@) [0001] L'invention concerne une composition sous forme d'une solution aqueuse injectable, dont le pH est compris de 3,5 à 4,4 comprenant au moins de l'insuline humaine A21G et un suppresseur de glucagon à action prandiale.@) The invention relates to a composition in the form of an injectable aqueous solution, the pH of which is between 3.5 and 4.4 comprising at least human insulin A21G and a glucagon suppressant with prandial action .
[0002] Dans un mode de réalisation, le suppresseur de glucagon à action prandiale est choisi dans le groupe constitué d'un analogue de l'amyline ou un agoniste du récepteur de l'amyline ou un analogue du GLP-1 ou un agoniste du récepteur au GLP-1 (GLP-1 RA). [0003] Dans un mode de réalisation, le suppresseur de glucagon à action prandiale est analogue de l'amyline ou un agoniste du récepteur de l'amyline.In one embodiment, the glucagon suppressant with prandial action is chosen from the group consisting of an amylin analog or an amylin receptor agonist or a GLP-1 analog or an agonist of the GLP-1 receptor (GLP-1 RA). In one embodiment, the glucagon suppressant with prandial action is analogous to amylin or an agonist of the amylin receptor.
[0004] Dans un mode de réalisation, le peptide suppresseur de glucagon à action prandiale est le pramlintide.In one embodiment, the glucagon suppressing peptide with prandial action is pramlintide.
[0001] Elle concerne également un procédé d'obtention de l'insuline humaine A21G comprenant au moins une étape consistant à faire réagir l'insuline humaine A21G, B31 R, B32R (insuline glargine) avec la carboxypeptidase B de rat à un ratio insuline/carboxypeptidase compris entre 500 et 2000, à un pH compris de 7,5 à 8,5 et à une température comprise de 20 à 30°C pendant 10 à 20 heures lllllllllllllllllllllllllllllllllllllllllllllIt also relates to a process for obtaining human insulin A21G comprising at least one step consisting in reacting human insulin A21G, B31 R, B32R (insulin glargine) with rat carboxypeptidase B at an insulin ratio / carboxypeptidase between 500 and 2000, at a pH between 7.5 and 8.5 and at a temperature between 20 and 30 ° C for 10 to 20 hours lllllllllllllllllllllllllllllllllllllllllllllllll
COMPOSITIONS SOUS FORME D'UNE SOLUTION AQUEUSE INJECTABLE COMPRENANT AU MOINS DE L'INSULINE HUMAINECOMPOSITIONS IN THE FORM OF AN AQUEOUS INJECTION SOLUTION COMPRISING AT LEAST HUMAN INSULIN
A21G ET UN SUPPRESSEUR DE GLUCAGON A ACTION PRANDIALE [0001] L'invention concerne les thérapies par injection de composition comprenant au moins de l'insuline humaine A21G, à action prandiale, et un suppresseur de glucagon, en particulier à action prandiale, pour traiter le diabète et permettre qu'à améliorer le contrôle des hyperglycémies post-prandiales.A21G AND A GLUCAGON SUPPRESSOR WITH PRANDIAL ACTION [0001] The invention relates to therapies by injection of composition comprising at least human insulin A21G, with prandial action, and a glucagon suppressant, in particular with prandial action, for treating diabetes and allow that to improve the control of postprandial hyperglycemia.
[0002] Le diabète de type 1 est une maladie autoimmune conduisant à la destruction des cellules béta du pancréas. Ces cellules sont connues pour produire l'insuline, dont le rôle principal est de réguler l'utilisation du glucose dans les tissus périphériques (Gerich 1993 Control of glycaemia). Par conséquent, les patients atteints de diabète de type 1 souffrent d'hyperglycémie chronique et doivent s'administrer de l'insuline exogène afin de limiter cette hyperglycémie. L'insulinothérapie a permis de changer drastiquement l'espérance de vie de ces patients.Type 1 diabetes is an autoimmune disease leading to the destruction of beta cells in the pancreas. These cells are known to produce insulin, the main role of which is to regulate the use of glucose in peripheral tissues (Gerich 1993 Control of glycaemia). Consequently, patients with type 1 diabetes suffer from chronic hyperglycemia and must administer exogenous insulin in order to limit this hyperglycemia. Insulin therapy has drastically changed the life expectancy of these patients.
[0003] A ce jour, les patients diabétiques de type 1 utilisent deux types d'insuline, ies insulines prandiales à action courte pour contrôler leur glycémie au moment du repas et les insulines basales à action longue pour contrôler leur glycémie tout au long de la journée et de la nuit. Plusieurs types d'insuline à action courte existent caractérisées par leur délai d'action. Par exemple, l'insuline humaine, dite regular, a une action retardée par rapport aux insulines analogues, dites rapides, telles que l'insuline lispro (Humalog®, ELI LILLY) ou l'insuline aspart (Novorapid®, NOVO NORDISK). Ainsi, l'insuline humaine doit être administrée en moyenne 30 minutes avant le repas alors que les insulines analogues peuvent être administrées 15 minutes avant le repas ou au moment du repas. De plus, il est admis que les insulines analogues conduisent à un meilleur contrôle de la glycémie post-prandiale que l'insuline humaine, ce qui explique que la très grande majorité des patients en Europe et aux Etats-Unis utilisent aujourd'hui des insulines analogues rapides dont l'action est plus courte que celle de l'insuline humaine.To date, type 1 diabetic patients use two types of insulin, prandial short-acting insulins to control their blood sugar at mealtime and long-acting basal insulins to control their blood sugar throughout the day and night. Several types of short-acting insulin exist characterized by their time of action. For example, human insulin, called regular, has a delayed action compared to analogous insulins, called rapid, such as insulin lispro (Humalog®, ELI LILLY) or insulin aspart (Novorapid®, NOVO NORDISK). Thus, human insulin should be administered on average 30 minutes before a meal while similar insulins may be administered 15 minutes before a meal or at mealtime. In addition, it is recognized that insulin analogues lead to better control of postprandial blood sugar than human insulin, which explains why the vast majority of patients in Europe and the United States today use insulins. rapid analogs whose action is shorter than that of human insulin.
[0004] Cependant, le contrôle de la glycémie après la prise d'un repas assuré par ces insulines prandiales exogènes n'est pas optimal, même dans le cas des insulines analogues rapides. Ceci est iié, en partie, au fait que ces patients, contrairement aux personnes saines, produisent du glucagon après la prise d'un repas, ce qui conduit au déstockage d'une partie du glucose stocké dans le foie. Cette production de glucose médiée par le glucagon aggrave le problème d'hyperglycémie post-prandiale de ces patients et conduit à une utilisation excessive de l'insuline.However, the control of blood sugar after taking a meal provided by these exogenous mealtime insulins is not optimal, even in the case of rapid analog insulins. This is due, in part, to the fact that these patients, unlike healthy people, produce glucagon after eating a meal, which leads to the destocking of part of the glucose stored in the liver. This glucagon-mediated glucose production exacerbates the postprandial hyperglycemia problem in these patients and leads to excessive use of insulin.
[0005] Cette problématique de régulation de la glycémie post-prandiale est assez similaire pour les patients atteints de diabète de type 2 traités par l'insuline dans les cas où leur maladie a conduit à une perte très significative de leur capacité de production d'insuline et d'amyline.This problem of regulating postprandial glycemia is quite similar for patients with type 2 diabetes treated with insulin in cases where their disease has led to a very significant loss of their production capacity. insulin and amylin.
[0006] Il a été démontré que des suppresseurs de glucagon, en particulier des peptides et/ou hormones, sont susceptibles d'inhiber la production de glucagon après la prise d'un repas, ce qui conduit à améliorer significativement le contrôle de la glycémie post-prandiale. Par exemple l'amyline, une hormone produite par les cellules béta du pancréas, et dont la production est également déficiente chez les patients diabétiques de type 1, joue un rôle clé dans la régulation de la glycémie post-prandiale. L'amyline, également connue sous le nom de « islet amyloid polypeptide » ou IAPP, est un peptide de 37 amino-acides qui est co-stocké et co-sécrété avec l'insuline (Schmitz 2004 Amylin Agonists). Ce peptide est décrit comme bloquant la production du glucagon par les cellules alpha du pancréas. Ainsi, l'insuline et l'amyline ont des rôles complémentaires et synergiques, puisque l'insuline permet de réduire la concentration de glucose dans le sang alors que l'amyline permet de réduire l'entrée de glucose endogène dans le sang en inhibant la production, ou sécrétion, du glucagon endogène.It has been shown that glucagon suppressants, in particular peptides and / or hormones, are capable of inhibiting the production of glucagon after taking a meal, which leads to significantly improving blood sugar control postprandial. For example, amylin, a hormone produced by beta cells in the pancreas, and whose production is also deficient in type 1 diabetic patients, plays a key role in the regulation of postprandial blood sugar. Amylin, also known as the "islet amyloid polypeptide" or IAPP, is a peptide of 37 amino acids that is co-stored and co-secreted with insulin (Schmitz 2004 Amylin Agonists). This peptide is described as blocking the production of glucagon by the alpha cells of the pancreas. Thus, insulin and amylin have complementary and synergistic roles, since insulin makes it possible to reduce the concentration of glucose in the blood whereas amylin makes it possible to reduce the entry of endogenous glucose into the blood by inhibiting the production, or secretion, of endogenous glucagon.
[0007] Cependant, l'amyline humaine a des propriétés qui ne sont pas compatibles avec les exigences pharmaceutiques en termes de solubilité et de stabilité (Goldsbury CS, Cooper GJ, Goldie KN, Muller SA, Saafi EL, Gruijters WT, Misur MP, Engel A, Aebi U, Kistler J : Polymorphie fibrillar assembly of human amylin. J Struct Biol 119:17-27, 1997). L'amyline est connue pour former des fibres amyloïdes qui conduisent à la formation de plaques qui sont insolubles dans l'eau. Par conséquent, il a été nécessaire de développer un analogue afin de résoudre ces problèmes de solubilité.[0007] However, human amylin has properties which are not compatible with pharmaceutical requirements in terms of solubility and stability (Goldsbury CS, Cooper GJ, Goldie KN, Muller SA, Saafi EL, Gruijters WT, Misur MP, Engel A, Aebi U, Kistler J: Polymorphie fibrillar assembly of human amylin. J Struct Biol 119: 17-27, 1997). Amylin is known to form amyloid fibers which lead to the formation of plaques which are insoluble in water. Therefore, it was necessary to develop an analog in order to solve these solubility problems.
[0008] La société Amylin a développé un analogue de l'amyline, le pramlintide, pour pallier le manque de stabilité physique de l'amyline humaine. Ce produit commercialisé sous le nom de Symlin® a été approuvé en 2005 par la FDA pour le traitement des diabétiques de type 1 et de type 2, en complément d'une insulinothérapie. Il doit être administré par voie sous cutanée trois fois par jour, dans l'heure précédant le repas afin d'améliorer le contrôle de la glycémie post-prandiale, compte tenu de sa demi-vie relativement courte de quelques heures. Ce peptide est formulé à pH 4,0 et est décrit pour fibriller lorsque le pH de la solution est supérieur à 5,5. Des variantes d'analogues sont décrites dans le brevet US5,686,411.The company Amylin has developed an analogue of amylin, pramlintide, to overcome the lack of physical stability of human amylin. This product marketed under the name of Symlin® was approved in 2005 by the FDA for the treatment of type 1 and type 2 diabetics, in addition to insulin therapy. It should be administered subcutaneously three times a day, within one hour of a meal, to improve control of postprandial blood sugar, given its relatively short half-life of a few hours. This peptide is formulated at pH 4.0 and is described to fibrillate when the pH of the solution is greater than 5.5. Variants of analogs are described in US Pat. No. 5,686,411.
[0009] Les analogues d'amyline ou les agonistes au récepteur d'amyline dites « prandiales » ou « à action courte » reproduisent les effets de l'amyline tout en présentant une demi-vie plus importante. Ces dérivés de l'amyline permettant de contrôler la glycémie au moment du repas peuvent présenter une demi-vie inférieure à 8h. Cette demi-vie est la demi-vie apparente d'élimination après injection sous-cutanée chez l'homme. La demi vie de ces analogues d'amyline ou les agonistes au récepteur d'amyline peut être inférieure à 5 heures, notamment inférieure à 4 heures, voire inférieure à 3 heures.The analogs of amylin or agonists at the amylin receptor called "prandials" or "short-acting" reproduce the effects of amylin while having a greater half-life. These amylin derivatives used to control blood sugar at mealtime can have a half-life of less than 8 hours. This half-life is the apparent elimination half-life after subcutaneous injection in humans. The half-life of these amylin analogues or agonists at the amylin receptor can be less than 5 hours, in particular less than 4 hours, or even less than 3 hours.
[00010] Cependant, les compositions comprenant de l'amyline ou un analogue de l'amyline, et en particulier le pramlintide peuvent provoquer certains effets indésirables chez les patients. En particulier ces compositions peuvent provoquer des nausées chez des patients.However, the compositions comprising amylin or an analog of amylin, and in particular pramlintide can cause certain undesirable effects in patients. In particular, these compositions can cause nausea in patients.
[00011] Le GLP-1, un autre peptide physiologique, est également décrit pour jouer un rôle similaire à celui de l'amyline en termes de suppression de la sécrétion du glucagon à la suite de la prise d'un repas. Le GLP-1 est aussi connu pour son rôle d'insuline sécrétagogue et est donc particulièrement efficace en complément de l'insuline, en particulier chez les patients diabétiques de type 2. Ces actions sont glucodépendantes, ce qui minimise le risque hypoglycémique. Les GLP-1 RA, ne sont approuvés, à ce jour, que pour les patients diabétiques de type 2.GLP-1, another physiological peptide, is also described to play a role similar to that of amylin in terms of suppressing the secretion of glucagon following the taking of a meal. GLP-1 is also known for its role as secretagogue insulin and is therefore particularly effective in addition to insulin, in particular in patients with type 2 diabetes. These actions are glucose-dependent, which minimizes the risk of hypoglycaemia. GLP-1 RA, to date, are only approved for type 2 diabetic patients.
[00012] De même, le GLP-1 humain ne peut être utilisé comme traitement thérapeutique du fait d'une demi-vie extrêmement courte. Différents dérivés du GLP-1, agonistes du récepteur du GLP-1, dits GLP-1 RA, ou analogues du GLP-1, reproduisent les effets du GLP-1 tout en présentant une demi-vie plus importante. Ces dérivés du GLP-1 peuvent être répartis en trois groupes selon leur demi-vie respective : ceux à action courte, ou prandiale, pour contrôler la glycémie au moment du repas (demi-vie inférieure à 8h), ceux à action quotidienne pour couvrir les besoins au cours de la journée (demi-vie supérieure à 8h, voire lOh) et ceux à action hebdomadaire pour couvrir les besoins au cours de la semaine (demi-vie supérieure à 48h). Au niveau des GLP-1 RA à action prandiale, les deux peptides approuvés à ce jour sont l'exenatide (Byetta®, ASTRA-ZENECA, deux administrations par jour) et le lixisenatide (Lyxumia®, SANOFI, une administration par jour). Ces deux GLP-1 RA sont formulés à un pH proche de 4 et sont à administrer dans l'heure précédent le repas, comme le pramlintide.Likewise, human GLP-1 cannot be used as a therapeutic treatment due to an extremely short half-life. Different GLP-1 derivatives, GLP-1 receptor agonists, known as GLP-1 RA, or analogs of GLP-1, reproduce the effects of GLP-1 while having a longer half-life. These GLP-1 derivatives can be divided into three groups according to their respective half-life: those with short action, or meal, to control blood sugar at mealtime (half-life less than 8 hours), those with daily action to cover needs during the day (half-life greater than 8h, even 10h) and those with weekly action to cover needs during the week (half-life greater than 48h). At the level of GLP-1 RA with prandial action, the two peptides approved to date are exenatide (Byetta®, ASTRA-ZENECA, two administrations per day) and lixisenatide (Lyxumia®, SANOFI, one administration per day). These two GLP-1 RA are formulated at a pH close to 4 and are to be administered within the hour preceding the meal, like pramlintide.
[00013] Une des principales difficultés pour les patients insulinodépendants à utiliser ces différents composés à action courte suppresseurs de glucagon est liée au nombre d'injections supplémentaires, pouvant aller de 1 à 3 injections par jour au-delà des 2 à 4 injections d'insuline. Il est donc primordial de pouvoir combiner en solution une insuline prandiale avec un suppresseur de glucagon à action prandiale afin de permettre l'utilisation de ces composés complémentaires à l'insuline sans alourdir le poids du traitement pour les patients. De plus cela permettrait de mimer plus finement la physiologie puisque ces hormones sont toutes les deux sécrétées en réponse à un repas, afin d'améliorer le contrôle de la glycémie post-prandiale, en particulier un meilleur contrôle des hyperglycémies post-prandiales, et donc de mieux traiter le diabète.One of the main difficulties for insulin-dependent patients in using these various short-acting glucagon suppressing compounds is linked to the number of additional injections, which can range from 1 to 3 injections per day beyond 2 to 4 injections of insulin. It is therefore essential to be able to combine a mealtime insulin with a mealtime glucagon suppressant in order to allow the use of these insulin complementary compounds without increasing the weight of the treatment for patients. In addition, this would allow physiology to be mimed more finely since these hormones are both secreted in response to a meal, in order to improve the control of postprandial blood sugar, in particular better control of postprandial hyperglycemia, and therefore better treat diabetes.
[00014] Or, les insulines prandiales et ces peptides d'intérêt ne sont pas compatibles en solution aqueuse. En effet, les insulines prandiales ont une stabilité chimique optimale à un pH proche de 7 alors que les dérivés de l'amyline ou du GLP-1 ne sont pas stables physiquement et chimiquement à un pH proche du pH physiologique. [00015] Cette difficulté a conduit à la conception de pompe contenant deux réservoirs permettant de maintenir séparés l'insuline prandiale du dérivé de l'amyline. La demande de brevet US2016/001002 de la société ROCHE décrit une telle pompe afin de rendre possible la co-administration de l'amyline et d'une insuline prandiale avec un seul dispositif médical. Cependant, il serait préférable de pouvoir mélanger en solution aqueuse ces hormones afin d'employer des dispositifs médicaux existants, plus simples et/ou présentant un risque moindre de dysfonctionnement.However, the prandial insulins and these peptides of interest are not compatible in aqueous solution. Indeed, prandial insulins have optimal chemical stability at a pH close to 7 while amylin or GLP-1 derivatives are not physically and chemically stable at a pH close to physiological pH. This difficulty led to the design of a pump containing two reservoirs making it possible to keep mealtime insulin separate from the amylin derivative. Patent application US2016 / 001002 from the company ROCHE describes such a pump in order to make possible the co-administration of amylin and a mealtime insulin with a single medical device. However, it would be preferable to be able to mix these hormones in aqueous solution in order to use existing medical devices, simpler and / or presenting a lower risk of dysfunction.
[00016] Une autre solution apportée au problème du mélange en solution aqueuse de ces hormones consiste à substituer l'eau par un solvant organique. La demande de brevet W02013067022 de la société XERIS décrit des compositions qui comprennent de l'amyline et de l'insuline en solution dans un solvant organique. Cependant, l'utilisation d'un solvant organique tel que le DMSO soulève des questions de sécurité pour le patient pour le traitement de maladie chronique telle que le diabète. En outre les solvants organiques peuvent être problématiques par rapport aux dispositifs d'injections, notamment en solubilisant certains composants de ceux-ci. Il est donc souhaitable de développer ces combinaisons sous forme de solution aqueuse.Another solution to the problem of mixing an aqueous solution of these hormones is to substitute water with an organic solvent. Patent application WO2013067022 from the company XERIS describes compositions which comprise amylin and insulin in solution in an organic solvent. However, the use of an organic solvent such as DMSO raises patient safety issues for the treatment of chronic disease such as diabetes. In addition, organic solvents can be problematic in relation to injection devices, in particular by dissolving certain components of these. It is therefore desirable to develop these combinations in the form of an aqueous solution.
[00017] Le problème de stabilité en solution aqueuse a également été contourné en préparant des mélanges à l'état solide. La demande de brevet EP2060268 de NOVO NORDISK décrit des formulations d'insuline et de pramlintide sous forme de poudre atomisée pour l'application nasale. Cependant, la voie d'administration préférable et la plus utilisée à ce jour est la voie sous-cutanée pour laquelle l'obtention de solutions aqueuses prêtes à l'emploi est nécessaire.The problem of stability in aqueous solution has also been circumvented by preparing mixtures in the solid state. NOVO NORDISK patent application EP2060268 describes formulations of insulin and pramlintide in the form of an atomized powder for nasal application. However, the preferable and most used route of administration to date is the subcutaneous route for which the obtaining of ready-to-use aqueous solutions is necessary.
[00018] Une autre approche a consisté à combiner une insuline prandiale à un dérivé de l'amyline au pH auquel ce dérivé de l'amyline est stable physiquement. La demande de brevet US20090192075 de la société Biodel décrit une composition liquide comprenant l'insuline humaine, le pramlintide et un chélateur de zinc à pH 4,0. Cette demande décrit une action rapide de l'insuline humaine par la présence d'un chélatant de zinc. Cependant, l'insuline humaine étant connue pour ne pas être chimiquement stable à pH acide, cette technique ne devrait pas permettre de satisfaire les critères des la Pharmacopée EP et/ou US.Another approach has been to combine a mealtime insulin with an amylin derivative at the pH at which this amylin derivative is physically stable. Patent application US20090192075 from the company Biodel describes a liquid composition comprising human insulin, pramlintide and a zinc chelator at pH 4.0. This application describes a rapid action of human insulin by the presence of a zinc chelator. However, since human insulin is known not to be chemically stable at acidic pH, this technique should not make it possible to meet the criteria of the Pharmacopoeia EP and / or US.
[00019] Une approche alternative consiste à stabiliser le pramlintide à l'aide d'un tensio-actif à pH neutre, pH auquel l'insuline prandiale est stable. La demande W02007104786 de la société NOVO NORDISK décrit une composition soluble comprenant des analogues de l'insuline humaine, B28D, B3K ou B29E et le pramlintide à un pH compris de 6,5 à 9,0 et qui comprend un dérivé du glycérophosphate, en particulier le dimyristoyl glycérophosphoglycérol (DMPG). Cependant, la stabilité du pramlintide dans ces conditions est limitée et ne paraît pas suffisante pour un produit pharmaceutique injectable pour le traitement du diabète.An alternative approach consists in stabilizing the pramlintide using a surfactant at neutral pH, pH at which the mealtime insulin is stable. Application WO2007104786 from the company NOVO NORDISK describes a soluble composition comprising analogs of human insulin, B28D, B3K or B29E and pramlintide at a pH of from 6.5 to 9.0 and which comprises a derivative of glycerophosphate, in in particular dimyristoyl glycerophosphoglycerol (DMPG). However, the stability of pramlintide under these conditions is limited and does not seem sufficient for an injectable pharmaceutical product for the treatment of diabetes.
[00020] Les compositions de l'art antérieur comprenant en association une insuline prandiale et le pramlintide citent la plupart du temps les différents types d'insulines prandiales, cependant leurs exemples sont dirigés vers des compositions comprenant des insulines analogues prandiales dites rapides, ces dernières étant considérées comme plus performantes que l'insuline humaine.The compositions of the prior art comprising in combination a prandial insulin and pramlintide most of the time cite the different types of prandial insulins, however their examples are directed to compositions comprising so-called rapid prandial analog insulins, the latter being considered to perform better than human insulin.
[00021] La demanderesse a trouvé, de manière surprenante, qu'une composition contenant une insuline humaine A21G dite regular, c'est-à-dire une insuline différant de l'insuline humaine uniquement par le remplacement du résidu asparagine en position 21 sur la chaîne A par un résidu glycine, en association avec un suppresseur de glucagon à action prandiale à un pH allant de 3,5 à 4,4 en solution aqueuse présentait une stabilité physique et chimique compatible avec les exigences pharmaceutiques et supérieure aux solutions proposées dans l'art antérieur.The Applicant has found, surprisingly, that a composition containing a human insulin A21G called regular, that is to say an insulin differing from human insulin only by replacing the asparagine residue in position 21 on chain A with a glycine residue, in combination with a glucagon suppressant with prandial action at a pH ranging from 3.5 to 4.4 in aqueous solution exhibited physical and chemical stability compatible with pharmaceutical requirements and superior to the solutions proposed in prior art.
[00022] De plus, la demanderesse a été surprise de constater que ces compositions contenant de l'insuline humaine A21G qui est moins rapide que les analogues d'insuline dits rapides, en association avec un suppresseur de glucagon à action prandiale à un pH allant de 3,5 à 4,4 en solution aqueuse permettait également d'obtenir un meilleur contrôle de la glycémie post-prandiale qu'avec un analogue d'insuline prandiale dit rapide, seule ou en combinaison avec un suppresseur de glucagon à action prandiale.In addition, the Applicant was surprised to find that these compositions containing human insulin A21G which is slower than the so-called rapid insulin analogues, in combination with a glucagon suppressant with prandial action at a pH ranging 3.5 to 4.4 in aqueous solution also made it possible to obtain better control of postprandial glycemia than with a so-called rapid prandial insulin analog, alone or in combination with a glucagon suppressant with prandial action.
[00023] L'obtention d'une composition sous forme de solution aqueuse injectable présentant des propriétés de stabilités physique et chimique améliorées par rapport à celles décrites dans l'art antérieur, ainsi qu'un meilleur contrôle des hyperglycémies post-prandiales est remarquable car il est bien connu de l'homme de l'art que les propriétés de stabilité physique et chimique sont très difficiles à prédire, tout particulièrement dans le cas de combinaisons.Obtaining a composition in the form of an injectable aqueous solution having improved physical and chemical stability properties compared to those described in the prior art, as well as better control of postprandial hyperglycaemia is remarkable because It is well known to those skilled in the art that the properties of physical and chemical stability are very difficult to predict, especially in the case of combinations.
[00024] Par ailleurs, il est également recherché une composition qui permette de diminuer, voire de supprimer, tout ou partie des effets indésirables qui peuvent être générés par les principes actifs.Furthermore, a composition is also sought which makes it possible to reduce, or even eliminate, all or part of the undesirable effects which can be generated by the active ingredients.
[00025] L'invention concerne une composition sous forme d'une solution aqueuse injectable, dont le pH est compris de 3,5 à 4,4, comprenant au moins l'insuline humaine A21G dit regular et un suppresseur de glucagon à action prandiale.The invention relates to a composition in the form of an injectable aqueous solution, the pH of which is between 3.5 and 4.4, comprising at least the human insulin A21G called regular and a glucagon suppressant with prandial action. .
[00026] Selon un mode de réalisation, le suppresseur de glucagon à action prandiale est un analogue de l'amyline ou un agoniste du récepteur de l'amyline, un analogue du GLP-1 ou un agoniste du récepteur au GLP-1, encore appelé GLP-1 RA.According to one embodiment, the glucagon suppressant with prandial action is an analog of amylin or an agonist of the amylin receptor, an analog of GLP-1 or an agonist of the GLP-1 receptor, again called GLP-1 RA.
[00027] L'invention concerne également des formulations pharmaceutiques stables comprenant de telles compositions.The invention also relates to stable pharmaceutical formulations comprising such compositions.
[00028] Les exigences permettant d'obtenir une formulation pharmaceutique injectable pour le traitement du diabète sont notamment :The requirements for obtaining an injectable pharmaceutical formulation for the treatment of diabetes are in particular:
une formulation liquide aqueuse stable physiquement et chimiquement au moins deux semaines, voire un mois à 30°C (usages multiples) et au moins un an, voire 2 ans à 5°C, une compatibilité avec les conservateurs anti-microbiens.an aqueous liquid formulation that is physically and chemically stable for at least two weeks, or even a month at 30 ° C (multiple uses) and at least one year, or even 2 years at 5 ° C, compatibility with antimicrobial preservatives.
[00029] De la même façon, les formulations d'insuline humaine A21G avec un analogue du GLP-1 ou un agoniste du récepteur au GLP-1, encore appelé GLP-1 RA, par exemple de l'exenatide ou du lixisenatide, à pH compris de 3,5 à 4,4 ont une stabilité physique et chimique permettant le développement d'une formulation liquide stable au moins deux semaines, voire un mois à 30°C et au moins un an, voire 2 ans, à 5°C [00030] La demanderesse a également constaté que la formulation selon l'invention à pH compris de 3,5 à 4,4 possède des propriétés pharmacocinétiques compatibles avec une utilisation au moment des repas et permet un meilleur contrôle de la glycémie postprandiale.Similarly, formulations of human insulin A21G with a GLP-1 analog or a GLP-1 receptor agonist, also called GLP-1 RA, for example exenatide or lixisenatide, pH between 3.5 and 4.4 have a physical and chemical stability allowing the development of a stable liquid formulation at least two weeks, even a month at 30 ° C and at least one year, even 2 years, at 5 ° C The Applicant has also found that the formulation according to the invention at a pH between 3.5 and 4.4 has pharmacokinetic properties compatible with use during meals and allows better control of postprandial blood sugar.
[00031] En outre, la demanderesse a été surprise de constater que ces formulations conduisaient à un fort ralentissement de l'absorption du pramlintide. Cela est notamment caractérisé par un pic plasmatique (tmax) de pramlintide significativement retardé et/ou par une exposition plasmatique au pramlintide précoce (AUCo-3omin) significativement diminuée par rapport à l'administration de pramlintide seul.In addition, the Applicant was surprised to find that these formulations led to a sharp slowdown in the absorption of pramlintide. This is notably characterized by a significantly delayed plasma peak (tmax) of pramlintide and / or by a significantly reduced plasma exposure to early pramlintide (AUCo-3omin) compared to the administration of pramlintide alone.
[00032] Ceci peut notamment permettre de diminuer voire de supprimer les effets indésirables du pramlintide, en particulier en ce qui concerne les nausées.This can in particular make it possible to reduce or even eliminate the undesirable effects of pramlintide, in particular with regard to nausea.
[00033] L'invention concerne également l'utilisation d'une composition sous forme d'une solution aqueuse injectabie, dont le pH est compris de 3,5 à 4,4 comprenant au moins l'insuline humaine A21G et un suppresseur de glucagon, en particulier à action prandiale, pour améliorer le contrôle de la glycémie postprandiale.The invention also relates to the use of a composition in the form of an injectable aqueous solution, the pH of which is between 3.5 and 4.4 comprising at least human insulin A21G and a glucagon suppressant , in particular with prandial action, to improve the control of postprandial glycemia.
[00034] S'agissant de la stabilité, la méthode classique pour mesurer les stabilités des protéines ou peptides consiste à mesurer la formation de fibrilles à l'aide de Thioflavine T, encore appelée ThT. Cette méthode permet de mesurer dans des conditions de température et d'agitation permettant une accéiération du phénomène, le temps de latence avant la formation de fibrilles par mesure de l'augmentation de la fluorescence. Les compositions selon l'invention ont un temps de latence avant la formation de fibrilles nettement supérieur à ceux décrits dans la littérature. Les compositions selon l'invention présentent une stabilité physique et chimique, bien supérieure à celles décrites dans i'art antérieur en utilisant des insulines commerciales.With regard to stability, the conventional method for measuring the stabilities of proteins or peptides consists in measuring the formation of fibrils using Thioflavin T, also called ThT. This method makes it possible to measure, under temperature and agitation conditions allowing acceleration of the phenomenon, the latency time before the formation of fibrils by measuring the increase in fluorescence. The compositions according to the invention have a latency time before the formation of fibrils significantly greater than those described in the literature. The compositions according to the invention exhibit physical and chemical stability, much greater than those described in the prior art using commercial insulins.
[00035] Dans un mode de réalisation, ies formulations selon un temps de latence mesuré par ThT au moins égal à 8 heures.In one embodiment, the formulations according to a latency time measured by ThT at least equal to 8 hours.
[00036] Dans un mode de réalisation, les formulations selon un temps de latence mesuré par ThT au moins égal à 10 heures. [00037] Dans un mode de réalisation, les formulations selon un temps de latence mesuré par ThT au moins égal à 15 heures. [00038] Dans un mode de réalisation, les formulations selon un temps de latence mesuré par ThT au moins égal à 20 heures. [00039] Dans un mode de réalisation, les formulations selon un temps de latence mesuré par ThT au moins égal à 25 heures.In one embodiment, the formulations according to a latency time measured by ThT at least equal to 10 hours. In one embodiment, the formulations according to a latency time measured by ThT at least equal to 15 hours. In one embodiment, the formulations according to a latency time measured by ThT at least equal to 20 hours. In one embodiment, the formulations according to a latency time measured by ThT at least equal to 25 hours.
l'invention l'invention l'invention l'invention l'invention prandiales présentent présentent présentent présentent présentent [00040] Dans un mode de réalisation, l'invention concerne une composition sous forme d'une solution aqueuse injectable, dont le pH est compris de 3,5 à 4,4, comprenant au moins de l'insuline humaine A21G et un agoniste au récepteur de l'amyline ou un analogue d'amyline. Selon un mode de réalisation il s'agit du pramlintide.the invention the invention the invention the invention the prandials present present present present present [00040] In one embodiment, the invention relates to a composition in the form of an injectable aqueous solution, the pH of which is understood from 3.5 to 4.4, comprising at least human insulin A21G and an amylin receptor agonist or an amylin analog. According to one embodiment, it is pramlintide.
[00041] Dans un mode de réalisation, l'invention concerne une composition sous forme d'une solution aqueuse injectable, dont le pH est compris de 3,5 à 4,2, comprenant au moins de l'insuline humaine A21G et un agoniste au récepteur de l'amyline ou un analogue d'amyline. Selon un mode de réalisation il s'agit du pramlintide.In one embodiment, the invention relates to a composition in the form of an injectable aqueous solution, the pH of which is between 3.5 and 4.2, comprising at least human insulin A21G and an agonist to the amylin receptor or an amylin analog. According to one embodiment, it is pramlintide.
[00042] Dans un mode de réalisation, l'invention concerne une composition sous forme d'une solution aqueuse injectable, dont le pH est compris de 3,8 à 4,2, comprenant au moins de l'insuline humaine A21G et un agoniste au récepteur de l'amyline ou un analogue d'amyline. Selon un mode de réalisation il s'agit du pramlintide.In one embodiment, the invention relates to a composition in the form of an injectable aqueous solution, the pH of which is between 3.8 and 4.2, comprising at least human insulin A21G and an agonist to the amylin receptor or an amylin analog. According to one embodiment, it is pramlintide.
[00043] Dans un mode de réalisation, l'invention concerne une composition sous forme d'une solution aqueuse injectable, dont le pH est 4,0, comprenant au moins de l'insuline humaine A21G et un agoniste au récepteur de l'amyline ou un analogue d'amyline. Selon un mode de réalisation il s'agit du pramlintide.In one embodiment, the invention relates to a composition in the form of an injectable aqueous solution, the pH of which is 4.0, comprising at least human insulin A21G and an agonist at the amylin receptor or an amylin analog. According to one embodiment, it is pramlintide.
[00044] Dans un mode de réalisation, l'invention concerne une composition sous forme d'une solution aqueuse injectable, dont le pH est compris de 3,5 à 4,4, comprenant au moins de l'insuline humaine A21G et un agoniste au récepteur du GLP1 ou un analogue du GLP-1. Selon un mode de réalisation ledit agoniste au récepteur du GLP-1 est l'exénatide. Selon un autre mode de réalisation ledit agoniste au récepteur du GLP-1 est le lixisénatide.In one embodiment, the invention relates to a composition in the form of an injectable aqueous solution, the pH of which is between 3.5 and 4.4, comprising at least human insulin A21G and an agonist to the GLP1 receptor or a GLP-1 analog. According to one embodiment, said agonist at the GLP-1 receptor is exenatide. According to another embodiment, said agonist at the GLP-1 receptor is lixisenatide.
[00045] Dans un mode de réalisation, l'invention concerne une composition sous forme d'une solution aqueuse injectable, dont le pH est compris de 3,5 à 4,2, comprenant au moins de l'insuline humaine A21G et un agoniste au récepteur du GLP1 ou un analogue du GLP-1. Selon un mode de réalisation ledit agoniste au récepteur du GLP-1 est l'exénatide. Selon un autre mode de réalisation ledit agoniste au récepteur du GLP-1 est le lixisénatide.In one embodiment, the invention relates to a composition in the form of an injectable aqueous solution, the pH of which is between 3.5 and 4.2, comprising at least human insulin A21G and an agonist to the GLP1 receptor or a GLP-1 analog. According to one embodiment, said agonist at the GLP-1 receptor is exenatide. According to another embodiment, said agonist at the GLP-1 receptor is lixisenatide.
[00046] Dans un mode de réalisation, l'invention concerne une composition sous forme d'une solution aqueuse injectable, dont le pH est compris de 3,8 à 4,2, comprenant au moins de l'insuline humaine A21G et un agoniste au récepteur du GLP1 ou un analogue du GLP-1. Selon un mode de réalisation ledit agoniste au récepteur du GLP-1 est l'exénatide. Selon un autre mode de réalisation ledit agoniste au récepteur du GLP-1 est le lixisénatide.In one embodiment, the invention relates to a composition in the form of an injectable aqueous solution, the pH of which is between 3.8 and 4.2, comprising at least human insulin A21G and an agonist to the GLP1 receptor or a GLP-1 analog. According to one embodiment, said agonist at the GLP-1 receptor is exenatide. According to another embodiment, said agonist at the GLP-1 receptor is lixisenatide.
[00047] Dans un mode de réalisation, l'invention concerne une composition sous forme d'une solution aqueuse injectable, dont le pH est 4,0, comprenant au moins de l'insuline humaine A21G et un agoniste au récepteur du GLP-1 ou un analogue du GLP1. Selon un mode de réalisation ledit agoniste au récepteur du GLP-1 est l'exénatide.In one embodiment, the invention relates to a composition in the form of an aqueous injectable solution, the pH of which is 4.0, comprising at least human insulin A21G and an agonist at the GLP-1 receptor or a GLP1 analog. According to one embodiment, said agonist at the GLP-1 receptor is exenatide.
Selon un autre mode de réalisation ledit agoniste au récepteur du GLP-1 est le lixisénatide.According to another embodiment, said agonist at the GLP-1 receptor is lixisenatide.
[00048] Dans un mode de réalisation, l'invention concerne une composition sous forme d'une solution aqueuse injectable, dont le pH est compris de 3,5 à 4,4, comprenant au moins de l'insuline humaine A21G, un agoniste au récepteur de l'amyline ou un analogue d'amyline, et un agoniste au récepteur du GLP-1 ou un analogue du GLP-1. Selon un mode de réalisation ledit agoniste au récepteur du GLP-1 est l'exénatide. Selon un autre mode de réalisation ledit agoniste au récepteur du GLP-1 est le lixisénatide. Selon encore un autre mode de réalisation ledit agoniste au récepteur de l'amyline ou analogue d'amyline est le pramlintide.In one embodiment, the invention relates to a composition in the form of an injectable aqueous solution, the pH of which is between 3.5 and 4.4, comprising at least human insulin A21G, an agonist to the amylin receptor or an amylin analog, and an agonist to the GLP-1 receptor or a GLP-1 analog. According to one embodiment, said agonist at the GLP-1 receptor is exenatide. According to another embodiment, said agonist at the GLP-1 receptor is lixisenatide. According to yet another embodiment, said agonist at the amylin receptor or amylin analog is pramlintide.
[00049] Dans un mode de réalisation, l'invention concerne une composition sous forme d'une solution aqueuse injectable, dont le pH est compris de 3,5 à 4,2, comprenant au moins de l'insuline humaine A21G, un agoniste au récepteur de l'amyline ou un analogue d'amyline, et un agoniste au récepteur du GLP-1 ou un analogue du GLP-1. Selon un mode de réalisation ledit agoniste au récepteur du GLP-1 est l'exénatide. Selon un autre mode de réalisation ledit agoniste au récepteur du GLP-1 est le lixisénatide. Selon encore un autre mode de réalisation ledit agoniste au récepteur de l'amyline ou analogue d'amyline est le pramlintide.In one embodiment, the invention relates to a composition in the form of an injectable aqueous solution, the pH of which is between 3.5 and 4.2, comprising at least human insulin A21G, an agonist to the amylin receptor or an amylin analog, and an agonist to the GLP-1 receptor or a GLP-1 analog. According to one embodiment, said agonist at the GLP-1 receptor is exenatide. According to another embodiment, said agonist at the GLP-1 receptor is lixisenatide. According to yet another embodiment, said agonist at the amylin receptor or amylin analog is pramlintide.
[00050] Dans un mode de réalisation, l'invention concerne une composition sous forme d'une solution aqueuse injectable, dont le pH est compris de 3,8 à 4,2, comprenant au moins de l'insuline humaine A21G, un agoniste au récepteur de l'amyline ou un analogue d'amyline, et un agoniste au récepteur du GLP-1 ou un analogue du GLP-1. Selon un mode de réalisation ledit agoniste au récepteur du GLP-1 est de l'exénatide. Selon un autre mode de réalisation ledit agoniste au récepteur du GLP-1 est du lixisénatide. Selon encore un autre mode de réalisation ledit agoniste au récepteur de l'amyline ou analogue d'amyline est le pramlintide.In one embodiment, the invention relates to a composition in the form of an injectable aqueous solution, the pH of which is between 3.8 and 4.2, comprising at least human insulin A21G, an agonist to the amylin receptor or an amylin analog, and an agonist to the GLP-1 receptor or a GLP-1 analog. According to one embodiment, said agonist at the GLP-1 receptor is exenatide. According to another embodiment, said agonist at the GLP-1 receptor is lixisenatide. According to yet another embodiment, said agonist at the amylin receptor or amylin analog is pramlintide.
[00051] Dans un mode de réalisation, l'invention concerne une composition sous forme d'une solution aqueuse injectable, dont le pH est 4,0, comprenant au moins de l'insuline humaine A21G, un agoniste au récepteur de l'amyline ou un analogue d'amyline, et un agoniste au récepteur du GLP-1 ou un analogue du GLP-1. Selon un mode de réalisation ledit agoniste au récepteur du GLP-1 est de l'exénatide. Selon un autre mode de réalisation ledit agoniste au récepteur du GLP-1 est du lixisénatide. Selon encore un autre mode de réalisation ledit agoniste au récepteur de l'amyline ou analogue d'amyline est le pramlintide.In one embodiment, the invention relates to a composition in the form of an injectable aqueous solution, the pH of which is 4.0, comprising at least human insulin A21G, an agonist at the amylin receptor or an amylin analog, and a GLP-1 receptor agonist or a GLP-1 analog. According to one embodiment, said agonist at the GLP-1 receptor is exenatide. According to another embodiment, said agonist at the GLP-1 receptor is lixisenatide. According to yet another embodiment, said agonist at the amylin receptor or amylin analog is pramlintide.
[00052] Les compositions sous forme d'une solution aqueuse injectable selon l'invention sont des solutions limpides. On entend par « solution limpide », des compositions qui satisfont aux critères décrits dans les pharmacopées américaine et européenne concernant les solutions injectables. Dans la pharmacopée US, les solutions sont définies dans la partie <1151> faisant référence à l'injection (<1>) (faisant référence à <788> selon USP 35 et précisé dans <788> selon USP 35 et dans <787>, <788> et <790> USP 38 (à partir du 1er août 2014), selon USP 38). Dans la pharmacopée européenne, les solutions injectables doivent remplir les critères donnés dans les sections 2.9.19 et 2.9.20.The compositions in the form of an injectable aqueous solution according to the invention are clear solutions. The term “clear solution” is understood to mean compositions which satisfy the criteria described in the American and European pharmacopoeias concerning injectable solutions. In the US Pharmacopoeia, the solutions are defined in the section <1151> referring to the injection (<1>) (referring to <788> according to USP 35 and specified in <788> according to USP 35 and in <787> , <788> and <790> USP 38 (from1 August 2014), according to USP 38). In the European Pharmacopoeia, injectable solutions must meet the criteria given in sections 2.9.19 and 2.9.20.
[00053] Dans la présente demande, l'amyline telle que mentionnée fait référence aux composés décrits dans les brevets US 5,124,314 et US 5,234,906. On entend par « analogue », lorsqu'il est utilisé par référence à un peptide ou une protéine, dans iequel un ou plusieurs résidus d'acides aminés constitutifs de la séquence primaire ont été substitués par d'autres résidus d'acides aminés et/ou dans lequel un ou plusieurs résidus d'acides aminés constitutifs ont été supprimés et/ou dans lequel un ou plusieurs résidus d'acides aminés constitutifs ont été ajoutés. Le pourcentage d'homologie admis pour la présente définition d'un analogue est de 50 %. Dans le cas de l'amyline, un analogue peut être par exemple dérivé de la séquence d'acide aminé primaire de l'amyline en substituant un ou plusieurs acides aminés naturels ou non naturels ou peptidomimétiques.In this application, the amylin as mentioned refers to the compounds described in US patents 5,124,314 and US 5,234,906. The term “analog” means, when used with reference to a peptide or a protein, in which one or more amino acid residues constituting the primary sequence have been substituted by other amino acid residues and / or in which one or more constituent amino acid residues have been deleted and / or in which one or more constituent amino acid residues have been added. The percentage of homology accepted for the present definition of an analogue is 50%. In the case of amylin, an analog may for example be derived from the primary amino acid sequence of amylin by substituting one or more natural or non-natural or peptidomimetic amino acids.
[00054] L'exenatide et le lixisénatide respectivement décrits dans les demandes US2004/0023871 et W00104156 sont généralement considérés comme des agonistes au récepteur du GLP-1. Dans un mode de réalisation, le suppresseur de glucagon à action prandiale est le pramlintide (Symlin®) commerciaiisé par la société ASTRAZENECA AB.Exenatide and lixisenatide respectively described in applications US2004 / 0023871 and W00104156 are generally considered to be agonists at the GLP-1 receptor. In one embodiment, the glucagon suppressant with prandial action is pramlintide (Symlin®) marketed by the company ASTRAZENECA AB.
[00055] Dans un mode de réalisation, les GLP-1, analogues de GLP-1, ou GLP-1 RA sont dits « à action courte » ou « prandiaux ». On entend par « à action courte » ou « prandiaux », des GLP-1, analogues de GLP-1, ou GLP-1 RA, dont la demi-vie apparente d'élimination après injection sous-cutanée chez l'homme est inférieure 8 heures, en particulier inférieure à 5 heures, de préférence inférieure à 4 heures ou bien encore inférieure à 3 heures, comme par exemple l'exenatide et le lixisenatide.In one embodiment, GLP-1, analogs of GLP-1, or GLP-1 RA are said to be "short-acting" or "prandial". “Short-acting” or “prandial” is understood to mean GLP-1, analogs of GLP-1, or GLP-1 RA, whose apparent elimination half-life after subcutaneous injection in humans is lower. 8 hours, in particular less than 5 hours, preferably less than 4 hours or even less than 3 hours, such as for example exenatide and lixisenatide.
[00056] Dans un mode de réalisation, les GLP-1, les analogues de GLP-1, ou les GLP-1 RA sont choisis dans le groupe constitué par l'exenatide (Byetta®, ASTRAZENECA), le lixisenatide (Lyxumia®, SANOFI), leurs analogues ou dérivés et leurs sels pharmaceutiquement acceptables.In one embodiment, GLP-1, GLP-1 analogs, or GLP-1 RA are chosen from the group consisting of exenatide (Byetta®, ASTRAZENECA), lixisenatide (Lyxumia®, SANOFI), their analogs or derivatives and their pharmaceutically acceptable salts.
Il [00057] Dans un mode de réalisation, le GLP-1, analogue de GLP-1, ou GLP-1 RA est i’exenatide ou Byetta®, ses analogues ou dérivés et leurs sels pharmaceutiquement acceptables.It [00057] In one embodiment, GLP-1, analog of GLP-1, or GLP-1 RA is i’enenide or Byetta®, its analogs or derivatives and their pharmaceutically acceptable salts.
[00058] Dans un mode de réalisation, GLP-1, analogue de GLP-1, ou GLP-1 RA est le lïxisenatide ou Lyxumia®, ses analogues ou dérivés et leurs sels pharmaœutiquement acceptables.In one embodiment, GLP-1, analog of GLP-1, or GLP-1 RA is lexisenatide or Lyxumia®, its analogs or derivatives and their pharmaceutically acceptable salts.
[00059] Dans un mode de réalisation, la concentration en insuline humaine A21G est comprise de 2 à 20 mg/mL. Dans un mode de réalisation, la concentration d'insuline humaine A21G est comprise de 240 à 3000 μΜ ou 40 à 500 U/mL.In one embodiment, the concentration of human insulin A21G is between 2 and 20 mg / ml. In one embodiment, the concentration of human insulin A21G is between 240 to 3000 μΜ or 40 to 500 U / ml.
[00065] Dans la présente demande 100 U/mi d'insuline humaine A21G correspond à 3,5 mg/ml. Dans un mode de réalisation, « la concentration en peptide suppresseur de glucagon à action prandiale est comprise de 0,01 à 10 mg/mL.In the present application 100 U / mi of human insulin A21G corresponds to 3.5 mg / ml. In one embodiment, “the concentration of glucagon suppressing peptide with prandial action is between 0.01 and 10 mg / ml.
[00066] Dans un mode de réalisation, la concentration en pramlintide est comprise de 0,32 à 5 mg/mL, [00067] Dans un mode de réalisation, la concentration en pramlintide est comprise de 0,4 à 3 mg/mL.In one embodiment, the pramlintide concentration is between 0.32 and 5 mg / ml, In one embodiment, the pramlintide concentration is between 0.4 and 3 mg / ml.
[00068] Dans un mode de réalisation, la concentration en pramlintide est comprise de 0,5 à 2 mg/mL.In one embodiment, the pramlintide concentration is between 0.5 and 2 mg / ml.
[00069] Dans un mode de réalisation, la concentration en pramlintide est comprise de 0,5 à 1,5 mg/mL.In one embodiment, the pramlintide concentration is between 0.5 and 1.5 mg / ml.
[00070] Dans un mode de réalisation, la concentration en pramlintide est comprise de 0,6 à 1 mg/mL.In one embodiment, the concentration of pramlintide is from 0.6 to 1 mg / ml.
[00071] Dans un mode de réalisation, la concentration en pramlintide est de 1,0 mg/ml.In one embodiment, the pramlintide concentration is 1.0 mg / ml.
[00072] Dans un mode de réalisation, la concentration en pramlintide est de 0,6 mg/ml.In one embodiment, the pramlintide concentration is 0.6 mg / ml.
[00073] Dans un mode de réalisation, la concentration en exenatide est comprise de 10 à 1000 pg/ml.In one embodiment, the concentration of exenatide is from 10 to 1000 pg / ml.
[00074] Dans un mode de réalisation, de 10 à 500 pg/ml.In one embodiment, from 10 to 500 pg / ml.
[00075] Dans un mode de réalisation, de 20 à 400 pg/ml.In one embodiment, from 20 to 400 pg / ml.
[00076] Dans un mode de réalisation, de 20 à 300 pg/ml.In one embodiment, from 20 to 300 pg / ml.
la concentration en exenatide est comprise la concentration en exenatide est comprise la concentration en exenatide est comprise [00077] Dans un mode de réalisation, la concentration en exenatide est comprise de 30 à 300 pg/ml.Dans un mode de réalisation, la concentration en exénatide est comprise de 30 à 150 pg/ml.the concentration of exenatide is understood the concentration of exenatide is understood the concentration of exenatide is understood [00077] In one embodiment, the concentration of exenatide is comprised from 30 to 300 pg / ml. In one embodiment, the concentration of exenatide is from 30 to 150 pg / ml.
[00078] Dans un mode de réalisation, la concentration en exenatide est comprise de 40 à 150 pg/ml.In one embodiment, the concentration of exenatide is from 40 to 150 pg / ml.
[00079] Dans un mode de réalisation, la concentration en exénatide est comprise de 40 à 80 pg/ml.In one embodiment, the concentration of exenatide is from 40 to 80 pg / ml.
[00080] Dans un mode de réalisation, la concentration en exenatide est de 50 pg/ml.In one embodiment, the concentration of exenatide is 50 pg / ml.
[00081] Dans un mode de réalisation, la concentration en lixisenatide est comprise de 20 à 1000 pg/ml.In one embodiment, the concentration of lixisenatide is between 20 and 1000 pg / ml.
[00082] Dans un mode de réalisation, la concentration en lixisenatide est comprise de 20 à 800 pg/ml.In one embodiment, the concentration of lixisenatide is between 20 and 800 pg / ml.
[00083] Dans un mode de réalisation, la concentration en lixisenatide est comprise de 40 à 600 pg/ml.In one embodiment, the lixisenatide concentration is between 40 and 600 pg / ml.
[00084] Dans un mode de réalisation, la concentration en lixisenatide est comprise de 60 à 600 pg/ml.In one embodiment, the concentration of lixisenatide is from 60 to 600 pg / ml.
[00085] Dans un mode de réalisation, la concentration en lixisenatide est comprise de 60 à 300 pg/ml.In one embodiment, the concentration of lixisenatide is from 60 to 300 pg / ml.
[00086] Dans un mode de réalisation, la concentration en lixisenatide est comprise de 80 à 300 pg/ml.In one embodiment, the concentration of lixisenatide is between 80 and 300 pg / ml.
[00087] Dans un mode de réalisation, la concentration en lixisenatide est comprise de 80 à 160 pg/ml.In one embodiment, the concentration of lixisenatide is between 80 and 160 pg / ml.
[00088] Dans un mode de réalisation, la concentration en lixisenatide est de 100 pg/ml.In one embodiment, the concentration of lixisenatide is 100 pg / ml.
[00089] Par ailleurs, il est particulièrement intéressant de combiner en solution aqueuse l'insuline humaine A21G avec un analogue de l'amyline, un agoniste au récepteur de l'amyline ou le GLP-1, un analogue du GLP-1, ou un agoniste au récepteur du GLP-1. Cette combinaison dite « triple » permettrait notamment de potentialiser les effets de chaque hormone et de pouvoir potentiellement réduire les doses de chacune d'elles.Furthermore, it is particularly advantageous to combine human insulin A21G in aqueous solution with an analog of amylin, an agonist at the amylin receptor or GLP-1, an analog of GLP-1, or a GLP-1 receptor agonist. This so-called “triple” combination would in particular make it possible to potentiate the effects of each hormone and potentially be able to reduce the doses of each of them.
[00090] Dans un mode de réalisation, la concentration en exenatide, ses analogues ou dérivés et leurs sels pharmaceutiquement acceptables est comprise dans un intervalle de 0,01 à 1,0 mg pour 100 U d'insuline.In one embodiment, the concentration of exenatide, its analogs or derivatives and their pharmaceutically acceptable salts is in the range of 0.01 to 1.0 mg per 100 U of insulin.
[00091] Dans un mode réalisation, la concentration en exenatide, ses analogues ou dérivés et leurs sels pharmaceutiquement acceptables est de 0,01 à 0,5 mg pour 100 U d'insuline.In one embodiment, the concentration of exenatide, its analogs or derivatives and their pharmaceutically acceptable salts is 0.01 to 0.5 mg per 100 U of insulin.
[00092] Dans un mode réalisation, la concentration en exenatide, ses analogues ou dérivés et leurs sels pharmaceutiquement acceptables est de 0,02 à 0,4 mg pour 100 U d'insuline.In one embodiment, the concentration of exenatide, its analogs or derivatives and their pharmaceutically acceptable salts is 0.02 to 0.4 mg per 100 U of insulin.
[00093] Dans un mode réalisation, la concentration en exenatide, ses analogues ou dérivés et leurs sels pharmaceutiquement acceptables est de 0,03 à 0,3 mg pour 100 U d'insuline.In one embodiment, the concentration of exenatide, its analogs or derivatives and their pharmaceutically acceptable salts is 0.03 to 0.3 mg per 100 U of insulin.
[00094] Dans un mode réalisation, la concentration en exenatide, ses analogues ou dérivés et leurs sels pharmaceutiquement acceptables est de 0,03 à 0,2 mg pour 100 U d'insuline.In one embodiment, the concentration of exenatide, its analogs or derivatives and their pharmaceutically acceptable salts is 0.03 to 0.2 mg per 100 U of insulin.
[00095] Dans un mode réalisation, la concentration en exenatide, ses analogues ou dérivés et leurs sels pharmaceutiquement acceptables est de 0,03 à 0,15 mg pour 100 U d'insuline.In one embodiment, the concentration of exenatide, its analogs or derivatives and their pharmaceutically acceptable salts is 0.03 to 0.15 mg per 100 U of insulin.
[00096] Dans un mode réalisation, la concentration en exenatide, ses analogues ou dérivés et leurs sels pharmaceutiquement acceptables est de 0,05 mg pour 100 U d'insuline.In one embodiment, the concentration of exenatide, its analogs or derivatives and their pharmaceutically acceptable salts is 0.05 mg per 100 U of insulin.
[00097] Dans un mode de réalisation, la concentration en lixisenatide, ses analogues ou dérivés et leurs sels pharmaceutiquement acceptables est comprise dans un intervalle de 0,01 à 1 mg pour 100 U d'insuline.In one embodiment, the concentration of lixisenatide, its analogs or derivatives and their pharmaceutically acceptable salts is in the range of 0.01 to 1 mg per 100 U of insulin.
[00098] Dans un mode réalisation, la concentration en lixisenatide, ses analogues ou dérivés et leurs sels pharmaceutiquement acceptables est de 0,01 à 0,5 mg pour 100 U d'insuline.In one embodiment, the concentration of lixisenatide, its analogs or derivatives and their pharmaceutically acceptable salts is 0.01 to 0.5 mg per 100 U of insulin.
[00099] Dans un mode réalisation, la concentration en lixisenatide, ses analogues ou dérivés et leurs sels pharmaceutiquement acceptables est de 0,02 à 0,4 mg pour 100 U d'insuline.In one embodiment, the concentration of lixisenatide, its analogs or derivatives and their pharmaceutically acceptable salts is 0.02 to 0.4 mg per 100 U of insulin.
[000100] Dans un mode réalisation, la concentration en lixisenatide, ses analogues ou dérivés et leurs sels pharmaceutiquement acceptables est de 0,03 à 0,3 mg pour 100 U d'insuline.In one embodiment, the concentration of lixisenatide, its analogs or derivatives and their pharmaceutically acceptable salts is 0.03 to 0.3 mg per 100 U of insulin.
[000101] Dans un mode réalisation, la concentration en lixisenatide, ses analogues ou dérivés et leurs sels pharmaceutiquement acceptables est de 0,04 à 0,2 mg pour 100 U d'insuline.In one embodiment, the concentration of lixisenatide, its analogs or derivatives and their pharmaceutically acceptable salts is 0.04 to 0.2 mg per 100 U of insulin.
[000102] Dans un mode réalisation, ia concentration en lixisenatide, ses analogues ou dérivés et leurs sels pharmaceutiquement acceptables est de 0,04 à 0,15 mg pour 100 U d'insuline.In one embodiment, the concentration of lixisenatide, its analogs or derivatives and their pharmaceutically acceptable salts is 0.04 to 0.15 mg per 100 U of insulin.
[000103] Dans un mode réalisation, la concentration en lixisenatide, ses analogues ou dérivés et leurs sels pharmaceutiquement acceptables est de 0,1 mg pour 100 U d'insuline.In one embodiment, the concentration of lixisenatide, its analogs or derivatives and their pharmaceutically acceptable salts is 0.1 mg per 100 U of insulin.
[000104] Dans un mode de réalisation, les compositions selon l'invention sont réalisées par mélange de solutions, d'analogues d'amyline ou d'agonistes au récepteur de l'amyline, et de solutions de GLP-1, d'analogue de GLP-1 ou de d'agoniste au récepteur du GLP-1 RA en ratios volumiques compris dans un intervalle de 10/90 à 90/10.In one embodiment, the compositions according to the invention are produced by mixing solutions, amylin analogs or agonists at the amylin receptor, and solutions of GLP-1, analog GLP-1 or agonist to the GLP-1 RA receptor in volume ratios in the range of 10/90 to 90/10.
[000105] Dans un mode de réalisation, les compositions selon l'invention comprennent en outre des sels de zinc à une concentration comprise de 0 à 800 μΜ pour 100 U d'insuline.In one embodiment, the compositions according to the invention also comprise zinc salts at a concentration of 0 to 800 μΜ per 100 U of insulin.
[000106] Dans un mode de réalisation, les compositions selon l'invention comprennent en outre des sels de zinc à une concentration comprise de 0 à 500 μΜ pour 100 U d'insuline.In one embodiment, the compositions according to the invention further comprise zinc salts at a concentration of 0 to 500 μΜ per 100 U of insulin.
[000107] Dans un mode de réalisation, les compositions selon i'invention comprennent en outre des sels de zinc à une concentration comprise de 100 à 500 μΜ pour 100 U d'insuline.In one embodiment, the compositions according to the invention further comprise zinc salts at a concentration of 100 to 500 μΜ per 100 U of insulin.
[000108] Dans un mode de réalisation, les compositions selon l'invention comprennent en outre des sels de zinc à une concentration comprise de 200 à 400 μΜ pour 100 U d'insuline.In one embodiment, the compositions according to the invention further comprise zinc salts at a concentration of 200 to 400 μΜ per 100 U of insulin.
[000109] Dans un mode de réalisation, les compositions selon l'invention comprennent en outre des sels de zinc à une concentration de 300 μΜ pour 100 U d'insuline.In one embodiment, the compositions according to the invention also comprise zinc salts at a concentration of 300 μΜ per 100 U of insulin.
[000110] Dans un mode de réalisation, les compositions selon l'invention comprennent en outre des tampons.In one embodiment, the compositions according to the invention further comprise buffers.
[000111] Dans un mode de réalisation, les compositions selon l'invention comprennent un tampon choisi dans le groupe constitué par un tampon acétate de sodium et le Tris.In one embodiment, the compositions according to the invention comprise a buffer chosen from the group consisting of a sodium acetate buffer and Tris.
[000112] Dans un mode de réalisation, les compositions selon l'invention comprennent en outre des conservateurs.In one embodiment, the compositions according to the invention also comprise preservatives.
[000113] Dans un mode de réalisation, les conservateurs sont choisis dans le groupe constitué par le m-crésol et le phénol, seuls ou en mélange.In one embodiment, the preservatives are chosen from the group consisting of m-cresol and phenol, alone or as a mixture.
[000114] Dans un mode de réalisation, la concentration des conservateurs est comprise de 10 à 50 mM.In one embodiment, the concentration of preservatives is between 10 and 50 mM.
[000115] Dans un mode de réalisation, la concentration des conservateurs est comprise de 10 à 40 mM.In one embodiment, the concentration of preservatives is between 10 and 40 mM.
[000116] Dans un mode de réalisation, les compositions selon l'invention comprennent en outre un tensioactif.In one embodiment, the compositions according to the invention further comprise a surfactant.
[000117] Dans un mode de réalisation, le tensioactif est choisi dans le groupe constitué par le Poloxamer 188, le Tween® 20, encore appelé Polysorbate 20, et le Tween® 80, encore appelé Polysorbate 80.In one embodiment, the surfactant is chosen from the group consisting of Poloxamer 188, Tween® 20, also called Polysorbate 20, and Tween® 80, also called Polysorbate 80.
[000118] Dans un mode de réalisation la concentration Tween® 20 varie de 5 à 50 pg/ml.In one embodiment, the Tween® 20 concentration varies from 5 to 50 pg / ml.
[000119] Dans un mode de réalisation la concentration Tween® 20 varie de 5 à 25 pg/ml.In one embodiment, the Tween® 20 concentration varies from 5 to 25 pg / ml.
[000120] Dans un mode de réalisation la concentration Tween® 20 est de 10 pM.In one embodiment, the Tween® 20 concentration is 10 pM.
[000121] Les compositions selon l'invention peuvent en outre comprendre des additifs tels que des agents de tonicité.The compositions according to the invention can also comprise additives such as tonicity agents.
[000122] Dans un mode de réalisation, les agents de tonicité sont choisis dans le groupe constitué par la glycérine, le chlorure de sodium, le mannitol et la glycine.In one embodiment, the tonicity agents are chosen from the group consisting of glycerin, sodium chloride, mannitol and glycine.
[000123] Dans un mode de réalisation, les compositions selon l'invention comprennent en outre un anti-oxydant.In one embodiment, the compositions according to the invention further comprise an antioxidant.
[000124] Dans un mode de réalisation, l'anti-oxydant est la méthionine.[000124] In one embodiment, the antioxidant is methionine.
[000125] Dans un mode de réalisation, la composition pharmaceutique comprend en outre au moins un promoteur d'absorption choisi parmi les promoteurs d'absorption, les promoteurs de diffusion ou les agents vasodilatateurs, seuls ou en mélange.In one embodiment, the pharmaceutical composition also comprises at least one absorption promoter chosen from absorption promoters, diffusion promoters or vasodilating agents, alone or as a mixture.
[000126] Les promoteurs d'absorption incluent, sans se limiter, les surfactants, par exemple, les sels biliaires, les sels d'acides gras ou les phospholipides ; les agents nicotiniques, comme les nicotinamides, les acides nicotiniques, la niacine, la niacinamide, la vitamine B3 et leurs sels ; les inhibiteurs de la trypsine pancréatique ; les sels de magnésium ; les acides gras polyinsaturés ; le phosphatidylcholine didécanoyl ; les aminopolycarboxylates ; la tolmétine ; le caprate de sodium ; l'acide salicylique ; l'acide oléique ; l'acide linoléique ; l'acide eicosapentaénoïque (EPA) ; l'acide docosahexaénoïque (DHA) ; l'acide benzylique ; les donneurs de monoxyde d'azote, par exemple, la 3-(2-Hydroxy-l-(l-méthyléthyl)-2-nitrosohydrazino)-lpropanamine, la N-éthyl-2-(l-éthyl-hydroxy-2-l-nitrosohydrazino)-éthanamine, ou la S-nitroso-N-acétylpenicillamine ; les acides biliaires, la glycine sous sa forme conjuguée à un acide biliaire ; l'ascorbate de sodium, l'ascorbate de potassium ; le salicylate de sodium, le salicylate de potassium, l'acide acétyl-salicylique, l'acide salicylosalicylique, l'acétylsalicylate d'aluminum, le salicylate de choline, le salicylamide, l'acétylsalicylate de lysine ; l'exalamide ; le diflunisal ; l'éthenzamide ; l'EDTA ; seul ou en mélange.Absorption promoters include, without limitation, surfactants, for example, bile salts, salts of fatty acids or phospholipids; nicotinic agents, such as nicotinamides, nicotinic acids, niacin, niacinamide, vitamin B3 and their salts; pancreatic trypsin inhibitors; magnesium salts; polyunsaturated fatty acids; didecanoyl phosphatidylcholine; aminopolycarboxylates; tolmetin; sodium caprate; salicylic acid; oleic acid; linoleic acid; eicosapentaenoic acid (EPA); docosahexaenoic acid (DHA); benzylic acid; nitric oxide donors, for example, 3- (2-Hydroxy-1- (1-methylethyl) -2-nitrosohydrazino) -lpropanamine, N-ethyl-2- (1-ethyl-hydroxy-2- l-nitrosohydrazino) -ethanamine, or S-nitroso-N-acetylpenicillamine; bile acids, glycine in its form conjugated with a bile acid; sodium ascorbate, potassium ascorbate; sodium salicylate, potassium salicylate, acetylsalicylic acid, salicylosalicylic acid, aluminum acetylsalicylate, choline salicylate, salicylamide, lysine acetylsalicylate; exalamide; diflunisal; ethenzamide; EDTA; alone or as a mixture.
[000127] Dans un mode de réalisation, la composition pharmaceutique comprend en outre au moins un promoteur de diffusion. Des exemples de promoteur de diffusion incluent, sans se limiter, les glycosaminoglycanases, par exemple la hyaluronidase.In one embodiment, the pharmaceutical composition also comprises at least one diffusion promoter. Examples of diffusion promoters include, but are not limited to, glycosaminoglycanases, for example hyaluronidase.
[000128] Dans un mode de réalisation, la composition pharmaceutique comprend en outre au moins un agent vasodilatateur.In one embodiment, the pharmaceutical composition also comprises at least one vasodilator.
[000129] Dans un mode de réalisation, la composition pharmaceutique comprend en outre au moins un agent vasodilatateur provoquant une hyperpolarisation en bloquant les canaux ioniques de calcium.In one embodiment, the pharmaceutical composition also comprises at least one vasodilator causing hyperpolarization by blocking the calcium ion channels.
[000130] Dans un mode de réalisation, l'agent vasodilatateur provoquant une hyperpolarisation en bloquant les canaux ioniques de calcium est l’adénosine, un agent hyperpolarisant dérivé de l'endothélium, un inhibiteur de la phosphodiestérase de type 5 (PDE5), un agent d'ouverture des canaux potassiques ou toute combinaison de ces agents.In one embodiment, the vasodilator causing hyperpolarization by blocking the calcium ion channels is adenosine, a hyperpolarizing agent derived from the endothelium, a phosphodiesterase type 5 (PDE5) inhibitor, a potassium channel opening agent or any combination of these agents.
[000131] Dans un mode de réalisation, la composition pharmaceutique comprend en outre au moins un agent vasodilatateur à médiation par AMPc.In one embodiment, the pharmaceutical composition further comprises at least one vasodilator agent mediated by cAMP.
[000132] Dans un mode de réalisation, ia composition pharmaceutique comprend en outre au moins un agent vasodilatateur à médiation par GMPc.In one embodiment, the pharmaceutical composition also comprises at least one vasodilator agent mediated by cGMP.
[000133] Dans un mode de réalisation, la composition pharmaceutique comprend en outre au moins un agent vasodilatateur choisi dans le groupe comprenant les agents vasodilatateurs qui agissent en provoquant une hyperpolarisation en bloquant les canaux ioniques de calcium, les agents vasodilatateurs à médiation par AMPc, et les 30 agents vasodilatateurs à médiation par GMPc.In one embodiment, the pharmaceutical composition also comprises at least one vasodilating agent chosen from the group comprising vasodilating agents which act by causing hyperpolarization by blocking calcium ion channels, vasodilator agents mediated by cAMP, and the 30 cGMP mediated vasodilators.
[000134] Le au moins un agent vasodilatateur est chosi dans le groupe comprenant, les donneurs de monoxyde d'azote, par exemple, la nitroglycérine, le dinitrate d'isosorbide, le mononitrate d'isosorbide, le nitrate d'amyl, l'érythrityle, le tétranitrate, 35 et le nitroprussiate) ; la prostacycline et ses analogues, par exemple l'époprosténol sodique, l'iloprost, l'époprosténol, le tréprostinil ou le selexipag ; l'histamine, la 2méthylhistamine, la 4-méthylhistamine; la 2-(2-pyridyl)éthylamine, la 2-(2thiazolyl)éthylamine ; la papavérine, le chlorhydrate de papavérine ; le minoxidil ; la dipyridamole ; I'hydralazine ; l'adénosine, l'adénosine triphosphate; l'uridine trisphosphate ; le GPLC ; la L-carnitine ; l'arginine ; la prostaglandine D2 ; les seis de potassium ; et dans certains cas, les antagonistes des récepteurs al et a2 ,par exemple, le prazosine, la phénoxybenzamine, la phentolamine, la dibénamine, le chlorhydrate de moxisylyte et la tolazoline), le bétazole, le dimaprit ; les agonistes des récepteurs β2, par exemple, l'isoprotérénol, la dobutamine, l'albutérol, la terbutaline, l'aminophylline, la théophylline, la caféine ; l'alprostadil, l'ambrisentan ; la cabergoline ; la diazoxide ; le mesilate de dihydralazine ; le chlorhydrate de diltiazem ; l'énoximone ; le chlorhydrate de flunarizine ; l'extrait de Ginkgo biloba ; le lévosimendan ;la molsidomine ; l'oxalate acide de naftidrofuryl ;le nicorandil ;la pentoxifylline ;le chlorure de phenoxybenzamine ; le piribédil base ; le mesilate de piribédil ;le regadenoson monohydrate ; le riociguat ; le sildenafil citrate, le tadalafil, le chlorhydrate trihydraté de vardenafil ; le chlorhydrate de trimetazidine ; la trinitrine ; le chlorhydrate de vérapamil ; les antagonistes des récepteur à l'endothéline, par exemple l'avanafil et le bosentran monohydrate ; et les inhibiteurs des canaux calciques,par exemple, l'amlodipine, l'aranidipine, l'azelnidipine, la barnidipine, la benidipine, la cilnidipine, la clévidipine, l'isradipine, l'efonidipine, la felodipine, la lacidipine, la lercanidipine, la manidipine, la nicardipine, la nifedipine, la nilvadipine, la nimodipine, la nisoldipine, la nitrendipine, la prandipine ; seul ou en mélange.The at least one vasodilator is chosen from the group comprising, nitrogen monoxide donors, for example, nitroglycerin, isosorbide dinitrate, isosorbide mononitrate, amyl nitrate, erythrityl, tetranitrate, 35 and nitroprusside); prostacyclin and its analogs, for example sodium epoprostenol, iloprost, epoprostenol, treprostinil or selexipag; histamine, 2methylhistamine, 4-methylhistamine; 2- (2-pyridyl) ethylamine, 2- (2thiazolyl) ethylamine; papaverine, papaverine hydrochloride; minoxidil; dipyridamole; Hydralazine; adenosine, adenosine triphosphate; uridine trisphosphate; GPLC; L-carnitine; arginine; prostaglandin D2; potassium seis; and in some cases, the al and a2 receptor antagonists, for example, prazosin, phenoxybenzamine, phentolamine, dibenamine, moxisylyte hydrochloride and tolazoline), betazole, dimaprit; β2 receptor agonists, for example, isoproterenol, dobutamine, albuterol, terbutaline, aminophylline, theophylline, caffeine; alprostadil, ambrisentan; cabergoline; diazoxide; dihydralazine mesilate; diltiazem hydrochloride; enoximone; flunarizine hydrochloride; Ginkgo biloba extract; levosimendan; molsidomine; naftidrofuryl acid oxalate; nicorandil; pentoxifylline; phenoxybenzamine chloride; base piribedil; piribedil mesilate; regadenoson monohydrate; riociguat; sildenafil citrate, tadalafil, vardenafil hydrochloride trihydrate; trimetazidine hydrochloride; trinitrine; verapamil hydrochloride; endothelin receptor antagonists, for example avanafil and bosentran monohydrate; and calcium channel blockers, for example, amlodipine, aranidipine, azelnidipine, barnidipine, benidipine, cilnidipine, clevidipine, isradipine, efonidipine, felodipine, lacidipine, lercanidipine , manidipine, nicardipine, nifedipine, nilvadipine, nimodipine, nisoldipine, nitrendipine, prandipine; alone or as a mixture.
[000135] Dans un mode de réalisation, la composition selon l'invention contient de 3,5 mg/mL à 10,5 mg/mL d'insuline humaine A21G, 0,6 mg/mL à 3 mg/mL de pramîintide, 25 mM de m-crésol, 184 mM de glycérine à un pH de 4,0. Cette composition peut contenir en outre de 300 à 900 μΜ de zinc.In one embodiment, the composition according to the invention contains from 3.5 mg / ml to 10.5 mg / ml of human insulin A21G, 0.6 mg / ml to 3 mg / ml of praminintide, 25 mM m-cresol, 184 mM glycerin at pH 4.0. This composition can also contain from 300 to 900 μΜ of zinc.
[000136] Dans un mode de réalisation, la composition selon l'invention contient 3,5 mg/mL d'insuline humaine A21G, 0,6 mg/mL de pramîintide, 25 mM de m-crésol, 184 mM de glycérine, à un pH de 4,0. Cette composition peut contenir en outre 300 μΜ de zinc. Cette composition peut en outre comprendre du polysorbate 20, en particulier à 10 μΜ.In one embodiment, the composition according to the invention contains 3.5 mg / ml of human insulin A21G, 0.6 mg / ml of praminintide, 25 mM of m-cresol, 184 mM of glycerin, to a pH of 4.0. This composition can also contain 300 μΜ of zinc. This composition can also comprise polysorbate 20, in particular at 10 μΜ.
[000137] Dans un mode de réalisation, la composition selon l'invention contient 7,0 mg/mL d'insuline humaine A21G, 1,2 mg/mL de pramîintide, 25 mM de m-crésol, 184 mM de glycérine, à un pH de 4,0. Cette composition peut contenir en outre 600 μΜ de zinc. Cette composition peut en outre comprendre du polysorbate 20, en particulier à 10 μΜ.In one embodiment, the composition according to the invention contains 7.0 mg / ml of human insulin A21G, 1.2 mg / ml of praminintide, 25 mM of m-cresol, 184 mM of glycerin, to a pH of 4.0. This composition can also contain 600 μΜ of zinc. This composition can also comprise polysorbate 20, in particular at 10 μΜ.
[000138] Dans un mode de réalisation, la composition selon l'invention contient 10,5 mg/mL d'insuline humaine A21G, 1,8 mg/mL de pramîintide, 25 mM de m-crésol, 184 mM de glycérine, à un pH de 4,0. Cette composition peut contenir en outre 900 μΜ de zinc. Cette composition peut en outre comprendre du polysorbate 20, en particulier à 10 pM.In one embodiment, the composition according to the invention contains 10.5 mg / ml of human insulin A21G, 1.8 mg / ml of praminintide, 25 mM of m-cresol, 184 mM of glycerin, to a pH of 4.0. This composition can also contain 900 μΜ of zinc. This composition can also comprise polysorbate 20, in particular at 10 μM.
[000139] Les compositions selon l'invention peuvent comprendre en outre tous les 5 excipients conformes aux Pharmacopées, notamment EP et/ou US, et compatibles avec les insulines utilisées aux concentrations d'usage.The compositions according to the invention may also comprise all the 5 excipients in accordance with the Pharmacopoeias, in particular EP and / or US, and compatible with the insulins used at the concentrations of use.
[000140] Selon un mode de réalisation, la composition peut être sous forme solide ou lyophilisée. Cette composition peut alors servir à reconstituer une solution ou une formulation.According to one embodiment, the composition can be in solid form or lyophilized. This composition can then be used to reconstitute a solution or a formulation.
[000141] Les modes d'administration envisagés sont par voie intraveineuse, souscutanée, intradermique ou intramusculaire, [000142] Selon un mode de réalisation particulier le mode d'administration est la voie sous-cutanée.The modes of administration envisaged are by the intravenous, subcutaneous, intradermal or intramuscular route, [000142] According to a particular embodiment, the mode of administration is the subcutaneous route.
[000143] Les voies d'administration transdermique, orale, nasale, vaginale, oculaire, buccale, pulmonaire sont également envisagées.[000143] The transdermal, oral, nasal, vaginal, ocular, oral, pulmonary administration routes are also envisaged.
[000144] L’invention concerne également une pompe, implantable ou transportable, comprenant une composition selon l’invention.The invention also relates to a pump, implantable or transportable, comprising a composition according to the invention.
[000145] L’invention concerne encore l'utilisation d'une composition selon l'invention destinée à être placée dans une pompe, implantable ou transportable.The invention also relates to the use of a composition according to the invention intended to be placed in a pump, implantable or transportable.
[000146] L’invention concerne également des formulations unidoses.The invention also relates to single-dose formulations.
[000147] Dans un mode de réalisation, les formulations sont sous forme d'une solution injectable.In one embodiment, the formulations are in the form of an injectable solution.
[000148] La préparation d’une composition selon l'invention présente l'avantage de pouvoir être réalisée par simple mélange d'une solution aqueuse, d'un analogue d'amyline ou d'un agoniste au récepteur de l'amyline, et d'insuline humaine A21G, en 30 solution aqueuse ou sous forme lyophilisée.The preparation of a composition according to the invention has the advantage of being able to be carried out by simple mixing of an aqueous solution, of an amylin analog or of an agonist at the amylin receptor, and A21G human insulin, in aqueous solution or in lyophilized form.
[000149] Si nécessaire, la composition du mélange est ajustée en excipients tels que glycérine, m-crésol, chlorure de zinc, Poloxamer 188 et polysorbate 20 (Tween® 20). Cette addition peut être effectuée par ajout de solutions concentrées desdits excipients, 35 [000150] Dans un mode de réalisation, les compositions sont caractérisées en ce que lesdites compositions présentent une solubilité à un pH de 4,0 et une stabilité physique mesurée par ThT supérieure à celle d'une composition de référence comprenant un analogue d'amyline ou un agoniste au récepteur de l'amyline ou et une insuline prandiale commerciale.If necessary, the composition of the mixture is adjusted in excipients such as glycerin, m-cresol, zinc chloride, Poloxamer 188 and polysorbate 20 (Tween® 20). This addition can be carried out by adding concentrated solutions of said excipients. In one embodiment, the compositions are characterized in that said compositions have a solubility at a pH of 4.0 and a physical stability measured by higher ThT. to that of a reference composition comprising an amylin analogue or an amylin receptor agonist or and a commercial mealtime insulin.
[000151] La ThT est mesuré selon le protocole décrit dans les exemples.[000151] ThT is measured according to the protocol described in the examples.
[000152] Dans un mode de réalisation, les compositions sont caractérisées en ce que lesdites compositions présentent une solubilité à un pH de 4,0 et une stabilité physique mesurée par ThT supérieure à celle d'une composition de référence comprenant un GLP1, un analogue de GLP-1 ou un agoniste de récepteur de GLP-1 et une insuline prandiale commerciale.In one embodiment, the compositions are characterized in that said compositions have a solubility at a pH of 4.0 and a physical stability measured by ThT greater than that of a reference composition comprising a GLP1, an analog GLP-1 or a GLP-1 receptor agonist and commercial mealtime insulin.
[000153] L'insuline et les insulines analogues peuvent être obtenues par des méthodes de technologies de l'ADN recombinante en bactéries telle que /'Escherichia Coli ou en levures telle que le Saccharomyces Cerevisiae (voir par exemple G. Walsh Appl. Microbiol. Biotechnol. 2005, 67, 151-159). Généralement, on produit une proinsuline qui est ensuite digérée par des enzymes telles que la trypsine et la carboxypeptidase B pour obtenir la séquence souhaitée.Insulin and analogous insulins can be obtained by methods of recombinant DNA technology in bacteria such as Escherichia Coli or in yeasts such as Saccharomyces Cerevisiae (see for example G. Walsh Appl. Microbiol. Biotechnol. 2005, 67, 151-159). Generally, a proinsulin is produced which is then digested by enzymes such as trypsin and carboxypeptidase B to obtain the desired sequence.
[000154] Pour la fabrication d'insuline humaine A21G, on code la proinsuline pour avoir la glycine en A21 et après digestion par la trypsine et la carboxypetidase B, on obtient l'insuline souhaitée. Un mode opératoire est décrit par Kohn et al., dans Peptides 2007, 28, 935-948.For the manufacture of human insulin A21G, the proinsulin is coded to have glycine in A21 and after digestion with trypsin and carboxypetidase B, the desired insulin is obtained. A procedure is described by Kohn et al., In Peptides 2007, 28, 935-948.
[000155] L'invention concerne également le procédé d'obtention de l’insuline humaine A21G comprenant au moins une étape consistant à faire réagir l'insuline humaine A21G, B31R, B32R (insuline glargine) avec la carboxypeptidase B de rat à un ratio insuline/carboxypeptidase compris entre 500 et 2000, à un pH compris de 7,5 à 8,5 et à une température comprise de 20 à 30°C pendant 10 à 20 heures. Le produit peut ensuite être purifié. Cette purification peut être effectuée par par chromatographie liquide.The invention also relates to the process for obtaining human insulin A21G comprising at least one step consisting in reacting human insulin A21G, B31R, B32R (insulin glargine) with rat carboxypeptidase B at a ratio insulin / carboxypeptidase between 500 and 2000, at a pH between 7.5 and 8.5 and at a temperature between 20 and 30 ° C for 10 to 20 hours. The product can then be purified. This purification can be carried out by liquid chromatography.
[000156] L'insuline humaine A21G peut donc être obtenue en enlevant les deux arginines de l'insuline glargine par digestion avec une carboxypeptidase B. Après digestion enzymatique, l'insuline humaine A21G est purifiée par chromatographie puis isolée par lyophilisation ou par cristallisation par des méthodes classiques.Human insulin A21G can therefore be obtained by removing the two arginines from insulin glargine by digestion with a carboxypeptidase B. After enzymatic digestion, human insulin A21G is purified by chromatography and then isolated by lyophilization or by crystallization by conventional methods.
ii
Description des figures :Description of the figures:
Figure 1: Détermination graphique du temps de latence de fibrillation.Figure 1: Graphical determination of the fibrillation latency time.
[000157] A la figure 1 est représentée la détermination graphique du temps de 5 latence de fibrillation sur un exemple virtuel. En abscisse figure le temps en minutes, en ordonnée figure la fluorescence ThT en unité arbitraire (u.a.) et LT figure le temps de latence, ou « lag time ».FIG. 1 shows the graphical determination of the fibrillation latency time on a virtual example. On the abscissa is the time in minutes, on the ordinate is the fluorescence ThT in arbitrary units (u.a.) and LT is the lag time, or "lag time".
Figure 2 : Concentrations en pramlintide et insuline plasmatique après administration de la formulation A21-8 (moyenne ± erreur standard) [000158] Les carrés représentent la concentration en insuline et les triangles la concentration en pramlintide.Figure 2: Pramlintide and plasma insulin concentrations after administration of the formulation A21-8 (mean ± standard error) The squares represent the insulin concentration and the triangles represent the pramlintide concentration.
[000159] En abscisse figure le temps en minutes après injection, en ordonnée à gauche la concentration en insuline en pmol/l et en ordonnée la concentration en pramlintide en pmol/l corrigées de la ligne de base, ou « baseline ».On the abscissa is the time in minutes after injection, on the y-axis the insulin concentration in pmol / l and on the y-axis the pramlintide concentration in pmol / l corrected from the baseline, or "baseline".
Figure 3 : Glycémie après administration de la formulation A21-8 (moyenne ± erreur standard).Figure 3: Blood sugar after administration of the A21-8 formulation (mean ± standard error).
[000160] En abscisse le temps en minutes après injection, et en ordonnée la glycémie en % du niveau basal.On the abscissa the time in minutes after injection, and on the ordinate the blood sugar in% of the basal level.
Figure 4 : Concentrations en pramlintide après administration des formulation A21-9 20 et PRAM (moyenne ± erreur standard).Figure 4: Pramlintide concentrations after administration of formulations A21-9 20 and PRAM (mean ± standard error).
[000161] En abscisse le temps en minutes après injection, et en ordonnée les concentrations en pramlintide corrigées de la ligne de base, ou « baseline » (concentrations pré-doses retranchées individuellement), en pmol/L.On the abscissa, the time in minutes after injection, and on the ordinate the pramlintide concentrations corrected from the baseline, or “baseline” (pre-dose concentrations entrenched individually), in pmol / L.
ExemplesExamples
Exemple 1. Préparation de l'insuline humaine A21G [000162] On mélange 5 g d'insuline glargine (Gan & Lee Pharmaceuticals) à de 30 l'enzyme carboxypeptidase B (Référence 08039852001 ; Sigma-Aldrich) à pH 8,0 (pH ajusté par ajout de tampon Tris) et on laisse à 25°C pendant 17 heures, la concentration en insuline glargine étant d'environ 4 mg/mL. Le ratio enzyme/glargine est de 1/500. Le mélange est ensuite purifié par chromatographie liquide, dialysé contre de l'acide chlorhydrique 0,01N puis lyophilisé. On obtient l'insuline humaine A21G avec une pureté 35 de 98% et un rendement d'environ 90%. La masse molaire de l'insuline mesurée par spectrométrie de masse (Maldi-Tof) est de 5752 Da. L'insuline humaine A21G peut aussi être obtenue à partir de la technologie recombinante comme décrit par Kohn et al. (Peptides 2007, 28, 935-948).Example 1. Preparation of human insulin A21G [000162] 5 g of insulin glargine (Gan & Lee Pharmaceuticals) are mixed with the enzyme carboxypeptidase B (Reference 08039852001; Sigma-Aldrich) at pH 8.0 (pH adjusted by adding Tris buffer) and left at 25 ° C for 17 hours, the insulin glargine concentration being approximately 4 mg / ml. The enzyme / glargine ratio is 1/500. The mixture is then purified by liquid chromatography, dialyzed against 0.01N hydrochloric acid and then lyophilized. Human insulin A21G is obtained with a purity of 98% and a yield of approximately 90%. The insulin molar mass measured by mass spectrometry (Maldi-Tof) is 5752 Da. Human insulin A21G can also be obtained from recombinant technology as described by Kohn et al. (Peptides 2007, 28, 935-948).
Exemple 2. Compositions d'insulines prandiales et de pramlintide, d'exénatide ou de lixisénatide à pH acide.Example 2. Compositions of prandial insulins and pramlintide, exenatide or lixisenatide at acidic pH.
Préparation d'une solution d'insuline humaine A21G 100 UI/mL (3,5 mg/ml) et de pramlintide 1 mg/mL contenant du m-crésol (25 mM), de la glycérine (184 mM) et du chlorure de zinc (300 μΜ) à pH acide de 3,5 ou 4,0.Preparation of a solution of human insulin A21G 100 IU / ml (3.5 mg / ml) and pramlintide 1 mg / ml containing m-cresol (25 mM), glycerin (184 mM) and chloride zinc (300 μΜ) at an acid pH of 3.5 or 4.0.
[000163] Une solution concentrée d'excipients (m-créycérine) est ajoutée à une solution d'insuline humaine A21G concentrée (300 UI/mL à pH 3,5). Une solution de pramlintide (Ambiopharm) concentrée (10 mg/mL à pH 4) et une solution de concentrée de chlorure de zinc sont ajoutées à cette solution concentrée d'insuline humaine A21G et d'excipients de manière à obtenir la composition finale visée. Le pH final, soit 3,5 ou 4,0, est ajusté à la valeur désirée par ajout d'une solution aqueuse de NaOH ou d'HCI. La solution obtenue est limpide et homogène, celle-ci est filtrée sur 0,22 μΜ et stockée dans des cartouches en verre (1 mL de solution par cartouche).A concentrated solution of excipients (m-creycerin) is added to a solution of human insulin A21G concentrated (300 IU / mL at pH 3.5). A concentrated pramlintide solution (Ambiopharm) (10 mg / mL at pH 4) and a zinc chloride concentrate solution are added to this concentrated solution of human insulin A21G and of excipients so as to obtain the final targeted composition. The final pH, either 3.5 or 4.0, is adjusted to the desired value by adding an aqueous solution of NaOH or HCl. The solution obtained is clear and homogeneous, it is filtered through 0.22 μΜ and stored in glass cartridges (1 ml of solution per cartridge).
Préparation d'une solution d'insuline humaine A21G 100 UI/mL et de pramlintide 0,6 mg/mL contenant du m-crésol (25 mM), de la glycérine (184 mM) et du chlorure de zinc (300 μΜ) à pH acide de 4,0.Preparation of a solution of human insulin A21G 100 IU / mL and pramlintide 0.6 mg / mL containing m-cresol (25 mM), glycerin (184 mM) and zinc chloride (300 μΜ) at acid pH of 4.0.
[000164] Cette solution est préparée de la même manière que la solution présentée ci-dessus.This solution is prepared in the same way as the solution presented above.
Préparation d'une solution d'insuline humaine A21G 100 UI/mL et de pramlintide 1 mg/mL contenant du m-crésol (25 mM) et de la glycérine (184 mM) à pH acide de 4,0.Preparation of a solution of human insulin A21G 100 IU / ml and pramlintide 1 mg / ml containing m-cresol (25 mM) and glycerin (184 mM) at an acid pH of 4.0.
[000165] Une solution concentrée d'excipients (m-crésol, glycérine) est ajoutée à une solution d'insuline humaine A21G concentrée (800 UI/mL à pH 3,5). Une solution de pramlintide concentrée (10 mg/mL à pH 4) est ajoutée à cette solution concentrée d'insuline humaine et d'excipients de manière à obtenir la composition finale visée. Le pH final, soit 4,0, est ajusté à la valeur désirée par ajout d'une solution aqueuse de NaOH ou d'HCI. La solution obtenue est limpide et homogène, celle-ci est filtrée sur 0,22 μΜ et stockée dans des cartouches en verre (1 mL de solution par cartouche).A concentrated solution of excipients (m-cresol, glycerin) is added to a solution of concentrated human insulin A21G (800 IU / ml at pH 3.5). A concentrated pramlintide solution (10 mg / ml at pH 4) is added to this concentrated solution of human insulin and of excipients so as to obtain the final targeted composition. The final pH, ie 4.0, is adjusted to the desired value by adding an aqueous solution of NaOH or HCl. The solution obtained is clear and homogeneous, it is filtered through 0.22 μΜ and stored in glass cartridges (1 ml of solution per cartridge).
Préparation d'une solution d'insuline humaine A21G 100 UI/mL et de pramlintide 1 mg/mL contenant du m-crésol (25 mM), de la glycérine (184 mM) et du Tween 20 (10 pg/ml) à pH 4.Preparation of a solution of human insulin A21G 100 IU / mL and pramlintide 1 mg / mL containing m-cresol (25 mM), glycerin (184 mM) and Tween 20 (10 pg / ml) at pH 4.
[000166] Une solution concentrée d'excipients (m-crésol, glycérine) est ajoutée à une solution d'insuline humaine A21G concentrée (300 UI/mL à pH 3,5). Une solution de pramlintide concentrée (10 mg/mL à pH 4) et une solution de tween 20 concentrée sont ajoutées à cette solution concentrée d'insuline humaine A21G et d'excipients de manière à obtenir la composition finale visée. Le pH final est ajusté à la valeur désirée par ajout d'une solution aqueuse de NaOH ou d'HCI. La solution obtenue est limpide et homogène, celle-ci est filtrée sur 0,22 pM et stockée dans des cartouches en verre (1 mL de solution par cartouche).A concentrated solution of excipients (m-cresol, glycerin) is added to a solution of concentrated human insulin A21G (300 IU / mL at pH 3.5). A concentrated pramlintide solution (10 mg / ml at pH 4) and a concentrated tween 20 solution are added to this concentrated solution of human insulin A21G and of excipients so as to obtain the final targeted composition. The final pH is adjusted to the desired value by adding an aqueous solution of NaOH or HCl. The solution obtained is clear and homogeneous, it is filtered through 0.22 pM and stored in glass cartridges (1 ml of solution per cartridge).
Préparation d'une solution d'insuline humaine A21G 100 UI/mL et de pramlintide 1 mg/mL contenant du m-crésol (25 mM), de la glycérine (184 mM), du chlorure de zinc (300 μΜ) et du Tween 20 (10 pg/ml) à pH 4.Preparation of a solution of human insulin A21G 100 IU / mL and pramlintide 1 mg / mL containing m-cresol (25 mM), glycerin (184 mM), zinc chloride (300 μΜ) and Tween 20 (10 pg / ml) at pH 4.
[000167] Une solution concentrée d'excipients (m-crésol, glycérine est ajoutée à une solution d'insuline humaine A21G concentrée (300 UI/mL à pH 3,5). Une solution de pramlintide concentrée (10 mg/mL à pH 4), une solution de chlorure de zinc concentrée et une solution de tween 20 concentrée sont ajoutées à cette solution concentrée d'insuline humaine A21G et d'excipients de manière à obtenir la composition finale visée. Le pH final est ajusté à la valeur désirée par ajout d'une solution aqueuse de NaOH ou d'HCI. La solution obtenue est limpide et homogène, celle-ci est filtrée sur 0,22 μΜ et stockée dans des cartouches en verre (1 mL de solution par cartouche).A concentrated solution of excipients (m-cresol, glycerin is added to a solution of concentrated human insulin A21G (300 IU / ml at pH 3.5). A concentrated pramlintide solution (10 mg / ml at pH 4), a concentrated zinc chloride solution and a concentrated tween 20 solution are added to this concentrated solution of human insulin A21G and of excipients so as to obtain the final composition aimed at. The final pH is adjusted to the desired value by adding an aqueous solution of NaOH or HCl, the solution obtained is clear and homogeneous, it is filtered through 0.22 μΜ and stored in glass cartridges (1 ml of solution per cartridge).
Préparation d'une solution d'insuline humaine A21G 100 UI/mL et d'exénatide 50 pg/mL contenant du m-crésol (25 mM), de la glycérine (184 mM) et du chlorure de zinc (300 μΜ) à pH acide.Preparation of a solution of human insulin A21G 100 IU / mL and exenatide 50 pg / mL containing m-cresol (25 mM), glycerin (184 mM) and zinc chloride (300 μΜ) at pH acid.
[000168] Une solution concentrée d'excipients (m-crésol, glycérine)) est ajoutée à une solution d'insuline humaine A21G concentrée (300 UI/mL à pH 3,5). Une solution d'exénatide (Bachem) concentrée (10,5 mg/mL à pH 4) et une solution concentrée de chlorure de zinc sont ajoutées à cette solution concentrée d'insuline humaine A21G et d'excipients de manière à obtenir la composition finale visée. Le pH final 4,0 est ajusté à la valeur désirée par ajout d'une solution aqueuse de NaOH ou d'HCI. La solution obtenue est limpide et homogène, celle-ci est filtrée sur 0,22 μΜ et stockée dans des cartouches en verre (1 mL de solution par cartouche).A concentrated solution of excipients (m-cresol, glycerin)) is added to a solution of concentrated human insulin A21G (300 IU / ml at pH 3.5). A concentrated exenatide solution (Bachem) (10.5 mg / ml at pH 4) and a concentrated solution of zinc chloride are added to this concentrated solution of human insulin A21G and of excipients so as to obtain the final composition referred. The final pH 4.0 is adjusted to the desired value by adding an aqueous solution of NaOH or HCl. The solution obtained is clear and homogeneous, it is filtered through 0.22 μΜ and stored in glass cartridges (1 ml of solution per cartridge).
Préparation d'une solution d'insuline humaine A21G 100 UI/mL et de lixisénatide 100 pg/mL contenant du m-crésol (25 mM), de la glycérine (184 mM) et du chlorure de zinc (300 pM) à pH acide.Preparation of a solution of human insulin A21G 100 IU / mL and lixisenatide 100 pg / mL containing m-cresol (25 mM), glycerin (184 mM) and zinc chloride (300 pM) at acidic pH .
[000169] Une solution concentrée d'excipients (m-crésol, glycérine) est ajoutée à une solution d'insuline humaine A21G concentrée (230 UI/mL à pH 3,5). Une solution de de lixisénatide (Ambiopharm) concentrée (10,5 mg/mL à pH 4) et une solution concentrée de chlorure de zinc sont ajoutées à cette solution concentrée d'insuline humaine A21G et d'excipients de manière à obtenir la composition finale visée. Le pH final 4,0 est ajusté à la valeur désirée par ajout d'une solution aqueuse de NaOH ou d'HCI. La solution obtenue est limpide et homogène, celle-ci est filtrée sur 0,22 μΜ et stockée dans des cartouches en verre (1 mL de solution par cartouche).[000169] A concentrated solution of excipients (m-cresol, glycerin) is added to a solution of concentrated human insulin A21G (230 IU / ml at pH 3.5). A concentrated solution of lixisenatide (Ambiopharm) (10.5 mg / ml at pH 4) and a concentrated solution of zinc chloride are added to this concentrated solution of human insulin A21G and of excipients so as to obtain the final composition referred. The final pH 4.0 is adjusted to the desired value by adding an aqueous solution of NaOH or HCl. The solution obtained is clear and homogeneous, it is filtered through 0.22 μΜ and stored in glass cartridges (1 ml of solution per cartridge).
Préparation d'une solution d'insuline humaine 100 UI/mL et de pramlintide 1 mg/mL contenant du m-crésol (25 mM), de la glycérine (184 mM) et du chlorure de zinc (300 μΜ) à pH acide de 3,5 ou 4,0.Preparation of a solution of human insulin 100 IU / mL and pramlintide 1 mg / mL containing m-cresol (25 mM), glycerin (184 mM) and zinc chloride (300 μΜ) at acid pH of 3.5 or 4.0.
[000170] Une solution concentrée d'excipients (m-crésol, glycérine) est ajoutée à une solution d'insuline humaine (Amphastar Pharmaceuticals) concentrée (800 UI/mL à pH 3,5). Une solution de pramlintide concentrée (10 mg/mL à pH 4) et une solution concentrée de chlorure de zincsont ajoutées à cette solution concentrée d'insuline humaine et d'excipients de manière à obtenir la composition finale visée. Le pH final, soit 3,5 ou 4,0, est ajusté à la valeur désirée par ajout d'une solution aqueuse de NaOH ou d'HCI. La solution obtenue est limpide et homogène, celle-ci est filtrée sur 0,22 μΜ et stockée dans des cartouches en verre (1 mL de solution par cartouche).A concentrated solution of excipients (m-cresol, glycerin) is added to a solution of human insulin (Amphastar Pharmaceuticals) concentrated (800 IU / mL at pH 3.5). A concentrated pramlintide solution (10 mg / mL at pH 4) and a concentrated zinc chloride solution are added to this concentrated solution of human insulin and of excipients so as to obtain the final targeted composition. The final pH, either 3.5 or 4.0, is adjusted to the desired value by adding an aqueous solution of NaOH or HCl. The solution obtained is clear and homogeneous, it is filtered through 0.22 μΜ and stored in glass cartridges (1 ml of solution per cartridge).
Préparation d'une solution d'insuline aspart 100 lU/mL et de pramlintide 1 mg/mL contenant du m-crésol (25 mM), de la glycérine (184 mM) et du chlorure de zinc (300 μΜ) à pH acide de 3,5 ou 4,0.Preparation of a solution of insulin aspart 100 lU / mL and pramlintide 1 mg / mL containing m-cresol (25 mM), glycerin (184 mM) and zinc chloride (300 μΜ) at acid pH of 3.5 or 4.0.
[000171] Une solution concentrée d'excipients (m-crésol, glycérine) est ajoutée à une solution d'insuline aspart (HEC Pharmaceuticals) concentrée (500 IIJ/mL à pH 3). Une solution de pramlintide concentrée (10 mg/mL à pH 4) et une solution concentrée de chlorure de zincsont ajoutées à cette solution concentrée d'insuline aspart et d'excipients de manière à obtenir la composition finale visée. Le pH final, soit 3,5 ou 4,0, est ajusté à la valeur désirée par ajout d'une solution aqueuse de NaOH ou d'HCI. La solution ajustée à pH 4,0 est turbide dès l'ajustement de pH. La solution ajustée à pH 3,5 est limpide. Celle-ci est filtrée sur 0,22 μΜ et stockée dans des cartouches en verre (1 mL de solution par cartouche).A concentrated solution of excipients (m-cresol, glycerin) is added to a concentrated insulin aspart solution (HEC Pharmaceuticals) (500 IIJ / mL at pH 3). A concentrated pramlintide solution (10 mg / mL at pH 4) and a concentrated solution of zinc chloride are added to this concentrated solution of insulin aspart and of excipients so as to obtain the final targeted composition. The final pH, either 3.5 or 4.0, is adjusted to the desired value by adding an aqueous solution of NaOH or HCl. The solution adjusted to pH 4.0 is turbid as soon as the pH is adjusted. The solution adjusted to pH 3.5 is clear. This is filtered through 0.22 μΜ and stored in glass cartridges (1 mL of solution per cartridge).
Préparation d'une solution d'insuline lispro 100 UI/mL et de pramlintide 1 mg/mL contenant du m-crésol (25 mM), de la glycérine (184 mM) et du chlorure de zinc (300 μΜ) à pH acide de 3,5 ou 4,0.Preparation of a solution of insulin lispro 100 IU / mL and pramlintide 1 mg / mL containing m-cresol (25 mM), glycerin (184 mM) and zinc chloride (300 μΜ) at acid pH of 3.5 or 4.0.
[000172] Une solution concentrée d'excipients (m-crésol, glycérine) est ajoutée à une solution d'insuline lispro (Gan et Lee Pharmaceuticals) concentrée (650 UI/mL à pH 3). Une solution de pramlintide concentrée (10 mg/mL à pH 4) et une solution concentrée de chlorure de zinc sont ajoutéesà cette solution concentrée d'insuline lispro et d'excipients de manière à obtenir la composition finale visée. Le pH final, soit 3,5 ou 4,0, est ajusté à la valeur désirée par ajout d'une solution aqueuse de NaOH ou d'HCI.A concentrated solution of excipients (m-cresol, glycerin) is added to a concentrated solution of insulin lispro (Gan and Lee Pharmaceuticals) (650 IU / mL at pH 3). A concentrated pramlintide solution (10 mg / ml at pH 4) and a concentrated solution of zinc chloride are added to this concentrated solution of insulin lispro and of excipients so as to obtain the final targeted composition. The final pH, either 3.5 or 4.0, is adjusted to the desired value by adding an aqueous solution of NaOH or HCl.
La solution obtenue est limpide et homogène, celle-ci est filtrée sur 0,22 μΜ et stockée dans des cartouches en verre (1 mL de solution par cartouche).The solution obtained is clear and homogeneous, it is filtered through 0.22 μΜ and stored in glass cartridges (1 ml of solution per cartridge).
Préparation d'une solution d'insuline glulisine 100 lU/mL et de pramlintide 1 mg/mL contenant les excipients du produit commercial Apidra® (29 mM mcrésol, 50 mM de Tris, 86 mM de chlorure de zinc et 8,15 μΜ de tween 20) à pH acide de 3,0, 3,5 ou 4,0.Preparation of a solution of insulin glulisine 100 lU / mL and pramlintide 1 mg / mL containing the excipients of the commercial product Apidra® (29 mM mresol, 50 mM Tris, 86 mM zinc chloride and 8.15 μΜ of tween 20) at an acid pH of 3.0, 3.5 or 4.0.
[000173] Le pH de la solution commerciale d'insuline glulisine, Apidra®, est ajusté à pH 2,5 par ajout d'une solution aqueuse d'HCI. Cette solution est ajoutée à pramlintide sous la forme de poudre de manière à obtenir une solution contenant 100 UI/mL d'insuline et 1 mg/mL de pramlintide. Le pH final est ajusté à la valeur désirée par ajout d'une solution aqueuse de NaOH ou d'HCI. Les solutions ajustées à pH 3,5 et 4,0 sont turbides dès l'ajustement de pH. La solution ajustée à pH 3,0 est limpide. Celle-ci est filtrée sur 0,22 μΜ et stockée dans des cartouches en verre (1 mL de solution par cartouche). Après quelques heures de stockage la solution est turbide et hétérogène.The pH of the commercial insulin glulisine solution, Apidra®, is adjusted to pH 2.5 by adding an aqueous HCl solution. This solution is added to pramlintide in powder form so as to obtain a solution containing 100 IU / ml of insulin and 1 mg / ml of pramlintide. The final pH is adjusted to the desired value by adding an aqueous solution of NaOH or HCl. Solutions adjusted to pH 3.5 and 4.0 are turbid as soon as the pH is adjusted. The solution adjusted to pH 3.0 is clear. This is filtered through 0.22 μΜ and stored in glass cartridges (1 mL of solution per cartridge). After a few hours of storage the solution is turbid and heterogeneous.
Préparation d'une solution de pramlintide 1 mg/mL contenant du m-crésol (20 mM), du mannitol (236 mM) et du tampon acide acétique/acétate de sodium (30 mM) à pH 4,0.Preparation of a 1 mg / mL pramlintide solution containing m-cresol (20 mM), mannitol (236 mM) and acetic acid / sodium acetate buffer (30 mM) at pH 4.0.
[000174] Une solution de pramlintide concentrée à 10 mg/mL est préparée par dissolution de pramlintide sous forme de poudre achetée chez Ambiopharm. Cette solution est ajoutée à une solution concentrée d'excipients (m-crésol, mannitol, tampon acide acétique/acétate de sodium) de manière à obtenir la composition finale visée. Le pH final est ajusté à 4,0 ± 0,2 par ajout de NaOH/HCI.A concentrated pramlintide solution at 10 mg / ml is prepared by dissolving pramlintide in the form of a powder purchased from Ambiopharm. This solution is added to a concentrated solution of excipients (m-cresol, mannitol, acetic acid / sodium acetate buffer) so as to obtain the final targeted composition. The final pH is adjusted to 4.0 ± 0.2 by adding NaOH / HCl.
Préparation d'une solution d'insuline humaine A21G 100 UI/mL et de pramlintide 0.6 mg/mL contenant du m-crésol (25 mM), de la glycérine (184 mM), du tampon acide acétique/acétate de sodium (18 mM) et du Tween 20 (8 μΜ) à pH 4.Preparation of a solution of human insulin A21G 100 IU / mL and pramlintide 0.6 mg / mL containing m-cresol (25 mM), glycerin (184 mM), acetic acid / sodium acetate buffer (18 mM ) and Tween 20 (8 μΜ) at pH 4.
[000175] Des solutions concentrées de glycérine et m-crésol sont ajoutées à une solution d'insuline humaine A21G concentrée dans un tampon acide acétique/acétate de sodium à pH 4 (300 UI/mL à pH 4). Une solution de pramlintide (Ambiopharm) concentrée (10 mg/mL à pH 4) et une solution concentrée de Tween 20 sont enfin ajoutées à cette solution concentrée d'insuline humaine A21G et d'excipients de manière à obtenir la composition finale visée. Le pH final est ajusté à la valeur désirée par ajout d'une solution aqueuse de NaOH ou d'HCI. La solution obtenue est limpide et homogène, celle-ci est filtrée sur 0,22 pMm.[000175] Concentrated solutions of glycerin and m-cresol are added to a solution of human insulin A21G concentrated in an acetic acid / sodium acetate buffer at pH 4 (300 IU / ml at pH 4). A concentrated pramlintide solution (Ambiopharm) (10 mg / ml at pH 4) and a concentrated solution of Tween 20 are finally added to this concentrated solution of human insulin A21G and of excipients so as to obtain the final targeted composition. The final pH is adjusted to the desired value by adding an aqueous solution of NaOH or HCl. The solution obtained is clear and homogeneous, it is filtered through 0.22 pMm.
Les compositions préparées ci-dessus sont présentées dans le tableau 1 ci-dessous :The compositions prepared above are presented in Table 1 below:
Tableau 1 : compositions d'insuline et de pramlintideTable 1: insulin and pramlintide compositions
Exemple 3. Etude de compatibilité des insulines prandiales avec le pramlintide à pH 5 acide.Example 3. Compatibility study of prandial insulins with pramlintide at acid pH 5.
Aspect visuel des solutions d'insuline et de pramlintide à pH acide.Visual appearance of insulin and pramlintide solutions at acid pH.
[000176] L'observation est réalisée à température ambiante après 2 à 3 heures de stabilisation de la solution stockée en cartouches.The observation is carried out at room temperature after 2 to 3 hours of stabilization of the solution stored in cartridges.
Le Tableau 2 présente l'aspect visuel de solutions d'insuline et de pramlintide décrites précédemment.Table 2 shows the visual appearance of the insulin and pramlintide solutions described above.
Tableau 2 : Aspect visuel des so utions d'insuline et de pramlintide.Table 2: Visual appearance of insulin and pramlintide solutions.
[000177] Parmi les insulines évaluées, seules l'insuline humaine, l'insuline lispro et l'insuline humaine A21G permettent d'obtenir une formulation homogène et limpide avec le pramlintide à pH 4, attestant de la solubilité des espèces. Les insulines aspart et glulisine ne conviennent pas pour obtenir une formulation limpide avec le pramlintide à pH 4,0.Among the insulins evaluated, only human insulin, insulin lispro and human insulin A21G make it possible to obtain a homogeneous and clear formulation with pramlintide at pH 4, attesting to the solubility of the species. The insulins aspart and glulisine are not suitable for obtaining a clear formulation with pramlintide at pH 4.0.
Exemple 4. Etude du temps de latence de fibrillation.Example 4. Study of the fibrillation latency time.
Principe [000178] La mauvaise stabilité d'un peptide peut conduire à la formation de fibrilles amyloïdes, définies comme des structures macromoléculaires ordonnées. Celles-ci peuvent éventuellement conduire à la formation de gel au sein de l'échantillon.Principle [000178] The poor stability of a peptide can lead to the formation of amyloid fibrils, defined as ordered macromolecular structures. These can eventually lead to gel formation within the sample.
[000179] L'essai de suivi de la fluorescence de la thioflavine T (ThT) est utilisé pour analyser la stabilité physique des formulations. La thioflavine T est une petite molécule sonde ayant une signature de fluorescence caractéristique lorsqu'elle se lie à des fibrilles de type amyloïdes (Naiki et al. (1989) Anal. BioChem. 177, 244-249 ; LeVine (1999) Methods. Enzymol. 309, 274-284).The test for monitoring the fluorescence of thioflavin T (ThT) is used to analyze the physical stability of the formulations. Thioflavin T is a small probe molecule with a characteristic fluorescence signature when it binds to amyloid-like fibrils (Naiki et al. (1989) Anal. BioChem. 177, 244-249; LeVine (1999) Methods. Enzymol . 309, 274-284).
[000180] Cette méthode permet de suivre la formation de fibrilles pour de faibles concentrations de ThT au sein de formulations non diluées. Ce suivi est réalisé dans des conditions de stabilité accélérées : sous agitation et à 37°C.This method makes it possible to follow the formation of fibrils for low concentrations of ThT within undiluted formulations. This monitoring is carried out under accelerated stability conditions: with stirring and at 37 ° C.
Conditions expérimentales [000181] Les échantillons ont été préparés juste avant le début de la mesure. La préparation de chaque composition est décrite dans l'exemple associé. La thioflavine T a été ajoutée dans la composition à partir d'une solution mère concentrée de manière à induire une dilution négligeable de la composition. La concentration de thioflavine T dans la composition est 40 μΜ. Un volume de 150 pL de la composition a été introduit au sein d'un puit d’une plaque 96 puits. Chaque composition a été analysée en triplicat au sein d'une même plaque. La plaque a été scellée par du film transparent afin d'éviter l'évaporation de la composition.Experimental conditions [000181] The samples were prepared just before the start of the measurement. The preparation of each composition is described in the associated example. Thioflavin T was added to the composition from a concentrated stock solution so as to induce a negligible dilution of the composition. The concentration of thioflavin T in the composition is 40 μΜ. A volume of 150 μL of the composition was introduced into a well of a 96-well plate. Each composition was analyzed in triplicate within the same plate. The plate was sealed with transparent film to avoid evaporation of the composition.
[000182] Cette plaque a ensuite été placée dans l’enceinte d'un lecteur de plaques (EnVision 2104 Multilabel, Perkin Elmer). La température est réglée à 37°C, et une agitation latérale de 960 rpm avec 1 mm d'amplitude est imposée.[000182] This plate was then placed in the enclosure of a plate reader (EnVision 2104 Multilabel, Perkin Elmer). The temperature is adjusted to 37 ° C., and lateral agitation of 960 rpm with 1 mm of amplitude is imposed.
[000183] Une lecture de l'intensité de fluorescence dans chaque puit est réalisée avec une longueur d'onde d'excitation de 442 nm, et une longueur d'onde d'émission de 482 10 nm au cours du temps.A reading of the fluorescence intensity in each well is carried out with an excitation wavelength of 442 nm, and an emission wavelength of 482 10 nm over time.
[000184] Le processus de fibrillation se manifeste par une forte augmentation de la fluorescence après un délai appelé temps de latence.The fibrillation process is manifested by a sharp increase in fluorescence after a delay called lag time.
[000185] Pour chaque puit, ce délai a été déterminé graphiquement comme l'intersection entre la ligne de base du signal de fluorescence et la pente de la courbe 15 de fluorescence en fonction du temps déterminée pendant la forte augmentation initiale de fluorescence, tel que montré en Figure 1. La valeur de temps de latence reportée correspond à la moyenne des temps de latence des 3 puits.For each well, this delay was determined graphically as the intersection between the baseline of the fluorescence signal and the slope of the fluorescence curve as a function of the time determined during the large initial increase in fluorescence, such as shown in Figure 1. The reported latency time value corresponds to the average latency time of the 3 wells.
[000186] Les solutions de pramlintide et d'insuline limpides à pH 3,5 et 4,0 de 20 l'exemple précédent sont ensuite soumises au test de fibrillation en présence de ThT.The clear pramlintide and insulin solutions at pH 3.5 and 4.0 of the previous example are then subjected to the fibrillation test in the presence of ThT.
Le temps de latence renseigné dans le Tableau 3 correspond à la moyenne des 3 mesures, l'intervalle d'incertitude correspond à l'écart moyen entre ces 3 résultats.The latency time indicated in Table 3 corresponds to the average of the 3 measurements, the uncertainty interval corresponds to the average difference between these 3 results.
Tableau 3 : Temps de latence des solutions d'insuline et de pramlintide.Table 3: Latency times of insulin and pramlintide solutions.
[000187] De façon inattendue, les formulations contenant l'insuline humaine A21G ont des temps de latence de fibrillation bien supérieurs à ceux des insulines commerciales testées à pH 3,5 ou à pH 4,0, en particulier aux insulines analogues rapides, lispro et aspart.Unexpectedly, the formulations containing the human insulin A21G have fibrillation latency times much higher than those of the commercial insulins tested at pH 3.5 or at pH 4.0, in particular the fast analog insulins, lispro. and aspart.
Exemple 5. Etude du temps de latence de fibrillation en présence de Tween 20Example 5. Study of the fibrillation latency time in the presence of Tween 20
Dans le Tableau 4 sont présentés les temps de latence de solutions d'insuline humaine A21G et de pramlintide à pH 4 en présence de Tween 20.Table 4 shows the latency times of solutions of human insulin A21G and pramlintide at pH 4 in the presence of Tween 20.
Tableau 4 : Temps de latence des solutions d'insuline humaine A21G et de pramlintide en présence de Tween 20.Table 4: Latency time of solutions of human insulin A21G and pramlintide in the presence of Tween 20.
[000188] La stabilité physique est donc améliorée en présence de Tween 20 à 10 pg/mLPhysical stability is therefore improved in the presence of Tween 20 at 10 pg / mL
Exemple 6. Stabilité physique des formulations à 30°C en condition statique [000189] Des cartouches en verre remplies avec 1 mL de composition sont placées dans une étuve maintenue à 30°C. Ces cartouches sont inspectées visuellement afin de détecter l'apparition de particules visibles ou d'une turbidité. Cette inspection est réalisée selon les recommandations de la Pharmacopée Européenne (EP 2.9.20) : les cartouches sont soumises à un éclairage d'au moins 2000 Lux et sont observées face à un fond blanc et un fond noir. Ces résultats sont en accord avec la pharmacopée US (USP <790>).Example 6. Physical Stability of the Formulations at 30 ° C Under Static Conditions [000189] Glass cartridges filled with 1 ml of composition are placed in an oven maintained at 30 ° C. These cartridges are visually inspected for the appearance of visible particles or turbidity. This inspection is carried out according to the recommendations of the European Pharmacopoeia (EP 2.9.20): the cartridges are subjected to lighting of at least 2000 Lux and are observed in front of a white background and a black background. These results are in agreement with the US Pharmacopoeia (USP <790>).
Tableau 5 : Stabilité physique des solutions d'insuline et de Pramlintide à 30°C en condition statique.Table 5: Physical stability of insulin and Pramlintide solutions at 30 ° C under static conditions.
[000190] L'insuline aspart formulée avec le pramlintide à pH 3,5 est moins stable que l'insuline humaine A21G formulée avec pramlintide à pH 3,5 ou 4,0.Insulin aspart formulated with pramlintide at pH 3.5 is less stable than human insulin A21G formulated with pramlintide at pH 3.5 or 4.0.
Exemple 7. Etude de stabilité physique de l'insuline humaine A21G avec l'exénatide et le lixisénatide.Example 7. Study of physical stability of human insulin A21G with exenatide and lixisenatide.
Les formulations A21-6 et A21-7 sont mises en cartouches puis placées à 30°C pendant 4 semaines. Les temps de latence de fibrillation sont mesurés pour des formulations fraîchement préparées et sont présentées dans le tableau 6.Formulations A21-6 and A21-7 are placed in cartridges and then placed at 30 ° C for 4 weeks. The fibrillation latency times are measured for freshly prepared formulations and are presented in Table 6.
Tab eau 6 : Temps de latence et stabilité physique à 30°C en condition statique des solutions d'insuline humaine A21G et d'exénatide ou de lixisénatide.Water tab 6: Latency time and physical stability at 30 ° C under static conditions of solutions of human insulin A21G and exenatide or lixisenatide.
Exemple 8. Stabilité chimique d'une formulation d'insuline humaine A21G et de pramlintide [000191] Toutes les formulations sont à pH 4,0 ou à pH 3,5 et contiennent 100 U/mL d'insuline humaine A21G, 1 mg/mL de pramlintide, 25 mM de m-crésol et 184 mM de glycérine. Les formulations sont stockées dans des cartouches en verre et placées à 30°C en condition statique. L'insuline humaine A21G et le pramlintide sont dosés par chromatographie liquide (HPLC) en phase inverse. Les mesures sont présentées dans le tableau 7.Example 8 Chemical Stability of a Formulation of Human Insulin A21G and of Pramlintide All the formulations are at pH 4.0 or at pH 3.5 and contain 100 U / ml of human insulin A21G, 1 mg / mL pramlintide, 25 mM m-cresol and 184 mM glycerin. The formulations are stored in glass cartridges and placed at 30 ° C in static condition. Human insulin A21G and pramlintide are determined by reverse phase liquid chromatography (HPLC). The measures are presented in Table 7.
Tableau 7 : Evolution des concentrations dd'insuline (a) en U/mL et de pramlintide (b) en mg/mL [000192] Les formulations contenant l'insuline humaine A21G et le pramîintide présentent une bonne stabilité chimique après 4 semaines à 30°C. Les formulations de pramîintide avec les insulines commerciales se dégradent rapidement à pH 4,0, et encore plus vite à pH 3,5.Table 7: Evolution of the concentrations of insulin (a) in U / mL and of pramlintide (b) in mg / mL [000192] The formulations containing human insulin A21G and pramintintide exhibit good chemical stability after 4 weeks at 30 ° C. Pramintide formulations with commercial insulins degrade quickly at pH 4.0, and even faster at pH 3.5.
Exemple 9. Etudes de pharmacocinétique et pharmacodynamie chez le chien [000193] Etude de pharmacocinétique et pharmacodynamie chez le chien de la composition insuline humaine A21G (100 U/mL, c'est-à-dire 3,5 mg/ml) et pramîintide (0,6 mg/mL). La formulation testée est à pH 4,0 et contient 25 mM de m-crésol et 184 mM de glycérine (Formulation A21-8).Example 9. Pharmacokinetic and Pharmacodynamic Studies in Dogs [000193] Pharmacokinetic and Pharmacodynamic Studies in Dogs of the Composition Human Insulin A21G (100 U / mL, ie 3.5 mg / ml) and Pramintintide (0.6 mg / mL). The formulation tested is at pH 4.0 and contains 25 mM of m-cresol and 184 mM of glycerin (Formulation A21-8).
[000194] Quatre animaux mis à jeun depuis 18 heures environ ont été injectés par voie sous-cutanée dans le cou à la dose de 0,2 U/kg d'insuline et 0,12 pg/kg de pramîintide. Dans l'heure précédant l'injection, un ou plusieurs prélèvements sanguins sont réalisés afin de déterminer le niveau basal de glucose, d'insuline et de pramîintide. Des prélèvements sanguins sont ensuite réalisés pendant 5 heures après administration de la formulation. La glycémie est déterminée au moyen d'un glucomètre. Les niveaux d'insuline et de pramîintide dans le plasma sont déterminés par un test ELISA.Four animals fasted for about 18 hours were injected subcutaneously into the neck at a dose of 0.2 U / kg of insulin and 0.12 pg / kg of pramintintide. In the hour preceding the injection, one or more blood samples are taken to determine the basal level of glucose, insulin and pramintintide. Blood samples are then taken for 5 hours after administration of the formulation. Blood sugar is determined using a glucometer. The plasma insulin and praminintide levels are determined by an ELISA test.
[000195] Les paramètres pharmacocinétiques de la formulation A21-8 sont estimés à partir des concentrations plasmatiques d'insuline et de pramîintide corrigées des valeurs basales. Une analyse non compartimentale standard est réalisée à l'aide du logiciel Phoenix WinNonlin (version 7, Certara). Les valeurs des paramètres (moyenne ± écart-type) sont reportées dans les tableaux 8 et 9 ci-dessous :The pharmacokinetic parameters of the formulation A21-8 are estimated from the plasma concentrations of insulin and pramintintide corrected for basal values. A standard non-compartmental analysis is performed using Phoenix WinNonlin software (version 7, Certara). The values of the parameters (mean ± standard deviation) are given in Tables 8 and 9 below:
Tableau 8 : paramètres de PK de l'analogue de l'insuline totaleTable 8: PK parameters of the total insulin analog
Tableau 9 : paramètres de PK du pramîintide [000196] Les profils pharmacocinétiques (PK) moyens de l'insuline totale (carrés) et du pramîintide (triangles) dans le plasma sont présentés dans la Figure 2.Table 9: PK parameters of pramintintide [000196] The mean pharmacokinetic profiles (PK) of total insulin (squares) and of pramintintide (triangles) in plasma are presented in Figure 2.
Les profils de glycémies moyennes exprimées en pourcentages du niveau basal sont représentés dans la Figure 3.The mean blood glucose profiles expressed as percentages of the basal level are shown in Figure 3.
[000197] Il est constaté que le pramlintide et l'insuline humaine A21G ont tous les deux des cinétiques d'absorption prandiales donnant lieu à une activité hypoglycémiante précoce suivie d'un retour à un niveau proche de la glycémie basale après 5 heures post-administration. Ces résultats de pharmacocinétique et de pharmacodynamie indiquent clairement que la Formulation A21-8 est compatible avec une utilisation lors des repas.It is found that pramlintide and human insulin A21G both have kinetics of prandial absorption giving rise to early hypoglycaemic activity followed by a return to a level close to basal glycemia after 5 hours post- administration. These pharmacokinetic and pharmacodynamic results clearly indicate that Formulation A21-8 is compatible with use during meals.
Exemple 10 : Etudes de pharmacocinétique du pramlintide chez le cochon [000198] Etude de pharmacocinétique chez le cochon de la composition insuline humaine A21G (3,5 mg/mL équivalent à 100 U/mL d'insuline) et pramlintide (0,6 mg/mL).EXAMPLE 10 Pharmacokinetic Studies of Pramlintide in Pig [000198] Pharmacokinetic Study in Pig of the Composition Human Insulin A21G (3.5 mg / ml equivalent to 100 U / ml of Insulin) and Pramlintide (0.6 mg / mL).
[000199] Des cochons domestiques d'environ 50 kg, préalablement cathétérisés au niveau de la jugulaire, sont mis à jeun 2,5 heures avant le début de l'expérience. Dans l'heure précédant l'injection d'insuline, 3 prélèvements sanguins sont réalisés afin de déterminer le niveau basal de glucose et d'insuline.Domestic pigs of about 50 kg, previously catheterized at the chin strap, are fasted 2.5 hours before the start of the experiment. In the hour before the insulin injection, 3 blood samples are taken to determine the basal level of glucose and insulin.
[000200] L'injection des formulations d'insuline humaine A21G combinée à du pramlintide (A21-9) ou de pramlintide (PRAM) à la dose de 0,2 U d'insuline/kg et 1,2 pg de pramlintide/kg est réalisée en sous-cutané au niveau du flanc de l'animal à l'aide d'un stylo à insuline (Novo, Sanofi ou Eli Lilly) équipé d'une aiguille 31 G.The injection of formulations of human insulin A21G combined with pramlintide (A21-9) or pramlintide (PRAM) at a dose of 0.2 U of insulin / kg and 1.2 pg of pramlintide / kg is performed subcutaneously on the side of the animal using an insulin pen (Novo, Sanofi or Eli Lilly) fitted with a 31 G needle.
[000201] Afin de déterminer les concentrations plasmatiques en pramlintide, des prélèvements sanguins sont réalisés aux temps suivants : 4, 8, 12, 16, 20, 30, 40, 50, 60, 70, 80, 100, 120, 150 et 180 minutes. Après chaque prélèvement, le cathéter est rincé avec une solution diluée d'héparine.To determine the plasma pramlintide concentrations, blood samples are taken at the following times: 4, 8, 12, 16, 20, 30, 40, 50, 60, 70, 80, 100, 120, 150 and 180 minutes. After each sample, the catheter is rinsed with a dilute solution of heparin.
Résultats de pharmacocinétique de la solution d'insuline humaine A21G et de pramlintide A21-9 et de la solution de pramlintide PRAM chez le cochon [000202] Les résultats de 3 études réalisées sur une même cohorte de cochons ont été mis en commun pour comparer les pharmacocinétiques du pramlintide entre la formulation A21-9 et la formulation PRAM. Les paramètres pharmacocinétiques des formulations A21-9 et PRAM sont estimés à partir des concentrations plasmatiques de pramlintide corrigées des valeurs basales. Une analyse non compartimentale standard est réalisée à l'aide du logiciel Phoenix WinNonlin (version 7, Certara). Les valeurs des paramètres (moyenne ± écart-type) sont reportées dans le tableau ci-après.Pharmacokinetic results of the human insulin A21G solution and pramlintide A21-9 and the pramlintide PRAM solution in pigs [000202] The results of 3 studies carried out on the same cohort of pigs were pooled to compare the pharmacokinetics of pramlintide between formulation A21-9 and formulation PRAM. The pharmacokinetic parameters of formulations A21-9 and PRAM are estimated from the plasma concentrations of pramlintide corrected for basal values. A standard non-compartmental analysis is performed using Phoenix WinNonlin software (version 7, Certara). The values of the parameters (mean ± standard deviation) are given in the table below.
[000203] Avec tmax= temps nécessaire pour observer la concentration plasmatique maximale ; AUCo-3Omin= aire sous la courbe des concentrations plasmatiques en fonction du temps entre 0 et 30 min après injection ; AUCo-t= aire sous la courbe des concentrations plasmatique en fonction du temps entre 0 et la dernière concentration quantifiable après injection [000204] Les résultats de pharmacocinétique du pramlintide obtenus avec les formulations A21-9 et PRAM sont présentés sur la Figure 4. L'analyse de ces profils et des paramètres indique que la combinaison de l'insuline humaine A21G et du pramlintide (formulation A21-9, courbe tracée avec les carrés) conduit à un ralentissement 15 significatif de l'absorption du pramlintide par rapport au pramlintide seul (formulation[000203] With tmax = time necessary to observe the maximum plasma concentration; AUCo-30min = area under the curve of plasma concentrations as a function of time between 0 and 30 min after injection; AUCo-t = area under the curve of plasma concentrations as a function of time between 0 and the last quantifiable concentration after injection [000204] The pharmacokinetics of pramlintide obtained with formulations A21-9 and PRAM are presented in Figure 4. L analysis of these profiles and parameters indicates that the combination of human insulin A21G and pramlintide (formulation A21-9, curve plotted with squares) leads to a significant slowdown in the absorption of pramlintide compared to pramlintide alone (formulation
PRAM, courbe tracée avec les triangles). La formulation A21-9 conduit à un pic plasmatique (tmax) significativement retardé (environ 18 min, p<0,05) et à une exposition plasmatique au pramlintide précoce (AUCo somin) significativement diminuée (environ 43%, p<0,05) par rapport à la formulation PRAM. D'autre part, l'exposition 20 plasmatique au pramlintide totale (AUCo-t) apparaît similaire entre les deux formulations suggérant des biodisponibilités comparables.PRAM, curve drawn with the triangles). The A21-9 formulation leads to a significantly delayed plasma peak (tmax) (approximately 18 min, p <0.05) and to significantly decreased plasma exposure to early pramlintide (AUCo somin) (approximately 43%, p <0.05 ) compared to the PRAM formulation. On the other hand, the plasma exposure to total pramlintide (AUCo-t) appears similar between the two formulations suggesting comparable bioavailability.
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