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Metodo di Golgi

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Disegno di Camillo Golgi dell'ippocampo trattato con il metodo del nitrato d'argento
Disegno dicellule di Purkinje nellacorteccia delcervelletto fatto da Santiago Ramón y Cajal, dimostrante chiaramente il potere del metodo di colorazione di Golgi nella rivelazione di dettagli fini.
Unneurone piramidale umano neocorticale colorato tramite la tecnica di Golgi. Notare il dendrite apicale estendentesi verticalmente sopra ilsoma e i numerosi dendriti basali che si irradiano lateralmente dalla base delcorpo cellulare.

Ilmetodo di Golgi oimpregnazione cromoargentica è una tecnica dimicroscopia ottica che permette la perfetta visualizzazione dellecellule deltessuto nervoso.L'impregnazione cromoargentica fu inizialmente chiamatareazione nera, perché determina una colorazione nera delneurone e dei suoi organuli.

Questo metodo fu messo a punto nel1873 dalmedicochirurgo italianoCamillo Golgi, che lavorava nellaPia Casa degli Incurabili diAbbiategrasso e che era sempre stato impegnato nello studio delsistema nervoso (la sua tesi di laurea era stata curata daCesare Lombroso).

La colorazione di Golgi è stata notoriamente usata anche dalneuroanatomistaSantiago Ramón y Cajal (1852-1934), che con essa scoprì una serie di fatti nuovi circa l'organizzazione del sistema nervoso, ispirando la nascita delladottrina del neurone. Ramon y Cajal ha in ultimo migliorato la tecnica utilizzando un metodo che egli definiva "doppia impregnazione". La tecnica di colorazione di Ramon y Cajal, ancora in uso, è chiamata Colorazione di Cajal.

Meccanismo

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Le cellule del tessuto nervoso sono densamente imballate e possono essere ottenute poche informazioni sulle loro strutture e interconnessioni se tutte le cellule sono colorate. Inoltre, le sottili estensioni filamentose delle cellule neurali, tra cui gliassoni e idendriti dei neuroni, sono troppo sottili e trasparenti per essere viste con le normali tecniche di colorazione. Il metodo di Golgi colora nella loro interezza un numero limitato di cellule a caso. Il meccanismo con cui questo accade è ancora in gran parte sconosciuto.[1] I dendriti, così come ilsoma delle cellule, sono chiaramente colorati in marrone e nero e possono essere seguiti in tutta la loro lunghezza, il che ha permesso ai neuroanatomisti di tracciare le connessioni tra i neuroni per rendere visibile la struttura di rete complessa di molte parti delcervello e delmidollo spinale.

Metodo di esecuzione

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Secondo il sito SynapseWeb,[2] la ricetta per la colorazione di Golgi consiste in:

  1. Immergere per due giorni un blocco (approx. 10x5 mm) di tessuto cerebrale fissato con laformaldeide (o perfuso conparaformaldeide-glutaraldeide) dentro una soluzione acquea al 2% dibicromato di potassio.
  2. Asciugare brevemente il blocco concarta da filtro.
  3. Immergere il blocco in una soluzione acquosa al 2% dinitrato d'argento per altri 2 giorni.
  4. Tagliare sezioni di ca. 20-100 µm di spessore.
  5. Disidratare rapidamente inetanolo (ad esempio, inDepex oEnthalan).

Questa tecnica è stata successivamente perfezionata sostituendo il precipitato d'argento con oro, tramite l'immersione del campione in cloruro d'oro e poi inacido ossalico e la successiva rimozione dell'argento contiosolfato di sodio. Ciò conserva un maggior grado di struttura fine, con i dettagli ultrastrutturali segnati da piccole particelle di oro.[1][collegamento interrotto]

Citazioni sul metodo

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Ramón y Cajal disse, a proposito del metodo Golgi:

Ho espresso la sorpresa che ho sperimentato dopo aver visto con i miei occhi i meravigliosi poteri rivelatori della reazione cromo-argento, e l'assenza di qualsiasi emozione nel mondo scientifico suscitato dalla sua scoperta.
Recuerdos de mi vida, Vol. 2,Historia de mi labor científica. Madrid: Moya, 1917, p. 76.

Note

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  1. ^ J. G. Nicholls,From neuron to brain, Sinauer Associates, 2001, p. 5,ISBN 0-87893-439-1, /ISSN.
  2. ^ Spacek, J., Fiala, J.,Visualization of Dendritic Spines, susynapses.clm.utexas.edu, SynapseWeb, 28 giugno 2002.URL consultato il 17 giugno 2010(archiviato dall'url originale il 26 giugno 2010).

Voci correlate

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Collegamenti esterni

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