JP2007271388A - Separation method of serum or plasma, and blood separation tube - Google Patents

Abstract

<P>PROBLEM TO BE SOLVED: To provide a method for separating plasma/serum from whole sampled blood, containing particulates, using a simple operation. <P>SOLUTION: In the blood separating method for separating plasma or serum from the whole sampled blood, the whole sampled blood containing particulates is mixed with a polymer flocculant, the mixture is treated centrifugally to make blood cells precipitate and particulates flocculated by the polymer flocculant, and the plasma or the serum on the upper layer is recovered. <P>COPYRIGHT: (C)2008,JPO&INPIT

Description

Translated fromJapanese

本発明は採取全血から血清または血漿を分離する血液分離方法およびこの方法に用いる血液分離管に係り、より詳細には、人工酸素運搬体等の微粒子を含む全血から一段で血清または血漿を分離する血液分離方法およびこの方法に用いる血液分離管に関する。  The present invention relates to a blood separation method for separating serum or plasma from collected whole blood and a blood separation tube used in the method, and more specifically, serum or plasma is separated from whole blood containing fine particles such as an artificial oxygen carrier in one step. The present invention relates to a blood separation method for separation and a blood separation tube used in this method.

採取血液を対象とする臨床検査として、血液生化学検査等のように、血漿あるいは血清を対象に行なわれるものがある。このため、採取全血から血漿や血清を得る操作は血液検体の処理として頻繁に行なわれる。現行の採取全血から血漿または血清を分離する方法では、採血管に採取した全血を遠心分離して赤血球、白血球、血小板等の血球成分を沈殿させ、上澄み液として血漿または血清を得ている。  Some clinical tests on collected blood are performed on plasma or serum, such as blood biochemical tests. For this reason, the operation of obtaining plasma or serum from the collected whole blood is frequently performed as processing of a blood sample. In the current method of separating plasma or serum from collected whole blood, the whole blood collected in a blood collection tube is centrifuged to precipitate blood cell components such as red blood cells, white blood cells, and platelets, and plasma or serum is obtained as a supernatant. .

血漿や血清を得るための採血管は数多く市販され、血漿分離用にはＥＤＴＡ−２Ｎａ、ＥＤＴＡ−２Ｋａ、クエン酸Ｎａ、ヘパリンＮａ等の血液抗凝固剤の入った容器、また、血清分離用には血液凝固促進剤の入った容器が使用されている。また、容器内を減圧して密栓することにより、所定量の血液が採血できる真空採血管も広く使用されている。通常の血液ではこの方法で検査に支障のない血漿や血清の検体が得られる。  Many blood collection tubes for obtaining plasma and serum are commercially available. For plasma separation, containers containing blood anticoagulants such as EDTA-2Na, EDTA-2Ka, Na citrate, and heparin Na, and for serum separation Are used in containers containing blood coagulation promoters. In addition, vacuum blood collection tubes that can collect a predetermined amount of blood by reducing the pressure in the container and sealing it are also widely used. With normal blood, plasma and serum samples that do not interfere with the test can be obtained by this method.

しかし、溶血により遊離ヘモグロビンが混入している血液検体、トリグリセリド濃度の上昇により乳濁した乳糜血漿等は、検査が困難な検体である。このような検体では、ヘモグロビンの特性吸収や濁度が測定を妨害して正確な検査値が得られない。  However, blood samples in which free hemoglobin is mixed due to hemolysis, milk plasma that has become milky due to an increase in triglyceride concentration, and the like are difficult samples to test. In such a specimen, the characteristic absorption or turbidity of hemoglobin interferes with the measurement, and an accurate test value cannot be obtained.

また、微粒子を輸送担体とする薬物輸送、ヘモグロビンをリン脂質小胞体に内包させた人工酸素運搬体（ヘモグロビン小胞体）、造影剤等の開発が進み、微粒子製剤の投与を伴う治療は近い将来増加するとともに多様化することが予測される。血管内への投与を目的として開発される微粒子の大きさは数十〜数百ナノメートルの範囲に設定される場合が多く、その大きさや濃度にもよるが、それら微粒子製剤は、乳濁した分散液として提供される。これら血管内へ投与される微粒子は、血球に比して数十〜数百倍小さな粒子であるため、現行の血液分離に用いられる遠心分離（遠心力：ほぼ数千ｇ）で沈降させるのは事実上困難である。すなわち、微粒子製剤投与後の採取血液をそのまま遠心分離しても微粒子が浮遊した血漿や血清しか得られず、乳濁、さらには微粒子形成材や担持薬剤の特性吸収により各種検査に支障が生じることになる。この点が、微粒子製剤の臨床応用に際しての共通の解決課題となるが、現在までこの課題の実用的な解決には至っていない。  In addition, the development of drug transport using microparticles as a carrier, artificial oxygen carriers encapsulating hemoglobin in phospholipid endoplasmic reticulum (hemoglobin endoplasmic reticulum), contrast media, etc. has progressed, and treatment involving the administration of microparticle preparations will increase in the near future And diversification is expected. The size of microparticles developed for the purpose of administration into blood vessels is often set in the range of tens to hundreds of nanometers, and depending on the size and concentration, these microparticle formulations are emulsions. Provided as a dispersion. These microparticles administered into blood vessels are tens to hundreds of times smaller than blood cells. Therefore, sedimentation by centrifugation (centrifugal force: approximately several thousand g) used for current blood separation is It is practically difficult. In other words, even if the collected blood after administration of the microparticle preparation is centrifuged as it is, only plasma and serum in which the microparticles are suspended can be obtained, and various tests may be hindered due to the emulsion and absorption of the characteristics of the microparticle forming material and the supported drug. become. This is a common solution for clinical application of microparticle preparations, but no practical solution to this problem has been achieved so far.

微粒子を分離する方法は実験的に幾つか知られている。例えば、数万〜数十万ｇの遠心力をかけて微粒子を沈殿させる超遠心分離法、限外濾過やフィルター濾過等の膜分離が挙げられる。これらの方法は実験室や微粒子製造における分離精製に用いられ、原理的にはこれらの方法により血漿や血清から微粒子を除去することは可能である。しかし、超遠心分離は超遠心分離機器の設置された特定箇所でしか実施できないため、医療現場でこの実施を広く期待できるとは言えず、また、限外濾過やフィルター濾過は目詰まりが頻発し、操作の煩雑さがあるため、迅速で正確に多検体の処理が要求される臨床検体の処理法としては必ずしも実用的とは言えない。  Several methods for separating fine particles are experimentally known. For example, ultracentrifugation methods in which fine particles are precipitated by applying centrifugal force of tens of thousands to hundreds of thousands of g, and membrane separation such as ultrafiltration and filter filtration can be mentioned. These methods are used for separation and purification in laboratories and microparticle production, and in principle, microparticles can be removed from plasma and serum by these methods. However, since ultracentrifugation can only be performed at specific locations where ultracentrifugation equipment is installed, it cannot be said that this practice can be widely expected at medical sites, and ultrafiltration and filter filtration are frequently clogged. Because of the complexity of the operation, it is not always practical as a clinical specimen processing method that requires rapid and accurate processing of multiple specimens.

ところで、高分子の添加により懸濁粒子が凝集する現象はそれ自体よく知られ、例えば、リン脂質の形成する小胞体は、細胞膜のモデルとして、共存する高分子との相互作用が詳しく調べられている。各種分子量体の入手が容易なデキストラン等の多糖類（非特許文献１、２）やポリエチレングリコール（非特許文献３）がよく使用され、これらの高分子と小胞体を共存させると、条件により小胞体凝集が生起する。高分子による小胞体凝集の主要な作用として、小胞体表面の電荷（ゼータ電位）の中和あるいは遮蔽や小胞体間の架橋が知られている。高分子が粒子表面に吸着する吸着能は高分子の分子量が大きくなるほど顕著となり、また小胞体膜の流動性、小胞体表面電荷、イオン強度、温度、ｐＨ等も関連因子として見出されている（非特許文献１、２、３）。高分子の添加による小胞体凝集現象はその機構が詳しく調べられ、制御因子も明らかになっているので応用技術として利用できる。しかし、応用分野が見出されていないために有効に活用されていないのが実状である。応用例の一つとして薬剤を内包する小胞体の精製方法が提案されている（特許文献１）。  By the way, the phenomenon in which suspended particles aggregate due to the addition of a polymer is well known per se. For example, vesicles formed by phospholipids have been studied in detail for their interaction with coexisting polymers as a model for cell membranes. Yes. Polysaccharides such as dextran (Non-patent Documents 1 and 2) and polyethylene glycol (Non-patent Document 3), which are easily available in various molecular weights, are often used. Endoplasmic reticulum aggregation occurs. As the main action of endoplasmic reticulum aggregation by a polymer, neutralization or shielding of the charge (zeta potential) on the surface of the endoplasmic reticulum and cross-linking between the endoplasmic reticulum are known. The adsorption ability of the polymer to the particle surface becomes more pronounced as the molecular weight of the polymer increases, and the fluidity of the endoplasmic reticulum membrane, the surface charge of the endoplasmic reticulum, ionic strength, temperature, pH, etc. have been found as related factors. (Non-patent documents 1, 2, and 3). The mechanism of endoplasmic reticulum aggregation due to the addition of polymer has been investigated in detail, and the control factors have been clarified, so it can be used as an applied technology. However, the actual situation is that it has not been used effectively because no application field has been found. As one application example, a method for purifying an endoplasmic reticulum encapsulating a drug has been proposed (Patent Document 1).

水処理の分野では、水溶性高分子の添加により粒子を凝集させて沈降除去する方法が実用化されている。この分野で対象とされる粒子の粒径はおおよそ数μｍから数百μｍであり、これより粒径の大きいものは自然沈殿でよく、逆に小さいものは凝集反応が起こりにくいため、除去するには精密濾過等の他の方法が必要とされている。古くからアルカリデンプンやアルギン酸ソーダ等の天然系水溶性高分子が使われてきたが、最近はより性能の高い合成系高分子凝集剤が広く使われている。数μｍから数百μｍの大きさの粒子を対象とするので血球分離には利用できる。  In the field of water treatment, a method of aggregating particles by adding a water-soluble polymer and removing them by sedimentation has been put into practical use. Particles targeted in this field are approximately several μm to several hundred μm, and particles having a particle size larger than this may be natural precipitation, while particles having a smaller particle size are less likely to cause an agglomeration reaction. Other methods such as microfiltration are required. Natural water-soluble polymers such as alkali starch and sodium alginate have been used for a long time, but recently synthetic polymer flocculants with higher performance have been widely used. Since particles of several μm to several hundred μm are targeted, it can be used for blood cell separation.

その例として、特許文献２には、人体から採取した血液（全血）に、デキストランと、バンコマイシンもしくはバンコマイシン構造を持つ化合物を添加混合し、所定時間の経過により血漿（および／または血清）と血球とを分離することを特徴とする血球の分離方法が記載されている。この方法は、従来の遠心分離機の使用を必要としないことを特徴としている。しかしながら、下記比較例２で確認されているように、この方法を微粒子を含む全血に適用した場合、血球は沈降するものの、微粒子は沈降せず、血漿／血清から微粒子を分離することはできなかった。  As an example, Patent Document 2 discloses that blood (whole blood) collected from a human body is mixed with dextran and vancomycin or a compound having a vancomycin structure, and plasma (and / or serum) and blood cells are obtained after a predetermined time. A method for separating blood cells, characterized in that This method is characterized in that it does not require the use of a conventional centrifuge. However, as confirmed in Comparative Example 2 below, when this method is applied to whole blood containing fine particles, the blood cells settle, but the fine particles do not settle, and the fine particles cannot be separated from plasma / serum. There wasn't.

また、血漿とヘモグロビン内包小胞体を混合した試料にデキストランを添加して遠心分離することにより、ヘモグロビン内包小胞体を沈降させて血漿を分離した実験が非特許文献４に報告されている。この報告では、予め血液から分離した血漿にヘモグロビン内包小胞体を混合し、このものにデキストランを添加して遠心分離することにより再び血漿を得る方法が記載されている。この方法を微粒子を含む採取全血に適用した場合、まず微粒子を含む採取全血から微粒子の浮遊する血漿を分離する操作を行い、その微粒子の浮遊する血漿にデキストランを添加し、遠心分離を行うという二段階の処理を要すことになり、従来の血球分離に較べ操作が煩雑となる。多検体を同時に処理することが多い臨床検体において、段階処理による容器間の移液が検体汚染や検体の入れ違い等の原因となる可能性もある。
特開平４−２１６２７号公報特開平８−２０８４９２号公報J. Biochem., 88, 1219, 1980J. Biochem., 91, 975, 1982Macromolecules, 29, 8132-8136Clin. Chem. Lab. Med., 41, 222-231, 2003Further, Non-Patent Document 4 reports an experiment in which plasma is separated by adding dextran to a sample in which plasma and hemoglobin-encapsulating vesicles are mixed and centrifuging to precipitate the hemoglobin-encapsulating vesicles. This report describes a method of obtaining plasma again by mixing hemoglobin-containing endoplasmic reticulum with plasma previously separated from blood, adding dextran to this and centrifuging it. When this method is applied to collected whole blood containing fine particles, first, the operation of separating the floating plasma of fine particles from the collected whole blood containing fine particles is performed, and dextran is added to the floating plasma of the fine particles, followed by centrifugation. Therefore, the operation becomes complicated compared to the conventional blood cell separation. In clinical specimens that often process multiple specimens at the same time, transfer between containers by stage processing may cause specimen contamination or specimen misplacement.
JP-A-4-21627 JP-A-8-208492 J. Biochem., 88, 1219, 1980 J. Biochem., 91, 975, 1982 Macromolecules, 29, 8132-8136 Clin. Chem. Lab. Med., 41, 222-231, 2003

以上述べたように、微粒子を投与した後の血液から採取された全血には、微粒子が含まれるが、その採取全血を遠心分離に供しただけでは、微粒子は、分離された血漿／血清に浮遊したままとどまり、微粒子による濁度や特性吸収により、特に比色や比濁を測定原理とする既存の臨床検査に支障をきたす。そして、従来の方法では、全血から、微粒子の取り除かれた血漿／血清を獲得するためには、煩雑な操作を要する。  As described above, the whole blood collected from the blood after administration of the microparticles contains microparticles, but the microparticles are separated from the separated plasma / serum only by subjecting the collected whole blood to centrifugation. It stays floating in the water, and the turbidity and characteristic absorption by the fine particles impede existing clinical tests that use colorimetry and turbidity as measurement principles. In the conventional method, complicated operations are required to obtain plasma / serum from which fine particles have been removed from whole blood.

従って、本発明は、微粒子を含む採取全血から、血漿／血清を、簡便な操作で、特に一段階で、分離するための方法とそのために使用される血液分離管を提供することを目的とする。  Accordingly, an object of the present invention is to provide a method for separating plasma / serum from collected whole blood containing microparticles by a simple operation, particularly in one step, and a blood separation tube used for the method. To do.

本発明者らは上記目的を達成すべく鋭意検討を行った結果、微粒子の浮遊する採取全血に高分子凝集剤を添加して、これを単に遠心分離することにより血漿や血清を分離できることを見いだした。その際、高分子凝集剤を収容した血液分離管を使用すれば、従来の血球分離と全く同じ操作で、採血から血漿／血清の分離までを、一段階で行うことが可能となる。  As a result of intensive studies to achieve the above object, the present inventors have found that plasma and serum can be separated by adding a polymer flocculant to collected whole blood in which fine particles are suspended and simply centrifuging it. I found it. At that time, if a blood separation tube containing a polymer flocculant is used, blood collection and plasma / serum separation can be performed in one step by exactly the same operation as conventional blood cell separation.

すなわち、本発明の１つの側面によれば、微粒子を含む採取全血を高分子凝集剤と混合し、その混合物を遠心処理に供して前記高分子凝集剤により凝集した血球と微粒子を沈降させ、上層の血漿または血清を回収することを特徴とする採取全血から血清または血漿を分離する血液分離方法が提供される。  That is, according to one aspect of the present invention, the collected whole blood containing microparticles is mixed with a polymer flocculant, and the mixture is subjected to centrifugation to precipitate blood cells and microparticles aggregated by the polymer flocculant, There is provided a blood separation method for separating serum or plasma from a collected whole blood, characterized in that upper plasma or serum is collected.

また、本発明の他の側面によれば、本発明の血液分離方法に用いる血液分離管であって、血液分離管本体と、前記血液分離管本体に収容された前記高分子凝集剤を含むことを特徴とする血液分離管が提供される。  According to another aspect of the present invention, there is provided a blood separation tube for use in the blood separation method of the present invention, comprising a blood separation tube main body and the polymer flocculant accommodated in the blood separation tube main body. A blood separation tube is provided.

本発明によれば、微粒子を含む採取全血から血漿／血清を簡便な操作で効率的に分離することができる。  According to the present invention, plasma / serum can be efficiently separated from collected whole blood containing fine particles by a simple operation.

以下に本発明の詳細を説明する。  Details of the present invention will be described below.

本発明よると、まず、微粒子を含む採取全血に高分子凝集剤を添加する。  According to the present invention, first, a polymer flocculant is added to the collected whole blood containing fine particles.

血中に投与される微粒子としては、油滴小球、脂肪乳剤、高分子ビーズ、高分子ミセル、高分子ゲル、あるいは両親媒性化合物の形成するミセル、小胞体、繊維状集合体、平板状集合体等を例示することができる。通常、これら微粒子は、直径が０．０１〜１μｍの範囲内にある。これら微粒子のうち、ヘモグロビンを内包したリン脂質小胞体を生理学的に許容され得る媒体に分散させた人工酸素運搬体は、人工血液として使用される。  Fine particles to be administered into blood include oil droplet globules, fat emulsions, polymer beads, polymer micelles, polymer gels, or micelles, vesicles, fibrous aggregates, and flat plates formed by amphiphilic compounds. An aggregate etc. can be illustrated. Usually, these fine particles have a diameter in the range of 0.01 to 1 μm. Among these fine particles, an artificial oxygen carrier in which phospholipid vesicles encapsulating hemoglobin are dispersed in a physiologically acceptable medium is used as artificial blood.

本発明に用いられる高分子凝集剤は、微粒子を凝集させる水溶性高分子を包含する。その例として、ポリビニルアルコール、ポリビニルピロリドン、ポリアクリルアミド、ポリエチレングリコール、澱粉、デキストラン、デキストリン等のノニオン性高分子凝集剤、カチオン変性ポリアクリルアミド、ポリＬ−リジン、キトサン、ポリビニルピリジン、ニトロ化アクリル樹脂、ポリビニルイミダゾリン、ポリ（ジアルキルアミノエチル）アクリレート、カチオン化澱粉、ポリエチレンイミン、アスパラギン酸／ヘキサメチレンジアミン重縮合物、ポリビニルアミジン、主鎖中に第４級アンモニウム塩構造を含む強塩基性高分子電解質であるアイオネン等のカチオン性高分子凝集剤、ポリアクリル酸ナトリウム、ポリアクリルアミドの部分加水分解物、スルホメチル化ポリアクリルアミド、アルギン酸ナトリウム、カルボキシメチルセルロースのナトリウム塩等のアニオン性高分子凝集剤、アクリルアミド／アミノアルキルアクリレート（またはメタクリレート）４級塩／アクリル酸（またはアクリル酸エステル）共重合体等の両性高分子凝集剤等が挙げられる。微粒子の性質により適した高分子凝集剤を使用できるが、各種生化学検査に供される血漿や血清を採取することを考慮して、目的とする検査を妨害しない高分子凝集剤を選択することが望ましい。微粒子がマイナスの電荷を有しているときはカチオン性高分子を、また微粒子がプラスの電荷を有しているときはアニオン性高分子を選択することにより、微粒子表面と高分子凝集剤が静電的に相互作用して凝集が促進されることが多く、逆に同電荷の微粒子と高分子の組み合せでは静電反発により凝集し難くなる場合がある。複数種の高分子凝集剤を使用してもよく、また微粒子の特性に合わせて適した高分子凝集剤を設計・合成できる場合には、新規な高分子凝集剤を使用することもできる。高分子凝集剤としては、デキストランおよびポリエチレングリコールが好ましく、デキストランが特に好ましい。  The polymer flocculant used in the present invention includes a water-soluble polymer that aggregates fine particles. Examples thereof include polyvinyl alcohol, polyvinyl pyrrolidone, polyacrylamide, polyethylene glycol, nonionic polymer flocculants such as starch, dextran, dextrin, cation-modified polyacrylamide, poly L-lysine, chitosan, polyvinyl pyridine, nitrated acrylic resin, Polyvinylimidazoline, poly (dialkylaminoethyl) acrylate, cationized starch, polyethyleneimine, aspartic acid / hexamethylenediamine polycondensate, polyvinylamidine, a strongly basic polymer electrolyte containing a quaternary ammonium salt structure in the main chain Cationic polymer flocculants such as certain ionene, sodium polyacrylate, partial hydrolyzate of polyacrylamide, sulfomethylated polyacrylamide, sodium alginate, carboxyme Anionic polymer flocculants such as sodium salt of Le cellulose, acrylamide / aminoalkyl acrylate (or methacrylate) quaternary salt / acrylic acid (or acrylate) copolymer of the amphoteric polymer flocculant and the like. A polymer flocculant suitable for the properties of the fine particles can be used, but taking into account the collection of plasma and serum for various biochemical tests, select a polymer flocculant that does not interfere with the intended test. Is desirable. By selecting a cationic polymer when the fine particles have a negative charge, and selecting an anionic polymer when the fine particles have a positive charge, the surface of the fine particles and the polymer flocculant are static. Aggregation is often promoted by electrical interaction, and conversely, the combination of fine particles and polymer having the same charge may make aggregation difficult due to electrostatic repulsion. A plurality of types of polymer flocculants may be used, and when a polymer flocculant suitable for the characteristics of the fine particles can be designed and synthesized, a novel polymer flocculant can also be used. As the polymer flocculant, dextran and polyethylene glycol are preferable, and dextran is particularly preferable.

一般に高分子凝集剤は、分子量が高いほど凝集能が高くなるため、分散性の高い微粒子を凝集させるにはより高分子量の添加を必要とする。分子量の上限はないが、分子量の増大により溶液粘度が上昇して採取血液との混合に時間を要す場合があるので、分子量２００万以下で微粒子を凝集できる高分子を選択するのが好ましい。また、非特許文献３に記載されているように、微粒子の凝集を生起する高分子凝集剤には下限臨界分子量が存在する点には充分注意が必要である。下限臨界分子量は高分子凝集剤の種類や微粒子の種類により決まるため、制限を設けることはできないが、臨界分子量以下の高分子を添加しても微粒子の凝集は生起しないため目的は達成されない。例えば、デキストランは、２００ｋＤａ以上の平均分子量を有することが好ましい。  In general, the higher the molecular weight of the polymer flocculant, the higher the aggregating ability. Therefore, a higher molecular weight needs to be added in order to agglomerate fine particles having high dispersibility. Although there is no upper limit on the molecular weight, it is preferable to select a polymer that can aggregate fine particles with a molecular weight of 2 million or less because the viscosity of the solution may increase due to an increase in the molecular weight and mixing with the collected blood may take time. Further, as described in Non-Patent Document 3, it is necessary to pay sufficient attention to the fact that the polymer flocculant that causes aggregation of fine particles has a lower critical molecular weight. Since the lower critical molecular weight is determined by the type of polymer flocculant and the type of fine particles, no limitation can be set. However, even if a polymer having a critical molecular weight or less is added, the aggregation of the fine particles does not occur, and the object is not achieved. For example, dextran preferably has an average molecular weight of 200 kDa or more.

高分子凝集剤は、固体、液体のいずれでもよく、例えば、溶液、粉末、薄膜等の形態で用いることができる。高分子凝集剤を溶液として用いる場合、溶媒としては、生理食塩水、緩衝溶液等を用いることができる。  The polymer flocculant may be either solid or liquid, and can be used in the form of, for example, a solution, a powder, or a thin film. When the polymer flocculant is used as a solution, a physiological saline, a buffer solution, or the like can be used as the solvent.

高分子凝集剤の量は、全血１ｍＬ当たり、１０ｍｇ以上の割合で用いることが好ましい。高分子凝集剤の量の上限に特に制限はないが、全血１ｍＬ当たり５０ｍｇ以下で十分である。  The amount of the polymer flocculant is preferably used at a rate of 10 mg or more per 1 mL of whole blood. The upper limit of the amount of the polymer flocculant is not particularly limited, but 50 mg or less per mL of whole blood is sufficient.

採取全血には、高分子凝集剤に加えて、血液抗凝固剤または血液凝固促進剤を添加することができる。血液抗凝固剤は、全血から血漿を選択的に取得する場合に添加することができ、血液凝固促進剤は、全血から血清を選択的に取得する場合に添加することができる。  In addition to the polymer flocculant, a blood anticoagulant or a blood coagulation promoter can be added to the collected whole blood. The blood anticoagulant can be added when plasma is selectively obtained from whole blood, and the blood coagulation promoter can be added when serum is selectively obtained from whole blood.

血液抗凝固剤としては、それ自体既知のものを用いることができ、例えば、エチレンジアミン四酢酸二カリウム塩（ＥＤＴＡ−２Ｋ）、エチレンジアミン四酢酸二ナトリウム塩（ＥＤＴＡ−２Ｎａ）、エチレンジアミン四酢酸ナトリウム二カリウム塩、エチレンジアミン四酢酸ナトリウム三カリウム塩、エチレンジアミン四酢酸三ナトリウム塩等のＥＤＴＡ塩；ヘパリンナトリウム、ヘパリンリチウム等のヘパリン塩；フッ化ナトリウム；クエン酸ナトリウムが挙げられる。これらの２種以上を組み合わせてもよい。血液抗凝固剤の使用量は、既知の使用量でよく、例えば、血液抗凝固剤としてＥＤＴＡ−２Ｎａを使用する場合には、全血１ｍＬ当たり、１ｍｇ程度の割合で添加することができる。血液抗凝固剤は、固体、液体のいずれでもよく、例えば、溶液、粉末、薄膜等の形態で用いることができる。溶液として用いる場合、溶媒は、上記高分子凝固剤の溶液に用いる溶媒を用いることができる。  As the blood anticoagulant, those known per se can be used. For example, ethylenediaminetetraacetic acid dipotassium salt (EDTA-2K), ethylenediaminetetraacetic acid disodium salt (EDTA-2Na), ethylenediaminetetraacetic acid sodium dipotassium EDTA salts such as sodium salt, ethylenediaminetetraacetic acid sodium tripotassium salt, ethylenediaminetetraacetic acid trisodium salt; heparin salts such as heparin sodium and heparin lithium; sodium fluoride; sodium citrate. Two or more of these may be combined. The amount of blood anticoagulant used may be a known amount. For example, when EDTA-2Na is used as a blood anticoagulant, it can be added at a rate of about 1 mg per mL of whole blood. The blood anticoagulant may be either solid or liquid, and can be used in the form of, for example, a solution, a powder, or a thin film. When used as a solution, the solvent used in the polymer coagulant solution can be used as the solvent.

血液凝固促進剤としては、それ自体既知のものを用いることができ、例えばシリカが挙げられる。血液凝固促進剤の使用量は、既知の使用量でよく、例えば、血液凝固促進剤は、全血１ｍＬ当たり、０．０１〜１．５ｍｇの割合で添加することができる。血液凝固促進剤は、固体、液体のいずれでもよく、例えば、溶液、粉末、薄膜等の形態で用いることができる。溶液として用いる場合、溶媒は、上記高分子凝固剤の溶液に用いる溶媒を用いることができる。  As the blood coagulation promoter, those known per se can be used, and examples thereof include silica. The amount of the blood coagulation promoter used may be a known amount. For example, the blood coagulation promoter can be added at a rate of 0.01 to 1.5 mg per mL of whole blood. The blood coagulation promoter may be either solid or liquid, and can be used in the form of, for example, a solution, a powder, or a thin film. When used as a solution, the solvent used in the polymer coagulant solution can be used as the solvent.

さらに、全血には、血漿や血清の分離を容易にするため、分離促進剤を混合することができる。分離促進剤としては、シリコーンオイル、塩素化ポリブテン、ポリイソブテン、アクリル重合体、α−オレフィン／マレイン酸ジエステル重合体等の樹脂を主成分として、これらに比重、粘度調整用としてシリカ、粘土等の無機微粒子や有機ゲル化剤を添加したものが挙げられる。これらの主成分となる樹脂は基本的に疎水性を有するものであり、また、無機微粒子は増粘効果、チキソトロピ−性を与え、有機ゲル化剤は、チキソトロピ−性を付与することなく、増粘効果を与えるものとして利用できる。分離促進剤は、全血１ｍＬ当たり、５０〜４００ｍｇの割合で用いることができる。  Further, in order to facilitate separation of plasma and serum, whole blood can be mixed with a separation accelerator. Separation accelerators are mainly composed of resins such as silicone oil, chlorinated polybutene, polyisobutene, acrylic polymer, α-olefin / maleic acid diester polymer, and specific gravity and inorganic properties such as silica and clay for adjusting viscosity. The thing which added microparticles | fine-particles and an organic gelling agent is mentioned. These main components are basically hydrophobic, inorganic fine particles provide a thickening effect and thixotropic property, and organic gelling agents increase without imparting thixotropic property. Can be used to give a sticky effect. The separation promoter can be used at a rate of 50 to 400 mg per mL of whole blood.

こうして、全血に高分子凝集剤（および必要により、上記血液抗凝固剤または血液凝固促進剤、あるいは分離促進剤）を添加し、混合した後、この混合物を遠心分離操作に供する。この遠心分離操作は、通常の遠心分離機を用いて行うことができ、遠心力としては、１０００〜５０００ｇで十分である。  Thus, after adding and mixing the polymer aggregating agent (and the blood anticoagulant or the blood coagulation promoter or the separation promoter if necessary) to the whole blood, the mixture is subjected to a centrifugation operation. This centrifugation operation can be performed using a normal centrifuge, and a centrifugal force of 1000 to 5000 g is sufficient.

この遠心分離操作により、血球沈殿層の上に、高分子凝集剤により凝集した微粒子の沈殿層が形成され、澄んだ血漿あるいは血清が上層（上澄み）として形成される。しかる後、血漿または血清を回収する。  By this centrifugation operation, a precipitate layer of fine particles aggregated by the polymer flocculant is formed on the blood cell sedimentation layer, and clear plasma or serum is formed as an upper layer (supernatant). Thereafter, plasma or serum is collected.

本発明の血液分離方法は、高分子凝集剤を収容した血液分離管を用いることによって、より簡便に行うことができる。血液分離管は、有底筒状（通常、円筒状）の分離管本体を有し、この分離管本体の内部に高分子凝集剤（および必要により、上記血液抗凝固剤または血液凝固促進剤、あるいは分離促進剤）が収容されている。分離管本体としては、通常一般に使用されている採血管を用いることができる。そのような採血管は、ガラス、またはポリスチレン、ポリメチルメタクリレート、ポリエステル等の合成樹脂で形成される。本発明の血液分離管は、分離管本体内部が減圧状態に維持されていることが好ましく、そのような分離管本体としては、通常一般的に使用されている真空採血管を用いることができる。  The blood separation method of the present invention can be carried out more easily by using a blood separation tube containing a polymer flocculant. The blood separation tube has a bottomed cylindrical (usually cylindrical) separation tube body, and a polymer flocculant (and the blood anticoagulant or blood coagulation promoter, if necessary, inside the separation tube body, Alternatively, a separation accelerator) is accommodated. As the separation tube main body, a generally used blood collection tube can be used. Such a blood collection tube is formed of glass or a synthetic resin such as polystyrene, polymethyl methacrylate, polyester or the like. In the blood separation tube of the present invention, the inside of the separation tube main body is preferably maintained in a reduced pressure state. As such a separation tube main body, a generally used vacuum blood collection tube can be used.

図１は、高分子凝集剤等を収容した本発明の血液分離管を例示する概略図である。図１Ａは、分離管本体１１内に、液体（溶液）状態の高分子凝集剤等１３が収容されている例を示す。図１Ｂは、分離管本体１１内に、固体（例えば粉末）状態の高分子凝集剤等１４が収容されている例を示す。図１Ｃは、分離管本体１１の内壁に、薄膜状態の高分子凝集剤１５が収容されている例を示す。これら血液分離管は、内部が減圧状態にあり、そのため、開口部はゴムキャップ１２により密閉されている。  FIG. 1 is a schematic view illustrating a blood separation tube of the present invention containing a polymer flocculant and the like. FIG. 1A shows an example in which apolymer flocculant 13 or the like 13 in a liquid (solution) state is accommodated in the separation tubemain body 11. FIG. 1B shows an example in which apolymer flocculant 14 or the like in a solid (for example, powder) state is accommodated in the separation tubemain body 11. FIG. 1C shows an example in which apolymer flocculant 15 in a thin film state is accommodated on the inner wall of the separation tubemain body 11. These blood separation tubes have a reduced pressure inside, and therefore the opening is sealed with arubber cap 12.

本発明の血液分離管は、従来使用されている採血管と高分子凝集剤をセットにして要時準備することもできる。  The blood separation tube of the present invention can be prepared as needed by combining a conventionally used blood collection tube and a polymer flocculant.

従来の採血管と本発明の血液分離管を使用して、微粒子浮遊血液を遠心分離した後の状態を図２に例示する。  The state after centrifuging fine particle floating blood using a conventional blood collection tube and the blood separation tube of the present invention is illustrated in FIG.

従来の採血管（図２Ａ）を使用した場合には、血球成分は沈降して沈殿層２３を形成し、その上に白血球／血小板沈殿層２２が形成されるが、微粒子は血漿／血清に浮遊して分離できず、乳濁した血漿／血清層２１が形成されるに過ぎない。  When a conventional blood collection tube (FIG. 2A) is used, blood cell components settle to form asediment layer 23, and a leukocyte /platelet sediment layer 22 is formed thereon, but microparticles float in plasma / serum. Thus, only a milky plasma /serum layer 21 that cannot be separated is formed.

一方、本発明の血液分離管（図２Ｂ）を使用した場合には、血球沈殿層２３の上に白血球／血小板沈殿層２２が形成されるとともに、白血球／血小板沈殿層２５の上に微粒子沈殿層３２が形成され、その上に、澄んだ透明な血漿／血清層３１が形成される。この血漿／血清層３１は、デカンテーション等それ自体既知の手法で回収することができる。  On the other hand, when the blood separation tube of the present invention (FIG. 2B) is used, a white blood cell /platelet precipitation layer 22 is formed on the bloodcell precipitation layer 23 and a fine particle precipitation layer is formed on the white blood cell / platelet precipitation layer 25. 32 is formed on which a clear transparent plasma /serum layer 31 is formed. The plasma /serum layer 31 can be collected by a known method such as decantation.

なお、図２は下記実施例に記載の人工酸素運搬体が微粒子として浮遊した血液について実施した例を図示したものであり、微粒子の大きさや比重、凝集の度合い、高分子凝集剤の種類により沈殿部分の構成は、微粒子が血球の下層に沈殿、血球と微粒子が混在した沈殿になることもある。  FIG. 2 shows an example in which the artificial oxygen carrier described in the following examples was carried out on blood floating as fine particles, and the precipitates depend on the size and specific gravity of the fine particles, the degree of aggregation, and the type of polymer flocculant. The structure of the portion may be that the fine particles are precipitated in the lower layer of the blood cells, and the blood cells and the fine particles are mixed.

以下に実施例を用いて説明するが、本発明はこの実施例に限定されるものでない。  The present invention will be described below with reference to examples, but the present invention is not limited to these examples.

比較例１：従来の採血管の利用
麻酔下、ビーグル犬の大腿動脈より血液を５０％脱血した後、１時間経過してから人工酸素運搬体として直径２５０ｎｍのリン脂質小胞体にヘモグロビンを内包させた微粒子（ヘモグロビン小胞体）を５重量％アルブミン水溶液に分散させた人工酸素運搬体を、脱血液と同容量で上腕静脈より輸注した。４時間後にこのビーグル犬より採取した血液を試料とし、従来使用されている全血を対象とする真空採血管に採取した。真空採血管として収容物のないもの、抗凝固剤を収容したもの、あるいは凝固促進剤と分離促進剤を収容したものを使用した。室温で１０分間静置した後、遠心分離（５０００ｒｐｍ、１０分）した結果、血球は沈殿するものの、ヘモグロビン小胞体は血漿あるいは血清に浮遊したままで分離できなかった。その状態は図２（Ａ）に例示されている。Comparative Example 1: Use of a conventional blood collection tube Under anesthesia, 50% of blood was removed from the femoral artery of a beagle dog, and after 1 hour, hemoglobin was encapsulated in a phospholipid vesicle having a diameter of 250 nm as an artificial oxygen carrier. An artificial oxygen carrier in which the fine particles (hemoglobin vesicles) thus dispersed were dispersed in a 5% by weight albumin aqueous solution was infused from the brachial vein in the same volume as blood removal. Four hours later, the blood collected from the beagle dog was used as a sample, and the whole blood conventionally used was collected in a vacuum blood collection tube. As the vacuum blood collection tube, one having no container, one containing an anticoagulant, or one containing a coagulation accelerator and a separation accelerator was used. After standing at room temperature for 10 minutes and then centrifuging (5000 rpm, 10 minutes), blood cells precipitated, but hemoglobin vesicles remained floating in plasma or serum and could not be separated. The state is illustrated in FIG.

比較例２：デキストラン添加による分離法
特許文献２には、人体から採取した血液にデキストラン、バイコマイシンまたはバイコマイシン構造式を持つ化合物、クロロキンを添加混合し、血球分離を促進することにより遠心分離を省略する方法が記載されている。Comparative Example 2: Separation Method by Addition of Dextran In Patent Document 2, dextran, a compound having a baicomycin or baicomycin structural formula, and chloroquine are added to and mixed with blood collected from a human body, and centrifugation is omitted by promoting blood cell separation. A method is described.

そこで、比較例１に記載したビーグル犬の採取血液１ｍＬに、生理塩水に溶解させたデキストラン溶液（分子量：４８７ｋＤａ、４００ｍｇ／ｍＬ）を２５μＬ添加してそのまま静置した。血球の沈降は進行するものの、2時間静置しても人工酸素運搬体は血漿に浮遊したままで分離できなかった。  Therefore, 25 μL of dextran solution (molecular weight: 487 kDa, 400 mg / mL) dissolved in physiological saline was added to 1 mL of blood collected from the beagle dog described in Comparative Example 1, and left as it was. Although sedimentation of blood cells progressed, the artificial oxygen carrier was suspended in plasma and could not be separated even after standing for 2 hours.

実施例１
（Ａ）ポリエチレングリコール溶液（高分子凝集剤）の調整
表１に示す平均分子量の異なる２種類の市販のポリエチレングリコール粉末各１ｇを秤量し、これを生理塩水５ｍＬに溶解させて２種類の高分子凝集剤溶液を調製した。

Example 1
(A) Preparation of polyethylene glycol solution (polymer flocculant) 1 g of two types of commercially available polyethylene glycol powders having different average molecular weights shown in Table 1 were weighed and dissolved in 5 mL of physiological saline to prepare two types of polymers. A flocculant solution was prepared.

（Ｂ）ポリエチレングリコールを収容した採血管による血漿分離
市販の採血管に、表１に示した高分子凝集剤を各々０．５ｍＬ収容し、３つの血液分離管を作製した（表２）。(B) Plasma separation using a blood collection tube containing polyethylene glycol 0.5 mL of the polymer flocculant shown in Table 1 was housed in a commercially available blood collection tube to produce three blood separation tubes (Table 2).

微粒子としてリン脂質小胞体（粒径：２７０ｎｍ）の生理塩分散液（脂質濃度：５ｇ／ｄＬ、１０ｍＬ）をウサギ（２．５ｋｇ）の耳静脈から投与し、３０分経過後に採血した。採取血液（５ｍＬ）を表２に示した血液分離管に採取して、２５℃で１０分間静置した。各血液分離管を遠心分離（５０００ｒｐｍ、１０分）に供して血漿層からの小胞体除去の様子を観察した。結果を表２に併記する。

A physiological salt dispersion (lipid concentration: 5 g / dL, 10 mL) of phospholipid vesicles (particle size: 270 nm) as fine particles was administered from the ear vein of a rabbit (2.5 kg), and blood was collected after 30 minutes. The collected blood (5 mL) was collected in the blood separation tube shown in Table 2 and allowed to stand at 25 ° C. for 10 minutes. Each blood separation tube was subjected to centrifugation (5000 rpm, 10 minutes), and the state of the endoplasmic reticulum removal from the plasma layer was observed. The results are also shown in Table 2.

表２に示すように、高分子凝集剤を収容していない採血管（血液分離管１）では、血漿層に小胞体が残留して乳濁していた。一方、ポリエチレングリコールを高分子凝集剤として収容した採血管では透明な血漿が得られた。このことよりポリエチレングリコールを高分子凝集剤として収容した分採血管が、小胞体が浮遊する血液の分離に有効に機能することが確認された。  As shown in Table 2, in the blood collection tube (blood separation tube 1) that did not contain the polymer flocculant, the endoplasmic reticulum remained in the plasma layer and became emulsion. On the other hand, transparent blood plasma was obtained in a blood collection tube containing polyethylene glycol as a polymer flocculant. From this, it was confirmed that the blood collection tube containing polyethylene glycol as a polymer flocculant functions effectively for the separation of blood in which the endoplasmic reticulum floats.

実施例２
（Ａ）デキストラン溶液（高分子凝集剤）の調製
表３に示す平均分子量を有する市販のデキストラン粉末１ｇを秤量し、これを生理塩水５ｍＬに溶解させて高分子凝集剤を調製した。

Example 2
(A) Preparation of dextran solution (polymer flocculant) 1 g of commercially available dextran powder having an average molecular weight shown in Table 3 was weighed and dissolved in 5 mL of physiological saline to prepare a polymer flocculant.

（Ｂ）デキストランを収容した採血管による血漿分離
市販の７ｍＬ採血管（収容物なし）に、表３に示した高分子凝集剤を各々０．５ｍＬ収容して７つの血液分離管を作製した（表４）。(B) Plasma separation by blood collection tube containing dextran Seven commercially available 7-mL blood collection tubes (without inclusions) each containing 0.5 mL of the polymer flocculant shown in Table 3 to prepare seven blood separation tubes ( Table 4).

ヘモグロビン小胞体を投与したビーグル犬から採血し、採血液（５ｍＬ）を表４に示した血液分離管に採取して、２５℃で１０分間静置した。各血液分離管を遠心分離（５０００ｒｐｍ、１０分）に供して血漿層からのヘモグロビン小胞体除去の様子を観察した。結果を表４に併記する。

Blood was collected from a beagle dog administered with hemoglobin vesicles, and blood (5 mL) was collected in a blood separation tube shown in Table 4 and allowed to stand at 25 ° C. for 10 minutes. Each blood separation tube was subjected to centrifugation (5000 rpm, 10 minutes), and the state of hemoglobin vesicle removal from the plasma layer was observed. The results are also shown in Table 4.

表４に示すように、分子量１２４ｋＤａ以下のデキストランを添加した血液分離管（血液分離管４〜８）では、血漿層にヘモグロビン小胞体が残留して乳濁していた。なお、比較例１に記載のように、デキストランを収容していない採血管でもヘモグロビン小胞体が残留して乳濁した血漿層となる。一方、デキストランの分子量２００ｋＤａ、４８７ｋＤａ（血液分離管９、１０）では透明な血漿が得られた。採血液中にヘモグロビン小胞体が浮遊する血液では、分子量２００ｋＤａ以上のデキストランを収容した血液分離管を使用すれば遠心分離により透明な血漿が得られることが示された。  As shown in Table 4, in the blood separation tubes (blood separation tubes 4 to 8) to which dextran having a molecular weight of 124 kDa or less was added, hemoglobin vesicles remained in the plasma layer and became emulsion. In addition, as described in Comparative Example 1, even in a blood collection tube that does not contain dextran, the hemoglobin vesicle remains and becomes a milky plasma layer. On the other hand, transparent plasma was obtained with dextran molecular weights of 200 kDa and 487 kDa (blood separation tubes 9 and 10). For blood in which hemoglobin endoplasmic reticulum floats during blood collection, it was shown that transparent plasma can be obtained by centrifugation using a blood separation tube containing dextran having a molecular weight of 200 kDa or more.

実施例３：デキストランの収容量の効果
市販の７ｍＬ採血管（収容物なし）に高分子凝集剤として分子量４８７ｋＤａのデキストラン溶液０．３〜０．７５ｍＬを収容して５つの血液分離管を作製した（表５）。Example 3 Effect of Capacity of Dextran Five blood separation tubes were prepared by accommodating 0.3 to 0.75 mL of dextran solution having a molecular weight of 487 kDa as a polymer coagulant in a commercially available 7 mL blood collection tube (no container). (Table 5).

ヘモグロビン小胞体を投与したビーグル犬から採血し、採血液（５ｍＬ）を、表５に示した血液分離管に採取して、２５℃で１０分間静置した。各血液分離管を遠心分離（５０００ｒｐｍ、１０分）に供して血漿層からのヘモグロビン小胞体除去の様子を観察した。結果を表５に併記する。

Blood was collected from a beagle dog administered with hemoglobin vesicles, and blood (5 mL) was collected in a blood separation tube shown in Table 5 and allowed to stand at 25 ° C. for 10 minutes. Each blood separation tube was subjected to centrifugation (5000 rpm, 10 minutes), and the state of hemoglobin vesicle removal from the plasma layer was observed. The results are also shown in Table 5.

表５に示すように０．５ｍＬ以上（採血後のデキストラン濃度にして１８ｍｇ／ｍＬ以上）を収容した採血管を使用すれば遠心分離により透明な血漿が得られることが示された。As shown in Table 5, it was shown that transparent plasma can be obtained by centrifugation when a blood collection tube containing 0.5 mL or more (the dextran concentration after blood collection is 18 mg / mL or more) is used.

実施例４：デキストランを収容した採血管による血清分離
市販の凝固促進剤（シリカ）を収容した採血管に高分子凝集剤として分子量４８７ｋＤａのデキストラン溶液（２００ｍｇ／ｍＬ、０．７５ｍＬ）を収容して血液分離管を作製した。Example 4: Serum separation by blood collection tube containing dextran A dextran solution (200 mg / mL, 0.75 mL) having a molecular weight of 487 kDa was accommodated as a polymer aggregating agent in a blood collection tube containing a commercially available coagulation promoter (silica). A blood separation tube was prepared.

ヘモグロビン小胞体を投与したビーグル犬から採血し、採血液（６．２５ｍＬ）を上記血液分離管に採取して、２５℃で２０分間静置した。この血液分離管を遠心分離（５０００ｒｐｍ、１０分）に供したところ、得られた上澄み（血清）は透明であり、血清からのヘモグロビン小胞体除去が確認された。  Blood was collected from a beagle dog administered with hemoglobin vesicles, and blood (6.25 mL) was collected in the blood separation tube and allowed to stand at 25 ° C. for 20 minutes. When this blood separation tube was subjected to centrifugation (5000 rpm, 10 minutes), the obtained supernatant (serum) was transparent, and it was confirmed that hemoglobin vesicles were removed from the serum.

また比較例としてデキストラン溶液を収容していない採血管をそのまま使用したものについては、同様の遠心分離によりヘモグロビン小胞体は除去されず、透明な血清を得ることはできなかった。  In addition, as a comparative example, a blood collection tube that did not contain a dextran solution was used as it was, and the hemoglobin vesicles were not removed by the same centrifugation, and transparent serum could not be obtained.

実施例５：高分子凝集剤を収容した採血管による血漿微粒子の分離
ラット（５００ｇ）から血液１２ｍＬを採取した。この採取血液３ｍＬを生理塩水（０．４ｍＬ）を収容した採血管に採取した。２５℃で１０分間静置した後、遠心分離（５０００ｒｐｍ、１０分）供したところ、得られた血漿は僅かに乳濁していた。これは、トリグリセリドやリポ蛋白質等生体由来の微粒子の光散乱により、この含量が著しく高い場合には（高脂血症）強い濁度により比濁、比色による検査が困難になる。Example 5: Separation of plasma microparticles using a blood collection tube containing apolymer flocculant 12 mL of blood was collected from a rat (500 g). 3 mL of this collected blood was collected in a blood collection tube containing physiological saline (0.4 mL). After standing at 25 ° C. for 10 minutes and then subjected to centrifugation (5000 rpm, 10 minutes), the obtained plasma was slightly milky. This is due to light scattering of biologically derived fine particles such as triglycerides and lipoproteins, and when this content is extremely high (hyperlipidemia), turbidity and colorimetric examination become difficult due to strong turbidity.

同様に、ラットからの採取血液３ｍＬを、分子量４８７ｋＤａのデキストラン溶液（２００ｍｇ／ｍＬ、０．４ｍＬ）、または分子量２０ｋＤａのポリエチレングリコール溶液（２００ｍｇ／ｍＬ、０．４ｍＬ）を収容した採血管（血液分離管）に採取した。２５℃で１０分間静置した後、遠心分離（５０００ｒｐｍ、１０分）に供したところ、得られた血漿は、デキストランを収容した血液分離管では僅かに乳濁していたが、ポリエチレングリコールを収容した血液分離管では濁度の低下を認めた。このことから、本発明の血液分離管は高分子凝集剤の選択により生体由来の微粒子の除去にも有効であることが確認された。  Similarly, 3 mL of blood collected from a rat was collected from a blood collection tube (blood separation) containing a dextran solution (200 mg / mL, 0.4 mL) having a molecular weight of 487 kDa or a polyethylene glycol solution (200 mg / mL, 0.4 mL) having a molecular weight of 20 kDa. Tube). After standing at 25 ° C. for 10 minutes and then subjecting to centrifugation (5000 rpm, 10 minutes), the obtained plasma was slightly milky in the blood separation tube containing dextran, but contained polyethylene glycol. The blood separation tube showed a decrease in turbidity. From this, it was confirmed that the blood separation tube of the present invention is effective in removing fine particles derived from living bodies by selecting a polymer flocculant.

実施例６：微粒子投与血液から分離した血清の生化学検査
実施例４で分離した血清について生化学検査を実施した。超遠心分離あるいは従来の採血管により分離した血清を比較とした。検査は臨床検査機関に依頼し、通常の臨床検査法に従い実施された。その結果を表６に示す。

Example 6: Biochemical test of serum separated from microparticle-administered blood Biochemical test was performed on the serum separated in Example 4. Serum separated by ultracentrifugation or a conventional blood collection tube was used for comparison. Tests were commissioned to clinical laboratories and performed according to normal clinical laboratory methods. The results are shown in Table 6.

表６に示すように、実施例４で得られた血清を、超遠心分離法で得られた血清の生化学検査値と比較すると、βーリポ蛋白で低値傾向を認めるものの、その他の項目は同等であった。一方、高分子凝集剤を収容していない従来の採血管では、大部分の項目において測定値が大きく逸脱するか、検出不可であった。本発明の高分子凝集剤を収容した採血管の使用により、微粒子投与による血液生化学検査への干渉が回避されることが確認された。  As shown in Table 6, when the serum obtained in Example 4 was compared with the biochemical test value of the serum obtained by the ultracentrifugation method, a low value tendency was observed in β-lipoprotein, but other items were It was equivalent. On the other hand, in the conventional blood collection tube that does not contain the polymer flocculant, the measured value deviates greatly in most items or is undetectable. It has been confirmed that the use of blood collection tubes containing the polymer flocculant of the present invention avoids interference with blood biochemical tests due to the administration of fine particles.

本発明の血液分離管を示す概略図。Schematic which shows the blood separation tube of this invention.従来の採血管と本発明の血液分離管を使用して微粒子浮遊血液を遠心分離した後の状態を示す概略図。Schematic which shows the state after centrifuging fine particle floating blood using the conventional blood collection tube and the blood separation tube of this invention.

符号の説明Explanation of symbols

１１…血液分離管本体
１２…ゴムキャップ
１３…液体状態の高分子凝集剤
１４…固体状態の高分子凝集剤
１５…薄膜状態の高分子凝集剤
２１…微粒子が浮遊した乳濁血漿／血清層
２２…白血球／血小板沈殿層
２３…赤血球沈殿層
３１…透明血漿／血清層
３２…凝集微粒子沈殿層DESCRIPTION OFSYMBOLS 11 ... Bloodseparation tube body 12 ...Rubber cap 13 ... Liquidstate polymer flocculant 14 ... Solidstate polymer flocculant 15 ... Thin filmstate polymer flocculant 21 ... Emulsion plasma / serum layer with suspendedfine particles 22 White blood cell /platelet sediment layer 23 Red bloodcell sediment layer 31 Transparent plasma /serum layer 32 Aggregated particulate sediment layer

Claims (11)

Translated fromJapanese

微粒子を含む採取全血を高分子凝集剤と混合し、その混合物を遠心処理に供して前記高分子凝集剤により凝集した血球と微粒子を沈降させ、上層の血漿または血清を回収することを特徴とする採取全血から血清または血漿を分離する血液分離方法。  Collected whole blood containing microparticles is mixed with a polymer flocculant, and the mixture is subjected to a centrifugal treatment to precipitate blood cells and microparticles aggregated by the polymer flocculant, thereby collecting upper plasma or serum. A blood separation method for separating serum or plasma from collected whole blood. 前記採取全血を前記高分子凝集剤を収容した分離管に入れ、その分離管を前記遠心処理に供することを特徴とする請求項１に記載の血液分離方法。  2. The blood separation method according to claim 1, wherein the collected whole blood is put into a separation tube containing the polymer flocculant, and the separation tube is subjected to the centrifugal treatment. 前記微粒子が、血管内に投与された製剤であり、その直径が０．０１〜１μｍの範囲内にあることを特徴とする請求項１に記載の血液分離方法。  The blood separation method according to claim 1, wherein the fine particles are a preparation administered into a blood vessel, and the diameter thereof is in the range of 0.01 to 1 µm. 前記製剤が、ヘモグロビンを内包したリン脂質小胞体を含む人工酸素運搬体であることを特徴とする請求項３に記載の血液分離方法。  4. The blood separation method according to claim 3, wherein the preparation is an artificial oxygen carrier containing a phospholipid vesicle encapsulating hemoglobin. 前記高分子凝集剤が、ポリエチレングリコールまたはデキストランであることを特徴とする請求項１〜４のいずれか１項に記載の血液分離方法。  The blood separation method according to any one of claims 1 to 4, wherein the polymer flocculant is polyethylene glycol or dextran. 前記デキストランの平均分子量が２００ｋＤａ以上であることを特徴とする請求項５に記載の血液分離方法。  6. The blood separation method according to claim 5, wherein the average molecular weight of the dextran is 200 kDa or more. 前記デキストランを、前記採取全血中の濃度が１８ｍｇ／ｍＬ以上となるように前記全血と混合することを特徴とする請求項５または６に記載の血液分離方法。  The blood separation method according to claim 5 or 6, wherein the dextran is mixed with the whole blood so that the concentration in the collected whole blood is 18 mg / mL or more. 前記高分子凝集剤に加えて、前記採取全血に血液抗凝固剤または血液凝固促進剤をさらに添加することを特徴とする請求項１〜７のいずれか１項に記載の血液分離方法。  The blood separation method according to any one of claims 1 to 7, wherein a blood anticoagulant or a blood coagulation promoter is further added to the collected whole blood in addition to the polymer flocculant. 請求項２〜７に記載の血液分離方法に用いる血液分離管であって、血液分離管本体と、前記血液分離管本体に収容された前記高分子凝集剤を含むことを特徴とする血液分離管。  A blood separation tube used in the blood separation method according to claim 2, comprising a blood separation tube main body and the polymer flocculant accommodated in the blood separation tube main body. . 前記血液分離管本体にさらに血液抗凝固剤または血液凝固促進剤を収容したことを特徴とする請求項９に記載の血液分離管。  The blood separation tube according to claim 9, wherein a blood anticoagulant or a blood coagulation promoter is further contained in the blood separation tube main body. 前記血液分離管本体の内部が真空状態に維持されていることを特徴とする請求項９または１０に記載の血液分離管。  The blood separation tube according to claim 9 or 10, wherein the inside of the blood separation tube main body is maintained in a vacuum state.

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