DE4124778A1 - METHOD AND ARRANGEMENT FOR ANALYZING AGGLUTINATION REACTIONS - Google Patents
METHOD AND ARRANGEMENT FOR ANALYZING AGGLUTINATION REACTIONSInfo
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Abstract
Description
Translated fromGermanDie Erfindung betrifft ein Verfahren und eine Anordnung zur Analyse von Agglutinationsreaktionen.The invention relates to a method and an arrangement forAnalysis of agglutination reactions.
Agglutinationsreaktionen werden im großen Umfang traditionsgemäß in der Blutgruppenserologie durchgeführt. In letzter Zeit ist auch ein sehr starker Zuwachs an Publikationen zu spezifischen Agglutinationstesten für eine Reihe von Proteinen und anderen Liganden festzustellen. Für diese Teste werden in der Regel Antikörper gegen die zu bestimmende Substanz an speziell präparierte Erythrozyten oder definierte Partikel, sehr häufig Latexpartikel, gebunden. Es gibt eine Vielfalt von Variationsmöglichkeiten beim Einsatz solcher Teste.Agglutination reactions are traditional to a large extentperformed in blood group serology. Lately isalso a very strong increase in publications on specificAgglutination tests for a range of proteins and othersDetermine ligands. Usually for these testsAntibodies against the substance to be determined atprepared erythrocytes or defined particles, very commonLatex particles, bound. There are a variety of variationspossibilities when using such tests.
Die Auswertung der Agglutinationsreaktion erfolgt überwiegend semiquantitativ durch visuelle Beobachtung oder nach Verdünnung wenigstens eines der Reaktanden in Titerstufen.The agglutination reaction is predominantly evaluatedsemi-quantitative by visual observation or after dilutionat least one of the reactants in titer levels.
Versuche zur quantitativen Auswertung von Agglutinationsreaktionen unter Nutzung von Bildauswerteverfahren, von speziellen Verfahren zur Messung der Verteilung von freien Reaktanden und Agglutinaten in Mikrotiterplatten sind aufwendig und bedürfen einer großen Zahl von Kontrolluntersuchungen, da besonders im Falle von schwach ausgebildeten Agglutinaten die Differenzierung zur Nichtagglutination schwierig ist. Spezielle Automaten zur Blutgruppenbestimmung sind aufwendig und sehr teuer. Hinzu kommt, daß besonders in der Blutgruppenserologie spezielle Erythrozyteneigenschaften, beispielsweise im Coombs-Test, erst nach mehrfacher Waschung der Erythrozyten bestimmbar sind. Diese Waschschritte sind zeitaufwendig und umständlich und erlauben keine einheitliche Probenhandhabung im Gesamtprozeß der Analyse. Es ist seit langem bekannt, daß Erythrozyten und andere Zellen in geeigneten Medien durch Molekularsiebgele von niedermolekularen Begleitstoffen getrennt werden können.Experiments for the quantitative evaluation ofAgglutination reactions usingImage evaluation method, from special methods for measuring theDistribution of free reactants and agglutinates inMicrotiter plates are complex and require a large numberof check-ups, especially in the case of weaktrained agglutinates differentiation toNon-agglutination is difficult. Special machines forBlood group determination is complex and very expensive. In additioncomes that special, especially in blood group serologyErythrocyte properties, for example in the Coombs test, firstcan be determined after multiple erythrocyte washing. TheseWashing steps are time-consuming and cumbersome and allowno uniform sample handling in the overall process of the analysis.It has long been known that erythrocytes and other cellsin suitable media using molecular sieve gels fromlow molecular accompanying substances can be separated.
Darüberhinaus ist bekannt, daß Agglutinate von Erythrozyten bestimmte Agarosegele nur schwer passieren können. Durch visuelle Besichtigung solcher Ölanordnungen, die als geschlossene Zentrifugenröhrchen ausgebildet sind, lassen sich Agglutinationsreaktionen mit Erythrozyten semiquantitativ beurteilen.In addition, it is known that agglutinates of erythrocytescertain agarose gels are difficult to pass. Byvisual inspection of such oil arrangements, which asclosed centrifuge tubes are formed, canAgglutination reactions with erythrocytes semi-quantitativejudge.
Der Erfindung liegt die Aufgabe zugrunde ein kostengünstiges, praktikables, breit einsetzbares und automatisierbares Analysesystem für Agglutinationsreaktionen zu schaffen, welches die sichere Analyse von Agglutinationen auch nach der essentiellen Entfernung von störenden Begleitstoffen semiquantitativ und quantitativ erlaubt.The invention has for its object an inexpensive,practical, widely applicable and automatableTo create analysis system for agglutination reactions, whichthe reliable analysis of agglutinations even after theessential removal of disruptive accompanying substancesallowed semi-quantitative and quantitative.
Die Aufgabe wird erfindungsgemäß dadurch gelöst, daß die Reaktionspartner in eine Mikrosäule eingebracht werden, daß die Agglutinationsreaktion in der Mikrosäule erfolgt, daß nach der Agglutinationsreaktion eine Trennung von Agglutinaten und nicht verbrauchten Reaktionspartnern durch Stofftrennung nach Partikelgröße unter Krafteinwirkung erfolgt, daß die nichtagglutinierten Partner unter der Mikrosäule aufgefangen werden, und daß der Verbrauch von Reaktionspartnern im Durchlauf bestimmt wird. Die Stofftrennung nach Partikelgröße kann entweder durch Molekularsiebgele oder durch Filtration, entweder über speziellen Filtern oder durch Filterhilfen erfolgen. Zur Bewegung des zu trennenden Stoffgutes können die Gravitationskraft, Zentrifugalkraft, hydrostatischer Druck oder Luftdruck eingesetzt werden. Ebenso kann ein elektrisches oder magnetisches Feld zur Trennung eingesetzt werden.The object is achieved in that theReactants are introduced into a micro column that theAgglutination reaction in the micro column occurs after theAgglutination reaction is a separation of agglutinates and notspent reaction partners by separating themParticle size under the influence of force takes place that thenon-agglutinated partner caught under the micro columnand that the consumption of reactants in the runis determined. The separation of substances by particle size caneither by molecular sieve gels or by filtration,either through special filters or through filter aidsrespectively. To move the material to be separated, theGravitational force, centrifugal force, hydrostatic pressure orAir pressure can be used. Likewise, an electrical ormagnetic field can be used for separation.
Der Einsatz des Verfahrens wird erweitert dadurch, daß zumindest ein Reaktionsparter mit einer Markersubstanz fest verbunden wird. Solche Markersubstanzen können radioaktive Isotope, Enzyme, Lumineszensmarker, Fluoreszensmarker oder biospezifische Liganden mit hoher Affinität zu Substanzen sein, die sich leicht analytisch nachweisen lassen. Markierung mit magnetischen Partikeln führt zu einer weiteren Möglichkeit der Erweiterung des Einsatzes des Systems. Die Kopplung von Reaktionspartnern an Latex- oder andere Partikel erschließt den Einsatz der bekannten Partikelagglutinationstechniken. Die Messung der natürlichen Eigenschaften von Teilnehmern, beispielsweise der Trübung der Lösung von Erythrozytensuspensionen, sichert den Einsatz in der Blutgruppenserologie und bildet die Grundlage für universelle Blutgruppenautomaten.The use of the method is expanded by the fact thatat least one reaction partner with a marker substanceis connected. Such marker substances can be radioactiveIsotopes, enzymes, luminescent markers, fluorescent markers orbiospecific ligands with high affinity for substances,which are easy to prove analytically. Mark withmagnetic particles leads to another possibility of Expansion of the use of the system. The coupling ofReaction partners on latex or other particles opens up theUse of known particle agglutination techniques. TheMeasuring the natural properties of participants,for example the turbidity of the solution ofErythrocyte suspensions, ensures use in theBlood group serology and forms the basis for universalBlood group machines.
Werden vor der eigentlichen Agglutinationsreaktion in der Säule Abtrennungsschritte, die die Prinzipien der Chromatographie nutzen, vorgesehen, so kann die Spezifität der Technik stark erweitert werden. Mit Molekularsiebgelen können niedermolekulare Begleitstoffe abgetrennt werden. Der Einsatz von spezifischen Immunoliganden erlaubt hochspezifisch nahezu jeden beliebigen Begleitstoff zu entfernen. Auch andere Affinitätsgele und unspezifische Chromatographiegele können zur Entfernung von Begleitstoffen vor der Agglutination genutzt werden.Be in the column before the actual agglutination reactionSeparation steps that follow the principles of chromatographyuse, provided the specificity of the technique can be strongbe expanded. Molecular sieve gels can be used in low molecular weightAccompanying substances are separated. The use of specificImmunoligands allow almost any highly specificRemove accompanying substances. Other affinity gels andnonspecific chromatographic gels can be used to removeAccompanying substances can be used before agglutination.
Die zur Durchführung des Verfahrens vorgesehene Anordnung trennt in einer Mikrosäule einen eingangsseitgen Teil von einem ausgangsseitigen Teil durch ein Filterelement. Paßfähig zur Mikrosäule ist ein lösbares Auffanggefäß vorgesehen, in dem der Durchlauf aufgenommen wird. In diesem Auffanggefäß kann die Analyse der Agglutinationsreaktion entweder direkt durch optische Messungen der Eigenschaften der markierten oder unmarkierten Reaktanten, oder nach Zwischenschaltung eines Hilfsschrittes erfolgen. Die schichtweise Anordnung verschiedener Chromatographiematerialien in der Mikrospule erlaubt die Realisierung der Vorabtrennung verschiedener Begleitstoffe. Eine Erweiterung des Eingangsteils der Mikrosäule gestattet das Mischen der Reaktanden. Die Anordnung der Einzelsäulen und Auffanggefäße in bestimmten Reihen und Matrixanordnungen erlaubt einen hohen Probendurchsatz und die Automatisierung des Verfahrens. Besonders günstig ist die paßfähige Anordnung der Mikrosäulen zu Mikrotiterplatten, da für viele analytische Fragen sofort kommerziell erhältliche Mikrotiterplatten-Reader eingesetzt werden können.The arrangement provided for carrying out the method separatesin a micro column a part of one on the input sideoutput part through a filter element. Suitable forA removable receptacle is provided in the micro column, in which thePass is recorded. In this container theAnalysis of the agglutination reaction either directlyoptical measurements of the properties of the marked orunlabeled reactants, or after interposing aAuxiliary step. The layered arrangementvarious chromatography materials in the microcoilallows the pre-separation of different onesAccompanying substances. An extension of the entrance part of the micro columnallows the reactants to be mixed. The arrangement of theIndividual columns and receptacles in certain rows andMatrix arrangements allow a high sample throughput andAutomation of the process. It is particularly cheapfit arrangement of the micro columns to microtiter plates, because formany analytical questions immediately commercially availableMicrotiter plate readers can be used.
Die gesamte Anordnung kann in Zentrifugenrotoren eingesetzt werden, wenn die Stofftrennung durch Zentrifugalkraft erfolgt. Durch die Anbringung geeigneter Verbindungsstücke zu Pipetten und Multipipetten kann die Stofftrennung vorteilhaft auch durch Flüssigkeitsdruck oder Luftdruck erfolgen.The entire arrangement can be used in centrifuge rotorsif the separation is done by centrifugal force.By attaching suitable connectors to pipettesand multipipettes can also advantageously be separated byLiquid pressure or air pressure.
Die Erfindung wird durch 9 Ausführungsbeispiele erläutert. Es zeigtThe invention is illustrated by 9 exemplary embodiments.It shows
Fig. 1 Mikrosäulen und AuffanggefäßeFig. 1 micro columns and collecting vessels
Fig. 1a Mikrosäule mit FilterFig. 1a micro column with filter
Fig. 1b Mikrosäule mit Filterelement und ChromatographiematerialFig. 1b micro column with filter element and chromatography material
Fig. 1c Mikrosäule mit Filterelement und zwei verschiedenen ChromatographiematerialienFig. 1c micro column with filter element and two different chromatography materials
Fig. 1d Mikrosäule mit Filter und einem ChromatographiematerialFig. 1d micro column with filter and a chromatography material
Fig. 2 Pluralität von Mikrosäulen (Mikrosäulenkammer), Auffangefäßen (Mikrotiterplatte) und Pipetten (Mehrkanalpipetten)Fig. 2 Plurality of microcolumns (microcolumn chamber), collecting vessels (microtiter plate) and pipettes (multichannel pipettes)
DieFig. 1a zeigt die Anordnung zur Analyse von Agglutinationsreaktionen bestehend aus einer Mikrosäule (1), die aus einem eingansseitigem Teil (2) und einem ausgangsseitigem Teil (3), getrennt durch ein Filter (4), zusammengesetzt ist. Der eingangsseitige Teil enthält eine Erweiterung (5) zum Einbringen und Mischen der Reaktanden und einen Säulenteil (6). Der Säulendurchlauf (7) wird in einem Auffanggefäß (8) aufgefangen.Fig. 1a shows the arrangement for analyzing agglutination reactions consisting of a microcolumn (1 ), which is composed of an input-side part (2 ) and an output-side part (3 ), separated by a filter (4 ). The part on the input side contains an extension (5 ) for introducing and mixing the reactants and a column part (6 ). The column pass (7 ) is collected in a collecting vessel (8 ).
DieFig. 1b zeigt die Anordnung mit einem Filterelement (9) und die Füllung der Säule mit einem Chromatographiematerial (10).Fig. 1b shows the arrangement with a filter element (9 ) and the filling of the column with a chromatography material (10 ).
DieFig. 1c zeigt die Anordnung mit einem Filterelement und zwei verschiedenen Chromatographiematerialien (11 und12).Fig. 1c shows the assembly having a filter element and two different chromatographic materials(11 and12).
DieFig. 1d zeigt die Anordnung mit einem Filter (4) und einem Chromatographiematerial (10).Fig. 1d shows the arrangement with a filter (4 ) and a chromatography material (10 ).
Fig. 2 zeigt die Pluralität der Anordnung der Mikrosäulen (1) in Mikrosäulenkammern (13), der Auffanggefäße (8) in Mikrotiterplatten (14) und der Pipettenspitzen in Mehrkanalpipetten (15).Fig. 2 shows the plurality of the arrangement of the micro-columns (1 ) in micro-column chambers (13 ), the collecting vessels (8 ) in microtiter plates (14 ) and the pipette tips in multi-channel pipettes (15 ).
Jeder Säulenteil (6) der Säulen der Mikrosäulenkammer (13), der mit einem Filter (4) mit einer Porengröße von 10 µm vom ausgangsseitigen Teil getrennt ist, wird mit 20 µl -Antiserum (Anti-A, Anti-B oder Anti-A+D) gefüllt. In das Antiserum werden 5 µl einer 5%igen Erythrozytensuspension in 0,9% NaCl pipettiert und durch Heben und Senken des Pipettenkolbens gemischt. Die Mikrosätllenkammer wird 10-20 min bei Raumtemperatur inkubiert und danach 30 min bei 250 U/min über einer Mikrotiterplatte (14), die in jedem Loch 100 µl 0,9% NaCl enthält, zentrifugiert. Die Agglutinate verbleiben auf der Filteroberfläche, die nichtagglutinierten Erythrozyten sedimentieren aus dem ausgangsseitigen Teil in die Mikrotiterplatte. Die Mikrotiterplatte wird auf einem horizontal rotierenden Schüttler geschüttelt und in einem Reader bei 405 nm ausgewertet.Each column part (6 ) of the columns of the micro-column chamber (13 ), which is separated from the outlet-side part by a filter (4 ) with a pore size of 10 µm, is treated with 20 µl antiserum (Anti-A, Anti-B or Anti-A + D) filled. 5 µl of a 5% erythrocyte suspension in 0.9% NaCl are pipetted into the antiserum and mixed by lifting and lowering the pipette piston. The microseat chamber is incubated for 10-20 min at room temperature and then centrifuged for 30 min at 250 rpm over a microtiter plate (14 ) which contains 100 µl 0.9% NaCl in each well. The agglutinates remain on the filter surface, the non-agglutinated erythrocytes sediment from the outlet part into the microtiter plate. The microtiter plate is shaken on a horizontally rotating shaker and evaluated in a reader at 405 nm.
Die in der Mikrotiterplatte suspendierten nicht-agglutinierten Erythrozyten weisen die folgenden Extinktionen auf:The non-agglutinated ones suspended in the microtiter plateErythrocytes have the following extinctions:
Reaktion von A-Erythrozyten
Reaction of A erythrocytes
Jeder Säulenteil (6) der Säulen der Mikrosäulenkammer (13) wird mit 30 µ in 0,9 % NaCl gequollenem Sephadex G 200 als Chromatographiematerial (10) gefüllt, indem 150 µl einer 20%igen Gelsuspension in die Säulen gefüllt werden und bei 500 U/min für 5 min zentrifugiert werden.Each column part (6 ) of the columns of the micro-column chamber (13 ) is filled with 30 μ in Sephadex G 200 swollen in 0.9% NaCl as chromatography material (10 ) by filling 150 μl of a 20% gel suspension into the columns and at 500 U centrifuged for 5 min / min.
Danach werden 20 µl einer Antiserumverdünnung auf die Geloberfläche pipettiert. Dazu werden 5 µl der 5%igen Erythrozytensuspension pipettiert. Alle Pipettierschritte (Gelsuspension, Antiserumverdünnung, Erythrozytensuspension) werden mit Mehrkanalpipetten (8-, 12- oder 96-fach) (15) vorgenommen.Then 20 µl of an antiserum dilution are pipetted onto the gel surface. 5 µl of the 5% erythrocyte suspension are pipetted into this. All pipetting steps (gel suspension, antiserum dilution, erythrocyte suspension) are carried out with multichannel pipettes (8, 12 or 96-fold) (15 ).
Nach 10 min Inkubation bei Raumtemperatur werden die Säulenkammern bei 250 U/min für 10 min über einer Mikrotiterplatte zentrifugiert und damit der Säulenauslauf jeder Säule in einem Loch der Mikrotiterplatte, die 100 µl 0,9%iges NaCl pro Loch enthält, aufgefangen.After 10 min incubation at room temperature, theColumn chambers at 250 rpm for 10 min above oneCentrifuge microtiter plate and thus the column outlet everyoneColumn in a hole in the microtiter plate containing 100 µl 0.9%Contains NaCl per hole.
Die Erytrozytenagglutinate befinden sich nach Zentrifugation auf dem Gel bzw. in den oberen Gelanteilen. Die nicht-agglutinierten Erythrozyten sedimentieren in die Mikrotiterplatte. Die Mikrotiterplatte wird nun mittels eines Schüttlers geschüttelt und danach bei 405 nm in einem Mikrotiterplattenreader oder einem äquivalenten Photometer gemessen.The erytrocyte agglutinates are on after centrifugationthe gel or in the upper parts of the gel. The non-agglutinated Erythrocytes sediment into the microtiter plate.The microtiter plate is now shaken using a shakershaken and then at 405 nm in oneMicrotiter plate reader or an equivalent photometermeasured.
Die in der Mikrotiterplatte suspendierten nicht-agglutinierten Erythrozyten weisen die folgenden Extinktionen auf:The non-agglutinated ones suspended in the microtiter plateErythrocytes have the following extinctions:
Reaktion von A-Erythrozyten
Reaction of A erythrocytes
Jeder Säulenteil (6) der Säulen der Mikrosäulenkammer (13) wird mit 30 µl in 0,9% NaCl gequollenem Biogel 200 gefüllt, wie in Anwendungsbeispiel 7 beschrieben.Each column part (6 ) of the columns of the micro column chamber (13 ) is filled with 30 μl of Biogel 200 swollen in 0.9% NaCl, as described in application example 7.
Es werden 20 µl Coombs-Serum (Anti-Human-Globulin) auf die Geloberfläche pipettiert. 5 µl der ungewaschenen sensibilisierten Erythrozyten aus Vollblut werden aus einer 5%igen Suspension ebenfalls auf die Geloberfläche pipettiert. Die Säulenkammern werden 15-30 min bei Raumtemperatur inkubiert und danach wie in Anwendungsbeispiel 7 zentrifugiert und photometrisch gemessen.20 µl of Coombs serum (anti-human globulin) are applied to thePipetted gel surface. 5 µl of the unwashedsensitized erythrocytes from whole blood are made from a5% suspension also pipetted onto the gel surface.The column chambers are incubated for 15-30 min at room temperatureand then centrifuged as in Application Example 7 andmeasured photometrically.
Die mit Coombs-Serum agglutinierten Erythrozyten befinden sich nach der Zentrifugation als scharfe Bande auf der Geloberfläche oder in der oberen Hälfte des Geles. Die nicht-agglutinierten Erythrozyten sedimentieren in die Mikrotiterplatte.The red blood cells agglutinated with Coombs serum are locatedafter centrifugation as a sharp band on the gel surfaceor in the top half of the gel. The non-agglutinatedErythrocytes sediment into the microtiter plate.
Die in der Mikrotiterplatte suspendierten nicht-agglutinierten Erythrozyten weisen die folgenden Extinktionen auf:The non-agglutinated ones suspended in the microtiter plateErythrocytes have the following extinctions:
Reaktion von Coombs-positiven 0-Erythrozyten
Reaction from Coombs positive 0 erythrocytes
Jeder Säulenteil (6) der Säulen der Mikrosäulenkammer (13) wird mit 30 µl gequollenem Sephadex G200 superfine, wie in Anwendungsbeispiel 7 beschrieben, gefüllt. Auf die Geloberfläche werden 20 µl der zu untersuchenden Serumprobe pipettiert. Dazu werden 5 µl Streptolysin-0-markierte Latexpartikel (1 : 2 in 0,9% NaCl verdünnt, aus Rheumajet ASO, biokit) pipettiert. Nach Inkubation für 10 min bei Raumtemperatur werden die Mikrosäulenkammern wie in Anwendungsbeispiel 6 über einer Mikrotiterplatte zentrifugiert. Die agglutinierten Latexpartikel bleiben auf der Geloberfläche oder in den oberen Gelteilen liegen, die nichtagglutinierten Partikel sedimentieren in die Mikrotiterplatte. Die Mikrotiterplatte wird geschüttelt und in einem Reader bei 380 nm ausgewertet.Each column part (6 ) of the columns of the micro column chamber (13 ) is filled with 30 μl of swollen Sephadex G200 superfine, as described in application example 7. 20 µl of the serum sample to be examined are pipetted onto the gel surface. For this purpose, 5 µl streptolysin-0-labeled latex particles (diluted 1: 2 in 0.9% NaCl, from Rheumajet ASO, biokit) are pipetted. After incubation for 10 min at room temperature, the microcolumn chambers are centrifuged as in application example 6 over a microtiter plate. The agglutinated latex particles remain on the gel surface or in the upper parts of the gel, the non-agglutinated particles sediment into the microtiter plate. The microtiter plate is shaken and evaluated in a reader at 380 nm.
Die in der Mikrotiterplatte suspendierten nichtagglutinierten Latexpartikel weisen die folgenden Extinktionen auf:The non-agglutinated ones suspended in the microtiter plateLatex particles have the following extinctions:
BezugszeichenlisteReference list
1 Mikrosäule
2 eingangsseitiger Teil der Mikrosäule
3 ausgangsseitiger Teil der Mikrosäule
4 Filter
5 Erweiterung im eingangsseitigen Teil
6 Säulenteil der Mikrosäule
7 Säulendurchlauf
8 Auffanggefäß
9 Filterelement
10 Chromatographiematerial a
11 Chromatographiematerial b
12 Chromatographiematerial c
13 Mikrosäulenkammer
14 Mikrotiterplatte
15 Mehrkanalpipette1 micro column
2 part of the micro column on the input side
3 output part of the micro column
4 filters
5 Extension in the entrance part
6 column part of the micro column
7 column run
8 collecting vessel
9 filter element
10 Chromatography material a
11 Chromatography material b
12 Chromatography material c
13 micro column chamber
14 microtiter plate
15 multi-channel pipette
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Translated fromGermanPriority Applications (3)
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Cited By (10)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| FR2702050A1 (en)* | 1993-02-26 | 1994-09-02 | Boy Inst Jacques | Blood grouping method using immunoenzymatic reactions |
| NL1006680C2 (en)* | 1997-03-04 | 1998-09-07 | Alexander Adrianus Moen | Method for detecting the presence of an immunologically reactive molecule in a sample. |
| WO1999007471A1 (en)* | 1997-08-07 | 1999-02-18 | Roche Diagnostics Gmbh | System for providing biological materials |
| WO2001055727A1 (en)* | 2000-01-31 | 2001-08-02 | Emory University | Immunological assay system and method |
| WO2003047756A3 (en)* | 2001-12-04 | 2004-02-19 | Lutz Eichacker | Device and method for processing biological or chemical substances or substance mixtures thereof |
| WO2006005593A1 (en)* | 2004-07-12 | 2006-01-19 | Holger Kiesewetter | Method for the simple and rapid detection of cells and biomolecules by means of paramagnetic particles |
| DE102006002258A1 (en)* | 2006-01-17 | 2007-07-26 | Siemens Ag | Module for the preparation of a biological sample, biochip set and use of the module |
| EP1947461A3 (en)* | 2006-11-23 | 2008-07-30 | OMX GmbH | Method for quantitative comparison of two or more proteins |
| WO2013083619A1 (en)* | 2011-12-06 | 2013-06-13 | Universite Libre De Bruxelles | Method and device for assaying an antigen present on erythrocytes or an antibody binding to an antigen present on erythrocytes |
| CN105652014A (en)* | 2015-12-31 | 2016-06-08 | 合肥天生物技术研究所 | Preparation method of detection card for direct antiglobulin test |
Families Citing this family (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| FR2719122B1 (en)* | 1994-04-22 | 1996-07-12 | Scibiex Sarl | Device and method for immunological analysis. |
| DE19601346A1 (en)* | 1996-01-16 | 1997-07-17 | Bernd Dr Pevec | Analysis method based on immune response |
| DE69934449T2 (en)* | 1998-03-12 | 2007-09-27 | Miltenyi Biotech Gmbh | Microcolumn system for magnetic separation |
Family Cites Families (7)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US4425438A (en)* | 1981-03-13 | 1984-01-10 | Bauman David S | Assay method and device |
| US5073484A (en)* | 1982-03-09 | 1991-12-17 | Bio-Metric Systems, Inc. | Quantitative analysis apparatus and method |
| WO1986007463A1 (en)* | 1985-06-03 | 1986-12-18 | American National Red Cross | Microtiter - surface - flocculation assay for antigen or antibody screening |
| DE3717211A1 (en)* | 1987-05-22 | 1988-12-01 | Diagen Inst Molekularbio | DEVICE AND METHOD FOR SEPARATING AND CLEANING MOLECULES |
| WO1989000290A1 (en)* | 1987-07-02 | 1989-01-12 | In Vitro Technologies, Inc. | Capillary device for immunoassay of multiple analytes |
| JPH087215B2 (en)* | 1987-08-24 | 1996-01-29 | シュティフツング・フュア・ディアグノスティッシュ・フォルシュンク | Method for detecting antigen and / or antibody and test kit for detection |
| CA2055095C (en)* | 1990-11-09 | 2003-05-13 | Johnna B. Hawk | Column agglutination assay and device |
- 1991
- 1991-07-26DEDE19914124778patent/DE4124778A1/ennot_activeWithdrawn
- 1992
- 1992-07-25WOPCT/DE1992/000601patent/WO1993003374A2/enactiveApplication Filing
- 1992-07-25AUAU23745/92Apatent/AU2374592A/ennot_activeAbandoned
Cited By (18)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| FR2702050A1 (en)* | 1993-02-26 | 1994-09-02 | Boy Inst Jacques | Blood grouping method using immunoenzymatic reactions |
| NL1006680C2 (en)* | 1997-03-04 | 1998-09-07 | Alexander Adrianus Moen | Method for detecting the presence of an immunologically reactive molecule in a sample. |
| WO1998039656A1 (en)* | 1997-03-04 | 1998-09-11 | Alexander Adrianus Moen | Method for detecting the presence of an immunologically reactive molecule in a sample |
| US7537935B2 (en) | 1997-08-07 | 2009-05-26 | Roche Molecular Systems, Inc. | System for providing biological materials |
| WO1999007471A1 (en)* | 1997-08-07 | 1999-02-18 | Roche Diagnostics Gmbh | System for providing biological materials |
| US6669910B1 (en) | 1997-08-07 | 2003-12-30 | Roche Diagnostics Gmbh | System for providing biological materials |
| WO2001055727A1 (en)* | 2000-01-31 | 2001-08-02 | Emory University | Immunological assay system and method |
| US7189357B2 (en) | 2000-01-31 | 2007-03-13 | Emory University | Immunological assay system and method |
| WO2003047756A3 (en)* | 2001-12-04 | 2004-02-19 | Lutz Eichacker | Device and method for processing biological or chemical substances or substance mixtures thereof |
| WO2006005593A1 (en)* | 2004-07-12 | 2006-01-19 | Holger Kiesewetter | Method for the simple and rapid detection of cells and biomolecules by means of paramagnetic particles |
| DE102006002258A1 (en)* | 2006-01-17 | 2007-07-26 | Siemens Ag | Module for the preparation of a biological sample, biochip set and use of the module |
| DE102006002258B4 (en)* | 2006-01-17 | 2008-08-21 | Siemens Ag | Module for the preparation of a biological sample, biochip set and use of the module |
| US8771609B2 (en) | 2006-01-17 | 2014-07-08 | Siemens Aktiengesellschaft | Module for processing a biological sample, biochip kit, and use of the module |
| EP1947461A3 (en)* | 2006-11-23 | 2008-07-30 | OMX GmbH | Method for quantitative comparison of two or more proteins |
| WO2013083619A1 (en)* | 2011-12-06 | 2013-06-13 | Universite Libre De Bruxelles | Method and device for assaying an antigen present on erythrocytes or an antibody binding to an antigen present on erythrocytes |
| CN104081209A (en)* | 2011-12-06 | 2014-10-01 | 布鲁塞尔大学 | Method and device for assaying an antigen present on erythrocytes or an antibody binding to an antigen present on erythrocytes |
| US10241120B2 (en) | 2011-12-06 | 2019-03-26 | Universite Libre De Bruxelles | Method and device for assaying an antigen present on erythrocytes or an antibody binding to an antigen present on erythrocytes |
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