Justin Long est le deuxième de trois frères nés à Fairfield, deR. James Long(en), philosophe et professeur de latin à l'université de Fairfield, et de Wendy Lesniak, ancienne actrice de théâtre. Il est élevé dans un rite catholique conservateur. Son frère aîné, Damian, est un acteur de théâtre et professeur à la Weston High School.
Justin Long fait ses études au Fairfield College Preparatory School, une institution jésuite, ainsi qu'auVassar College, où il est membre de la troupe comique Laughingstock, et joue dans différentes pièces dontLibres sont les papillons.
Quelques années après, il remporte le prix avec la nomination duSaturn Award pour le meilleur jeune acteur grâce à son interprétation de Darius « Darry » Jenner, l’adolescent pourchassé par un monstre dans le film d’horreurJeepers Creepers deVictor Salva.[réf. nécessaire]
De 2006 à 2009, il estMac dans les publicitésGet a Mac d'Apple. En 2011, il endosse un rôle similaire pour Intel dans leur campagneJustin Gets Real.
Entre 2007 et 2010, Justin Long partage la vie de l'actriceDrew Barrymore. Celle-ci confirme leur rupture durant le tournage de leur film en commun,Trop loin pour toi[1]. En 2012, il fréquente brièvement l'actrice américaineKate Mara[2]. De à, il a une relation avec l'actriceAmanda Seyfried[3]. Depuis 2021, il est en couple avecKate Bosworth.
De 2006 à 2010, Justin Long joue dans la compagne publicitaireGet a Mac pour la marqueApple où il interprète le rôle d'un ordinateurMac face à un ordinateurPC incarné par l'acteurJohn Hodgman.
Par ailleurs, et paradoxalement, il apparaît en 2021 dans une publicité vantant des ordinateursIntel face aux Macs[6] dans le sillage de latransition des Macintosh vers l'ARM d'Apple.