Befruktning (fertilisering) er sammensmeltningen av tokjønnsceller (gameter),[1] for eksempelegg- ogsædceller. Befruktningen er en viktig del avkjønnet formering. Ved befruktningen oppstårzygoten, som forener de to gameteneshaploide (enkelte)kromosomsettene i en nydiploid celle (med det vanlige dobbelte kromosomsettet).[1] Zygoten er det første stadiet i en nyorganismes liv, befruktningen er således starten på dette livet.
Man snakker omindre befruktning når befruktningen skjer i kroppen til en av foreldrene. Dette vil vanligvis være moren, selv om det fins unntak (for eksempelsjøhester).Ytre befruktning finner sted hos mange vannlevende arter, når beggekjønnene avgir sine kjønnsceller til vannet. Befruktningen vil da finne sted utenfor kroppene til foreldrene, og zygotene vil «leve sitt eget liv» fra starten av.
Hos mennesker kalles befruktningen ogsåunnfangelse.