Procédé de séparation de cellules mobiles, notamment de
spermatozoldes mobiles, ainsi que dispositif pour la
mise en oeuvre de ce procédé."
La présente invention se rapporte à un procédé de séparation de cellules mobiles se trouvant dans un milieu visqueux et, notamment des spermatozoides mobiles;; des autres constituants du sperme éjaculé, ainsi qu'wu dis positif pour la mise en oeuvre de ce procédé."
Depuis quelques années, la recherche médica- le tente d'apporter des solutions aux problèmes posés par la stérilité des couples, Certaines techniques ont permis d'apporter l'espoir à des femmes pour lesquelles, jusqu'à présent, la venue au monde d'un enfant était une hypothèse peu probable.Au premier rang de ces techniques, il faut mentionner l'insémination artificielle qui est de nos jours parfaitement au point0
Très récemment, certains médecins ont nieme réussi à faire naître dans les meilleures conditions pos sibles des enfants issus de mère n'ayant pas ou plus de trompes, après une fécondation "in vitro". Il s'agit là d'une technique qui n'en est encore qu'au stade expérimen- tal, mais qui devrait, ces toutes prochaines années, être tentée à plus grande échelle,
Pour avoir le maximum de chance de succès, que ce soit dans le cas de fécondation "in untero" ou "in vitro", il est nécessaire d'utiliser un sperme qui soit de la meilleure qualité possible, et donc qui possède le plus grand pourcentage possible de spermatozoïdes mobiles.Method for separating mobile cells, especially
mobile sperm, as well as a device for
implementation of this process. "
The present invention relates to a process for the separation of mobile cells located in a viscous medium and, in particular mobile spermatozoa; other constituents of ejaculated sperm, as well as positive for the implementation of this process. "
In recent years, medical research has attempted to provide solutions to the problems posed by the sterility of couples. Certain techniques have brought hope to women for whom, until now, the birth of a child was an unlikely hypothesis. At the forefront of these techniques, we must mention artificial insemination which is nowadays perfectly developed0
Very recently, some doctors have even managed to give birth in the best possible conditions to children from mothers with no or no more fallopian tubes, after "in vitro" fertilization. This is a technique which is still only at the experimental stage, but which should be tried on a larger scale in the next few years,
To have the maximum chance of success, whether in the case of "in untero" or "in vitro" fertilization, it is necessary to use a sperm which is of the best possible quality, and therefore which has the greatest possible percentage of mobile sperm.
A cet effet, on a déjà proposé divers types de traitements du sperme éjaculé, se proposant d'améliorer son "degré d'efficacité", ce qui revient à augmenter la proportion de spermatozoïdes mobiles par rapport aux autres constituants, c'est-à-dire les spermatozoïdes immobiles ou morts, les cellules rondes et le plasma seminal. To this end, various types of treatment of ejaculated sperm have already been proposed, proposing to improve its "degree of effectiveness", which amounts to increasing the proportion of mobile sperm compared to the other constituents, that is to say -to say immobile or dead spermatozoa, round cells and seminal plasma.
La méthode qui est actuellement la plus utilisée dans ce but est la centrifugation. Celle-ci n'est cependant pas sans inconvénient, vu qu'elle est d'une mise en oeuvre peu aisée, et ne donne pas toujours des résultats satisfaisants. The method that is currently the most used for this purpose is centrifugation. However, this is not without drawback, since it is not very easy to implement, and does not always give satisfactory results.
La présente invention se propose de remédier à ces inconvénients en proposant un procédé permettant de séparer les spermatozoïdes mobiles des autres constituants du sperme éjaculé, qui soit d'une mise en oeuvre simple, et permette d'aboutir, en un temps relativement court, à un résultat satisfaisant. The present invention proposes to remedy these drawbacks by proposing a method for separating the mobile sperm from the other constituents of the ejaculated sperm, which is of simple implementation, and makes it possible, in a relatively short time, to a satisfactory result.
A cet effet, le procédé qui fait l'objet de l'invention est caractérisé en ce que l'on remplit d'un milieu aqueux tampon un récipient, notamment tubulaire, divisé en sa partie inférieure en deux compartiments, à savoir un compartiment d'introduction et un compartiment de prélèvement, séparés par une barrière, le compartiement de prélèvement étant nettement plus profond que le compati ment d'introduction et le niveau du milieu tampon dépassant la barrière, on dépose, notamment à l'aide d'une pi- pette le sperme au fond du compartiment d'introduction, en quantité insuffisante pour que son niveau dépasse la barrière, on laisse reposer la préparation ainsi obtenue pour laisser le temps aux spermatozoïdes mobiles de migrer dans le milieu tampon vers le compartiment de prélèvement et de sédimenter dans ce compartiment d'où ils ne peuvent ressortir du fait de la trop grande hauteur de la barrière, puis, on prélève la partie inférieure du compartiment de prélèvement à l'aide d'une pipette. To this end, the process which is the subject of the invention is characterized in that a container, in particular a tubular container, divided in its lower part into two compartments, namely a compartment d, is filled with an aqueous buffer medium. introduction and a sampling compartment, separated by a barrier, the sampling compartment being considerably deeper than the introduction compati ment and the level of the buffer medium exceeding the barrier, is deposited, in particular using a pi - drops the sperm at the bottom of the introduction compartment, in an insufficient quantity for its level to exceed the barrier, the preparation thus obtained is allowed to stand to allow the mobile sperm time to migrate in the buffer medium to the sampling compartment and sediment in this compartment from which they cannot come out due to the excessive height of the barrier, then, the lower part of the sampling compartment is removed using a pipette.
Ce procédé permet d'aboutir à une séparation satisfaisante des spermatozoïdes mobiles en un laps de temps de l'ordre de 3 heures0
Le milieu tampon aqueux peut en fait être quelconque, pour peu qu'il ait un pH voisin de 7, et qu'il contienne du glucose. On peut, de manière satisfaisante, utiliser un milieu tampon renfermant des acides aminés et/ ou des sels minéraux,
Le procédé qui fait l'objet de l'invention est basé sur la différence de densité existant entre le sperme et le milieu tamponp qui fait que le sperme reste au fond au compartiement d'introductionsans risque de mé- lange, et, que seuls les spermatozoïdes mobiles sont susm ceptibles de passer rapidement dans le milieu tampon de par leur propre mouvement de propulsion et de traverser la barrière, pour se trouver au droit du compartiment de prélèvement où ils sédimentent rapidement.This process leads to a satisfactory separation of the mobile spermatozoa in a period of the order of 3 hours0
The aqueous buffer medium can in fact be arbitrary, provided that it has a pH close to 7, and that it contains glucose. It is possible, satisfactorily, to use a buffer medium containing amino acids and / or mineral salts,
The process which is the subject of the invention is based on the difference in density existing between the sperm and the buffer medium which means that the sperm remains at the bottom in the introductory compartment without the risk of mixing, and that only the mobile spermatozoa are liable to pass quickly into the buffer medium by their own propulsion movement and to cross the barrier, to be located to the right of the sampling compartment where they rapidly sediment.
Il est particulièrement important que le com- partiment de prélèvement soit suffisamment profond pour éviter tout risque de retour des spermatozoïdes mobiles vers le compartiment d'introduction0
On a obtenu des résultats satisfaisants en utilisant un compartiment d'introduction ayant une profondeur de 5 mm, et un compartiment de prélèvement ayant une profondeur de 20 ami avec, une injection dans le comm partiment d'introduction, d'une quantité de sperme telle que son niveau reste à environ 2 mm au-dessous de la barw rière.It is particularly important that the collection compartment is deep enough to avoid any risk of return of the mobile sperm to the introduction compartment.
Satisfactory results have been obtained by using an introductory compartment having a depth of 5 mm, and a sampling compartment having a depth of 20 mm with, an injection into the introduction compartment, of such a quantity of sperm that its level remains about 2 mm below the barrier.
Selon une autre caractéristique de l'inven- tion, permettant d'améliorer le taux et la vitesse de séparation, pendant la phase de repos, on injecte dans la préparation un courant d'oxygène et de gaz carbonique. According to another characteristic of the invention, making it possible to improve the rate and the speed of separation, during the rest phase, a stream of oxygen and carbon dioxide is injected into the preparation.
En plus de la lutte contre la stérilité9 le procédé qui fait l'objet de l'invention peut etre appli- que dans divers domaine-s de la recherche pure, notamment pour la recherche d'anticorps anti-spermatozoïdes. In addition to the fight against sterility9, the process which is the subject of the invention can be applied in various fields of pure research, in particular for the search for anti-sperm antibodies.
Ce procédé peut aussi trouver une applica tion dans le domaine vétérinaire, pour améliorer le rendement des élevages. This process can also find an application in the veterinary field, to improve the yield of farms.
L'invention concerne également un dispositif pour la mise en oeuvre du procédé qui a été décrit ci dessus. The invention also relates to a device for implementing the method which has been described above.
Ce dispositif se compose d'un récipient, notamment tubulaireS comportant à sa partie inférieure un compartiment dlintroduction et un compartiment de prélève ment, plus profond que le compartiement d'introduction, ces deux compartiments étant séparés par une barrière0
Selon l'invention, ce dispositif est carac térisé en ce que le compartiment d'introduction a la forme d'un anneau entourant le compartiment de prélèvement.This device consists of a container, in particular tubularS comprising at its lower part an introduction compartment and a withdrawal compartment, deeper than the introduction compartment, these two compartments being separated by a barrier 0
According to the invention, this device is characterized in that the introduction compartment has the shape of a ring surrounding the sampling compartment.
Cette disposition spécifique des deux compar- timents est celle qui s'est révélée la plus favorable pour augmenter au maximum la probabilité pour que les spermato- roides mobiles se sédimentent au droit du compartiment de prélèvement, vers le fond de ce compartiment. This specific arrangement of the two compartments is the one which has proved to be the most favorable for maximizing the probability that mobile sperm will sediment in the area of the sampling compartment, towards the bottom of this compartment.
Pour faciliter l'opération de prélèvement des spermatozoïdes mobiles an fond du compartiment de pré lèvement, opération qui est effectuée- à l'aide d'une pipette de type "Pasteur" selon une caractéristique préfé rentielle de l'invention, le compartiment de prélèvement se rétrécit en forme de une à sa partie inférieure
Selon une autre caractéristique de l'inven- tion, la barrière de séparation des deux compartiments a la forme d'un cylindre et constitue, avec les parois du compartiment de prélèvement, un tube continu à fond conique.To facilitate the operation of collecting mobile sperm at the bottom of the collection compartment, which operation is carried out using a "Pasteur" type pipette according to a preferred characteristic of the invention, the collection compartment narrows in the shape of a at its lower part
According to another characteristic of the invention, the barrier separating the two compartments has the shape of a cylinder and constitutes, with the walls of the sampling compartment, a continuous tube with a conical bottom.
Par ailleurs, ce dispositif peut comporter un bouchon munI, le cas échéant, d'une ouverture permettant l'introduction d'un gaz lors de la phase de repos. Furthermore, this device may include a plug provided, where appropriate, with an opening allowing the introduction of a gas during the rest phase.
Le dispositif qui fait l'objet de l'inven tion peut être conçu en un matériau quelconque, mais, sa forme particulièrement simple permet de concevoir des diso positifs à usage unique en une matière plastique transparente non toxique. The device which is the subject of the invention can be designed in any material, but its particularly simple shape allows the design of disposable devices in a transparent non-toxic plastic.
Les caractéristiques du procédé, ainsi que du dispositif qui font l'objet de l'invention, seront ddw crites plus en détail en se référant aux dessins annexés dans lesquels :
- la figure 1 est une vue en perspective de ce dispositif,
- la figure 2 est une vue en coupe de ce me dispositif,
Selon les figures 1 et 2, le dispositif qui fait l'objet de l'invention se compose d'un récipient tubulaire 1 séparé, en sa partie inférieure, en deux compas timents, à savoir un compartiment d'introduction 2 et un compartiment de prélèvement 3 plus profond que le compas timent d'introduction
Ces deux compartiments sont séparés par une barrière 4.The characteristics of the process, as well as of the device which are the subject of the invention, will be described in more detail with reference to the appended drawings in which:
FIG. 1 is a perspective view of this device,
FIG. 2 is a sectional view of this me device,
According to Figures 1 and 2, the device which is the subject of the invention consists of a tubular container 1 separated, in its lower part, into two compasses, namely an introduction compartment 2 and a compartment for sample 3 deeper than the introduction compass
These two compartments are separated by a barrier 4.
Selon la figure 29 le compartiment d'intro duction 2 a la forme d'un anneau qui entoureS sur toute sa périphérie le compartiment de prélèvement qui est consu titué par un cylindre dont la partie inférieure 5 se rétrécit en forme de c8ne et dont la partie supérieure 4 constitue la barrière de séparation des deux compartiments 2 et 3. According to FIG. 29, the intro duction compartment 2 has the shape of a ring which surrounds, over its entire periphery, the sampling compartment which is formed by a cylinder, the lower part 5 of which narrows in the form of a cone and the part upper 4 constitutes the separation barrier of the two compartments 2 and 3.
Pour assurer l'équilibre du dispositif, les parois latérales 6 du tube 1 se poursuivent au-delà des parois inférieures annulaires 7 du compartiment dyintron diction. To ensure the balance of the device, the side walls 6 of the tube 1 continue beyond the annular lower walls 7 of the dyintron diction compartment.
Le dispositif 1 est par ailleurs muni d'un bouchon 8 comportant un orifice 12 permettant en cours de processus l'introduction d'un gaz, notamment un mélange de gaz carbonique et d'oxygène selon la flèche A. The device 1 is moreover provided with a plug 8 comprising an orifice 12 allowing during the process the introduction of a gas, in particular a mixture of carbon dioxide and oxygen according to arrow A.
Ce dispositif, qui est de préférence en une matière plastique transparente, non toxique, et doit entre jeté après usage, est destiné à la mise en oeuvre d'un procédé de séparation des spermatozoïdes mobiles des autrès constituants du sperme éjaculé. This device, which is preferably made of a transparent, non-toxic plastic material and must be discarded after use, is intended for the implementation of a process for the separation of mobile spermatozoa from the other constituents of ejaculated sperm.
Selon la figure 2, pour la mise en oeuvre de ce procédé, on remplit le tube 1 d'un milieu tampon 9 con tenant du-glucose et, le cas échéant, des. acides aminés et/ou des sels minéraux jusqu'à un niveau dépassant l'ex- trémité supérieure 10 de la barrière 4, puis, on dépose à l'aide d'une pipette le sperme à séparer 11 au fond du compartiment d'introduction 2 de façon que son niveau vienne jusqu'à environ 2 mm en dessous de l'extrémité supérieu- re de la barrière 4, puis, on laisse reposer la préparation ainsi obtenue pendant une période d'environ 3 heures, le cas échéant, en bouchant le tube avec le bouchon 8 et en introduisant un courant dto2ygène et/ou- de gaz carbonique selon la flèche A par l'orifice 12. According to FIG. 2, for the implementation of this method, the tube 1 is filled with a buffer medium 9 containing glucose and, where appropriate,. amino acids and / or mineral salts up to a level exceeding the upper end 10 of the barrier 4, then, using a pipette, the sperm to be separated 11 is deposited at the bottom of the introduction compartment 2 so that its level comes up to approximately 2 mm below the upper end of the barrier 4, then the preparation thus obtained is left to stand for a period of approximately 3 hours, if necessary, plugging the tube with the plug 8 and introducing a flow of oxygen and / or carbon dioxide according to arrow A through the orifice 12.
Pendant ce repos, les spermatozoïdes immobiles ou morts, les cellules rondes et le plasma séminal cons- titutifs du sperme restent au fond du compartiment 2 sans rIsquer de se mélanger avec le milieu tampon 9, tandis que les spermatozoïdes mobiles et eux seuls, sont susceptibles de passer dans le milieu aqueux 9 du fait de leur propre mouvement de propulsion selon la flèche B, et une propor- tion importante d'entre eus est susceptible de passer au dessus de la barrière 4 pour se trouver au droit du cons partiment de prélèvement 3 où ils sédimentent rapidement du fait de la faible viscosité du milieu 9, pour se retrouver à la partie. inférieure 13 de ce compartiment où ils peuvent être prélevés, notamment à l'aide d'une pipette "Pasteur". During this rest, the immobile or dead spermatozoa, the round cells and the seminal plasma constituting the sperm remain at the bottom of compartment 2 without risking mixing with the buffer medium 9, while the mobile spermatozoa and them alone are susceptible to pass into the aqueous medium 9 due to their own propulsion movement according to arrow B, and a significant proportion of them is likely to pass over the barrier 4 to be in line with the sampling part cons 3 where they quickly sediment due to the low viscosity of the medium 9, to end up in the game. lower 13 of this compartment where they can be taken, in particular using a "Pasteur" pipette.
A titre d'exemmle, les résultats les plus satisfaisants ont été obtenus à partir d'un dispositif de dimensions suivantes :
Hauteur totale a du tube 1 : 45 mm
Largeur b du tube 1 : 1-3 mm épaisseur c des parois de ce tube o 1,5 mm
Hauteur d du compartiment de prélèvement 3 : 20 mm
Longueur e de la partie cylindrique de ce tube : 10 me
Hauteur f de la barrière 4 : 5 me Epaisseur g des parois du compartiment de
prélèvement 3 : 0,5 mm
Largeur h de ce compartiment 3 : 6 mm
Bien entendu, ces données ne sont indiquées qu'à titre d'exemple et ne sauraient, en aucun cas9 constituer une limitation de l'invention.By way of example, the most satisfactory results have been obtained from a device of the following dimensions:
Total height a of tube 1: 45 mm
Width b of tube 1: 1-3 mm thickness c of the walls of this tube o 1.5 mm
Height d of sampling compartment 3: 20 mm
Length e of the cylindrical part of this tube: 10 me
Height f of the barrier 4: 5 me Thickness g of the walls of the compartment
sample 3: 0.5 mm
Width h of this compartment 3: 6 mm
Of course, this data is only given by way of example and cannot, in any case, constitute a limitation of the invention.
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| FR8301110AFR2539628B1 (en) | 1983-01-25 | 1983-01-25 | PROCESS FOR SEPARATING MOBILE CELLS, ESPECIALLY MOBILE SPERMATOZOIDS, AND A DEVICE FOR CARRYING OUT SAID METHOD |
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| FR8301110AFR2539628B1 (en) | 1983-01-25 | 1983-01-25 | PROCESS FOR SEPARATING MOBILE CELLS, ESPECIALLY MOBILE SPERMATOZOIDS, AND A DEVICE FOR CARRYING OUT SAID METHOD |
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| ST | Notification of lapse |