DE102011083595A1 - Inhibition of the effect of interleukin 1 beta for the treatment of endometriosis - Google Patents

Abstract

Translated fromGerman

Die vorliegende Erfindung betrifft die Behandlung der Endometriose mit chemischen und biologischen Substanzen und diese enthaltende Arzneimittel die die biologische Wirkung von IL-1β verringern und/oder verhindern.The present invention relates to the treatment of endometriosis with chemical and biological substances and medicaments containing them which reduce and / or prevent the biological action of IL-1β.

Description

Translated fromGerman

Die vorliegende Erfindung betrifft die Behandlung und Vorbeugung der Endometriose mit chemischen und biologischen Substanzen und diese enthaltende Arzneimittel die die biologische Wirkung von Interleukin 1 beta (IL-1β) verringern und/oder verhindern.The present invention relates to the treatment and prevention of endometriosis with chemical and biological substances and pharmaceutical compositions containing them which reduce and / or prevent the biological effect ofinterleukin 1 beta (IL-1β).

Endometriose ist eine Krankheit bei der Endometrium außerhalb des Uterus auftritt. Von dieser Krankheit sind hauptsächlich Frauen im gebärfähigen Alter betroffen. Dieses ektopische (außerhalb der ursprünglichen Lokalisation) Endometrium unterliegt ebenso wie das eutopische (normale Lokalisation im Uterus) Endometrium dem Einfluss der Sexualsteroide und damit den zyklusbedingten Umbauvorgängen (Proliferation, sekretorische Aktivität). An Endometriose leiden 10–20 % der Frauen im reproduktiven Alter. Kernsymptome der Endometriose sind chronische Unterleibsschmerzen, Dysmenorrhoe, Dyspareunie, Dysurie, Blutungsstörungen und Unfruchtbarkeit. Die Symptome treten zumeist kombiniert auf. Es wird vermutet, dass die Läsionen durch retrograde Menstruation über den Eileiter in den Peritonealraum gelangen und sich dann dort einnisten. Medikamentöse Ansätze zur Behandlung der Endometriose umfassen zur Zeit die Gabe von GnRH-Agonisten, Androgenen, Aromataseinhibitoren, Antigestagenen oder oraler Kontrazeptiva. Allerdings sind diese Therapien nicht bei allen Patientinnen wirksam und häufig mit Nebenwirkungen assoziiert. Um dieses Problem zu lösen wurden weitere Behandlungsansätze erforscht. Es konnte dabei gezeigt werden, dass die Inhibition der Wirkung von IL-1β eine wirksame Therapie der Endometriose ermöglicht.Endometriosis is a disease in which endometrium occurs outside the uterus. This disease mainly affects women of childbearing age. This ectopic (outside the original localization) endometrium, like the eutopic (normal location in the uterus) endometrium, is subject to the influence of sex steroids and thus to cycle-related remodeling (proliferation, secretory activity). Endometriosis affects 10-20% of women of reproductive age. The core symptoms of endometriosis are chronic abdominal pain, dysmenorrhea, dyspareunia, dysuria, bleeding disorders and infertility. The symptoms are mostly combined. It is thought that the lesions reach the peritoneal space via the fallopian tube through retrograde menstruation and then settle there. Drug approaches to the treatment of endometriosis currently include the administration of GnRH agonists, androgens, aromatase inhibitors, antigestagens or oral contraceptives. However, these therapies are not effective in all patients and are often associated with side effects. In order to solve this problem further treatment approaches were explored. It could be shown that the inhibition of the effect of IL-1β allows an effective therapy of endometriosis.

IL-1β ist ein Zytokin das als Vorläuferprotein mit 266 Aminosäuren und einer Molekülmasse von 30,74 kDa nicht ausschließlich, aber insbesondere von Leukozyten nach deren Stimulation gebildet wird. Das noch biologisch inaktive Vorläuferprotein wird durch verschiedene Enzyme insbesondere durch Caspase 1 gespalten, wodurch das biologisch aktive 153 Aminosäuren lange aktive IL-1β gebildet wird. Das aktive IL-1β bindet an den Interleukin 1 Rezeptor (IL-1R), der aus zwei Untereinheiten besteht. Dem Interleukin Rezeptor Typ 1 (IL1R1) und dem Interleukin 1 Rezeptor Typ 2, wobei der IL1R1 nach Bindung von IL-1β an IL1R1 und IL1R2 eine intrazelluläre Signalkaskade auslöst, die unter anderem zu einer Aktivierung der Transkriptionsfaktoren AP1 und NF-kB führt und damit wesentlich für die inflamatorische Aktivierung von Zellen verantwortlich ist. Auf diesem Weg vermittelt IL-1β eine Vielzahl von biologischen Prozessen, vor allem durch die Induktion von weiteren inflamatorischen Mediatoren, wie z.B. Interleukin 6, Interleukin 8, Corticotrophin und Prostraglandin E2 (PDE2).IL-1β is a cytokine which is formed as a precursor protein with 266 amino acids and a molecular weight of 30.74 kDa not only, but especially of leukocytes after their stimulation. The still biologically inactive precursor protein is cleaved by various enzymes, inparticular caspase 1, to form the biologically active 153 amino acid active IL-1β. The active IL-1β binds to theinterleukin 1 receptor (IL-1R), which consists of two subunits. The interleukin receptor type 1 (IL1R1) and theinterleukin 1receptor type 2, the IL1R1 after binding of IL-1β to IL1R1 and IL1R2 triggers an intracellular signaling cascade, which among other things leads to an activation of the transcription factors AP1 and NF-kB and thus is responsible for the inflamatory activation of cells. In this way, IL-1β mediates a variety of biological processes, primarily by the induction of other inflamatory mediators, such as e.g. Interleukin 6, Interleukin 8, Corticotrophin and Prostraglandin E2 (PDE2).

IL-1β ist bei Endometriosepatientinnen in der peritonealen Flüssigkeit vermehrt vorzufinden (Oku et al. Human Reproduction 2004). Die Konzentration von IL-1β korreliert dabei positiv mit den Hauptsymtomen der Endometriose, dem peritonealen Schmerz und der Infertilität (Akoum et al. Fertil Steril 2008). IL-1β vermittelt in stromalen Zellen des Endometriums die Expression des Enzyms Cox2, was zu einer vermehrten Produktion von PGE2 führt, einer der Mediatoren von Schmerz (Wu et al. Journal of Clinical Endocrinology and Metabolism 2004) und ein Wachstumsfaktor des Endometriums. IL-1β steigert außerdem die Angiogenese und Adhäsion von Gewebe. Im Peritoneum und in endometrialen Läsionen wirkt es daher als Wachstumsfaktor für das fehlplazierte endometriale Gewebe.IL-1β is increasingly found in endometriosis patients in the peritoneal fluid ( Oku et al. Human Reproduction 2004 ). The concentration of IL-1β correlates positively with the main symptoms of endometriosis, peritoneal pain and infertility ( Akoum et al. Fertil Sterile 2008 ). IL-1β mediates expression of the enzyme Cox2 in stromal cells of the endometrium, leading to increased production of PGE2, one of the mediators of pain ( Wu et al. Journal of Clinical Endocrinology and Metabolism 2004 ) and a growth factor of the endometrium. IL-1β also enhances angiogenesis and adhesion of tissue. In the peritoneum and in endometrial lesions, it therefore acts as a growth factor for the misplaced endometrial tissue.

WO 2005/023193 nennt Methoden zur Behandlung der Endometriose unter Verabreichung von Stoffen die Angiogenese, Entzündungen oder Matrix Metalloproteinase Expression hemmen. Dort ist u.a. Kineret^® (Anakinra) – welches zur Behandlung Rheumatoider Arthritis in einer subkutanen Standard Dosis of 100 mg/Tag geeignet ist – genannt. Keine experimentellen Daten die eine Wirksamkeit bei der Behandlung der Endometriose bestätigen sind dort genannt. WO 2005/023193 cites methods for treating endometriosis by administering substances that inhibit angiogenesis, inflammation or matrix metalloproteinase expression. There is (anakinra) and others Kineret^® - containing 100 mg / day is suitable for treating rheumatoid arthritis in a subcutaneous dose of standard - called. No experimental data confirming efficacy in the treatment of endometriosis are mentioned there.

Wenn die Wirkung von IL-1β unterbunden wird, entweder durch Neutralisation von IL-1β mittels neutralisierender Antikörper, oder durch die Inhibition des IL-1R z.B. durch synthetische Interleukin 1 Rezeptor Antagonisten oder funktionsblockierende Antikörper oder durch die Inhibition der Signalweiterleitung am zytoplasmatischen Teil des Interleukin 1 Rezeptors wird die Entstehung und das Wachstum und von endometrialen Läsionen verringert.When the effect of IL-1β is suppressed, either by neutralization of IL-1β by neutralizing antibody, or by inhibition of IL-1R, e.g. synthetic interleukin-1 receptor antagonists or function-blocking antibodies, or inhibition of signal transduction at the cytoplasmic portion of the interleukin-1 receptor, reduce the development and growth of endometrial lesions.

In vivo gelang der Nachweis, dass die Abwesenheit von IL-1β und die Inhibition des IL-1R im Vergleich zur Kontrollgruppe zu einer signifikanten Reduktion der durchschnittlichen Läsionsgrößen führt.In vivo, it was shown that the absence of IL-1β and the inhibition of IL-1R lead to a significant reduction of the average lesion size compared to the control group.

Entsprechend stellt die Neutralisation des IL-1β oder die Inhibition des IL-1R eine Möglichkeit zur Therapie der Endometriose dar.Accordingly, neutralization of IL-1β or inhibition of IL-1R is one way to treat endometriosis.

Gegenstand der vorliegenden Erfindung ist der Einsatz von Antikörpern oder von Antikörperfragmenten gegen IL-1β oder gegen den IL-1R oder von rekombinanten Proteinen die IL-1β oder den IL-1R binden zur Behandlung und/oder Prophylaxe der Endometriose.The present invention is the use of antibodies or antibody fragments against IL-1β or against the IL-1R or recombinant proteins which bind IL-1β or IL-1R for the treatment and / or prophylaxis of endometriosis.

Weiterer Gegenstand der vorliegenden Erfindung sind Antikörper oder Antikörperfragmente gegen IL-1β oder gegen den IL-1R oder von rekombinanten Proteinen die IL-1β oder den IL-1R binden zur Verwendung in einem Verfahren zur Behandlung und/oder Prophylaxe der Endometriose.Another object of the present invention are antibodies or antibody fragments against IL-1β or against the IL-1R or of recombinant proteins which bind IL-1β or IL-1R for use in a method for the treatment and / or prophylaxis of endometriosis.

Gegenstand der vorliegenden Erfindung ist auch die Verwendung von Antikörpern oder eines Antikörperfragments gegen IL-1β oder gegen den IL-1R oder von rekombinanten Proteinen die IL-1β oder den IL-1R binden zur Herstellung eines Arzneimittels zur Behandlung und/oder Prophylaxe der Endometriose. The present invention also provides the use of antibodies or an antibody fragment against IL-1β or against the IL-1R or recombinant proteins which bind IL-1β or IL-1R for the manufacture of a medicament for the treatment and / or prophylaxis of endometriosis.

Ebenfalls Gegenstand der vorliegenden Erfindung ist ein Verfahren zur Behandlung und/oder Prophylaxe der Endometriose unter Verwendung von Antikörpern oder eines Antikörperfragments gegen IL-1β oder gegen den IL-1R oder von rekombinanten Proteinen die IL-1β oder den IL-1R binden.Likewise provided by the present invention is a method for the treatment and / or prophylaxis of endometriosis using antibodies or an antibody fragment against IL-1β or against the IL-1R or recombinant proteins which bind IL-1β or IL-1R.

Gegenstand der vorliegenden Erfindung sind weiterhin Arzneimittel, enthaltend mindestens einen Antikörper oder eine Antikörperfragment gegen IL-1β oder gegen den IL-1R oder enthaltend mindestens ein rekombinantes Protein, das IL-1β oder den IL-1R bindet in Kombination mit einen oder mehreren weiteren Wirkstoffen (z.B. Estrogenrezeptorantagonsisten (einschließlich Antiöstrogenen, SERM und SERD), Gestagene, Antigestagene (einschließlich SPRM), Aromataseinhibitoren oder GnRH-Analoga) zur Behandlung und/oder Prophylaxe der zuvor genannten Erkrankungen.The present invention furthermore relates to medicaments comprising at least one antibody or an antibody fragment against IL-1β or against the IL-1R or containing at least one recombinant protein which binds IL-1β or the IL-1R in combination with one or more further active compounds (eg, estrogen receptor antagonists (including antiestrogens, SERM and SERD), progestins, antigestagens (including SPRM), aromatase inhibitors or GnRH analogs) for the treatment and / or prophylaxis of the aforementioned disorders.

Dabei kommen als Estrogenrezeptorantagonsisten beispielsweise die folgenden Verbindungen in Betracht: Fulvestrant, Raloxifene, Tamoxifene, Toremifene, Arzoxifene, Lasofoxifene, Ospemifene, Sivifene, Bazedoxifene, Afimoxifene, Enclomiphene, Fispemifene, Acolbifene, Droloxifene, Centchromane oder LevormeloxifeneSuitable estrogen receptor antagonists are, for example, the following compounds: fulvestrant, raloxifene, tamoxifen, toremifene, arzoxifene, lasofoxifene, ospemifene, sivifene, bazedoxifene, afimoxifene, enclomiphene, fispemifene, acolbifene, droloxifene, centchromane or levormeloxifene

Als Gestagene geeignet sind insbesondere: Allylestrenol, Chlormadinonacetat, Cyproteronacetat, Desogestrel, Dienogest, Drospirenon, Dydrogesteron, Etonogestrel, Ethynodiol, Gestoden, Levonorgestrel, Lynestrenol, Medrogeston, Medroxyprogesteron, Megestrolazetat, Nomegestrol, Norethindron, Norethisteron, Norethynodrel, Norgestimat, Norgestrel, Quingestron oder Trimegeston.Particularly suitable as progestogens are: allylestrenol, chlormadinone acetate, cyproterone acetate, desogestrel, dienogest, drospirenone, dydrogesterone, etonogestrel, ethynodiol, gestodene, levonorgestrel, lynestrenol, medrogestone, medroxyprogesterone, megestrol acetate, nomegestrol, norethindrone, norethynode, norgestimate, norgestrel, quingestrone or trimegestone.

Geeignete Aromataseinhibitoren sind beispielsweise: Anastrozol (Arimidex^®), Exemestan (Aromasin^®), Fadrozol (Afema^®), Formestan (Lentaron^®), Letrozol (Femara^®), Pentrozol oder Vorozol (Rivizor^®).Suitable aromatase inhibitors include: anastrozole (Arimidex^®), exemestane (Aromasin^®), fadrozole (AFEMA^®), Formestane (Lentaron^®), letrozole (Femara^®), pentrozole or vorozole (Rivizor^®).

Geeignete Antigestagene sind beispielsweise Mifepriston, Lonaprisan oder Asoprisnil.Suitable antigestagens are, for example, mifepristone, lonaprisan or asoprisnil.

Der Antikörper bzw. das Antikörperfragment gegen IL-1β oder den IL-1R und das IL-1β oder den IL-1R bindende rekombinante Protein wirken dabei neutralisierend, funktionsblockierend oder inhibierend auf die Aktivierung des IL-1R.The antibody or the antibody fragment against IL-1β or the IL-1R and the IL-1β or the IL-1R binding recombinant protein act neutralizing, functionally blocking or inhibiting the activation of the IL-1R.

Ein Antikörper, Antikörperfragment oder rekombinantes Protein das den IL-1R bindet wird als funktionsblockierend oder inhibierend bezeichnet, wenn der IL-1R eine mindestens um 20% reduzierte intrazelluläre Aktivität zeigt während IL-1b in unmittelbarer Nähe vorhanden ist, verglichen mit der intrazellulären Aktivität des IL-1R bei Abwesenheit des Antikörpers, Antikörperfragments oder rekombinanten Proteins.An antibody, antibody fragment or recombinant protein that binds the IL-1R is said to function block or inhibit when the IL-1R exhibits at least a 20% reduced intracellular activity while IL-1b is present in close proximity compared to the intracellular activity of the IL-1R in the absence of the antibody, antibody fragment or recombinant protein.

Ein Antikörper, Antikörperfragment oder rekombinantes Protein das IL-1b bindet wird als neutralisierend oder funktionsblockierend oder inhibierend bezeichnet, wenn der IL-1R eine mindestens um 20% reduzierte intrazelluläre Aktivität zeigt während das gebundene IL-1b in unmittelbarer Nähe vorhanden ist, verglichen mit der intrazellulären Aktivität des IL-1R bei Abwesenheit des Antikörpers, Antikörperfragments oder rekombinanten ProteinsAn antibody, antibody fragment or recombinant protein that binds IL-1b is said to be neutralizing or function blocking or inhibiting if the IL-1R shows at least a 20% reduced intracellular activity while the bound IL-1b is present in close proximity compared to the intracellular activity of the IL-1R in the absence of the antibody, antibody fragment or recombinant protein

Die Begriffe "Antikörper", "Antikörperfragment", "Antikörper gegen IL-1β oder IL-1R" und "Antikörperfragment gegen IL-1β oder IL-1R" entsprechen auch den Ausführungen inUS 2009/0181019 A1 (Methods for the treatment of gout; Erfinder: Alan M. Solinger; Anmeldenummer: 12/338,957; Anmeldedatum: 18. Dezember 2008), Absätze [0063]–[0065], und vereinzelt auch bis [0162]. Diese Antikörper und Antikörperfragmente können wie in US 2009/0181019 A1, Absätze [0066]–[0162] beschrieben, hergestellt werden. Ein Beispiel für einen derartigen Antikörper ist Gevokizumab. Gevokizumab (Laborcode = XOMA 52) ist ein Antikörper mit einer Light Chain variablen Region mit der Seq ID No 5 und einer Heavy-Chain variablen Region der Seq ID No 6 entsprechend US 2009/0181019 A1 (Seite 33). Ebenfalls in Frage kommende Antikörper sind Antikörper oder Antikörperfragmente die mit Gevokizumab um die Bindung an IL-1β konkurrieren (vergl. Definition in US 2009/0181019 A1 {z.B. Seite 4 [0029] am Ende}).The terms "antibody", "antibody fragment", "antibody to IL-1β or IL-1R" and "antibody fragment to IL-1β or IL-1R" also correspond to the statements in US 2009/0181019 A1 (Methods for the treatment of gout, Inventor: Alan M. Solinger, application number: 12 / 338,957, filing date: December 18, 2008), paragraphs [0063] - [0065], and occasionally also to [0162]. These antibodies and antibody fragments can be prepared as described in US 2009/0181019 A1, paragraphs [0066] - [0162]. An example of such an antibody is gevokizumab. Gevokizumab (laboratory code = XOMA 52) is an antibody having a light chain variable region with Seq ID No 5 and a heavy chain variable region ofSeq ID No 6 according to US 2009/0181019 A1 (page 33). Also contemplated antibodies are antibodies or antibody fragments that compete with gevokizumab for binding to IL-1β (see definition in US 2009/0181019 A1 (eg, page 4 at the end}).

Weitere Beispiele für in Frage kommende Antikörper gegen IL-1β sind AAL-160, Canakinumab und LY-2189102.Further examples of candidate antibodies against IL-1β are AAL-160, canakinumab and LY-2189102.

AAL-160 ist inUS 2009/0232803 A1 (Antibodies to Human IL-1BETA; Erfinder: Hermann Gram, Franco E. Di Padova; Anmeldenummer: 12/351,007; Anmeldedatum: 9. Januar 2009), Seite 1, Absatz [0005] bzw. in dessen deutschem Äquivalent (DE 601 24 863 T3 Seite 2/23 Absatz [0005]) definiert als ein IL-1β bindendes Molekül, das eine Antigenbindungsspezifität für ein antigenes Epitop von reifem humanem IL-1β aufweist, das eine Schleife umfasst, die die Reste Gly 22, Pro 23, Tyr 24 und Glu 25 enthält, und das zur Hemmung der Bindung von IL-1β an dessen Rezeptor fähig ist und wobei das IL-1β bindende Molekül eine Antigenbindungsstelle umfasst, die zumindest eine variable Domäne der schweren Kette des Immunoglobulins (VH) umfasst, die in Folge die hypervariablen Regionen CDR1, CDR2 und CDR3 umfasst, wie dies in SEQ ID Nr. 1 gezeigt ist, das heißt die CDR1 weist die Aminosäuresequenz Ser-Tyr-Trp-Ile-Gly auf, die CDR2 weist die Aminosäuresequenz Ile-Ile-Tyr-Pro-Ser-Asp-Ser-Asp-Thr-Arg-Tyr-Ser-Pro-Ser-Phe-Gln-Gly auf, und die CDR3 weist die Aminosäuresequenz Tyr-Thr-Asn-Trp-Asp-Ala-Phe-Asp-Ile auf und wobei das IL-1β bindende Molekül eine Antigenbindungsstelle umfasst, die mindestens eine variable Domäne der leichten Kette des Immunglobulins (VL) umfasst, die in Folge die hypervariablen Regionen CDR1', CDR2' und CDR3' umfasst, wie dies in SEQ ID Nr. 2 gezeigt ist, das heißt die CDR1' weist die Aminosäuresequenz Arg-Ala-Ser-Gln-Ser-Val-Ser-Ser-Tyr-Leu-Ala auf, die CDR2' weist die Aminosäuresequenz Asp-Ala-Ser-Asn-Arg-Ala-Thr auf und die CDR3' weist die Aminosäuresequenz Gln-Gln-Arg-Ser-Asn-Trp-Met-Phe-Pro auf. Seq ID Nr. 1 und Nr. 2 sind in DE 601 24 863 T3 Seite 11/23 bzw. 12/23 genannt. Verfahren zur Herstellung von zu AAL vergleichbaren Antikörpern sind in Beispiel 1 der o.g. Anmeldung offenbart (Abätze [0099 ff]).AAL-160 is in US 2009/0232803 A1 (Antibodies to Human IL-1BETA inventors: Hermann Gram, Franco E. Di Padova, application number: 12 / 351,007, date of application: 9 January 2009),page 1, paragraph [0005] or in its German equivalent ( DE 601 24 863T3 Page 2/23, paragraph [0005]) defined as an IL-1β binding molecule having an antigen binding specificity for an antigenic epitope of mature human IL-1β comprising a loop containing the residues Gly 22, Pro 23, Tyr 24 and Glu 25, which is capable of inhibiting the binding of IL-1β to its receptor and wherein the IL-1β binding molecule comprises an antigen binding site comprising at least one immunoglobulin heavy chain (VH) heavy chain variable domain, which in sequence comprises the hypervariable regions CDR1, CDR2 and CDR3 as shown in SEQ ID NO: 1, that is, the CDR1 has the amino acid sequence Ser-Tyr-Trp-Ile-Gly, the CDR2 has the amino acid sequence Ile-Ile -Tyr-Pro-Ser-Asp-Ser-Asp-Thr-Arg-Tyr-Ser-Pro-Ser-Phe-Gln-Gly, and the CDR3 has the amino acid sequence Tyr-Thr-Asn-Trp-Asp-Ala. Phe-Asp-Ile and wherein the IL-1β binding molecule comprises an antigen binding site comprising at least one immunoglobulin light chain variable domain (VL) comprising, in order, the hypervariable regions CDR1 ', CDR2' and CDR3 ', such as this is shown in SEQ ID NO: 2, that is, the CDR1 'has the amino acid sequence Arg-Ala-Ser-Gln-Ser-Val-Ser-Ser-Tyr-Leu-Ala, the CDR2' has the amino acid sequence Asp-Ala -Ser-Asn-Arg-Ala-Thr and the CDR3 'has the amino acid sequence Gln-Gln-Arg-Ser-Asn-Trp-Met-Phe-Pro. Seq ID No. 1 and No. 2 are mentioned in DE 601 24 863 T3 pages 11/23 and 12/23, respectively. Methods for the preparation of antibodies comparable to AAL are disclosed in Example 1 of the abovementioned application (paragraphs [0099 ff]).

Canakinumab (Markenname ILARIS, Laborkode: ACZ885) ist beispielsweise Gegenstand folgender PublikationenEP 1313769 (=WO 02/16436; =DE 60134148): Dhimolea, Eugen (2010)."Canakinumab". mAbs 2 (1): 3–13;Lachmann, HJ; Kone-Paut I, Kuemmerle-Deschner JB et al. "Use of canakinumab in the cryopyrin-associated periodic syndrome". New Engl J Med 360 (23): 2416–25;Yasothan U, Kar S "Therapies for COPD". Nat Rev Drug Discov 7 (4): 285.For example, canakinumab (trade name ILARIS, laboratory code: ACZ885) is the subject of the following publications EP 1313769 (= WO 02/16436 ; = DE 60134148 ): Dhimolea, Eugene (2010). "Canakinumab". mAbs 2 (1): 3-13 ; Lachman, HJ; Kone-Paut I, Kuemmerle-Deschner JB et al. "Use of canakinumab in the cryopyrin-associated periodic syndrome". New Engl J Med 360 (23): 2416-25 ; Yasothan U, Kar S "Therapies for COPD". Nat Rev Drug Discov 7 (4): 285 ,

Ein Beispiel für einen in Frage kommende Antikörper gegen den IL-1R ist AMG-108.An example of a candidate antibody to IL-1R is AMG-108.

Der Begriff "IL-1β oder IL-1R bindendes rekombinantes Protein" beschreibt eine beliebige Aminosäuresequenz von mindestens 15 Aminosäuren, die auch natürlich vorkommen kann aber mit technischen Verfahren hergestellt wurde und keine strukturelle Ähnlichkeit der Molekülstruktur mit einem Fragment eines Antikörpers besitzt, aber in der Lage ist IL-1b oder den IL-1R zu binden. Die Beispiele für solche rekombinanten Proteine sind Anakinra und Rilonacept. Die Herstellung weiterer derartiger Proteine ist dem Fachmann bekannt.The term "IL-1β or IL-1R binding recombinant protein" describes any amino acid sequence of at least 15 amino acids, which may be naturally occurring but has been prepared by engineering techniques and has no structural similarity to the molecular structure with a fragment of an antibody, but in U.S. Pat Able to bind IL-1b or the IL-1R. The examples of such recombinant proteins are anakinra and rilonacept. The preparation of further such proteins is known to the person skilled in the art.

Zur Behandlung der Endometriose besonders geeignet sind die Antikörper gegen IL-1β: Gevokizumab, AAL-160, Canakinumab, LY-2189102, AMG-108 und die rekombinanten Proteine Anakinra und Rilonacept.Particularly suitable for the treatment of endometriosis are the antibodies against IL-1β: gevokizumab, AAL-160, canakinumab, LY-2189102, AMG-108 and the recombinant proteins anakinra and rilonacept.

Die folgenden Beispiele dienen der Erläuterung der Erfindung ohne diese in irgend einer Weise zu beschränken.The following examples serve to illustrate the invention without limiting it in any way.

Beispiel 1: Die Abwesenheit der Wirkung von Interleukin 1 beta verringert die Läsionsgröße im Endometriose MausmodellExample 1: The absence of the effect ofinterleukin 1 beta reduces the lesion size in endometriosis mouse model

Die durch IL-1β gesteigerte Angiogenese und Adhäsion von endometrialen Läsionen ist eine zentraler Mechanismus der Entstehung und Persistenz der Endometriose Als Nachweis für die therapeutische Wirkung der Inhibition der Wirkung des IL-1β wird folgender Versuch gesehen, bei dem Endometriose entweder in normalen Mäusen induziert wird, oder in Mäusen, die genetisch so verändert sind, dass sie kein aktives Interleukin 1 beta produzieren.The IL-1β-enhanced angiogenesis and adhesion of endometrial lesions is a central mechanism of endometriosis development and persistence. The evidence for the therapeutic effect of inhibiting the action of IL-1β is the following experiment in which endometriosis is induced either in normal mice , or in mice that are genetically engineered to produce noactive interleukin 1 beta.

Die Uteri von acht bis zehn Wochen alten C57BL/6J Wildtyp und IL-1β defizienten (IL-1b-KO) Weibchen die sich im Östrus befinden werden entfernt und entlang der Tuben geöffnet. Aus dem geöffneten auf das Myometrium gelegten Uterus wurden 3,14mm² Stanzbiopsien gewonnen. Diese Stanzbiopsien wurden in jeweils syngene Empfängermäuse transplantiert, wobei jeweils 6 Biopsien von innen an das Peritoneum der Empfängermäuse genäht wurden. Stanzbiopsien von IL1b-KO Uteri werden in IL1b-KO Mäuse und Wildtyputeri in Wildtypmäuse transplantiert. 28 Tage nach der Transplantation werden alle Tiere getötet, laparotomiert und die Läsionsgröße photografisch vermessen. Während des gesamten Versuchs bekommen die Tiere Altromin-Trockenfutter und Wasser ad libitum. Die Auswertung der Versuchsergebnisse erfolgte durch Vergleich der durchschnittlichen Läsionsgröße pro Tier bei Wildtyptieren mit der durchschnittlichen Läsionsgröße pro Tier bei IL1b-KO Tieren.The uteri of eight to ten week old C57BL / 6J wild-type and IL-1β deficient (IL-1b-KO) females that are in the oestrus are removed and opened along the tubes. From the opened uterus placed on the myometrium, 3.14mm² punch biopsies were obtained. These punch biopsies were transplanted into syngeneic recipient mice, with 6 biopsies each being sutured from the inside to the peritoneum of the recipient mice. Punch biopsies of IL1b-KO uteri are transplanted into IL1b-KO mice and wild-type uteri in wild-type mice. 28 days after the transplantation, all animals are killed, laparotomized and the size of the lesion is measured photographically. Throughout the experiment, the animals get Altromin dry food and water ad libitum. The evaluation of the test results was carried out by comparing the average lesion size per animal in wild-type animals with the average lesion size per animal in IL1b-KO animals.

Die Verhinderung der biologischen Wirkung von IL-1β führt zu einer signifikanten Reduktion des Wachstums der Läsionen verglichen mit Tieren mit biologisch aktivem IL-1β (). Dargestellt ist die durchschnittliche Läsionsgröße pro Tier 28 Tage nach der Transplantation der Uterusbiopsien. Der Stern (*) indiziert einen signifikanten Unterschied (p<0,05 im two tailed students T test) der durchschnittlichen Läsionsgrößen zwischen den Gruppen nach Tag 28 des Versuchs.The prevention of the biological effect of IL-1β leads to a significant reduction of the growth of the lesions compared to animals with biologically active IL-1β ( ). The average lesion size per animal is shown 28 days after the transplantation of the uterine biopsies. The asterisk (*) indicates a significant difference (p <0.05 in the two tailed students T test) in average lesion sizes between groups after day 28 of the experiment.

Beispiel 2: Die Interleukin 1 Receptor Antagonisierung verringert die Läsionsgröße und die Expression von IL-6 und TNF alpha in endometriotischen Läsionen in vivoExample 2:Interleukin 1 receptor antagonization reduces lesion size and expression of IL-6 and TNF alpha in endometriotic lesions in vivo

Die gesteigerte Expression der von IL-1β induzierten Zytokinen und Chemokinen ist ein zentraler Mechanismus der lokalen Entzündung in endometriotischen Läsionen, die als Konsequenz Schmerzen bei der Endometriose erzeugt. Mit dem folgenden Versuch können wir nachweisen, dass die Inhibition der Wirkung von IL-1β die lokale Entzündung in den endometriotischen Läsionen verringert wird.Increased expression of IL-1β-induced cytokines and chemokines is a central mechanism of local inflammation in endometriotic lesions, which in turn produces pain in endometriosis. In the following experiment, we can demonstrate that inhibition of the action of IL-1β reduces local inflammation in endometriotic lesions.

Die Uteri von acht bis zehn Wochen alte Balb/c Weibchen die sich im Estrus befinden werden entfernt und entlang der Tuben geöffnet. Aus dem geöffneten auf das Myometrium gelegten Uterus werden 3,14mm² Stanzbiopsien gewonnen. Diese Stanzbiopsien wurden in syngene Empfängermäuse transplantiert, wobei jeweils 6 Biopsien von innen an das Peritoneum genäht werden. Die Tiere werden einen Tag nach der Laparotomie und danach täglich für 7 Tage jeweils morgens und abends mit 10 mg/kg des humanen Interleukine 1 Rezeptor Antagonisten Anakinra oder PBS behandelt. Zehn Tage nach Behandlungsbeginn werden alle Tiere getötet, laparotomiert, die Läsionsgröße gemessen und die Läsionen entfernt. Die Läsionen werden homogenisiert und die RNS der Läsionszellen isoliert. Nach Generierung von DNS aus der RNS wird mittel Taqman PCR die Expression der Zytokine TNF alpha, Interleukin 6, Interferon gamma und der Chemokine CXCL1 und CXCL5 bestimmt. Während des gesamten Versuchs bekamen die Tiere Altromin-Trockenfutter und Wasser ad libitum The uteri of eight to ten-week-old Balb / c females that are in the Estrus are removed and opened along the tubes. 3.14mm² punch biopsies are obtained from the open uterus placed on the myometrium. These punch biopsies were transplanted into syngeneic recipient mice, with 6 biopsies each being sutured from the inside to the peritoneum. The animals are treated one day after the laparotomy and then daily for 7 days in the morning and evening with 10 mg / kg of thehuman interleukin 1 receptor antagonist anakinra or PBS. Ten days after the start of treatment, all animals are killed, laparotomized, the lesion size is measured and the lesions are removed. The lesions are homogenized and the RNA of the lesion cells isolated. Following generation of DNA from the RNA, the expression of the cytokines TNF alpha,interleukin 6, interferon gamma and the chemokines CXCL1 and CXCL5 is determined by means of Taqman PCR. Throughout the experiment, the animals were given Altromin dry food and water ad libitum

Die Verhinderung der biologischen Wirkung von IL-1β führt schon an Tag 10 nach Behandlungsbegin zu einer Reduktion der Läsionsgröße (). In endometrialen Läsionen kommt es dabei zu einer signifikant verringerten Expression der Zytokine TNF alpha und IL-6 und der Chemokine CXCL1 und CXCL5 verglichen mit der Expression in Läsionen aus nicht mit Interleukine 1 Rezeptor Antagonisten behandelten Tieren (). Dargestellt ist in die absolute Größe der einzelnen Läsionen in behandelten vs. unbehandelten Gruppen und die Expression der indizierten Gene in Läsionen 10 Tage nach Behandlungsbeginn relative zu der Genexpression in Läsionen von Tieren die nicht mit Interleukine 1 Rezeptor Antagonisten behandelt wurden.The prevention of the biological effect of IL-1β already leads to a reduction of the lesion size on day 10 after initiation of treatment ( ). In endometrial lesions, there is a significantly reduced expression of the cytokines TNF alpha and IL-6 and the chemokines CXCL1 and CXCL5 compared to the expression in lesions from animals not treated withinterleukin 1 receptor antagonists ( ). Is shown in the absolute size of each lesion treated in vs. untreated groups and the expression of the indicated genes in lesions 10 days after initiation of treatment relative to the gene expression in lesions of animals not treated withinterleukin 1 receptor antagonists.

Verzeichnis der Abbildungen:List of pictures:

: durchschnittliche Läsionsgröße pro Tier nach 28 Tagen : average lesion size per animal after 28 days

: Läsionsgröße : Lesion size

: Relative Genexpression in Läsionen von anakinrabehandelten und kontrollbehandelten Tieren : Relative gene expression in lesions of anakinra-treated and control-treated animals

ZITATE ENTHALTEN IN DER BESCHREIBUNG QUOTES INCLUDE IN THE DESCRIPTION

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Claims (5)

Translated fromGerman

Antikörper, Antikörperfragment oder rekombinantes Protein gegen IL-1β oder IL-1R zur Anwendung bei der Behandlung oder Vorbeugung der Endometriose.Antibody, antibody fragment or recombinant protein against IL-1β or IL-1R for use in the treatment or prevention of endometriosis.Antikörper gemäß Anspruch 1, nämlich Gevokizumab, AAL-160, Canakinumab, LY-2189102 oder AMG-108.An antibody according to claim 1, namely gevokizumab, AAL-160, canakinumab, LY-2189102 or AMG-108.Rekombinantes Protein gemäß Anspruch 1, nämlich Anakinra oder Rilonacept.Recombinant protein according to claim 1, namely anakinra or rilonacept.Verwendung eines Antikörpers nach Anspruch 1 oder 2 zur Herstellung eines Arzneimittels zur Behandlung oder Vorbeugung der Endometriose.Use of an antibody according to claim 1 or 2 for the manufacture of a medicament for the treatment or prevention of endometriosis.Verwendung eines Antikörpers, Antikörperfragments oder rekombinanten Proteins gegen IL-1β oder IL-1R zur Behandlung oder Vorbeugung der Endometriose.Use of an antibody, antibody fragment or recombinant protein against IL-1β or IL-1R for the treatment or prevention of endometriosis.

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