AR132964A1 - ANTISENSE OLIGONUCLEOTIDES FOR THE TREATMENT OF NEURODEGENERATIVE DISEASES - Google Patents

Abstract

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Oligonucleótidos guía que son por lo menos parcialmente complementarios de una porción de una secuencia de ácidos nucleicos RELN diana que comprende un nucleótido diana, en donde la secuencia de ácidos nucleicos RELN diana codifica una proteína reelina, donde el oligonucleótido guía está configurado de tal manera que puede formar un complejo de hebra doble con la porción de la secuencia de ácidos nucleicos RELN diana en condiciones fisiológicas dentro de una célula, y el complejo de hebra doble tiene la capacidad para reclutar una entidad de edición de ácidos nucleicos para realizar la edición del nucleótido diana a fin de generar una secuencia de ácidos nucleicos RELN editada que comprende un nucleótido diana editado; así como composiciones, vectores y métodos de uso relacionados con los mismos. Reivindicación 1: Un oligonucleótido guía que es por lo menos parcialmente complementario de una porción de una molécula de ácido nucleico RELN humana, caracterizado porque comprende un nucleótido diana, en donde la molécula de ácido nucleico RELN codifica una proteína reelina, en donde el oligonucleótido guía está configurado de manera tal que puede formar un complejo de hebra doble con la porción del ácido nucleico de RELN en condiciones fisiológicas dentro de una célula y el complejo de hebra doble tiene la capacidad para reclutar una enzima editora de ácidos nucleicos que está presente de manera natural en la célula, para realizar la edición del nucleótido diana a fin de generar un ácido nucleico de RELN editado que comprende un nucleótido diana editado. Reivindicación 18: Un vector, preferiblemente un vector viral, más preferiblemente un vector de virus adenoasociado (AAV), caracterizado porque comprende una molécula de ácido nucleico que codifica un oligonucleótido guía de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones 1 a 7. Reivindicación 19: Una composición farmacéutica, caracterizada porque comprende un oligonucleótido guía de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones 1 a 17, o un vector de acuerdo con la reivindicación 18, y un vehículo farmacéuticamente aceptable. Reivindicación 23: Un método in vitro, ex vivo o in vivo para desaminar una adenosina diana en una secuencia de ácidos nucleicos RELN diana en una célula de cerebro, preferiblemente una neurona, caracterizado porque dicho método comprende los pasos de: (i) proveer en la célula un oligonucleótido guía de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones 1 a 17, o un vector de acuerdo con la reivindicación 18; (ii) permitir la captación por la célula del oligonucleótido guía o del vector; (iii) permitir el alineamiento del oligonucleótido guía con la secuencia de ácidos nucleicos RELN diana; y (iv) permitir que una entidad de edición de ácidos nucleicos edite la diana. Reivindicación 25: Un método para editar una secuencia de ácidos nucleicos RELN humana en una célula, preferiblemente una célula de cerebro, en donde la secuencia de ácidos nucleicos RELN humana es pre-ARNm o ARNm, caracterizado porque dicho método comprende poner la secuencia de ácidos nucleicos RELN diana en contacto con un oligonucleótido guía capaz de desencadenar una desaminación mediada por ADAR de adenosina en inosina, para de esa manera editar la secuencia de ácidos nucleicos RELN diana para que codifique una proteína reelina con la capacidad para retardar el inicio de uno o más síntomas de una enfermedad neurodegenerativa, preferiblemente la enfermedad de Alzheimer, más preferiblemente la enfermedad de Alzheimer autosómica dominante. Reivindicación 27: Una molécula de ácido nucleico para editar una adenosina diana en una molécula de pre-ARNm o ARNm de RELN humana, caracterizada porque la región diana es la SEQ ID Nº 106, y en donde la adenosina diana es el segundo nucleótido del codón que codifica histidina en la posición 3447 de la proteína reelina humana codificada por RELN.Guide oligonucleotides that are at least partially complementary to a portion of a target RELN nucleic acid sequence comprising a target nucleotide, wherein the target RELN nucleic acid sequence encodes a reelin protein, wherein the guide oligonucleotide is configured such that it can form a double-stranded complex with the portion of the target RELN nucleic acid sequence under physiological conditions within a cell, and the double-stranded complex has the ability to recruit a nucleic acid editing entity to perform editing of the target nucleotide to generate an edited RELN nucleic acid sequence comprising an edited target nucleotide; as well as compositions, vectors, and methods of use related thereto. Claim 1: A guide oligonucleotide that is at least partially complementary to a portion of a human RELN nucleic acid molecule, comprising a target nucleotide, wherein the RELN nucleic acid molecule encodes a reelin protein, wherein the guide oligonucleotide is configured such that it can form a double-stranded complex with the portion of the RELN nucleic acid under physiological conditions within a cell and the double-stranded complex has the ability to recruit a nucleic acid editing enzyme that is naturally present in the cell to edit the target nucleotide to generate an edited RELN nucleic acid comprising an edited target nucleotide. Claim 18: A vector, preferably a viral vector, more preferably an adeno-associated virus (AAV) vector, characterized in that it comprises a nucleic acid molecule encoding a guide oligonucleotide according to any one of claims 1 to 7. Claim 19: A pharmaceutical composition, characterized in that it comprises a guide oligonucleotide according to any one of claims 1 to 17, or a vector according to claim 18, and a pharmaceutically acceptable carrier. Claim 23: An in vitro, ex vivo or in vivo method for deaminating a target adenosine in a target RELN nucleic acid sequence in a brain cell, preferably a neuron, characterized in that said method comprises the steps of: (i) providing into the cell a guide oligonucleotide according to any one of claims 1 to 17, or a vector according to claim 18; (ii) allowing uptake by the cell of the guide oligonucleotide or the vector; (iii) allowing alignment of the guide oligonucleotide with the target RELN nucleic acid sequence; and (iv) allowing a nucleic acid editing entity to edit the target. Claim 25: A method for editing a human RELN nucleic acid sequence in a cell, preferably a brain cell, wherein the human RELN nucleic acid sequence is pre-mRNA or mRNA, characterized in that said method comprises contacting the target RELN nucleic acid sequence with a guide oligonucleotide capable of triggering an ADAR-mediated deamination of adenosine to inosine, thereby editing the target RELN nucleic acid sequence to encode a reelin protein with the ability to delay the onset of one or more symptoms of a neurodegenerative disease, preferably Alzheimer's disease, more preferably autosomal dominant Alzheimer's disease. Claim 27: A nucleic acid molecule for editing a target adenosine in a human RELN pre-mRNA or mRNA molecule, characterized in that the target region is SEQ ID No. 106, and wherein the target adenosine is the second nucleotide of the codon encoding histidine at position 3447 of the human reelin protein encoded by RELN.