CN111450082A - 一种系统性红斑狼疮治疗纳米颗粒的合成方法 - Google Patents

Abstract

本发明公布一种系统性红斑狼疮治疗纳米颗粒的合成方法。主要步骤包括:1)PEG水溶液的制备；2)PLGA有机溶液的制备；3)薄膜水化法合成IL‑10@HIV‑Vpu蛋白纳米颗粒。其中辅助蛋白U(Vpu)可抑制一种叫做NF‑kB的转录因子的激活，减少了在免疫反应中起关键作用的细胞因子的产生，抑制机体免疫功能。白介素‑10(IL‑10)是一种多细胞源、多功能的细胞因子，调节细胞的生长与分化，参与炎性反应和免疫反应，是目前公认的炎症与免疫抑制因子。PLGA‑PEG无毒，生物相容性好，具有良好的成囊和成膜的性能。

Description

一种系统性红斑狼疮治疗纳米颗粒的合成方法

技术领域

本发明涉及纳米颗粒的合成技术领域,具体涉及一种通过PLGA-PEG包裹HIV-Vpu蛋白和白介素-10(IL-10)的策略,合成HIV-Vpu蛋白@IL-10@PEG-PLGA纳米制剂的方法。

背景技术

系统性红斑狼疮(SLE)涉及复杂的病理机制，造成多器官损伤，并可能危及生命。非特异性免疫抑制剂或抗炎药，例如糖皮质激素(GCs)，环磷酰胺和甲氨蝶呤，是SLE中常用的药物。然而，这种疗法的疗效有时不能令人满意，持续使用会引起严重的副作用，这突出表明有必要探索一种高效，安全的更好的治疗方法。而HIV病毒产生的多种蛋白质在抑制免疫反应方面可发挥作用。其中辅助蛋白U(Vpu)可抑制一种叫做NF-kB的转录因子的激活，减少了在免疫反应中起关键作用的细胞因子的产生。

白介素10是一种多细胞源、多功能的细胞因子，调节细胞的生长与分化，参与炎性反应和免疫反应，是目前公认的炎症与免疫抑制因子。避免肾小球中免疫因子过量产生，阻止免疫系统对肾小球造成损伤。

PLGA-PEG是一种两嵌段聚合物。其中PLGA由两种单体——乳酸和羟基乙酸随机聚合而成，是一种可降解的功能高分子有机化合物，其降解产物是乳酸和羟基乙酸，同时也是人代谢途径的副产物，所当它应用在医药和生物材料中时不会有毒副作用，具有良好的生物相容性、无毒、良好的成囊和成膜的性能。PEG具有良好的水溶性，赋予了聚合物生物相容性。

发明内容

本发明为克服现有技术的不足，提供一种通过PLGA-PEG包裹HIV-Vpu蛋白和白介素-10(IL-10)的策略,合成系统性红斑狼疮治疗纳米颗粒制剂的方法。利用HIV-Vpu蛋白和IL-10抑制免疫过激反应，防止免疫系统攻击自身，以达到治疗系统性红斑狼疮的目的。

本发明的技术方案是一种系统性红斑狼疮治疗纳米颗粒的合成方法，通过PLGA-PEG包裹HIV-Vpu蛋白和白介素-10(IL-10)的策略,具体步骤如下：

1)称取PLGA材料，加入二氯甲烷后超声溶解，得到浓度为0.25-1mg/ml的PLGA有机溶液；

2)称取PEG材料，加入水后超声溶解，得到浓度为0.25-1mg/ml的PEG水溶液；

3)称取IL-10材料，加入二氯甲烷后超声溶解，得到浓度为0.5-2mg/ml的IL-10有机溶液；

4)利用薄膜水化法合成HIV-Vpu蛋白@IL-10@PEG-PLGA纳米颗粒。

(1)将盛有2ml PLGA溶液的单口瓶置于超声破碎仪上，开始超声，时间设定为12min，温度为0℃，超声频率为4s，2s；

(2)边超声边逐滴加入100uL的IL-10溶液和2ml PEG水溶液，继续超声直至完全混匀；

(3)超声好的产物立即添加到圆底瓶中，在旋转蒸发器上进行旋蒸，直至直至二氯甲烷和水全部蒸干，瓶底形成一层薄膜。

(4)在装有脂质体的圆底瓶中加入1mL稀释后的HIV-Vpu蛋白，吹悬搅拌至均匀混合，最终得到HIV-Vpu蛋白@IL-10@PEG-PLGA纳米颗粒。

本发明的优势在于：

1)HIV-Vpu蛋白可抑制一种叫做NF-kB的转录因子的激活，减少了在免疫反应中起关键作用的细胞因子的产生。

2)白介素-10(IL-10)白介素10是一种多细胞源、多功能的细胞因子，调节细胞的生长与分化，参与炎性反应和免疫反应，是目前公认的炎症与免疫抑制因子。

3)PLGA-PEG具有良好的生物相容性、无毒、良好的成囊和成膜的性能。

附图说明

图1：纳米颗粒TEM图像。

具体实施方式

以下结合附图和具体实施例来对本发明作进一步的说明。

实施例1：

1)称取10mg PLGA材料，加入20ml二氯甲烷后超声溶解，得到浓度为0.5mg/ml的PLGA有机溶液；

2)称取10mg PEG材料，加入20ml水后超声溶解，得到浓度为0.5mg/ml的PEG水溶液；

3)称取20mg IL-10材料，加入20ml二氯甲烷后超声溶解，得到浓度为1mg/ml的IL-10有机溶液；

4)利用薄膜水化法合成HIV-Vpu蛋白@IL-10@PEG-PLGA纳米颗粒。

(1)将盛有2ml PLGA溶液的单口瓶置于超声破碎仪上，开始超声，时间设定为12min，温度为0℃，超声频率为4s，2s；

(2)边超声边逐滴加入100uL的IL-10溶液和2ml PEG水溶液，继续超声直至完全混匀；

(3)超声好的产物立即添加到圆底瓶中，在旋转蒸发器上进行旋蒸，直至直至二氯甲烷和水全部蒸干，瓶底形成一层薄膜。

(4)在装有脂质体的圆底瓶中加入1mL稀释后的HIV-Vpu蛋白，吹悬搅拌至均匀混合，最终得到HIV-Vpu蛋白@IL-10@PEG-PLGA纳米颗粒。

实施例2：

1)称取5mg PLGA材料，加入20ml二氯甲烷后超声溶解，得到浓度为0.25mg/ml的PLGA有机溶液；

2)称取5mg PEG材料，加入20ml水后超声溶解，得到浓度为0.25mg/ml的PEG水溶液；

3)称取10mg IL-10材料，加入20ml二氯甲烷后超声溶解，得到浓度为0.5mg/ml的IL-10有机溶液；

4)利用薄膜水化法合成HIV-Vpu蛋白@IL-10@PEG-PLGA纳米颗粒。

(1)将盛有2ml PLGA溶液的单口瓶置于超声破碎仪上，开始超声，时间设定为12min，温度为0℃，超声频率为4s，2s；

(2)边超声边逐滴加入100uL的IL-10溶液和2ml PEG水溶液，继续超声直至完全混匀；

(3)超声好的产物立即添加到圆底瓶中，在旋转蒸发器上进行旋蒸，直至直至二氯甲烷和水全部蒸干，瓶底形成一层薄膜。

(4)在装有脂质体的圆底瓶中加入1mL稀释后的HIV-Vpu蛋白，吹悬搅拌至均匀混合，最终得到HIV-Vpu蛋白@IL-10@PEG-PLGA纳米颗粒。

实施例3：

1)称取20mg PLGA材料，加入20ml二氯甲烷后超声溶解，得到浓度为1mg/ml的PLGA有机溶液；

2)称取20mg PEG材料，加入20ml水后超声溶解，得到浓度为1mg/ml的PEG水溶液；

3)称取30mg IL-10材料，加入20ml二氯甲烷后超声溶解，得到浓度为1.5mg/ml的IL-10有机溶液；

4)利用薄膜水化法合成HIV-Vpu蛋白@IL-10@PEG-PLGA纳米颗粒。

(1)将盛有2ml PLGA溶液的单口瓶置于超声破碎仪上，开始超声，时间设定为12min，温度为0℃，超声频率为4s，2s；

(2)边超声边逐滴加入100uL的IL-10溶液和2ml PEG水溶液，继续超声直至完全混匀；

(3)超声好的产物立即添加到圆底瓶中，在旋转蒸发器上进行旋蒸，直至直至二氯甲烷和水全部蒸干，瓶底形成一层薄膜。

(4)在装有脂质体的圆底瓶中加入1mL稀释后的HIV-Vpu蛋白，吹悬搅拌至均匀混合，最终得到HIV-Vpu蛋白@IL-10@PEG-PLGA纳米颗粒。

Claims (2)

1.一种系统性红斑狼疮治疗纳米颗粒的合成方法，其特征是，通过PEG-PLGA包裹HIV-Vpu蛋白和IL-10的策略,具体步骤如下：

1)称取PLGA材料，加入二氯甲烷后超声溶解，得到浓度为0.25-1mg/ml的PLGA有机溶液；

2)称取PEG材料，加入水后超声溶解，得到浓度为0.25-1mg/ml的PEG水溶液；

3)称取IL-10材料，加入二氯甲烷后超声溶解，得到浓度为0.5-2mg/ml的IL-10有机溶液；

4)利用薄膜水化法合成HIV-Vpu蛋白@IL-10@PEG-PLGA纳米颗粒。

2.根据权利要求1所述的系统性红斑狼疮治疗纳米颗粒的合成方法，其特征是，抑制免疫过激的HIV-Vpu蛋白@IL-10@PEG-PLGA纳米颗粒制备，通过PEG-PLGA包裹HIV-Vpu蛋白和IL-10的策略，所述步骤4)具体如下：

(1)将盛有2ml PLGA溶液的单口瓶置于超声破碎仪上，开始超声，时间设定为12min，温度为0℃，超声频率为4s，2s；

(2)边超声边逐滴加入IL-10溶液和2ml PEG水溶液，继续超声直至完全混匀；

(3)超声好的产物立即添加到圆底瓶中，在旋转蒸发器上进行旋蒸，直至直至二氯甲烷和水全部蒸干，瓶底形成一层薄膜；

(4)在装有脂质体的圆底瓶中加入1mL稀释后的HIV-Vpu蛋白，吹悬搅拌至均匀混合，最终得到HIV-Vpu蛋白@IL-10@PEG-PLGA纳米颗粒。

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