table 4 for blood of an unknown sample51, from ± 0.30,
Both are reduced to ± 0.15. Here, the window of the remaining peakis calculated based on the retention time of themain peakA1C , and the data analysis unit 45 is instructed to identify the window.
【００４３】この各ピークのウインドウはそれぞれＡ1C
の保持時間の固有の関数である。これは副ピークの保持
時間が主ピークの保持時間に比例するとする相対的な保
持時間による同定方法の発展したものであるとみなすこ
とができる。つまり、比例計算を一般的な関数に拡張
し、またウインドウを各ピーク固有の関数にしている。
この方法は単純に比例関係にならない溶出方法を用いる
クロマトグラフィに有効である。保持時間の長いものか
ら順にｌ−Ａ1C，Ｆ，Ａ1bと同定する。各成分の定量値
はピーク面積の占める割合を百分率により制御部４４を
介してＣＲＴ４６に表示する。また同定されたクロマト
グラムはプリンタ４７により図５のように印刷される。
計算されたウインドウ内にピークがないときには探索し
た時刻を印字し、定量値は０.０％ とする。以降、未知
試料５１の分析の場合、Ａ0とＡ1C，Ａ1aは縮小された
ウインドウ法を、１−Ａ1C，Ｆ，Ａ1bは個々の可変ウイ
ンドウ法を用いて同定する。The window of each peak is A1C
Is a unique function of the retention time of This can be considered to be obtained by the development of methods for the identification by the relative retention time to the retention times ofFukupi over click it is proportional to the retention time ofthe main peak. That is, the proportional calculation is extended to a general function, and the window is a function unique to each peak.
This method is effective for chromatography using an elution method that is not simply proportional. L-A1C in order from a long retention time,F, identifiedasA1b. The quantitative value of each component is displayed on the CRT 46 via the control unit 44 as a percentage of the ratio of the peak area. The identified chromatogram is printed by the printer 47 as shown in FIG.
If there is no peak in the calculated window, the searched time is printed, and the quantitative value is set to 0.0%. Later, if the analysis of an unknown sample 51, A0 and A1C, theA1a is reduced windowscheme, 1-A 1C, F, A 1bis identified using individual variable window scheme.
【００４４】もう１つのピーク同定方法について説明す
る。この同定法は、前述の１つのタイムウインドウで複
数のクロマト分離された被検成分ピークを同定する方法
を応用する。Another peak identification method will be described. This identification method employs the above-described method of identifying a plurality of chromatographically separated test component peaks in one time window.
【００４５】この同定法では、まず標準試料を分離カラ
ムで成分分離した後、面積3,000 μＶ・ｓ以上のピー
クを選別する。次に、表５のタイムウインドウを用い、
ウインドウ内に頂点のあるピークを検出する。In this identification method, first, a standard sample is separated into components by a separation column, and then a peak having an area of 3,000 μV · s or more is selected. Next, using the time window shown in Table 5,
Detect peaks with vertices in the window.
【００４６】[0046]
【表５】[Table 5]
【００４７】次いで、表５のウインドウＡで、面積の大
きい順に２本のピークを選別する。この場合、（１）ピ
ークが２本ある場合は、保持時間の短い順にＡ1a，Ａ1b
と同定し、（２）ピークが１本の場合は、Ａ1bと同定す
る。Next, in window A of Table 5, two peaks are selected in descending order of area. In this case, (1) when there are two peaks, A1a and A1b are arranged in ascending order of retention time.
(2) If there is one peak, it is identified as A1b .
【００４８】次に、表５のウインドウＢで、面積の大き
い順に３本のピークを選別する。この場合、（１）ピー
クが３本ある場合は、保持時間の短い順にＦ，Ｉ−
Ａ1c，Ａ1cと同定する。（２）ピークが２本の場合は、
保持時間の長い方のピークをＡ1cと同定する。もう１つ
のピークは、その保持時間がＡ1cから０.４ 分以内に接
近していれば、ｌ−Ａ1cと同定し、それ以外はＦと同定
する。（３）ピークが１本の場合は、それをＡ1cと同定
する。Next, in window B of Table 5, three peaks are selected in descending order of area. In this case, (1) when there are three peaks, F, I−
A1c and A1c are identified. (2) When there are two peaks,
The peak with the longer retention time is identified as A1c . Another peak long as the retention time close within 0.4 minutes from A1c, and identified as l-A1c, otherwise identified as F. (3) If there is only one peak, it is identified as A1c .
【００４９】さらに、表５のウインドウＣで、面積の一
番大きいピークをＡ0と同定する。この同定法を実行す
るため、まず図４のデータ解析部４５は、図５の如きク
ロマトグラム６０から、面積３,０００μＶ・ｓ以上のピ
ークを検知する。クロマトグラム６０を３つのウインド
ウに分割し、それぞれのウインドウ内で面積の大きなピ
ークを選別し、ルールに従って同定する。分析条件決定
部５３は同定結果を受け、Ａ0とＡ1cが同定されていな
いときエラーとする。同定されていれば、制御部４４に
未知試料５１へ分析を移行するよう命令する。Further, in window C of Table 5, the peak having the largest area is identified as A0 . In order to execute this identification method, first, the data analysis unit 45 in FIG. 4 detects a peak having an area of 3,000 μV · s or more from a chromatogram 60 as shown in FIG. The chromatogram 60 is divided into three windows, and a peak having a large area is selected in each window, and identified according to rules. Analysis condition determining unit 53 receives the identification result, the error when the A0 and A1c has not been identified. If identified, the control unit 44 is instructed to shift the analysis to the unknown sample 51.
【００５０】グリコヘモグロビン分析計もカテコールア
ミン分析計と同様に各ピークの保持時間が基準値を外れ
ることがある。前述したようなポンプ流量やカラム温度
の変更も有効な手段である。また、ステップワイズ溶出
を行っているため、分析条件決定部５３はルールに従い
計算し、各溶離液の切り換え時間を変更するよう制御部
４４に命令することもできる。制御部４４は制御の条件
を変更し、再び標準試料５２を測定する。In the glycated hemoglobin analyzer, the retention time of each peak may deviate from the reference value similarly to the catecholamine analyzer. Changing the pump flow rate and column temperature as described above is also an effective means. In addition, since the stepwise elution is performed, the analysis condition determination unit 53 can calculate according to a rule and instruct the control unit 44 to change the switching time of each eluent. The controller 44 changes the control conditions and measures the standard sample 52 again.
【００５１】また、図４のグリコヘモグロビン分析計で
は、ｌ−Ａ1cをより良く分離するために高分離分析法と
いう分析方法も設定できる。これは３５mmのカラムを用
いる前述の高速法に対して、８０mmのカラムを使用す
る。分析者はどちらかの分析法を選択するか、入力し、
適切なカラムを取り付ける必要がある。準備運転中に、
流量１.０ｍｌ／minにより送液し、分析条件決定部５３
は、ポンプ圧力が５０bar 未満であれば３５mmのカラ
ム、それ以上であれば８０mmのカラムが取り付けられて
いるとし、選択された分析法と取り付けられたカラムが
一致しない場合、エラーとする。またはこのようなカラ
ム認識手段を用いれば、特に分析者が分析方法を入力設
定することなく、分析条件を決定することができる。In the glycohemoglobin analyzer of FIG. 4, an analysis method called a high separation analysis method can be set in order to separate l-A1c better. This uses an 80 mm column, as opposed to the high speed method described above using a 35 mm column. The analyst selects or enters either method,
Appropriate columns need to be installed. During the preparation operation,
The solution is sent at a flow rate of 1.0 ml / min, and the analysis condition determination unit 53
Indicates that a 35 mm column is installed if the pump pressure is less than 50 bar, and an 80 mm column is installed if it is greater than 50 bar, and it is an error if the selected analytical method does not match the installed column. Alternatively, if such a column recognizing means is used, the analysis conditions can be determined without the analyst inputting and setting the analysis method.
【００５２】また以下に述べる標準試料を用いるカラム
認識手段も利用することができる。このほうが、カラム
の劣化による圧力上昇の影響を受けないため、圧力によ
る判断より有効である。何れのカラムが取り付けられて
いても、一旦高分離法により測定し、クロマトグラムの
パターンから、例えば、単一ウインドウによる複数ピー
ク同定法を用いて、Ａ1cの保持時間が１.５ 分未満であ
れば３５mmのカラム、それ以上であれば８０mmのカラム
が取り付けられていると認識する。Also, a column recognition means using a standard sample described below can be used. This method is more effective than the judgment based on the pressure because it is not affected by the pressure increase due to the deterioration of the column. Regardless of which column is attached, once measured by the high-resolution method, the retention time of A1c is less than 1.5 minutes from the chromatogram pattern using, for example, a single window multiple peak identification method. If it is, it is recognized that a 35 mm column is attached, and if it is more than that, an 80 mm column is attached.
【００５３】なお、本発明の具体例としてクロマトグラ
フ装置を用いて実施例を説明してきたが、一般の分析装
置に適用できることは自明である。例えば、マススペク
トロメトリーのように、ポリエチレングリコール（ＰＥ
Ｇ）の混合溶液を標準試料としてスキャンし、Ｍ／Ｚ軸
を設定する場合にも利用できる。即ち、所定の標準試料
を用いて、検出されるピークの数を固定しておく。単一
ウインドウによる複数ピーク同定法を用いることによ
り、各ＰＥＧの検出位置と分子量を対応させることがで
きる。Although the embodiment has been described using a chromatographic apparatus as a specific example of the present invention, it is obvious that the present invention can be applied to a general analyzer. For example, as in mass spectrometry, polyethylene glycol (PE
It can also be used when scanning the mixed solution of G) as a standard sample and setting the M / Z axis. That is, the number of detected peaks is fixed using a predetermined standard sample. By using the multiple peak identification method using a single window, the detection position and molecular weight of each PEG can be made to correspond.
【００５４】[0054]
【発明の効果】本発明によれば、分析装置の操作者は試
料をセットして運転開始するだけであり分析条件は分析
装置自体で自動決定されるので、分析操作者は分析条件
を検討するという煩わしさから開放される。According to the present invention, the operator of the analyzer only sets the sample and starts the operation, and the analysis conditions are automatically determined by the analyzer itself. Therefore, the analysis operator examines the analysis conditions. You will be released from the hassle.
【図１】本発明の一実施例であるカテコールアミン分析
計のシステム構成図である。FIG. 1 is a system configuration diagram of a catecholamine analyzer which is one embodiment of the present invention.
【図２】縮小ウインドウ同定法の説明図である。FIG. 2 is an explanatory diagram of a reduced window identification method.
【図３】単一ウインドウによる複数ピーク同定法の説明
図である。FIG. 3 is an explanatory diagram of a multiple peak identification method using a single window.
【図４】本発明の他の実施例であるグリコヘモグロビン
分析計のシステム構成図である。FIG. 4 is a system configuration diagram of a glycohemoglobin analyzer according to another embodiment of the present invention.
【図５】グリコヘモグロビンのクロマトグラム例を示す
図である。FIG. 5 is a diagram showing an example of a chromatogram of glycated hemoglobin.
１，４０…送液ポンプ、２…反応部、３，４１…分離カ
ラム、４，４２…検出器、５，４３…サンプラ、６，４
４…制御部、７，４５…データ解析部、１４，５３…分
析条件決定部。1, 40 liquid sending pump, 2 reaction part, 3, 41 separation column, 4, 42 detector, 5, 43 sampler, 6, 4
4 control unit, 7, 45 data analysis unit, 14, 53 analysis condition determination unit
───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (72)発明者 藤井 芳雄 茨城県勝田市市毛882番地 株式会社 日立製作所 那珂工場内 (72)発明者 佐竹 尋志 茨城県勝田市市毛882番地 株式会社 日立製作所 那珂工場内 (72)発明者 山田 富士夫 茨城県勝田市市毛882番地 株式会社 日立製作所 那珂工場内 (72)発明者 田上 孝一 茨城県勝田市市毛882番地 日立計測エ ンジニアリング株式会社内 (72)発明者 梅里 文則 茨城県勝田市市毛882番地 日立計測エ ンジニアリング株式会社内 (56)参考文献 特開 昭58−225352（ＪＰ，Ａ) 特開 昭58−41352（ＪＰ，Ａ) (58)調査した分野(Int.Cl.6，ＤＢ名) G01N 30/86──────────────────────────────────────────────────続 き Continued on front page (72) Inventor Yoshio Fujii 882 Ma, Katsuta-shi, Ibaraki Prefecture Inside Naka Works, Hitachi, Ltd. (72) Inventor Fujio Yamada 882 Ma, Katsuta, Ibaraki Pref.Hitachi, Ltd.Naka Plant (72) Inventor Koichi Tagami 882 Ma, Katsuta, Ibaraki Pref.Hitachi Keisoku Engineering Co., Ltd. (72) Invention Person Bunri Umeri 882 Ma, Katsuta-shi, Ibaraki Pref. Hitachi Measurement Engineering Co., Ltd. (56) Reference JP-A-58-225352 (JP, A) JP-A-58-41352 (JP, A) (58) Survey Field (Int.Cl.6 , DB name) G01N 30/86
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