JP2022130270A - Auxiliary agent for intestinal absorption and its use - Google Patents
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Abstract
Description
Translated fromJapanese本発明は、腸管吸収用補助剤、より詳しくは、高分子化合物を腸管経由によって、確実に生体中に吸収させるための「ドラッグデリバリーシステム補助剤」として用いることができる「腸管吸収用補助剤」に関するものである。
また本発明は、より確実に腸管吸収させることができる「腸管吸収用組成物」に関するものである。
更に本発明は、より確実に生体内で機能、効能、又は効果を発揮することができる、「腸管吸収用薬剤」に関するものである。The present invention provides an intestinal absorption adjuvant, more specifically, an "intestinal absorption adjuvant" that can be used as a "drug delivery system adjuvant" for ensuring absorption of a polymer compound into the body via the intestinal tract. It is about.
The present invention also relates to a "composition for intestinal absorption" that allows for more reliable intestinal absorption.
Furthermore, the present invention relates to a "medicine for intestinal absorption" that can more reliably exhibit its function, efficacy, or effect in vivo.
薬剤等の活性物質を、生体内へ投与する方法としては、注射剤、経皮吸収剤、経口剤など種々の方法が用いられている。中でも注射剤は、血管や皮下又は筋肉等に直接投与することによって、活性物質が分解・失活せずに目的とする部位に到達することができるため、有効な投与方法の一つとして使用されている。Various methods such as injections, percutaneous absorption agents, and oral agents are used to administer active substances such as drugs into living bodies. Among them, injections are used as one of the effective administration methods because they can reach the target site without the active substance decomposing or deactivating by direct administration into blood vessels, subcutaneous or muscle. ing.
但し、注射剤には、痛みを伴うこと以外に、通院負担あるいは自己注射の場合の、身体的・精神的な負担等があり、一日に複数回投与しなければならない場合に、特にその負担は大きいことから、多くの注射剤が、経口剤への代替を望まれている。However, in addition to the pain associated with injections, there are physical and mental burdens such as hospital visits and self-injection. Therefore, many injectable drugs are expected to be replaced by oral drugs.
しかしながら、活性物質の種類によっては、特に活性物質が「多糖類」や「蛋白質」等の中・高分子化合物である場合には、消化管吸収を担う小腸から殆ど吸収されないことが知られており、経口薬剤の開発は、困難とされてきた。However, it is known that depending on the type of active substance, particularly when the active substance is a medium- or high-molecular compound such as "polysaccharide" or "protein", it is hardly absorbed from the small intestine responsible for gastrointestinal absorption. , the development of an oral drug has been difficult.
一方、腸管吸収性の改善については、活性物質を、膜透過ペプチド等の「吸収促進剤」と併用する方法等も試みられているが、そうした特殊な「吸収促進剤」を必要としない方法が望まれていた。On the other hand, in order to improve intestinal absorbability, a method of using the active substance in combination with an "absorption enhancer" such as a membrane permeable peptide has been attempted, but there is a method that does not require such a special "absorption enhancer". was desired.
また、直径が数十μｍ以下の微細な気泡、いわゆるマイクロバブルや、１μｍ未満のナノバブル等を発生させる装置の開発が進み（特許文献１）、それらの気泡を含有する溶液が、医療、農業、水産・養殖業等の種々の分野で利用されるようになって来ている。In addition, the development of devices that generate fine bubbles with a diameter of several tens of μm or less, so-called microbubbles, nanobubbles of less than 1 μm, etc., has progressed (Patent Document 1), and solutions containing these bubbles are used in medical, agricultural, It has come to be used in various fields such as fisheries and aquaculture.
そして、本発明者によって、「腸内フローラ移植」にこの微細な気泡を含む溶液（以下、単に「ナノバブル（水）」又は「ＮＢ」と記載する場合がある。）を用いる方法が開発された（特許文献２）。Then, the present inventor developed a method of using a solution containing these fine bubbles (hereinafter sometimes simply referred to as "nanobubbles (water)" or "NB") for "intestinal flora transplantation". (Patent document 2).
しかしながら、特許文献１は、主として、気泡による殺菌その他を目的とするものであり、目的物質を患部に送り届けるいわゆるドラッグデリバリーシステムに関するものでは無く、
また特許文献２は、「目的物質（ドナー由来の腸内細菌群）」を、レシピエント（患者）の腸管の表面付近に生着させる技術に過ぎず、「目的物質（腸内細菌）」を、腸壁の腸管細胞を経由して、腸管内部にまで吸収させるものでは無かった。However,
In addition,
本発明者等は鋭意検討の結果、驚くべきことに、低張液を主たる成分とする溶媒、あるいは低張液中に更に微細な気泡を含む溶媒が、他の吸収促進剤等を一切使用することなく中・高分子化合物の腸管吸収を促進することを見出し、本発明に到達したものであって、その目的とするところは、腸管細胞を傷つけることなく、中・高分子化合物を腸管から吸収させることのできる「補助剤」、又はこれら補助剤と中・高分子活性物質を含む「組成物」又は「薬剤」を提供するにある。As a result of extensive studies, the present inventors have surprisingly found that a solvent containing a hypotonic solution as a main component or a solvent containing finer bubbles in a hypotonic solution does not use any other absorption enhancer. The present invention was achieved by discovering that the intestinal absorption of medium- and high-molecular weight compounds can be promoted through the intestinal tract without damaging the intestinal cells. It is an object of the present invention to provide an "adjuvant" that can be used for the treatment, or a "composition" or "medicine" containing these adjuvants and a medium- or high-molecular-weight active substance.
上述の目的は、下記第一の発明から第十の発明によって、達成される。The above object is achieved by the following first to tenth inventions.
＜第一の発明＞
下記（Ｉ）を含むことを特徴とする、（III）投与目的物質を腸管を経由して吸収させるための腸管吸収用補助剤。<First invention>
(III) an intestinal absorption adjuvant for absorbing a substance to be administered via the intestinal tract, characterized by containing the following (I).
（Ｉ）低張液を含む溶媒(I) a solvent containing a hypotonic solution
＜第二の発明＞
下記（Ｉ）及び（II）を含むことを特徴とする、第一の発明に記載の補助剤。<Second invention>
The adjuvant according to the first invention, characterized by comprising the following (I) and (II).
（Ｉ）低張液を含む溶媒
（II）ナノサイズ以下（１μｍ未満）の気泡(I) Solvent containing hypotonic solution (II) Bubbles of nano size or less (less than 1 μm)
＜第三の発明＞
（III）投与目的物質が、下記（III）－ｉ乃至（III）－iiiから選択される少なくとも１種であることを特徴とする、第一の発明又は第二の発明に記載の補助剤。<Third invention>
(III) The adjuvant according to the first invention or the second invention, wherein the substance to be administered is at least one selected from the following (III)-i to (III)-iii.
（III）－ｉ：難吸収性低分子化合物
（III）－ii：中分子化合物
（III）－iii：高分子化合物(III)-i: Poorly absorbable low-molecular-weight compound (III)-ii: Medium-molecular-weight compound (III)-iii: Polymer compound
＜第四の発明＞
（III）投与目的物質が、下記から選択される少なくとも１種であることを特徴とする、第一の発明乃至第三の発明のいずれか１項に記載の補助剤。<Fourth invention>
(III) The adjuvant according to any one of the first to third inventions, wherein the substance to be administered is at least one selected from the following.
（III）－ii－ａ：ペプチド又はその誘導体
（III）－iii－ａ：蛋白質又はその誘導体
（III）－iii－ｂ：多糖類又はその誘導体(III)-ii-a: peptide or derivative thereof (III)-iii-a: protein or derivative thereof (III)-iii-b: polysaccharide or derivative thereof
＜第五の発明＞
（III）投与目的物質が、下記の（III）－iii－ａ－１及び／又は（III）－iii－ｂ－１であることを特徴とする、第一の発明乃至第三の発明のいずれか１項に記載の補助剤。<Fifth Invention>
(III) Any one of the first to third inventions, wherein the substance to be administered is (III)-iii-a-1 and/or (III)-iii-b-1 below. or the adjuvant according to
（III）－iii－ａ－１：インスリン又はその誘導体
（III）－iii－ｂ－１：デキストラン又はその誘導体(III)-iii-a-1: insulin or its derivative (III)-iii-b-1: dextran or its derivative
＜第六の発明＞
（Ｉ）中の低張液が、下記の（Ｉ）－ｉ乃至（Ｉ）－ｖiiの少なくとも１種からなることを特徴とする、第一の発明乃至第五の発明のいずれか１項に記載の補助剤。<Sixth invention>
Any one of the first to fifth inventions, wherein the hypotonic solution in (I) comprises at least one of the following (I)-i to (I)-vii Auxiliaries as described.
（Ｉ）－ｉ：超純水
（Ｉ）－ii：逆浸透水
（Ｉ）－iii：改質逆浸透水（modified RO water）
（Ｉ）－iv：生理食塩水とブドウ糖液からなる「低張電解質輸液」（１～４号液）
（Ｉ）－v：注射用蒸留水
（Ｉ）－vi：精製水
（Ｉ）－vii：イオン交換水(I)-i: ultrapure water (I)-ii: reverse osmosis water (I)-iii: modified reverse osmosis water (modified RO water)
(I)-iv: "Hypotonic electrolyte infusion" consisting of physiological saline and glucose solution (No. 1 to 4 solutions)
(I)-v: distilled water for injection (I)-vi: purified water (I)-vii: deionized water
＜第七の発明＞
（II）の平均気泡径が、１μｍ未満であることを特徴とする、第一の発明乃至第六の発明のいずれか１項記載の補助剤。<Seventh invention>
The adjuvant according to any one of the first to sixth inventions, wherein (II) has an average cell diameter of less than 1 µm.
＜第八の発明＞
第一の発明乃至第七の発明のいずれか１項記載の補助剤とともに、（III）投与目的物質を含むことを特徴とする、腸管吸収用組成物。<Eighth Invention>
A composition for intestinal absorption comprising (III) an administration target substance together with the adjuvant according to any one of the first invention to the seventh invention.
＜第九の発明＞
（III）投与目的物質が、下記（III）－ｉ乃至（III）－iiiから選択される少なくとも１種であることを特徴とする、第八の発明に記載の腸管吸収用組成物。
（III）－ｉ：難吸収性低分子化合物
（III）－ii：中分子化合物
（III）－iii：高分子化合物<Ninth Invention>
(III) The composition for intestinal absorption according to the eighth invention, wherein the substance to be administered is at least one selected from (III)-i to (III)-iii below.
(III)-i: Poorly absorbable low-molecular-weight compound (III)-ii: Medium-molecular-weight compound (III)-iii: Polymer compound
＜第十の発明＞
第一の発明乃至第七の発明のいずれか１項記載の補助剤とともに、下記（III）－iii－ａ－１を含むことを特徴とする、インスリンの失活又は欠乏に起因する疾患の予防及び／又は治療剤。
（III）－iii－ａ－１：インスリン又はその誘導体<Tenth invention>
Prevention of diseases caused by insulin inactivation or deficiency, characterized by containing the following (III)-iii-a-1 together with the adjuvant according to any one of the first to seventh inventions and/or therapeutic agents.
(III)-iii-a-1: insulin or a derivative thereof
本発明の腸管吸収用補助剤は、低張液を主な成分とし、小腸透過ペプチド等の特殊な薬剤の併用も不要であるという極めて簡素な構成にも関わらず、投与目的物質、中でもこれまで腸管吸収が極めて困難とされてきた中・高分子化合物を、腸管から確実に吸収させることができるという利点を有している。
しかも、本発明の腸管吸収用補助剤自体に消化管細胞に対する細胞傷害性は見られず、（III）投与目的物質の、安全な腸管吸収促進が可能である。
またナノサイズ以下（１μｍ未満）の気泡を更に含有する本発明の腸管吸収用補助剤の場合には、投与目的物質を各種の消化酵素等による分解・失活等から保護する効果が本発明によって確認されたため、腸管吸収後にもその活性を充分に発揮させ得ることが判明した。The intestinal absorption adjuvant of the present invention is composed mainly of a hypotonic solution and does not require a combination of special drugs such as small intestinal permeable peptides. It has the advantage of being able to reliably absorb medium- and high-molecular weight compounds, which have been thought to be extremely difficult to absorb from the intestinal tract, from the intestinal tract.
Moreover, the intestinal absorption adjuvant of the present invention itself does not exhibit cytotoxicity to gastrointestinal cells, and (III) it is possible to safely promote intestinal absorption of the substance to be administered.
In addition, in the case of the intestinal absorption adjuvant of the present invention, which further contains nano-sized (less than 1 μm) air bubbles, the effect of protecting the substance to be administered from decomposition, deactivation, etc. by various digestive enzymes etc. is achieved by the present invention. Therefore, it was found that the activity can be fully exerted even after intestinal absorption.
以下、本発明を詳細に説明する。The present invention will be described in detail below.
［本発明の腸管吸収用補助剤］
本発明の「腸管吸収用補助剤」は、（III）投与目的物質を腸管を経由して吸収させるための補助剤であって、下記（Ｉ）を含むことを特徴とするものである。
（Ｉ）低張液を含む溶媒[Adjuvant for intestinal absorption of the present invention]
The "intestinal absorption adjuvant" of the present invention is (III) an adjuvant for the absorption of a substance to be administered via the intestinal tract, and is characterized by containing the following (I).
(I) a solvent containing a hypotonic solution
尚、本発明において「腸管吸収」とは、腸壁を通して吸収されることを言い、
本発明の「腸管吸収用補助剤」とは、その剤形や投与方法に関わらず、腸管吸収を促進する補助剤を意味する。In the present invention, "intestinal absorption" refers to absorption through the intestinal wall,
The "intestinal absorption adjuvant" of the present invention means an adjuvant that promotes intestinal absorption, regardless of its dosage form or administration method.
《（Ｉ）低張液を含む溶媒》
本発明において（Ｉ）低張液を含む溶媒とは、低張液を主たる成分とする溶媒を言い、（Ｉ）の溶媒に用いられる「低張液」とは、生体内の溶液（体液、血液等）よりも浸透圧の低い溶液を意味する。<<(I) a solvent containing a hypotonic solution>>
In the present invention, (I) a solvent containing a hypotonic solution refers to a solvent containing a hypotonic solution as a main component. It means a solution with a lower osmotic pressure than blood, etc.).
具体的には、体液（血漿）の浸透圧である、約２８５±５ｍＯｓｍ（ミリオスモル）／Ｌよりも低い浸透圧を有する液体を意味し、例えば下記のようなものが挙げられるが、これらに限定されるものではない。Specifically, it means a liquid having an osmotic pressure lower than about 285 ± 5 mOsm (milliosmol) / L, which is the osmotic pressure of body fluids (plasma). not to be
（Ｉ）－ｉ：超純水（明確な定義や国際規格等は無いが、医療用途に用いられる超純水（Ultrapure water）等が挙げられる。）
（Ｉ）－ii：逆浸透水（ＲＯ（reverse osmosis）水：高張液側へ移動した純水を、半透膜（逆浸透膜）を介してポンプなどで再び低張液側に押し戻す逆浸透現象を利用することによって得られる純度の高い水）
（Ｉ）－iii：改質逆浸透水（modified RO water）
（Ｉ）－iv：生理食塩水とブドウ糖液からなる「低張電解質輸液」（１～４号液）
（Ｉ）－v：注射用蒸留水
（Ｉ）－vi：精製水
（Ｉ）－vii：イオン交換水(I)-i: ultrapure water (although there is no clear definition or international standard, examples include ultrapure water used for medical purposes.)
(I)-ii: Reverse osmosis water (RO (reverse osmosis) water: Reverse osmosis in which pure water that has moved to the hypertonic liquid side is pushed back to the hypotonic liquid side by a pump or the like through a semipermeable membrane (reverse osmosis membrane). high-purity water obtained by utilizing the phenomenon)
(I)-iii: modified RO water
(I)-iv: "Hypotonic electrolyte infusion" consisting of physiological saline and glucose solution (No. 1 to 4 solutions)
(I)-v: distilled water for injection (I)-vi: purified water (I)-vii: deionized water
但し、上記の中でも、細胞傷害性の少ないものが好ましいものとして挙げられる。However, among the above, those with low cytotoxicity are preferred.
（Ｉ）－iiiの「改質逆浸透水」とは、例えば０．１μ以下のポアサイズの濾過膜を半透膜（逆浸透膜）として用いた、備長炭含有ミネラルのごく一部を強制通過させた水等を意味する。(I)-iii "Modified reverse osmosis water" is, for example, a filtration membrane with a pore size of 0.1μ or less as a semi-permeable membrane (reverse osmosis membrane), forcing a small amount of Bincho charcoal-containing minerals to pass through. It means water etc.
尚、本発明の（Ｉ）には、上述の低張液以外に、本発明の目的を阻害しない範囲で、各種の添加剤等を含有させることができる。
具体的には、例えば腸管吸収用補助剤全体の浸透圧を、約２８５±５ｍＯｓｍ（ミリオスモル）／Ｌ未満に維持できる範囲で、等張液や高張液その他の溶媒や各種の添加剤を含有させることができる。In addition to the hypotonic solution described above, (I) of the present invention may contain various additives and the like within a range that does not hinder the object of the present invention.
Specifically, for example, an isotonic solution, a hypertonic solution, other solvents, and various additives are contained within a range in which the osmotic pressure of the entire intestinal absorption adjuvant can be maintained at less than about 285±5 mOsm (milliosmoles)/L. be able to.
《（II）ナノサイズ以下（１μｍ未満）の気泡》
本発明の腸管吸収用補助剤には、更に下記の（II）を含有させることができる。<<(II) Bubbles of nano size or less (less than 1 μm)>>
The intestinal absorption adjuvant of the present invention can further contain (II) below.
（II）ナノサイズ以下（１μｍ未満）の気泡(II) Bubbles of nano size or less (less than 1 μm)
（気泡中の気体の種類）
本発明で用いられる（II）のナノサイズ以下の気泡中の「気体成分」としては、例えば下記の１種又は２種以上であることが好ましいが、必ずしもこれらに限定されるものでは無い。(Type of gas in bubble)
The "gas component" in the (II) nano-sized or smaller bubbles used in the present invention is preferably one or more of the following, but is not necessarily limited thereto.
（II）－（ｉ）：大気
（II）－（ii）：水素
（II）－（iii）：窒素
（II）－（iv）：オゾン
（II）－（ｖ）：酸素
（II）－（vi）：二酸化炭素
（II）－（vii）：アルゴン(II) - (i): atmosphere (II) - (ii): hydrogen (II) - (iii): nitrogen (II) - (iv): ozone (II) - (v): oxygen (II) - ( vi): carbon dioxide (II) - (vii): argon
（II）－（ｉ）の大気を単独で用いる場合、例えば（II）－（ii）乃至（II）－（vii）のような特別な「気体成分」を準備しなくて良い点で、現実的であり、好ましい。When the atmosphere of (II)-(i) is used alone, there is no need to prepare special "gas components" such as (II)-(ii) to (II)-(vii), is targeted and desirable.
尚、「大気」あるいは「２種以上の混合気体」を（Ｉ）の溶媒に導入した場合の、「溶媒（Ｉ）中に発生した気泡（II）」中の「各気体成分の封入比率」を正確に測定することは、現在の技術では容易ではない。
溶媒（Ｉ）中に気泡（II）を発生させる過程で、溶媒（Ｉ）中に溶け込み得る「量」や「スピード」が、「気体成分」毎に異なり、また、発生した気泡（II）中に封入された「気体成分」の「種類」や「比率」を正確に判定すること自体が容易ではないからである。
しかしながら、例えば「気体成分（仮にＸとする。）」を単独あるいは大気と併用して用いた場合には、大気のみを用いる場合に比べて、「溶媒（Ｉ）中に発生した気泡（II）」中の、「気体成分（Ｘ）」の「封入比率」が高くなる筈であり、それによって、上述したような、「気体成分（Ｘ）」の特性を、より活かすことができると考えられる。In addition, when "air" or "mixed gas of two or more types" is introduced into the solvent (I), the "filling ratio of each gas component" in the "bubbles (II) generated in the solvent (I)" Accurately measuring is not easy with current technology.
In the process of generating bubbles (II) in solvent (I), the "amount" and "speed" that can be dissolved in solvent (I) differ for each "gas component", and the generated bubbles (II) This is because it is not easy to accurately determine the "kind" and "ratio" of the "gas components" enclosed in the gas.
However, for example, when the "gas component (assumed to be X)" is used alone or in combination with the atmosphere, compared to the case of using only the atmosphere, "bubbles (II) generated in the solvent (I) ”, the “encapsulation ratio” of “gas component (X)” should be high, and it is believed that the characteristics of “gas component (X)” as described above can be further utilized. .
尚、気泡中の水素の比率を、大気を単独で使用した場合よりも高めると、下記のメリットが期待できるため好ましい。It should be noted that if the ratio of hydrogen in the bubbles is higher than that in the case of using air alone, the following merits can be expected, which is preferable.
１，水素を使用した本発明のナノバブル水の酸化還元電位（ターゲットは-150mV±15mV）が、腸管内環境の酸化還元電位（－50mV～－250mV）と同程度の低さであることから、それに被覆された（III）投与目的物質が腸壁に定着し易く、腸上皮細胞表面における物質濃度が高くなることから、細胞内外の濃度差が高まり受動拡散が促進され、対象物への腸管吸収促進効果が高いと考えられること。1. Since the oxidation-reduction potential of the nanobubble water of the present invention using hydrogen (target is -150 mV ± 15 mV) is as low as the oxidation-reduction potential of the intestinal environment (-50 mV to -250 mV), (III) The substance to be administered that is coated thereon easily settles on the intestinal wall, and the concentration of the substance on the surface of the intestinal epithelial cells increases. Considered to have a high promotional effect.
２，腸管内に炎症がある場合、酸化還元電位が高くなる傾向にあり、免疫反応が亢進して、導入した（III）投与目的物質が、投与対象者の免疫によって跳ね返されがちだが、水素の酸化還元電位の低さによる抗炎症作用で、その反応を和らげることができると考えられること。2. When there is inflammation in the intestinal tract, the oxidation-reduction potential tends to increase, the immune response is enhanced, and the introduced (III) administration target substance tends to be repelled by the administration subject's immunity, but hydrogen Anti-inflammatory effects due to its low redox potential are thought to be able to moderate the reaction.
気泡中の水素の比率を、大気よりも高めるには、水素単独を用いるほか、大気と水素を併用する方法等が挙げられる。In order to make the ratio of hydrogen in the bubbles higher than that in the air, hydrogen alone may be used, or air and hydrogen may be used in combination.
この場合、大気と水素単独の気体を同時に封入しても良いが、大気と共に封入する水素の濃度を段階的に増やしていく、あるいは、当初は大気単独を用い、後半の段階で、水素を封入する等の方法が挙げられ、これらの方法を用いることで、溶媒中への溶解等による水素の損失が最小限に抑えられ、より多くの水素を気泡中に封入することができると考えられる。In this case, air and hydrogen gas alone may be enclosed at the same time, but the concentration of hydrogen to be enclosed together with the air is increased step by step, or air alone is initially used and hydrogen is enclosed in the latter stage. By using these methods, the loss of hydrogen due to dissolution in the solvent, etc. can be minimized, and more hydrogen can be enclosed in the bubbles.
大気と水素を同時に用いる場合の比率は、特に制限されるものでは無いが、例えば封入操作に使用する「（ii）水素」の量を、使用する「（ｉ）大気」の量の１０倍以上とすることが好ましいと考えられ、より好ましくは、使用する「（ｉ）大気」の量の１００倍以上である。The ratio when the atmosphere and hydrogen are used at the same time is not particularly limited, but for example, the amount of "(ii) hydrogen" used in the sealing operation is 10 times or more the amount of "(i) atmosphere" used. and more preferably at least 100 times the amount of "(i) air" used.
（気泡の大きさ）
本発明の「腸管吸収用補助剤」に用いられる「（II）ナノサイズ以下（１ミクロン未満）の気泡」の大きさは、主にナノサイズ以下（１ミクロン未満）である必要がある一方で、具体的な大きさは、この補助剤によって腸管から吸収させる（III）投与目的物質の種類やサイズ等によって、臨機応変に変更することができる。(Bubble size)
The size of "(II) nano-sized or smaller (less than 1 micron) bubbles" used in the "intestinal absorption adjuvant" of the present invention needs to be mainly nano-sized or smaller (less than 1 micron). The specific size can be changed according to circumstances, depending on the type and size of the substance (III) to be administered through the intestinal tract by this adjuvant.
具体的には、「（II）ナノサイズ以下（１ミクロン未満）の気泡」の大きさが、例えば９００ｎｍ以下程度が好ましく、より好ましくは数百ｎｍ以下である。特に数十ｎｍ以下、更には数ｎｍ以下であると、腸管への（III）投与目的物質の吸収スピードや吸収割合が格段に向上する可能性があるため好ましい。Specifically, the size of "(II) bubbles of nano size or less (less than 1 micron)" is preferably about 900 nm or less, more preferably several hundred nm or less. In particular, when the size is several tens of nm or less, more preferably several nm or less, the absorption speed and absorption rate of (III) the substance to be administered into the intestinal tract may be remarkably improved, which is preferable.
但し、数百ｎｍ程度でも本発明の効果を十分発揮し得ることから、気泡の大きさは、現実的には、気泡を小さくする製造コストとのバランスから決定すれば良い。However, since the effect of the present invention can be sufficiently exhibited even with a thickness of several hundred nanometers, the size of the bubble may be determined in consideration of the balance with the manufacturing cost for reducing the size of the bubble.
（全気泡中のナノサイズ以下の気泡の比率）
「腸管吸収用補助剤」中の全気泡中、「（II）ナノサイズ以下の気泡）」が必ずしも１００％である必要は無い。(Ratio of nano-sized or smaller bubbles in all bubbles)
It is not necessary for "(II) nano-sized or smaller air bubbles)" to be 100% in all the air bubbles in the "intestinal absorption adjuvant".
しかし、本発明の「腸管吸収用補助剤」によって腸管内に吸収された（III）投与目的物質が、生体においてその本来の機能、効能、又は効果を充分に発揮するためには、（III）投与目的物質よりも小さい「（II）ナノサイズ以下の気泡」が、（III）投与目的物質の表面又は周囲を被覆等によって保護し、あるいはその表面又は周囲に存在する隙間等から（III）投与目的物質の内側に入り込み、より密接に（III）投与目的物質を保護するためには、少なくとも個々の（III）投与目的物質の表面又は周囲全体を保護し得る程度に多数含んでいることが好ましいと考えられる。However, in order for the (III) administration target substance absorbed into the intestine by the "intestinal absorption adjuvant" of the present invention to fully exhibit its original function, efficacy, or effect in the living body, (III) "(II) Bubbles of nano size or smaller" which are smaller than the substance to be administered protect the surface or surroundings of the substance to be administered (III) by coating, etc., or (III) are administered through gaps existing on the surface or around the substance. In order to get inside the target substance and more closely protect the (III) target substance for administration, it is preferable to contain at least a large number of (III) to the extent that the surface or the entire surroundings of each individual target substance for administration can be protected. it is conceivable that.
更に、ナノサイズよりも大きな気泡の圧壊による補助剤自体の変性が少ない点で、できるだけ「（II）ナノサイズ以下の気泡」の比率が高いことが望ましい。Furthermore, it is desirable that the ratio of "(II) bubbles of nanosize or smaller" is as high as possible, because the adjuvant itself is less denatured due to the crushing of bubbles larger than nanosize.
また、気泡の大きさは、必ずしも均質にはならず、ある程度の気泡径分布を有するのが一般的である。Also, the size of the cells is not necessarily uniform, and generally has a certain degree of cell size distribution.
そのため、具体的な目安としては、気泡の「平均径」が、使用する（III）投与目的物質全体の径よりも充分に小さければ、（III）投与目的物質を保護できるほど小さな気泡も多数含まれると考えられ、例えば、平均気泡径（直径）が１μｍ（１０００ｎｍ）未満の溶液を用いることが好ましく、より好ましくは、平均気泡径９００ｎｍ以下である。Therefore, as a specific guideline, if the "average diameter" of the bubbles used (III) is sufficiently smaller than the overall diameter of the substance to be administered, (III) it contains a large number of bubbles small enough to protect the substance to be administered. For example, it is preferable to use a solution having an average bubble diameter (diameter) of less than 1 μm (1000 nm), more preferably an average bubble diameter of 900 nm or less.
（腸管吸収用補助剤中の気泡の数）
本発明の「腸管吸収用補助剤」中の気泡の数は、多いほうが望ましい。
具体的な数は（III）投与目的物質の種類や濃度によっても異なり、一概には言えないが、「（II）ナノサイズ以下の気泡」を製造することのできる公知の製造機器を用いた場合に一般的に発生し得る、数千個～数億個／ｍｌであれば十分であることが、確認できている。(Number of air bubbles in intestinal absorption adjuvant)
The number of air bubbles in the "intestinal absorption adjuvant" of the present invention is desirably as large as possible.
The specific number varies depending on (III) the type and concentration of the substance to be administered, and it cannot be generalized, but when using a known manufacturing device capable of manufacturing "(II) bubbles of nano-size or less" It has been confirmed that thousands to hundreds of millions of particles/ml, which can generally occur in a normal environment, are sufficient.
しかし、数千万個～数億個／ｍｌであれば、より好ましいと考えられる。
また、生体内の消化酵素による投与目的物質の失活を防ぐ点では、より高濃度のものが好ましく、例えば、数億個／ｍｌ以上が好ましく、より好ましくは１０億個／ｍｌ以上である。However, tens of millions to hundreds of millions of cells/ml are considered more preferable.
Also, from the viewpoint of preventing deactivation of the substance to be administered by digestive enzymes in the body, a higher concentration is preferable, for example, several hundred million cells/ml or more, and more preferably one billion cells/ml or more.
尚、微細な気泡を測定する方法としては、電気的検知帯法（Electrical Sensing Zone Method）として知られる下記のコールター原理を用いた方法が挙げられ、具体的には、ベックマン・コールター株式会社製の「Multisizer3」、「Multisizer4」、「Multisizer4e」等を使用する方法等が挙げられる。
コールター原理とは、１つ又は複数の微細な空孔（アパチャー）が設けられた筒（マノメーター）の内部に、一定量の電解液を流し、マノメーターの内部と外部とに電極を設置して直流電圧（内部がマイナス、外部がプラス電極）を印加し、粒子（気泡等）が検知帯（アパチャー感応領域）を通過する際に生じる、２電極間の電気抵抗の変化を測定することによって、気泡径と気泡の数の分布を測定する方法である。As a method for measuring fine air bubbles, there is a method using the following Coulter principle known as the Electrical Sensing Zone Method. A method using "Multisizer3", "Multisizer4", "Multisizer4e", etc. can be mentioned.
The Coulter Principle is a cylinder (manometer) with one or more fine holes (apertures). By applying a voltage (negative electrode for the inside and positive electrode for the outside) and measuring the change in electrical resistance between the two electrodes that occurs when particles (such as bubbles) pass through the detection zone (aperture sensitive area), air bubbles can be detected. It is a method of measuring the distribution of the diameter and the number of bubbles.
《腸管吸収用補助剤の製造方法》
本発明の「腸管吸収用補助剤」は、（Ｉ）の溶媒中に、(II)の気泡を発生させることによって製造することができる。<<Method for producing intestinal absorption adjuvant>>
The "intestinal absorption adjuvant" of the present invention can be produced by generating bubbles (II) in the solvent (I).
「（Ｉ）の溶媒中に、(II)の気泡を発生させる方法」としては、例えば下記のような方法、あるいはこれらの併用方法等が挙げられるが、これらに限定されるものでは無い。Examples of the "method of generating bubbles (II) in the solvent (I)" include, but are not limited to, the following methods, or a combination thereof.
気液混合せん断方式：
気体を液体と共に高速旋回させる方法である。Gas-liquid mixed shear method:
This is a method of swirling gas and liquid at high speed.
超音波方式：
液体に、衝撃波やキャビテーションを加えて、一旦できた気泡を更に圧壊する方法である。Ultrasonic method:
In this method, a shock wave or cavitation is applied to the liquid to further crush the bubbles once formed.
加圧溶解方式：
気体と液体に圧力をかけ、一気に放出することで、気泡を発生させる方法である。Pressurized melting method:
It is a method of generating air bubbles by applying pressure to gas and liquid and releasing them all at once.
微細孔方式：
オリフィス等を用い、圧力をかけながら気体を供給する方法である。Micropore method:
This is a method of supplying gas while applying pressure using an orifice or the like.
電気分解方式：
水溶液中に浸漬した細線から、気体を発生させる方法である。Electrolysis method:
This is a method of generating gas from a fine wire immersed in an aqueous solution.
上記の中でも、「気液混合せん断方式」は、マイクロバブルの更なるせん断処理により、安定したナノサイズ以下の気泡を発生させることができるため好ましい。Among the above methods, the "gas-liquid mixed shearing method" is preferable because it can generate stable bubbles of nano-size or less by further shearing the microbubbles.
また、具体的には、例えば、下記１）及び２）等の市販の装置を併用する等して、ナノバブルを発生させることができる。
１）協和機設社製マイクロナノバブル発生装置「バヴィタス（登録商標）HYK-25」による、直径１マイクロメートル以下の気泡生成（回転せん断方式）
２）株式会社亞八和社製「νＧ７（登録商標）」によるマイクロナノバブルの、ナノバブル化（ステンレス製フィルター）Further, specifically, for example, nanobubbles can be generated by using commercially available devices such as the following 1) and 2).
1) Micro-nano bubble generator "Bavitus (registered trademark) HYK-25" manufactured by Kyowa Kisetsu Co., Ltd. generates bubbles with a diameter of 1 micrometer or less (rotational shear method)
2) Converting micro-nano bubbles to nanobubbles (stainless steel filter) using “νG7 (registered trademark)” manufactured by Ahachiwa Co., Ltd.
尚、本件発明者によって開発された、下記特許出願に記載の「ウルトラファインバブル（ＮＢ）発生装置」を使用すると、気泡の粒径が１μｍ未満、例えば平均気泡径が数ｎｍ～数百ｎｍのオーダーで、且つ濃度の濃いナノバブル水を、効率良く生成することができるため、特に好ましい。
特願２０２０－５７１７６In addition, when using the "ultra-fine bubble (NB) generator" described in the following patent application developed by the present inventor, the particle diameter of the bubbles is less than 1 μm, for example, the average bubble diameter is several nm to several hundred nm. It is particularly preferable because it is possible to efficiently generate nanobubble water in order and with a high concentration.
Patent application 2020-57176
《気泡濃度の制御》
本発明の「腸管吸収用補助剤」に含有される「 (II) ナノサイズ以下の気泡」の濃度は、用途等に応じて、下記の方法等に従って、適宜制御することができる。
ｉ）「(II)ナノサイズ以下の気泡」の濃度を低くする方法：
（Ｉ）中に一旦気泡を発生させた後、（Ｉ）の溶媒やその他の溶媒を更に加えて、希釈する方法。
但し、この場合、「腸管吸収用補助剤」全体の浸透圧を、約２８５±５ｍＯｓｍ（ミリオスモル）／Ｌ未満に維持することが好ましい。
ｉｉ）「(II)ナノサイズ以下の気泡」の濃度を高くする方法：
ｉｉ）－１：上述の装置を用いて気泡含有溶媒を作製する段階で、旋回数，旋回時間，圧力，攪拌数，せん断時間等を増やす方法。
ｉｉ）－２：一旦作成した気泡含有溶媒を、限外濾過等の方法で、濾過して濃縮する方法。
具体的には、例えばマクロセップ アドバンス 遠心濾過デバイス（日本ポール（株））等の容器に気泡含有溶媒（原液）を入れ、マイクロ冷却遠心機（久保田商事（株）、Model 3740）を用いた限外濾過等で濃縮することによって、簡便かつ効率的に濃縮することができる。
濃縮倍率は、原液の濃度や装置の条件等によって変化するが、例えば約３０倍に濃縮することが可能である。<<Control of Bubble Density>>
The concentration of the "(II) nano-sized or smaller air bubbles" contained in the "intestinal absorption adjuvant" of the present invention can be appropriately controlled according to the use, etc., according to the method described below.
i) How to reduce the concentration of "(II) nano-sized or smaller bubbles":
A method of once generating air bubbles in (I) and then further adding the solvent of (I) or another solvent for dilution.
However, in this case, it is preferable to maintain the osmotic pressure of the entire "intestinal absorption adjuvant" at less than about 285±5 mOsm (milliosmol)/L.
ii) How to increase the concentration of "(II) nano-sized or smaller bubbles":
ii)-1: A method of increasing the swirling number, swirling time, pressure, stirring number, shearing time, etc. at the stage of preparing the bubble-containing solvent using the above apparatus.
ii)-2: A method of filtering and concentrating the foam-containing solvent once prepared by a method such as ultrafiltration.
Specifically, for example, a bubble-containing solvent (undiluted solution) is placed in a container such as Macrosep Advance Centrifugal Filtration Device (Nippon Pall Co., Ltd.), and ultracentrifugation is performed using a micro-refrigerated centrifuge (Kubota Shoji Co., Model 3740). By concentrating by filtration or the like, the concentration can be easily and efficiently performed.
The concentration ratio varies depending on the concentration of the stock solution, the conditions of the apparatus, etc., but it is possible to concentrate the solution about 30 times, for example.
尚、「（II）ナノサイズ以下の気泡」を含有させることによる、浸透圧への影響は、殆ど無いと考えられる。In addition, it is considered that the osmotic pressure is hardly affected by the inclusion of "(II) nano-sized or smaller bubbles".
《その他の成分》
尚、本発明の「腸管吸収用補助剤」には、（Ｉ）及び（II）以外に、本発明の目的を阻害しない範囲で、各種の溶媒や添加剤等を含有させることができる。《Other Ingredients》
In addition to (I) and (II), the "intestinal absorption adjuvant" of the present invention may contain various solvents, additives, and the like within a range that does not impede the purpose of the present invention.
《投与形態（剤形）》
本発明の「腸管吸収用補助剤」の形態は、特に限定されるものではなく、液状、ゲル状、ゾル状（含：コロイド等）、クリーム状等の種々の形態が挙げられるが、本発明の腸管吸収用補助剤に、（II）の気泡が含まれる場合には、気泡の保存安定性に優れる形態が好ましい。<<Dosage form (dosage form)>>
The form of the "intestinal absorption adjuvant" of the present invention is not particularly limited, and includes various forms such as liquid, gel, sol (including colloid, etc.), and cream. When the intestinal absorption adjuvant of (II) contains air bubbles, a form in which the air bubbles are excellent in storage stability is preferred.
《投与量》
本発明の「腸管吸収用補助剤」の投与量は、この補助剤によって腸管吸収性を促進すべき「（III）投与目的物質」の活性や含有量、疾患の具体的な種類、症状の程度、年齢、性別、体重、投与形態等に応じて適宜選ぶことができ、一概には規定できないが、一例としては、通常成人として１日あたり、約０．０３～１０００ｍｇ、好ましくは０．１～５００ｍｇ、更に好ましくは０．１～１００ｍｇを１日１～数回に分けて投与する方法等が挙げられる。"Dose"
The dosage of the "intestinal absorption adjuvant" of the present invention depends on the activity and content of "(III) administration target substance" that should promote intestinal absorption by this adjuvant, the specific type of disease, and the degree of symptoms. , Age, sex, body weight, administration form, etc., can be appropriately selected, and can not be defined unconditionally. A method of administering 500 mg, more preferably 0.1 to 100 mg in divided doses once to several times a day may be mentioned.
尚、本発明の「腸管吸収用補助剤」を、「（III）を含有する経口製剤」を飲む際の嚥下補助としてと使用する場合には、更に多量の「腸管吸収用補助剤」を使用することもできる。When the "intestinal absorption adjuvant" of the present invention is used as a swallowing aid when taking the "oral preparation containing (III)", a larger amount of the "intestinal absorption adjuvant" is used. You can also
《用途》
本発明の「腸管吸収用補助剤」は、後述する「（III）投与目的物質」と、ほぼ同時にあるいは少しの時間差（例えば数秒～数分内）で生体内に投与するために用いることができる。
また本発明の「腸管吸収用補助剤」は、後述する本発明の「腸管吸収用組成物」の構成材料として使用することができる。《Application》
The "intestinal absorption adjuvant" of the present invention can be used for in vivo administration to the "(III) substance to be administered" described below almost simultaneously or with a slight time difference (for example, within several seconds to several minutes). .
The "intestinal absorption adjuvant" of the present invention can also be used as a constituent material of the "composition for intestinal absorption" of the present invention, which will be described later.
《投与方法》
本発明の「腸管吸収用補助剤」の投与方法は、薬物吸収の態様が腸管吸収であれば、特に限定されず、注腸カテーテルや経口投与等が挙げられるが、経口投与によるものが、投与の対象者である患者自身の負担が少ない点で、好ましい。《Administration method》
The administration method of the "intestinal absorption adjuvant" of the present invention is not particularly limited as long as the mode of drug absorption is intestinal absorption, and examples thereof include enema catheterization and oral administration. It is preferable in that the burden on the patient who is the subject of the treatment is small.
《（III）投与目的物質》
本発明において、腸管より吸収させる対象である「（III）投与目的物質」としては、低分子量化合物から中分子・高分子量化合物（又はこれらの誘導体）まで、幅広い分子量の化合物が挙げられるが、本発明は、これまで腸管吸収が特に困難とされてきた「（III）－ｉ：難吸収性低分子化合物」、「（III）－ii：中分子化合物」、又は「（III）－iii：高分子化合物」等に特に有用である。<<(III) Substance to be administered>>
In the present invention, the "(III) substance to be administered" to be absorbed from the intestinal tract includes compounds with a wide range of molecular weights, from low molecular weight compounds to medium and high molecular weight compounds (or derivatives thereof). The invention relates to "(III)-i: Poorly absorbable low-molecular-weight compound", "(III)-ii: Middle-molecular-weight compound", or "(III)-iii: Highly It is particularly useful for "molecular compounds" and the like.
低分子化合物、中分子化合物、高分子化合物の明確な線引きは困難であるが、一般的には、下記のように分類されている。
しかし、当然ながら下記の例示や定義に限定されるものではない。Although it is difficult to draw a clear line between low-molecular-weight compounds, middle-molecular-weight compounds, and high-molecular-weight compounds, they are generally classified as follows.
However, it is of course not limited to the following examples and definitions.
低分子化合物：
化学構造の小さな、いわゆる低分子医薬や、難消化性のオリゴ糖（分子量３００～５００未満）等の、
例えば、分子量が約５００未満の化合物等が例として挙げられるが、これらに限定されるものではない。Low molecular compound:
So-called low-molecular-weight drugs with small chemical structures, indigestible oligosaccharides (
Examples include, but are not limited to, compounds having a molecular weight of less than about 500.
中でも、「BCS Class III（高溶解性‐低透過性医薬品）に属する低分子化合物、例えばＦａｍｏｔｉｄｉｎｅなど、あるいはビンブラスチンなど排出トランスポーター基質となる化合物のような、これまで腸管吸収が特に困難とされてきた「（III）－ｉ：難吸収性低分子化合物」が、本発明の補助剤による効果が高いため、好ましいものとして例示される。Among them, low-molecular-weight compounds belonging to BCS Class III (highly soluble-low-permeable drugs), such as famotidine, and compounds that serve as excretion transporter substrates such as vinblastine, have been particularly difficult to absorb through the intestinal tract. In addition, "(III)-i: Poorly absorbable low-molecular-weight compound" is exemplified as a preferable one because the adjuvant of the present invention is highly effective.
（III）－ii：中分子化合物：
シクロスポリンA（分子量約１２０２）等のペプチド製剤又はその誘導体（（III）－ii－ａ）、難消化性のオリゴ糖（分子量５００～数千）等の、
例えば、分子量が約５００～数千までの化合物等が例として挙げられるが、これらに限定されるものではない。(III)-ii: middle molecular compound:
Peptide preparations such as cyclosporine A (molecular weight about 1202) or derivatives thereof ((III)-ii-a), indigestible oligosaccharides (molecular weight 500 to several thousand), etc.
Examples include, but are not limited to, compounds having a molecular weight of about 500 to several thousand.
（III）－iii：高分子化合物：
インスリン（分子量約５８００）又はその誘導体（（III）－iii－ａ－１）等の蛋白質製剤（（III）－iii－ａ）等、
抗体医薬、
デキストラン（分子量約４０００のデキストラン４、分子量約４万のデキストラン４０、分子量約７．５万のデキストラン７０等）又はその誘導体（（III）－iii－ｂ－１）等の多糖類等（（III）－iii－ｂ）、難消化性のオリゴ糖（分子量数千～３００００）、
その他の一般的に注射で用いられているバイオ医薬品等の、
例えば、分子量が約数千～１５万くらいの化合物等が例として挙げられるが、これらに限定されるものではない。(III)-iii: polymer compound:
Protein preparations ((III)-iii-a) such as insulin (molecular weight about 5800) or derivatives thereof ((III)-iii-a-1), etc.
antibody drug,
Polysaccharides such as dextran (
Other biopharmaceuticals commonly used for injection,
Examples include, but are not limited to, compounds having a molecular weight of about several thousand to about 150,000.
尚、本発明において用いられる「（III）－iii－ａ－１：インスリン又はその誘導体」には、天然由来のもの、人工的に作成したもの、あるいは半人工的に作成したもの等が含まれる。Incidentally, "(III)-iii-a-1: insulin or derivative thereof" used in the present invention includes those derived naturally, those produced artificially, those produced semi-artificially, and the like. .
天然由来のものとしては、ヒト又はヒト以外の動物から抽出したものが挙げられる。
ヒト以外の動物としては、ほ乳類等が挙げられ、中でも豚由来のものが、ヒトのインスリンに近い性質を有する点で好ましい。Those derived from nature include those extracted from humans or non-human animals.
Examples of non-human animals include mammals, etc. Among them, those derived from pigs are preferable in that they have properties similar to those of human insulin.
半人工的に作成したものとしては、上述のヒト又はヒト以外の動物から抽出したインスリン遺伝子から作成したもの等が挙げられる。Examples of semi-artificially produced insulins include those prepared from insulin genes extracted from humans or non-human animals as described above.
人工的に作成したものとしては、
１）人工的に合成した「インスリン遺伝子」を発現させた「インスリン」
２）天然から抽出した「インスリン遺伝子」の一部を、欠失、置換、付加及び／又は挿入した組み替え遺伝子を発現させた「遺伝子組み換えインスリン」（例：超速効型インスリンアナログ製剤等）、
３）２）の組み換え遺伝子配列を、一から人工的に合成した遺伝子を発現させた「インスリン類縁体」
４）天然、半合成、人工合成したインスリンに糖鎖付加等の修飾が施された「インスリン誘導体」
等が挙げられる。As artificially created
1) “Insulin” in which an artificially synthesized “insulin gene” is expressed
2) "genetically-recombinant insulin" (e.g., ultra-rapid-acting insulin analog preparations, etc.) expressing a recombinant gene in which a part of the "insulin gene" extracted from nature is deleted, substituted, added, and/or inserted;
3) "Insulin analogues" expressed by artificially synthesizing the recombinant gene sequence of 2) from scratch
4) “Insulin derivatives” which are natural, semi-synthetic, or artificially synthesized insulins with modifications such as glycosylation.
etc.
更に、本発明で用いられるインスリンには、六量体のように、複数の分子が凝集した多量体の場合も含まれる。Furthermore, the insulin used in the present invention also includes multimers in which multiple molecules are aggregated, such as hexamers.
［本発明の腸管吸収用組成物］
本発明の「腸管吸収用組成物」は、上記本発明の「腸管吸収用補助剤」とともに、上述の（III）投与目的物質を含むことを特徴とするものである。[Composition for intestinal absorption of the present invention]
The "composition for intestinal absorption" of the present invention is characterized by containing the above-mentioned (III) substance for administration together with the "adjuvant for intestinal absorption" of the present invention.
本発明の「腸管吸収用組成物」とは、その剤形や投与方法に関わらず、腸管から吸収される「組成物」又は「薬剤」を意味する。The "composition for intestinal absorption" of the present invention means a "composition" or "drug" that is absorbed from the intestinal tract, regardless of its dosage form or administration method.
《その他の成分》
尚、本発明の「腸管吸収用組成物」には、（Ｉ）、（II）、及び（III）以外に、本発明の目的を阻害しない範囲で、各種の添加剤等を含有させることができる。《Other Ingredients》
In addition to (I), (II), and (III), the "composition for intestinal absorption" of the present invention may contain various additives within a range that does not hinder the object of the present invention. can.
《投与形態（剤形）》
本発明の「腸管吸収用組成物」の形態は、特に限定されるものではなく、液状、ゲル状、ゾル状（含：コロイド等）、クリーム状、ソフトカプセルや腸溶カプセル等のカプセル剤等の種々の形態が挙げられるが、本発明の腸管吸収用組成物に、（II）の気泡が含まれる場合には、気泡の保存安定性に優れる形態が好ましい。<<Dosage form (dosage form)>>
The form of the "composition for intestinal absorption" of the present invention is not particularly limited. There are various forms, but when the composition for intestinal absorption of the present invention contains air bubbles (II), a form in which the air bubbles are excellent in storage stability is preferred.
尚、腸溶カプセルとは、薬の錠剤やカプセルを、小腸等に到達してから溶けるような物質で被膜したカプセルを言う。An enteric-coated capsule is a drug tablet or capsule coated with a substance that dissolves after reaching the small intestine.
《投与方法》
本発明の「腸管吸収用組成物」の投与方法は、薬物吸収の態様が腸管吸収であれば、特に限定されず、注腸カテーテルや経口投与等が挙げられるが、経口投与によるものが、投与の対象者である患者自身の負担が少ない点で、好ましい。《Administration method》
The administration method of the "composition for intestinal absorption" of the present invention is not particularly limited as long as the mode of drug absorption is intestinal absorption, and examples thereof include enema catheterization and oral administration. It is preferable in that the burden on the patient who is the subject of the treatment is small.
《投与量》
本発明の「腸管吸収用組成物」の投与量は、含有する「（III）投与目的物質」の活性や含有量、疾患の具体的な種類、症状の程度、年齢、性別、体重、投与形態等に応じて適宜選ぶことができ、一概には規定できないが、一例としては、通常成人として１日あたり、約０．０３～１０００ｍｇ、好ましくは０．１～５００ｍｇ、更に好ましくは０．１～１００ｍｇを１日１～数回に分けて投与する方法等が挙げられる。"Dose"
The dosage of the "composition for intestinal absorption" of the present invention is determined by the activity and content of the "(III) substance to be administered" contained, the specific type of disease, the degree of symptoms, age, sex, body weight, and dosage form. It can be selected as appropriate according to the condition, etc., and cannot be defined unconditionally, but as an example, it is usually about 0.03 to 1000 mg, preferably 0.1 to 500 mg, more preferably 0.1 to 0.1 mg per day for an adult. Examples include a method of administering 100 mg in divided doses once to several times a day.
《組成物の製造方法》
本発明の「腸管吸収用組成物」は、上述の「腸管吸収用補助剤」を予め製造したのちに、「（III）投与目的物質」と混合しても良いが、「腸管吸収用補助剤」の製造過程において、「（III）投与目的物質」を混合しても良い。<<Method for producing composition>>
The "composition for intestinal absorption" of the present invention may be mixed with "(III) substance to be administered" after the above-mentioned "adjuvant for intestinal absorption" is prepared in advance. may be mixed with "(III) substance to be administered" in the manufacturing process of ".
《用途》
本発明の「腸管吸収用組成物」は、インスリン等の高分子の腸管吸収を促進することができるため、下記の「インスリンの失活又は欠乏に起因する疾患の予防及び／又は治療剤」として使用することができる。《Application》
Since the "composition for intestinal absorption" of the present invention can promote intestinal absorption of macromolecules such as insulin, it can be used as a "prophylactic and/or therapeutic agent for diseases caused by insulin inactivation or deficiency" below. can be used.
［本発明のインスリンの失活又は欠乏に起因する疾患の予防及び／又は治療剤］
本発明の「インスリンの失活又は欠乏に起因する疾患の予防及び／又は治療剤」には、上記本発明の「腸管吸収用補助剤」とともに、下記（III）－iii－ａ－１を含むことを特徴とするものである。[Preventive and/or therapeutic agent for diseases caused by insulin inactivation or deficiency according to the present invention]
The "prophylactic and/or therapeutic agent for diseases caused by insulin inactivation or deficiency" of the present invention includes the following (III)-iii-a-1 together with the above-mentioned "intestinal absorption adjuvant" of the present invention. It is characterized by
（III）－iii－ａ－１：インスリン又はその誘導体(III)-iii-a-1: insulin or a derivative thereof
（III）－iii－ａ－１のインスリン又はその誘導体の詳細な内容については、上述の通りである。(III)-iii-a-1 The details of insulin or its derivative are as described above.
インスリンの欠乏に起因する疾患としては、例えば下記のようなものが挙げられるが、これらに限定されるものではない。Examples of diseases caused by insulin deficiency include, but are not limited to, the following.
Ｉ型糖尿病
II型糖尿病Type I diabetes
Type II diabetes
《その他の成分》
尚、本発明の上記「予防及び／又は治療剤」には、（Ｉ）、（II）、及び（III）－iii－ａ－１のインスリン又はその誘導体以外に、本発明の目的を阻害しない範囲で、各種の添加剤等を含有させることができる。《Other Ingredients》
The above-mentioned "prophylactic and/or therapeutic agent" of the present invention includes insulin or derivatives thereof other than (I), (II), and (III)-iii-a-1, which do not inhibit the object of the present invention. Various additives and the like can be contained within the range.
本発明の上記「予防及び／又は治療剤」の、投与形態（剤形）、投与方法、投与量、製法、その他は、上述の「腸管吸収用組成物」の場合と同様である。
上記本発明の「腸管吸収用組成物」は、インスリン等の高分子の腸管吸収を促進することができるため、「インスリンの失活又は欠乏に起因する疾患の予防及び／又は治療剤」として使用することができる。The administration form (dosage form), administration method, dosage, manufacturing method, and others of the above-mentioned "preventive and/or therapeutic agent" of the present invention are the same as in the case of the above-mentioned "composition for intestinal absorption".
Since the "composition for intestinal absorption" of the present invention can promote intestinal absorption of macromolecules such as insulin, it can be used as a "prophylactic and/or therapeutic agent for diseases caused by insulin inactivation or deficiency". can do.
［実施例１～５，比較例１～２：腸管吸収用補助剤］
実施例又は比較例の「腸管吸収用補助剤」として下記のものを準備し、後述する本発明の「腸管吸収用組成物」の原料として使用した。[Examples 1 to 5, Comparative Examples 1 to 2: Auxiliary agents for intestinal absorption]
The following "intestinal absorption adjuvants" for Examples or Comparative Examples were prepared and used as raw materials for the "composition for intestinal absorption" of the present invention, which will be described later.
尚、以下においては、ナノバブル（ナノサイズ以下の気泡）を単に「ＮＢ」と記載する場合がある。In the following, nanobubbles (bubbles of nano size or smaller) may be simply referred to as "NB".
（比較例１：等張液Ａ）
等張液（２８２ｍＯｓｍ／Ｌ）：ＰＢＳ（リン酸緩衝生理食塩水，ｐＨ７．４）(Comparative Example 1: Isotonic solution A)
Isotonic solution (282 mOsm/L): PBS (phosphate buffered saline, pH 7.4)
（比較例２：等張液Ｂ）
比較例１の等張液内に、特許２０２０－５７１７６に記載の「ウルトラファインバブル（ＮＢ）発生装置」を使用することによって、下記の気泡を発生させたもの。
（II）ナノサイズ以下の気泡（平均気泡径：約２００ｎｍ以下，気泡濃度：数億個／ｍｌ，内部気体：大気の一部を３Ｇ純水素（純度９９．９９９）に置換）(Comparative Example 2: Isotonic solution B)
The following bubbles were generated in the isotonic solution of Comparative Example 1 by using the "ultra-fine bubble (NB) generator" described in Patent 2020-57176.
(II) Nano-sized or smaller bubbles (average bubble diameter: about 200 nm or less, bubble concentration: hundreds of millions/ml, internal gas: part of the air is replaced with 3G pure hydrogen (99.999 purity))
（実施例１：低張液Ａ）
低張液（約１３０ｍＯｓｍ／Ｌ以下）：超純水（Ultrapure water）(Example 1: Hypotonic solution A)
Hypotonic solution (about 130 mOsm/L or less): Ultrapure water
（実施例２：低張液Ｂ）
低張液（１００ｍＯｓｍ／Ｌ以下）：上述の（Ｉ）－iii：改質逆浸透水（modified RO water）(Example 2: Hypotonic solution B)
Hypotonic solution (100 mOsm / L or less): above (I)-iii: modified reverse osmosis water (modified RO water)
（実施例３：低張液Ｂ＋ＮＢ（基本濃度のＮＢ））
実施例２の低張液内に、特許２０２０－５７１７６に記載の「ウルトラファインバブル（ＮＢ）発生装置」を使用することによって、下記の気泡を発生させたもの。(Example 3: Hypotonic solution B + NB (basic concentration of NB))
The following bubbles were generated in the hypotonic solution of Example 2 by using the "ultra-fine bubble (NB) generator" described in Patent 2020-57176.
（II）ナノサイズ以下の気泡（平均気泡径：約２００ｎｍ以下，気泡濃度：数億個／ｍｌ，内部気体：大気の一部を３Ｇ純水素（純度９９．９９９）に置換）
尚、気泡濃度の測定には、上述のベックマン・コールター株式会社製「Multisizer4e」を用いた。(II) Nano-sized or smaller bubbles (average bubble diameter: about 200 nm or less, bubble concentration: hundreds of millions/ml, internal gas: part of the air is replaced with 3G pure hydrogen (99.999 purity))
In addition, the above-mentioned "Multisizer 4e" manufactured by Beckman Coulter, Inc. was used to measure the bubble density.
（実施例４：低張液Ｂ＋ＮＢ（低濃度のＮＢ））
実施例３の「低張液Ｂ＋ＮＢ（基本濃度のＮＢ）」の腸管吸収用補助剤を、実施例１の低張液Ａからなる補助剤で、５倍に希釈したもの。(Example 4: Hypotonic solution B + NB (low concentration NB))
The intestinal absorption adjuvant "hypotonic solution B + NB (basic concentration NB)" of Example 3 was diluted 5 times with the adjuvant consisting of hypotonic solution A of Example 1.
（II）ナノサイズ以下の気泡（平均気泡径：約２００ｎｍ以下，気泡濃度：数千～１億個／ｍｌ，内部気体：大気の一部を３Ｇ純水素（純度９９．９９９）に置換）(II) Nano-sized or smaller bubbles (average bubble diameter: about 200 nm or less, bubble concentration: several thousand to 100 million bubbles/ml, internal gas: part of the air is replaced with 3G pure hydrogen (purity 99.999))
（実施例５：低張液Ｂ＋ＮＢ（高濃度のＮＢ））
実施例２の低張液内に、特許２０２０－５７１７６に記載の「ウルトラファインバブル（ＮＢ）発生装置」を使用してＮＢを発生させる際に、実施例３の４倍の時間をかけて攪拌することによって、下記の気泡を発生させたもの。(Example 5: Hypotonic solution B + NB (high concentration NB))
In the hypotonic solution of Example 2, when generating NB using the "ultra-fine bubble (NB) generator" described in Patent 2020-57176, it was stirred for four times as long as in Example 3. By doing so, the following bubbles were generated.
（II）ナノサイズ以下の気泡（平均気泡径：約２００ｎｍ以下，気泡濃度：数億～１０億個／ｍｌ，内部気体：大気の一部を３Ｇ純水素（純度９９．９９９）に置換）(II) Nano-sized or smaller bubbles (average bubble diameter: about 200 nm or less, bubble concentration: several hundred million to one billion/ml, internal gas: part of the air is replaced with 3G pure hydrogen (purity 99.999))
［実施例６～８，比較例３～４：腸管吸収用組成物（（III）投与目的物質：インスリン）］
上述の実施例又は比較例の「腸管吸収用補助剤」を用いて、下記の手順によってインスリン投与液を作成し、本発明の「腸管吸収用組成物（（III）投与目的物質：インスリン（（III）－iii－ａ－１））」とした。[Examples 6 to 8, Comparative Examples 3 to 4: Intestinal Absorption Composition ((III) Target Substance of Administration: Insulin)]
Using the "intestinal absorption adjuvant" of the above Examples or Comparative Examples, an insulin administration solution was prepared according to the following procedure, and the "intestinal absorption composition ((III) substance to be administered: insulin (( III)-iii-a-1))”.
（インスリン投与液の製造方法）
１）固形のインスリン（富士フィルム和光純薬株式会社製，ヒト組換インスリン）２．９０９ｍｇに、０．１Ｍ ＨＣｌ ０．１ｍｌを加えた。
２）１）に、インスリンの容器吸着防止剤として０．００１Ｗ／Ｖ％の下記ＭＣを含有させた上記実施例又は比較例の各「腸管吸収用補助剤」を、各々３．８ｍｌ加えた。
３）２）に、０．１Ｍ ＮａＯＨを０．１ｍｌ加え、インスリン投与液（腸管吸収用組成物）とした。(Method for producing insulin solution)
1) 0.1 ml of 0.1 M HCl was added to 2.909 mg of solid insulin (manufactured by Fujifilm Wako Pure Chemical Industries, Ltd., human recombinant insulin).
2) To 1), 3.8 ml of each "intestinal absorption adjuvant" of the above Examples or Comparative Examples containing 0.001 W/V % of the following MC as an insulin container adsorption inhibitor was added.
3) 0.1 ml of 0.1 M NaOH was added to 2) to prepare an insulin administration liquid (composition for intestinal absorption).
インスリン濃度：２．９０９ｍｇ／４ｍｌ＝０．７２７ｍｇ／ｍｌ≒２０ＩＵ／ｍｌInsulin concentration: 2.909mg/4ml = 0.727mg/ml ≈ 20IU/ml
ＭＣ（メチルセルロース）：信越化学工業（株）製，メトローズ（登録商標）ＳＭ－１５（分子量約６万）MC (methyl cellulose): manufactured by Shin-Etsu Chemical Co., Ltd., Metolose (registered trademark) SM-15 (molecular weight: about 60,000)
（実施例６）
実施例１の「腸管吸収用補助剤（超純水）」を用い、上記の方法に従って、インスリン投与液（実施例６の腸管吸収用組成物）を製造した。(Example 6)
Using the "intestinal absorption adjuvant (ultra-pure water)" of Example 1, an insulin administration solution (composition for intestinal absorption of Example 6) was produced according to the above method.
（実施例７）
実施例２の「腸管吸収用補助剤（modified RO water）」を用い、上記の方法に従って、インスリン投与液（実施例７の腸管吸収用組成物）を製造した。(Example 7)
Using the "adjuvant for intestinal absorption (modified RO water)" of Example 2, an insulin administration liquid (composition for intestinal absorption of Example 7) was produced according to the above method.
（実施例８）
実施例３の「腸管吸収用補助剤（modified RO water＋基本濃度のＮＢ）」を用い、上記の方法に従って、インスリン投与液（実施例８の腸管吸収用組成物）を製造した。(Example 8)
Using the "adjuvant for intestinal absorption (modified RO water + basic concentration of NB)" of Example 3, an insulin administration solution (composition for intestinal absorption of Example 8) was produced according to the above method.
（比較例３）
比較例１の「腸管吸収用補助剤（ＰＢＳ）」を用い、上記の方法に従って、インスリン投与液（比較例３の腸管吸収用組成物）を製造した。(Comparative Example 3)
Using the "intestinal absorption adjuvant (PBS)" of Comparative Example 1, an insulin administration liquid (composition for intestinal absorption of Comparative Example 3) was produced according to the above method.
（比較例４）
比較例２の「腸管吸収用補助剤（ＰＢＳ＋基本濃度のＮＢ）」を用い、上記の方法に従って、インスリン投与液（比較例４の腸管吸収用組成物）を製造した。(Comparative Example 4)
Using the "intestinal absorption adjuvant (PBS+basic concentration of NB)" of Comparative Example 2, an insulin administration solution (composition for intestinal absorption of Comparative Example 4) was produced according to the above method.
［実施例９～１１，比較例５：腸管吸収用組成物（（III）投与目的物質：デキストラン）］
上述の実施例又は比較例の「腸管吸収用補助剤」を用いて、下記の手順によってデキストラン投与液を作成し、本発明の「腸管吸収用組成物（（III）投与目的物質：デキストラン（（III）－iii－ｂ－１））」とした。[Examples 9 to 11, Comparative Example 5: Composition for intestinal absorption ((III) target substance for administration: dextran)]
Using the "intestinal absorption adjuvant" of the above-mentioned Examples or Comparative Examples, a dextran administration solution was prepared by the following procedure, and the "intestinal absorption composition ((III) target substance for administration: dextran (( III)-iii-b-1))”.
（デキストラン投与液の製造方法）
上述の実施例又は比較例の「腸管吸収用補助剤」に、「ＦＤ４（ＦＩＴＣ（Fluoresceinisothiocyanate：蛍光標識）デキストラン、分子量：約４千）」を各々４ｍｇ／ｍｌの濃度となるように溶解させて、デキストラン投与液（腸管吸収用組成物）とした。(Method for producing dextran administration solution)
"FD4 (FITC (fluoresceinisothiocyanate: fluorescent labeling) dextran, molecular weight: about 4,000)" was dissolved in the "intestinal absorption adjuvant" of the above-mentioned Examples or Comparative Examples to a concentration of 4 mg/ml. , a dextran administration solution (composition for intestinal absorption).
（実施例９～１１）
実施例２、実施例３、実施例５の「腸管吸収用補助剤」を用い、上記の方法に従って、デキストラン（ＦＤ４）投与液（実施例９～１１の腸管吸収用組成物）を製造した。
実施例９：実施例２（modified RO water）＋ＦＤ４
実施例１０：実施例３（modified RO water＋基本濃度のＮＢ）＋ＦＤ４
実施例１１：実施例５（modified RO water＋高濃度のＮＢ）＋ＦＤ４(Examples 9-11)
Using the "intestinal absorption adjuvant" of Examples 2, 3 and 5, dextran (FD4) administration solutions (compositions for intestinal absorption of Examples 9-11) were produced according to the above method.
Example 9: Example 2 (modified RO water) + FD4
Example 10: Example 3 (modified RO water + basic concentration NB) + FD4
Example 11: Example 5 (modified RO water + high concentration NB) + FD4
（比較例５）
比較例１の「腸管吸収用補助剤（ＰＢＳ）」を用い、上記の方法に従って、デキストラン投与液（比較例５の腸管吸収用組成物）とした。(Comparative Example 5)
Using the "intestinal absorption adjuvant (PBS)" of Comparative Example 1, a dextran administration solution (composition for intestinal absorption of Comparative Example 5) was prepared according to the above method.
［試験例１：腸管吸収用組成物を用いたインスリンの腸管吸収促進効果確認試験］
図１に示す公知のIn situ closed loop法を用いて、実施例又は比較例のインスリン投与液（腸管吸収用組成物）を投与対象（ラット）の腸管に直接投与した後、ラット血液（血漿）中のインスリンを測定することによって、腸管経由吸収量、すなわち本発明の「腸管吸収用組成物」による、高分子化合物（インスリン）の吸収促進効果を確認した。[Test Example 1: Test to confirm the effect of promoting insulin intestinal absorption using a composition for intestinal absorption]
Using the known in situ closed loop method shown in FIG. By measuring the amount of insulin in the sample, the amount absorbed through the intestinal tract, that is, the effect of the "composition for intestinal absorption" of the present invention on enhancing the absorption of the polymer compound (insulin) was confirmed.
「腸管吸収用組成物」の具体的な投与手順を、図２に示した。A specific administration procedure of the "composition for intestinal absorption" is shown in FIG.
尚、その他の実験条件は、下記の通りである。Other experimental conditions are as follows.
《材料と方法：Material and Method》
（投与対象）
ＳＤ系ラット、雄、１９０ｇ（各群３～１０匹）《Materials and Methods》
(Administration target)
SD rat, male, 190 g (3-10 rats in each group)
（投与液）
実施例６～８の「インスリン投与液（腸管吸収用組成物）」・・・低張液（＋ＮＢ）＋インスリン
比較例３～４の「インスリン投与液（腸管吸収用組成物）」・・・等張液（＋ＮＢ）＋インスリン(Dosing solution)
"Insulin administration solution (intestinal absorption composition)" of Examples 6-8...Hypotonic solution (+NB) + insulin "Insulin administration solution (intestinal absorption composition)" of Comparative Examples 3-4... Isotonic solution (+NB) + insulin
（投与量）
０．５ｍｌ／（ラット体重）２００ｇ（＝２．５ｍｌ／ｋｇ）(Dose)
0.5 ml/(rat body weight) 200 g (=2.5 ml/kg)
尚、「インスリン投与液（腸管吸収用組成物）」中のインスリン濃度は、上述の通り０．７２７ｍｇ／ｍｌ≒２０ＩＵ／ｍｌであるため、「インスリン投与液（腸管吸収用組成物）」２．５ｍｌ／ｋｇの投与とは、すなわち「インスリン投与量：約５０ＩＵ／ｋｇ」に相当することになる。Since the insulin concentration in the "insulin dosing solution (composition for intestinal absorption)" is 0.727 mg/ml≈20 IU/ml as described above, "insulin dosing solution (composition for intestinal absorption)"2. Administration of 5 ml/kg corresponds to "insulin dose: about 50 IU/kg".
（投与後の採血部位）
頸静脈(Blood sampling site after administration)
jugular vein
（血漿中インスリン濃度測定法）
ＥＬＩＳＡ（酵素免疫測定法）
（使用機器）
Insulin, Human, ELISA Kit / MRD-10-1113-01-1(Plasma insulin concentration measurement method)
ELISA (enzyme immunoassay)
(Used equipment)
Insulin, Human, ELISA Kit / MRD-10-1113-01-1
《結果》
測定結果を図３に示す。
図３で、抽出されたインスリンの単位「μＵ／ｍｌ」とは、「μＩＵ／ｍｌ」を意味する。
また、図には示していないが、実施例４（低濃度のＮＢ）又は実施例５（高濃度のＮＢ）の腸管吸収用補助剤を用いて、上記と同様に「インスリン投与液（腸管吸収用組成物）」を作成し、試験例１と同様の試験を行った結果、気泡（ＮＢ）濃度によって多少差があるものの、いずれも腸管経由で確実に生体内に吸収され得ることがわかった。"result"
The measurement results are shown in FIG.
In FIG. 3, the unit of extracted insulin "μU/ml" means "μIU/ml".
In addition, although not shown in the figure, the intestinal absorption adjuvant of Example 4 (low concentration NB) or Example 5 (high concentration NB) was used in the same manner as above, "Insulin administration solution (intestinal absorption The composition for use)” was prepared and the same test as in Test Example 1 was conducted. As a result, although there was a slight difference depending on the air bubble (NB) concentration, it was found that all of them could be reliably absorbed into the body via the intestinal tract. .
《考察》
血漿中のインスリン濃度が、比較例と比べて有意に増加している図３の結果から、低張液を溶媒（腸管吸収用補助剤）として用いた組成物とすることによって、これまで腸管からの吸収が極めて困難とされてきた高分子化合物（インスリン）であっても、腸管経由で確実に生体内に吸収され得ることがわかった。
尚、低張液に更にＮＢを含む場合、低張液のみと比較して多少吸収促進効果は低減していたが、
ｉ）本発明者による他の検証実験（データ示さず）によって、ＮＢ水を使用した場合には、生体投与する前の、各種の活性物質の溶媒中での保存安定性が向上する傾向が確認されており、
ｉｉ）また、後述の試験例５等によって、低張液のみの場合に比べて、更にＮＢを含むものを使用した場合の方が、消化管での酵素分解等からインスリンを保護する効果が顕著に高いことが確認された（図７－１，図７－２）ことから、結果として、腸管吸収後のインスリンのトータル的な活性を、低張液のみの場合よりも高く維持できる可能性があり
これらを総合的に考慮した場合には、低張液のみの場合よりも、更にＮＢを含むものが、投与目的物質の腸管吸収には好ましい場合もあると考えられる。《Consideration》
From the results of FIG. 3, in which the insulin concentration in plasma is significantly increased compared to the comparative example, it can be seen that by making a composition using a hypotonic solution as a solvent (adjuvant for intestinal absorption), It was found that even high-molecular weight compounds (insulin), which have been considered to be extremely difficult to absorb, can be reliably absorbed into the body via the intestinal tract.
In addition, when the hypotonic solution further contains NB, the absorption promoting effect was somewhat reduced compared to the hypotonic solution alone.
i) Other verification experiments (data not shown) by the present inventors confirmed that the use of NB water tends to improve the storage stability of various active substances in solvents before administration to the body. has been
ii) In addition, according to Test Example 5 described later, the effect of protecting insulin from enzymatic degradation in the gastrointestinal tract, etc., is more pronounced when a solution containing NB is used than when only a hypotonic solution is used. (Figs. 7-1 and 7-2), as a result, it is possible that the total insulin activity after intestinal absorption can be maintained higher than in the hypotonic solution alone. Considering these factors comprehensively, it is thought that in some cases, a solution containing NB is more preferable than a hypotonic solution alone for intestinal absorption of the substance to be administered.
［試験例２：腸管吸収用組成物を用いたデキストランの腸管吸収促進効果確認試験］
試験例１と同様の方法を用い、実施例又は比較例のデキストラン投与液（腸管吸収用組成物）を投与対象（ラット）の腸管に直接投与した後、ラット血液（血漿）中のデキストランを測定することによって、腸管経由吸収量、すなわち本発明の「腸管吸収用組成物」による、高分子化合物（デキストラン）の吸収促進効果を確認した。[Test Example 2: Dextran intestinal absorption promoting effect confirmation test using composition for intestinal absorption]
Using the same method as in Test Example 1, the dextran administration solution (composition for intestinal absorption) of Example or Comparative Example was directly administered to the intestinal tract of an administration subject (rats), and then dextran in rat blood (plasma) was measured. By doing so, the amount absorbed through the intestinal tract, that is, the effect of promoting the absorption of the polymer compound (dextran) by the "composition for intestinal absorption" of the present invention was confirmed.
「腸管吸収用組成物」の具体的な投与手順は、図２に準じて行った。但し、採血は２４０分まで行った。
尚、その他の実験条件は、下記の通りである。A specific administration procedure of the “composition for intestinal absorption” was performed according to FIG. However, blood collection was performed up to 240 minutes.
Other experimental conditions are as follows.
《材料と方法：Material and Method》
（投与対象）
ＳＤ系ラット、雄、１９０ｇ（各群３～４匹）《Materials and Methods》
(Administration target)
SD rat, male, 190 g (3-4 rats in each group)
（投与液）
実施例９～１１の「デキストラン投与液（腸管吸収用組成物）」・・・低張液（modified RO water）（＋ＮＢ）＋ＦＤ４
比較例５の「デキストラン投与液（腸管吸収用組成物）」・・・等張液（PBS）＋ＦＤ４(Dosing solution)
"Dextran administration solution (composition for intestinal absorption)" of Examples 9 to 11 ... hypotonic solution (modified RO water) (+NB) + FD4
"Dextran administration solution (composition for intestinal absorption)" of Comparative Example 5... isotonic solution (PBS) + FD4
（投与量）
０．５ｍｌ／（ラット体重）２００ｇ（＝２．５ｍｌ／ｋｇ）
デキストラン投与液の濃度は、上述の通り、４ｍｇ／ｍｌなので、上記投与量は、蛍光標識デキストラン投与量：１０ｍｇ／（ラット体重）ｋｇに相当する。(Dose)
0.5 ml/(rat body weight) 200 g (=2.5 ml/kg)
Since the concentration of the dextran administration solution is 4 mg/ml as described above, the above administration amount corresponds to a fluorescence-labeled dextran administration amount of 10 mg/(rat body weight) kg.
（投与後の採血部位）
頸静脈(Blood sampling site after administration)
jugular vein
（血漿中デキストラン濃度測定法）
蛍光度を測定して、濃度に変換することによって測定した。(Plasma dextran concentration measurement method)
Measured by measuring fluorescence and converting to concentration.
《結果》
測定結果を図４に示す。
尚、図中の「ｍｅａｎｓ±ＳＥ」とは、平均値±標準誤差を意味する。
また、図中のNとは、1群あたりのラット数を意味する。"result"
The measurement results are shown in FIG.
In addition, "means±SE" in the figure means mean value±standard error.
In addition, N in the figure means the number of rats per group.
《考察》
血漿中のデキストラン濃度が、比較例と比べて有意に増加している図４の結果から、低張液を溶媒（腸管吸収用補助剤）として用いた組成物とすることによって、これまで腸管からの吸収が極めて困難とされてきた高分子化合物（デキストラン）であっても、腸管経由で確実に生体内に吸収され得ることがわかった。《Consideration》
From the results of FIG. 4, in which the concentration of dextran in plasma is significantly increased compared to the comparative example, it can be seen that by making a composition using a hypotonic solution as a solvent (adjuvant for intestinal absorption), It was found that even a high-molecular compound (dextran), which has been considered extremely difficult to absorb, can be reliably absorbed into the body via the intestinal tract.
［試験例３：腸管吸収用補助剤の細胞傷害性確認試験］
乳酸脱水素酵素（Lactate dehydrogenase：ＬＤＨ）は、ほとんど全ての細胞の細胞質に存在する酵素であり、通常は細胞膜を透過しないが、細胞膜が何らかの事情で傷害を受けると細胞外に漏れ出すことが知られている。
従って、細胞外に放出されたＬＤＨ量を測定することで、腸管吸収用補助剤の細胞傷害性の指標とすることが出来る。[Test Example 3: Cytotoxicity Confirmation Test of Intestinal Absorption Adjuvant]
Lactate dehydrogenase (LDH) is an enzyme present in the cytoplasm of almost all cells, and although it does not normally permeate the cell membrane, it is known to leak out of the cell if the cell membrane is damaged for some reason. It is
Therefore, by measuring the amount of LDH released outside the cells, it can be used as an indicator of the cytotoxicity of the intestinal absorption adjuvant.
そこで、試験例１等と同様のIn situ closed loop法を用いて、ラットの小腸に実施例又は比較例の各「腸管吸収用補助剤」を投与した後、１時間経過後に腸管から投与液を回収し、その回収液中に含まれるＬＤＨ量を、下記のキットを用いて測定することによって、腸管吸収用補助剤による細胞傷害の有無を判定した。Therefore, using the same in situ closed loop method as in Test Example 1, etc., each "intestinal absorption adjuvant" of Examples or Comparative Examples was administered to the small intestine of rats, and after 1 hour, the administration solution was removed from the intestinal tract. The cells were collected and the amount of LDH contained in the collected liquid was measured using the following kit to determine the presence or absence of cytotoxicity caused by the intestinal absorption adjuvant.
《材料と方法：Material and Method》《Materials and Methods》
（投与対象）
ＳＤ系ラット、雄、１９０ｇ（各群３匹）(Administration target)
SD rat, male, 190 g (3 rats in each group)
（投与液）
実施例１～３の「腸管吸収用補助剤」・・・低張液（＋ＮＢ）
比較例１～２の「腸管吸収用補助剤」・・・等張液（＋ＮＢ）(Dosing solution)
"Adjuvant for intestinal absorption" of Examples 1 to 3: hypotonic solution (+NB)
"Intestinal absorption adjuvant" of Comparative Examples 1 and 2: isotonic solution (+NB)
更に、細胞傷害性のある場合の例（ポジティブコントロール）として、下記の参考例１の溶液を使用した。Furthermore, as an example of cytotoxicity (positive control), the solution of Reference Example 1 below was used.
（参考例１）
５％Ｔｒｉｔｏｎ Ｘ－１００を含むＰＢＳ（等張液）・・・等張液＋Triton X-100(Reference example 1)
PBS containing 5% Triton X-100 (isotonic solution): isotonic solution + Triton X-100
尚、Ｔｒｉｔｏｎ Ｘ－１００とは、タンパク質を失活させずに、生体膜を可溶化し得るものとして知られている、公知の界面活性剤であり、本試験例においては、ＬＤＨを漏出させる「ポジティブコントロール」として用いている。Triton X-100 is a known surfactant that is known to be able to solubilize biological membranes without inactivating proteins, and in this test example, it causes LDH to leak out. used as a positive control.
（投与量）
０．５ｍｌ／（ラット体重）２００ｇ(Dose)
0.5 ml/(rat weight) 200 g
（使用機器）
同仁堂製 細胞毒性測定キット（製品名：Cytotoxicity LDH Assay Kit-WST）(Used equipment)
Cytotoxicity measurement kit manufactured by Dojindo (product name: Cytotoxicity LDH Assay Kit-WST)
《結果》
試験結果を、図５に示す。"result"
The test results are shown in FIG.
図５からわかる通り、実施例及び比較例のいずれも、細胞傷害の一般的な指標となるＴｒｉｔｏｎ Ｘ－１００を用いた参考例１と比較して、ＬＤＨの漏出量は極めて少なかった。As can be seen from FIG. 5, in both Examples and Comparative Examples, the amount of LDH leaked was extremely small compared to Reference Example 1 using Triton X-100, which is a general indicator of cytotoxicity.
《考察》
つまり、本発明の「腸管吸収用補助剤」によるインスリンやデキストランの吸収促進は、細胞を破壊した上での強制的な腸管内浸入等では無く、安全性に問題が無いことが確認できた。《Consideration》
In other words, it was confirmed that the promotion of absorption of insulin or dextran by the "intestinal absorption adjuvant" of the present invention does not involve forced penetration into the intestine after destroying cells, and that there is no problem with safety.
［実施例１２：腸管吸収用補助剤］
実施例３の「腸管吸収用補助剤（modified RO water＋基本濃度のＮＢ）」（以下、NanoGASTM（RO）（N：Normal））と記載する場合がある。）２０mLを、マクロセップ アドバンス 遠心濾過デバイス（日本ポール（株））に入れ、遠心条件３０００xｇ、４℃、１５分のマイクロ冷却遠心機（久保田商事（株）、Model 3740）を用いた限外濾過によって濃縮し、ＮＢの気泡濃度を高めた「腸管吸収用補助剤（modified RO water＋高濃度のＮＢ）」（以下、NanoGASTM（RO）（C：Conc））と記載する場合がある。）１．５ｍＬを作成した。
尚、簡易的な測定方法を用いた気泡濃度の比較によって、この限外濾過で得られた高濃度ＮＢ水は、基本濃度の約３０倍の気泡を含むことが確認された。[Example 12: Auxiliary agent for intestinal absorption]
It may be described as "intestinal absorption adjuvant (modified RO water + basic concentration NB)" (hereinafter, NanoGAS™ (RO) (N: Normal)) of Example 3. ) was placed in a Macrosep Advance Centrifugal Filtration Device (Nippon Pall Co., Ltd.) and centrifuged at 3000 xg, 4°C for 15 minutes by ultrafiltration using a micro-refrigerated centrifuge (Kubota Shoji Co., Model 3740). It may be described as "intestinal absorption adjuvant (modified RO water + high-concentration NB)" (hereinafter, NanoGAS™ (RO) (C: Conc)) in which NB is concentrated to increase the bubble concentration. ) 1.5 mL was made.
A comparison of bubble concentration using a simple measurement method confirmed that the high-concentration NB water obtained by ultrafiltration contained about 30 times the base concentration of bubbles.
［実施例１３：腸管吸収用組成物（（III）投与目的物質：インスリン）］
実施例１２の腸管吸収用補助剤を用い、実施例６等に記載の方法に準じて、インスリン投与液（実施例１３の腸管吸収用組成物）を製造した。
従って、インスリン濃度は、実施例６等と同様に、約２０ＩＵ／ｍｌであった。[Example 13: Composition for intestinal absorption ((III) target substance for administration: insulin)]
Using the intestinal absorption adjuvant of Example 12 and according to the method described in Example 6, etc., an insulin administration solution (the composition for intestinal absorption of Example 13) was produced.
Therefore, the insulin concentration was about 20 IU/ml as in Example 6 and the like.
［試験例４：気泡濃度の異なる腸管吸収用組成物を用いたインスリンの腸管吸収促進効果確認試験］
後述する実験条件以外は、試験例１と同様にして、In situ closed loop法を用いて、本発明の気泡濃度の異なる「腸管吸収用組成物」による、高分子化合物（インスリン）の吸収促進効果を確認した。[Test Example 4: Test to confirm the effect of promoting insulin intestinal absorption using compositions for intestinal absorption with different bubble concentrations]
Except for the experimental conditions to be described later, the in situ closed loop method was used in the same manner as in Test Example 1 to determine the absorption promoting effect of the macromolecular compound (insulin) by the "composition for intestinal absorption" having different bubble concentrations of the present invention. It was confirmed.
尚、実験条件は、下記の通りである。The experimental conditions are as follows.
《材料と方法：Material and Method》《Materials and Methods》
（投与対象）
ＳＤ系ラット、雄、１９０～２３０ｇ（各群３～６匹）(Administration target)
SD rat, male, 190-230 g (3-6 rats in each group)
（投与液）
「実施例７の腸管吸収用組成物：インスリン投与液（低張液（ＲＯ）＋インスリン）」
「実施例８の腸管吸収用組成物：インスリン投与液（低張液（ＲＯ）＋ＮＢ（基本濃度）＋インスリン）」
「実施例１３の腸管吸収用組成物：インスリン投与液（低張液（ＲＯ）＋ＮＢ（高濃度）＋インスリン）」
「比較例３の腸管吸収用組成物：インスリン投与液（等張液（ＰＢＳ）＋インスリン）」
「比較例４の腸管吸収用組成物：インスリン投与液（等張液（ＰＢＳ）＋ＮＢ（基本濃度）＋インスリン）」(Dosing solution)
"Composition for intestinal absorption of Example 7: insulin administration solution (hypotonic solution (RO) + insulin)"
"Composition for intestinal absorption of Example 8: insulin administration solution (hypotonic solution (RO) + NB (basic concentration) + insulin)"
"Composition for intestinal absorption of Example 13: insulin administration solution (hypotonic solution (RO) + NB (high concentration) + insulin)"
"Composition for intestinal absorption of Comparative Example 3: insulin administration solution (isotonic solution (PBS) + insulin)"
"Composition for intestinal absorption of Comparative Example 4: insulin administration solution (isotonic solution (PBS) + NB (basic concentration) + insulin)"
《結果》
測定結果を図６に示す。"result"
The measurement results are shown in FIG.
尚、図６中の「NanoGASTM」とは、シンバイオシス（株）社製のＮＢ（水）（腸管吸収用補助剤）を意味する。
また、図６で、抽出されたインスリンの単位「μＵ／ｍｌ」とは、「μＩＵ／ｍｌ」を意味する。
図６から分かる通り、低張液を溶媒（腸管吸収用補助剤）として用いた組成物とすることによって、これまで腸管からの吸収が極めて困難とされてきた高分子化合物（インスリン）であっても、腸管経由で確実に生体内に吸収され得ることがわかった。
また、特に、ナノサイズ以下の気泡（ＮＢ）の濃度を高めた実施例１３の場合に、インスリンの腸管吸収量が特に多かった。In addition, "NanoGAS™ " in Fig. 6 means NB (water) (intestinal absorption adjuvant) manufactured by Symbiosis Co., Ltd.
Also, in FIG. 6, the unit of extracted insulin "μU/ml" means "μIU/ml".
As can be seen from FIG. 6, by making a composition using a hypotonic solution as a solvent (adjuvant for intestinal absorption), a polymer compound (insulin), which has been considered to be extremely difficult to be absorbed from the intestinal tract, can be obtained. Also, it was found that it can be reliably absorbed into the body via the intestinal tract.
In particular, in the case of Example 13 in which the concentration of nano-sized or smaller bubbles (NB) was increased, the intestinal absorption of insulin was particularly high.
《考察》
低張液の腸管吸収作用に加え、高濃度のナノサイズ以下の気泡の存在が、更にインスリンの消化管吸収性を向上させることが分かった。《Consideration》
In addition to the effect of intestinal absorption of hypotonic solution, it was found that the presence of high concentrations of sub-nano-sized bubbles further improves the gastrointestinal absorption of insulin.
［実施例１４～１６，比較例６：腸管吸収用組成物（（III）投与目的物質：インスリン）］
上述の実施例２，３，１２又は比較例１の「腸管吸収用補助剤」を用いて、下記の手順によってインスリン投与液を作成し、本発明の「腸管吸収用組成物（（III）投与目的物質：インスリン（（III）－iii－ａ－１））」とした。[Examples 14 to 16, Comparative Example 6: Composition for intestinal absorption ((III) substance to be administered: insulin)]
Using the above-mentioned "intestinal absorption adjuvant" of Examples 2, 3, 12 or Comparative Example 1, an insulin administration solution was prepared according to the following procedure, and the "intestinal absorption composition ((III) administration Target substance: insulin ((III)-iii-a-1))”.
（インスリン投与液の製造方法）
１）固形のインスリン（富士フィルム和光純薬株式会社製，ヒト組換インスリン）７．５ｍｇに、０．１Ｍ ＨＣｌ ７５μＬを加えた。
２）１）に、インスリンの容器吸着防止剤として０．００１Ｗ／Ｖ％の下記ＭＣを含有させた上記実施例２，３，１２又は比較例１の各「腸管吸収用補助剤」を、各々２．８５ｍｌ加えた。
３）２）に、０．１Ｍ ＮａＯＨを７５μＬ加え、実施例１４～１６又は比較例６のインスリン投与液（腸管吸収用組成物）とした。(Method for producing insulin solution)
1) 75 μL of 0.1 M HCl was added to 7.5 mg of solid insulin (manufactured by Fujifilm Wako Pure Chemical Industries, Ltd., human recombinant insulin).
2) Each of the "intestinal absorption adjuvants" of Examples 2, 3, 12 or Comparative Example 1, which contains 0.001 W/V% of the following MC as an insulin container adsorption inhibitor in 1), 2.85 ml was added.
3) To 2), 75 μL of 0.1 M NaOH was added to prepare insulin administration solutions (compositions for intestinal absorption) of Examples 14 to 16 or Comparative Example 6.
（インスリン濃度）
７.５ｍｇ／３ｍＬ＝２.５ｍｇ／ｍＬ≒６９ＩＵ／ｍＬ(insulin concentration)
7.5 mg/3 mL = 2.5 mg/mL ≈ 69 IU/mL
ＭＣ（メチルセルロース）：信越化学工業（株）製，メトローズ（登録商標）ＳＭ－１５（分子量約６万）MC (methyl cellulose): manufactured by Shin-Etsu Chemical Co., Ltd., Metolose (registered trademark) SM-15 (molecular weight: about 60,000)
［試験例５：ＮＢによる、インスリンの消化酵素（トリプシン）分解に対する安定性向上確認試験］
インスリンは、実際には、腸管に辿り着くまでにトリプシン等のざまざまな消化酵素によって分解その他の阻害作用の影響を受けることが知られている。
そこで、インスリンが受ける消化酵素分解作用に対する、ＮＢの保護効果を、インビトロで確認した。
具体的には、ＮＢによる、インスリンの消化酵素分解からの保護作用を、インスリン残存濃度の時間経過（図７－１），インスリンの分解速度定数と半減期（図７－２）によって評価した。[Test Example 5: Confirmation test of stability improvement against insulin digestive enzyme (trypsin) degradation by NB]
Insulin is actually known to undergo degradation and other inhibitory effects by various digestive enzymes such as trypsin before reaching the intestinal tract.
Therefore, the protective effect of NB against the digestive enzymatic action of insulin was confirmed in vitro.
Specifically, the protective effect of NB from digestive enzymatic degradation of insulin was evaluated by the time course of residual insulin concentration (FIG. 7-1), the degradation rate constant and half-life of insulin (FIG. 7-2).
尚、実験条件は、下記の通りである。The experimental conditions are as follows.
《材料と方法：Material and Method》《Materials and Methods》
（トリプシン濃度）
トリプシン（シグマアルドリッチ社製，トリプシン ブタ膵臓由来）２．３８ｍｇを、下記の被検液のうち、実施例１４～１６又は比較例６の各「インスリン投与液（腸管吸収用組成物）」１ｍLに投与し、最終濃度１０μＭとした。(trypsin concentration)
2.38 mg of trypsin (manufactured by Sigma-Aldrich, trypsin derived from porcine pancreas) was added to 1 mL of each "insulin administration solution (composition for intestinal absorption)" of Examples 14 to 16 or Comparative Example 6 among the test solutions below. dosed to a final concentration of 10 μM.
尚、コントロールである対照例１には、トリプシンを投与しなかった。No trypsin was administered to Control Example 1 as a control.
また、コントロールである対照例２には、トリプシンと共に、公知のＳＴＩ（大豆トリプシンインヒビター）１．２５ｍｇ／ｍｌを投与した。In Control Example 2 as a control, 1.25 mg/ml of a known STI (soybean trypsin inhibitor) was administered together with trypsin.
（被検液）
「実施例１４のインスリン投与液（低張液（ＲＯ）＋インスリン）」＋トリプシン
「実施例１５のインスリン投与液（低張液（ＲＯ）＋ＮＢ（基本濃度）＋インスリン）」＋トリプシン
「実施例１６のインスリン投与液（低張液（ＲＯ）＋ＮＢ（高濃度）＋インスリン）」＋トリプシン
「比較例６のインスリン投与液（等張液（ＰＢＳ）＋インスリン）」＋トリプシン
「対照例１（等張液（ＰＢＳ）＋インスリン）」・・・（トリプシン無）
「対照例２（等張液（ＰＢＳ）＋インスリン）」＋トリプシン＋トリプシン阻害剤（ＳＴＩ）(Test liquid)
"Insulin administration solution of Example 14 (hypotonic solution (RO) + insulin)" + Trypsin "Insulin administration solution of Example 15 (hypotonic solution (RO) + NB (basal concentration) + insulin)" + Trypsin "Example 16 insulin administration solution (hypotonic solution (RO) + NB (high concentration) + insulin)” + trypsin “insulin administration solution of Comparative Example 6 (isotonic solution (PBS) + insulin)” + trypsin “control example 1 (etc. Tonic solution (PBS) + insulin)” (without trypsin)
"Control 2 (isotonic solution (PBS) + insulin)" + trypsin + trypsin inhibitor (STI)
（試験方法）
各被検液に、上記濃度となるようにトリプシンを加え、３７℃で９０分間、恒温槽にて保存した。
図７－１に示したように、ＨＰＬＣにより、定期的にインスリンの残存濃度を測定した（図７－１）。
また、これらの測定結果をもとに、インスリンの分解速度定数と半減期を求めた結果を、図７－２に示した。(Test method)
Trypsin was added to each test solution so as to have the above concentration, and the solution was stored in a constant temperature bath at 37° C. for 90 minutes.
As shown in Figure 7-1, the residual insulin concentration was periodically measured by HPLC (Figure 7-1).
Based on these measurement results, the degradation rate constant and half-life of insulin were obtained, and the results are shown in FIG. 7-2.
《結果》
尚、図７－１，図７－２中の「NanoGASTM」とは、シンバイオシス（株）社製のＮＢ（水）（腸管吸収用補助剤）を意味する。"result"
"NanoGAS™ " in Figs. 7-1 and 7-2 means NB (water) (intestinal absorption adjuvant) manufactured by Symbiosis Co., Ltd.
ＮＢを含む実施例１５及び実施例１６の場合、インスリンの半減期は、
“トリプシンを含まない対照例１”や、
”トリプシンと共に公知のトリプシン阻害剤（ＳＴＩ）を併用した対照例２”
ほどでは無いものの、
“ＰＢＳのみを含む腸管吸収用組成物（比較例６）”と比較して、２～２．５倍に延長された。For Examples 15 and 16 with NB, the insulin half-life is
"
"Control Example 2 using a known trypsin inhibitor (STI) in combination with trypsin"
Although not as
Compared to the "composition for intestinal absorption containing only PBS (Comparative Example 6)", it was prolonged 2 to 2.5 times.
但し、ＮＢの濃度による差は（実施例１５：基本濃度，実施例１６：高濃度）、それほど見られなかった。However, the difference due to the concentration of NB (Example 15: basic concentration, Example 16: high concentration) was not observed so much.
尚、実施例１４（低張液のみ。ＮＢ無し。）は、トリプシンに対するインスリンの安定性にはあまり寄与していなかった。Note that Example 14 (hypotonic solution only, no NB) did not contribute much to the stability of insulin against trypsin.
《考察》
１）ＮＢの有用性について：
上述の試験例１（In situ closed loop法：トリプシンの分泌が殆ど無い小腸に、直接投与する試験）によれば、ＮＢを有する実施例８は、低張液のみの実施例６，７ほど腸管吸収効果は見られなかったが、本試験例５によって、インスリンをトリプシン阻害から保護する効果は、ＮＢを有する場合の方が高いことが確認された。
つまり、トリプシンによる投与目的物質の活性阻害を考慮した場合、ＮＢの存在が重要である可能性が示唆された。《Consideration》
1) About usefulness of NB:
According to the above-mentioned Test Example 1 (In situ closed loop method: a test of direct administration to the small intestine where there is almost no trypsin secretion), Example 8 with NB is as intestinal as Examples 6 and 7 with only a hypotonic solution. Although no absorption effect was observed, Test Example 5 confirmed that the effect of protecting insulin from trypsin inhibition was higher with NB.
In other words, it was suggested that the presence of NB is important when considering the activity inhibition of the administration target substance by trypsin.
尚、これは、本発明者等がゼータ電位測定によって明らかにした通り、ＮＢの表面が負に帯電していることによるものであると考えられる。
つまり、中性域でインスリンは負の電荷を有し、トリプシンは正の電荷を有していることから、負の電荷を有するＮＢが、インスリンとトリプシンとの相互作用を阻害したことによるものと考えられる。As clarified by the inventors' zeta potential measurement, this is considered to be due to the fact that the surface of the NB is negatively charged.
In other words, since insulin has a negative charge and trypsin has a positive charge in the neutral range, the negatively charged NB inhibited the interaction between insulin and trypsin. Conceivable.
２）トリプシン以外の酵素について：
また、この試験例５による酵素分解実験は、インスリン分解酵素として、トリプシンのみを用いた、イン・ビトロでの実験である。
しかし生体内には、インスリンを分解する酵素はトリプシン以外にも存在しており、ＮＢの濃度が濃い実施例１６は、ＮＢが基本濃度の実施例１５よりも多種・多量の酵素を阻害できるものと考えられる。
試験例４のインスリン腸管吸収実験（図６）において、ＮＢを、より高濃度で含む実施例１６が、基本濃度の実施例１５よりも、顕著な促進効果を示したのは、このためと考えられる。2) Enzymes other than trypsin:
In addition, the enzymatic degradation experiment according to Test Example 5 is an in vitro experiment using only trypsin as an insulin-degrading enzyme.
However, enzymes other than trypsin that degrade insulin exist in vivo, and Example 16 with a high concentration of NB can inhibit a greater variety and amount of enzymes than Example 15 with a basic concentration of NB. it is conceivable that.
It is believed that this is the reason why Example 16 containing a higher concentration of NB showed a more pronounced promoting effect than Example 15 with a basic concentration in the insulin intestinal absorption experiment of Test Example 4 (Fig. 6). be done.
３）低張液のみの実施例について
尚、実施例１４（低張液のみ。ＮＢ無し。）は、トリプシンに対するインスリンの安定性には寄与しなかったものの、試験例１（図３）において、実施例１４に相当する「低張液のみの実施例７」が、インスリンの腸管吸収効果そのものは、ＮＢを有する他の実施例より高かったことを考慮すれば、投与目的物質へのトリプシンの影響をそれほど考慮する必要の無い場合には、ＮＢを含まない低張液からなる腸管吸収用補助剤（又はそれと共に投与目的物質を含む腸管吸収用組成物）も、充分に利用価値があるものと考えられる。3) Examples with only hypotonic solution Although Example 14 (only hypotonic solution, no NB) did not contribute to the stability of insulin against trypsin, in Test Example 1 (Fig. 3), Considering that "Example 7 with only a hypotonic solution" corresponding to Example 14 had a higher insulin intestinal absorption effect than other examples with NB, the effect of trypsin on the substance to be administered In the case where there is no need to consider so much, an intestinal absorption adjuvant consisting of a hypotonic solution containing no NB (or an intestinal absorption composition containing an administration target substance together with it) is also sufficiently useful. Conceivable.
本発明の腸管吸収用補助剤は、低張液を主な成分とし、小腸透過ペプチド等の特殊な薬剤の併用も不要であるという極めて簡素な構成にも関わらず、（III）投与目的物質、中でもこれまで腸管吸収が極めて困難とされてきた物質（例えば、（III）－ｉ：難吸収性低分子化合物や、（III）－ii：中分子化合物、又は（III）－iii：高分子化合物等）を、腸管から確実に吸収させることができるという利点を有している。
しかも、本発明の腸管吸収用補助剤自体に消化管細胞に対する細胞傷害性は見られず、（III）投与目的物質の、安全な腸管吸収促進が可能である。
またナノサイズ以下（１μｍ未満）の気泡を更に含有する本発明の腸管吸収用補助剤の場合には、（III）投与目的物質を各種の消化酵素等による分解・失活等から保護する効果が本発明によって確認されたため、腸管吸収後にもその活性を充分に発揮させ得ることが判明した。Although the intestinal absorption adjuvant of the present invention is composed mainly of a hypotonic solution and does not require the use of a special drug such as a peptide that penetrates the small intestine, it has the advantages of (III) a substance to be administered, Among them, substances that have been considered to be extremely difficult to absorb in the intestinal tract (for example, (III)-i: poorly absorbable low-molecular-weight compounds, (III)-ii: medium-molecular-weight compounds, or (III)-iii: high-molecular-weight compounds etc.) can be reliably absorbed from the intestinal tract.
Moreover, the intestinal absorption adjuvant of the present invention itself does not exhibit cytotoxicity to gastrointestinal cells, and (III) it is possible to safely promote intestinal absorption of the substance to be administered.
In addition, in the case of the intestinal absorption adjuvant of the present invention, which further contains nano-sized (less than 1 μm) air bubbles, (III) the effect of protecting the substance to be administered from decomposition, deactivation, etc. by various digestive enzymes is exhibited. Since it was confirmed by the present invention, it was found that the activity can be fully exerted even after intestinal absorption.
Claims (10)
Translated fromJapanese（Ｉ）低張液を含む溶媒(III) an intestinal absorption adjuvant for absorbing a substance to be administered via the intestinal tract, characterized by containing the following (I).
(I) a solvent containing a hypotonic solution
（Ｉ）低張液を含む溶媒
（II）ナノサイズ以下（１μｍ未満）の気泡2. The adjuvant according to claim 1, comprising the following (I) and (II).
(I) Solvent containing hypotonic solution (II) Bubbles of nano size or less (less than 1 μm)
（III）－ｉ：難吸収性低分子化合物
（III）－ii：中分子化合物
（III）－iii：高分子化合物(III) The adjuvant according to claim 1 or 2, wherein the substance to be administered is at least one selected from (III)-i to (III)-iii below.
(III)-i: Poorly absorbable low-molecular-weight compound (III)-ii: Medium-molecular-weight compound (III)-iii: Polymer compound
（III）－ii－ａ：ペプチド又はその誘導体
（III）－iii－ａ：蛋白質又はその誘導体
（III）－iii－ｂ：多糖類又はその誘導体(III) The adjuvant according to any one of claims 1 to 3, wherein the substance to be administered is at least one selected from the following.
(III)-ii-a: peptide or derivative thereof (III)-iii-a: protein or derivative thereof (III)-iii-b: polysaccharide or derivative thereof
（III）－iii－ａ－１：インスリン又はその誘導体
（III）－iii－ｂ－１：デキストラン又はその誘導体(III) The substance to be administered is (III)-iii-a-1 and/or (III)-iii-b-1 below, according to any one of claims 1 to 3. adjuvant.
(III)-iii-a-1: insulin or its derivative (III)-iii-b-1: dextran or its derivative
（Ｉ）－ｉ：超純水
（Ｉ）－ii：逆浸透水
（Ｉ）－iii：改質逆浸透水（modified RO water）
（Ｉ）－iv：生理食塩水とブドウ糖液からなる「低張電解質輸液」（１～４号液）
（Ｉ）－v：注射用蒸留水
（Ｉ）－vi：精製水
（Ｉ）－vii：イオン交換水The adjuvant according to any one of claims 1 to 5, wherein the hypotonic solution in (I) consists of at least one of (I)-i to (I)-vii below. .
(I)-i: ultrapure water (I)-ii: reverse osmosis water (I)-iii: modified reverse osmosis water (modified RO water)
(I)-iv: "Hypotonic electrolyte infusion" consisting of physiological saline and glucose solution (No. 1 to 4 solutions)
(I)-v: distilled water for injection (I)-vi: purified water (I)-vii: deionized water
（III）－ｉ：難吸収性低分子化合物
（III）－ii：中分子化合物
（III）－iii：高分子化合物(III) The composition for intestinal absorption according to claim 8, wherein the substance to be administered is at least one selected from the following (III)-i to (III)-iii.
(III)-i: Poorly absorbable low-molecular-weight compound (III)-ii: Medium-molecular-weight compound (III)-iii: Polymer compound
（III）－iii－ａ－１：インスリン又はその誘導体Prevention of diseases caused by insulin inactivation or deficiency and/or comprising the following (III)-iii-a-1 together with the adjuvant according to any one of claims 1 to 7 therapeutic agent.
(III)-iii-a-1: insulin or a derivative thereof
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